CN111748598A - 一种小分子肽蛋白粉及其制备方法 - Google Patents
一种小分子肽蛋白粉及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了小分子肽蛋白粉及其制备方法，采用微生物发酵技术和酶技术结合的方法，将高品质的大分子球蛋白分解转化为小分子肽，从而获得不同氨基酸排序和分子量不同的肽。能广泛应用于医药保健，动物保健，食品工业，饲料工业等领域。
Description
技术领域
本发明属于保健食品技术领域，涉及一种小分子肽蛋白粉及其制备方法。
背景技术
小分子肽全称小分子活性肽，是介于氨基酸与蛋白质之间一种生化物质，它比蛋白质分子量小，又比氨基酸分子量大，是一个蛋白质的片段。
小分子肽具有以下特点:(1)小分子肽结构简单、分子量小，可快速透过小肠黏膜吸收而不需要再次消化，也不需要耗费能量，具有100％吸收的特点。因此，小分子活性肽的吸收、转化和利用是高效和完全的。(2)小分子活性肽可以直接进入细胞内是其生物活性的重要体现。小分子肽可以透过皮肤屏障、血脑屏障、胎盘屏障、肠胃黏膜屏障直接进入细胞内。(3)小分子肽的活性很高，往往很小的量就能起很大的作用。(4)小分子肽具有重要的生理功能，涉及人体的激素、神经、细胞生长和生殖各领域，它可以调节体内各个系统和细胞的生理功能，维持人体的神经、消化、生殖、生长、运动代谢、循环等系统的正常生理活动。(5)小分子肽不仅能提供人体生长发育所需的营养物质，而且具有特殊的生物学功能，可防治血栓、高血脂、高血压，延缓衰老，抗疲劳，提高机体免疫力等。
随着生物技术的发展，生产肽的方法也不断发展。现有的生产小分子肽的方法主要有以下几种：提取法、酸碱法、酶解法、合成法和基因工程法。
(一)提取法：
20世纪五六十年代，世界许多国家，包括我国主要是从动物脏器获取肽。如胸腺肽，其生产方法是将刚生下来的小牛宰杀之后，割下其胸腺，然后用震荡分离的生物技术，将小牛胸腺中的肽震荡分离出来，制成胸腺肽针剂。这种胸腺肽被广泛应用于调节和增强人体免疫功能。
目前已经从人、动物、植物、微生物及海洋生物中分离出多种生物活性肽；然而，生物活性肽在生物体内含量一般是微量的，而且目前天然生物中分享纯化获得的活性肽工艺还不是很完善，导致成本很高，生物活性低；多肽提取分离常用的方法包括：盐析沉淀法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、凝胶电泳等，其主要缺点是操作复杂，成本较高。
(二)酸碱法：
酸解法和碱解法多用于试验机构，而在实际生产中较少使用。碱解法水解蛋白，丝氨酸和苏氨酸等大部分氨基酸被破坏并且发生消旋作用，营养成分损失大，因此很少采用此法生产；酸解法水解蛋白不会引起氨基酸的消旋作用，水解速度快，反应完全彻底，但它的弱点是工艺复杂，很难控制，环境污染大，生产的多肽分子量分布不均，极不稳定，生理功能很难确定。
(三)酶解法：
多数生物活性肽是以非活性状态存在于蛋白质的长链中，当用特异蛋白酶水解时，其有活性的肽段就从蛋白氨基序列中释放出来。近几十年来，运用酶解方式从动植物、海洋生物中获取的生物法性肽一直是国内外研究的热点，已从中分离提取出具有免疫调节、抗氧化、抑菌、降血压、抗血脂、抗肿瘤等多种生物活性肽。
酶解法生产生物活性肽是通过选择适当的蛋白酶，以蛋白质为底物，将蛋白质酶解，即可得到大量具有各种生理功能的生物活性肽。在生产过程中，温度、PH值、酶浓度和底物浓度等因素与小肽酶解生产效果密切相关，其中最关键的是酶的选择。酶解法使用的酶不同、酶的选择与配方不同、酶解的蛋白质不同，所获得的多肽品质、分子量分布和氨基酸组成也大不相同。
(四)合成法：
化学合成法，对于合成50个氨基酸的多肽有显著的优势，多肽的化学合成法主要分为液相法和固相法。对于由较少氨基酸组成的多肽，采用液相合成方法速度快、纯度高，且能大量合成。液相合成法是经典的合成方法，其优点是保护基选择较多、成本低廉和合成规模容易放大。固相法是把要合成的多肽中一端的氨基酸羧基、氨基或侧链基附着在固体载体上，然后从氨基端或羧基端逐步增长肽链的方法。与液相法相比，固相法具有操作简单，能够实现自动化操作的优点。
酶合成法，是指用蛋白酶催化合成肽。在活性肽的酶合成法中，最广泛应用的酶是丝氨酸和半胱氨酸内切酶。酶法合成与化学合成方法相比，具有在温和条件下进行，专性强，区域选择性高、毒性小、无消旋作用等特点。酶促肽合成具有其不可替代的优势，但反应周期长、生产效率低等缺点使得依靠酶法进行肽保成还远不能满足工业生产的需要，在实际生产中酶法合成的应用仍然有限。
(五)基因工程法：
基因工程法指从动植物或海洋生物基因组中分离出带有目的基因的DNA片段，然后将DNA片段克隆至适当载体并采用特定方法将其导入受体细胞，通过细胞表达获得所需要的活性肽或将外源基因插入到噬菌体基因序列中，使得多肽以整合蛋白形式表达噬菌体颗粒表面经加工和纯化后获得。基因工程法合成多肽具有高表达、产量高和成本低等优点，可以得到高纯度、疗效好且具有天然活性的多肽类药物。此方法已被用于生产多肽药物，如胸腺肽、干扰素、白细胞介素等。与化学合成相比，基因工程法更适于长肽的制备。
发明内容
本发明旨在提供一种小分子肽蛋白粉及其制备方法，采用微生物发酵技术和酶技术结合的方法，将高品质的大分子球蛋白分解转化为小分子肽，从而获得不同氨基酸排序和分子量不同的肽，生产工艺简单，产品应用前景广泛。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了一种小分子肽蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
1)分别将大豆和核桃仁洗净、加水泡发后，磨成糊状备用；
2)将步骤1)准备好的两种糊状原料混合后加入玉米粉、糖和酶菌合剂，混合均匀，置于27-35℃、15天以上，完成水解；
3)生鸡蛋去壳后装入容器中搅拌均匀，再加入玉米粉和糖，最后加入酶菌合剂，置于27-35℃中，发酵20天以上；
4)将步骤2)获得的水解产物通过胶体磨研磨后与步骤3)获得的发酵产物混合，均质；
5)将步骤4)所得产物烘干，粉碎，过筛，得小分子肽蛋白粉。
优选地，步骤1)中，料水比为1:1-2，更优选1：1.5。
优选地，步骤2)中，所述酶菌合剂中，酶包括纤维素酶、木聚糖酶和蛋白酶，菌种包括枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和乳酸菌。更优选地，每1g酶菌合剂中，枯草芽孢杆菌≥5.6×107cfu，乳酸菌≥4×106cfu，酿酒酵母≥3.0×107cfu，纤维素酶200U，木聚糖酶2000U，蛋白酶6000U。
优选地，步骤2)中，大豆糊状原料和核桃仁糊状原料按重量比9：1混合。
优选地，步骤2)中，两种糊状原料混合后的总重量与玉米粉、糖和酶菌合剂的重量比为10kg：2kg：200g：3g。
优选地，步骤3)中，生蛋液与玉米粉、糖和酶菌合剂的重量比为5000：1500：150：3。
优选地，步骤4)中，通过胶体磨研磨至细度为60-100μm。
优选地，步骤4)中，步骤2)获得的水解产物研磨后与步骤3)获得的发酵产物混合重量比为7：3。
优选地，步骤5)中，釆用低温烘干机50℃烘干，粉碎后过100目筛。
本发明还提供了由上述制备方法制得的小分子肽蛋白粉。
本发明的有益效果如下：
本发明采用微生物发酵技术和酶技术结合的方法，将高品质的大分子球蛋白分解转化为小分子肽，从而获得不同氨基酸排序和分子量不同的肽。具体过程是通过微生物的代谢作用和酶的剪切作用，对氨基酸和肽链进行移接和重排，使肽链基团修饰和重组，从而获得不同分子量的肽。本发明所获取的小分子肽蛋白粉中小分子肽占比大，符合医药应用的需求，且能有效透过血脑屏障等人体保护性机制，达到临床中更为高效而安全的应用目的，而且，还能广泛应用于医药保健，动物保健，食品工业，饲料工业等领域。
具体实施方式
为了更清楚的描述本发明，现结合具体实施例做进一步描述。可以理解的是，所述实施例为示例性说明，而非用作对本发明的限定。
本发明中，
原料主要采用鸡蛋，优选采用鲜鸡蛋，配以少量核桃仁、大豆、玉米粉、糖和水。其中，“糖”可选用葡萄糖或蔗糖。
菌种选用枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、乳酸菌，酶选用蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶，菌种和酶均为现有市售产品，可直接购买，只要混合后每1g酶菌合剂中菌种和酶达到以下规格即可：枯草芽孢杆菌≥5.6×107cfu，乳酸菌≥4×106cfu，酿酒酵母3.0×107cfu，纤维素酶200U，木聚糖酶2000U，蛋白酶6000U。
本发明提供的一种小分子肽蛋白粉的制备方法，主要包括以下步骤：
1、将大豆洗净、水泡发后，用磨浆机磨成糊状备用；核桃仁洗净、水泡发后，用磨浆机磨成糊状备用，料水比均优选1：1.5，磨浆机型号不限。
2、将准备好的上述两种原料按90:10斤比例混合后加入玉米粉20斤、蔗糖2斤，再加入15g酶菌合剂，混合均匀。该步骤中，当微生物发酵产热时，复合酶就发生水解作用，蛋白质底物在微生物分泌的酶和加入的酶的共同作用下水解底物，蛋白质在酶的水解作用下发生断裂变成不同分子量的肽。一般27-35℃室温中15天以上即可完成水解。
3、取鲜鸡蛋破壳装入容器中搅拌均匀，以100斤生蛋液为例，再加入玉米粉30斤、蔗糖3斤，最后加入30g酶菌合剂，置室温约30℃中，发酵20天以上。
4、将第2步水解完成得到的产物通过胶体磨磨一次至细度80μm后，与第3步得到的产物按重量比例7：3混合匀质后进行下一步。
5、将第4步得到的混合物釆用低温烘干机50℃烘干，粉碎，过100目筛，得小分子肽蛋白粉。包装即可。
需要说明的是，本申请中，如未有特殊说明，所用材料及工艺均可采用现有常规技术手段来实现，申请人对此不做具体限定。
Claims (10)
1.一种小分子肽蛋白粉的制备方法，包括以下步骤：
1)分别将大豆和核桃仁洗净、加水泡发后，磨成糊状备用；
2)将步骤1)准备好的两种糊状原料混合后加入玉米粉、糖和酶菌合剂，混合均匀，置于27-35℃、15天以上，完成水解；
3)生鸡蛋去壳后装入容器中搅拌均匀，再加入玉米粉和糖，最后加入酶菌合剂，置于27-35℃中，发酵20天以上；
4)将步骤2)获得的水解产物通过胶体磨研磨后与步骤3)获得的发酵产物混合，均质；
5)将步骤4)所得产物烘干，粉碎，过筛，得小分子肽蛋白粉。
2.根据权利要求1所述的一种小分子肽蛋白粉的制备方法，其特征在于，步骤1)中，料水比为1:1-2。
3.根据权利要求1所述的一种小分子肽蛋白粉的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述酶菌合剂中，酶包括纤维素酶、木聚糖酶和蛋白酶，菌种包括枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和乳酸菌；每1g酶菌合剂中，枯草芽孢杆菌≥5.6×107cfu，乳酸菌≥4×106cfu，酿酒酵母≥3.0×107cfu，纤维素酶200U，木聚糖酶2000U，蛋白酶6000U。
4.根据权利要求1所述的一种小分子肽蛋白粉的制备方法，其特征在于，步骤2)中，大豆糊状原料和核桃仁糊状原料按重量比9：1混合。
5.根据权利要求4所述的一种小分子肽蛋白粉的制备方法，其特征在于，步骤2)中，两种糊状原料混合后的总重量与玉米粉、糖和酶菌合剂的重量比为10kg：2kg：200g：3g。
6.根据权利要求1所述的一种小分子肽蛋白粉的制备方法，其特征在于，步骤3)中，生蛋液与玉米粉、糖和酶菌合剂的重量比为5000：1500：150：3。
7.根据权利要求1所述的一种小分子肽蛋白粉的制备方法，其特征在于，步骤4)中，通过胶体磨研磨至细度为60-100μm。
8.根据权利要求1所述的一种小分子肽蛋白粉的制备方法，其特征在于，步骤4)中，步骤2)获得的水解产物研磨后与步骤3)获得的发酵产物混合重量比为7：3。
9.根据权利要求1所述的一种小分子肽蛋白粉的制备方法，其特征在于，步骤5)中，釆用低温烘干机50℃烘干，粉碎后过100目筛。
10.一种小分子肽蛋白粉，通过权利要求1-9任意一项所述的一种小分子肽蛋白粉的制备方法制成。
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|---|---|---|---|---|
| CN112450316A (zh) * | 2020-12-02 | 2021-03-09 | 通化承诚药业有限公司 | 小牛胸腺肽粉制备方法 |
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| CN115804455A (zh) * | 2021-09-14 | 2023-03-17 | 锐肽生物科技(大连)集团股份有限公司 | 有机沙棘木耳活性小分子肽液制备方法 |
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- 2020-06-16 CN CN202010549090.5A patent/CN111748598A/zh not_active Withdrawn
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