RU2018123502A - Масштабируемые способы получения рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (aav) в системе бессывороточной суспензионной культуры клеток, подходящего для клинического применения - Google Patents

Масштабируемые способы получения рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (aav) в системе бессывороточной суспензионной культуры клеток, подходящего для клинического применения Download PDF

Info

Publication number
RU2018123502A
RU2018123502A RU2018123502A RU2018123502A RU2018123502A RU 2018123502 A RU2018123502 A RU 2018123502A RU 2018123502 A RU2018123502 A RU 2018123502A RU 2018123502 A RU2018123502 A RU 2018123502A RU 2018123502 A RU2018123502 A RU 2018123502A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
pei
plasmid
composition
cells
mixture
Prior art date
Application number
RU2018123502A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2018123502A3 (ru
RU2766583C2 (ru
Inventor
Гуан ЦЮЙ
Линь ЛУ
Джон Фрейзер РАЙТ
Original Assignee
Спарк Терапьютикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Спарк Терапьютикс, Инк. filed Critical Спарк Терапьютикс, Инк.
Publication of RU2018123502A publication Critical patent/RU2018123502A/ru
Publication of RU2018123502A3 publication Critical patent/RU2018123502A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2766583C2 publication Critical patent/RU2766583C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0684—Cells of the urinary tract or kidneys
    • C12N5/0686—Kidney cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
    • C12N2750/14152—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Claims (127)

1. Композиция, содержащая смесь плазмиды/PEI, содержащую компоненты:
(a) одну или несколько плазмид, содержащих нуклеиновые кислоты, кодирующие упаковывающие белки AAV, и/или нуклеиновые кислоты, кодирующие хелперные белки;
(b) плазмиду, содержащую нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт; и
(c) раствор полиэтиленимина (PEI),
где указанные плазмиды находятся в диапазоне молярного соотношения от приблизительно 1:0,01 до приблизительно 1:100 или в диапазоне молярного соотношения от приблизительно 100:1 до приблизительно 1:0,01, и где смесь указанных компонентов (a), (b) и (c), необязательно, инкубируют в течение периода времени от приблизительно 10 секунд до приблизительно 4 часов.
2. Композиция по п.1, дополнительно содержащая клетки.
3. Композиция по п.2, где указанные клетки приводят в контакт с указанной смесью плазмиды/PEI из указанных компонентов (a), (b) и (c).
4. Композиция по п.3, дополнительно содержащая свободный PEI.
5. Композиция по п.4, где указанные клетки приводят в контакт с указанным свободным PEI.
6. Композиция по п.3, где указанные клетки приводят в контакт со смесью указанных компонентов (a), (b) и (c) в течение по меньшей мере приблизительно 4 часов.
7. Композиция по п.3, где указанные клетки приводят в контакт со смесью указанных компонентов (a), (b) и (c) в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 4 часов до приблизительно 140 часов.
8. Композиция по п.3, где указанные клетки приводят в контакт со смесью указанных компонентов (a), (b) и (c) в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 4 часов до приблизительно 96 часов.
9. Композиция по п.5, где указанные клетки приводят в контакт со смесью указанных компонентов (a), (b) и (c) и указанным свободным PEI в течение по меньшей мере приблизительно 4 часов.
10. Композиция по п.5, где указанные клетки приводят в контакт со смесью указанных компонентов (a), (b) и (c) в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 4 часов до приблизительно 140 часов.
11. Композиция по п.5, где указанные клетки приводят в контакт со смесью указанных компонентов (a), (b) и (c) в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 4 часов до приблизительно 96 часов.
12. Композиция по любому из пп.6-11, где указанные клетки продуцируют рекомбинантный вектор AAV, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт.
13. Композиция по любому из пп.1-12, где указанная композиция содержит контейнер, необязательно, включающий флакон, планшет, мешок или биореактор, указанный контейнер, необязательно, является стерильным и/или, необязательно, подходит для поддержания жизнеспособности или роста клеток.
14. Композиция по п.1, дополнительно содержащая плазмиду, содержащую нуклеиновые кислоты, кодирующие белки капсида AAV.
15. Композиция по п.14, дополнительно содержащая клетки, приведенные в контакт с указанной смесью плазмиды/PEI из указанных компонентов (a), (b) и (c), и указанная плазмида содержит нуклеиновые кислоты, кодирующие белки капсида AAV.
16. Композиция по п.15, дополнительно содержащая свободный PEI, где указанные клетки приводят в контакт с указанным свободным PEI.
17. Композиция по п.16, где указанные клетки приводят в контакт со смесью указанных компонентов (a), (b) и (c), где указанная плазмида содержит нуклеиновые кислоты, кодирующие белки капсида AAV, и указанным свободным PEI в течение по меньшей мере приблизительно 4 часов.
18. Композиция по п.16, где указанные клетки приводят в контакт со смесью указанных компонентов (a), (b) и (c), где указанная плазмида содержит нуклеиновые кислоты, кодирующие белки капсида AAV, и указанным свободным PEI в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 4 часов до приблизительно 140 часов.
19. Композиция по п.16, где указанные клетки приводят в контакт со смесью указанных компонентов (a), (b) и (c), где указанная плазмида содержит нуклеиновые кислоты, кодирующие белки капсида AAV, и указанным свободным PEI в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 4 часов до приблизительно 96 часов.
20. Способ получения трансфицированных клеток, включающий:
(a) получение плазмиды;
(b) получение раствора, содержащего полиэтиленимин (PEI);
(c) смешивание плазмиды, полученной на стадии (a), с раствором PEI, полученным на стадии (b), для получения смеси плазмиды/PEI и, необязательно, инкубацию указанной смеси плазмиды/PEI в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 10 секунд до приблизительно 4 часов;
(d) приведение клеток в контакт с указанной смесью плазмиды/PEI, полученной на стадии (c), для получения культуры клеток с плазмидой/PEI;
(e) добавление свободного PEI к указанной культуре клеток с нуклеиновой кислотой/PEI, полученной на стадии (d), для получения культуры клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI; и
(f) инкубацию указанной культуры клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI, полученной на стадии (e), в течение по меньшей мере приблизительно 4 часов и, таким образом, получение трансфицированных клеток.
21. Способ по п.20, где указанная плазмида содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт.
22. Способ получения трансфицированных клеток, продуцирующих рекомбинантный вектор AAV, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт, включающий:
(a) получение одной или нескольких плазмид, содержащих нуклеиновые кислоты, кодирующие упаковывающие белки AAV, и/или нуклеиновые кислоты, кодирующие хелперные белки;
(b) получение плазмиды, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт;
(c) получение раствора, содержащего полиэтиленимин (PEI);
(d) смешивание плазмид, полученных на стадиях (a) и (b), с раствором PEI, полученным на стадии (c), где указанные плазмиды находятся в диапазоне молярного соотношения от приблизительно 1:0,01 до приблизительно 1:100 или в диапазоне молярного соотношения от приблизительно 100:1 до приблизительно 1:0,01, для получения смеси плазмиды/PEI и, необязательно, инкубацию указанной смеси плазмиды/PEI в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 10 секунд до приблизительно 4 часов;
(e) приведение клеток в контакт с указанной смесью плазмиды/PEI, полученной на стадии (d), для получения культуры клеток с плазмидой/PEI;
(f) добавление свободного PEI к указанной культуре клеток с плазмидой/PEI, полученной на стадии (e), для получения культуры клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI; и
(g) инкубацию указанной культуры клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI, полученной на стадии (f), в течение по меньшей мере приблизительно 4 часов и, таким образом, получение трансфицированных клеток, продуцирующих рекомбинантный вектор AAV, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт.
23. Способ по п.20 или 22, дополнительно включающий стадию сбора указанных трансфицированных клеток, полученных на стадиях (f) или (g), и/или среды для культивирования указанных трансфицированных клеток, полученной на стадиях (f) или (g), для получения сбора клеток и/или среды для культивирования.
24. Способ по п.22, дополнительно включающий выделение и/или очистку рекомбинантного вектора AAV от указанного сбора клеток и/или среды для культивирования, полученного на стадии (g), и, таким образом, получение рекомбинантного вектора AAV, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт.
25. Способ получения рекомбинантного вектора AAV, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт, включающий стадии:
(a) получения одной или нескольких плазмид, содержащих нуклеиновые кислоты, кодирующие упаковывающие белки AAV, и/или нуклеиновые кислоты, кодирующие хелперные белки;
(b) получения плазмиды, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт;
(c) получения раствора, содержащего полиэтиленимин (PEI);
(d) смешивания указанных плазмид, полученных на стадиях (a) и (b), с указанным раствором PEI, полученным на стадии (c), где указанные плазмиды находятся в диапазоне молярного соотношения от приблизительно 1:0,01 до приблизительно 1:100 или в диапазоне молярного соотношения от приблизительно 100:1 до приблизительно 1:0,01, для получения смеси плазмиды/PEI и, необязательно, инкубацию смеси плазмиды/PEI в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 10 секунд до приблизительно 4 часов;
(e) приведения клеток в контакт с указанной смесью плазмиды/PEI, полученной на стадии (d), для получения культуры клеток с плазмидой/PEI;
(f) добавления свободного PEI к указанной культуре клеток с плазмидой/PEI, полученной на стадии (e), для получения культуры клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI;
(g) инкубации указанной культуры клеток с плазмидой/PEI, полученной на стадии (e), или указанной культуры клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI, полученной на стадии (f), в течение по меньшей мере приблизительно 4 часов для получения трансфицированных клеток;
(h) сбора указанных трансфицированных клеток, полученных на стадии (g), и/или среды для культивирования трансфицированных клеток, полученной на стадии (g), для получения сбора клеток и/или среды для культивирования; и
(i) выделения и/или очистки рекомбинантного вектора AAV от указанного сбора клеток и/или среды для культивирования, полученного на стадии (h), и, таким образом, получения рекомбинантного вектора AAV, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт.
26. Способ получения трансфицированных клеток, продуцирующих рекомбинантный вектор AAV, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт, включающий стадии:
(a) получения смеси компонентов (i), (ii) и (iii):
(i) одной или нескольких плазмид, содержащих нуклеиновые кислоты, кодирующие упаковывающие белки AAV, и/или нуклеиновые кислоты, кодирующие хелперные белки;
(ii) плазмиды, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт; и
(iii) раствора полиэтиленимина (PEI),
(b) смешивания указанных плазмид (i) и (ii) с указанным раствором PEI (iii) таким образом, что указанные плазмиды находятся в диапазоне молярного соотношения от приблизительно 1:0,01 до приблизительно 1:100 или в диапазоне молярного соотношения от приблизительно 100:1 до приблизительно 1:0,01, для получения смеси плазмиды/PEI и, необязательно, инкубации указанной смеси плазмиды/PEI в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 10 секунд до приблизительно 4 часов;
(c) приведения клеток в контакт с указанной смесью плазмиды/PEI, полученной на стадии (b), для получения культуры клеток с плазмидой/PEI;
(d) добавления свободного PEI к указанной культуре клеток с плазмидой/PEI, полученной на стадии (c), для получения культуры клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI;
(e) инкубации указанной культуры клеток с плазмидой/PEI, полученной на стадии (c), или указанной культуры клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI, полученной на стадии (d), в течение по меньшей мере приблизительно 4 часов для получения трансфицированных клеток, продуцирующих рекомбинантный вектор AAV, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт.
27. Способ по п.25 или 26, дополнительно включающий стадию сбора трансфицированных клеток, полученных на стадии (e), и/или среды для культивирования трансфицированных клеток, полученной на стадии (e), для получения сбора клеток и/или среды для культивирования; и/или выделения и/или очистки рекомбинантного вектора AAV от сбора клеток и/или среды для культивирования, полученного на стадии (e), и, таким образом, получение рекомбинантного вектора AAV, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт.
28. Способ получения рекомбинантного вектора AAV, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт, включающий стадии:
(a) получения смеси компонентов (i), (ii) и (iii):
(i) одной или нескольких плазмид, содержащих нуклеиновые кислоты, кодирующие упаковывающие белки AAV, и/или нуклеиновые кислоты, кодирующие хелперные белки;
(ii) плазмиды, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт; и
(iii) раствор полиэтиленимина (PEI),
(b) смешивания указанных плазмид (i) и (ii) с указанным раствором PEI (iii) таким образом, что указанные плазмиды находятся в диапазоне молярного соотношения от приблизительно 1:0,01 до приблизительно 1:100 или в диапазоне молярного соотношения от приблизительно 100:1 до приблизительно 1:0,01, для получения смеси плазмиды/PEI и, необязательно, инкубации указанной смеси плазмиды/PEI в течение периода времени от приблизительно 10 секунд до приблизительно 4 часов;
(c) приведения клеток в контакт с указанной смесью плазмиды/PEI, полученной на стадии (b), для получения культуры клеток с плазмидой/PEI;
(d) добавления свободного PEI к указанной культуре клеток с плазмидой/PEI, полученной на стадии (c), для получения культуры клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI;
(e) инкубации указанной культуры клеток с плазмидой/PEI, полученной на стадии (c), или указанной культуры клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI, полученной на стадии (d), в течение по меньшей мере приблизительно 4 часов для получения трансфицированных клеток;
(f) сбора указанных трансфицированных клеток, полученных на стадии (e), и/или среды для культивирования трансфицированных клеток, полученной на стадии (e), для получения сбора клеток и/или среды для культивирования; и
(g) выделения и/или очистки рекомбинантного вектора AAV из сбора клеток и/или среды для культивирования, полученного на стадии (f), и, таким образом, получения рекомбинантного вектора AAV, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт.
29. Способ получения рекомбинантного вектора AAV, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт, включающий стадии:
(a) получения смеси компонентов (i), (ii) и (iii):
(i) одной или нескольких плазмид, содержащих нуклеиновые кислоты, кодирующие упаковывающие белки AAV, и/или нуклеиновые кислоты, кодирующие хелперные белки;
(ii) плазмиды, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт; и
(iii) раствор полиэтиленимина (PEI),
где указанные плазмиды (i) и (ii) находятся в диапазоне молярного соотношения от приблизительно 1:0,01 до приблизительно 1:100 или в диапазоне молярного соотношения от приблизительно 100:1 до приблизительно 1:0,01, и где смесь компонентов (i), (ii) и (iii), необязательно, инкубируют в течение периода времени от приблизительно 10 секунд до приблизительно 4 часов.
(b) приведения клеток в контакт со смесью, полученной на стадии (a), для получения культуры клеток с плазмидой/PEI;
(c) добавления свободного PEI к указанной культуре клеток с плазмидой/PEI, полученной на стадии (b), для получения культуры клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI;
(d) инкубации указанной культуры клеток с плазмидой/PEI, полученной на стадии (b), или указанной культуры клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI, полученной на стадии (c), в течение по меньшей мере приблизительно 4 часов для получения трансфицированных клеток;
(e) сбора указанных трансфицированных клеток, полученных на стадии (d), и/или среды для культивирования трансфицированных клеток, полученной на стадии (d), для получения сбора клеток и/или среды для культивирования; и
(f) выделения и/или очистки рекомбинантного вектора AAV от сбора клеток и/или среды для культивирования, полученного на стадии (e), и, таким образом, получения рекомбинантного вектора AAV, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт.
30. Композиция или способ по любому из пп.3-29, где указанную культуру клеток с плазмидой/PEI, или указанную культуру клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI, или указанную культуру клеток с нуклеиновой кислотой/PEI инкубируют в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 4 часов до приблизительно 140 часов.
31. Композиция или способ по любому из пп.3-30, где указанную культуру клеток с плазмидой/PEI или указанную культуру клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI инкубируют в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 4 часов до приблизительно 96 часов.
32. Композиция или способ по любому из пп.1-31, где указанная смесь плазмиды/PEI имеет массовое соотношение PEI:плазмида в диапазоне от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 5:1 или массовое соотношение PEI:плазмида в диапазоне от приблизительно 5:1 до приблизительно 0,1:1, или где указанная культура клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI имеет массовое соотношение PEI:плазмида в диапазоне от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 5:1 или массовое соотношение PEI:плазмида в диапазоне от приблизительно 5:1 до приблизительно 0,1:1.
33. Композиция или способ по любому из пп.1-32, где указанная смесь плазмиды/PEI имеет массовое соотношение PEI:плазмида в диапазоне от приблизительно 1:1 до приблизительно 5:1 или массовое соотношение PEI:плазмида в диапазоне от приблизительно 5:1 до приблизительно 1:1; или где указанная культура клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI имеет массовое соотношение PEI:плазмида в диапазоне от приблизительно 1:1 до приблизительно 5:1 или массовое соотношение PEI:плазмида в диапазоне от приблизительно 5:1 до приблизительно 1:1.
34. Композиция или способ по любому из пп.1-33, где PEI из указанной смеси плазмиды/PEI и/или свободный PEI содержит гидролизованный линейный полиэтиленимин.
35. Композиция или способ по любому из пп.1-34, где PEI из указанной смеси плазмиды/PEI и/или указанный свободный PEI содержит гидролизованный линейный полиэтиленимин с молекулярной массой в диапазоне от приблизительно 4000 до приблизительно 160000 и/или в диапазоне от приблизительно 2500 до приблизительно 250000 в пересчете на свободное основание.
36. Композиция или способ по любому из пп.1-35, где PEI из указанной смеси плазмиды/PEI и/или указанный свободный PEI содержит гидролизованный линейный полиэтиленимин с молекулярной массой приблизительно 40000 и/или приблизительно 25000 в пересчете на свободное основание.
37. Композиция или способ по пп.1-36, где молярное соотношение азота (N) в общем PEI и фосфата (P) в плазмиде находится в диапазоне от приблизительно 1:1 до приблизительно 50:1 (N:P) в указанной культуре клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI.
38. Композиция или способ по пп.1-37, где молярное соотношение азота (N) в общем PEI и фосфата (P) в плазмиде составляет приблизительно 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1 (N:P) в указанной культуре клеток со свободным PEI/плазмидой/PEI.
39. Композиция или способ по любому из пп.1-38, где указанную смесь плазмиды/PEI инкубируют в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 30 секунд до приблизительно 4 часов.
40. Композиция или способ по любому из пп.1-39, где указанную смесь плазмиды/PEI инкубируют в течение периода времени в диапазоне от приблизительно 1 минуты до приблизительно 30 минут.
41. Композиция или способ по любому из пп.1-40, где количество свободного PEI находится в диапазоне от приблизительно 10% до приблизительно 90% общего PEI.
42. Композиция или способ по любому из пп.1-41, где количество свободного PEI находится в диапазоне от приблизительно 25% до приблизительно 75% общего PEI.
43. Композиция или способ по любому из пп.1-42, где количество свободного PEI составляет приблизительно 50% общего PEI.
44. Композиция или способ по любому из пп.4, 5 и 9-43, где указанный свободный PEI добавляют к указанным клеткам до, во время или после приведения указанной смеси плазмиды/PEI в контакт с указанными клетками.
45. Композиция или способ по любому из пп.2-44, где указанные клетки находятся в суспензионной культуре.
46. Композиция или способ по любому из пп.2-44, где указанные клетки выращивают или поддерживают в бессывороточной среде для культивирования.
47. Композиция или способ по любому из пп.2-46, где указанные клетки имеют плотность в диапазоне от приблизительно 1×105 клеток/мл до приблизительно 1×108 клеток/мл при контакте с указанной смесью плазмиды/PEI и/или с указанным свободным PEI.
48. Композиция или способ по любому из пп.2-47, где жизнеспособность указанных клеток при контакте с указанной смесью плазмиды/PEI или указанным свободным PEI составляет приблизительно 60% или более 60%, или где указанные клетки находятся в логарифмической фазе роста при контакте с указанной смесью плазмиды/PEI.
49. Композиция или способ по любому из пп.2-48, где жизнеспособность указанных клеток при контакте с указанной смесью плазмиды/PEI или указанным свободным PEI составляет приблизительно 90% или более 90%, или где указанные клетки находятся в логарифмической фазе роста при контакте с указанной смесью плазмиды/PEI или указанным свободным PEI.
50. Композиция или способ по любому из пп.1-49, где кодируемые упаковывающие белки AAV включают rep AAV и/или cap AAV.
51. Композиция или способ по п.50, где кодируемые упаковывающие белки AAV включают белки rep AAV и/или cap AAV любого серотипа AAV.
52. Композиция или способ по любому из пп.1-51, где кодируемые хелперные белки содержат белки E2 и/или E4 аденовируса, белки VARNA и/или не-AAV хелперные белки
53. Композиция или способ по любому из пп.2-52, где указанные клетки являются клетками млекопитающих.
54. Композиция или способ по любому из пп.2-52, где указанные клетки являются клетками HEK 293E или HEK 293F.
55. Композиция или способ по любому из пп.2-54, где общее количество плазмиды, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт, и одной или нескольких плазмид, содержащих нуклеиновые кислоты, кодирующие упаковывающие белки AAV, и/или нуклеиновые кислоты, кодирующие хелперные белки, находится в диапазоне от приблизительно 0,1 мкг до приблизительно 15 мкг на мл клеток.
56. Композиция или способ по любому из пп.1-55, где молярное соотношение плазмиды, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт, и одной или нескольких плазмид, содержащих нуклеиновые кислоты, кодирующие упаковывающие белки AAV, и/или нуклеиновые кислоты, кодирующие хелперные белки, находится в диапазоне от приблизительно 1:5 до приблизительно 1:1 или в диапазоне от приблизительно 1:1 до приблизительно 5:1.
57. Композиция или способ по любому из пп.1-56, где указанные одна или несколько плазмид содержат первую плазмиду, содержащую нуклеиновые кислоты, кодирующие упаковывающие белки AAV, и вторую плазмиду, содержащую нуклеиновые кислоты, кодирующие хелперные белки.
58. Композиция или способ по п.57, где молярное соотношение плазмиды, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую белок или транскрибирующуюся в представляющий интерес транскрипт, и первой плазмиды, содержащей нуклеиновые кислоты, кодирующие упаковывающие белки AAV, и второй плазмиды, содержащей нуклеиновые кислоты, кодирующие хелперные белки, находится в диапазоне приблизительно 1-5:1:1, или 1:1-5:1, или 1:1:1-5.
59. Композиция или способ по любому из пп.1-58, где рекомбинантный вектор AAV имеет любой из серотипов AAV 1-12, белок капсида VP1, VP2 и/или VP3 AAV, или модифицированный белок капсида VP1, VP2 и/или VP3 AAV или его вариант, или белок капсида VP1, VP2 и/или VP3 AAV дикого типа.
60. Композиция или способ по любому из пп.1-59, где вектор AAV имеет серотип AAV или псевдотип AAV, где указанный псевдотип AAV имеет серотип капсида AAV, отличающийся от серотипа ITR.
61. Композиция или способ по любому из пп.1-60, где вектор AAV дополнительно содержит интрон, элемент контроля экспрессии, один или несколько инвертированных концевых повторов (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV) и/или филлерную полинуклеотидную последовательность.
62. Композиция или способ по п.61, где интрон находится в нуклеиновой кислоте, кодирующей белок или транскрибирующейся в представляющий интерес транскрипт, или фланкирует ее, или где элемент контроля экспрессии функционально связан с нуклеиновой кислотой, кодирующей белок или транскрибирующейся в представляющий интерес транскрипт, или где ITR AAV фланкируют 5'- или 3'-конец нуклеиновой кислоты, кодирующей белок или транскрибирующейся в представляющий интерес транскрипт, или где филлерная полинуклеотидная последовательность фланкирует 5'- или 3'-конец нуклеиновой кислоты, кодирующей белок или транскрибирующейся в представляющий интерес транскрипт.
63. Композиция или способ по п.61, где элемент контроля экспрессии содержит конститутивный или регулируемый контрольный элемент, или тканеспецифический элемент контроля экспрессии, или промотор.
64. Композиция или способ по п.61, где элемент контроля экспрессии содержит элемент, обеспечивающий экспрессию в печени.
65. Композиция или способ по п.61, где ITR содержит один или несколько ITR любого из серотипов AAV2 или AAV6 или их комбинацию.
66. Композиция или способ по любому из пп.1-65, где вектор AAV содержит белок капсида VP1, VP2 и/или VP3, имеющий 75% или более идентичности последовательности по отношению к любому из белков капсид VP1, VP2 и/или VP3 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV10, AAV11 или AAV-2i8, или содержит модифицированный белок капсида VP1, VP2 и/или VP3 или его вариант, выбранный из любого из серотипов AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV10, AAV11 и AAV-2i8 AAV.
67. Композиция или способ по любому из пп.3-65, где клетки субкультивируют до достижения сниженной плотности клеток перед контактом с указанной смесью плазмиды/PEI.
68. Композиция или способ по любому из пп.3-65, где клетки субкультивируют до достижения плотности клеток в диапазоне от приблизительно 0,1×106 клеток/мл до приблизительно 5,0×106 клеток/мл перед контактом с указанной смесью плазмиды/PEI.
69. Композиция или способ по любому из пп.67-68, где клетки приводят в контакт с указанной смесью плазмиды/PEI в пределах периода от 2 до 5 дней после субкультивирования.
70. Композиция или способ по любому из пп.67-68, где клетки приводят в контакт с указанной смесью плазмиды/PEI в пределах периода от 3 до 4 дней после субкультивирования.
71. Способ по п.20, где количество плазмиды, встраиваемой в указанные трансфицированные клетки, составляет по меньшей мере на 50% больше при использовании стадии добавления свободного PEI к культуре клеток с плазмидой/PEI по сравнению с отсутствием добавления свободного PEI к культуре клеток с плазмидой/PEI.
72. Способ по любому из пп.22-71, где количество полученного рекомбинантного вектора на основе AAV составляет по меньшей мере на 50% или более больше при использовании стадии добавления свободного PEI к культуре клеток с плазмидой/PEI по сравнению с отсутствием добавления свободного PEI к культуре клеток с плазмидой/PEI.
73. Способ по любому из пп.22-71, где количество полученного рекомбинантного вектора на основе AAV составляет в 1-5, 5-10 или 10-20 раз больше при использовании стадии добавления свободного PEI к культуре клеток с плазмидой/PEI по сравнению с отсутствием добавления свободного PEI к культуре клеток с плазмидой/PEI.
RU2018123502A 2015-12-01 2016-12-01 Масштабируемые способы получения рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (aav) в системе бессывороточной суспензионной культуры клеток, подходящего для клинического применения RU2766583C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562261815P 2015-12-01 2015-12-01
US62/261,815 2015-12-01
PCT/US2016/064414 WO2017096039A1 (en) 2015-12-01 2016-12-01 Scalable methods for producing recombinant adeno-associated viral (aav) vector in serum-free suspension cell culture system suitable for clinical use

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2018123502A true RU2018123502A (ru) 2020-01-14
RU2018123502A3 RU2018123502A3 (ru) 2020-04-20
RU2766583C2 RU2766583C2 (ru) 2022-03-15

Family

ID=58797705

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018123502A RU2766583C2 (ru) 2015-12-01 2016-12-01 Масштабируемые способы получения рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (aav) в системе бессывороточной суспензионной культуры клеток, подходящего для клинического применения

Country Status (16)

Country Link
US (1) US20190292561A1 (ru)
EP (1) EP3384015A4 (ru)
JP (2) JP7444521B2 (ru)
KR (1) KR20180091863A (ru)
CN (1) CN108603174A (ru)
AU (2) AU2016362317B2 (ru)
BR (1) BR112018011193A2 (ru)
CA (1) CA3006309A1 (ru)
CO (1) CO2018006699A2 (ru)
IL (1) IL259595B2 (ru)
MX (1) MX2018006682A (ru)
PE (2) PE20181534A1 (ru)
PH (1) PH12018501168A1 (ru)
RU (1) RU2766583C2 (ru)
SG (2) SG11201804400SA (ru)
WO (1) WO2017096039A1 (ru)

Families Citing this family (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015191508A1 (en) 2014-06-09 2015-12-17 Voyager Therapeutics, Inc. Chimeric capsids
WO2016073693A2 (en) 2014-11-05 2016-05-12 Voyager Therapeutics, Inc. Aadc polynucleotides for the treatment of parkinson's disease
GB201420139D0 (en) 2014-11-12 2014-12-24 Ucl Business Plc Factor IX gene therapy
US10597660B2 (en) 2014-11-14 2020-03-24 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (ALS)
SG11201703419UA (en) 2014-11-14 2017-05-30 Voyager Therapeutics Inc Modulatory polynucleotides
WO2016094783A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the production of scaav
EP3831842A1 (en) 2015-09-28 2021-06-09 The University of North Carolina at Chapel Hill Methods and compositions for antibody-evading virus vectors
WO2017189964A2 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment of disease
US11326182B2 (en) 2016-04-29 2022-05-10 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment of disease
EP3458589A4 (en) 2016-05-18 2020-01-01 Voyager Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING HUNTINGTON'S DISEASE
KR20240056729A (ko) 2016-05-18 2024-04-30 보이저 테라퓨틱스, 인크. 조절성 폴리뉴클레오티드
US20190185864A1 (en) 2016-08-23 2019-06-20 Akouos, Inc. Compositions and methods for treating non-age-associated hearing impairment in a human subject
CN110650673B (zh) 2016-08-30 2024-04-09 加利福尼亚大学董事会 用于生物医学靶向和递送的方法以及用于实践该方法的装置和系统
JP2020518259A (ja) 2017-05-05 2020-06-25 ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッドＶｏｙａｇｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． ハンチントン病治療組成物および方法
US11603542B2 (en) 2017-05-05 2023-03-14 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (ALS)
JOP20190269A1 (ar) 2017-06-15 2019-11-20 Voyager Therapeutics Inc بولي نوكليوتيدات aadc لعلاج مرض باركنسون
PE20200737A1 (es) * 2017-06-30 2020-07-23 Spark Therapeutics Inc Metodos de purificacion de columna de vector aav
EP3654860A1 (en) 2017-07-17 2020-05-27 Voyager Therapeutics, Inc. Trajectory array guide system
US11512327B2 (en) 2017-08-03 2022-11-29 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for delivery of AAV
US20200237799A1 (en) 2017-10-16 2020-07-30 Voyager Therapeutics, Inc. Treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als)
AU2018352236A1 (en) 2017-10-16 2020-04-23 The Curators Of The University Of Missouri Treatment of amyotrophic lateral sclerosis (ALS)
BR112020007405A2 (pt) * 2017-10-18 2020-12-08 Regenxbio Inc. Produtos terapêuticos de anticorpo pós-translacionalmente modificados totalmente humanos
EP3720500A4 (en) * 2017-12-05 2021-08-25 Applied Genetic Technologies Corporation FORMULATION OPTIMIZATION FOR VIRAL PARTICLES
EP3774854A1 (en) 2018-04-03 2021-02-17 Stridebio, Inc. Antibody-evading virus vectors
CN108866011A (zh) * 2018-07-31 2018-11-23 深圳生生凡非基因技术有限公司 一种同步包装rAAV的方法
US10842885B2 (en) 2018-08-20 2020-11-24 Ucl Business Ltd Factor IX encoding nucleotides
CN110437317B (zh) * 2019-01-30 2023-05-02 上海科技大学 具有变异衣壳蛋白的腺相关病毒及其用途
WO2020165656A1 (en) * 2019-02-11 2020-08-20 Excellgene S.A. Novel eukaryotic cell transfection systems and related methods
TW202102525A (zh) 2019-03-21 2021-01-16 美商史崔德生物公司 重組腺相關病毒載體
WO2021028837A1 (en) 2019-08-13 2021-02-18 Waters Technologies Corporation Affinity resins and sample preparation devices based on cartilaginous fish ignar derived binding domains
MX2022004352A (es) 2019-10-17 2022-07-19 Stridebio Inc Vectores virales adenoasociados para el tratamiento de la enfermedad de niemann-pick tipo c.
CN110894494B (zh) * 2019-11-22 2022-09-27 广西梧州制药（集团）股份有限公司 一种大规模高密度悬浮培养293细胞高产腺病毒的方法
CN110938654A (zh) * 2019-12-11 2020-03-31 和元生物技术（上海）股份有限公司 一种细胞转染试剂及其应用
WO2021146591A2 (en) * 2020-01-17 2021-07-22 Asklepios Biopharmaceutical, Inc. Recombinant aav production
EP4114958A1 (en) 2020-02-21 2023-01-11 Akouos, Inc. Compositions and methods for treating non-age-associated hearing impairment in a human subject
WO2022043926A1 (en) * 2020-08-31 2022-03-03 Intas Pharmaceuticals Ltd. Process for preparation of recombinant adeno-associated virus particle
CA3197726A1 (en) 2020-10-15 2022-04-21 Simon Auslaender Nucleic acid constructs for simultaneous gene activation
MX2023004052A (es) 2020-10-15 2023-05-03 Hoffmann La Roche Constructos de acido nucleico para transcripcion de arn asociado a un virus (arn va).
WO2022229853A1 (en) * 2021-04-27 2022-11-03 Novartis Ag Viral vector production system
WO2023198685A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for determining aav genomes
EP4279599A1 (en) * 2022-05-18 2023-11-22 Branca Bunus Limited Ordered formulation method to construct polyplex with core-aggregate structure
WO2023227438A1 (en) 2022-05-23 2023-11-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Raman-based method for the differentiation of aav particle serotype and aav particle loading status
WO2023232922A1 (en) 2022-06-03 2023-12-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for producing recombinant aav particles
WO2024013239A1 (en) 2022-07-14 2024-01-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for producing recombinant aav particles
WO2024056561A1 (en) 2022-09-12 2024-03-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for separating full and empty aav particles

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2995542A1 (en) * 1997-09-05 1999-03-11 Genzyme Corporation Methods for generating high titer helper-free preparations of recombinant aav vectors
US6995006B2 (en) * 1997-09-05 2006-02-07 Targeted Genetics Corporation Methods for generating high titer helper-free preparations of released recombinant AAV vectors
US6593123B1 (en) * 2000-08-07 2003-07-15 Avigen, Inc. Large-scale recombinant adeno-associated virus (rAAV) production and purification
US7605249B2 (en) * 2002-11-26 2009-10-20 Medtronic, Inc. Treatment of neurodegenerative disease through intracranial delivery of siRNA
US7829694B2 (en) * 2002-11-26 2010-11-09 Medtronic, Inc. Treatment of neurodegenerative disease through intracranial delivery of siRNA
RU2303064C2 (ru) * 2005-04-06 2007-07-20 ГУ НИИ вирусных препаратов им. О.Г. Анджапаридзе РАМН Молекулярный комплекс для трансфекции клеток млекопитающих, содержащий плазмидную днк, модифицированный полиэтиленимин и молекулы-лиганды
AU2013221212B2 (en) * 2012-02-17 2018-08-09 The Children's Hospital Of Philadelphia AAV vector compositions and methods for gene transfer to cells, organs and tissues
AU2014232879B2 (en) * 2013-03-15 2020-03-05 The Children's Hospital Of Philadelphia Scalable manufacturing process to produce recombinant lentiviral vectors in serum-free suspension cell culture system
WO2014201252A2 (en) * 2013-06-13 2014-12-18 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Messenger rna based viral production
CN103329852B (zh) * 2013-06-19 2015-10-07 中国医学科学院病原生物学研究所 一种hbv持续性感染及纤维化小鼠模型建立
CN105579584B (zh) * 2013-06-28 2020-08-28 埃泽瑞斯公司 用于将rna引入细胞的组合物
DK3024498T3 (da) * 2013-07-22 2020-03-02 Childrens Hospital Philadelphia Aav-variant og sammensætninger, fremgangsmåder og anvendelser til genoverførsel til celler, organer og væv
EP3033113B1 (en) * 2013-08-13 2023-10-04 Baylor College of Medicine A novel plga-modified polyethylenimine self-assembly nanotechnology for nucleic acid and drug delivery
KR20200033840A (ko) * 2017-06-07 2020-03-30 스파크 테라퓨틱스, 인코포레이티드 개선된 세포 트랜스펙션 및/또는 rAAV 벡터 생산을 위한 증진제

Also Published As

Publication number Publication date
AU2016362317A1 (en) 2018-06-14
PH12018501168A1 (en) 2019-01-21
CN108603174A (zh) 2018-09-28
PE20181534A1 (es) 2018-09-26
RU2018123502A3 (ru) 2020-04-20
JP2018535682A (ja) 2018-12-06
IL259595B2 (en) 2024-01-01
RU2766583C2 (ru) 2022-03-15
US20190292561A1 (en) 2019-09-26
EP3384015A4 (en) 2019-05-29
BR112018011193A2 (pt) 2018-11-21
PE20240371A1 (es) 2024-03-05
CO2018006699A2 (es) 2018-09-20
EP3384015A1 (en) 2018-10-10
IL259595B1 (en) 2023-09-01
SG11201804400SA (en) 2018-06-28
SG10202106287YA (en) 2021-07-29
MX2018006682A (es) 2018-09-26
IL259595A (en) 2018-07-31
JP7444521B2 (ja) 2024-03-06
JP2022071049A (ja) 2022-05-13
CA3006309A1 (en) 2017-06-08
KR20180091863A (ko) 2018-08-16
WO2017096039A1 (en) 2017-06-08
AU2016362317B2 (en) 2023-03-16
AU2023200992A1 (en) 2023-05-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2018123502A (ru) Масштабируемые способы получения рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (aav) в системе бессывороточной суспензионной культуры клеток, подходящего для клинического применения
JP2018535682A5 (ru)
US11634691B2 (en) Compositions and methods of treatment
US9441206B2 (en) Cell line for production of adeno-associated virus
CA2698011C (en) Porcine adeno-associated viruses
US20240076319A1 (en) Helper plasmid and method for preparing recombinant adeno-associated virus
CN108330147A (zh) 一种重组腺相关病毒载体生产工艺的建立
EP3762501A1 (en) Aav chimeras
JP7227983B2 (ja) パルボウイルスベクターの産生
RU2019143489A (ru) УСИЛИВАЮЩИЕ АГЕНТЫ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ТРАНСФЕКЦИИ КЛЕТОК И/ИЛИ ПРОДУКЦИИ ВЕКТОРА rAAV
US20230203535A1 (en) Recombinant P5 Promoter for Use in Reducing DNA Contamination of AAV Preparations
WO2024075819A1 (ja) 細胞を用いたウイルスベクターの生産方法
AU2022292164A1 (en) Aav manufacturing methods
WO2024013239A1 (en) Method for producing recombinant aav particles
US20240026309A1 (en) Cell lines for production of adeno-associated virus
WO2023198685A1 (en) Method for determining aav genomes
TW202405182A (zh) 生產重組ａａｖ顆粒之方法
TW202417619A (zh) 生產重組 ａａｖ 顆粒之方法
US20220242917A1 (en) Compositions and methods for producing adeno-associated viral vectors