RU2015140942A

RU2015140942A - Рекомбинантные клетки растений, способ их получения и способ получения белка-мишени с их использованием

Info

Publication number: RU2015140942A
Application number: RU2015140942A
Authority: RU
Inventors: Юн У ЧИН; Ын Кён ЛИ; Ми Ок ЧАН; Пуна ПАК; Соо Нан ЛИ; Пу Лим ЯН; Ил Сок КИМ; Ил Сок О
Original assignee: Унхва Корпорейшн; Юн У ЧИН; Ын Кён ЛИ
Priority date: 2013-02-28
Filing date: 2014-02-28
Publication date: 2017-03-31
Also published as: AU2014221493B2; CA2902808C; EP2962552A4; EP2962552A1; US20160010099A1; JP2016508380A; EP2962552B1; US10087452B2; AU2014221493A1; WO2014133365A1; CN105120657A; KR20140108174A; JP6062074B2; CN105120657B; CA2902808A1; RU2636462C2; KR102168500B1

Claims

1. Растительные клетки для экспрессии белка-мишени,

где растительные клетки содержат рекомбинантный вектор, содержащий встроенный в него ген (гены), кодирующие белок-мишень,

где растительные клетки содержат клетки камбиальной меристемы (CMC) или каллюса,

где клетки камбиальной меристемы (CMC) являются типом полученной из растения клеточной линии, содержащей по природе недифференцированные клетки, выделенные из растения, где клеточная линия выделена из камбиальной ткани растения и имеет меристематическую преемственность без прохождения через дедифференцировку в каллюс.

2. Растительные клетки для экспрессии белка-мишени по п. 1, где рекомбинантный вектор, содержащий ген (гены), кодирующие белок-мишень, введен в клетки камбиальной меристемы растений (ТСМС).

3. Растительные клетки для экспрессии белка-мишени по п. 2, где ген (гены), кодирующие белок-мишень, трансформирован в растительные клетки так, что белок-мишень временно экспрессируется в растительных клетках.

4. Растительные клетки для экспрессии белка-мишени по п. 2, где ген (гены), кодирующие белок-мишень, стабильно трансформированы в клетки камбиальной меристемы растений (CMC).

5. Растительные клетки для экспрессии белка-мишени по п. 2, где клетки камбиальной меристемы (CMC) выделены из трансгенного растения с геном (генами), кодирующими белок-мишень.

6. Растительные клетки для экспрессии белка-мишени по п. 2, где белок-мишень является одним или более белками, выбранными из группы, состоящей из антигенов, антител, фрагментов антител, структурных белков, регуляторных белков, факторов транскрипции, белков токсинов, гормонов, аналогов гормонов, цитокинов, ферментов, ингибиторов ферментов, транспортных белков, рецепторов, фрагментов рецепторов, индукторов защитных сил хозяина, запасных белков, транспортных белков вирусов растений, белков защиты и репортерных белков.

7. Растительные клетки для экспрессии белка-мишени по п. 2, где растение выбрано из группы, состоящей из томата, табака, моркови, тиса и дикого женьшеня.

8. Способ получения растительных клеток для экспрессии белка-мишени, где способ предусматривает стадию трансфекции или трансформации популяции растительных клеток, включающей клетки камбиальной меристемы (CMC) или каллюса, геном (генами), кодирующими белок-мишень, сокультивированием популяции растительных клеток, включающей клетки камбиальной меристемы (СМС) или каллюса, с Agrobacteria, содержащими вектор, содержащий встроенный в него ген (гены), кодирующие белок-мишень,

где клетки камбиальной меристемы (CMC) являются клеточной линией, содержащей по природе недифференцированные клетки, выделенные из растения, причем клеточная линия выделена из камбиальной ткани растения и имеет меристематическую преемственность без прохождения через дедифференцировку в каллюс.

9. Способ по п. 8, где ген (гены), кодирующие белок-мишень, трансфицируют или трансформируют сокультивированием клеток камбиальной меристемы (CMC) и Agrobacteria, содержащими вектор, содержащий встроенный в него ген(ы), кодирующие белок-мишень.

10. Способ по п. 8, где стадия трансфекции или трансформации дополнительно содержит стационарное культивирование.

11. Способ по п. 8, где стадия трансфекции или трансформации дополнительно содержит выполняемое один раз стационарное культивирование или периодически выполняемое стационарное культивирование.

12. Способ по п. 8, где сокультивирование предусматривает культивирование растительных клеток и культуры Agrobacteria, содержащей вектор, содержащий ген (гены) белка-мишени, со встряхиванием в течение 1 минуты - 48 часов;

стационарное культивирование данной культуры в течение 1 минуты - 96 часов и

культивирование со встряхиванием данной культуры в течение 1-14 дней.

13. Способ по п. 8, где Arobacteria имеет OD 0,0001-2,0.

14. Способ получения белка-мишени из трансгенного растения для экспрессии белка-мишени, причем этот способ предусматривает стадии:

(a) выращивания трансгенного растения с геном (генами), кодирующими белок-мишень;

(b) выделения трансгенных клеток камбиальной меристемы (ТСМС) из этого трансформированного растения;

(c) культивирования выделенных трансгенных клеток камбиальной меристемы (ТСМС) в среде и

(d) извлечения белка-мишени, экспрессированного в культивированных трансгенных клетках камбиальной меристемы (ТСМС).

15. Способ получения белка-мишени в клетках растений для экспрессии этого белка-мишени, причем этот способ предусматривает стадии:

(a) стабильной трансформации популяции растительных клеток, включающей клетки камбиальной меристемы (CMC) или каллюса, геном (генами), кодирующими белок-мишень, или временная экспрессия гена (генов), кодирующих белок-мишень, сокультивированием популяции растительных клеток, включающей клетки камбиальной меристемы (CMC) или каллюса, с Agrobacteria, содержащими вектор, в состав которых входит ген (гены), кодирующие белок-мишень,

где клетки камбиальной меристемы (CMC) являются клеточной линией, содержащей по природе недифференцированные клетки, выделенные из растения, причем эта клеточная линия выделена из камбиальной ткани растения и имеет меристематическую преемственность без прохождения через дедифференциацию в каллюс; и

(b) извлечения белка-мишени, экспрессируемого в культуре клеток растения, которые инфицированы Agrobacteria посредством сокультивирования.