RU2014123164A - Клетки млекопитающих, экспрессирующие лиганд cd40l, и их применение - Google Patents
Клетки млекопитающих, экспрессирующие лиганд cd40l, и их применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2014123164A RU2014123164A RU2014123164/10A RU2014123164A RU2014123164A RU 2014123164 A RU2014123164 A RU 2014123164A RU 2014123164/10 A RU2014123164/10 A RU 2014123164/10A RU 2014123164 A RU2014123164 A RU 2014123164A RU 2014123164 A RU2014123164 A RU 2014123164A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- antibody
- rabbit
- interleukin
- cd40l
- Prior art date
Links
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 title claims abstract 17
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 title claims abstract 17
- 239000003446 ligand Substances 0.000 title claims 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 title 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract 53
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims abstract 33
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims abstract 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract 27
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 claims abstract 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract 22
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims abstract 20
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract 16
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims abstract 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract 9
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract 4
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 claims abstract 4
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 claims abstract 3
- 101001010621 Homo sapiens Interleukin-21 Proteins 0.000 claims abstract 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 claims abstract 3
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 claims abstract 3
- 210000003297 immature b lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims abstract 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 claims abstract 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims 27
- 102100030704 Interleukin-21 Human genes 0.000 claims 25
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims 12
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 8
- 101100059511 Homo sapiens CD40LG gene Proteins 0.000 claims 6
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 claims 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 4
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims 4
- 102100034980 ICOS ligand Human genes 0.000 claims 3
- 101710093458 ICOS ligand Proteins 0.000 claims 3
- 102000053646 Inducible T-Cell Co-Stimulator Human genes 0.000 claims 3
- 108700013161 Inducible T-Cell Co-Stimulator Proteins 0.000 claims 3
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 claims 3
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 claims 3
- 102100036922 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13B Human genes 0.000 claims 3
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 claims 3
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 claims 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims 3
- -1 APRIL Proteins 0.000 claims 2
- 102100025277 C-X-C motif chemokine 13 Human genes 0.000 claims 2
- 102100039396 C-X-C motif chemokine 16 Human genes 0.000 claims 2
- 102100036170 C-X-C motif chemokine 9 Human genes 0.000 claims 2
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims 2
- 101000858064 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 13 Proteins 0.000 claims 2
- 101000889133 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 16 Proteins 0.000 claims 2
- 101000947172 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 9 Proteins 0.000 claims 2
- 101000617130 Homo sapiens Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 claims 2
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 claims 2
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 claims 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims 2
- 102100039064 Interleukin-3 Human genes 0.000 claims 2
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 claims 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 claims 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims 2
- 102100039897 Interleukin-5 Human genes 0.000 claims 2
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 claims 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims 2
- 101710088580 Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 claims 2
- 101710181056 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13B Proteins 0.000 claims 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229940076264 interleukin-3 Drugs 0.000 claims 2
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 claims 2
- 229940100602 interleukin-5 Drugs 0.000 claims 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims 2
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 claims 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 2
- BXNMTOQRYBFHNZ-UHFFFAOYSA-N resiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C(N(C(COCC)=N3)CC(C)(C)O)C3=C(N)N=C21 BXNMTOQRYBFHNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 claims 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims 2
- 108010028006 B-Cell Activating Factor Proteins 0.000 claims 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 claims 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 claims 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 claims 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 claims 1
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 claims 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 claims 1
- 108010067003 Interleukin-33 Proteins 0.000 claims 1
- 102000017761 Interleukin-33 Human genes 0.000 claims 1
- 102100021592 Interleukin-7 Human genes 0.000 claims 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 claims 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 claims 1
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 claims 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims 1
- 102000016548 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Human genes 0.000 claims 1
- 108010053096 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Proteins 0.000 claims 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 claims 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 claims 1
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 claims 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 claims 1
- 229940100994 interleukin-7 Drugs 0.000 claims 1
- 229940118526 interleukin-9 Drugs 0.000 claims 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0635—B lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
- C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2321—Interleukin-21 (IL-21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
- C12N2501/52—CD40, CD40-ligand (CD154)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/99—Coculture with; Conditioned medium produced by genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Abstract
1. Способ получения антитела, включающий этап совместного культивирования кроличьих B-клеток с клетками млекопитающих, экспрессирующими CD40L кролика, в присутствии IL-2 и IL-21.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что B-клетки представляют собой незрелые B-клетки.3. Способ по любому из п.п. 1 и 2, отличающийся тем, что IL-2 представляет собой человеческий IL-2, a IL-21 представляет собой мышиный IL-21.4. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что В-клетка представляет собой одиночную осажденную B-клетку.5. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что B-клетки представляют собой lgG-положительные B-клетки (lgGB-клетки).6. Применение IL-2 и/или IL-21 для совместного культивирования кроличьих В-клеток с фидерными клетками.7. Применение по п. 6, отличающееся тем, что фидерные клетки представляют собой клетки млекопитающих, экспрессирующие CD40L кролика.8. Способ культивирования кроличьих B-клеток, секретирующих антитело, которое специфически связывается с поверхностным антигеном T-клеток и опосредует передачу ингибирующего сигнала в Т-клетки, включающий совместное культивирование B-клеток и клеток млекопитающих, экспрессирующих CD40L кролика, в присутствии IL-2 и IL-21.9. Способ культивирования антителосекретирующих кроличьих B-клеток, включающий в следующем порядке:i) первое совместное культивирование кроличьих B-клеток и клеток млекопитающих, экспрессирующих CD40L кролика, в присутствии стимулятора митоза, иii) последующее второе совместное культивирование кроличьих B-клеток и клеток млекопитающих, экспрессирующих CD40L кролика, в присутствии стимулятора продукции антитела.10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что стимулятор митоза выбран из группы, включающей соединени
Claims (29)
1. Способ получения антитела, включающий этап совместного культивирования кроличьих B-клеток с клетками млекопитающих, экспрессирующими CD40L кролика, в присутствии IL-2 и IL-21.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что B-клетки представляют собой незрелые B-клетки.
3. Способ по любому из п.п. 1 и 2, отличающийся тем, что IL-2 представляет собой человеческий IL-2, a IL-21 представляет собой мышиный IL-21.
4. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что В-клетка представляет собой одиночную осажденную B-клетку.
5. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что B-клетки представляют собой lgG-положительные B-клетки (lgG+B-клетки).
6. Применение IL-2 и/или IL-21 для совместного культивирования кроличьих В-клеток с фидерными клетками.
7. Применение по п. 6, отличающееся тем, что фидерные клетки представляют собой клетки млекопитающих, экспрессирующие CD40L кролика.
8. Способ культивирования кроличьих B-клеток, секретирующих антитело, которое специфически связывается с поверхностным антигеном T-клеток и опосредует передачу ингибирующего сигнала в Т-клетки, включающий совместное культивирование B-клеток и клеток млекопитающих, экспрессирующих CD40L кролика, в присутствии IL-2 и IL-21.
9. Способ культивирования антителосекретирующих кроличьих B-клеток, включающий в следующем порядке:
i) первое совместное культивирование кроличьих B-клеток и клеток млекопитающих, экспрессирующих CD40L кролика, в присутствии стимулятора митоза, и
ii) последующее второе совместное культивирование кроличьих B-клеток и клеток млекопитающих, экспрессирующих CD40L кролика, в присутствии стимулятора продукции антитела.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что стимулятор митоза выбран из группы, включающей соединения, взаимодействующие с CD40 и CD40L, соединения, взаимодействующие с индуцибельным костимулятором Т-клеток (ICOS) и лигандом ICOS (ICOS-L), индуцирующий пролиферацию лиганд (APRIL), активирующий B-клетки фактор (BAFF), рецептор комплемента 2 типа (CR2), хемокиновый лиганд с мотивом СХС (CXCL9), CXCL12 (фактор стромальных клеток 1 типа (SDF-1)), CXCL13, CXCL16, лиганд Fms-подобной тирозинкиназы (Flt-3L), интерлейкин-1 (α/β), интерлейкин-2, интерлейкин-3, интерлейкин-4, интерлейкин-5, интерлейкин-7, интерлейкин-10, интерлейкин-14, интерлейкин-21, белок, ассоциированный с сигнальной молекулой активации лимфоцитов SLAM (SAP), частицы золотистого стафилококка штамма Cowan 1 (SAC, убитые нагреванием, фиксированные формалином), лиганды Toll-подобных рецепторов (TLR), такие как липополисахарид (LPS), различные олигодезоксинуклеотиды на основе цитозинфосфатгуанина CpG или резиквимод (R-848), лимфопоэтин из стромы тимуса (TSLP), фактор некроза опухоли (TNF) альфа, интерфероны I типа (например, IFN α/β), интерфероны II типа (например, IFNy).
11. Способ по п. 9 или 10, отличающийся тем, что стимулятор продукции антитела выбран из группы, включающей соединения, взаимодействующие с CD40 и CD40L, соединения, взаимодействующие с ICOS и ICOS-L, APRIL, BAFF, CR2, CXCL9, CXCL12 (SDF-1), CXCL13, CXCL16, Flt-3L, интерлейкин-1 (а/β), интерлейкин-2, интерлейкин-3, интерлейкин-4, интерлейкин-5, интерлейкин-6, интерлейкин-9, интерлейкин-10, интерлейкин-13, интерлейкин-21, интерлейкин-33, SAP (белок, ассоциированный с сигнальной молекулой активации лимфоцитов), частицы золотистого стафилококка штамма Cowan 1 (SAC, убитые нагреванием, фиксированные формалином), лиганды TLR, такие как LPS, различные олигодезоксинуклеотиды на основе CpG или резиквимод (R-848), TSLP, фактор некроза опухоли (TNF) альфа, интерфероны I типа (например, IFN α/β), интерфероны II типа (например, IFNy).
12. Способ получения антитела, которое специфически связывается с антигеном, включающий следующие этапы:
a) совместное культивирование пула антителосекретирующих кроличьих В-клеток или одиночных антителосекретирующих кроличьих В-клеток с клетками млекопитающих, экспрессирующими CD40L кролика, в присутствии IL-2 и IL-21,
b) культивирование клеток, содержащих в составе одной или нескольких экспрессионных кассет нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельные участки антитела, секретируемого кроличьими В-клетками, культивируемыми совместно на этапе (a), или их гуманизированные варианты,
c) выделение антитела из клеток или культуральной среды и, таким образом, получение антитела, которое специфически связывается с антигеном.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что способ включает следующие этапы:
a) обеспечение популяции антителосекретирующих (зрелых) кроличьих В-клеток (полученных из крови экспериментального животного или человека),
b) окрашивание клеток, входящих в популяцию кроличьих В-клеток, по меньшей мере одним флуоресцентным красителем (в одном воплощении с использованием от одного до трех или от двух до трех флуоресцентных красителей),
c) осаждение одиночных клеток из популяции окрашенных В-клеток в отдельные контейнеры (в одном воплощении контейнер представляет собой лунку многолуночного планшета),
d) культивирование осажденных отдельных кроличьих В-клеток в присутствии клеток млекопитающих, экспрессирующих CD40L кролика, а также IL-2 и IL21,
e) определение специфичности связывания антител, секретируемых в культуральную среду отдельными кроличьими В-клетками,
f) определение аминокислотной последовательности вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей специфически связывающихся антител, и получение таким образом при помощи ПЦР с обратной транскрипцией и секвенирования нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельные домены легкой и тяжелой цепей моноклонального антитела,
g) включение нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельные домены легкой и тяжелой цепей моноклонального антитела, или ее варианта, кодирующего гуманизированную версию вариабельных доменов легкой и/или тяжелой цепей, в экспрессионную кассету для экспрессии антитела,
h) введение нуклеиновой кислоты в клетку,
i) культивирование клетки и выделение антитела из клетки или культуральной надосадочной жидкости и, таким образом, получение антитела, которое специфически связывается с антигеном.
14. Применение клеток млекопитающих, экспрессирующих CD40L кролика, а также IL-2 и IL-21 для совместного культивирования антителосекретирующих кроличьих В-клеток.
15. Применение SAC для совместного культивирования антителосекретирующих В-клеток, возможно с клетками млекопитающих, экспрессирующими CD40L, и/или IL-2, и/или IL-21, и/или IL-6.
16. Способ получения антитела, включающий этап совместного культивирования человеческих В-клеток с клетками млекопитающих, экспрессирующими CD40L человека, в присутствии IL-2, или IL-21, или IL-6, или их комбинации.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что B-клетки представляют собой незрелые B-клетки.
18. Способ по любому из пп. 16 и 17, отличающийся тем, что совместное культивирование осуществляют в присутствии IL-2, или IL-2 и IL-21, или IL-2 и IL-21 и IL-6.
19. Способ по любому из пп. 16 и 17, отличающийся тем, что В-клетка представляет собой одиночную осажденную В-клетку.
20. Способ по любому из пп. 16 и 17, отличающийся тем, что B-клетки представляют собой lgG-положительные B-клетки (lgG+B-клетки).
21. Применение IL-2, и/или IL-21, и/или IL-6 для совместного культивирования человеческих В-клеток с фидерными клетками.
22. Применение по п. 21, отличающееся тем, что фидерная клетка представляет собой клетку млекопитающих, экспрессирующую CD40L человека.
23. Применение по любому из пп. 21-22, отличающееся тем, что применяют IL-2, или IL-2 и IL-21, или IL-2 и IL-21, и IL-6.
24. Способ культивирования человеческих В-клеток, секретирующих антитело, которое специфически связывается с поверхностным антигеном Т-клеток и опосредует передачу ингибирующего сигнала в Т-клетки, включающий совместное культивирование человеческих В-клеток и клеток млекопитающих, экспрессирующих CD40L человека, в присутствии IL-2, и/или IL-21, и/или IL-6.
25. Способ получения антитела, которое специфически связывается с антигеном, включающий следующие этапы:
a) совместное культивирование пула антителосекретирующих человеческих В-клеток или одиночных антителосекретирующих человеческих В-клеток с клетками млекопитающих, экспрессирующими CD40L человека, в присутствии IL-2, и/или IL-21, и/или IL-6,
b) культивирование клеток, содержащих в составе одной или нескольких экспрессионных кассет нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельные участки антитела, секретируемого человеческими В-клетками, культивируемыми совместно на этапе (a), или ее вариант,
c) выделение антитела из клеток или культуральной среды и таким образом получение антитела, которое специфически связывается с антигеном.
26. Способ по п. 25, отличающийся тем, что способ включает следующие этапы:
a) обеспечение популяции антителосекретирующих (зрелых) человеческих В-клеток,
b) окрашивание клеток, входящих в популяцию человеческих В-клеток, по меньшей мере одним флуоресцентным красителем (в одном воплощении с использованием от одного до трех или от двух до трех флуоресцентных красителей),
c) осаждение одиночных клеток из популяции окрашенных В-клеток в отдельные контейнеры (в одном воплощении контейнер представляет собой лунку многолуночного планшета),
d) культивирование осажденных отдельных человеческих В-клеток в присутствии клеток млекопитающих, экспрессирующих CD40L человека, а также IL-2, и/или IL21, и/или IL-6,
e) определение специфичности связывания антител, секретируемых в культуральную среду отдельными человеческими В-клетками,
f) определение аминокислотной последовательности вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей специфически связывающихся антител, и получение таким образом при помощи ПЦР с обратной транскрипцией и секвенирования нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельные домены легкой и тяжелой цепей моноклонального антитела,
g) включение нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельные домены легкой и тяжелой цепей моноклонального антитела, в экспрессионную кассету для экспрессии антитела,
h) введение нуклеиновой кислоты в клетку,
i) культивирование клетки и выделение антитела из клетки или культуральной надосадочной жидкости и, таким образом, получение антитела, которое специфически связывается с антигеном.
27. Способ по любому из пп. 25-26, отличающийся тем, что совместное культивирование осуществляют в присутствии IL-2, или IL-2 и IL-21, или IL-2 и IL-21 и IL-6.
28. Применение клеток млекопитающих, экспрессирующих CD40L человека, IL-2 и/или IL-21 и/или IL-6 для совместного культивирования антителосекретирующих человеческих В-клеток.
29. Применение по п. 28, отличающееся тем, что применяют IL-2, или IL-2 и IL-21, или IL-2 и IL-21 и IL-6.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP11190341.5 | 2011-11-23 | ||
| EP11190341 | 2011-11-23 | ||
| PCT/EP2012/073232 WO2013076139A1 (en) | 2011-11-23 | 2012-11-21 | Cd40l expressing mammalian cells and their use |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017127486A Division RU2017127486A (ru) | 2011-11-23 | 2012-11-21 | Клетки млекопитающих, экспрессирующие лиганд cd40l, и их применение |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2014123164A true RU2014123164A (ru) | 2015-12-27 |
| RU2627597C2 RU2627597C2 (ru) | 2017-08-09 |
Family
ID=47215579
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017127486A RU2017127486A (ru) | 2011-11-23 | 2012-11-21 | Клетки млекопитающих, экспрессирующие лиганд cd40l, и их применение |
| RU2014123164A RU2627597C2 (ru) | 2011-11-23 | 2012-11-21 | Клетки млекопитающих, экспрессирующие лиганд cd40l, и их применение |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017127486A RU2017127486A (ru) | 2011-11-23 | 2012-11-21 | Клетки млекопитающих, экспрессирующие лиганд cd40l, и их применение |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20140315252A1 (ru) |
| EP (2) | EP2782931B1 (ru) |
| JP (3) | JP6374791B2 (ru) |
| KR (1) | KR102069394B1 (ru) |
| CN (2) | CN108192943B (ru) |
| BR (1) | BR112014010455A2 (ru) |
| CA (1) | CA2850694A1 (ru) |
| ES (1) | ES2617488T3 (ru) |
| HK (2) | HK1200177A1 (ru) |
| MX (1) | MX2014005479A (ru) |
| RU (2) | RU2017127486A (ru) |
| SG (2) | SG11201402194RA (ru) |
| WO (1) | WO2013076139A1 (ru) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10017739B2 (en) * | 2012-09-06 | 2018-07-10 | Duke University | Methods of expanding and assessing B cells and using expanded B cells to treat disease |
| US20140287952A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Alderbio Holdings Llc | Protocol for identifying and isolating antigen-specific b cells and producing antibodies to desired antigens |
| US20160075766A1 (en) | 2013-05-21 | 2016-03-17 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Method for producing antibodies using ovine b-cells and uses thereof |
| EP3087177B1 (en) * | 2013-12-24 | 2022-09-14 | Kling Biotherapeutics B.V. | Ex vivo antibody production |
| ES2944563T3 (es) * | 2014-05-19 | 2023-06-22 | Hoffmann La Roche | Procedimiento para producir anticuerpos usando linfocitos B ovinos y usos de los mismos |
| CN104991061B (zh) * | 2015-06-12 | 2017-04-12 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 基于ipma的小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒 |
| CN109072192B (zh) * | 2016-02-16 | 2024-02-09 | 杜克大学 | 用于扩展和分化生产抗体的b细胞的方法 |
| CN108884442B (zh) * | 2016-03-30 | 2023-06-02 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | B细胞培养方法 |
| CN106220740A (zh) * | 2016-08-18 | 2016-12-14 | 中山大学 | 可溶性蛋白baff在b细胞体外培养及扩增的应用 |
| WO2018122147A1 (en) | 2017-01-02 | 2018-07-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | B-cell cultivation method |
| JP7075898B2 (ja) * | 2017-01-16 | 2022-05-26 | 株式会社カネカ | Ｂ細胞集団の製造方法、及びそれを用いたモノクローナル抗体の製造方法 |
| CA3051466A1 (en) | 2017-01-31 | 2018-08-09 | Vanderbilt University | Generation of human allergen-and helminth-specific ige monoclonal antibodies for diagnostic and therapeutic use |
| CN110621773B (zh) | 2017-05-19 | 2023-06-09 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于产生胸腺细胞上清液的方法 |
| CN111417719B (zh) * | 2017-11-30 | 2023-08-29 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | B细胞培养方法 |
| CN110396498A (zh) * | 2018-04-25 | 2019-11-01 | 重庆市畜牧科学院 | 体外活化记忆性b细胞成浆细胞的方法 |
| AU2019288277A1 (en) * | 2018-06-19 | 2021-01-28 | H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. | Oncolytic virus or antigen presenting cell mediated cancer therapy using type I interferon and CD40-ligand |
| CN109234238A (zh) * | 2018-09-30 | 2019-01-18 | 杭州华安单抗生物技术有限公司 | 细胞株及其应用、b细胞的培养体系及培养方法和抗体的制备方法 |
| CN109234232A (zh) * | 2018-09-30 | 2019-01-18 | 杭州华安单抗生物技术有限公司 | 兔外周血b细胞的培养体系及培养方法、抗体的制备方法和应用 |
| CN111499746B (zh) * | 2020-04-28 | 2020-11-24 | 优睿赛思(武汉)生物科技有限公司 | 一种针对人白介素-2的高亲和力兔单克隆抗体及其应用 |
| CN111518765B (zh) * | 2020-05-12 | 2021-01-26 | 优睿赛思(武汉)生物科技有限公司 | 一种b淋巴细胞体外培养体系及应用 |
| WO2022047381A1 (en) | 2020-08-31 | 2022-03-03 | Genentech, Inc. | Methods for producing antibodies |
| RU2770004C1 (ru) * | 2021-07-30 | 2022-04-14 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Южный федеральный университет» | Способ прогнозирования предрасположенности к посттравматическому гонартрозу |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5010182A (en) | 1987-07-28 | 1991-04-23 | Chiron Corporation | DNA constructs containing a Kluyveromyces alpha factor leader sequence for directing secretion of heterologous polypeptides |
| AU4005289A (en) | 1988-08-25 | 1990-03-01 | Smithkline Beecham Corporation | Recombinant saccharomyces |
| CN1333373A (zh) * | 2001-05-18 | 2002-01-30 | 苏州大学医学生物技术研究所 | 激发型抗人cd40单克隆抗体的制备方法及其应用 |
| PL1639013T3 (pl) * | 2003-07-02 | 2013-02-28 | Innate Pharma | Przeciwciała pan-kir2dl receptorów NK i ich zastosowanie w diagnostyce i leczeniu |
| EP1692276B1 (en) * | 2003-11-19 | 2010-07-21 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by the SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | Method of inducing memory b cell development and terminal differentiation |
| US20060051348A1 (en) | 2004-09-09 | 2006-03-09 | Jorn Gorlach | Method of producing a plurality of isolated antibodies to a plurality of cognate antigens |
| CA2622603C (en) | 2005-09-15 | 2014-06-17 | Crucell Holland B.V. | Method for preparing immunoglobulin libraries |
| JP2009513680A (ja) * | 2005-10-28 | 2009-04-02 | セントカー・インコーポレーテツド | 抗体の生成におけるｂ細胞増殖剤の使用 |
| US20070269868A1 (en) | 2006-05-19 | 2007-11-22 | Carvalho Jensen Anne E | Culture method for obtaining a clonal population of antigen-specific B cells |
| EP3138852A1 (en) * | 2007-01-03 | 2017-03-08 | Morphotek, Inc. | High affinity antibodies that neutralize staphylococcus enterotoxin b |
| ES2610607T3 (es) | 2007-05-21 | 2017-04-28 | Alderbio Holdings Llc | Anticuerpos contra IL-6 y usos de los mismos |
| EP2018070A1 (en) | 2007-07-17 | 2009-01-21 | Thomson Licensing | Method for processing images and the corresponding electronic device |
| CA2706700A1 (en) * | 2007-11-08 | 2009-05-14 | Cytimmune Sciences, Inc. | Compositions and methods for generating antibodies |
| EP2242836B1 (en) * | 2008-01-28 | 2015-05-20 | Thomas Jefferson University | Method of making hybrid cells that express useful antibodies |
| CN102164958A (zh) * | 2008-06-25 | 2011-08-24 | 艾斯巴技术,爱尔康生物医药研究装置有限责任公司 | 使用通用抗体构架进行的兔抗体的人源化 |
| EP2321354B2 (en) * | 2009-02-24 | 2019-11-20 | ESBATech, an Alcon Biomedical Research Unit LLC | Methods for identifying immunobinders of cell-surface antigens |
| JP5550132B2 (ja) * | 2009-10-30 | 2014-07-16 | 学校法人東京理科大学 | 抗原特異的ｂ細胞集団の製造方法 |
| US8981057B2 (en) * | 2010-03-05 | 2015-03-17 | Academisch Medisch Centrum Bij De Universiteit Van Amsterdam | B-cell stimulating fusion proteins of an antigen with BAFF or APRIL |
-
2012
- 2012-11-21 SG SG11201402194RA patent/SG11201402194RA/en unknown
- 2012-11-21 JP JP2014542810A patent/JP6374791B2/ja active Active
- 2012-11-21 RU RU2017127486A patent/RU2017127486A/ru not_active Application Discontinuation
- 2012-11-21 SG SG10201608341XA patent/SG10201608341XA/en unknown
- 2012-11-21 BR BR112014010455A patent/BR112014010455A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2012-11-21 MX MX2014005479A patent/MX2014005479A/es unknown
- 2012-11-21 EP EP12788221.5A patent/EP2782931B1/en active Active
- 2012-11-21 CA CA2850694A patent/CA2850694A1/en not_active Abandoned
- 2012-11-21 US US14/360,048 patent/US20140315252A1/en not_active Abandoned
- 2012-11-21 RU RU2014123164A patent/RU2627597C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2012-11-21 WO PCT/EP2012/073232 patent/WO2013076139A1/en active Application Filing
- 2012-11-21 EP EP16203631.3A patent/EP3176178B1/en active Active
- 2012-11-21 CN CN201810053265.6A patent/CN108192943B/zh active Active
- 2012-11-21 CN CN201280057401.XA patent/CN103946236B/zh active Active
- 2012-11-21 KR KR1020147013798A patent/KR102069394B1/ko active IP Right Grant
- 2012-11-21 ES ES12788221.5T patent/ES2617488T3/es active Active
-
2015
- 2015-01-21 HK HK15100665.7A patent/HK1200177A1/xx unknown
-
2017
- 2017-02-28 JP JP2017035643A patent/JP6505761B2/ja active Active
-
2018
- 2018-08-23 HK HK18110900.8A patent/HK1251617A1/zh unknown
- 2018-10-03 US US16/150,509 patent/US20190153091A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-03-27 JP JP2019059609A patent/JP6659888B2/ja active Active
-
2022
- 2022-08-11 US US17/819,064 patent/US20230399396A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20190153091A1 (en) | 2019-05-23 |
| JP6374791B2 (ja) | 2018-08-15 |
| EP3176178B1 (en) | 2019-01-30 |
| HK1251617A1 (zh) | 2019-02-01 |
| SG11201402194RA (en) | 2014-09-26 |
| EP3176178A1 (en) | 2017-06-07 |
| JP2017113027A (ja) | 2017-06-29 |
| CN103946236A (zh) | 2014-07-23 |
| SG10201608341XA (en) | 2016-11-29 |
| RU2627597C2 (ru) | 2017-08-09 |
| CN108192943A (zh) | 2018-06-22 |
| EP2782931B1 (en) | 2016-12-14 |
| KR102069394B1 (ko) | 2020-01-22 |
| BR112014010455A2 (pt) | 2018-08-07 |
| CA2850694A1 (en) | 2013-05-30 |
| US20140315252A1 (en) | 2014-10-23 |
| JP6659888B2 (ja) | 2020-03-04 |
| EP2782931A1 (en) | 2014-10-01 |
| CN103946236B (zh) | 2018-02-16 |
| US20230399396A1 (en) | 2023-12-14 |
| JP2019092527A (ja) | 2019-06-20 |
| JP6505761B2 (ja) | 2019-04-24 |
| RU2017127486A (ru) | 2019-02-06 |
| HK1200177A1 (en) | 2015-07-31 |
| JP2014533514A (ja) | 2014-12-15 |
| KR20140095066A (ko) | 2014-07-31 |
| MX2014005479A (es) | 2014-08-18 |
| ES2617488T3 (es) | 2017-06-19 |
| WO2013076139A1 (en) | 2013-05-30 |
| CN108192943B (zh) | 2022-03-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2014123164A (ru) | Клетки млекопитающих, экспрессирующие лиганд cd40l, и их применение | |
| Blanca et al. | Human B cell activation by autologous NK cells is regulated by CD40-CD40 ligand interaction: role of memory B cells and CD5+ B cells | |
| Kondo et al. | Identification of clonogenic common lymphoid progenitors in mouse bone marrow | |
| Spits et al. | The expanding family of innate lymphoid cells: regulators and effectors of immunity and tissue remodeling | |
| Romee et al. | Cytokine activation induces human memory-like NK cells | |
| Read et al. | In vitro differentiation of effector CD4+ T helper cell subsets | |
| RU2015155197A (ru) | Способ культивирования одиночной в-клетки | |
| US7915043B2 (en) | CD34(+) cells and their methods of use | |
| KR20210111746A (ko) | 세포를 단리 및 증식하는 방법 | |
| CN104884612A (zh) | Mait样细胞及其制作方法 | |
| Melchers et al. | Cellular stages and molecular steps of murine B-cell development | |
| Lopez-Ocasio et al. | T follicular regulatory cell suppression of T follicular helper cell function is context-dependent in vitro | |
| Cooper et al. | Isolation and characterization of human natural killer cell subsets | |
| CN111518765B (zh) | 一种b淋巴细胞体外培养体系及应用 | |
| Bonnaure et al. | Bone marrow mesenchymal stem cells enhance the differentiation of human switched memory B lymphocytes into plasma cells in serum-free medium | |
| Pishdadian et al. | Type 2 Innate Lymphoid Cells: Friends or Foes—Role in Airway Allergic Inflammation and Asthma | |
| US11124766B2 (en) | Growth and survival compositions for cells capable of producing antibodies and methods related thereto | |
| JP5757942B2 (ja) | 表現型の可塑性を示す細胞を生成する方法 | |
| CA3216986A1 (en) | Compositions and methods for differentiating and expanding b lineage cells | |
| US20220213439A1 (en) | Systems and methods for modulating a cell phenotype | |
| CN114703134A (zh) | 一种体外分化和扩增Th17细胞的方法及应用 | |
| Zambrano et al. | Prolonged Ex vivo expansion and differentiation of naïve murine CD43− B splenocytes | |
| Vos et al. | Heterogeneity in the ability of cytotoxic murine NK cell clones to enhance Ig secretion in vitro | |
| CN110418838B (zh) | B细胞群的制备方法、以及使用了其的单克隆抗体的制备方法 | |
| Baba et al. | Mouse germinal center B cells with the xid mutation retain responsiveness to antimouse CD40 antibodies but diminish IL-5 responsiveness. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201122 |