RU2013154962A

RU2013154962A - Способ получения полиплоидных мегакариоцитов и тромбоцитов

Info

Publication number: RU2013154962A
Application number: RU2013154962/10A
Authority: RU
Inventors: Кодзи ЭТО; Хиромицу НАКАУЧИ; Наоя ТАКАЯМА; Соу НАКАМУРА
Original assignee: Университет Токио
Priority date: 2011-05-13
Filing date: 2012-05-11
Publication date: 2015-06-20
Also published as: US10533185B2; IL229382B; BR112013029334A2; CN103814126A; EP2708597A1; IL229382A0; KR20140029488A; AU2012256880A1; JPWO2012157586A1; CA2836073A1; SG195007A1; RU2606764C2; AU2012256880B2; DK2708597T3; KR101572344B1; EP2708597A4; CN103814126B; US20140127815A1; US20180016597A1; EP2708597B1

Abstract

1. Способ получения полиплоидных мегакариоцитов, включающий принудительную экспрессию гена-супрессора апоптоза в мегакариоцитах, не прошедших полиплоидизацию, и культивирование указанных клеток.2. Способ по п.1, в котором геном-супрессором апоптоза является ген BCL-XL.3. Способ по п.1, в котором на стадии культивирования ингибируют экспрессию или функцию продукта гена p53.4. Способ по п.1, в котором на стадии культивирования мегакариоциты, не прошедшие полиплоидизацию, подвергают по меньшей мере одной из следующих обработок (a)-(c):(a) обработке ингибитором функции актомиозинового комплекса;(b) обработке ингибитором ROCK; и(c) обработке ингибитором HDAC.5. Способ по п.4, в котором ингибитором ROCK является Y27632; ингибитором HDAC является вальпроевая кислота; а ингибитором функции актомиозинового комплекса является блеббистатин.6. Способ по п.1, в котором стадию культивирования проводят при температуре выше 37°C.7. Способ по п.1, в котором мегакариоциты, не прошедшие полиплоидизацию, получают путем принудительной экспрессии онкогена и любого из следующих генов (i)-(iii) в клетках на любой стадии дифференцировки от гемопоэтических клеток-предшественников до мегакариоцитов, не прошедших полиплоидизацию:(i) гена, подавляющего экспрессию гена p16 или гена p19;(ii) гена, подавляющего экспрессию гена Ink4a/Arf; и(iii) гена polycomb; икультивирования и пролиферации полученных клеток.8. Способ по п.7, в котором в качестве онкогена используют ген c-MYC, а в качестве любого из генов (i)-(iii) используют BMI1.9. Способ по п.7, в котором гемопоэтические клетки-предшественники получены из клеток, выбранных из группы, состоящей из ИПС клеток, ЭС клеток, гемопоэтических стволовых кле

Claims

1. Способ получения полиплоидных мегакариоцитов, включающий принудительную экспрессию гена-супрессора апоптоза в мегакариоцитах, не прошедших полиплоидизацию, и культивирование указанных клеток.

2. Способ по п.1, в котором геном-супрессором апоптоза является ген BCL-XL.

3. Способ по п.1, в котором на стадии культивирования ингибируют экспрессию или функцию продукта гена p53.

4. Способ по п.1, в котором на стадии культивирования мегакариоциты, не прошедшие полиплоидизацию, подвергают по меньшей мере одной из следующих обработок (a)-(c):

(a) обработке ингибитором функции актомиозинового комплекса;

(b) обработке ингибитором ROCK; и

(c) обработке ингибитором HDAC.

5. Способ по п.4, в котором ингибитором ROCK является Y27632; ингибитором HDAC является вальпроевая кислота; а ингибитором функции актомиозинового комплекса является блеббистатин.

6. Способ по п.1, в котором стадию культивирования проводят при температуре выше 37°C.

7. Способ по п.1, в котором мегакариоциты, не прошедшие полиплоидизацию, получают путем принудительной экспрессии онкогена и любого из следующих генов (i)-(iii) в клетках на любой стадии дифференцировки от гемопоэтических клеток-предшественников до мегакариоцитов, не прошедших полиплоидизацию:

(i) гена, подавляющего экспрессию гена p16 или гена p19;

(ii) гена, подавляющего экспрессию гена Ink4a/Arf; и

(iii) гена polycomb; и

культивирования и пролиферации полученных клеток.

8. Способ по п.7, в котором в качестве онкогена используют ген c-MYC, а в качестве любого из генов (i)-(iii) используют BMI1.

9. Способ по п.7, в котором гемопоэтические клетки-предшественники получены из клеток, выбранных из группы, состоящей из ИПС клеток, ЭС клеток, гемопоэтических стволовых клеток, полученных из пуповинной крови, костного мозга или периферической крови, и гемопоэтических стволовых клеток.

10. Композиция клеток крови, содержащая полиплоидные мегакариоциты, полученные посредством способа по п.1.

11. Способ получения тромбоцитов, включающий:

- получение полиплоидных мегакариоцитов способом по п.1 и культивирования клеток; и

- сбор тромбоцитов из культуры полиплоидных мегакариоцитов.

12. Способ по п.11, в котором стадию культивирования полиплоидных мегакариоцитов проводят при подавлении экспрессии гена-супрессора апоптоза, который принудительно экспрессирован, или после удаления гена-супрессора апоптоза из клеток.

13. Способ по п.11, в котором стадию культивирования полиплоидных мегакариоцитов проводят в отсутствие сыворотки и/или при отсутствии фидерных клеток.

14. Способ по п.11, в котором стадию культивирования полиплоидных мегакариоцитов проводят в течение от 1 до 15 суток.

15. Способ по п.11, в котором стадию культивирования полиплоидных мегакариоцитов проводят при 37°C.

16. Способ по п.11, в котором на стадии культивирования полиплоидных мегакариоцитов в среду добавляют ингибитор ROCK и/или ингибитор функции актомиозинового комплекса.

17. Способ по п.16, в котором ингибитором ROCK является Y27632, а ингибитором функции актомиозинового комплекса является блеббистатин.

18. Тромбоциты, полученные способом по п.11.

19. Продукт крови, содержащий тромбоциты по п.18.