RU2012558C1

RU2012558C1 - Способ индуцирования дифференциации злокачественных клеток

Info

Publication number: RU2012558C1
Application number: SU904831976A
Authority: RU
Inventors: Флойд Делюка Гектор; Константин Шнес Хайнрих; Леонард Перлман Кейто; Ричард Сицински Рафал; Мартин Прэл Джин
Original assignee: Висконсин Алюмни Рисерч Фаундейшн
Priority date: 1989-03-09
Filing date: 1990-11-06
Publication date: 1994-05-15
Also published as: NO904854D0; HU9802116D0; AU5198890A; NO904854L; FI905489A0; HUT56538A; US5237110A; IL93455A0; IL93455A; KR950013636B1; RU2055068C1; AR246254A1; RO109331B1; US5880113A; US5618805A; KR920700200A; HU222491B1; US5710294A; US5561123A; CA1333616C

Abstract

Использование: медицина, экспериментальная биология. Сущность изобретения: изобретение касается нового класса соединений группы витамина D₃ , а именно аналогов 1 α -гидроокси-19-нор-витамина D₃ , а также общего метода синтеза таких соединений. Подобные соединения проявляют повышенную активность по торможению разрастания недифференцированных клеток, включая злокачественные, и по стимулированию их дифференциации, являясь таким образом новыми лечебными средствами для излечения злокачественных новообразований и иных заболеваний, характеризующихся разрастанием недифференцированных клеток. Кроме того, предложены медицинские рецепты с использованием данных соединений и методы лечения. 1 з. п. ф-лы.

Description

Изобретение касается биологически активных соединений группы витамина D, а именно 19-нор-аналогов 1 α-гидроксилированных соединений группы витамина D, а также общего технологического процесса их получения.

1а-Гидроксилированные метаболиты витамина D, среди которых наиболее важными являются 1 α, 25-дигидроксивитамин D₃ и 1 α, 25-дигидроксивитамин D₂, известны в качестве высокоэффективных регуляторов кальциевого гомеостаза в теле животных и человека, была также установлена и их активность в отношении клеточной дифференциации. Было получено и испытано множество структурных аналогов упомянутых метаболитов, включая соединения с различной структурой ответвлений, с различными типами гидроксилирования и разнообразной стереохимией. Важнейшими примерами указанных аналогов могут служить 1 α-гидроксивитамин D₃, 1 α-гидроксивитамин D₂, различные производные 1 α, 25-дигидроксивитамина D₃ с фтрированными боковыми цепочками, а также аналоги, являющиеся гомологами по боковым цепочкам. Ряд этих известных соединений проявляет высокую потенциальную активность "ин витро" или "ин вито" и применяется или предложен для применения с целью лечения разнообразных заболеваний: почечной остеодистрофии, рахита, плохо поддающего воздействию витамина D, остеоспороза, псориаза и некоторых злокачественных образований.

Класс 1 α-гидроксилированных соединений группы витамина D включает 19-нор-аналоги, т. е. соединения, в которых типичная для всех структур группы витамина D экзоциклическая метиленовая группа кольца А удалена и замещена двумя атомами водорода. А именно, структура этих новых аналогов характеризуется следующей формулой:

(I) где Х¹ и Х² (каждый из них) выбраны из множества, содержащего водород и ацил;
радикал R представляет собой любую из типичных боковых цепочек соединений группы витамина D, т. е. R может представлять собой алкил, водород, гидроксиалкил или же радикал фторалкила. Кроме того, R может также представлять собой следующую боковую цепочку:

где R¹ - водород, гидроксигруппа или 0-ацил, каждый из радикалов R² и R³ выбран из множества, содержащего алкил, гидроксиалкил и фторалкил, или же оба эти радикала вместе могут быть представлены группой -(СН₂)_m-, где m - целое положительное число, равное от 2 до 5;
R⁴ выбран из множества, содержащего водород, гидроксигруппу, фтор, 0-ацил, гидроксиалкил и фторалкил, R⁵ выбран из множества, содержащего водород, фтор, алкил, гидроксиалкил и фторалкил, или же оба радикала R⁴и R⁵ могут быть представлены вместе кислородом с двойной связью;
радикалы R⁶ и R⁷ выбраны из множества, содержащего водород, гидроксигруппу, 0-ацил, фтор и алкил, или же оба эти радикала R⁶ и R⁷могут быть представлены двойной связью "углерод-углерод", где n - целое положительное число, принимающее значения от 1 до 5, а атом углерода на любой из позиций 20, 22 или 23 боковой цепочки может быть заменен атомом кислорода, серы или азота.

Важными специфическими примерами боковых цепочек являются структуры, представленные формулами а), b), c), d) и с), приведенными ниже, т. е. это боковые цепочки, наличествующие в 25-гидроксивитамине D₃(а), витамине D₃ (b), 25-гидроксивитамине D₂ (с), витамине D₂ (d) и С-24-эпимере 25-гидроксивитамина D₂ (e):

_(c);

OH (e) .

Термин "алкил" означает радикал алкила с 1-5 атомами углерода во всех формах изомерии: метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, пентил и т. п. термины "гидроксиалкил" и "фторалкил" относятся к указанным алкилам, замещенным соответственно одной или более гидроксигруппами или фтором, а термин "ацил" означает алифатическую группу ацила с 1-5 атомами углерода: формил, ацетил, пропионил и т. п. или ароматическую группу: бензоил, нитробензоил или галобензоил. Термин "арил" означает группу фенила или же алкил-, нитро- или галозамещенную группу фенила.

Получить соединения группы 1 α-гидрокси-19-нор-витамина D, принципиальная структура которых показана выше, можно общепринятым способом с использованием в качестве исходных материалов известных соединений группы витамина D. Например, подходящими исходными веществами могут служить соединения группы витамина D общей формулы

(II), где R - боковая цепочка любого типа из тех, что описаны выше.

Указанные исходные вещества группы витамина D представляют собой известные соединения или же соединения, которые можно получить известными способами.

Согласно известному процессу, исходное вещество превращают в соответствующее производное 1 α-гидрокси-3,5-цикловитамина D приведенной ниже общей структурной формулы III, где Х - водород; Q - алкил, предпочтительно метил:
Q

(III)
Для предотвращения реакции 1 α-гидроксигруппы (на последующих стадиях) гидроксигруппу переводят в соответствующее ацил-производное с использованием стандартного процесса ацилирования, например обработкой ацилангидридом или ацилгалидом в пиридине при комнатной или несколько повышенной температуре: 30-70^оС. Следует при этом иметь в виду, что хотя для иллюстрации процесса, отвечающего предлагаемому способу, выше приведена защита функциональных гидроксигрупп ацилом, можно использовать и другие стандартные группы, защищающие гидроксигруппу, например защитные группы алкилсилила или алкоксиалкила. Подобные защитные группы хорошо известны в данной области. К ним относятся триметилсилил, триэтилсилил, трет. -бутилдиметилсилил, или же тетрагидрофуранил, метоксиметил. Применение этих защитных групп является обычной разновидностью конкретных условий эксперимента в области, охватываемой настоящим изобретением.

Далее проводят реакцию производного, полученного как указано выше, с тетраоксидом осмия для получения 10,19-дигидроксианалога формулы IV, где Х - ацил:

(IV)
Затем этот аналог подвергают реакции расщепления диола при помощи метапериодата натрия или аналогичного реагента, вызывающего расщепление винилового диола, например при помощи тетраацетата свинца, с целью получения промежуточного 10-оксо-соединения следующей структурной формулы V, где Х - ацил:
Q

(V)
Эти два последовательных этапа можно осуществить по методике, которую предложили Паарен и сотр. (J. Org Chem. , т. 48, 1983, с. 3819). Если элемент R боковой цепочки несет вициновые диолы, например 24,25-дигидрокси- или 25,26-дигидрокси- и т. п. , последние, разумеется, тоже необходимо защитить путем ацилирования, силилирования, превращением в производное изопропилидена до проведения расщепления периодатом.

В большинстве случаев указанное ацилирование 1 α-гидроксигруппы самопроизвольно вызывает эффект ацилирования функциональных гидроксигрупп боковых цепочек, поэтому условия ацилирования следует подходящим образом отрегулировать с тем, чтобы обеспечить полную защиту группировок вицинового диола боковой цепочки.

Следующий этап процесса заключается в восстановлении 10-оксогруппы до соответствующего 10-спирта следующей структурной формулы VI, где Х - ацил; Y - гидроксигруппа:

(VI)
Если Х - ацил, то восстановление проводят удобным образом в органическом растворителе при температуре от 0^оС до комнатной с использованием NaBH₄ или равноценного гидридного восстановителя, избирательно восстанавливающего группы карбонила без расщепления сложноэфирных функциональных групп. Так как окси Х-группа, защищающая гидроксигруппу и устойчивая к действию восстановителей, то можно применять и другие гидридные восстановители: LiAlH₄ и т. п.

Далее промежуточное 10-гидроксисоединение обрабатывают алкил- или арилсульфонилгалидом, например метансульфонил- хлоридом, в подходящем растворителе, например в пиридине, с целью получения соответствующего 10-0-алкил- или арилсульфонил-производного, представляющего собой соединение указанной структурной формулы VI, где Y представляет собой алкил-SO₂O- или арил-SO₂O-. Затем данное сульфонатное промежуточное соединение подвергают прямому восстановлению литий-алюминиевым гидридом или же аналогичным известным литий-алюминий- алкил-гидридным реагентом в растворителе, представляющем собой простой эфир, в температурном интервале от 0^оС до точки кипения растворителя, замещая тем самым группу сульфоната и получая 10-деоксипроизводное, представленное структурной формулой VI, где Х и Y - водород. Приведенная структурная формула VI показывает, что на данном этапе восстановления функциональная группа 1-0-ацила предшествующего соединения формулы V также расщепляется с образованием свободной функциональной 1 α-гидроксигруппы, причем все защитные группы 0-ацила боковой цепочки аналогично будут восстановлены до соответствующей спиртовой функциональной группы. По желанию гидроксигруппы на позиции С-1 (или гидроксигруппы боковой цепочки) можно перезащитить ацилированием или силилированием или же преобразованием в соответствующее производное алкилсилила или алкоксиалкила, однако подобного рода защита не требуется. Альтернативные группы, защищающие гидроксигруппу, такие как группы алкилсилила или алкоксиалкила, на данном этапе восстановления удерживаются, но при желании их можно удалить на этом или последующих этапах проведения процесса тем или иным известным стандартным методом.

Далее упомянутое промежуточное 1 α-гидрокси-10-деокси-соединение цикловитамина D подвергают сольволизации в присутствии низкомолекулярной органической кислоты в условиях проведения процесса. При проведении сольволиза в уксусной кислоте была, например получена смесь 3-ацетата 1 α-гидрокси-19-нор-витамина D и 1-ацетата 1-α-гидрокси-19-нор-витамина D (соединения приведенных формул VII и VIII). Когда же в процессе сольволиза применяли другие кислоты, то аналогичным образом были получены 1- и 3-ацетат:

(VII)

(VIII)
Прямой основной гидролиз указанной смеси, проведенный в стандартных условиях, позволял получить искомый 1 α-гидрокси-10-нор-витамин D приведенной структурной формулы I (где X¹ и Х² - водород). Согласно другому варианту можно было также разделить упомянутую смесь моноацетатов (например методом жидкостной хроматографии под высоким давлением) и подвергнуть полученные изомеры (1-ацетил и 3-ацетат) гидролизу раздельно с целью получения из каждого из них окончательного продукта, а именно 1 α-гидрокси-19-нор-витамина D структурной формулы I. Точно так же разделенные моноацетаты структурных формул VII и VIII или же свободное 1,3-дигидрокси-соединение можно подвергнуть реацилированию по стандартной методике с использованием какой-либо желательной группы ацила, для того чтобы получить продукт приведенной структурной формулы I, где Х¹ и Х² представляют собой группы ацила, которые могут быть одинаковыми или различными.

Биологическая активность соединений группы 1 α-гидрокси-19-нор-витамина D.

Новые соединения, отвечающие предлагаемому способу, проявляют биологическую активность оригинального характера, а именно повышенную способность стимулировать дифференциацию злокачественных клеток, не проявляя в то же время никакой активности по известкованию костной ткани (или проявляя такую активность лишь в слабой степени). Это подтверждают результаты биологических испытаний, полученные для 1α , 25-дигидрокси-19-нор-витамина D₃ (соединение формулы Ia) и суммированные соответственно в табл. 1 и табл. 2.

В табл. 1 приведено сравнение активности известного активного метаболита 1 α, 25-дигидроксивитамина D₃ и его 19-нор-аналога структурной формулы Ia по дифференциации клеток лейкемии человека (клеток HL-60) в культуре до нормальных клеток (моноцитов). Активность по дифференцированию оценивали по трем стандартным методикам испытаний на дифференцирование: NBT(nitroblue terrazolium восстановление нитрокрасителя "терразол синий", NSE (поп-Specific esterase), неспецифическая активность по эстеразе, и РНА GO (phagocitosis), активность по фагоцитозу. Указанные испытания были проведены по стандартным рекомендациям. При проведении каждого испытания активность испытуемых соединений выражали в виде процентного содержания клеток НL-60, которые удалось дифференцировать до нормальных клеток, сопоставленного с данной концентрацией испытываемого соединения.

Данные, приведенные в табл. 1, показывают, что новый аналог, а именно, 1 α, 25-дигидрокси-19-нор-витамин D₃ формулы Ia так же, как и 1 α, 25-дигидроксивитамин D₃, обладает способностью стимулировать дифференциацию клеток лейкемии. Во всех трех испытаниях до 90% упомянутых клеток претерпели дифференциацию под действием 1 α, 25-дигидрокси-витамина D₃ с молярной концентрацией 1х10^-7, и та же самая степень дифференциации, т. е. 90, 84 и 90% , была достигнута под действием 19-нор-аналога формулы Ia.

В отличие предыдущим результатам новый 19-нор-аналог формулы Ia не проявил никакой активности в тех испытаниях, когда измеряли известкование костной ткани (типичный процесс, обусловленный соединениями группы витамина D).

Данные, представляющие собой результаты испытания по сравнению активности в отношении известкования костной ткани у крыс под действием 1 α, 25-дигидроксивитамина D₃ и 1 α, 25-дигидрокси-19-нор-витамина D₃формулы Ia, приведены в табл. 2. Это испытание было проведено согласно известной методике (Endocrinology, т. 92, 1973, с. 417).

Представленные в табл. 2 данные показывают ожидаемую активность по известкованию костей для 1 α, 25-дигидрокси- витамина D₃, выражающуюся в увеличении процентного содержания костной золы, а также в общем содержании золы при всех уровнях дозы витамина. В противоположность этому 19-нор-аналог формулы 1а не показывает никакой активности при всех трех уровнях дозы по сравнению с контрольной группой без витамина D ("-D").

Таким образом, новый 19-нор-аналог показывает избирательный характер активности в сочетании с высокой способностью вызывать дифференциацию злокачественных клеток при весьма низкой активности по известкованию костей или при ее полном отсутствии. Следовательно, соединения этого нового структурного типа можно использовать в качестве медицинского средства для извлечения злокачественных новообразований. Благодаря дифференцирующей активности соединений группы витамина D по отношению к кератиноцитам кожи (см. Смит с соавт. J. Invest, Dermatol, т. 86, 1986, с. 709; Смит с соавт. J. A. m. Acad. Dermatol, т. 19, 1988, с. 516) их считают показанными для успешного извлечения псориаза (см. Такамото с соавт. Сalc, TI ssue int, т. 39, 1986, с. 360). Указанные соединения можно считать полезными для лечения этого и других заболеваний кожи, характеризующихся разрастанием недифференцированных клеток. Установлено, что эти соединения также можно использовать для подавления паратироидных тканей, например, в случаях вторичного гиперпаратиродизма, найденного при заболевании печени (см. Златопольски и др. J. CLin. , Invest, т. 74, 1984, с. 2136).

Для лечебных целей новые соединения, отвечающие данному изобретению, можно включать в рецептурные средства в виде растворов в безвредных растворителях, или же в виде эмульсий, суспензий или дисперсий в подходящих безвредных растворителях, или носителях, а также в виде пилюль, таблеток или капсул, содержащих твердые носители в соответствии со способами, известными специалистами в данной области. Для местного применения данные соединения включают в рецептурные составы преимущественно в виде кремов или мазей или подобных средств, подходящих для указанного местного применения. Каждый из таких рецептурных составов может также содержать другие фармацевтически приемлемые и нетоксичные эксципиенты такие, как стабилизаторы, противоокислители, связующие, красители, эмульгаторы или вкусовые добавки.

Предложенные соединения назначают преимущественно в виде инъекций или внутривенного вливания подходящих стерильных растворов, а также в виде доз, принимаемых внутрь через пищеварительный тракт, или средств местного назначения в виде мазей, примочек или подходящих пластырей. Для извлечения злокачественных заболеваний отвечающие данному изобретению соединения группы 19-нор-витамина D назначают пациентам в дозах, достаточных для подавления разрастания злокачественных клеток и стимулировать дифференциации последних в нормальные моноциты-макрофаги. Аналогичным образом при лечении псориаза можно назначать прием предложенных соединений через пищеварительный тракт или назначать местное применение в количествах, достаточных для сдерживания разрастания недифференцированных кератиноцитов. При лечении гиперпаратиродизма указанные соединения назначают в дозах, достаточных для подавления паратироидной активности таким образом, чтобы уровни паратироидного гормона достигли нормальных значений. Приемлемые дозы составляют 1-500 мкг соединения в день. Эти дозы корректируют в зависимости от подлежащего извлечению заболевания, от серьезности последнего, а также от индивидуальной реакции и состояния пациента, что хорошо известно специалистам в данной области.

В примерах конкретные соединения, обозначаемые римскими цифрами и буквами, например 1а, 1b, . . . , IIa, IIb. . . и т. п. , соответствуют конкретным структурам и комбинациям боковых цепочек, описанным ранее.

П р и м е р 1. Получение 1 α, 25-дигидрокси-19-нор-витамина D₃формулы 1а
а) 6-метиловый эфир 1-ацетата 1 α, 25-дигидрокси-3,5-цикловитамина D.

С использованием 25-гидроксивитамина D₃ формулы IIa в качестве исходного вещества согласно известной методике получили известное производное: 1 α, 25-дигидрокси-3,5-цикловитамин D₃ формулы IIIa. Затем этот продукт подвергли ацилированию в стандартных условиях с целью получения соответствующего 1-ацетатного производного формулы IIIa, причем в первом производном Х представляет собой водород, а во втором - радикал ацетила.

б) 6-метиловый эфир 1-ацетата 10,19-дигидро-1 α, 10,19,25-тетрагидрокси-3,5-цикловитамина D₃ формулы IVa.

Промежуточное соединение формулы IIIa, где Х - ацетил, обрабатывали небольшим молярным избытком тетраоксида осмия в пиридине согласно общей методике (см. Паарен с соавт. V. Org. Chem. , т. 48, 1983, с. 3819) с целью получения 10,19-дигидроксилированного производного формулы IVa, для которого масс-спектрометрическая относительная интенсивность m/z составила: 506 (M⁺, 1), 488 (2), 474 (40), 425 (45), 396 (15), 285 (5), 229 (30), 133 (45), 59 (80), 43 (100), а наличие радикалов по данным ядерного магнитного резонанса для ¹Н: (CDCl₃)-δ 0,58 (3H, s, 18 CH₃), 0,58 (1H, m, 3-H), 0,93 (3H, d, I = 6,1 Гц, 21-СН₃), 1,22 (6Н, s, 26-CH₃), 2,10 (3H, s, COCH₃), 3,25 (3H, s, 6-СН₃), 3,63 (2Н, m, 19-СН₂), 4,60 (1Н, d, I = 9,2 Гц, 6-Н), 4,63 (1Н, dd, 1 β-H), 4,78 (1H, d, I = 9,2 Гц, 7-Н).

в) 6-метиловый эфир 1-ацетата 1 α, 25-дигидрокси-10-оксо-3,5-цикло-19-нор-вита- мина D₃ формулы Va.

Промежуточное 10,19-дигидроксилированное соединение формулы IVa обрабатывали раствором метапериодата натрия согласно методике (см. Паарен и др. , J. Org. Chem. , т. 48, 1983, с. 3819), с целью получения производного 10-оксо-цикловитамина D формулы Va, где Х - радикал ацетила. Масс-спектрометpическая относительная интенсивность m/z составила: 442 (М⁺-МеОН), (18), 424 (8), 382 (15), 364 (35), 253 (55), 225 (25), 197 (53), 155 (85), 137 (100). Наличие радикалов по данным ядерного магнитного резонанса для ¹Н (СDCl₃) δ 0,58 (3H, s, 18-СH₃), 0,93 (3Н, d, I = 6,6 Гц, 21-СН₃), 1,22 6Н, s, 26-СН₃ и 27-СН₃), 2,15 (s, 3-OCOCH₃), 3,30 (3H, s, 6-ОСН₃), 4,61 (1Н, d, I = 9,1 Гц, 6-Н), 4,71 (1Н, d, I = 9,6 Гц, 7-Н), 5,18 (1Н, m, 1 β-Н).

Установлено также, что данная реакция расщепления диола не требует повышенных температур, и реакцию, как правило, предпочтительнее проводить приблизительно при комнатной температуре.

г) 6-метиловый эфир 1 α-ацетокси-10,25-дигидрокси-3,5-цикло-19-нор-витамина D₃ формулы VIa, где Х - ацеторадикал, Y - гидроксил.

10-Оксосоединение формулы Va, где Х - ацеторадикал, в количестве 2,2 мг (4,6 мкмоль) растворяли в 0,5 л этилового спирта и к этому раствору добавляли 50 мкл (3,3 мкмоль) раствора NaBH₄, приготовленного с использованием 20 мг NaBH₄, 4,5 мл воды и 0,5 мл 0,01 н. раствора NaOH. Смесь механически перемешивали при 0^оС в течение 1,5 ч, а затем выдерживали при 0^оС в течение 16 ч. К смеси добавляли простой эфир, органическую фазу отмывали рассолом, осушали над сульфатом магния, отфильтровывали и выпаривали. Черновой продукт очищали в хроматографической колонке с гелем кремнезема (колонка 15х1 см). Спиртовое соединение формулы VIa, в котором Х - ацеторадикал; а Y - гидроксил, вымывали с использованием этилацетат-гексановых смесей и получали 1,4 мг (3 мкмоль) продукта. Масс-спектрометрическая относительная интенсивность m/z составила: 476 (М⁺) (I), 444 (85), 426 (18), 384 (30), 366 (48), 351 (21), 255 (35), 237 (48), 199 (100), 139 (51), 59 (58).

д) 1 α, 25-дигидрокси-19-нор-витамин D₃ формулы Ia, где Х¹ и Х²-водород.

10-Спиртовое соединение формулы VIa, где Х - ацеторадикал; Y - гидроксил, в количестве 1,4 мг растворяли в 100 мкл безводного СН₂Cl₂ и 10 мкл (14 мкмоль) раствора триэтиламина, приготовленного с использованием 12 мг (16 мкл) триэтиламина в 100 мкл безводного CH₂Cl₂, после чего при 0^оС добавляли 7 мкл (5,6 мкмоль) раствора мезилхлорида (9 мг мезилхлорида, 6,1 мкл, в 100 мкл безводного СН₂Cl₂). Смесь механически перемешивали при 0^оС в течение 2 ч. Растворители удаляли при помощи потока аргона, а остаток, представляющий собой соединение формулы VIa, где Х - ацеторадикал; Y - радикал СН₃SO₂O-, растворяли в 0,5 мл безводного тетрагидрофурана. Далее добавляли 5 мг LiAlY₄ при 0^оС и выдерживали смесь при этой температуре в течение 16 ч. Избыток LiAlH₄разлагали простым эфиром, содержащим воду. Эфирную фазу отмывали водой и высушивали над сульфатом магния, затем отфильтровывали и выпаривали остальное с целью получения 19-нор-продукта формулы VIa, где Х и Y - водород.

Полученный продукт растворяли в 0,5 мл уксусной кислоты и механически перемешивали при 55^оС в течение 20 мин. Смесь охлаждали, добавляли в нее ледяную воду и осуществляли экстрагирование простым эфиром. Другую фазу вымывали холодным 10% -ным раствором бикарбоната натрия и рассолом. Далее проводили осушение над сульфатом магния, фильтрование и выпаривание с целью получения искомой смеси 3-ацетокси-1 α-гидрокси- и 1 α-ацетокси-3-гидрокси-изомеров, которые далее были разделены и очищены методом HPLC на колонке "Зорбакс-Сил", 6,4 х 25 см, заправленной 2-пропиловым спиртом в гексане, с целью получения приблизительно по 70 мкг каждого продукта формулы VIIa и VIIIa. Измеренные показатели продукта: УФ (d ЕtOH) λ_max 242,5 (OD 0,72), 251,5 (OD 0,86), 260 (OD 0,57).

Оба ацетата 19-нор-1,25-дигидроксивитамина D₃ формула VIIa и VIIIa были гидролизованы одинаковым образом. Каждый из указанных моноацетатов растворяли в 0,5 мл простого эфира, куда добавляли 0,5 мл 0,1 н. раствора КОН в метиловом спирте. Смесь механически перемешивали в газовой среде аргона в течение 2 ч. Далее добавляли еще простого эфира, вымывали органическую фазу рассолом, осушали над сульфатом магния, фильтровали и выпаривали. Остаток растворяли в смеси 2-пропилового спирта и гексана, взятых в соотношении 1: 1, пропускали раствор через колонку "Сеп-Пак" и вымывали тем же растворителем. Затем растворители выпаривали и очищали остаток методом HPLC (колонка "Зорбакс-Сил", 6,4 х 25 см, 10% -ный раствор 2-пропилового спирта в гексане). Продукты гидролиза соединений VIIa и VIIIa были идентичны и дали 66 мкг соединения формулы Ia, где Х¹и Х² - водород. Масс-спектроскопическая относительная интенсивность m/z: 404 (М⁺) (100), 386 (41), 371 (20), 275 (53), 245 (51), 180 (43), 135 (72), 133 (72), 95 (82), 59 (18). Установлено точное значение массы, соответствующее соединению С₂₆Н₄₄O₃: 404,3290 по расчету и 404,3272 по данным измерений. Данные ядерного магнитного резонанса для ¹Н (CDCl₃): δ 0,52 (3H, s, 18-CH₃), 0,92 (3H, d, I = 6,9 Гц, 21-СН₃), 1,21 (6Н, s, 26-CH₃ и 27-CH₃), 4,02 (1H, m, 3 α-H), 4,06 (1Н, m, 1 β-H), 5,83 (1H, d, I = 11,6 Гц, 7-Н), 6,29 (1H, d, I = 10,7 Гц, 6-Н), УФ (в EtOH), λ_max 243 (OD 0,725), 251,5 (OD 0,623), 261 (OD 0,598).

П р и м е р 2. Стадии получения 1 α-гид- рокси-19-нор-витамина D₃формулы Ib.

а) С использованием витамина D₃ формулы IIb в качестве исходного вещества в условиях, указанных в примере Ia, было получено соединение IIIb, представляющее собой 6-метиловый эфир 1-ацетата 1 α-гидрокси-3,5-цикловитамина D₃, причем в формуле IIIb Х - ацеторадикал.

б) Путем обработки полученного как указано выше в п. а) примера 2, промежуточного соединения формулы IIb, где Х - ацеторадикал, в условиях, описанных в п. б) примера 1, был получен 6-метиловый эфир 1-ацетата 10,19-дигидро-1 α, 10,19-тригидрокси-3,5-цикловитамина D₃ формулы IVb, где Х - ацеторадикал.

в) Путем обработки промежуточного соединения IVb, где Х - ацеторадикал, метапериодатом натрия согласно приведенному п. 1b) примера 1, был получен 6-метиловый эфир 1-ацетата 1 α-гидрокси-10-оксо-3,5-цикло-19-нор-витамина D₃ формулы Vb, где Х - ацеторадикал.

г) Путем восстановления промежуточного 10-оксо-соединения формулы Vb, где Х - ацеторадикал, в условиях, описанных в п. г) примера 1, был получен 6-метиловый эфир 1 α-ацетокси-10-гидрокси-3,5-цикло-19-нор-витамина D₃ формулы VIb, где Х - ацеторадикал; Y - гидроксил.

д) Подвергнув промежуточное соединение формулы VIb, где Х - ацеторадикал; Y - гидроксил, технологической операции, описанной в п. д) приведенного примера 1, получили 1 α-гидрокси-19-нор-витамин D₃ формулы Ib, где Х¹ и X² - водород.

П р и м е р 3. Получение 1 α, 25-дигидрокси-19-нор-витамина D₂.

а) С использованием 25-гидроксивитамина D₂ формулы IIc в качестве исходного вещества в условиях эксперимента, аналогичных условиям п. а) примера 1, было получено соединение формулы IIIc, где Х - ацеторадикал, представляющее собой 6-метиловый эфир 1-ацетата 1 α, 25-дигидрокси-3,5-цикловитамина D₂.

б) Подвергнув промежуточное соединение формулы IIIc, где Х - ацеторадикал, полученное согласно приведенному выше п. а) примера 8, реакции в условиях, отвечающих п. б) примера 1, получили 6-метиловый эфир 1-ацетата 10,19-дигидро-1 α, 10,19,25-тетрагидрокси-3,5-цикловитамина D₂ формулы IVc, где Х - ацеторадикал.

в) Путем обработки промежуточного соединения формулы IVc, где Х - ацеторадикал, метапериодатом натрия согласно основным операциям, изложенным выше в п. в) примера 1, был получен 6-метиловый эфир 1-ацетата 1 α, 25-дигидрокси-10-оксо-3,5-цикло-19-нор-витамина D₂ формулы Vc, где Х - ацеторадикал.

г) Путем восстановления промежуточного 10-оксо-соединения формулы Vc, где Х - ацеторадикал в условиях, аналогичных условиям, описанным в п. г) примера 1, был получен 6-метиловый эфир 1 α-ацетокси-10,25-дигидрокси-3,5-цикло-19-нор-вита- мина D₂ формулы VIc, где Х - ацеторадикал, а Y - гидроксил.

д) Подвергнув промежуточное соединение VIc, где Х - ацеторадикал, Y - гидроксил, технологическим операциям, приведенным выше в п. д) примера 1, получили 1 α, 25-диигидрокси-19-нор-витамин D₂ формулы Ic, где Х¹ и Х² - водород.

П р и м е р 4. Получение 1 α-гидрокси-19-нор-витамина D₂.

а) С использованием витамина D₂ формулы IId в качестве исходного вещества в условиях, отвечающих п. а) примера 1, было получено известное соединение IIId, где Х - ацеторадикал, представляющее собой 6-метиловый радикал 1-ацетата 1 α-гидрокси-3,5-цикловитамина D₂.

б) С использованием промежуточного соединения IIId, где Х - ацеторадикал, полученного согласно приведенному п. а) примера 4, в условиях, отвечающих п. б) примера 1, был получен 6-метиловый эфир 1-ацетата 10,19-дигидро-1 α, 10,19-тригидрокси-3,5-цикловитамина D₂формулы IVd, где Х - ацеторадикал.

в) Путем обработки промежуточного соединения IVb, где Х - ацеторадикал, матапериодатом натрия согласно приведенному п. b) примера 1 был получен 6-метиловый эфир 1-ацетата 1 α-гидрокси-10-оксо-3,5-цикло-19-нор-витамина D₂ формулы Vd, где Х - ацеторадикал.

г) Путем восстановления промежуточного 10-оксо-соединения формулы Vd, где Х - ацеторадикал, в условиях, приведенных в п. г) примера 1, был получен 6-метиловый эфир 1 α-ацетокси-10-гидрокси-3,5-цикло-19-нор-витамина D₂ формулы VI d, где Х - ацеторадикал; Y - гидроксил.

д) Благодаря участию промежуточного соединения формулы VI d, где Х - ацеторадикал; Y - гидроксил, в технологической операции, приведенной в п. д) примера 1, был получен 1 α-гидрокси-19-норвитамина D₂ формулы 1d, где Х¹ и Х² - водород.

Claims

1. СПОСОБ ИНДУЦИРОВАНИЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ КЛЕТОК, отличающийся тем, что на эти клетки воздействуют достаточным для индуцирования дифференциации количеством по меньшей мере одного из соединений общей формулы 1

где X₁ и X₂ каждый выбран из группы, содержащей водород, ацил, алкилсилил и алкоксиалкил,
R выбран из группы, включающей алкил, водород, гидроксиалкил, фторалкил и боковую цепочку общей формулы

где R₁ - водород, гидроксирадикал или О-ацил;
R₂ и R₃ - каждый выбран из группы, содержащей алкил, гидроксиалкил или фторалкил, или если эти два радикала представлены вместе группой -(CH₂)_m, где m= 2 - 5 - целое положительное число;
R₄ выбран из группы, содержащей водород, гидрокси, фтор, О-ацил, алкил, гидроксиалкил или фторалкил;
R₅ выбран из группы, включающей водород, фтор, алкил, гидроксиалкил и фторалкил, или R₄ и R₅ вместе - кислород с двойной связью;
R₆ и R₇ каждый выбран из группы, содержащей водород, гидрокси, О-ацил, фтор и алкил, или R₆ и R₇ вместе образуют углерод-углеродную двойную связь;
n= 1 - 5 - целое положительное число;
углерод на любой из позиций 20 , 22 или 23 боковой цепи может быть замещен на кислород.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что воздействуют на клетки лейкемии.