MX2012001213A - Agentes terapeuticos para reducir los niveles de la hormona paratiroidea. - Google Patents

Agentes terapeuticos para reducir los niveles de la hormona paratiroidea.

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Abstract

Se describen compuestos que tienen actividad para disminuir los niveles de la hormona paratiroidea. En una modalidad, los compuestos constan de una subunidad de secuencia contigua, X1 - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7, en donde la subunidad X1 comprende una porción que contiene tiol y la distribución de carga en las subunidades X2-X7 proporciona la actividad deseada. También se describen, los métodos para utilizar los compuestos para tratar trastornos de hiperparatiroidismo, enfermedad ósea y/o hipercalcemia, y en particular, se proporcionan los métodos para disminuir la PTH en plasma y el calcio sérico. Los compuestos se pueden utilizar para crear sujetos que tengan, por ejemplo, hiperparatiroidismo primario, secundario o terciario; hipercalcemia de malignidad; enfermedad ósea metastásica; u osteoporosis.

Description

AGENTES TERAPÉUTICOS PARA REDUCIR LOS NIVELES DE LA HORMONA PARATIROIDEA CAMPO DE LA INVENCION La materia actual se relaciona con compuestos con actividad para disminuir los niveles de la hormona paratiroidea (PTH), con las composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos, y con el uso de estos compuestos y composiciones en los métodos de tratamiento, incluyendo de manera enunciativa el tratamiento de la hipercalcemia o hiperparatiroidismo o la modulación de los niveles de la PTH in vivo.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La homeostasis cálcica es el mecanismo mediante el cual el cuerpo mantiene niveles adecuados de calcio. El proceso se regula en gran medida, e implica una interacción compleja entre la absorción, transporte, almacenamiento de calcio en los huesos, la deposición en otros tejidos, y la excreción. La PTH es un regulador de los niveles de calcio en circulación, y funciona para aumentar la concentración de calcio en la sangre al mejorar la liberación del calcio proveniente del hueso a través del proceso de resorción ósea; al aumentar la reabsorción del calcio proveniente de los túbulos renales; y al mejorar la absorción del calcio en el intestino al aumentar la producción de 1.25- (OH) 2 vitamina D, la forma activa de vitamina la D. La PTH también estimula la excreción de fósforo del riñon, y aumenta la liberación desde el hueso.
La secreción de la PTH se regula mediante el receptor detector de calcio (CaSR) , un receptor acoplado a la proteina G expresado por diversos tipos celulares sobre la superficie de las células paratiroideas, que detecta las pequeñas fluctuaciones en la concentración de los iones de calcio extracelular (Ca2+) y responde al alterar la secreción de la PTH. La activación del CaSR mediante Ca2+ inhibe la secreción de la PTH que en un término de segundos a minutos a través de la inhibición del transporte vesicular, y este proceso se puede modular mediante la fosforilación de la proteina quinasa C (PKC) del receptor. El CaSR también se expresa sobre los osteoblastos y en el riñon, donde regula la excreción renal de Ca2+.
Además, la PTH regula la homeostasis de fósforo, la PTH estimula al receptor 1 de la hormona paratiroidea (PTHR1) o las membranas de las células tanto apicales (membrana de células en cepillo) como basolaterales en el tracto GI. La estimulación del PTHR1 conduce a un aumento en la excreción urinaria de fosfato (Pi) como una consecuencia de la reducción por la internalización del co-transportador renal de NaVfosfato (NaPi-IIa) sobre la membrana de las células en cepillo.
La PTH también se implica en la regulación de los osteoblastos y osteoclastos en el hueso. La PTH aumenta el Ca2+ en circulación al aumentar la resorción ósea y la reabsorción renal de calcio. La PTH estimula a que los osteoblastos produzcan el ligando RANK (RANKL) , que se une al receptor RANK y activa los osteoclastos, conduciendo a un aumento en la resorción ósea y un aumento en el Ca2+ sérico. La osteoprotegerina (OPG) es un receptor simulado para el RANKL que bloquea la resorción ósea. La osteoporosis se provoca por un desequilibrio entre los procesos de la resorción ósea mediante los osteoclastos y la formación de hueso por los osteoblastos.
El cuerpo humano contiene aproximadamente 1 kg de calcio, 99% del mismo reside en el hueso. Bajo condiciones normales, los iones de calcio en circulación (Ca2+) se mantiene estrechamente a un nivel de aproximadamente 9 hasta 10 mg/dl (es decir, 2.25-2.5 mmol/1; -600 mg) . Aproximadamente 1 g del calcio elemental (Ca2+) se ingiere diariamente. De esta cantidad, aproximadamente 200 mg/dia se absorben, y 800 mg/día se excretan. Además, aproximadamente 500 mg/dia se libera mediante la resorción ósea o se deposita en el hueso. Aproximadamente 10 g de Ca se filtra a través del riñon al día, con aproximadamente 200 mg que aparecen en la orina, y el resto que se reabsorberá.
La hipercalcemia es un nivel elevado de calcio en la sangre. La hipercalcemia aguda puede resultar en síntomas gastrointestinales (anorexia, náuseas, vómito) , renales (poliuria, polidipsia) , neuro-musculares (depresión, confusión, estupor, coma) y cardiacos (bradicardia, aurículo-ventricular de primer grado) . La hipercalcemia crónica también se asocia con síntomas gastrointestinales (dispepsia, estreñimiento, pancreatitis), renales (nefrolitiasis , nefrocalcinosis) , neuromusculares (debilidad) y cardiacos (bloqueo por hipertensión, sensibilidad por digitales). Pueden resultar ritmos cardiacos anormales, y los hallazgos EKG de un intervalo QT corto y una onda T extendida sugieren hipercalcemia. La hipercalcemia puede ser asintomática, con síntomas que se presentan más común a niveles altos de calcio (12.0 mg/dL o 3 mmol/1). La hipercalcemia severa (superior a 15-16 mg/dL o 3.75-4 mmol/1) se considera una emergencia médica: a estos niveles, pueden resultar un coma y un paro cardiaco .
La hipercalcemia con frecuencia se provoca por el hiperparatiroidismo, que conduce a una resorción ósea en exceso y niveles elevados de calcio sérico. En el hiperparatiroidismo esporádico primario, se sobre-produce la PTH mediante un adenoma paratiroideo individual, de manera menos común, se pueden provocar adenomas múltiples o hiperplasia difusa de la glándula paratiroides . La secreción aumentada de la PTH conduce a un aumento neto en la resorción ósea, con la liberación de Ca2+ y fosfato (Pi) . La PTH también mejora la reabsorción renal de Ca2+ e inhibe la reabsorción de fosfato (Pi) , dando por resultado en un aumento neto en el calcio sérico y una disminución en el fosfato.
El hiperparatiroidismo secundario se presenta cuando una disminución en los ' niveles en circulación del nivel de Ca2+ estimula la secreción de la PTH. Una causa del hiperparatiroidismo secundario es la insuficiencia renal crónica (también denominada como enfermedad renal crónica o CKD) , tal como en la enfermedad renal poliquistica o pielonefritis crónica o fallo renal crónica, tal como en pacientes con hemodiálisis (también denominada como enfermedad renal en etapa terminal o ESRD) . Se puede producir PTH en exceso en respuesta a la hipocalcemia resultante de la baja ingestión de calcio, trastornos GI, insuficiencia renal, deficiencia de vitamina D, e hipercalciuria renal. El hiperparatiroidismo terciario se puede presentar después de un largo periodo de hiperparatiroidismo secundario e hipercalcemia .
La malignidad es una causa común de la hipercalcemia no producida por la PTH. La hipercalcemia de malignidad, es una complicación poco común aunque severa del cáncer, que afecta entre el 10% y el 20% de pacientes con cáncer, y se puede presentar tanto con tumores sólidos como con leucemia. La condición tiene una abrupta aparición y tiene un pronóstico muy deficiente, con una supervivencia media de sólo seis semanas. Los factores de crecimiento (GF) regular la producción de la proteina relacionada con la hormona paratiroidea (PTHrP) en célula tumorales. Las células tumorales se pueden estimular mediante el GF autocrino para aumentar la producción de la PTHrP, lo que conduce a una resorción ósea mejorada. Las células tumorales metastáticas para el hueso también pueden secretar la PTHrP, que puede resorber hueso y liberar el GF adicional que a su vez actúa de una forma paracrina para mejorar adicionalmente la producción de PTHrP.
Por consiguiente, se desean compuestos con actividad para, por ejemplo, modular los niveles de la PTH y/o los niveles de calcio in vivo.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN En un aspecto, se proporciona un compuesto, que comprende la fórmula: Xl-X2-}Í3~X4-X5- 6-X7 en donde Xi es una subunidad que comprende un grupo que contiene tiol; X5 es una subunidad catiónica; X6 es una subunidad no catiónica; X7 es una subunidad catiónica; y al menos uno de preferencia dos, de X2, X3 y X es/son, independientemente, una subunidad catiónica; y en donde el compuesto tiene actividad para disminuir la concentración de la hormona paratiroidea . En una modalidad, la disminución en la concentración de la hormona paratiroidea es una disminución en la concentración de la hormona paratiroidea en sangre o plasma en un sujeto tratado con el compuesto con relación a la concentración de la hormona paratiroidea en sangre o plasma en el sujeto antes del tratamiento. En otra modalidad, la disminución en la concentración de la hormona paratiroidea se alcanza en ausencia de una respuesta histaminica .
En otra modalidad X3 y X4 son no catiónicos mientras que Xi, X5, ?d y X7 son catiónico.
En una modalidad, la subunidad Xi es un residuo de aminoácidos que contiene tiol, en otra modalidad, el grupo tiol de la subunidad Xi es una porción que contiene tiol orgánico .
En otra modalidad, cuando la subunidad X i es un residuo de aminoácido que contiene tiol, se selecciona del grupo que consiste de L-cisteína, D-cisteina, glutatión, cisteina de N-acetilado, homocisteina y cisteina pegilada.
Todavía en otra modalidad, la porción que contiene tiol orgánico se selecciona de las porciones de tiol-alquilo, o tioacilo tales como 3-mercaptopropilo o 3-mercaptopropionilo, ácido mercaptopropiónico, ácido mercaptoacético, tiobencilo o tiopropilo. Todavía en otra modalidad, la porción que contiene tiol orgánico es ácido mercaptopropiónico .
Todavía en otra modalidad, la subunidad Xi se modifica químicamente para que comprenda un grupo acetilo, un grupo benzoilo, un grupo butilo, u otro aminoácido tal como beta-alanina acetilada.
Todavía en modalidad, cuando la subunidad X i comprende un porción tiol, la subunidad Xi se une mediante un enlace covalente a una segunda porción tiol.
En otra modalidad, la fórmula X1 -X2-X3-X4-X5-X6-X7 consta de una secuencia contigua de residuos de aminoácidos (designados en la presente como ( Xa ai ) - ( aa2 ) - (Xaa3) - (Xaa4) - ( Xaas ) - ( Xaa6 ) - ( Xaa7) SEC ID NO : 1 ) o una secuencia de subunidades del compuesto orgánico (residuos que no son de aminoácidos) .
En otra modalidad, la secuencia contigua de los residuos de aminoácidos es una secuencia contigua de los residuos de L-aminoácidos, una secuencia contigua de los residuos de D-aminoácidos, una secuencia contigua de una mezcla de los residuos de L-aminoácidos y los residuos de D-aminoácidos, o una mezcla de residuos de los residuos de aminoácidos y los residuos de aminoácidos no naturales.
En otra modalidad, la secuencia contigua de los residuos de aminoácidos se enlaza a un compuesto para facilitar el transporte a través de una membrana celular. En otra modalidad, la secuencia contigua de los residuos de aminoácidos se enlaza a un compuesto que mejora el suministro de la secuencia dentro o a través de una o más capas del tej ido .
En otra modalidad, la secuencia contigua de los residuos de aminoácidos está contenida dentro de una secuencia de los residuos de aminoácidos a partir de los 8-50 residuos de aminoácidos, 8-40 residuos de aminoácidos, 8-30 residuos de aminoácidos u 8-20 residuos de aminoácido de longitud. Todavía en otra modalidad, la secuencia contigua de los residuos de aminoácidos está contenida dentro de una secuencia de los residuos de aminoácidos a partir de 8-19 residuos de aminoácidos, 8-18 residuos de aminoácidos, 8-17 residuos de aminoácidos, de 8-16 residuos de aminoácidos, 8- 15 residuos de aminoácidos, 8-14 residuos de aminoácidos, 8-13 residuos de aminoácidos, 8-12 residuos de aminoácidos, 8-11 residuos de aminoácidos, 8-10 residuos de aminoácidos, o 8-9 residuos de aminoácidos de longitud.
En otra modalidad, la subunidad X3 es un residuo de aminoácidos catiónicos.
En otra modalidad, la subunidad X2 es un residuo de aminoácidos no catiónicos, y en otra modalidad, la subunidad X4 es un residuo de aminoácidos no catiónicos. En una modalidad, el residuo de aminoácidos no catiónico es un D-aminoácido .
En otra modalidad, X3 y X4 son residuos de D-aminoácidos catiónicos.
En otra modalidad, la subunidad X5 es un residuo de D-aminoácidos .
En otro aspecto, la secuencia contigua en cualquiera de los compuestos descritos se une covalentemente vía el grupo que contiene tiol en la subunidad Xi a una segunda secuencia contigua. Por ejemplo, la segunda secuencia contigua puede ser idéntica a la secuencia contigua (para formar un dimero) , o pueden no ser idéntica, como podría ser el caso cuando se une a una porción que facilite la transferencia de la secuencia contigua a través de una membrana celular.
En otro aspecto, se proporciona un conjugado que comprende el péptido carrrar (SEC ID N0:2), en donde el péptido se conjuga en su residuo N-terminal a un residuo Cys .
En una modalidad, el péptido se modifica químicamente en la N-terminal, la C-terminal o ambos.
En otra modalidad, el N-terminal del péptido se modifica químicamente mediante acetilación y el C-terminal se modifica químicamente mediante amidación.
En otra modalidad, el conjugado es Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) .
En otro aspecto, se contempla un método para tratar el hiperparatiroidismo secundario (SHPT) en un sujeto, en donde se proporciona un compuesto como se describe en la presente al sujeto, en diversas modalidades, el sujeto puede estar padeciendo de una enfermedad renal crónica u otra condición .
En otro aspecto, se contempla un método para disminuir la hormona paratiroidea en un sujeto, en donde se proporciona al sujeto un compuesto según se describe en la presente .
En otro aspecto, se proporciona un régimen de tratamiento, el régimen comprende proporcionar un compuesto de acuerdo con cualquiera de aquellos descritos en la presente, en combinación con un segundo agente.
En una modalidad, el segundo agente terapéutico es vitamina D, un análogo de vitamina D o clorhidrato de cinacalcet .
En cualquiera de los aspectos o modalidades descritos en la presente, se contempla cualquiera de una o más de las secuencias que se espera individualmente o se retiran del alcance de las reivindicaciones. En ciertas modalidades, los péptidos identificados mediante cualquiera de una o más de las SEC ID NOs : 162-182, individualmente o en cualquier combinación, se excluyen de los compuestos, composiciones y métodos reivindicados.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 es una gráfica del nivel de la hormona paratiroidea, como el porcentaje del valor pre-dosis de valor inicial, como una función de tiempo, en horas, en ratas con insuficiencia renal aguda (modelo 1K1C) , donde las ratas se dosifican con Ac-crrrr-NH2 (SEC ID N0:4, diamantes), Ac-crrrrr-NH2 (SEC ID N0:5, cuadros cerrados), Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6, triángulos), Ac-crrrrrrr-NH2 (SEC ID N0:7, cuadros abiertos), o control de solución salina (símbolos x) ; la figura 2A es una gráfica de la concentración de IPi, en nM, como una función de la concentración del compuesto de Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO: 26, cuadros) y Ac-arrrar-NH2 (SEC ID NO:29, triángulos), como una medición de la capacidad de los compuesto para activar el CaSR humano en un ensayo celular in vitro cuando el CaSR humano se expresa como una linea celular HEK-293 transfectada establemente; la figura 2B muestra la reducción en la concentración de la PTH con la administración in vivo de los péptidos identificados como la SEC ID NO: 26 (Ac-carrrar-NH2) (cuadros) y como la SEC ID NO:29 (Ac-arrrar-NH2) (diamantes), cuando los péptidos se administran como un bolo IV a ratas normales Sprague Dawley a dosis de 9 mg/kg de la SEC ID NO: 29 y a 0.5 mg/kg para la SEC ID NO: 26. Se utilizó como un control (linea de trazos) un bolo intravenoso (IV) de solución salina. Se evaluaron los niveles de la PTH en plasma antes de la dosificación y 1, 2, 3 y 4 horas después de la dosificación. Los resultados se presentan como un promedio de grupo ± la desviación estándar (SD) , y la PTH se muestra como el porcentaje del valor de pre-dosis de valor inicial; la figura 3 es una gráfica de barras que compara la liberación de histamina después de la administración del bolo IV de diversos compuestos en ratas normales Sprague Dawley, donde los compuestos Ac-crrrr-N H2 (SEC ID NO:4), Ac-crrrrr-NH2 (SEC ID NO: 5), Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) y Ac-crrrrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 41) se dosificaron en una dosis en bolo IV equimolar de 2.1 mmol/kg, y se midió la histamina en plasma antes de la dosificación (pre-dosis) , 5, 15 y 30 minutos después de la dosificación; la figura 4 es una gráfica de barras que compara la liberación de histamina después de la administración en bolo IV de dos compuestos en ratas Sprague Dawley normales, donde los compuestos Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3, barras con dibujos de cruz) y Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6, barras abiertas) se dosificaron a 3 mg/kg, y se midió la histamina en plasma antes de la dosificación (tiempo cero) y 5, 15 y 30 minutos después de la dosificación; la figura 5 es una gráfica del nivel de la hormona paratiroidea, como porcentaje del valor pre-dosis de valor inicial, como una función de tiempo, en horas, en ratas normales dosificadas con 0.5 mg/kg mediante bolo IV de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6, diamantes), Ac-carrrrr-NH2 (SEC ID NO: 8, cuadros), Ac-crarrrr-NH2 ( SEC ID NO: 9, triángulos), Ac-crrarrr-NH2 (SEC ID NO: 10, símbolos x) , Ac-crrrarr-NH2 (SEC ID NO: 11, símbolos *), Ac-crrrrar-NH2 (SEC ID NO: 12, círculos) o Ac-crrrrra-NH2 (SEC ID NO: 13, símbolos +) ; las figuras 6A-6B son gráficas del nivel de la hormona paratiroidea, como porcentaje del valor pre-dosis de valor inicial, como una función de tiempo, en horas, en ratas sanas dosificadas con 0.5 mg/kg mediante bolo IV de Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO-.26, diamantes abiertos), Ac-crrarar-NH2 (SEC ID NO:25, cuadros abiertos), Ac-caarrrr-NH2 (SEC ID NO:22, triángulos), Ac-crraarr-NH2 (SEC SD NO:17, cuadros cerrados), Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3, diamantes figura 6B) , Ac-craarrr-NHz (SEC ID NO: 24, símbolos x en la figura 6A) ; Ac-c (C) rrarar-NH2 (SEC ID NO: 28, símbolos x, figura 6B) ; la figura 7 muestra la disminución en los niveles de la hormona paratiroidea en la sangre como una función de tiempo, del compuesto Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) administrado como un bolo IV a ratas Sprague Dawley normales a dosis de 1 mg/kg (diamantes), 0.5 mg/kg (cuadros), 0.3 mg/kg (triángulos), y 0.1 mg/kg (símbolos x) . Un bolo intravenoso (IV) de solución salina (círculos) se utilizó como un control. Los niveles de la PTH en plasma se evaluaron antes de la dosificación a l, 2, 3 y 4 horas después de la dosificación, la figura 8 es una gráfica del nivel de la hormona paratiroidea, como porcentaje del valor pre-dosis de valor inicial, como una función de tiempo, en horas, en ratas con insuficiencia renal aguda {modelo 1K1C) , en ratas con el modelo 1K1C de insuficiencia renal aguda, donde las ratas se dosificaron vía bolo IV del compuesto Ac-c (C) arrrar-N¾ (SEC ID NO: 3) a dosis de 3 mg/kg (diamantes), 1 mg/kg (triángulos), 0.5 mg/kg (cuadros) y 0.3 mg/kg (x símbolos), o solución salina (cuadros) ; la línea a trazos en la figura 8 indica el nivel de pre-dosificación de la PTH de valor inicial; la figura 9 es una gráfica del nivel de la hormona paratiroidea, como porcentaje del valor pre-dosis de valor inicial, como una función de tiempo, en horas, en ratas dosificadas intravenosamente con solución salina (símbolos x) o con los compuestos Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6, diamantes abiertos), y Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO:26, cuadros abiertos) a 1 mg/kg vía una infusión IV de 30-minutos, donde se evaluaron los niveles de la PTH en plasma antes de la dosificación, 16 horas y 24 horas después de la dosificación; la figura 10 es una gráfica del nivel de la hormona paratiroidea, como porcentaje del valor pre-dosis de valor inicial, como una función del tiempo, en horas, en ratas con insuficiencia renal aguda (modelo 1K1C) , donde las ratas se dosificaron vía bolo IV con los compuestos Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3, cuadros, símbolos *) y Ac-c (Ac-C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 146, triángulos, diamantes) a dosis de 0.3 mg/kg (cuadros, triángulos) y 0.5 mg/kg (*, diamantes); la figura 11 es una gráfica del nivel de la hormona paratiroidea, como porcentaje del valor pre-dosis de valor inicial, como una función de tiempo, en horas, en ratas tratadas vía suministro transdérmico facilitado por microporo de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6, dos animales, cuadros y triángulos) o con solución salina vía suministro transdérmico (diamantes) ; la figura 12 es una gráfica del nivel de la hormona paratiroidea, como porcentaje del valor pre-dosis de valor inicial, como una función del tiempo, en horas, en ratas tratadas vía suministro transdérmico facilitado por microporo de Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3); la figura 13 es una gráfica de la PTH media (como porcentaje del valor inicial) durante y después de una infusión IV de 6 horas de Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) en ratas normales Sprague-Dawley, donde el compuesto se suministró como infusión a velocidades de 1 pg/kg/hr (cuadros), 3 g/kg/hr (circuios), y 10 µg/kg/h (triángulos); la figura 14A muestra la PTH (como un porcentaje del valor inicial) durante y después de una infusión IV de 6 horas de Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) en el modelo de rata 1K1C de insuficiencia renal aguda, donde a las ratas se les administró por infusión intravenosamente a velocidades de dosificación de 30' µg/kg/hr (diamantes) y 100 µg/kg/hr (cuadros) ; la figura 14B es una gráfica de barras que muestra el calcio sérico, en mg/dL, para las ratas del modelo 1K1C tratadas como en la figura 14A.
La materia actual se puede comprender más fácilmente haciendo referencia a la siguiente descripción detallada de las modalidades preferidas y los ejemplos incluidos en la presente.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones Dentro de esta solicitud, a menos que se establezca de otra manera, las definiciones y los términos e ilustración de las técnicas de esta solicitud se pueden encontrar en cualquiera de las referencias bien conocidas tales como: Sambrook, J., et al., Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); Goeddel, D., ed., Gene Expression Technology, Methods in Enzymology, 185, Academic Press, San Diego, CA (1991); "Guide to Protein Purification" in Deutshcer, M. P., ed., Methods in Enzymology, Academic Press, San Diego, CA (1989) ; Innis, et al., PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press, San Diego, CA (1990); Freshney, R.I., Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 2nd Ed., Alan Liss, Inc. New York, NY (1987); Murray, EJ. , ed., Gene Transfer and Expression Protocols, pp. 109-128, The Humana Press Inc., Clifton, NJ and Lewin, B., Genes VI, Oxford University Press, New York (1997).
En el sentido en el que se utiliza en la presente, la forma singular "uno", "una", y "el", incluyen referencias en plural a menos que se indique de otra manera. Por ejemplo, "un" péptido modulador incluye uno de más péptidos moduladores .
En el sentido en el que se utiliza en la presente, un compuesto tiene "actividad para disminuir el nivel de la hormona paratiroidea" o la "actividad para disminuir la PTH" cuando el compuesto, con la administración a un sujeto, disminuye la hormona paratiroidea (PTH) en plasma con relación a la concentración de la PTH en plasma antes de la administración del compuesto, en una modalidad, la disminución en el nivel de la PTH es al menos 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o 95% menor una hora después de la administración del compuesto que el nivel de la PTH antes de la administración del compuesto.
En el sentido en el que se utiliza en la presente, "ausencia de una respuesta histaminica" o "falta de una respuesta histaminica" pretende una dosificación de un compuesto que produzca menos de 15-veces, 14-veces, 13-veces, 12-veces, 11-veces, 10-veces, 9-veces, 8-veces, 7-veces, 6-veces, 5-veces, 4-veces, o 3-veces aumento en histamina, medida in vitro en un ensayo como se describe en la presente, donde el cambio de veces se determina con base en los niveles de histamina antes de la incubación con el compuesto y después de 15 minutos de la incubación con el compuesto.
En el sentido en el que se utiliza en la presente, "aminoácido" se refiere a aminoácidos naturales y no naturales. Los veinte aminoácidos que se presentan en la naturaleza (L-isómeros) se designan mediante el código de tres letras con el prefijo "L-" (excepto para glicina que es aquiral) o mediante el código de una letra en mayúsculas: alanina ("L-Ala" o "A"), arginina ("L-Arg" o "R") , asparagina ( "L-Asn" o "N"), ácido aspártico ("L-Asp" o "D"), cisterna ("L-Cys" o "C"), glutamina ( "L-Gln" o "Q"), ácido glutámico ("L-Glu" o "E") , glicina ("Gly" o "G") , histidina ("L-His" o "H"), isoleucina ("L-Ile" o "I"), leucina ("L-Leu" o "L"), lisina ("L-Lys" o "K"), metionina ("L-Met" o "M") , fenilalanina ("L-Phe" o "F" ) , prolina ("L-Pro" o "P") , serina ("L-Ser" o "S") , treonina ( "L-Thr" o "T"), triptófano ("L-Trp" o "W"), tirosina ("L-Tyr" o "Y") y valina ("L-Val" o "V"). L-norleucina y L-norvalina se pueden representar como (NLeu) y (NVal), respectivamente. Los diecinueve aminoácidos que se presentan en la naturaleza que son quirales tienen un D-isómero correspondiente que se designa por el código de tres letras con el prefijo "D-" o mediante el código de una letra en minúsculas: alanina ("D-Ala" o "a"), arginina ("D-Arg" o "r") , asparagina ("D-Asn" o "a"), ácido aspártico ("D-Asp" o "d"), cisteina ("D-Cys" o "c"), glutamina ("D-Gln" o "q"), ácido glutámico ("D-Glu" o "e") , histidina ("D-His" o "h"), isoleucina ("D-Ile" o "i"), leucina ("D-Leu" o "1"), lisina ( "D-Lys" o "k"), metionina ("D- et" o "m"), fenilalanina ("D-Phe" o "f") , prolina ("D-Pro" o "p") , serina ("D-Ser" o "s") , treonina ("D-Thr" o "t"), triptófano ("D-Trp" o "w"), tirosina ("D-Tyr" o "y") y valina ("D-Val" o "v") . D-norleucina y D-norvalina se pueden representar como (dNLeu) y (dNVal), respectivamente. Aunque con frecuencia se utiliza un "residuo de aminoácido" con referencia a una subunidad monomérica de un péptido, polipéptido o proteina y "aminoácido" con frecuencia se utiliza con referencia a una molécula libre, el uso de estos términos en la técnica se superpone y varía. El término "aminoácido" y "residuo de aminoácidos" se utilizan indistintamente y pueden hacer referencia a una molécula libre de una subunidad monomérica de un péptido, polipéptido o proteína, dependiendo del contexto .
Para determinar la "homología" porcentual o "identidad" porcentual de dos secuencias de aminoácidos, las secuencias se alinean para fines de comparación óptima (por ejemplo, se pueden introducir espacios en las secuencias de un polipéptido para una alineación óptima con el otro polipéptido) . Los residuos de aminoácidos en las posiciones correspondientes de aminoácidos luego se comparan. Cuando se ocupa una posición en una secuencia por el mismo residuo de aminoácidos como la posición correspondiente en la otra secuencia, entonces las moléculas son idénticas en esa posición. En el sentido en el que se utiliza en la presente, "homología" de aminoácidos o de ácido nucleico es equivalente a "identidad" de aminoácidos o ácido nucleico, por consiguiente, la identidad de secuencia porcentual entre las dos secuencias es una función del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias (es decir, la identidad de secuencia porcentual = números de posiciones idénticas/números totales de las posiciones x 100) . La identidad de secuencia porcentual entre dos secuencias de polipéptidos se puede determinar utilizando el paquete de software Vector NTI (Invitrogen Corporation, 5791 Van Alien Way, Carlsbad, CA 92008). Para determinar la identidad porcentual de dos polipéptidos se utilizan una penalidad de abertura vacía de 10 y una penalidad de extensión vacía de 0.1. Todos los otros parámetros se ajustan en los ajustes por omisión .
Un "aminoácido catiónico" significa un residuo de aminoácidos que tenga una carga neta positiva a pH fisiológico (7.4), como sea el caso, por ejemplo, en los residuos de aminoácidos, donde la cadena lateral, o "grupo R", contiene un grupo funcional amino u otro grupo funcional que pueda aceptar un protón para cargarse positivamente a pH fisiológico, tal como una porción de guanidina o imidazol. Los residuos de aminoácidos catiónicos incluyen: arginina, lisina, histidina, ácido 2 , 3-diaminopropiónico (Dap) , ácido 2 , 4-diaminobutírico (Dab), ornitina, y homoarginina .
Una "subunidad catiónica" significa una subunidad que tiene una carga neta positiva a pH fisiológico (7.4).
En el sentido en el que se utiliza en la presente, "sustituciones conservadoras de aminoácidos" son sustituciones que no dan por resultado en un cambio significativo en la actividad o estructura terciaria de un polipéptido o proteina seleccionado. Estas sustituciones típicamente implican reemplazar un residuo de aminoácidos seleccionado con un residuo de aminoácidos diferente que tenga similares propiedades físico-químicas. El agrupamiento de aminoácidos y residuos de aminoácidos mediante propiedades fisicoquímicas se conocen por aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, entre los aminoácidos que se presentan en la naturaleza, la familia de residuos de aminoácidos que tengan cadenas laterales similares se han definido en la técnica, e incluyen cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina) , cadenas laterales ácidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico) , cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína) , cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano) , cadenas laterales beta-ramificadas (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina) .
En el sentido en el que se utiliza en la presente, "reticulación química" se refiere a la unión covalente de dos o más moléculas.
Un péptido o fragmento de péptido se "deriva de" un péptido o polipéptido original si tiene una secuencia de aminoácidos que sea idéntica u homologa a al menos una secuencia contigua de cinco residuos de aminoácidos, de mayor preferencia ocho residuos de aminoácidos, del péptido o polipéptido original.
En el sentido en el que se utiliza en la presente, el término "hiperparatiroidismo" se refiere a hiperparatiroidismo primario, secundario y terciario, a menos que se indique de otra manera.
El término "intradérmico" significa que en los métodos de tratamiento descritos en la presente se aplica a la piel una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto calcimimético para suministrar el compuesto a las capas de la piel por debajo del stratum comeum, y de esta forma alcanzar un efecto terapéutico deseado.
En el sentido en el que se utiliza en la presente, un polipéptido "aislado" o "purificado" o una porción biológicamente activa del mismo está libre de algo del material celular cuando se produce mediante técnicas de ADN recombinante, o cuando se sintetizan los precursores químicos u otros químicos. El término "prácticamente libre de material celular" incluye preparaciones de polipéptidos en las cuales el polipéptido se separa de algo de los componentes celulares de las células en las cuales se produce naturalmente o recombinantemente . Cuando el polipéptido o porción biológicamente activa del mismo se produce recombinantemente, también de preferencia está prácticamente libre del medio de cultivo, es decir, el medio de cultivo representa menos de aproximadamente el 20%, de mayor preferencia de aproximadamente el 10%, y con la máxima preferencia menos de aproximadamente el 5% del volumen de la preparación de polipéptidos. El término "prácticamente libre de precursores químicos u otros químicos" incluye preparaciones de polipéptidos en las cuales el polipéptido se separa de los precursores químicos u otros químicos que están implicados en la síntesis del polipéptido. En una modalidad, el término "prácticamente libre de precursores químicos u otros químicos" incluye las preparaciones de un polipéptido que tengan menos de aproximadamente el 30% (en peso seco) de los precursores químicos u otros químicos, de preferencia menos de aproximadamente el 20% de precursores químicos u otros químicos, de mayor preferencia aproximadamente el 15% de precursores químicos u otros químicos, todavía de mayor preferencia menos de aproximadamente 10% de precursores químicos u otros químicos, y con la máxima preferencia menos de 5% de precursores químicos u otros químicos. En modalidades preferidas, los polipéptidos aislados, o las porciones biológicamente activas de los mismos, carecen de polipéptidos contaminantes provenientes del mismo organismo del cual se deriva el polipéptido dominio.
En el sentido en el que se utiliza en la presente, "macroraoléculas" se refiere a una molécula, tal como un péptido, polipéptido, proteína o ácido nucleico, que típicamente tiene un peso molecular mayor de aproximadamente 900 Daltons.
Un "aminoácido no catiónico" significa un residuo de aminoácidos que no tiene carga o tiene una carga neta negativa a pH fisiológico (7.4), como es el caso, por ejemplo, en los residuos de aminoácidos, donde la cadena lateral, o "grupo R", es neutro (polar neutro y no polar neutro) y ácido. Los aminoácidos no catiónicos incluyen aquellos residuos con un grupo R que sea una porción de alquilo o aromática de hidrocarburos (por ejemplo, valina, alanina, leucina, isoleucina, fenilalanina ) ; un grupo polar R, neutro (asparagina, cisteina, glutamina, serina, treonina, triptófano, tirosina) ; o un grupo no polar R, neutro (glicina, metionina, prolina, valina, isoleucina) . Los aminoácidos no catiónicos con un grupo R ácido incluyen ácido aspártico y ácido glutámico.
Un "polímero" se refiere a una cadena lineal de dos o más subunidades idénticas o no idénticos unidas mediante enlaces covalentes.
En el sentido en el que se utiliza en la presente, "péptido" y "polipéptido" se refieren a cualquier polímero constituido de una cadena de residuos de aminoácidos enlazados por enlaces peptídicos, sin importar su tamaño. Aunque, "proteína" con frecuencia se utiliza con referencia a polipéptidos relativamente largos, y "péptido" con frecuencia se utiliza con referencia a polipéptidos pequeños, el uso de estos términos en la técnica, se superpone y varía. De esta forma, por simplicidad, el término "péptido" se utilizará en la presente, aunque en algunos casos en la técnica pueda hacer referencia al mismo polímero como un "polipéptido". A menos que se indique de otra manera, la secuencia para un péptido se proporciona en el orden del término amino para el término carboxilo.
Un "grupo que contiene tiol" o "porción que contiene tiol", en el sentido en el que se utiliza en la presente, significa un grupo funcional que comprende un enlace de azufre-hidrógeno (-SH) , y que es capaz de reaccionar con otro tiol bajo condiciones fisiológicas para formar un enlace disulfuro. Un tiol que es capaz de formar un enlace disulfuro con otro tiol se denomina en la presente como un "tiol reactivo". En una modalidad preferida, el grupo que contiene tiol tiene menos de 6 átomos lejos de la estructura del compuesto. En una modalidad más preferida, el grupo que contiene tiol tiene la estructura ( -SH-CH2-CH2-C (0) -0-) -.
En el sentido en el que se utiliza en la presente, "molécula pequeña" se refiere a una molécula distinta a una macromolécula, tal como una molécula orgánica, y típicamente tiene un peso molecular de menos de 1000 daltons.
En el sentido en el que se utiliza en la presente, "sujeto" se refiere a un sujeto humano o un sujeto animal.
Una "subunidad", significa una unidad monomérica que se une a más de otra unidad monomérica para formar un compuesto polimérico, donde una subunidad es el patrón de repetición más corto de elementos en el compuesto polimérico. Las subunidades ilustrativas son aminoácidos, que cuando se enlazan forman un compuesto polimérico tal como aquellos denominados en la técnica como un péptido, un polipéptido o una proteína.
En el sentido en el que se utiliza en la presente, una "cantidad terapéuticamente efectiva" es una cantidad requerida para producir un efecto terapéutico deseado. Por ejemplo, en los métodos para reducir el calcio sérico en sujetos hipercalcémicos, una cantidad terapéuticamente efectiva es la cantidad requerida para reducir los niveles de calcio sérico en al menos el 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20% o 25%. El calcio se puede medir como calcio total o como calcio ionizado. A manera de otro ejemplo, en los métodos para disminuir la PTH in vivo, una cantidad terapéuticamente efectiva es la cantidad requerida para reducir los niveles de la PTH en al menos 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20% o 25%.
En el sentido en el que se utiliza en la presente, el término "transdérmico" significa que en los métodos de tratamiento descritos en la presente, se aplica una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente calcimimético a la piel para suministrar el compuesto a la circulación sistémica y de esta forma alcanzar un efecto terapéutico deseado.
A menos que se especifique de otra manera, todos los documentos a los que se hace referencia en la presente se incorporan como referencia en su totalidad.
Compues os En un aspecto, se proporciona un compuesto que comprende la secuencia de subunidades X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7, donde Xi es una subunidad que comprende un grupo tiol; X5 es una subunidad catiónica; X6 es una subunidad no catiónica; X7 es una subunidad catiónica; y al menos dos de X2, X3 y X4 son independientemente una subunidad catiónica. Los compuestos tienen actividad para disminuir los niveles de la hormona paratiroidea (PTH) y/o disminuir los niveles de calcio en la sangre de un sujeto. Una disminución en los niveles de hormonas paratiroidea, como se ilustrará más adelante, significa una disminución de la concentración de la PTH en plasma o sangre en un sujeto con relación a la concentración de la PTH en plasma o sangre antes del tratamiento con el compuesto. En una modalidad, el compuesto alcanza una reducción en la concentración de la PTH en plasma en al menos el 50% dentro de una hora después de la dosificación, con relación a la PTH en plasma antes de la dosificación. Los compuestos se ejemplifican por péptidos, aunque un experto en la técnica apreciará que los compuestos no peptidicos que tienen la actividad deseada se pueden diseñar con base en los estudios de la relación estructura-actividad descritos en la presente .
En el sentido en el que se utiliza en la presente, hormona paratiroidea o PTH es un péptido de 84 aminoácidos producido mediante la glándula paratiroides y sus productos de descomposición. Junto a la PTH de longitud total (que consiste de los residuos 1-84 y algunas veces se denomina como PTH "intacta" o "bioactiva") en la sangre están presentes diversos fragmentos de la PTH generados mediante proteólisis y otras vías de metabolismo. La región 1-34 amino-terminal de la molécula de PTH intacta es activa biológicamente. Esta región de la molécula contiene la secuencia de aminoácidos que permite que la PTH se una a los receptores de la hormona paratiroidea en tejidos blanco. La región media y 35-84 carboxi-terminal de la molécula de PTH intacta se cree que será biológicamente inerte, aunque posee reactividad inmunológica . La PTH 7-84 se piensa que ejerce efectos que son opuestos a aquellos de la PTH 1-84. Diversos ensayos se han desarrollado para medir los niveles de la PTH, incluyendo diversos productos de descomposición y se revisan por Souberbielle et. al., Kidney International, 77 : 93-100 (2010), que se incorpora en la presente como referencia. En una modalidad, se deduce un compuesto que tiene actividad para disminuir el nivel de la PTH como se define en la presente utilizando un método de cuantificación de la PTH validada que detecte la forma bioactiva intacta de la PTH (1-84), y se conocen en la técnica los kits disponibles comercialmente (por ejemplo, véase el ejemplo 3 en la presente) .
En un primer estudio, los compuestos que contienen 4 a 7 sub-unidades catiónicas (por ejemplo, arginina) se generaron y probaron por su capacidad para disminuir la PTH en comparación con los valores de PTH de valor inicial y animales tratados con solución salina. Específicamente, se estableció un modelo 1K1C de insuficiencia renal aguda para utilizarse en la caracterización de la actividad para disminuir la PTH en un entorno de disfunción renal. El modelo 1K1C se describe en el Ejemplo 1A, y los compuestos sintetizados para prueba incluyen (i) Ac-crrrr-NH2 (SEC ID NO: 4), (ii} Ac-crrrrr-NH2 (SEC ID NO: 5), (iii) Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6), (iv) Ac-crrrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 7) y (v) control con solución salina.
Como se describe en el Ejemplo IB, los compuestos identificados como SEC ID: 4, SEC ID NO: 5, SEC ID NO: 6 y SEC ID NO: 7 cada uno se administraron mediante una infusión IV de 30 minutos a animales modelo 1K1C. La figura 1 muestra la reducción en los niveles PTH en plasma como un porcentaje del nivel de pre-dosificación (valor inicial) . Todos los cuatro compuestos dosificados a 3 mg/kg produjeron una caída significativa en la PTH en plasma, aunque las diferencias en la potencia y duración de la reducción de la PTH sugieren una relación entre la carga positiva neta y la actividad para disminuir la PTH. Por ejemplo, el compuesto Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6; triángulos) con seis subunidades catiónicas (arginina) tuvo una eficacia aumentada asi como la duración de la acción en comparación con los compuestos Ac-crrrr-NH2 (SEC ID NO: 4; diamantes) y Ac-crrrrr-NH2 (SEC ID NO: 5; cuadros), que contienen cuatro y cinco subunidades catiónicas (arginina), respectivamente. Sorprendentemente, el compuesto Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6; triángulos) con seis subunidades catiónicas (arginina) tuvo una duración de acción en comparación con el compuesto Ac-crrrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 7, cuadros abiertos) con siete residuos catiónicos (arginina) , lo que sugiere que la actividad o potencia de los compuestos no se correlaciona simplemente con el aumento de la carga catiónica del compuesto. Es decir, el compuesto Ac-crrrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 7) con siete subunidades catiónicas (residuos de arginina) produjo una calda inicial similar en la PTH como los compuestos con menores residuos catiónicos, aunque a través de las 24 horas después de la dosificación fue menos eficaz que Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) y Ac-crrrrr-NH2 (SEC ID NO: 5). Estos últimos dos compuestos produjeron una reducción media de la PTH de ~40% y 60% en el punto de tiempo de 24 horas, respectivamente. Tanto el grado de reducción de la PTH como la duración de la PTH son criterios importantes para obtener un beneficio terapéutico óptimo para pacientes que necesitan del tratamiento. Se debe observar que los compuestos en este estudio se administraron a la misma dosis mg/kg aunque, debido a diferencias en el peso molecular, realmente se dosificó un número diferente de moles de cada compuesto. Por lo tanto, Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) fue significativamente más potente que Ac-crrrr-NH2 (SEC ID NO: 4) y Ac-crrrrr-NH2 (SEC ID NO: 5) sobre una base por mol.
Se realizaron estudios adicionales para explorar la relación de estructura-actividad de los compuestos. El compuesto Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID: 6) se modificó mediante el reemplazo secuencial de un residuo de arginina con un residuo de alanina en cada una de las posiciones subunitarias X2 -X7. Los compuestos se caracterizaron en un ensayo del receptor para detección de calcio (CaSR) en humanos in vitro, descrito en el Ejemplo 2, en donde se utilizaron células HEK 293 que expresan el receptor para detección de calcio en humanos para medir la actividad de los compuestos ilustrativos. Sin desear estar vinculados por la teoría, se piensa que el mecanismo mediante el cual los compuestos descritos disminuyen la PTH in vivo, es a través de la activación del CaSR, que se expresa en la glándula paratiroides y controla la secreción de la PTH. La activación del CaSR conduce a un aumento en el calcio intracelular y el inositol-3-fosfato (IP3) y la acumulación posterior de inositol-fosfato-1 (IPi). Por consiguiente, en este ensayo in vitro, se determinó la concentración efectiva máxima media del compuesto para reducir la generación de ??? en un 50% (EC50) . Los mismos compuestos también se probaron in vivo para determinar su actividad para disminuir la PTH, como se describe en el Ejemplo 3. Los resultados se muestran en la Tabla 1. Los números en la columna titulada "% PTH AUC (1-4 horas) de control con solución salina" de la Tabla 1 definen la actividad como la reducción en el área bajo la curva (AUC) de PTH durante 4 horas como un porcentaje de la PTH AUC derivado de las ratas control tratadas con solución salina. Por ejemplo, una AUC (compuesto tratado) /AUC (control de solución salina) *100 que es igual a 0 podría ser indicativa de un compuesto para disminuir la PTH bastante activo que suprime completamente la PTH (a un nivel indetectable ) durante 4 horas después de una administración IV individual de ratas normales anestesiadas con isoflurano (IF). Por el contrario, un valor de AUC (compuesto tratado) /AUC (control con solución salina) *100 que es igual o mayor que 100 podría ser indicativo de un compuesto inactivo.
Tabla 1 Actividad in vitro e in vivo de los compuestos ilustrativos * Las negrillas indican sustituciones de D-alanina de aminoácidos catiónicos (D-arginina) en la SEC ID N0:6.
** Reducción de la PTH después de la administración IV de 0.5 mg/kg en ratas normales anestesiadas con isofluorano -la PTH se midió a 1, 2, 3 y 4 horas después de la administración y se calculó la AUC acumulativa. Los datos de la PTH se calcularon de acuerdo con la siguiente fórmula AUCcompUesto tratado/AUCControl con solución salina' *100.
En la Tabla 1, los compuestos Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6), Ac-carrrrr-NH2 (SEC ID NO: 8) y Ac-crrarrr-NH2 ( SEC ID NO: 10) fueron muy potentes, como resulta evidente por la disminución en la PTH porcentual a menos del limite de detección o esencialmente cero según se mide in vivo después de una administración IV individual en ratas normales. La sustitución del residuo catiónico (arginina) en las posiciones 2, 3, 4 ó 7 de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) dio por resultado en una pérdida de aproximadamente dos veces la potencia in vitro. La sustitución en la posición 5 para producir el compuesto Ac-crrrarr-NH2 (SEC ID NO: 11) produjo una reducción de 5-10 veces en la potencia in vitro, aunque la reducción AUC de la PTH porcentual in vivo del 45% podría ser suficientemente activa para una terapia clínica. Sorprendentemente, la sustitución del residuo de arginina catiónica en la posición 6 con el residuo no cargado (alanina) realmente mejoró la potencia. Los datos ilustran que los residuos catiónicos y no cargados en diferentes posiciones no son todos iguales y hubo cambios en la actividad como resultado del cambio en la estructura del compuesto .
Para evaluar adicionalmente el efecto de cambio en la actividad como una función de cambio en la estructura del compuesto, se generó otra serie de análogos de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) que contienen dobles sustituciones de aminoácidos, donde dos residuos catiónicos (arginina) se reemplazaron mediante residuos no cargados (alanina) , y se probaron para potencia. En la Tabla 2 se muestran los datos. Es importante observar que esta serie de compuestos tienen la misma carga neta catiónica que la SEC ID NO: 4 (cuatro residuos catiónicos) sorprendentemente todavia algo muy activa (SEC ID NO: 26) con muy bajo % de AUC de la PTH del control con solución salina mientras que otros son inactivos (por ejemplo, la SEC ID N0:14). Inesperadamente, esto sugiere que la posición de cambios asi como la carga catiónica total pueden influir en la potencia de los compuestos para la reducción de la PTH. Los datos mostrados en la Tabla 2 son consistentes con los datos mostrados en la Tabla 1, lo que sugiere que los residuos catiónicos de la SEC ID NO: 6 son esenciales en las posiciones 5 y 7 aunque no se requieren en la posición 6, para la actividad para disminución de la PTH.
Tabla 2 Actividad in vivo de los compuestos ilustrativos * Las negrillas indican las sustituciones respectivas de D-alanina de aminoácidos catiónicos (D-arginina) en Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) ** Reducción de la PTH después de la administración IV de 0.5 mg/kg en ratas normales anestesiadas con isofluorina -la PTH se midió a 1, 2, 3 y 4 horas después de la administración y se calculó la AUC acumulativa. Los datos de la PTH se calcularon de acuerdo con la siguiente fórmula AUCcompuest0 tratado/AUCcontroi con solución salina*100.
Los datos en la Tabla 2 ilustran los cambios estructurales que influyen en la actividad. En una modalidad, el compuesto es Ac-caarrrr-NH2 (SEC ID NO: 22) y en otra modalidad, el compuesto es Ac-craarrr-NH2 (SEC ID NO:24).
Se condujeron estudios adicionales de la relación estructura-actividad utilizando el ensayo celular in vitro en células HEK 293 que expresan el receptor para detección de calcio en humanos, como se describe en el Ejemplo 4. Se investigó la capacidad de los péptidos Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO:26) y Ac-arrrar-NH2 (SEC ID NO:29) para activar el CaSR humano al medir la acumulación de monofosfato de inositol (IPi) , que es reflectivo de la producción de IP3. La producción de IP3 es un mensajero secundario de señalización celular importante y su producción es una consecuencia en la dirección 3' directa de la activación de CaSR. La acumulación de IPi después de la producción de IP3 se puede obtener mediante el tratamiento de las células utilizadas en el ensayo con cloruro de litio (LICI2) que inhibe la enzima para que se convierta el IPi a inositol. En los estudios descritos en el Ejemplo 4 se midió la acumulación de IPi en presencia de los compuestos ilustrativos Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO: 26) y Ac-arrrar-NH2 (SEC ID NO:29). Los resultados se muestran en la figura 2A.
La concentración del IPi se reporta como nM junto con el eje Y y las concentraciones del compuesto de la SEC ID NO:26 o la SEC ID NO:29 se reportan como junto con el eje X. la ausencia del residuo de D-cisteina N-terminal de la SEC ID NO: 29 redujo dramáticamente la capacidad del compuesto para activar el CaSR en comparación con la SEC ID NO: 26. Es decir, la eliminación del residuo de cisteina N-terminal redujo significativamente la potencia del compuesto, ya que los péptidos Ac-carrrar-NH (SEC ID NO: 26) y Ac-arrrar-NH2 (SEC ID NO: 29) difieren únicamente en la presencia o ausencia de la D-cisteina N-terminal.
La contribución del grupo que contiene tiol en la subunidad Xi del compuesto (por ejemplo, en ciertas modalidades donde el compuesto es un péptido en el residuo N-terminal), también se investigó en un estudio in vivo. La actividad para disminuir la PTH de los péptidos identificados como la SEC ID NO: 26 (Ac-carrrar-NH2 ) y como la SEC ID NO: 29 (Ac-arrrar-NH2) se evaluó in vivo de acuerdo con los procedimientos en el Ejemplo 4. Los niveles de la PTH en plasma se valoraron antes de la dosificación a l, 2, 3 y 4 horas después de la dosificación. Los resultados se muestran en la figura 2B. Como se observa, una dosis de 0.5 mg/kg del péptido Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO:26) (cuadros) disminuyó la concentración en sangre de la PTH a un nivel no detectable de hasta 4 horas después de la dosificación. Por el contrario, el péptido que carece de un residuo N-terminal con un grupo que contiene tiol, Ac-arrrar-NH2 (SEC ID NO:29), diamantes, no redujo la concentración de la PTH, incluso a una dosis sustancialmente mayor (es decir, 9 mg/kg) .
La relación estructura-actividad del grupo que contiene tiol en la subunidad Xi del compuesto se analizó adicionalmente al preparar compuestos con subunidades Xi diferentes. Los compuestos, mostrados en la Tabla 3, se probaron in vivo en ratas normales para la actividad para reducir la PTH.
Tabla 3 Actividad ín vivo de los compuestos ilustrativos * Las negrillas indican una sustitución respectiva del residuo que contiene tiol (D-cisteina) en Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID N0:6) ** Reducción de la PTH después de la administración IV de 0.5 mg/kg en ratas normales anestesiadas con isoflurano -la PTH se midió a 1, 2, 3 y 4 horas después de la administración y se calculó la AUC acumulativa. Los datos de la PTH se calcularon de acuerdo con la siguiente fórmula AUCcompuesto tratado/^UCcontroi con solución salina*100.
Los datos en la Tabla 3 ilustran que se puede variar la subunidad Xi que contiene tiol. Se probaron los compuestos con lo siguiente en el residuo N-terminal -D-cisteina (cys), D-peniciliamina (dPen) , d-homocisteina (dHcy) y ácido mercaptopropiónico (Mpa) . Además, un aminoácido natural o no natural, tal como beta alanina, se puede conjugar para el residuo que contiene tiol N-terminal. Los datos ilustra que los compuestos catiónicos tales como Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) que contienen diferentes grupos que contienen tiol en la subunidad Xi reducen efectivamente la PTH ín vivo. Al sustituir el residuo de cisteina N-terminal con metionina, que no contiene un grupo tiol, dio por resultado en un compuesto con muy baja actividad para disminuir la PTH in vivo (datos no mostrados) .
Con base en los estudios anteriores, los compuestos de la secuencia contigua de las subunidades X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7, donde Xi es una subunidad que comprende un grupo que contiene tiol, tienen actividad para disminuir los niveles de la hormona paratiroidea . En una modalidad, el grupo que contiene tiol en la subunidad Xi se seleccionó del grupo que consiste de los residuos de aminoácidos que contienen tiol y las porciones que contienen tiol orgánico. En otra modalidad, el grupo que contiene tiol es capaz de reaccionar con otro grupo tiol bajo pH fisiológico y temperatura. En ciertas modalidades donde el residuo que contiene tiol es un residuo de aminoácido, la subunidad Xi puede ser cualquiera de cisteina, glutatión, ácido mercapto-propiónico, cisteina N-acetilada y cisteina PEGilada. En las modalidades donde el grupo que contiene tiol es una subunidad de un residuo que no es de aminoácidos, esta pequeña molécula orgánica con un grupo que contiene tiol, la subunidad Xi puede ser una de las porciones de tiol-alquilo, o tioacilo tales como los residuos de 3-mercaptopropilo o 3-mercaptopropionilo . En una modalidad, el tiol no es homocisteina .
Por consiguiente, y en otra modalidad, los compuestos descritos en la presente tienen "actividad clínica para disminuir el nivel de la hormona paratiroidea" , lo cual significa que el compuesto, con la administración a un sujeto, disminuye la hormona paratiroidea en plasma según se mide mediante el área bajo la curva de la PTH acumulativa (AUC de la PTH) durante 4 horas después de la administración en comparación con el AUC de la PTH de un sujeto control tratado con el vehículo correspondiente. Las concentraciones de la PTH en plasma se miden utilizando, por ejemplo, un kit ELISA disponible comercialmente que detecta el compuesto 1-84 de la PTH intacta bioactiva (véase el Ejemplo 3 para un kit específico) , compuesto con actividad clínica para disminuir el nivel de la hormona paratiroidea reduce el AUC de la PTH en al menos 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% en comparación con el AUC de la PTH de un sujeto control tratado con el vehículo correspondiente.
Los estudios anteriores, y otros descritos más adelante, ilustran modalidades adicionales de los compuestos descritos en la presente, en donde la subunidad Xi en algunas modalidades se pueden modificar químicamente, tal como mediante modificación química para incluir un grupo acetilo, un grupo benzoilo, un grupo bencilo, un grupo butilo, un aminoácido natural o no natural tal como beta-alanina acetilada o se une mediante un enlace covalente a otro porción tiol. Los terapéuticos peptidicos pueden ser vulnerables al ataque por peptidasa. Las exopeptidasas típicamente son enzimas no específicas que segmentan los residuos de aminoácidos de los términos amino o carboxi de un péptido o proteína. Las endopeptidasas , que se escinden dentro de una secuencia de aminoácidos, también pueden ser no específicas; sin embargo las endopeptidasas frecuentemente reconocen las secuencias amino particulares (sitios de reconocimiento) y segmentan el péptido en o cerca de esos sitios. Por consiguiente, se contemplan las modificaciones al compuesto para protegerlo de la degradación proteolitica.
Un método para proteger un péptido de la degradación proteolitica implica modificar químicamente, o "bloquear", los términos amino y/o carboxi de los péptidos. En el sentido en el que se utiliza en la presente, los términos "modificado químicamente" o "bloqueados" se utilizan indistintamente para hacer referencia a la introducción de un grupo bloqueador a un término o ambos términos en el compuesto vía una modificación covalente. Los grupos bloqueadores adecuados sirven para bloquear los términos de los péptidos sin disminuir la actividad biológica de los péptidos. Cualquier residuo colocado en los términos amino o carboxi, o ambos, de los compuestos descritos, incluyendo las subunidades que contienen tiol se pueden modificar químicamente .
En una modalidad preferida, el término amino del compuesto se modifican químicamente mediante acetilación, para proporcionar un péptido de N-acetilo (que se puede representar como "Ac-" en una estructura o fórmula en la presente), en una modalidad preferida, el término carboxi de los péptidos descritos, se modifica químicamente mediante amidación para proporcionar una carboxamida primaria en el término C (que se puede representar como "-NH2" en una secuencia peptídica, estructura, o fórmula en la presente) . En una modalidad preferida, tanto el término amino como el término carboxi se modifican químicamente mediante acetilación y amidación, respectivamente. Sin embargo, son posibles otros grupos de bloqueo. Por ejemplo, el término amino se puede bloquear mediante acilación con grupos tales como un grupo acetilo, un grupo benzoilo, o con aminoácidos naturales o no naturales tales como beta-alanina bloqueada con un grupo acetilo, o mediante alquilación con grupos tales como un grupo bencilo o un grupo butilo, o mediante sulfonilación para formar sulfonamidas . Similarmente, el término carboxi se puede esterificar, o convertir a una amida secundaria, y una sulfonamida de acilo, o lo semejante. En algunas modalidades, el término amino o el término carboxi pueden comprender un sitio para unión de una porción de polietilenglicol (PEG) es decir, los términos amino o carboxi se pueden modificar químicamente mediante la reacción con un PEG con grupo funcional adecuadamente.
La protección de los péptidos de las endopeptidasas típicamente implica la identificación y eliminación de un sitio de reconocimiento de endopeptidasa de un péptido. Los sitios de reconocimiento de proteasa son bien conocidos por aquellos con experiencia normal en la técnica. De esta forma, es posible identificar un sitio de reconocimiento potencial de endoproteasas y luego eliminar ese sitio al alterar la secuencia de aminoácidos dentro del sitio de reconocimiento. Los residuos en la secuencia de reconocimiento se pueden mover o eliminar para destruir el sitio de reconocimiento. De preferencia, se realiza una sustitución conservadora con uno o más de los aminoácidos que comprenden un sitio de reconocimiento identificado de proteasas.
? . Estudios adicionales de la relación Estructura- Actividad Se condujeron estudios adicionales de la actividad estructural, para evaluar adicionalmente el efecto de las propiedades de cada subunidad en el compuesto o su actividad terapéutica. Estos estudios se describirán ahora haciendo referencia al Ejemplo 5.
Se preparó una serie de compuestos que tienen un residuo de L-aminoácido sustituido por un residuo de D-aminoácido con base en un armazón para disminuir la PTH Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3). Los compuestos se administraron a sujetos y se valoraron los niveles de PTH en plasma antes de la dosificación y 1, 2, 3 y 4 horas después de la dosificación, como se describe en el Ejemplo 5 y se calculó el AUC como la suma de los valores de concentración de la PTH en los puntos de tiempo de 1, 2, 3 y 4 horas, normalizados por las AUC para el control con solución salina en los mismos puntos del tiempo, multiplicados por 100. Los resultados se muestran en la Tabla 4.
Tabla 4 Efecto de la sustitución de los L-aminoácidos sobre la potencia * Reducción de la PTH después de la administración IV de 0.5 mg/kg en ratas normales anestesiadas con isoflurano -la PTH se midió a 1, 2, 3 y 4 horas después de la administración y se calculó la AUC acumulativa. Los datos de la PTH se calcularon de acuerdo con la siguiente fórmula AUCcompuesto tratado AUCCont¡roi con solución salina*100.
Los compuestos ilustrativos mostrados en la Tabla 4 se modificaron químicamente, tanto en el término N como en el término C, según se indica por las designaciones Ac y NH2. La secuencia de siete subunidades carrrar (SEC ID NO:3), en donde todas las estructuras fueron residuos de D-aminoácido, se modificó al reemplazar una subunidad en un tiempo con un L-aminoácido . La subunidad Xi fue un residuo D-Cys (o un residuo L-Cys en la SEC ID NO: 34) conjugado vía un enlace disulfuro con un residuo L-Cys, según se indica mediante la designación entre paréntesis (C) . Los datos in vivo de la disminución de la PTH en la Tabla 4 muestran que la quiralidad de Arg y Ala afectan la actividad de los compuestos. En una modalidad, se contempla un compuesto de la secuencia X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 en donde al menos las subunidades identificadas como X4 y X7 son subunidades de los residuos de D-aminoácidos . En otra modalidad, las subunidades identificadas como X4, X5, y X7 son subunidades de residuos de D-aminoácidos . En una modalidad preferida, las subunidades identificadas como X3, X4, X5, Xs y X7 son subunidades de los residuos de D-aminoácidos. En modalidades más preferidas, las subunidades identificadas como X2, X3, X4, X5, e y X7 son subunidades de residuos de D-amino y todas las subunidades Xi, X2, X3, X4, X5, ?ß y X7 son subunidades de residuos de D-aminoácidos .
En otros estudios, también se encontró que la sustitución de un péptido que tiene todos los L-'aminoácidos con todos los D-aminoácidos no redujo la actividad in vitro de los péptidos probados; de hecho, los péptidos compuestos totalmente de los D-aminoácidos parecieron mejorar la potencia para la activación del CaSR. También se muestra que algunos de los residuos catiónicos (arginina) , en las posiciones especificas con relación al residuo de cisteina, se podrían sustituir con residuos no cargados (alanina) con mínimo efecto sobre la actividad hacia el CaSR.
Para caracterizar adicionalmente la relación entre la estructura y actividad contra el CaSR, se probó una variedad de péptidos catiónicos con diferentes números (4 a 8) de los residuos de arginina (todos contuvieron una cisteina N-terminal) utilizando el ensayo celular ín vitro HEK-293. Se encontró una correlación directa entre el número de subunidades catiónicas y la potencia del compuesto, donde la potencia resulta evidente por la capacidad para activar el CaSR. Reducir el número de actividades catiónicas (por ejemplo, arginina) de 5 a 4 dio por resultado en el mayor desplazamiento en la potencia (> 10 veces) lo que sugiere que puede haber un punto de inflexión de actividad entre los compuestos que tengan estas cargas netas, que una subunidad catiónico en la subunidad X5 se prefiere para actividad. Por consiguiente, se contemplan los compuestos de la estructura ??-?2-?3-? -?5~?6~?7G en donde X5 es una subunidad catiónica. En ciertas modalidades el Xi es una subunidad que comprende un grupo tiol que es capaz de reaccionar con otro grupo tiol bajo condiciones fisiológicas (un "tiol reactivo", intentando que un tiol reaccione con otro tiol (por ejemplo, cisteina con cisteina) bajo condiciones fisiológicas de pH 7.4 y la temperatura corporal) .
Inesperadamente, Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) con seis residuos catiónicos, cuando se evaluó in vivo, exhibió una mayor y más prolongada actividad que AC-crrrrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 41), que tuvo ocho residuos catiónicos. Esto contrasta con la observación de que la SEC ID NO: 41 fue más potente en la activación del CaSR en este en ensayo celular in vitro. Sin desear estar vinculados por la teoría, se cree que el desempeño superior de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) in vivo puede ser el resultado de las mejores propiedades farmacocinéticas de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6), debido a que se espera que Ac-crrrrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6441 se absorba en las células en virtud de su característica de penetración celular, y así se elimina de la proximidad a la porción activa de la CaSR.
Para explorar adicionalmente la relación de estructura-actividad de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6), se reemplazan algunos de los residuos catiónicos (arginina) con residuos no cargados (alanina) . Se encontró que reemplazar los residuos catiónicos (arginina) en las posiciones subunitarias X2 y X dio por resultado en un compuesto (SEC ID NO: 15) que tuvo una potencia reducida significativamente in vítro para activar el CaSR. Por el contrario, reemplazar los residuos catiónicos (arginina) en las posiciones subunitarias X2 y X6 dio por resultado en un compuesto (SEC ID NO: 26) que conservó mucho de la potencia observada con At-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) . Estos resultados sugieren que la posición de los residuos cargados en el compuesto contribuye a la potencia y, en algunas modalidades, puede superar la contribución de la carga positiva total del péptido, también parece que los residuos catiónicos (arginina) en ciertas posiciones, tales como la posición subunitaria X5, contribuyen desproporcionalmente a la potencia.
Se encontró que la presencia de una cisteina N-terminal mejora marcadamente la potencia de los péptidos para activar el CaSR. El CaSR es un receptor G-proteina-acoplado 7 -transmembrana con un mayor dominio extracelular que funciona como un receptor homodimérico . Existen 18 residuos de cisteina en el dominio extracelular, algunos de los cuales se han mostrado mediante polimorfismo o análisis mutacional que son importantes para la actividad del receptor. De observación particular con las cisteinas 129 y 131 de la región de Asa 2 del dominio extracelular. Las cisteinas 129 y 131 se piensa que forman un enlace disulfuro intermolecular entre los dos monómeros del complejo de receptores, que es una configuración cerrada o inhibida. La mutación de la cisteina 129 activa el CaSR, como lo hace un número de otras mutaciones, que incluyen una supresión total de la región de Asa 2. La potencia mejorada proporcionada por el residuo de cisteina N-terminal en los compuestos descritos podría resultar de una interacción específica con uno o más residuos de cisteina en el dominio extracelular del CaSR.
Para valorar adicionalmente el efecto de la quiralidad de las sustituciones de aminoácidos en la actividad de CaSR in vitro, se generó una serie de análogos de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) que contienen L-aminoácido o sustituciones de aminoácido aquiral (glicina) en diversas posiciones y se probaron para potencia contra el CaSR. Los análogos probados incluyeron Ac-cGrrrGr-NH2 (SEC ID NO:42), (ii) Ac-cArrrAr-NH2 (SEC ID NO:43), y (iii) Ac-CaRrRaR-NH2 (SEC ID NO:44). Todos los análogos anteriores tuvieron significativamente menor potencia que AC-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6), que varia de una diferencia de 10 veces para SEC ID NO: 44 {la más potente de los tres análogos) y una diferencia mayor de 2000 veces para la SEC ID NO: 43 (la menos potente de los tres análogos). Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO:26), en el cual los residuos de D-aminoácido catiónico (residuos de D-arginina) en las posiciones 2 y 6 de la SEC ID NO: 6 se reemplazaron mediante los residuos de D-aminoácido no cargados {residuos de D-arginina) , el cambio en la actividad fue mucho menor (diferencia de ~3 veces) . De esta forma, sorprendentemente, se encontró que la interrupción de todos residuos de D-aminoácidos de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) con dos o más residuos de L-aminoácidos dio por resultado en una reducción significativa en la potencia. También fue sorprendente que la potencia disminuyó más de 80 veces cuando la interrupción de residuos fue un residuo de aminoácidos aquiral no cargado (residuo de glicina) en comparación con cuando fue un residuo de L-aminoácidos no cargados (residuo de L-alanina) .
También fue sorprendente que reemplazar los dos residuos de D-aminoácidos no cargados (residuos de D-alanina) de Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO: 26) con sus contrapartes L-(SEC ID NO: 43), dio por resultado en una disminución mayor a 600 veces en la potencia, mientras que reemplazarlos con un residuo de aminoácidos aquirales no cargados (residuo de glicina) (SEC ID NO: 42) dio por resultado en una reducción menor a 8 veces en la potencia, y que reemplazar tres residuos de D-aminoácidos catiónicos (residuos de D-arginina) de Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO: 26) con sus contrapartes L- (SEC ID NO:44), dio por resultado en una diferencia menor a 4 veces en la potencia.
La actividad de una variedad de péptidos y conjugados se probó contra el CaSR humano. Estos estudios se condujeron al medir la producción de IPX en células HEK293 que expresan el CaSR humano. Los valores EC50 se muestran en la Tabla 5. Cada péptido se probó en ocho concentraciones diferentes, por duplicado, para establecer una curva de respuesta a la dosis. El ajuste de la curva se realizó utilizando GraphPad Prism. En la Tabla 5, y a todo lo largo de la especificación, los residuos proporcionados en mayúsculas son L-aminoácidos , mientras que las letras minúsculas indican D-aminoácidos. "Ac" indica un grupo de bloqueo con acetilo, "NH2" indica un grupo de bloqueo con amida, "Ac-bAla" es una beta-alanina acetilada, "GSH" indica glutatión reducido, "GS" indica glutatión oxidado, "PEG" se refiere a polietilenglicol, "PEG2" y "PEG5" se refieren a porciones de polietilenglicol de 2kDa y 5kDa, respectivamente, y "Mpa" se refiere a ácido mercaptopropionico. Un grupo encerrado entre paréntesis indica que el grupo o porción se une a la cadena lateral de la subunidad anterior o residuo de aminoácidos.
Tabla 5 Valor EC50 para péptidos catiónicos en un ensayo in v tro de CaSR En otro estudio de la relación estructura-actividad, la contribución de los aminoácidos no catiónicos a la potencia de los péptidos se evaluó al preparar una serie de péptidos con varios residuos de D-aminoácidos o glicina (Tabla 6) o con aminoácidos no naturales estéricamente obstruidos (Tabla 7), sustituidos en diversas posiciones en el péptido Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO: 26) y en el péptido Ac-crrarar-NH2 (SEC ID NO:153). Los péptidos se administraron como un bolo IV a ratas Sprague Dawley normales, a una dosis de 0.5 mg/kg. Se utilizó como un control un bolo intravenoso (IV) de solución salina. Los niveles de la PTH en plasma se evaluaron antes de la dosificación a 1, 2, 3 y 4 horas después de la dosificación. Los resultados se muestran en las tablas más adelante, e indican que: 1) un aminoácido pequeño tal como alanina, glicina o serina se prefiere en la posición 6 en el péptido Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO:26), y 2) la alanina en la posición 2 en Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO: 26) es mucho más permisiva para las sustituciones y se puede sustituir con aminoácidos naturales hidrofóbicos (por ejemplo, D-Val, D-Leu) , aromáticos (por ejemplo, D-Phe) , o polares (por ejemplo, D-Ser, D-Gln) asi como aminoácidos hidrofóbicos voluminosos no naturales (por ejemplo, dNle, dNva) pero no ácidos, y que 3) el residuo de alanina en la posición 4 del péptido Ac-crrarar-NH2 (SEC ID NO: 25) también es muy permisivo para las sustituciones y se puede adaptar a la mayoría de tipos de aminoácidos naturales (así como también aminoácidos hidrofóbicos voluminosos no naturales (por ejemplo DNle, dNva) aunque no es permisivo para los aminoácidos que afectan la conformación secundaria, a saber, glicina o prolina o los aminoácidos con cadena lateral ácida.
Tabla 6 Actividad de los compuestos con el péptido ilustrativo * Las negrillas indican la sustitución respectiva de los residuos de alanina en Ac-crrrar-NH2 (SEC ID NO: 6) o Ac-crrarar-NH2 (SEC ID NO: 25) .
** Reducción de la PTH después de la administración IV de 0.5 mg/kg en ratas normales anestesiadas con isoflurano -la PTH se midió a 1, 2, 3 y 4 horas después de la administración y se calculó la AUC acumulativa. Los datos de la PTH se calcularon de acuerdo con la siguiente fórmula AUCcorapuesto tratado/AUCcontrol con solución salinanoo.
Tabla 7 Actividad de los compuestos con el péptido ilustrativo * Las negrillas indican la sustitución respectiva de los residuos de alanina en Ac-crrrar-NH2 (SEC ID NO: 26) o Ac-crrarar-NH2 (SEC ID NO:25). Sar = el aminoácido de sarcosina no natural, Nma = N- metilalanina; AiB = aminoácido isobutirico, dNva = D-Norvalina, dNle = D-Norleucina .
** Reducción de la PTH después de la administración IV de 0.5 mg/kg en ratas normales anestesiadas con isoflurano -la PTH se midió a 1, 2, 3 y 4 horas después de la administración y se calculó la AUC acumulativa. Los datos de la PTH se calcularon de acuerdo con la siguiente fórmula AUCcompUest0 tratado/AUCcontl-0i con solución salina*100.
Tabla 8 Actividad de los compuestos con el péptido ilustrativo Las negrillas que se muestran entre paréntesis indican los grupos de conjugación respectiva que contienen tiol. GS = glutatión oxidado; dHcy = D-homocisteina, Mpa = ácido mercaptopropiónico; PEG = polietilenglicol .
Reducción de la PTH después de la administración IV de 0.5 mg/kg en ratas normales anestesiadas con isoflurano -la PTH se midió a l, 2, 3 y 4 horas después de la administración y se calculó la AUC acumulativa. Los datos de la PTH se calcularon de acuerdo con la siguiente fórmula AUCcompuesto tratado/AUCcontroi con solución salina*!^^' El compuesto se dosificó a 10 mg/kg (~ molaridad equivalente a unos 0.5 mg/kg del péptido no PEGilado) * El compuesto se dosificó a 20 mg/kg (~ molaridad equivalente a unos 0.5 mg/kg del péptido no PEGilado) B . Respuesta a histamina y estudios de la relación estructura-actividad En la bibliografía se han reportado compuestos poli-catiónicos para provocar la liberación de la amina histamina biogénica activa. Véase, Church et al., J. Immunol., 128 (5) : 2116-2121 (1982); Lagunoff et al., Ann . Rev. Pharmacol. Toxicol., 23:331-51 (1983). Se cree que la liberación de histamina es el resultado de mastocitos y la activación de basófilos que se presenta de una forma dependiente de Gai. Véase, Aridor et al., J. Cell Biol., 111 (3) : 909-17 (1990). Reducir o eliminar esta reacción fisiológica es conveniente, inter alia, para mejorar el margen terapéutico de calcimiméticos de péptidos catiónicos para el tratamiento de la SHPT.
Se condujeron estudios para evaluar la liberación de histamina inducida con la administración in vivo de los compuestos descritos en la presente. En un primer estudio, descrito en el Ejemplo 6, la dosificación mediante bolo IV o infusión en ratas Sprague Dawley normales se utilizó para evaluar la liberación de histamina asociada con diversos compuestos. Para evaluar el efecto de la carga neta positiva, de la liberación de histamina asociada con un compuesto, los péptidos que contienen 4 a 7 residuos catiónicos (arginina) se generaron y probaron para su capacidad para provocar la liberación de histamina in vivo, de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 6. Los péptidos probados incluyeron (i) Ac-crrrr-NH2 (SEC ID N0:4), (ii) Ac-crrrrr-NH2 (SEC ID NO: 5), (iii) Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) y (iv) Ac-crrrrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 41).
Como se muestra en la figura 3, cuando un número equivalente de moles de cada péptido se administró mediante bolo IV a ratas normales, la SEC ID NO: 41 (8 residuos de arginina) exhibió la mayor inversión de histamina. Otros compuestos con menos residuos Arg, incluyendo la SEC ID NO: 6 (6 residuos de arginina), la SEC ID N0:5 (5 residuos de arginina), y la SEC ID NO: 4 (4 residuos de arginina), también produjeron un máximo en el nivel de histamina, aunque a un menor grado en comparación con la SEC ID NO: 41, la SEC ID NO: 6, la SEC ID NO: 5 y la SEC ID NO: 4 que generaron respuestas más leves en su actividad para liberación de histamina (~2-3 veces superior al valor inicial). La SEC ID NO: 5 y la SEC ID NO: 4 fueron, sin embargo, menos potentes que la SEC ID NO: 6 con respecto a la disminución de la PTH en plasma .
Debido a que la actividad para reducir la PTH de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) se acompañó por falta de una respuesta histaminica, se condujeron evaluaciones adicionales con base en Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) para evaluar si fue posible o no disminuir adicionalmente la respuesta histaminica sin sacrificar la actividad para disminución de la PTH. Como se mostrará en los datos más adelante, la sustitución de los residuos catiónicos (arginina) en Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) con residuos no catiónicos (alanina) se realizó para producir una serie de análogos con una carga neta reducida total y una densidad de carga reducida. De estos análogos, tanto CA-cararrr-NH2 (SEC ID NO: 15) como Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO: 26) se asociaron con la falta de una respuesta histaminica cuando se administraron a ratas mediante bolo IV. De manera importante, estos dos péptidos conservaron sus propiedades calcimiméticas potentes y fueron capaces de reducir la secreción de la PTH tanto en ratas normales como en ratas con disfunción renal.
El compuesto Ac-crrrrrr-NH2 identificado como la SEC ID NO: 6 (2.1 µp???/kg = 2.3 mg/kg) provocó una respuesta histaminica observable de aproximadamente 2-3 veces sobre la el valor inicial en comparación con 9-6 veces con la SEC ID NO: 41 cuando se dosificó mediante bolo IV (administrado en menos de 1 minuto) en ratas normales. La liberación de histamina provocada por Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) llegó a un máximo a los 5 minutos después de la dosificación y regresó a los niveles de valor inicial 15 minutos después (figura 3) . Una reducción adicional en el número de subunidades cargadas para 5 y 4 residuos de arginina por péptido (SEC ID NO: 5 y SEC ID NO: 4, respectivamente) redujo adicionalmente la respuesta histaminica en comparación con los péptidos de oligo-arginina más largos; sin embargo, se observó un aumento de 2-3 veces en la histamina sobre el valor inicial 5 minutos después de la dosificación en bolo IV (figura 3) . Estos resultados sugieren una relación entre la carga neta del péptido y la liberación asociada de histamina. También se observó que los péptidos ricos en arginina con menos de 7 argininas están muy limitados en su capacidad para ingresar a las células, lo que sugiere que la penetración en la célula no se requiere para provocar una liberación de histamina .
La liberación de histamina asociada con los compuestos para disminuir la PTH Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) y Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) se evaluó in vivo. El compuesto Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) tuvo la siguiente estructura : c I (SEQ 10 O: 3) Esta estructura conjugado se denota en la presente como Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO.273 donde el residuo L-Cys enlazado al residuo que contiene tiol en la subunidad Xi del compuesto (aquí, un residuo D-Cys) vía un enlace disulfuro Cys-Cys, se coloca entre paréntesis en la fórmula. Esta notación se utiliza a todo lo largo para designar que la porción entre paréntesis se enlaza a un segundo grupo que contiene tiol. Con relación a Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) el compuesto Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) tuvo dos residuos catiónicos (arginina) sustituidos con residuos no cargados (alanina) en las posiciones subunitrarias X2 y ?T· Además, el residuo D-Cys en la posición ?? se conjuga a un residuo L-Cys .
Estos dos compuestos se administraron a ratas anestesiadas con isoflurano (Sprague Dawley) a 3 mg/kg mediante bolo intravenoso (IV) (administrado en menos de 1 minuto) . Se extrajo sangre antes de la dosificación y 5, 15 y 30 minutos después de la dosificación. Se midió la concentración de histamina, y el cambio de veces en la concentración de histamina en sangre con relación a la concentración de histamina en sangre de la pre-dosis se muestra en la figura. 4. El compuesto Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6, barras abiertas) indujo una respuesta histaminica, observada en el punto de datos 5 minutos después de la dosificación donde se observó un aumento de 7 veces en el nivel de histamina. El compuesto Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3, con barras con rayas en cruz) no indujo una respuesta histaminica evidente, como se observa por los puntos de datos a los 5, 10 y 15 minutos después de la dosificación donde el nivel de histamina no se aumentó con relación al nivel de histamina de pre-dosificación (tiempo cero) .
Para evaluar adicionalmente la relación entre la estructura del compuesto y la liberación de histamina, se preparó una serie de compuestos y se evaluó para su capacidad para provocar la inducción de histamina en un estudio in vitro utilizando mastocitos perifonéales de rata. En este ensayo, los compuestos se incubaron a 10 mM durante 15 minutos a 37 °C con células aisladas del lavado peritoneal de ratas SD. Después de la incubación, se recolectó el medio celular y se determinó el nivel de histamina. Los datos se muestran en la Tabla 9.
Tabla 9 Inducción de histamina in vitro en mastocitos peritoneales de rata de los compuestos con el péptido ilustrativo * Método mostrado en el Ejemplo 7 Abreviaturas: véase el Ejemplo 7 Para evaluar adicionalmente la relación entre la estructura del compuesto y la liberación de histamina, se preparó una serie de compuestos evaluados por su capacidad para provocar la inducción de histamina en ensayos in vivo. os datos se muestran en la Tabla 10.
Tabla 10 Inducción de histamina in vivo de los compuestos con el péptido ilustrativo * Método mostrado en el Ejemplo 7 Por consiguiente, y como se puede apreciar en vista de los datos de la PTH y los datos de histamina descritos en lo sucesivo, en una modalidad, se contempla un compuesto que tiene actividad para disminuir el nivel de la PTH en un sujeto en ausencia de una respuesta histaminica. En ciertas modalidades, la ausencia de una respuesta histaminica significa una dosis del compuesto que produce un aumento en histamina menor a 10 veces, de mayor preferencia 8 veces, todavía de mayor preferencia 5 veces, e incluso de mayor preferencia 3 veces, medido in vitro en un ensayo como se describe en la presente, en donde el cambio de veces se determina con base en los niveles de histamina antes de la incubación con el compuesto y después de 15 minutos de la incubación con el compuesto. En una modalidad específica, la respuesta histamínica se determina en un ensayo in vitro utilizando mastocitos perifonéales de rata aislados del lavado peritoneal de ratas Sprague Dawley normales, y donde el cambio de veces se determina con base en los niveles de histamina antes de la incubación con el compuesto y después de 15 minutos de la incubación con el compuesto. En los estudios conducidos en la presente, se realizó la evaluación in vitro de la liberación de histamina utilizando mastocitos perifonéales aislados de rata, aislados mediante lavado peritoneal utilizando HBSS frío + HEPES 25 mM pH 7.4 que contiene heparina (5u/mL). Las células se lavaron dos veces en tampón de estimulación (HBSS + HEPES 25 mM, pH 7. ) y se incubaron con 10 µ? del compuesto en tampón de estimulación (HBSS + HEPES 25 mM, pH 7.4) durante 15 minutos en una placa de 96 pozos (106/pozo) a 37°C. El sobrenadante celular se analizó para histamina utilizando el kit EIA de histamina (Cayman # 589651) .
En otra modalidad, se contempla un compuesto que tiene una actividad para disminuir el nivel de la PTH en un sujeto en ausencia de una respuesta histaminica clínica. En el sentido en el que se utiliza en la presente, ausencia de una "respuesta histaminica clínica" significa que una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto según se describe en la presente se administra al sujeto sin producir un aumento clínicamente adverso en la histamina en plasma o sangre según se mide 5-10 minutos después de terminar la dosificación o a través del curso del tratamiento. Por ejemplo, cuando un compuesto requerido para producir un efecto terapéutico deseado se administra a un sujeto mediante bolo (en el sentido en el que se utiliza en la presente "bolo" significa administrado durante un minuto o menos) produjo un aumento en la histamina en plasma o sangre 5-10 minutos después de terminar la dosificación que es menor a 15 veces, 10 veces, 9 veces, 8 veces, 7 veces, 6 veces, 5 veces, 4 veces, 3 veces, 2 veces superior a los niveles de pre-dosificación.
Como se puede apreciar a partir de los estudios descritos anteriormente, en una modalidad, el compuesto comprende una secuencia de 3 a 35 residuos de aminoácidos, en donde está presente en la secuencia una pluralidad de subunidades de residuos de aminoácidos cargados positivamente. En algunas modalidades, los compuestos descritos comprenden de 5 a 25 subunidades, y en una modalidad preferida, cada subunidad es un residuo de aminoácido. En otra modalidad, los compuestos descritos comprenden de 6 a 12 subunidades. Todavía en otras modalidades, los compuestos descritos comprenden de 3 a 9 subunidades de aminoácidos. En modalidades alternativas los compuestos descritas comprenden 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 ó 35 subunidades.
Las subunidades de los compuestos descritos, en una modalidad, se seleccionan independientemente de aminoácidos naturales o no naturales, o sus análogos, y pueden tener cualquier configuración L- o D- (excepto para glicina que es aquiral) . Glicina, los residuos alifáticos alanina, valina, leucina, o isoleucina, prolina, los residuos hidroxilo, serina y treonina, los residuos ácidos de ácido aspártico y ácido glutámico, los residuos amida, asparagina, y glutamina, los residuos básicos lisina y arginina, histidina, los residuos aromáticos fenilalanina, tirosina y triptófano, y los residuos que contienen azufre, metionina y cisteína todos se contemplan para utilizarse en los compuestos descritos. El número de subunidades cargadas positivamente, y su densidad pueden afectar la potencia del compuesto para reducir la PTH. En algunas modalidades, las subunidades cargadas positivamente se separan mediante una o más de otras subunidades ("subunidades de separación") . En una modalidad, las subunidades de separación son residuos de alanina. En algunas modalidades, la guiralidad de la subunidad de separación afecta la potencia del compuesto.
Los residuos de aminoácidos cargados positivamente de los compuestos descritos pueden ser un residuo natural o no natural especifico, o un análogo del mismo, que tenga cualquiera de la configuración L- o D- (por ejemplo, L-arginina) que se repite en la secuencia, o puede ser una variedad de residuos naturales o no naturales, o análogos de los mismos, que tengan cualquier configuración L- o D- . En algunas modalidades, el compuesto es un péptido que consta de 3 a 20 residuos de aminoácidos cargados positivamente, 6 a 12 residuos de aminoácidos cargados positivamente, 3 a 9 residuos de aminoácidos cargados positivamente, en algunas modalidades, los péptidos comprenden 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ó 20 residuos de aminoácidos cargado positivamente.
En algunas modalidades, los residuos de aminoácidos cargados positivamente se seleccionan independientemente de aminoácidos naturales. En algunas modalidades, los residuos de aminoácidos cargados positivamente se seleccionan independientemente de aminoácidos naturales y/o no naturales. En algunas modalidades, los residuos de aminoácidos cargados positivamente se seleccionan independientemente del grupo que consiste de arginina, lisina, histidina, ácido 2,3-diaminopropiónico (Dap), ácido 2 , 4-diaminobutirico (Dab), ornitina, y homoarginina . En una modalidad preferida, los residuos de aminoácidos cargados positivamente son residuos de arginina.
En algunas modalidades, el compuesto es un péptido y es una cadena o ramificación de un péptido contiguo individual. En otras modalidades, el compuesto es un péptido que está ramificado, todavía en otras modalidades, el péptido se conjuga con una o más porciones que contienen tiol (cada una, un "grupo de conjugación que contiene tiol" o un "grupo de conjugación") . En una modalidad preferida, y como se ilustra simplemente, el compuesto peptídico se conjuga con un grupo de conjugación Cys, vía un enlace (-S-S-) disulfuro (por ej emplo-Cys-Cys- ) . En el sentido en el que se utiliza en la presente, el término "compuesto" pretende abarcar tanto estos péptidos como estos conjugados.
Los compuestos típicamente comprenden una o más porciones de tiol, de preferencia una o más porciones de tiol reactivo. Las subunidades que tienen un grupo tiol incluyen compuestos que no son de aminoácido que tengan un grupo tiol y los aminoácidos con un grupo tiol. El grupo tiol de la subunidad que contiene tiol puede estar en una forma conjugada (por ejemplo, via un enlace disulfuro con un grupo de conjugación) o en una forma sin conjugar (es decir, un tiol reducido) . En una modalidad preferida, cuando el grupo tiol está ya sea en una forma no conjugada o una forma conjugada, es capaz de formar un enlace disulfuro con un grupo que contiene tiol. El residuo que contiene tiol se puede ubicar en cualquier posición a lo largo de la cadena peptidica, incluyendo el término amino, el término carboxi, o alguna otra posición. En una modalidad preferida, el residuo que contiene tiol o la subunidad se pueden ubicar en el término amino. En otras modalidades, el residuo tiol o la subunidad se pueden ubicar en el término carboxi o dentro de la secuencia peptidica.
Algunos ejemplos representativos de residuos que contienen tiol incluyen, sin limitación, cisteina, ácido mercaptopropiónico, homo-cisteina, y penicilamina . Cuando el residuo que contiene tiol contiene un centro quiral, puede estar presente en la configuración L- o D- . En una modalidad preferida, el residuo que contiene tiol es cisteina.
En algunas modalidades, la reticulación entre la subunidad que contiene tiol en la posición ?? en el compuesto y el grupo de conjugación que contiene tiol se pueden segmentar y/o intercambiar con otros grupos de conjugación que contienen tiol tales como cisteina (por ejemplo, mediante reducción del enlace disulfuro) in vivo para proporcionar una forma biológicamente activa del compuesto. De esta forma, el conjugado puede funcionar como una pro-fármaco del compuesto. Un grupo de conjugación también se puede utilizar para modificar las propiedades fisicoquímicas, farmacocinéticas y/o farmacodinámicas de los compuestos descritos (por ejemplo, la conjugación vía un enlace disulfuro a una porción PEGilado grande para mejorar la farmacocinética) .
En algunas modalidades, el compuesto es un péptido que consta de la secuencia de aminoácidos (Xaai) - ( aa2) _ (Xaa3) _ (Xaa4) - (Xaa5) - (Xaa6) - (Xaa7) (SEC ID NO: 155), en donde (Xaai) es un residuo de aminoácido que contiene tiol. (Xaa2) es un residuo de aminoácido no catiónico. (Xaa3) es cualquier residuo de aminoácido, (Xaa4) es cualquier residuo de aminoácido, (Xaas) es un residuo de aminoácido catiónico, (Xaa6) es un residuo no catiónico, y (Xaa7) es cualquier residuo de aminoácido. El péptido se puede modificar en el término N, el término C o ambos. En una modalidad preferida, el péptido se modifica tanto en el término N como en el término C mediante acetilación y amidación, respectivamente.
En algunas modalidades, un péptido comprende la secuencia de aminoácidos (D-Cys) - (Xaa2) - (Xaa3) - (Xaa4) - (Xaas) -(Xaa6) - ( aa7) ( SEC ID NO: 156), en donde (Xaa2) es un residuo de aminoácido no catiónico. (Xaa3) es cualquier residuo de aminoácido, (Xaa4) es cualquier residuo de aminoácido, (Xaas) se selecciona del grupo que consiste de D-Arg, L-Arg, D-Lys y L-Lys, (Xaa6) es un residuo no catiónico, y (Xaa7) es cualquier residuo de aminoácido. El péptido puede tener un remate N-terminal, un remate C-terminal o ambos. En una modalidad preferida, el péptido tiene tanto un remate N-terminal como un remate C-terminal.
En algunas modalidades, un péptido comprende la secuencia de aminoácidos (D-Cys) - (Xaa2) - (Xaa3) ~ (Xaa4> - (Xaas) - (Xaa6) - (Xaa7) (SEC ID NO: 157), en donde (Xaa2) , (Xaa3) y (Xaa4) son, independientemente, cualquier residuo de aminoácido, (aunque en una modalidad preferida, independientemente, se seleccionan del grupo que consiste de D-Ala, D-Val, D-Leu, D-NorVal, y D-NorLeu) , (Xaas) y (Xaa ) independientemente son cualquier residuo de aminoácido catiónico (aunque en una modalidad preferida, independientemente, se seleccionan del grupo que consiste de D-Arg, L-Arg, D-Lys, y L-Lys) , (Xaa6) es un residuo de aminoácido no catiónico (en una modalidad preferida, se selecciona del grupo que consiste de D-Ala, D-Val, D-Leu, D-NorVal y D-NorLeu) . El péptido puede tener un remate N-terminal, un remate C-terminal, o ambos. En una modalidad preferida, el péptido tiene tanto un remate N-terminal como un remate C-terminal.
En algunas modalidades, un péptido comprende la secuencia de aminoácidos ( D-Cys ) - (Xaa2) - ( aa3) - (Xaa ) - (Xaas) ~ (Xaa6) - (Xaa7) (SEC ID NO: 158), en donde (Xaa2) es un residuo de aminoácido no catiónico, (Xaa3) es cualquier residuo de aminoácido, ( aa4) es cualquier residuo de aminoácidos, (Xaas) se selecciona del grupo que consiste de D-Arg, L-Arg, D-Lys y L-Lys, (Xaa6) es un residuo no catiónico, y (Xaa7) es cualquier residuo de aminoácido. El péptido puede tener un remate N-terminal, y un remate C-terminal, o ambos. En una modalidad preferida, el péptido tiene tanto un remate N-terminal como un remate C-terminal.
En algunas modalidades, un péptido comprende la secuencia de aminoácidos (D-Cys) - (D-Ala) - (Xaa3) ~ (Xaa4) - (D-Arg) - (D-Ala) - (Xaa7) (SEC ID NO: 159), en donde (Xaa3) es cualquier residuo de aminoácido catiónico, (Xaa4) es cualquier residuo de aminoácido catiónico, y (Xaa7) es cualquier residuo de aminoácido catiónico. El péptido puede tener un remate N- terminal, un remate C-termina, o ambos. En una modalidad preferida, el péptido tiene tanto un remate N-terminal como un remate C-terminal.
En algunas modalidades, un péptido comprende la secuencia de aminoácidos (D-Cys) - (Xaa2) - ( aa3) - (D-Ala) - (D-Arg) - (D-Ala) - (Xaa7) (SEC ID NO: 160), en donde (Xaa2) , (Xaa3) y (Xaai) independientemente, son cualquier residuo de aminoácido catiónico. El péptido puede tener un remate N-terminal, un remate C-terminal, o ambos. En una modalidad preferida, el péptido tiene tanto un remate N-terminal como un remate C-terminal.
Otra modalidad es un péptido calcimimético, que comprende una secuencia de aminoácidos enlazada a los enlaces peptidicos, en donde la secuencia comprende de 5 a 10 residuos de aminoácido, y en donde la secuencia comprende un término amino, un término carboxi, al menos un residuo que contiene tiol y de 3 a 9 residuos cargados positivamente, en una modalidad, al menos un residuo que contiene tiol es un residuo de cisteina. En otro aspecto, el residuo de cisteina se coloca en el término amino del péptido, en cierta modalidad, el residuo de cisteina es un residuo L-Cys, un residuo D-Cys, o un residuo L- o D-homoCys, en otras modalidades, los residuos de aminoácido del péptido son D-aminoácidos o L-aminoácidos .
También se abarcan dentro del alcance de los compuestos reivindicados las moléculas peptidomiméticas que comprenden aproximadamente siete subunidades, en donde al menos una subunidad contiene un porción tiol, de preferencia una porción de tiol reactivo, y otras subunidades son una pluralidad de subunidades no catiónicas, y de 1 a 4 subunidades cargadas positivamente. Estas moléculas peptidomiméticas pueden comprender enlaces no peptidicos entre dos o más de las subunidades. Las diversas características de los compuestos analizados anteriormente se aplican en general a la molécula peptidomimética . Por ejemplo, como se analizó anteriormente, las subunidades utilizadas para construir las moléculas pueden ser aminoácidos que se presentan en la naturaleza, los residuos con cadenas laterales no naturales, los términos de los módulos pueden estar rematados o sin rematar de la forma analizada anteriormente. De manera similar, los residuos de aminoácidos de la molécula pueden ser los residuos de L- o D-aminoácidos. También como se analizó anteriormente, los residuos que contienen tiol pueden estar en una forma reducida u oxidada con cualquiera de las porciones que contienen tiol analizadas anteriormente.
Se han desarrollado muchas estructuras peptidomiméticas y los métodos para su síntesis (Babine, R. E . ; Bender, S. L. , Chem. Rev., 97:1359, 1997; Hanessian, S . ; et al., Tetrahedron, 53:12789, 1997; Fletcher, M. D. ; Cambell, M, C, Chem. Rev., 98:763, 1998); Peptidomimetics Protocols; Kazmierski W.M., Ed. ; Methods in Molecular Medicine Series. Vol . 23; Humana Press, Inc.; Totowa, NJ. (1999) Con ugados En algunas modalidades, el compuesto se retícula químicamente a un grupo de conjugación que contiene tiol vía un enlace disulfuro entre el tiol del compuesto y un tiol del grupo de conjugación. El grupo de conjugación que contiene tiol puede ser una molécula pequeña, tal como cisteína, o una macromolécula, tal como un polipéptido que contiene un residuo de cisteína. Los ejemplos de grupos de conjugación que contiene tiol adecuados incluyen cisteína, glutatión, tioalquilo, porciones tales como tiobencilo, ácido mercaptopropionico, cisteína N-acetilada, cisteamida, N-acetilcisteamida, homocisteína, penicilamina y tioles poli ( etilenglicol ) (PEG) modificados (denominados como "PEGilado") tales como cisteína PEGilada o una duplicación del compuesto (es decir, para formar un homodímero enlazado mediante un enlace disulfuro) . En una modalidad preferida, el grupo de conjugación que contiene tiol es cisteína. Otros homólogos de cisteína también se contemplan para utilizarse como grupos de conjugación que contienen tiol, ya sea solos o que consten de un grupo de conjugación mayor. Similarmente, los estereoisómeros de cisteína, homocisteína, y cisteamida son adecuados para utilizare como porciones que contienen tiol. Los grupos de conjugación se pueden utilizar para mejorar la estabilidad química y por lo tanto la vida en anaquel de un producto farmacéutico. En ciertas modalidades, el grupo de conjugación que contiene tiol y el péptido son iguales (es decir, el conjugado es un dímero) , que mostró inesperadamente muy buena estabilidad química en comparación con el grupo de conjugación heterologo tal como cisteína. Sin estar vinculados por la teoría, presumiblemente cuando el grupo de conjugación que contiene tiol y el péptido son iguales, entonces cualquier desproporcionación (por ejemplo, el mezclado del grupo de conjugación) reconstituirá el compuesto dimérico original. Por el contrario, la desproporcionación de un compuesto con un grupo de conjugación heterologo tal como cisteína puede conducir a la formación de homo-dímeros del péptido más cistina (cisteína -homodímero de cisteína) , más de el compuesto original residual. Un homodímero del péptido (es decir, el grupo de conjugación y el péptido son iguales) se podría convertir a una forma conjugada de cisteína del péptido in vivo debido a la alta concentración de la cisteína reducida en la circulación sistémica.
En algunas modalidades, las enseñanzas incluyen un conjugado disulfuro de un grupo de conjugación que contiene tiol y un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos (Xaal)- (Xaa2)-(Xaa3)-(Xaa4)-(Xaa5) - (Xaa6)-(Xaa7) (SEC ID NO: 155), en donde (Xaai) es un residuo de aminoácido con una porción que contiene tiol, (Xaa2) es un residuo de aminoácido no catiónico, (Xaa3) es cualquier residuo de aminoácido, (Xaa4) es cualquier residuo de aminoácido, (Xaa5) es un residuo de aminoácido catiónico, (Xaa6) es un residuo no catiónico, y (Xaa7) es cualquier residuo de aminoácido. El péptido puede tener un remate N-terminal, un remate C-terminal, o ambos. En una modalidad preferida, el péptido tiene tanto un remate N-terminal como un remate C-terminal. En una modalidad preferida, el grupo de conjugación que contiene tiol se selecciona del grupo que consiste de D-Cys, L-Cys, un péptido que contiene D-Cys, y un péptido que contiene L-Cys . Cuando el grupo de conjugación que contiene tiol es un aminoácido o un péptido, puede tener un remate N-terminal, un remate C-terminal, o ambos. En una modalidad preferida, el grupo de conjugación que contiene tiol tiene tanto un remate N-terminal como un remate C-terminal. En algunas modalidades, el grupo de conjugación que contiene tiol por si mismo es un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 155. En algunas modalidades, el grupo de conjugación que contiene tiol y el péptido son iguales (es decir, el conjugado es un dimero) .
En algunas modalidades, las enseñanzas incluyen un conjugado de un grupo de conjugación que contiene tiol y un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos (D-Cys) - (Xaa2)- (Xaa3) -(Xaa4)-(Xaa5)-(Xaa6)-(Xaa7) (SEC ID NO: 156), en donde (Xaa2) es un residuo de aminoácido no catiónico, (Xaa3) es cualquier residuo de aminoácido, ( aa4) es cualquier residuo de aminoácido, (Xaas) se selecciona del grupo que consiste de D-Arg, L-Arg, D-Lys y L-Lys, ( aa6) es un residuo no catiónico, y (Xaa7) es cualquier residuo de aminoácido. El péptido puede tener un remate N-terminal, un remate C-terminal, o ambos. En una modalidad preferida, el péptido tiene tanto un remate N-terminal como un remate C-terminal. En una modalidad preferida, el grupo de conjugación que contiene tiol se selecciona del grupo que consiste de D-Cys, L-Cys, un péptido que contiene D-Cys, y un péptido que contiene L-Cys. Cuando el grupo de conjugación que contiene tiol es un aminoácido o péptido, puede tener un remate N-terminal, un remate C-terminal, o ambos. En una modalidad preferida, el grupo de conjugación que contiene tiol tiene tanto un remate N-terminal como un remate C-terminal. En algunas modalidades, el grupo de conjugación que contiene tiol por si mismo es un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos of la SEC ID NO: 156. En algunas modalidades, el grupo de conjugación que contiene tiol y el péptido son iguales (es decir, el conjugado es un dimero) .
En algunas modalidades, las enseñanzas incluyen un conjugado de un grupo de conjugación que contiene tiol y un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos (L-Cys) - ( Xaa2 ) - ( Xaa3 ) - ( Xaa4 ) - ( Xaa5 ) - ( Xaa6 ) - ( Xaa7 ) (SEC ID NO: 183), en donde (Xaa2) es un residuo de aminoácido no catiónico, (Xaa3) es cualquier residuo de aminoácido, (XaS4) es cualquier residuo de aminoácido, (Xaas) se selecciona del grupo que consiste de D-Arg, L-Arg, D-Lys y L-Lys, ( aa6) es un residuo no catiónico, y (Xaa7) es cualquier residuo de aminoácido. El péptido puede tener un remate N-terminal, un remate C-terminal, o ambos. En una modalidad preferida, el péptido tiene tanto un remate N-terminal como un remate C-terminal. En una modalidad preferida, el grupo de conjugación que contiene tiol se selecciona del grupo que consiste de D-Cys, L-Cys, un péptido que contiene D-Cys, y un péptido que contiene L-Cys. Cuando el grupo de conjugación que contiene tiol es un aminoácido o un péptido, puede tener un remate N-terminal, un remate C-terminal, o ambos, en una modalidad preferida, el grupo de conjugación que contiene tiol tiene tanto un remate N-terminal como un remate C-terminal. En alqunas modalidades, el grupo de conjugación que contiene tiol por si mismo es un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 183. En algunas modalidades, el grupo de conjugación que contiene tiol y el péptido son iguales (es decir, el conjugado es un dímero) .
En algunas modalidades, las enseñanzas incluyen un conjugado de un grupo de conjugación que contiene tiol y un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos (D-Cys)-(D-Ala)-(Xaa3) - (Xaa4)-(D-Arg)-(D-Ala)-(Xaa7) (SEC ID NO: 161), en donde (Xaa3) es cualquier residuo de aminoácido, (Xaa ) es cualquier residuo de aminoácido, y (Xaa7) es cualquier residuo de aminoácido. El péptido puede tener un remate N-terminal, un remate C-terminal, o ambos. En una modalidad preferida, el péptido tiene tanto un remate N-terminal como un remate C-terminal . En una modalidad preferida, el grupo de conjugación que contiene tiol se selecciona del grupo que consiste de D-Cys, L-Cys, un péptido que contiene D-Cys, y un péptido que contiene L-Cys. Cuando el grupo de conjugación que contiene tiol es un aminoácido o un péptido, puede tener un remate N-terminal, un remate C-terminal, o ambos. En una modalidad preferida, the grupo de conjugación que contiene tiol tiene tanto un remate N-terminal como un remate C-terminal. En algunas modalidades, el grupo de conjugación que contiene tiol por si mismo es un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 161. En algunas modalidades, el grupo de conjugación que contiene tiol y el péptido son iguales (es decir, el conjugado es un dimero) .
Métodos de uso En un aspecto, se contemplan los métodos para prevenir, tratar o mejorar el hiperparatiroidismo, la enfermedad ósea y/u otros trastornos hipercalcémicos mediante la administración de los compuestos descritos en la presente. Como se ilustró anteriormente, los compuestos tienen actividad para disminuir los niveles de la PTH y/o calcio en un tejido o tejidos blanco, o en un sujeto, en ciertas modalidades, los compuestos descritos son capaces de disminuir los niveles de la PTH y/o calcio cuando se administra una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto a un sujeto que necesita de este tratamiento. El método de uso ahora se describirá haciendo referencia a los Ejemplos 3 y 8-11.
Con referencia nuevamente al Ejemplo 3, y como se analizó anteriormente con respecto a la Tabla 1, la serie de compuestos donde un residuo catiónico (arginina) se reemplazó secuencialmente con un residuo no catiónico (alanina) se administraron a ratas. La figura 5 muestra el perfil de tiempo de cada capacidad del compuesto para reducir la PTH en sangre y la duración de acción de los compuestos variables. En la figura 5, los compuestos Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6, diamantes), Ac-carrrrr-NH2 (SEC ID NO: 8, cuadros) y Ac-crrarrr-NH2 (SEC ID NO: 10, símbolos x) y Ac-crrrrar-NH2 (SEC ID NO: 12, círculos) son potentes in vivo, como resulta evidente por la disminución en la PTH porcentual del valor inicial pre-dosis a esencialmente cero y proporcionó una duración de potencia, en donde la concentración en sangre de la PTH permaneció disminuida durante al menos cuatro horas. Los compuestos Ac-crarrrr-NH2 (SEC ID NO: 9, triángulos), Ac-crrrarr-NH2 (SEC ID NO: 11, símbolos *) y Ac-crrrrra-NH2 (SEC ID NO: 13, símbolos +) disminuyeron la PTH porcentual del valor inicial durante aproximadamente 2-3 horas, y después de esto la concentración en sangre de la PTH comenzó a aumentar. La sustitución del residuo catiónico (arginina) en las posiciones subunitarias 5 ó 7 de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) impactó la duración de la actividad para disminución de la PTH.
El perfil de reducción de la PTH para una serie de compuestos que contienen dobles sustituciones de aminoácidos también se evaluó. Los compuestos seleccionados mostrados en la Tabla 2, anterior, se administraron a ratas normales mediante bolo IV a una dosis de 0.5 mg/kg y se evaluó la reducción en la PTH con relación al nivel en sangre de la PTH de la pre-dosis. Los datos se muestran en las figuras 6A, 6B, donde los compuestos se identifican como sigue: Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO:26, diamantes abiertos), Ac-crrarar-NH2 (SEC ID NO:25, cuadros abiertos), Ac-caarrrr-NH2 (SEC ID NO:22, triángulos), Ac-crraarr-NH2 (SEC ID NO: 17, círculos), Ac-c (C) arrrar-NH2 ( SEC ID NO: 3, diamantes figura 6B) , Ac-c (C) rrarar-NH2 ( SEC ID NO: 28, símbolos x, figura 6B) .
Se realizó otro estudio para evaluar adicionalmente la potencia del compuesto Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3). El compuesto se administró intravenosamente a ratas normales, como se detalla en el Ejemplo 2, a dosis de 1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 0.3 mg/kg, y 0.1 mg/kg. Los niveles de la PTH en plasma se evaluaron antes de la dosificación y durante 4 horas después de esto. La figura 7 muestra los resultados, donde la concentración en sangre de la PTH se muestra como porcentaje del valor de pre-dosis de valor inicial. Se observó una reducción de la PTH relacionada con la dosis después de una sola administración en bolo IV con la mayor dosis de 1 mg/kg (diamantes) que tuvo la mayor reducción en la PTH, seguida por 0.5 mg/kg (cuadros), 0.3 mg/kg (triángulos), y 0.1 mg/kg (símbolos x) . El control con solución salina se muestra por los símbolos de círculos. Como se observa, el péptido cuando se administró a una dosis terapéuticamente efectiva alcanza una reducción en la PTH de más del 50% con relación a la concentración de la PTH antes de la dosificación ("valor inicial") . Específicamente, el péptido cuando se administró a dosis mayores de 0.1 mg/kg redujo la concentración de la PTH a menos del 90% de la concentración de la PTH a valor inicial 1 hora después de la administración IV. Estas dosis del péptido identificado como la SEC ID NO: 3 también alcanzó un área bajo la curva (AUC) de menos del 50%. El AUC calculada como la suma de los valores de concentración de la PTH en los puntos de tiempo 1, 2, 3 y 4 horas, normalizado por el AUC para el control con solución salina en los mismos puntos de tiempo, multiplicado por 100.
También se probó el mismo compuesto en sujetos (ratas) con insuficiencia renal. En este estudio, el modelo 1K1C de insuficiencia renal aguda se utilizó para evaluar el compuesto Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) para caracterizar su actividad para disminuir la PTH en un entorno de disfunción renal. El modelo se describe en el Ejemplo 1A. El compuesto se administró intravenosamente como un bolo a animales comprometidos renalmente (ratas) a dosis de 3 mg/kg (n = 2), 1 mg/kg (n = 5), 0.5 mg/kg (n = 6) y 0.3 mg/kg (n = 5) . Un grupo control de animales se dosificó con solución salina. Los niveles de la PTH en plasma se evaluaron antes de la dosificación y varias horas después de esto. La figura 8 muestra los resultados, donde los animales tratados con solución salina (cuadros) tuvieron una concentración aumentada de la PTH con relación al nivel de la PTH de partida. A diversas dosificaciones de la SEC ID NO: 3, se observó un efecto dependiente de la dosis sobre la duración y grado de reducción de la PTH. Los animales tratados con la menor dosis de 0.3 mg/kg (símbolos x) que exhibieron una PTH reducida en el primer punto de tiempo y un aumento en la PTH entre las horas 1-24 después de la dosificación. Los niveles de dosis de 3 mg/kg (diamantes), 1 mg/kg (triángulos) y 0.5 mg/kg (cuadros) proporcionaron una concentración reducida en sangre de la PTH durante más de 15 horas, y para la dosis mayor, durante más de 24 horas.
En otro estudio para evaluar el efecto de las subunidades catiónicas de sustitución con subunidades no cargadas, como se ejemplifica mediante los residuos de aminoácidos de alanina, en el contexto de un sujeto con insuficiencia renal, se generó y se probó un análogo de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) por su capacidad para disminuir la PTH en animales modelo 1K1C después de una administración intravenosa individual de 1 mg/kg. En el análogo probado Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO:26), las subunidades catiónicas en las posiciones X2 y ?e de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) se sustituyeron con aminoácidos no cargados.
Como se muestra en la figura 9, Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO: 26, cuadros abiertos) muestra una actividad que es equivalente a Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6, diamantes abiertos) en la dosis probada (1 mg/kg) con una duración de acción extendida similar durante 24 horas. El análogo de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) con las sustituciones subunitarias no cargadas se encontró que conserva actividad y puede, de hecho, tener una potencia in vivo y duración de acción superior a la del compuesto identificado como la SEC ID NO: 6. En el compuesto, Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO: 26), los residuos D-Arg en las posiciones X2 y X6 se sustituyeron con residuos D-ala con relación al compuesto identificado como la SEC ID NO: 6.
De manera significativa, como se analizó anteriormente, la administración del compuesto Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO: 26) no se acompañó con la liberación de histamina, un efecto secundario no deseado que se observa con Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) y otros compuestos similares cuando se administra a dosis mayores (> 1 mg/kg) mediante bolo IV. La atenuación marcada de la liberación de histamina con el compuesto identificado como la SEC ID NO: 26 aumenta el margen terapéutico entre la actividad para deseada para disminución de la PTH y la actividad no deseada para inducir histamina después de la administración mediante bolo IV. Por consiguiente, en una modalidad preferida, se proporcionan compuestos que tienen actividad para reducir la concentración de la PTH in vivo en ausencia de una respuesta histaminica. Por consiguiente, en una modalidad, se proporciona un compuesto que tiene actividad para disminuir la PTH donde el compuesto, cuando se administra a un sujeto, humano o de otra manera, disminuye el nivel de la PTH a menos del 50% del nivel de pre-dosis en un término de una hora después de la dosificación. En una modalidad especifica, un compuesto que tiene una actividad significativa para disminuir la PTH significa un compuesto que cuando se administra a una rata normal disminuye el nivel de la PTH a menos del 50% del nivel de pre-dosis en un término de una hora después de la dosificación mediante bolo IV.
En otro estudio, detallado en el Ejemplo 8, se proporcionan compuestos en la forma de un conjugado, donde la subunidad que contiene tiol en la posición Xi se enlaza a través de un enlace disulfuro a un residuo de L-Cys . Estos compuestos tienen las siguientes estructuras: C kC-C i S &c-carrrar-NH2 Ac-cacrrar-Mlia ÍS-EC ID MQ: 3) y 10 NO: 141) En la notación utilizada en la presente, el compuesto que se enlaza a la porción que contiene tiol en la subunidad Xi se identifica entre paréntesis, donde en estos conjugados ilustrativos el compuesto L-Cys se indica (C) se enlaza a porción que contiene tiol en la subunidad Xi: Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) y Ac-c (Ac-C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 141) . Estos compuestos se administraron vía bolo IV a animales con insuficiencia renal aguda (modelo 1K1C) a dosis de 0.3 y 0.5 mg/kg, y los resultados se muestran en la figura 10. El compuesto Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) se representa mediante cuadros (0.3 mg/kg, n = 5) y símbolos * (0.5 mg/kg, n = 6) y el compuesto Ac-c (Ac-C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 141) mediante triángulos (0.3 mg/kg, n = 8) y diamantes (0.5 mg/kg, n = 7) . Esta respuesta a la dosis in vivo con la SEC ID NO: 3 exhibe una reducción dependiente de dosis en la PTH muy similar a Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) .
En algunos de los estudios in vivo descritos en la presente, los compuestos, incluyendo los compuestos en la forma conjugada donde el tiol en la subunidad Xi se retícula vía un enlace disulfuro a otra subunidad, se administraron como una infusión IV de 30 minutos. Sin embargo, se debe observar que infusiones más cortas (por ejemplo, <5 minutos) o el suministro mediante bolo IV típicamente producen una reducción farmacodinámica comparable de la PTH como una infusión de 30 minutos más larga. También se probó que la administración en bolo subcutáneo será una vía de suministro eficaz que genera una caída inicial más pequeña en la PTH, pero exhibe una reducción sostenida en la PTH similar al perfil observado por la vía IV. Como se muestra en la figura 11, el compuesto Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6), también se administró mediante suministro transdérmico facilitado por microporo (por ejemplo, microporación del stratum corneum) , y demuestra una reducción de la PTH en plasma durante varias horas como se supervisó. El compuesto Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6), también se administró mediante la vía transdérmica después de la microporación dando por resultando en una reducción de la PTH en plasma durante varias horas. El suministro transdérmico de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) proporciona una opción de adición para el suministro clínico de los compuestos descritos.
Para evaluar el efecto de la via de administración sobre la actividad de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) en el contexto de un sujeto con insuficiencia renal, se les administró a ratas en el modelo 1K1C 1 mg/kg del péptido ya sea como una bolo subcutáneo (SC) , o una infusión IV de 30 minutos. Ambas vías de administración redujeron efectivamente los niveles de la PTH en plasma durante más de 24 horas. Cuando se suministró crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) mediante infusión IV, los niveles de la PTH cayeron rápidamente en un 80-90% del valor inicial. A las 16 horas después de la dosificación, los niveles de la PTH habían comenzado a aumentar aunque todavía se redujeron en un -80% del valor inicial. Cuando Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 5) se suministró mediante bolo IV, los niveles de la PTH exhibieron una caída inicial más moderada a -40% del valor inicial, aunque exhibieron una duración similar de reducción como cuando se suministró el péptido mediante la vía IV. Veinticuatro horas después de la dosificación, los niveles de la PTH en animales dosificados por cualquier via habla rebotado parcialmente, aunque ambos exhibieron niveles reducidos de la PTH que fueron ~40-60% a partir del valor inicial. Los resultados mostraron que esta via de administración proporciona un perfil similar con respecto a la eficacia y duración de la reducción de la PTH como la administración IV, proporcionando asi una trayectoria alternativa para la dosificación clínica (datos no mostrados) .
Por consiguiente, en una modalidad preferida, un sujeto que tiene hiperparatiroidismo secundario (SHPT) se trata utilizando los compuestos descritos para reducir los niveles de la PTH en plasma y/o calcio. Los pacientes con SHPT sin tratar con hiperparatiroidismo moderadamente severo con frecuencia tuvieron niveles de la PTH intactos en circulación de valor inicial > 300 pg/ml y niveles que pueden exceder los 600 pg/ml. En una modalidad preferida, la disminución en los niveles de la PTH se midieron como una disminución en la PTH intacta por debajo de los niveles de valor inicial de pre-tratamiento . En otra modalidad, la disminución deseada en la PTH es para llevar los niveles de la PTH en plasma en general a los lineamientos reconocidos establecidos por la National Kidney Foundation u otros expertos en el tratamiento de trastornos renales e insuficiencia renal.
En otro aspecto, se proporcionan métodos para tratar el hiperparatiroidismo, la hipercalcemia y/o enfermedad ósea, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto descrito, en otra modalidad, el sujeto se puede tratar con un compuesto descrito en combinación con uno o más de otros agentes terapéuticamente efectivos.
En otro aspecto, el compuesto descrito se administra en una cantidad efectiva para reducir la PTH o el efecto de la PTH. En algunas modalidades, la reducción de la PTH en plasma es de al menos el 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25% o 30% por debajo de los niveles de valor inicial de pre-tratamiento durante al menos 10 horas después de la administración del compuesto descrito. En modalidades especificas, la reducción de la PTH en plasma es de al menos el 20% en a las 10 horas después de la administración. En modalidades preferidas, la reducción de la PTH en plasma es del 15 hasta el 40%, de preferencia del 20 hasta el 50%, de mayor preferencia del 30 hasta el 70% por debajo de los niveles de valor inicial de pre-tratamiento durante al menos 48 horas después de la administración del compuesto descrito.
En otro aspecto, el compuesto descrito se administra en una cantidad efectiva para disminuir el calcio sérico o el efecto del calcio, en algunas modalidades, la reducción en el calcio sérico es de al menos 1%, 2%, 3%, 4%, 5 , 6% , 7% , 8 % , 9% , 10%, 11%, 12 , 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20% o 25% por debajo de los niveles de pre-tratamiento durante al menos 10 horas después de la administración del péptido policatiónico . En algunas modalidades preferidas, la reducción en el calcio sérico es de al menos el 5% a las 10 horas después de la administración. En algunas modalidades preferidas, la reducción en el calcio sérico es de 5 hasta 10%, de preferencia 5 hasta 20% por debajo de los niveles de pre-tratamiento durante al menos 48 horas después de la administración del compuesto descrito.
En otro aspecto, se proporciona un método para tratar el hiperparatiroidismo y/o la hipercalcemia en un sujeto que necesita del mismo, que comprende: administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto descrito, en donde se reduce la PTH y/o el calcio.
Con base en la relación entre el calcio sérico, el metabolismo óseo y la PTH, se cree que los compuestos descritos son benéficos para el tratamiento de diversas formas de enfermedad ósea y/o hipercalcemia además del hiperparatiroidismo . Los compuestos descritos pueden tener ventajas en comparación con los agentes terapéuticos actuales, debido a que se pueden administrar parenteralmente y pueden no estar asociados con efectos adversos gastrointestinales, no se metabolizan por el citocromo P450 y pueden dar por resultado en reducciones más efectivas en la PTH y calcio en plasma.
Como se analizó anteriormente, los métodos descritos se pueden utilizar solos o en combinación con uno o más de otros agentes terapéuticamente efectivos. Estos otros agentes terapéuticamente efectivos incluyen, de manera enunciativa, el tratamiento con agentes de bifosfonato antirresorbantes , tales como, alendronato y risedronato; bloqueadores de integrina, tales como antagonistas a?ß3, estrógenos conjugados utilizados en la terapia de reemplazo hormonal, tales como PREMPR0MR, PREMARINMR y END0METRI0NMR, moduladores del receptor selectivo de estrógenos (SERM) , tales como raloxifeno, droloxifeno, CP-336,156 (Pfizer) y lasofoxifeno; inhibidores de catepsina K, terapia con vitamina D, análogos de vitamina D, tales como ZemplarMR (paricaicitol) ; CALCIJEX® ( calcitriol ) , HECTOROL® (doxercalciferol) , ONE-ALPHA® (alfacalcidol ) y los análogos en el desarrollo de Cytochroma conocidos como CTA-018, CTAP201 y CTAP101; otros calcimiméticos tales como Sensipar® ( cinacalcet ) , inhibidores de la familia de transportadores de fosfato sodio-dependientes tipo II, SLC34 (incluyendo las dos isoformas renales NaPi-IIa y NaPi-IIc, y el transportador de NaPi-IIb intestinal); fosfatoninas (incluyendo FGF-23, sFRP4, MEPE o FGF-7), tratamiento con la PTH a dosis baja (con o sin estrógeno) , calcitonina, inhibidores del ligando RANK, anticuerpos contra el ligando RANK, osteoprotegrina ; antagonistas de adensosina e inhibidores de bomba protónica de ATP.
En una modalidad, se administra un compuesto descrito a una dosis suficiente para disminuir los niveles tanto de la PTH con del calcio en suero. En otra modalidad, un compuesto descrito se administra a una dosis suficiente para disminuir la PTH sin afectar significativamente los niveles de calcio en suero. En una modalidad alternativa, se administra un compuesto descrito a una dosis suficiente para aumentar la PTH sin afectar significativamente los niveles de calcio en suero.
Formulaciones Se proporciona una composición farmacéutica gue comprende un compuesto descrito y al menos un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable. Los métodos para preparar estas composiciones farmacéuticas típicamente comprenden el paso de asociar un compuesto descrito con un portador y, opcionalmente, uno o más ingredientes secundarios. Los compuestos descritos y/o las composiciones farmacéuticas que comprenden los mismos se pueden formular en forma de dosificación farmacéuticamente aceptables mediante métodos convencionales conocidos por aquellos expertos en la técnica. Típicamente, las formulaciones se preparan al asociar uniforme e íntimamente un compuesto descrito con los portadores líquidos o los portadores sólidos divididos finamente, o ambos, y luego, si es necesario, configurar el producto .
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención adecuadas para administración parenteral comprenden uno o más compuestos descritos en combinación con uno o más soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas, isotónicas, estériles, farmacéuticamente aceptables, o polvos estériles que se pueden reconstituir en soluciones o dispersiones inyectables estériles justo antes de utilizarse, que pueden contener azúcares, alcoholes, aminoácidos, antioxidantes, tampones, bacteriostáticos, solubles que convierten la formulación isotónica con la sangre del recipiente destinado o los agentes de suspensión o espesantes .
Los ejemplos de portadores acuosos y no acuosos adecuados que se pueden emplear en las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen agua, etanol, polioles (tales como, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol , y lo semejante), y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, tal como, aceite de oliva, y ásteres orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo. Se puede mantener la fluidez adecuada, por ejemplo, mediante el uso de materiales de recubrimiento, tales como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño requerido de partícula en el caso de las dispersiones, y mediante el uso de tensioactivos .
Estas composiciones farmacéuticas también pueden contener adyuvantes tales como conservadores, agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes de dispersión. La prevención de la acción de los microorganismos con los compuestos descritos se puede asegurar mediante la inclusión de diversos agentes antibacterianos y anti-hongos, por ejemplo, parabeno, clorobutanol , ácido fenol-sórbico, y lo semejante. También puede ser conveniente incluir agentes para controlar la tonicidad, tales como azúcares, cloruro de sodio, y lo semejante, en las composiciones, además, la absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable se puede obtener mediante la inclusión de agentes que retarden la absorción tales como monoestearato de aluminio y gelatina.
En algunos casos, para prolongar el efecto de un fármaco, es conveniente disminuir la absorción del fármaco a partir de la inyección subcutánea o intramuscular. Esto se puede llevar a cabo mediante el uso de una suspensión liquida de material cristalino o amorfo que tenga deficiente solubilidad en agua. La velocidad de absorción del fármaco entonces depende de su velocidad de disolución la cual, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y la forma cristalina. Alternativamente, la absorción retardada de una forma de fármaco administrado parenteralmente se lleva a cabo al disolver o suspender el fármaco en un vehículo oleoso.
Por ejemplo, un compuesto descrito se puede suministrar a un ser humano en una forma de solución que se produce al reconstituir una forma sólida del fármaco con líquido. Esta solución se puede diluir adicionalmente con un fluido de infusión tal como agua para inyección, 0.9% de inyección de cloruro de sodio, 5% de inyección de dextrosa e inyección de Ringer tratada con lactato. Se prefiere que las soluciones reconstituidas y diluidas se utilicen en un término de 4-6 horas para el suministro de una potencia máxima. Alternativamente, un compuesto descrito se puede suministrar a un ser humano en una forma de tableta o cápsula .
Las formas de depósito inyectables se preparan al formar matrices microencapsuladas de los compuestos descritos en polímeros biodegradables tales como poliláctido-poliglicólido . Dependiendo de la proporción del fármaco a polímero, y la naturaleza del polímero particular empleado, se puede controlar la velocidad de liberación del fármaco. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli ( ortoésteres ) y poli (anhídridos ) . Las formulaciones inyectables de depósitos también se preparan al atrapar el fármaco en liposomas o microemulsiones que sean compatibles con el tejido corporal.
Cuando los compuestos descritos se administran como productos farmacéuticos, a seres humanos y animales, los mismos se pueden administrar solos o como una composición farmacéutica que contenga, por ejemplo, 0.1 hasta 99% (de mayor preferencia 10 hasta 30%) del ingrediente activo en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. En otras modalidades, la composición farmacéutica puede contener 0.2-25%, de preferencia 0.5-5% o 0.5-2%, del ingrediente activo. Estos compuestos se pueden administrar a seres humanos y otros animales para terapia mediante cualquier vía de administración adecuada, incluyendo, por ejemplo, inyección subcutánea, inyección intravenosa para depósito subcutáneo, infusión intravenosa o subcutánea. Estos compuestos se pueden administrar rápidamente (en un término de <1 minuto) como un bolo o más lentamente durante un periodo de tiempo prolongado (más de varios minutos, horas o días) . Estos compuestos se pueden suministrar diariamente o a través de múltiples dias, continua o intermitentemente. En una modalidad, los compuestos se pueden administrar transdérmicamente (por ejemplo, utilizando un parche, microagujas, microporos, ungüentos, microchorro o nanochorro) .
Sin importar la vía de administración seleccionada, los compuestos descritos, se pueden utilizar en una forma hidratada adecuada, y/o las composiciones farmacéuticas, se formulan en formas de dosificación farmacéuticamente aceptables mediante métodos convencionales conocidos por aquellos expertos en la técnica.
Los niveles reales de dosificación de los ingredientes activos en las composiciones farmacéuticas se pueden variar para obtener una cantidad del ingrediente activo que sea efectiva para alcanzar la respuesta terapéutica deseada para un paciente particular, composición, y modo de administración, sin que sea tóxico para el paciente .
El nivel de dosificación seleccionado dependerá de una variedad de factores entre los que se incluyen la actividad del compuesto descrito particular empleado, o el éster, sal o amida del mismo, la vía de administración, el tiempo de administración, la velocidad de excreción o metabolismo del compuesto particular que se empleará, la velocidad y grado de absorción, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales utilizados en combinación con el compuesto particular empleado, la edad, sexo, peso, condición, salud general e historial médico anterior del paciente que será tratado y factores similares bien conocidos en las técnicas médicas.
Un médico o veterinario que tenga experiencia normal en la técnica puede determinar fácilmente y prescribir la cantidad efectiva de la composición farmacéutica requerida. Por ejemplo, el médico o el veterinario podrían iniciar con dosis de los compuestos descritos empleados en la composición farmacéutica a niveles menores de los requeridos para alcanzar el efecto terapéutico deseado y aumentar gradualmente la dosificación hasta que se alcance el efecto deseado .
En general, una dosis diaria adecuada de un compuesto descrito será aquella cantidad del compuesto que sea la menor dosis efectiva para producir un efecto terapéutico. Esta dosis efectiva en general dependerá de los factores descritos anteriormente. En general, las dosis intracerebro , ventriculares y subcutáneas, transdérmicas , intramusculares, intravenosas de los compuestos descritos para un paciente, cuando se utilicen para los efectos indicados, · variará entre aproximadamente 1 pg a aproximadamente 5 mg por kilogramo de peso corporal por hora. En otras modalidades, la dosis variará entre aproximadamente 5 pg a aproximadamente 2.5 mg por kilogramo de peso corporal por hora, en modalidades adicionales, la dosis variará entre aproximadamente 5 g a aproximadamente 1 mg por kilogramo de peso corporal por hora.
Si se desea, la dosis diaria efectiva de un compuesto descrito se puede administrar como dos, tres, cuatro, cinco, seis o más sub-dosis administradas por separado a intervalos adecuados a todo lo largo del día, opcionalmente, en formas unitarias de dosificación. En una modalidad, el compuesto descrito se administra como una sola dosis al día. En modalidades adicionales, el compuesto se administra continuamente, tal como a través de la vía intravenosa u otras. En otras modalidades, el compuesto se administra con menos frecuencia de la diaria, tal como cada 2-3 días, junto con tratamiento de diálisis, semanalmente o con menor frecuencia.
El sujeto que recibe este tratamiento es cualquier animal que lo necesite, incluyendo primates, en particular seres humanos y otros mamíferos tales como equinos, cabras, cerdos y ovejas; y aves de corral y mascotas en general.
Los compuestos descritos se pueden administrar como tales o en combinaciones con portadores farmacéuticamente aceptables y también se pueden administrar junto con agentes antimicrobianos tales como penicilinas, cefalosporinas, aminoglucósidos y glicopéptidos . La terapia conjuntiva, de esta forma incluye la administración secuencial, simultánea y por separado del compuesto activo de tal forma que los efectos terapéuticos de la primera administrada no desaparezcan por completo cuando se administre la posterior.
Vias de administración para los compuestos descritos Estos compuestos se pueden administrar a seres humanos y otros animales para terapia mediante cualquier vía de administración adecuada. En el sentido en el que se utiliza en la presente, el término "vía" de administración pretende incluir, de manera enunciativa, inyección subcutánea, depósito subcutáneo, inyección intravenosa, infusión intravenosa o subcutánea, inyección infraocular, inyección intradérmica, inyección intramuscular, inyección intraperitoneal, administración intratraqueal , administración intraadiposal, administración intra-articular, administración intratecal, administración epidural, inhalación, administración intranasal, administración sublingual, administración bucal, administración rectal, administración vaginal, administración intracisternal y administración tópica, administración transdérmica, o administración vía suministro local (por ejemplo, mediante catéter o endoprótesis ) .
El suministro transdérmico de fármaco al cuerpo es un método deseable y conveniente para el suministro sistémico de las sustancias biológicamente activas a un sujeto, y, en particular para el suministro de sustancias que tengan deficiente biodisponibilidad oral, tales como proteínas y péptidos. La vía de suministro transdérmico ha sido particularmente exitosa con pequeños compuestos lipofílicos (por ejemplo, de menos de aproximadamente 1,000 daltons) tales como, escopolamina y nicotina, que pueden penetrar la capa externa del stratum corneum de la piel, que sirve como una barrera efectiva para el ingreso de sustancias en el cuerpo. Debajo del stratum corneum se encuentra la epidermis viable, que no contiene vasos sanguíneos, pero tiene algunos nervios. Todavía más profundo se encuentra la dermis, que contiene vasos sanguíneos, vasos linfáticos y nervios. Los fármacos que cruzan la barrera del stratum corneum, se pueden difundir en general a los capilares en la dermis para absorción y distribución sistémica.
Los avances tecnológicos en el suministro transdérmico se han enfocado en enfrentar la necesidad en la técnica para suministrar compuestos de alto peso molecular, hidrofilicos, tales como, proteínas y péptidos, a través de la piel. Un procedimiento implica la descomposición del stratum corneum utilizando métodos químicos o físicos para reducir la barrera planteada por el stratum corneum. La tecnología de microporación cutánea, que implica la creación de trayectorias de transporte de dimensión micrónica (microporos) en la piel (en particular, los microporos en el stratum corneum) , utilizando una técnica mínimamente invasiva, es un procedimiento más reciente. Las técnicas para crear microporos en la piel (stratum corneum) incluyen microporación térmica o ablación, disposiciones de microaguja, fonofóresis, ablación por láser y ablación por radiofrecuencia (Prausnitz and Langer (2008) Nat. Biotechnology 11:1261-68; Arora et al., Int. J. Pharmaceutics, 364 :227 (2008); Nanda et al., Current Drug Delivery, 3:233 (2006); Meidan et al. American J. Therapeutics, 11:312 (2004)).
Como se observó anteriormente, la secreción de la PTH se regula mediante el CaSR que se expresa sobre la superficie celular de las células paratiroideas . De esta forma con el fin de activar el CaSRl, el agente o compuesto se deben suministrar a las células paratiroidea . El suministro transdérmico de agentes calcimiméticos debe conseguir el suministro a través del stratum corneum y proporcionar una exposición sistémica hasta alcanzar a la célula paratiroidea. A la fecha, la técnica no ha demostrado si un compuesto calcimimético se puede suministrar o no transdérmicamente en una cantidad suficiente para beneficio terapéutico y, en particular en una cantidad suficiente para disminuir la PTH y/o el tratamiento, atenuación, disminución y/o alivio de la hipercalcemia.
Además de los calcimiméticos, los análogos de 1,25- (0H)2 vitamina D3 son los tratamientos utilizados más comúnmente para pacientes con hiperparatiroidismo asociada con enfermedad renal crónica y enfermedad renal en etapa terminal. Los análogos de vitamina D actúan al facilitar la absorción intestinal del calcio dietético, y reducir los niveles de la PTH, al inhibir la síntesis y secreción de la PTH. Mientras que se ha utilizado terapéuticamente el suministro intravenoso y oral de vitamina D a la fecha, la técnica no ha demostrado si los análogos de vitamina D, tales como ZemplarMR (paricalcitol ) , CalciJEX® (calcitriol) , ONE-ALPHA® ( alfacalcidol ) y Hectorol® (doxercalciferol ) se pueden suministrar o no transdérmicamente en una cantidad suficiente para beneficio terapéutico y, en particular en una cantidad suficiente para disminuir la hormona paratiroidea (PTH). Además, la técnica no ha demostrado si la co-administración mediante suministro transdérmico de un agente calcimimético en combinación con un análogo de vitamina D (ya sea como formulaciones por separado o como una co-formulación) en cantidades suficientes para beneficio terapéutico, y en particular en cantidades suficientes para disminuir la PTH y proporcionar un tratamiento efectivo para pacientes que padecen de hiperparatiroidismo .
Los agentes calcimiméticos se pueden administrar a través del stratum corneum, y/u otras capas de la epidermis, para suministro local o sistémico, para disminuir la hormona paratiroidea (PTH) y/o tratar la hipercalcemia . En una modalidad, el agente calcimimético se suministra vía microporación . Se contempla cualquiera de un número de técnicas para microporación, y varias se describen brevemente .
La microporación se puede alcanzar por medios mecánicos y/o fuerzas de impulsión externa, para romper el stratum corneum para suministrar los agentes calcimiméticos descritos en la presente a través de la superficie de la piel y en las capas cutáneas subyacentes y/o la corriente sanguínea .
En una primera modalidad, la técnica microporación es la ablación del stratum corneum en una región especifica de la piel utilizando una luz láser de pulsos de longitud de onda, longitud de pulsos, energía de pulsos, número de pulsos, y velocidad de repetición de pulsos para separar el stratum corneum sin dañar significativamente la epidermis subyacente. El agente calcimimético luego se aplica a la región de ablación. Otra técnica de microporacion por ablación láser, denominada como ondas de estrés inducido por láser (LISW) , implica ondas unipolares y de comprensión, de banda ancha, generadas por láseres con pulsos de alta potencia. Las LISW interactúan con los tejidos para descomponer los lípidos en el stratum corneum, creando canales intercelulares transitoriamente dentro del stratum corneum. Estos canales, o microporos, en el stratum corneum permiten el ingreso del agente calcimimético.
La sonoforesis o fonoforesis es otra técnica de microporacion que utiliza energía de ultrasonido. El ultrasonido es una onda sónica que posee frecuencias superiores a 20 KHz. El ultrasonido se puede aplicar ya sea continuamente o por pulsos, y se aplica a diversas variaciones de frecuencia e intensidad (Nanda et al., Current Drug Delivery, 3:233 (2006)).
Otra técnica de microporacion implica el uso de una disposición de microaguja. La disposición de las microagujas cuando se aplican a la región cutánea en una perforación del sujeto del stratum corneum y no penetran a una profundidad que estimule significativamente los nervios ni perfore los capilares, de esta forma, el paciente no experimenta ninguna incomodidad o una incomodidad mínima o dolor con la aplicación de la disposición de microagujas para la generación de microporos a través de los cuales se suministra el agente calcimimético .
Se contemplan las disposiciones de microagujas que constan de microagujas huecas o sólidas, donde el agente se puede recubrir sobre la superficie externa de las agujas o suministrar desde el interior de las agujas huecas. Los ejemplos de disposiciones de microaguja se describen, por ejemplo, en Nanda et al., Current Drug Delivery, 3:233 (2006) and Meidan et al. American J. Therapeutics, 1_1:312 (2004). Las disposiciones de microagujas de primera generación constaban de microagujas de silicio, sólidas, que se recubrían externamente con un agente terapéutico. Cuando el microarreglo de agujas se presionaba contra la piel y se retiraba después de aproximadamente 10 segundos, la permeación del agente sobre las agujas en el cuerpo se alcanzaba fácilmente. Las disposiciones de microagujas de segunda generación constaban de microagujas de silicio sólido o hueco, policarbonato, titanio u otro polímero adecuado y se recubrían o rellenaban con una solución del compuesto terapéutico. Las generaciones más recientes de disposiciones de microagujas se preparan a partir de polímeros biodegradables, donde las puntas de las agujas se recubren con un agente terapéutico que permanece en el stratu corneum y se disuelven lentamente.
Las microagujas se pueden construir a partir de una variedad de materiales, incluyendo metales, cerámicas, semiconductores, orgánicos, polímeros, y compuestos. Los materiales de construcción ilustrativos incluyen acero inoxidable de grado farmacéutico, oro, titanio, níquel, hierro, estaño, cromo, cobre, paladio, platino, aleaciones de estos u otros metales, silicio, dióxido de silicio, y polímeros. Los polímeros biodegradables representativos incluyen, polímeros de hidroxiácidos tales como, ácido láctico y poliláctido de acido glicólico, poliglicólido, poliláctido-co-glicólido , y copolímeros con poli (etilenglicol ) , polianhídridos , poli (orto) ésteres, poliuretanos , poli (ácido butírico), poli (ácido valérico) , y poli ( lactido-co-caprolactona) . Los polímeros no biodegradables representativos incluyen policarbonato, poliéster, y poliacrilamidas .
Las microagujas pueden tener puntas rectas o afiladas. En una modalidad el diámetro de la microaguja es mayor en el extremo basal de la microaguja y se afila a una punta en el extremo distal de la base. La microaguja también se puede fabricar para que tenga una punta que incluya tanto una porción recta (no afilada) como una porción afilada. Las agujas pueden no tener tampoco en extremo afilado en absoluto, es decir pueden ser simplemente cilindros con puntas romas o planas. Una microaguja hueca que tenga un diámetro prácticamente uniforme, pero que no se afile hacia una punta, se denomina en la presente como un "microtubo". En el sentido en el que se utiliza en la presente, el término "microaguja" incluye tanto microtubos como agujas afiladas a menos que se indique de otra manera.
La electroporación es otra técnica para crear microporos en la piel. Este procedimiento utiliza la aplicación de pulsos eléctricos largos de alto voltaje de microsegundos o milisegundos para crear poros transitorios, permeables dentro del stratum corneum.
Otras técnicas de microporación incluyen el uso de ondas de radio para crear microcanales en la piel. La ablación térmica todavía es otro procedimiento para alcanzar el suministro de compuestos de peso molecular mayor transdérmicamente Los solicitantes han descubierto que bajas dosis de agentes calcimiméticos se pueden administrar terapéuticamente durante un período prolongado de tiempo para tratar la SHPT. Esto difiere marcadamente de los requerimientos actuales de dosis de otros calcimiméticos (por ejemplo, clorhidrato de cinacalcet) .
El suministro transdérmico de los compuestos descrita en la presente se demostró en los estudios descritos en los Ejemplos 9-10. En un primer estudio, el compuesto Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) se administró transdérmicamente a ratas en las cuales se realizaron microporos a una pequeña zona de la piel mediante 5 pasadas de un rodillo dérmico de 1.0 mm bajo presión moderada. Una solución de ya sea Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) o solución salina se colocó sobre-el área de la piel con microporo. Se extrajo sangre durante un periodo de 4 horas y se analizó el plasma para los niveles de la PTH mediante ELISA. Los resultados se muestran en la figura 11, donde se muestra la PTH en plasma como un porcentaje del valor inicial pre-dosis para el animal tratado con solución salina (diamantes) y los dos animales tratados con el compuesto de prueba (cuadros, triángulos) . Estos datos indican que el compuesto Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) se puede suministrar sistémicamente en cantidades suficientes vía transdérmica (en este caso, suministro transdérmico facilitado por microporos) utilizando un rodillo ' dérmico para reducir efectiva y significativamente los niveles de la PTH del valor inicial durante las ~4 horas que fueron los estudios. Se debe observar que Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) ha mostrado que reduce efectivamente los niveles de la PTH del valor inicial en el modelo de rata 1K1C de insuficiencia renal aguda cuando se administra mediante infusión corta IV asi como en ratas normales (datos no mostrados) .
En otro estudio, descrito en el Ejemplo 10, el compuesto Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) se administró transdérmicamente facilitado por micro-poros a ratas normales utilizando un parche transdérmico . Un sistema de parches transdérmicos que contienen 10% de la solución (en peso) de Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) en solución salina se colocó sobre el área con microporos y se dejó en el lugar durante ~30 horas. Se realizaron extracciones de sangre de las ratas periódicamente durante las 30 horas y se analizaron las muestras de plasma para los niveles de PTH mediante ELISA. Los resultados se muestran en la figura 12. Sorprendentemente, estos datos demuestran que el suministro transdérmico facilitado por microporos puede alcanzar un suministro sostenido suficiente de Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) para producir una reducción significativa y extendida en la PTH durante >30 horas en ratas con función renal normal. Estos datos demuestran que la microporación facilitó el suministro transdérmico del conjugado Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) utilizando un parche que alcanza suficiente exposición en la sangre del péptido durante el curso de tratamiento para producir una reducción significativa y sostenida en la PTH a partir del valor inicial durante >30 horas. Estos datos demuestran que el suministro por parche transdérmico sobre una base diaria o mayor podría permitir el tratamiento de pacientes tanto con diálisis como sin hemodiálisis que necesitan del tratamiento. Por ejemplo, la CKD (etapa 4), el hiperparatiroidismo primario y el hiperparatiroidismo secundario (SHPT) en pacientes con trasplante renales que no se trataron típicamente con fármacos IV, pero que se podrían tratar fácilmente mediante un parche transdérmico diariamente vía microporación facilitó el suministro transdérmico.
Se condujo otro estudio para evaluar adicionalmente la vía de administración de los compuestos. Como se describe en el Ejemplo 11, el compuesto Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) se administró mediante infusión IV a dosis muy baja a ratas normales y a ratas con insuficiencia renal para identificar la menor dosis necesaria que se administrará mediante infusión, sistema de parches transdérmicos u otros medios de suministro sostenido para alcanzar una reducción significativa de la PTH. Ratas sanas se les administró por infusión intravenosamente durante seis horas con dosis muy bajas (1 pg/kg/hr, 3 pg/kg/hr, y 10 pg/kg/hr) de Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3). Se extrajeron muestras sanguíneas antes de la dosificación (pre) y a las 2 horas, 4 horas, 6 horas (justo antes de terminar la infusión; EOI) y 8 horas (2 horas después de la EOI) después del inicio de la infusión y se analizó el plasma para los niveles de la PTH mediante ELISA. Sorprendentemente, los datos mostrados en la figura 13 demuestran que la infusión de dosis muy bajas de Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) (1 pg/kg/hr (cuadros), 3 pg/kg/hr (círculos), y 10 pg/kg/hr (triángulos)) durante 6 horas son efectivas para producir una reducción significativa en la PTH a partir del valor inicial a través del curso de la infusión. Estos datos indican que dosis bajas suministradas continuamente podrían ser tan efectivas como (o incluso más efectivas que) el suministro de dosis mucho mayores como un bolo individual.
El efecto de disminución de la PTH se evaluó adicionalmente en el modelo de rata 1K1C de insuficiencia renal aguda. Las ratas del modelo 1K1C se les administró por infusión intravenosa con dosis bajas de Ac-c (C ) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) (30 pg/kg/hr y 100 pg/kg/hr) durante 6 horas. Se extrajeron muestras sanguíneas antes de la dosificación (Pre), y a las 2 horas, 4 horas, 6 horas (justo antes del término de la infusión; EOI), 8 horas (2 horas antes de la EOI) y 24 horas después del inicio de la infusión y se analizó el plasma para los niveles de la PTH mediante ELISA. Los datos mostrados en el figura 14A demuestran que la infusión IV de dosis bajas de Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) reducen significativamente la PTH de los niveles del valor inicial en el modelo 1K1C, un modelo de insuficiencia renal donde los niveles de la PTH de valor inicial se puede observar que serán de 400 hasta >1100pg/mL. Sorprendentemente, 6 horas de una infusión IV de dosis baja (diamantes, 30 µg/kg/hr y cuadros, 100 pg/kg/hr) de Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) fueron capaces de reducir la PTH del valor inicial durante -24 horas. Consistente con esta reducción dramática de la PTH en el modelo de rata 1K1C, la figura 14B muestra una gráfica de barras que traza los datos de calcio sérico en esta insuficiencia renal aguda, y muestra una reducción correspondiente en el calcio sérico después de una infusión IV de dosis baja de Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3). Estos datos demuestran que Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) es un compuesto caicimimético muy potente que es capaz de reducir la PTH y el calcio después de la infusión o suministro de dosis bajas (por ejemplo, mediante suministro transdérmico) durante el curso de ~24 horas. Estos datos apoyan adicionalmente la conclusión de que el suministro sostenido de dosis bajas de un agente caicimimético mediante infusión IV o mediante suministro transdérmico suministrado por microporos podría ser un tratamiento efectivo para pacientes sobre una base diaria o menos frecuente.
Terapia de combinación Como se describió anteriormente, se pueden utilizar métodos de uso solos o en combinación con otros procedimientos para el tratamiento de la hipercalcemia y/o la enfermedad ósea. Estos otros procedimientos incluyen de manera enunciativa, tratamiento con agentes tales como agentes de bisfosfonato, bloqueadores de integrina, terapia de reemplazo hormonal, moduladores del receptor selectivo de estrógenos, inhibidores de la catepsina K, terapia con vitamina D, análogo de vitamina D, tales como ZEMPLARMR (paricalcitol) , CALCIJEX® (calcitriol) , ONE-ALPHA® (alfacalcidol) y HECTOROL® (doxercalciferol) , agentes antiinflamatorios, terapia de la PTH a dosis baja (con o sin estrógenos) , calcimiméticos , aglutinantes de fosfato, calcitoninas , inhibidores del ligando RANK, anticuerpos contra el ligando RANK, osteoprotegrina, antagonistas de adensosina e inhibidores de bomba protónica con ATP.
En una modalidad, una terapia de combinación utiliza vitamina D o un análogo de vitamina D en combinación con un agente calcimimético . La vitamina D ayuda en la absorción del calcio y funciona para mantener los niveles sanguíneos normales de calcio y fosforoso. La PTH funciona para mejorar la absorción de calcio en el intestino al aumentar la producción de 1,25- (OH) 2 vitamina D, la forma activa de la vitamina D. La PTH también estimula la excreción de fósforo del riñon, y aumenta la liberación del hueso.
Como se analizó anteriormente, el hiperparatiroidismo secundario se caracteriza por una elevación en la hormona paratiroidea (PTH) asociada con niveles inadecuados de la hormona con vitamina D activa. La vitamina D o un análogo de vitamina D se puede utilizar para reducir los niveles elevados de la PTH en el tratamiento de hiperparatiroidismo secundario. En una modalidad, la invención incluye una composición farmacéutica que comprende un agente calcimimético y un análogo de vitamina D.
En una modalidad, la invención incluye una composición farmacéutica que comprende un agente calcimimético y ZE PLARMR (el paricalcitol ) . Paricalcitol es un análogo sintético de calcitriol, la forma metabólicamente activa de la vitamina D. La dosis inicial recomendada de Zemplar se basa en los niveles de valor inicial de la hormona paratiroidea intacta (iPTH) . Si el nivel de valor inicial de la iPTH es menor o igual a 500 pg/mL, la dosis diaria es 1 ]iq y la dosis "tres veces a la semana" (que se administrará a no más que cada tercer día) es 2 pg. Si la iPTH a valor inicial es mayor de 500 pg/mL, la dosis diaria es 2 ]iq, y la dosis "tres veces a la semana" (que se administrará a no más que cada tercer día) es 4 pg. Después de esto, la dosificación se debe individualizar y basar en los niveles de la iPTH en plasma sérico, con la supervisión del de calcio sérico y el fósforo sérico. Paricalcitol se describe en la patente de los Estados Unidos No. 5,246,925 y la patente US No. 5,587,497.
En otra modalidad, la invención incluye una composición farmacéutica que comprende un agente calcimimético y CALCIJEX® ( calcitriol ) . El calcitriol es la forma metabólicamente activa de la vitamina D. La dosificación inicial recomendada para CALCIJEX® (oral) es 0.25 pg/día. Esta cantidad se puede aumentar en 0.25 pg/día a intervalos de 4 hasta 8 semanas. Los niveles normales o solo reducidos ligeramente de calcio pueden responder a dosificaciones de 0.25 pg cada tercer día. Para pacientes con diálisis, la dosis inicial recomendada para CALCIJEX® (IV) es 0.02 pg/kg (1 hasta 2 pg) 3 veces/semana, cada tercer día. Esta cantidad se puede aumentar en 0.5 hasta 1 pg, cada 2 hasta 4 semanas. Calcitriol se describe en la patente de los Estados Unidos No. 6,051,567 y la patente US No. 6,265,392 y la patente US No. 6,274,169.
En una modalidad, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un agente calcimimético y HECTOROL® (doxercalciferol) . Doxercarciferol es un análogo sintético de la vitamina D que experimenta activación metabólica in vivo para formar la, 25-dihidroxivitamina D2, una forma biológicamente activa de la vitamina D, que se presenta en la naturaleza. La dosis inicial recomendada de HECTOROL® es 10 administrado tres veces a la semana en diálisis (aproximadamente cada tercer día}. La dosis inicial se debe ajustar, según se requiera, para disminuir la iPTH en sangre en la variación de 150 hasta 300 pg/mL. La dosis se puede aumentar a intervalos de 8 semanas en 2.5 µq si la iPTH no disminuye en un 50% y fracasa en alcanzar la variación blanco. La dosis máxima recomendada de HECTOROL es 20 µg administrado tres veces a la semana en diálisis durante un total de 60 µg a la semana. Doxercalciferol se describe en la patente de los Estados Unidos No. 5,602,116 y la patente US No. 5, 861, 386 y la patente US No. 5,869, 473 y la patente US No. 6,903,083.
La combinación particular de terapias (terapéuticos o procedimientos) para emplear en un régimen de combinación deberá tomar en cuenta la compatibilidad de los terapéuticos deseado y/o los procedimientos y el efecto terapéutico deseado que se alcanzará. También se debe apreciar que las terapias empleadas pueden alcanzar un efecto deseado para el mismo trastorno (por ejemplo, un compuesto inventivo se puede administrar concurrentemente con otro agente utilizado para tratar el mismo trastorno) , o se pueden alcanzar diferentes efectos (por ejemplo, el control de cualesquiera efectos adversos) . En el sentido en el que se utiliza en la presente, los agentes terapéuticos adicionales, que se administran normalmente para tratar o prevenir una enfermedad particular, o condición, se conocen como "adecuados para la enfermedad, o condición, que se tratará".
Un tratamiento de combinación de la presente invención como se define en la presente se puede alcanzar por medio de la administración simultánea, secuencial o por separado de los componentes individuales del tratamiento.
Los compuestos o las composiciones farmacéuticamente aceptables de los mismos también se pueden incorporar en composiciones para descubrir dispositivos médicos implantables , polímeros bio-erosionables, bombas implantables, y supositorios. Por consiguiente, en otro aspecto, se contempla una composición para recubrir un dispositivo implantable que comprende un compuesto descrito como se describió en general anteriormente, y un portador adecuado para recubrir el dispositivo implantable. Todavía en otro aspecto, se incluye un dispositivo implantable recubierto con una composición que comprende un compuesto según se describió en general anteriormente, y un portador adecuado para recubrir el dispositivo implantable.
Los recubrimientos adecuados y la preparación general de los dispositivos implantables recubiertos se describen en las patentes US Nos. 6,099,562; 5,886,026; y 5,304,121. Los recubrimientos son materiales poliméricos típicamente biocompatibles tales como polímero de hidrogel, polimetildisiloxano, policaprolactona, polietilenglicol, ácido poliláctico, acetato etilenvinílico, y mezclas de los mismos. Los recubrimientos opcionalmente se pueden recubrir adicionalmente mediante un revestimiento adecuado de fluorosilicona, polisacárido, polietilenglicol, fosfolípidos o combinaciones de los mismos para impartir características de liberación controlada en la composición.
Marcadores clínicos potenciales para determinar la eficacia del tratamiento La determinación de la efectividad de un método de tratamiento descrito se puede determinar mediante una variedad de métodos.
Los niveles normales de calcio sérico están en la variación de 8.8 mg/dL hasta 10.4 mg/dL (2.2 mmol/L hasta 2.6 mmol/L) . En ciertos casos, la eficacia del tratamiento se puede determinar mediante la medición de los marcadores séricos y urinarios relacionados con el calcio, incluyendo de manera enunciativa, calcio sérico total y ionizado, albúmina, PTH en plasma, PTHrP, fosfato, vitamina D y magnesio.
En otros casos, la eficacia se puede determinar mediante la medición de la densidad mineral ósea (B D) , o mediante la medición de marcadores bioquímicos para la formación de hueso y/o resorción ósea en suero u orina. Los marcadores potenciales de formación ósea incluyen, de manera enunciativa, fosfatasa alcalina total, fosfatasa alcalina ósea, osteocalcina, osteocalcina sub-carboxilada, propéptidos de procolágeno tipo I C-terminal, y propéptido de procolágeno tipo I N-terminal. Los marcadores potenciales de resorción ósea incluyen, de manera enunciativa, hidroxiprolina , hidroxilisina, hidroxilisina de glicosil-galactosilo, hidroxilisina de galactosilo, piridinolina, desoxipiridinolina, telopéptido reticulante N-terminal del colágeno tipo I, telopéptido reticulante C-terminal del colágeno tipo I, telopéptido reticulante C-terminal del colágeno tipo I, generado mediante los MP, sialoproteina ósea, fosfatasa ácida y fosfatasa ácida resistente a tartrato .
En otros casos, la eficacia se puede determinar mediante la reducción porcentual en la PTH con relación a un nivel de pre-dosificación (valor inicial) y/o al alcanzar nivel deseable de la PTH como se acepta en general que sea benéfico para los pacientes por ejemplo, los lineamientos establecidos por la National Kidney Foundation) . Todavía en otros casos, la eficacia se puede determinar mediante la medición de la reducción en la hiperplasia de la glándula paratiroides asociada con una enfermedad de hiperparatiroidismo .
Se espera que cuando se administre un método de tratamiento descrito a un sujeto que necesite del mismo, el método de tratamiento producirá un efecto, según se mide mediante, por ejemplo, uno o más de: calcio sérico total, calcio sérico ionizado, calcio total en sangre, calcio ionizado en sangre, albúmina, PTH en plasma, PTH en sangre, PTHrP, fosfato, vitamina D, magnesio, densidad mineral ósea (BMD) , fosfatasa alcalina total, fosfatasa alcalina ósea, osteocalcina, osteocalcina sub-carboxilada, propéptido de procolágeno tipo I C-terminal, propéptido de procolágeno tipo I N-terminal, hidroxiprolina, hidroxilisina , hidroxilisina glicosil-galactosilo, hidroxilisina galactosilo, piridinolina, desoxipiridinolina, telopéptido reticulante N-terminal de colágeno tipo I, telopéptido reticulante C-terminal de colágeno tipo I, mediante las MMP, sialoproteína ósea, fosfatasa ácida y fosfatasa ácida resistente a tartrato. Los efectos incluyen el tratamiento profiláctico así como el tratamiento de una enfermedad existente.
Una molécula biológicamente efectiva se puede enlazar funcionalmente a un péptido descrito con un enlace covalente o una interacción no covalente. En modalidades específicas, las moléculas biológicamente efectivas enlazadas funcionalmente pueden alterar la farmacocinética de los compuestos descritos en virtud de conferir propiedades al compuesto como parte de una molécula enlazada. Algunas de las propiedades que las moléculas biológicamente efectivas pueden conferir a los compuestos descritos incluyen, de manera enunciativa, suministro de un compuesto a una ubicación discreta dentro del cuerpo; concentración de la actividad de un compuesto en una ubicación deseada en el cuerpo y reducir sus efectos en otro sitio; reducir los efectos secundarios del tratamiento con un compuesto; cambiar la permeabilidad de un compuesto; cambiar la biodisponibilidad o la velocidad de suministro al cuerpo de un compuesto; cambiar la duración del efecto del tratamiento con un compuesto; alterar la estabilidad química in vitro del compuesto; alterar la estabilidad in vivo del compuesto, vida media, aclaramiento, absorción, distribución y/o excreción; alterar la velocidad de la aparición y la disminución de los efectos de un compuesto; proporcionar una acción permisiva al permitir que un compuesto tenga un efecto.
En un aspecto adicional, el compuesto descrito se puede conjugar para polietilenglicol (PEG). El PEG seleccionado puede ser de cualquier peso molecular conveniente, y puede ser lineal o ramificado, y se puede conjugar opcionalmente a través de un enlazante. El peso molecular promedio del PEG de preferencia variará entre aproximadamente 2 kiloDalton (kDa) a aproximadamente 100 kDa, de mayor preferencia entre aproximadamente 5 kDa hasta aproximadamente 40 kDa. Alternativamente, la porción PEG utilizada puede ser 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ó 20 kDa.
Los compuestos descritos se pueden conjugar a PEG a través de un residuo de aminoácido adecuado ubicado en cualquier posición sobre los compuestos. Los compuestos descritos opcionalmente pueden contener un residuo de aminoácido adicional al cual se conjuga el PEG, incluyendo por ejemplo, un residuo adicional que contiene amina, tal como lisina.
Se sabe en la técnica que los péptidos PEGilados aumentan la vida media en suero del péptido conjugado. Se conocen en la técnica una variedad de métodos para la formación de los péptidos PEGilados. Por ejemplo, la porción PEG se puede enlazar al término amino, el término carboxi o a través de una cadena lateral del péptido revindicado, opcionalmente a través de la presencia de un grupo enlazante. En otras modalidades, la porción PEG se puede enlazar al azufre de un aminoácido que contiene tiol, tal como cisteina, o se puede acoplar a la cadena lateral de un aminoácido que contiene amina, tal como lisina.
Los grupos PEG en general se unirán al compuesto descrito mediante acilación o alquilación a través de un grupo reactivo en la porción PEG (por ejemplo, un aldehido, amina, oxima, hidrazina tiol, éster, o un grupo de ácido carboxilico) , a un grupo reactivo en el compuesto descrito (por ejemplo, un aldehido, amina, oxima, hidrazina, éster, ácido o grupo tiol) que se pueden ubicar en el término amino, el término carboxi, o una posición de cadena lateral del compuesto descrito. Un procedimiento para la preparación de la PEGilación de péptidos sintéticos consiste en combinar a través de un enlace conjugado en solución, un péptido y una porción PEG, cada una que portan un grupo funcional que es reactivo mutuamente hacia el otro. Los péptidos se pueden preparar fácilmente utilizando una solución convencional o técnicas de síntesis en fase sólida. La conjugación del péptido y el PEG típicamente se realiza en fase acuosa y se puede supervisar mediante HPLC en fase inversa. Los péptidos PEGilados se pueden purificar y caracterizar fácilmente, utilizando técnicas estándar conocidas por un experto en la técnica .
Una o más subunidades individuales de los compuestos descritos también se pueden modificar con diversos agentes derivatizantes conocidos para reaccionar con cadenas laterales especificas o residuos terminales. Por ejemplo, los residuos de lisinilo y los residuos de amino terminales se pueden hacer reaccionar con anhídrido succínico u otros anhídridos de ácido carboxílico similares que invierten el cambio del lisinilo o residuo amino. Otros reactivos adecuados incluyen, por ejemplo, imidoésteres tales como, picolinimidato de metilo; piridoxal; fosfato de piridoxal; cloroborohidruro; ácido trinitrobencensulfónico; 0-metilisourea ; 2 , 4 , -pentandiona y reacción catalizada con transaminasa con glioxalato. Los residuos de arginilo se pueden modificar mediante una reacción con agentes convencionales tales como fenilglioxal, 2, 3-butandiona, 1,2-ciclohexandiona, y ninhidrina.
Además, los compuestos descritos se pueden modificar para que incluyan residuos no catiónicos que proporcionen residuos inmunogénicos útiles para el desarrollo de anticuerpos para mediciones ELISA bioanalíticas, así como para evaluar la inmunogenicidad. Por ejemplo, los compuestos descritos se pueden modificar mediante la incorporación de tirosina y/o residuos de glicina. Las modificaciones especificas de residuos de tirosilo son de particular interés para introducir marcas espectrales en los residuos de tirosilo. Los ejemplos no limitantes incluyen la reacción con compuestos de diazonio aromático o tetranitrometano . De manera más común, se utilizan N-acetilimidazol y tetranitrometano para formar O-acetiltirosilo y derivados 3-nitro, respectivamente.
Kits que comprenden los compuestos descritos La invención también proporciona los kits para llevar a cabo los regímenes terapéuticos de la invención. Estos kits comprenden cantidades efectivas de los compuestos descritos que tienen actividad como un modulador de CaSR, en forma farmacéuticamente aceptable, solos o en combinación con otros agentes, en forma farmacéuticamente aceptable. Las formas farmacéuticas preferidas incluyen los compuestos descritos en combinación con solución salina estéril, solución de dextrosa, solución amortiguada, agua estéril, u otro fluido estéril farmacéuticamente aceptable. Alternativamente, la composición puede incluir un agente ant i microbiano o bacteriostático . Alternativamente, la composición se puede liofilizar o desecar. En este caso, el kit puede comprender además una solución farmacéuticamente aceptable, de preferencia estéril, para formar una solución para fines de inyección. En otra modalidad, el kit puede comprender además una aguja o jeringa, de preferencia empacada en forma estéril, para inyectar la composición. En otras modalidades, el kit puede comprender además un medio de instrucciones para administrar la composición a un sujeto. El medio de instrucciones puede ser un inserto escrito, una cinta de audio, una cinta audiovisual, o cualquier otro medio para dar instrucciones sobre la administración de la composición a un sujeto.
En una modalidad, el kit comprende (i) un primer recipiente que contiene un compuesto descrito que tiene actividad como un modulador del CaSR; y (ii) los medios de instrucción para utilizarse. En otra modalidad, el kit comprende (i) un primer recipiente que contiene un compuesto como se describe en la presente, y (ii) un segundo recipiente que contiene un vehículo farmacéuticamente aceptable para dilución o reconstitución.
En otra modalidad, el equipo comprende (i) un primer recipiente que contiene un compuesto descrito que tiene actividad como un modulador del CaSR; (ii) un segundo recipiente que contiene un agente anticalcémico; y (iii) los medios de instrucción para utilizarse.
En una modalidad, el agente anticalcémico es un agente seleccionado del grupo que consiste de agentes de bisfosfonato, agentes terapéuticos para reemplazo hormonal, terapia con vitamina D, análogos de vitamina D, tales como ZEMPLARMR (paricalcitol) ; CALCIJEX® ( calcitriol ) , ONE-ALPHA® (alfacalcidol) y HECTOROL® (doxercalciferol ) , PTH a dosis baja (con o sin estrógeno) , y calcitonina.
En aspectos relacionados, la invención proporciona los artículos de fabricación que comprenden el contenido de los kits descritos anteriormente. Por ejemplo, la invención proporciona un artículo de fabricación que comprende una cantidad efectiva de un péptido descrito, solo o en combinación con otros agentes, y los medios de instrucciones que indican el uso para el tratamiento de las enfermedades descritas en la presente.
EJEMPLOS Los siguientes ejemplos se ofrecen para ilustrar pero no limitan los compuestos y métodos descritos en la presente. Se pueden realizar diversas modificaciones por el experto sin apartarse del verdadero espíritu y alcance de la materia descrita en la presente.
Ejemplo 1 Compuestos catiónicos con actividad para disminuir la PTH Modelo de insuficiencia renal Un modelo de rata de insuficiencia renal aguda (también denominado como el modelo 1K1C) se desarrolló para simular la patología del SHPT asociado con una enfermedad renal en etapa terminal. El modelo tiene características patológicas del hiperparatiroidismo asociado con una falta de función renal, en especial la elevación significativa de la PTH en plasma y la reducción en el calcio sérico. El desarrollo de este modelo permitió la caracterización adicional de los compuestos descritos en el contexto de un sujeto con disfunción renal y la PTH elevada. Los niveles de la PTH de valor inicial típicos en este modelo promediaron -450 pg/mL.
El modelo 1K1C de insuficiencia renal aguda implicó la eliminación de un riñon seguido por la exposición del riñon restante a 45 minutos de isquemia y 48 horas de reperfusión. El consiguiente daño por isquemia/reperfusión (I/R) al riñon restante dio por resultado en necrosis significativa y deficiencia renal. Los niveles de creatinina en suero se elevaron durante más de 24-48 horas después del ataque por I/R (datos no mostrados) . También debido a la disociación renal resultante, los niveles totales de la PTH se aumentaron dramáticamente a partir de los niveles de lesión por pre-I/R -100 pg/mL. A las 48 horas después I/R, los niveles de la PTH en plasma se elevaron a ~450 pg/mL (aumento de ~5 veces) y en algunos casos fueron tan altos como ~1200 pg/mL. Este aumento reproducible en la creatinina y la PTH en suero proporcionaron un modelo robusto que imitó la fisiología observada en pacientes con ESRD.
El clorhidrato de cinacalcet (SENSIPAR®) , un agente calcimimético aprobado que se utiliza para disminuir la PTH para el tratamiento del SHPT, se probó en el modelo 1K1C de insuficiencia renal aguda. La administración oral de cinacalcet a 30 mg/kg disminuyó significativamente la PTH en aproximadamente el 50% por hasta 6 horas. Este resultado es consistente con los datos preclínicos publicados para cinacalcet (Nemeth et al., J. Pharmacol. Exp. Then, 308 (2) : 627-35 (2004)) y valida que el modelo 1K1C de insuficiencia renal aguda es un modelo adecuado para evaluar la actividad de los calcimiméticos para esta indicación.
El protocolo utilizado en este estudio es como sigue. Ratas macho Sprague Dawley se adquirieron de Charles River Laboratories (Hollister, CA; peso de adquisición solicitado 250-275 g) . Para estudios con artículos de prueba, los animales se pre-canularon en las venas femoral y yugular para la administración del fármaco y extracciones de sangre, respectivamente. Los animales se mantuvieron en un entorno con temperatura controlada con un ciclo constante de 12 horas de luz/12 de horas oscuridad y con acceso libre a alimento y agua en todo momento. Todos los procedimientos experimentales con animales se realizaron de acuerdo con los lineamientos IACUC.
Se indujo anestesia general y se mantuvo mediante inyección intraperitoneal (IP) de pentobarbital sódico (5.2%, 0.4 mL/rata). Para los animales que recibieron 45 minutos de isquemia renal, se administró una inyección IP adicional de pentobarbital sódico (5.2%, 0.1 mL/rata) para mantener el plano anestésico. El muestreo sanguíneo para las mediciones de la PTH después de la administración de los compuestos en ratas normales se realizó bajo anestesia continua de isoflurano .
Para el procedimiento total se utilizó una técnica limpia, aséptica. Después de que se anestesiaron las ratas, se rasuró el abdomen con maquinilla eléctrica antes de la operación y la piel se limpió con solución de alcohol al 70%.
Para los estudios para desarrollo del modelo, la vena femoral izquierda se canuló con un tubo PE-10 para la extracción de sangre. Ambos ríñones se expusieron vía una laparotomía. Se realizó una nefrectomía derecha después de que se ligaron el pedículo renal derecho y la uretra con suturas dobles de seda 2-0. Después de la confirmación de la falta de hemorragia en el pedículo derecho, se disecó cuidadosamente la arteria renal izquierda y se sujetó con un microclip bascular para inducir isquemia global renal izquierda. La isquemia renal se confirmó mediante la observación de un cambio de color global blanco-gris (blanqueo) . La incisión abdominal se cubrió temporalmente con gasa para ayudar a mantener la temperatura de los órganos abdominales. Después de 45 minutos, el período designado de la isquemia, el clip se retiró y el flujo de la arteria renal izquierda se consideró restaurado con la observación de una restauración global de color rojo. La incisión abdominal se cerró en capas con suturas de seda 2-0. El animal luego se recuperó de la anestesia. Los parámetros fisiológicos incluyendo la temperatura corporal (36-37.5°C) y el peso corporal se midieron a todo lo largo del procedimiento. La temperatura corporal se supervisó y se mantuvo utilizando un sistema de retroalimentación con sonda rectal y almohadillas con calor.
Aproximadamente 48 horas después de la cirugía 1K1C (lesión por I/R) , los animales se dosificaron con diversos compuestos para medir los efectos de la PTH y el calcio en plasma. En la mayoría de los casos, los artículos de prueba se administraron mediante infusión IV (tiempo de infusión 5, 10 ó 30 minutos) aunque en algunos estudios los compuestos se administraron mediante bolo IV o inyección de bolo subcutáneo (SC) . Para la administración del fármaco y las extracciones de sangre, los animales se anestesiaron con isoflurano.
Se recolectaron periódicamente muestras sanguíneas a todo lo largo del curso del estudio. Las muestras séricas se analizaron para los niveles de calcio y las muestras del plasma se analizaron para la PTH. Debido a la variación de los valores de la PTH de valor inicial para ratas individuales, todos los datos se normalizaron a los niveles de pre-dosificación (valor inicial) . La creatinina sérica se midió utilizando un kit disponible comercialmente de BioAssay Systems (Hayward, Ca) , catálogo #DICT-500. Los análisis se realizaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
B. Compuestos de prueba en modelo de insuficiencia renal Se prepararon compuestos con las siguientes secuencias para prueba en el modelo de insuficiencia renal: Ac-crrrr-NH2 (SEC ID NO: 4), n=4, Ac-crrrrr-NH2 (SEC ID NO: 5), n=4, Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID ??:ß), ?=? , Ac-crrrrrrr-NH2 (SEC ID NO:7), r¡=4, y control con solución salina, n=2. Los péptidos se administraron a los animales a una dosis de 3 mg/kg mediante una infusión IV de 30 minutos. Antes de la dosificación, se extrajo una muestra de sangre para determinar el valor inicial, la concentración en plasma de la PTH pre-dosificación . Los resultados se muestran en la figura 1 como sigue: Ac-crrrr-NH2 (SEC ID NO:4, diamantes), Ac-crrrrr-NH2 (SEC ID NO: 5, cuadros), Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6, triángulos), y Ac-crrrrrrr-NH2 (SEC ID NO : 7 , cuadros abiertos) .
Ejemplo 2 Ensayo celular in vitro en HEK-293 que expresa el receptor detector de calcio humano Se sembraron células 293T de riñon embrionario humano (HEK) en un matraz T25 a 2 millones de células por matraz y se dejaron incubar a 37°C en CO2 al 5% durante la noche. Al dia posterior, estas células se transíectaron con el receptor de CaSR humano utilizando un reactivo de transfección con lipofectamina 2000, 24 horas después de la transfección, las células se sembraron en placas de 384 pozos a 8,000 células/pozos. Los ensayos se llevaron a cabo 48 horas después del transfección. En algunos casos, se determinaron los valores EC50 al medir la producción de monofosfato de inositol en las células HEK293, transfectadas establemente con el receptor detector de calcio humano (véase la Tabla 1) .
El medio de cultivo celular se aspiró de los pozos y se reemplazó con 28 µ?, de tampón de estimulación IX (Hepes 10 mM, CaCl2 1 mM, MgCl2 0.5 mM, KC1 4.2 mM, NaCl 146 mM, glucosa 5.5 mM, LiCl 50 mM pH 7.4) . Las células se incubaron con los compuestos a diversas concentraciones (1 mM o 300 µ? como la mayor y además diluciones en serie ½ log) a 37 °C durante 1.5 horas antes de terminar la reacción. La producción de IPi se determinó en las células utilizando el kit Cisbio IP-One (621 PAPEC) y de acuerdo con las instrucciones del fabricante, en resumen, la incubación con el compuesto se terminó al agregar secuencialmente IPi marcado con D2 y anti-IPi marcado con criptato en tampón de lisis y al incubar adicionalmente a temperatura ambiente durante 60 minutos. Las placas se leyeron a 620 nm y 668 nm con excitación de 314 nm. Como control negativo se utilizaron 293 células no t ransfectadas .
Se determinó la proporción de fluorescencia a 668 nm y 620 nm, se calcularon las concentraciones de IPi a partir de la curva estándar (generadas con Graph Pad Prism ver.4) utilizando concentraciones conocidas de los estándares IPi. Se calcularon los EC50 con base en los valores de la proporción fluorescente OD(668 nm) / (OD620 nm) utilizando una curva de regresión no lineal adecuada en el software Prism.
Los péptidos y conjugados se prepararon mediante química en fase sólida a una escala de 0.25 mmol en un sintetizador automático ABI . El acoplamiento secuencial de los Fmoc-aminoácidos (4 eq, Anaspec) para la resina Rink-amida (NovaBiochem) se llevó a cabo utilizando la activación HBTU/DIEA. El péptido ensamblado se segmentó con un coctel de TFA (fenol (5%), tritsopropilsilano (2.5%) y agua (2.5%); 10 mL por gramo de resina) y se aisló mediante precipitación con dietiléter. Después de la purificación mediante HPLC Cíe el producto final se aisló en la forma de sal de TFA mediante la liofilización de fracciones adecuadas, y se caracterizó mediante HPLC (pureza >95%) y LC-MS (PM confirmado) .
Ejemplo 3 Administración in vivo de los compuestos con subunidades catiónicas Los péptidos se administraron intravenosamente a una dosis de 0.5 mg/kg en ratas normales Sprague Dawley anestesiadas con isoflurano. Un grupo control de ratas se trató con solución salina. Se extrajo sangre antes de la dosificación y cada hora durante 4 horas. Las ratas se mantuvieron bajo anestesia con isofluorano durante el estudio total. La concentración de la PTH en plasma ser midió mediante ELISA, detectando la PTH 1-84 intacta bioactiva (número de catálogo 60-2700 Immutopics International) , y el área bajo la curva acumulativa para la AUC se calculó para los puntos de datos inclusivos de 1-4 horas. La reducción porcentual de la PTH se calculó de acuerdo con la siguiente fórmula: AUCcompUesto tratado/AUCcontrol con solución salina* 00 · Ejemplo 4 Estudio de la relación estructura-actividad: Actividad in vivo Los péptidos probados identificados en la presente como la SEC ID NO: 26 (Ac-carrrar-NH2) y como la SEC ID NO: 29 (Ac-arrrar-NH2) se probaron in vitro utilizando las células transfectadas HEK293 CaSR, de acuerdo con el procedimiento en el Ejemplo 2. Los péptidos también se probaron in vivo, al administrar como un bolo IV a ratas normales Sprague Dawley a dosificaciones de 9 mg/kg para la SEC ID NO: 29 y a 0.5 mg/kg para la SEC ID NO: 26. Como un control se utilizó un bolo intravenoso (IV) de solución salina. Los niveles de la PTH en plasma (K2EDTA) se valoraron antes de la dosificación y 1, 2, 3 y 4 horas después de la dosificación. Las ratas se mantuvieron bajo anestesia con isoflurano durante el estudio total. Los resultados se muestran en las figuras 2A-2B, se presentan como promedio de grupo ± desviación estándar (SD) . En la figura 2B, la PTH se muestra como el porcentaje del valor pre-dosis del valor inicial.
Ejemplo 5 Estudios de la relación estructura-actividad: Subunidades de D- L-aminoácidos Se prepararon una serie de compuestos que tienen un residuo de L-aminoácido sustituido para un residuo de D-aminoácido. Los compuestos se administraron en un bolo IV a ratas normales Sprague Dawley a una dosis de 0.5 mg/kg. Como un control se utilizó un bolo intravenoso (IV) de solución salina. Los niveles de la PTH en plasma (K2EDTA) se valoraron antes de la dosificación a l, 2, 3 y 4 horas después de la dosificación, y se calculó la AUC como se describió anteriormente. Las ratas se mantuvieron bajo anestesia con isoflurano durante el estudio total. Los resultados se muestran en la Tabla 4 anteriormente.
Ejemplo 6 Estudios de la relación estructura-actividad: Liberación de histamina Para evaluar la carga neta positiva sobre la liberación de histamina asociada con un compuesto, se generaron péptidos que contienen de 4 a 7 residuos catiónicos (arginina) y se probaron para su capacidad para provocar la liberación de histamina in vivo. Los péptidos probados incluyeron (i) Ac-crrrr-NH2 (SEC ID NO:4), (ii) Ac-crrrrr-NH2 (SEC ID NO: 5), (iíi) Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) y (iv) Ac-crrrrrrrr-NH2; SEC ID NO: 41).
Se obtuvieron ratas macho Sprague-Dawley (Charles River) pre-canuladas en las venas femoral y yugular para la infusión del fármaco y extracciones de sangre, respectivamente. Todos los tratamientos con el fármaco IV se condujeron bajo anestesia (isoflurano) . Los animales se dosificaron mediante un empuje IV de 1 minuto en un volumen total de 0.5 mL. Se extrajeron muestras de sangre a 5, 15 y 30 minutos después del bolo IV para generar muestras en plasma (K2EDTA) para análisis de histamina. Durante los 30 minutos de los estudios de infusión IV, se extrajo una muestra al término de la infusión. En algunos casos, se utilizaron ratas en el modelo 1K1C de isquemia renal aguda.
Se inyectó un volumen igual de solución salina después de cada extracción de sangre para reemplazar el volumen perdido. Se extrajeron aproximadamente 0.2 mL de sangre en cada punto de tiempo utilizando jeringas pre-recubiertas con EDTA para facilitar la recolección de suero.
Los ELISA para histamina se realizaron en plasma diluido utilizando el kit para inmunoensayo de la enzima de histamina ( EIA) (Cat #A05890, SPI-BIO, Montigny le Bretonneux, Francia) . El kit de EIA de histamina es un inmunoensayo de enzimas competitivo amplificado por derivación que detecta la histamina en una variación de 40 pg/mL hasta 5,500 pg/mL. Las muestras se analizaron por duplicado de acuerdo con el protocolo del fabricante.
Los péptidos liofilizados (sales de TFA) se pesaron y la masa registrada se ajustó para el contenido de péptido. Las soluciones se prepararon al disolver el material en solución salina normal para generar la concentración deseada de péptidos. En algunos casos, la molaridad del péptido se ajustó para permitir una comparación entre péptidos. Los péptidos se administraron mediante bolo IV a una dosis equivalente sobre una base por mol como la SEC ID NO: 41 (es decir, 0.7 pmol/rata) mediante un bolo IV de 1 minuto y se midió la histamina en plasma antes de la dosificación (pre-dosis), 5, 15 y 30 minutos después de la dosificación. Los datos se presentan como promedios de grupo (n=2) ± SD. La liberación de histamina se muestra como un cambio de veces de los niveles de pre-dosis (valor inicial) . Los resultados se muestran en el figura 3. Los datos se presentan como promedios de grupo (n=2) ± SD.
Ejemplo 7 Estudios de la relación estructura-actividad: Liberación de histamina Para la evaluación in vitro de la liberación de histamina, se aislaron mastocitos peritoneales de ratas aisladas al realizar un lavado peritoneal utilizando HBSS frió + HEPES 25 MI pH 7.4 que contiene heparina (5u/mL). Las células se lavaron dos veces en tampón de estimulación (HBSS + HEPES 25 mm pH 7.4 ) y se incubaron con 10 µ? del compuesto en tampón de estimulación (HBSS + 25 mm HEPES pH 7.4) durante 15 minutos en una placa de 96 pozos (106/pozo) a 37°C. El sobrenadante celular se analizó para histamina utilizando el kit de EIA (Cayman para histamina EIA #589651). Los datos se muestran en la Tabla 10.
Para la evaluación in vivo de la liberación de histamina, los compuestos se dosificaron en ratas normales anestesiadas con isoflurano a 2 mg/kg mediante bolo IV (administrado durante menos de un minuto) . La histamina en plasma se midió 5 minutos después de la administración del compuesto (Cayman para histamina EIA #589651) . Los datos se muestran en la Tabla 11.
Las abreviaturas utilizadas en la presente y en particular en las Tablas 10-11 se resumen aquí. vi o En el compuesto Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) se preparó para comparación con el compuesto Ac-carrrar-NH2 (SEC ID NO:26) . En el compuesto Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID N0:3) la subunidad que contiene tiol en la posición Xi se conjugó vía un enlace disulfuro a un residuo L-Cys . Los dos compuestos se administraron via bolo IV a animales con el modelo 1K1C de insuficiencia renal aguda a dosis de 0.3 y 0.5mg/kg. Los niveles en plasma de la PTH se evaluaron antes de la dosificación y periódicamente durante 24 horas después de la dosificación. Los resultados se muestran en la figura 10, donde los datos mostrados son los promedios de grupo ± SEM donde como una función de tiempo, en horas, en ratas con el modelo 1K1C de insuficiencia renal aguda, el compuesto Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID N0:3) se representa con cuadros (0.3 mg/kg, n=5) y símbolos * (0.5 mg/kg, n=6) y el compuesto Ac-C (Ac-C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 141) por triángulos (0.3 mg/kg, n=8) y diamantes (0.5 mg/kg, n=7) .
Ejemplo 9 Suministro transdérmico facilitado por microporos de agentes calcimiméticos Para evaluar el suministro sistémico de un agente calicimimético, se administró transdérmicamente Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) a ratas CD sin pelo utilizando un recipiente. Se aplicó Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) como una solución al 10% en solución salina a una zona de aproximadamente 1 cm2 sobre la espalda de las ratas sin pelo CD® a las que se les practicó microporacion con 5 pasos de un Derma Roller de 1.0 mm bajo presión moderada. Se pegó una cámara de poliestireno (I.D. 9.5 mm) sobre la zona de la piel con microporos para crear un recipiente para fármacos en el cual se aplicaron ya sea Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) o una solución salina. Una solución al 10% de Ac-crrrrrr-NH2 (SEC ID NO: 6) se administró en la cámara del recipiente en dos ratas, una solución salina sola se administró en la cámara del recipiente en una rata. Los recipientes se cubrieron con cinta para evitar la evaporación. Se realizaron extracciones de sangre durante un periodo de 4 horas y el plasma se analizó para los niveles de la PTH mediante ELISA. Los resultados se muestran en la figura 11.
Ejemplo 10 Suministro sostenido de agentes calcimiméticos mediante parche transdérmico facilitado por microporo Para evaluar adicionalmente el suministro sistémico de un agente calcimimético, se administró transdérmicamente Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) a ratas normales utilizando un parche transdérmico . Ratas normales se trataron con una disposición de microaguja y un sistema de parches transdérmicos . Un área pequeña de pelo en la espalda de ratas Sprague Dawley (~350 g) se rasuró utilizando maquinillas y a una zona de la piel se le practicó microporación utilizando una disposición 14x14 (~1 cm2) de microagujas (-0.5 mm) . Un sistema de parches transdérmicos que contiene solución al 10% (en peso) de Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) en solución salina se colocó sobre el área con microporos y se dejó en el lugar durante ~30 horas. Se tomaron extracciones de sangre de las ratas periódicamente durante las 30 horas y se analizaron las muestras de plasma para los niveles de la PTH mediante ELISA. Los resultados se muestran en la figura 12.
Ejemplo 11 Infusión de agentes calcimiméticos Para evaluar adicionalmente el efecto de disminución de la PTH del compuesto calcimimético, se administró Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) mediante infusión IV a dosis muy bajas a ratas normales y a ratas con insuficiencia renal para identificar la menor dosis necesaria que será administrada mediante infusión, el sistema de parches transdérmicos u otros medios para suministro sostenido para alcanzar una reducción significativa de la PTH. Ratas macho normales Sprague-Dawley (250-300 g) se les infundió intravenosamente durante 6 horas con Ac-c (C ) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3) a velocidades de dosis de lpg/kg/hr, 3µg/kg/hr y 10 g/kg/hr. Se extrajeron muestras de sangre antes de la dosificación, a las 2 horas, 4 horas, 6 horas (justo antes del término de la infusión; EOI) y 8 horas (2 horas después de la EOI) y se analizó el plasma para los niveles de la PTH mediante ELISA. Los datos se muestran en la figura 13, donde las ratas tratadas con l g/kg/hr (cuadros) , 3µg/kg/hr (diamantes) , y 10µg/kg/hr (triángulos) durante 6 horas fueron efectivos para producir una reducción significativa en la PTH a partir del valor inicial durante el curso de la infusión.
Se condujo un estudio similar en ratas con el modelo 1K1C de insuficiencia renal aguda. Las ratas del modelo 1K1C se infundieron intravenosamente con Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 273 a velocidades de dosis de 3G^g/kg/hr y 100 g/kg/hr durante 6 horas. Se extrajeron muestras sanguíneas para dosificación (Pre), a las 2 horas, 4 horas, 6 horas (justo antes del término de la infusión; EOI), 8 horas (2 horas después de la EOI) y 24 horas y se analizó el plasma para los niveles de la PTH mediante ELISA. Los datos se muestran en la figura 14A (30 g/kg/hr, diamantes, y 100pg/kg/hr, cuadros) y en la figura 14B se muestra el calcio sérico para los animales.

Claims (29)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes REIVINDICACIONES :
1. Un compuesto, que comprende la fórmula: l- 2-X3~"X4-X5-X6-X7 caracterizado porque Xi es una subunidad que comprende un grupo que contiene tiol; X5 es una subunidad catiónica; X6 es una subunidad no catiónica; X7 es un catiónico una subunidad; y al menos dos de X2, X3 y X4 son independientemente una subunidad catiónica; y en donde el compuesto tiene actividad para disminuir el nivel de la hormona paratiroidea en un sujeto.
2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el grupo tiol sobre la subunidad ?? se selecciona del grupo que consiste de los residuos de aminoácidos que contienen tiol y las porciones que contienen tiol orgánico.
3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el residuo de aminoácidos que contienen tiol se selecciona del grupo que consiste de cisterna, glutatión, cisterna de N-acetilado y cisteina PEGilada.
4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la porción que contiene tiol orgánico se selecciona de ácido mercaptopropiónico, ácido mercaptoacético, tiobencilo, y tiopropilo .
5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la subunidad Xi se modifica químicamente para que comprenda un grupo acetilo, un grupo benzoilo, un grupo butilo, una beta-alanina acetilada o se une mediante un enlace covalente a otro porción tiol.
6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la fórmula X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 consta de una secuencia contigua de residuos de aminoácidos, una secuencia contigua de compuestos orgánicos, o una mezcla de los mismos.
7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la secuencia contigua de los residuos de aminoácidos es una secuencia contigua de residuos de L-aminoácidos, una secuencia contigua de residuos de D-aminoácidos, una secuencia contigua de una mezcla de residuos de L-aminoácidos y residuos de D-aminoácidos, o una mezcla de residuos de aminoácidos y residuos de aminoácidos no naturales.
8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la fórmula X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 es una secuencia contigua de residuos de aminoácidos.
9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la secuencia contigua de los residuos de aminoácidos se conjuga a un compuesto para facilitar el transporte a través de una membrana celular.
10. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la secuencia contigua de los residuos de aminoácidos se conjuga con una secuencia de los residuos de aminoácidos entre 8-50 residuos de aminoácidos de longitud.
11. El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la subunidad X3 es un residuo aminoácidos catiónicos.
12. El compuesto de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la subunidad X2 es un residuo de aminoácidos no catiónicos.
13. El compuesto de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque X4 es un residuo de aminoácidos no catiónicos.
14. El compuesto de conformidad con la reivindicación 12 o la reivindicación 13, caracterizado porque el residuo de aminoácidos no catiónicos es un D-aminoácido .
15. El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque X3 y X4 son residuos de D-aminoácidos catiónicos.
16. El compuesto de conformidad con la reivindicación 15 caracterizado porque X5 es un residuo de D-aminoácidos .
17. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-16, caracterizado porque la fórmula se une covalentemente via el grupo que contiene tiol en la subunidad Xi a una segunda secuencia contigua.
18. El compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la segunda secuencia contigua es idéntica a la fórmula.
19. El compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la segunda secuencia contigua es un péptido que facilita la transferencia del compuesto a través de una membrana celular.
20. Un conjugado que consta de un péptido que comprende la secuencia carrrar (SEC ID NO: 2) y un grupo de conjugación, el péptido enlazado mediante un enlace disulfuro en su residuo N-terminal al grupo de conjugación.
21. El conjugado de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque el péptido se modifica químicamente en el término N, el término C, o ambos.
22. El conjugado de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque el término N se modifica químicamente mediante acetilación y el término C se modifica químicamente mediante amidación.
23. El conjugado de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque el conjugado es Ac-c (C) arrrar-NH2 (SEC ID NO: 3).
24. Una composición para utilizarse en el tratamiento del hiperparatiroidismo secundario (SHPT) en un sujeto, que comprende proporcionar un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-19 o un conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20-23.
25. Una composición para utilizarse en el SHPT en un sujeto que padece de una enfermedad renal crónica, que comprende proporcionar un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-19 o un conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20-23.
26. Una composición para utilizarse para disminuir los niveles de la hormona paratiroidea en un sujeto, que comprende proporcionar un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-19 o un conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20-23.
27. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 24, 25 ó 26, en donde la composición se proporciona transdérmicamente .
28. Un régimen de tratamiento, caracterizado porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-16 o un conjugado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20-23 y un segundo agente terapéutico.
29. El régimen de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el segundo agente terapéutico es la vitamina D, un análogo de vitamina D o un clorhidrato de cinacalcet.
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Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008067199A2 (en) * 2006-11-16 2008-06-05 Kai Pharmaceuticals, Inc. Polycationic calcium modulator peptides for the treatment of hyperparathyroidism and hypercalcemic disorders
PL3192520T3 (pl) 2009-07-29 2019-08-30 Kai Pharmaceuticals, Inc. Środki lecznicze do zmniejszania poziomów parathormonu
EP2543660A4 (en) 2010-03-04 2014-04-30 Ajinomoto Kk PROPHYLACTIC OR THERAPEUTIC ACTIVE AGAINST DIABETES OR ADIPOSITAS
CN102781910B (zh) 2010-03-04 2015-03-11 味之素株式会社 烷基胺衍生物
WO2011118843A1 (ja) 2010-03-24 2011-09-29 味の素株式会社 グルタミン酸エステル誘導体又はその塩
EP2554165A4 (en) 2010-04-02 2014-04-30 Ajinomoto Kk PROPHYLACTIC OR THERAPEUTIC AGENT FOR DIABETES OR OBESITY
BR112013031539A2 (pt) * 2011-06-08 2019-07-30 Kai Pharmaceuticals Inc agentes terapêuticos para regular fósforo sérico
AU2012335009B2 (en) * 2011-11-10 2017-08-31 Kai Pharmaceuticals, Inc. Calcimimetics and methods for their use
JP2015514771A (ja) * 2012-04-17 2015-05-21 ブラウン ユニバーシティ 神経保護性組成物および使用方法
US20200354428A9 (en) 2013-06-23 2020-11-12 Wisconsin Alumni Research Foundation Analogues of parathyroid hormone (1-34) that function as agonists of the parathyroid hormone receptor-1 and display modified activity profiles
CA2916222C (en) 2013-06-28 2021-05-18 Amgen Inc. Stable liquid formulation of amg 416 (etelcalcetide)
DK3126373T3 (da) * 2014-04-03 2020-05-04 Amgen Inc Fremgangsmåde til fremstilling af amg 416
CN105504012A (zh) * 2014-09-30 2016-04-20 深圳翰宇药业股份有限公司 一种多肽的制备方法
US9616109B2 (en) 2014-10-22 2017-04-11 Extend Biosciences, Inc. Insulin vitamin D conjugates
EP3220961B1 (en) 2014-10-22 2023-07-05 Extend Biosciences, Inc. Therapeutic vitamin d conjugates
EP3274360B1 (en) * 2015-03-26 2020-05-06 Amgen Inc. Solution phase method for preparing etelcalcetide
US9336841B1 (en) * 2015-04-16 2016-05-10 Taiwan Semiconductor Manufacturing Co., Ltd. Pipeline register with data alignment therein
CN106928320B (zh) 2015-12-31 2021-01-15 深圳翰宇药业股份有限公司 一种合成Etelcalcetide的方法
CN106928321B (zh) * 2015-12-31 2019-07-26 深圳翰宇药业股份有限公司 一种合成Etelcalcetide的方法
WO2018044468A1 (en) * 2016-08-30 2018-03-08 Wisconsin Alumni Research Foundation COMBINATION OF LOW DOSE 2-METHYLENE-19-NOR-(20S)-1α, 25-DIHYDROXYVITAMIN D3 AND CALCIMIMETICS TO TREAT SECONDARY HYPERPARATHYROIDISM
US20200261549A1 (en) * 2017-11-07 2020-08-20 Alphacore Pharma Llc Methods of treating and protecting against cardiac disease, cardiovascular disease and related conditions and symptoms
WO2019124411A1 (ja) 2017-12-20 2019-06-27 Ｅａファーマ株式会社 維持透析下の二次性副甲状腺機能亢進症の予防または治療用医薬組成物
KR20210124958A (ko) * 2018-11-02 2021-10-15 앰퍼샌드 바이오파마슈티컬스, 인코포레이티드 국소적으로 적용되는 완충제(buffers)를 사용하는 양이온 과부하 및 전해질 불균형의 위험 가능성 관리를 위한 제형 및 방법
US20220142958A1 (en) 2019-04-03 2022-05-12 Ea Pharma Co., Ltd. Medicinal composition having excellent stability
KR20220110789A (ko) * 2019-12-09 2022-08-09 베이징 투오 지에 바이오파마수티컬 컴퍼니 리미티드 칼슘 감지 수용체 효능제 화합물 및 이의 응용
US20230223125A1 (en) * 2020-05-04 2023-07-13 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Artificial intelligence-based systems and methods for dosing of pharmacologic agents
WO2022052471A1 (zh) * 2020-09-10 2022-03-17 陕西麦科奥特科技有限公司 双特异性融合多肽化合物
US11359134B2 (en) 2020-10-19 2022-06-14 Saudi Arabian Oil Company Treatment fluids and methods for recovering hydrocarbons from a subterranean formation
CN117500820A (zh) * 2021-06-08 2024-02-02 北京拓界生物医药科技有限公司 钙敏感受体激动剂化合物的盐酸盐及药物组合物和其应用
EP4353248A1 (en) * 2021-06-08 2024-04-17 Beijing Tuo Jie Biopharmaceutical Co. Ltd. Calcium-sensing receptor agonist composition and application thereof

Family Cites Families (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5602116A (en) 1988-08-02 1997-02-11 Bone Care International, Inc. Method for treating and preventing secondary hyperparathyroidism
US5869473A (en) 1988-08-02 1999-02-09 Bone Care International, Inc. Method for treating and preventing hyperparathyroidism
CA1333616C (en) 1989-03-09 1994-12-20 Hector F. Deluca 19-nor-vitamin d compounds
US5246925A (en) 1989-03-09 1993-09-21 Wisconsin Alumni Research Foundation 19-nor-vitamin D compounds for use in treating hyperparathyroidism
US5304121A (en) 1990-12-28 1994-04-19 Boston Scientific Corporation Drug delivery system making use of a hydrogel polymer coating
AU9131091A (en) 1990-11-07 1992-06-11 Scripps Research Institute, The Peptides that inhibit platelet binding of adhesion molecules
US6031003A (en) 1991-08-23 2000-02-29 Nps Pharmaceuticals, Inc. Calcium receptor-active molecules
US5814603A (en) * 1992-06-12 1998-09-29 Affymax Technologies N.V. Compounds with PTH activity
US5886026A (en) 1993-07-19 1999-03-23 Angiotech Pharmaceuticals Inc. Anti-angiogenic compositions and methods of use
CA2145214A1 (en) 1995-02-28 1996-08-29 Rick E. Preddie Agents for pre-symptomatic diagnosis, prevention and cure huntington's disease (hd) in humans
US6099562A (en) 1996-06-13 2000-08-08 Schneider (Usa) Inc. Drug coating with topcoat
US5688489A (en) 1995-09-15 1997-11-18 Resolution Pharmaceuticals, Inc. Non-receptor mediated imaging agents
DE69734157T2 (de) 1996-07-31 2006-07-13 The General Hospital Corp., Boston Parathyroidhormon-verwandthe peptidanaloge
US5895368A (en) 1996-09-23 1999-04-20 Medisystems Technology Corporation Blood set priming method and apparatus
WO1998017299A1 (en) 1996-10-18 1998-04-30 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Isozyme-specific activators of protein kinase c, methods and compositions
WO1998033812A1 (en) 1997-02-05 1998-08-06 Brigham And Women's Hospital, Inc. Mast cell protease peptide inhibitors
UA62967C2 (en) * 1997-05-14 2004-01-15 Aventis Pharm Prod Inc Peptide analogs of parathyroid hormons
GB2341390B (en) * 1997-05-21 2000-11-08 Univ Leland Stanford Junior Composition and method for enhancing transport across biological membranes
US6258774B1 (en) 1998-03-19 2001-07-10 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Carrier for in vivo delivery of a therapeutic agent
US7399489B2 (en) 1999-01-14 2008-07-15 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Exendin analog formulations
JP2000336099A (ja) 1999-05-27 2000-12-05 Sekisui Chem Co Ltd ペプチド及びｃ型肝炎抗体検出用試薬
US6051567A (en) 1999-08-02 2000-04-18 Abbott Laboratories Low oxygen content compositions of 1α, 25-dihydroxycholecalciferol
US6274169B1 (en) 1999-08-02 2001-08-14 Abbott Laboratories Low oxygen content compostions of 1α, 25-dihydroxycholecalciferol
US20020068342A1 (en) * 2000-02-09 2002-06-06 Rami Khosravi Novel nucleic acid and amino acid sequences and novel variants of alternative splicing
JP2004504295A (ja) 2000-07-18 2004-02-12 ボーン　ケア　インターナショナル　インコーポレイテッド 安定化１α−ヒドロキシビタミンＤ
DE10041126A1 (de) * 2000-08-22 2002-04-04 Aventis Res & Tech Gmbh & Co DNA-bindende Peptiddomänen und ein Verfahren zur Bereitstellung solcher Domänen
US20080249016A1 (en) * 2000-09-18 2008-10-09 Sanos Bioscience A/S Use of GLP-2 in a combination treatment for bone-related disorders
US20020168354A1 (en) 2000-11-10 2002-11-14 Daria Mochly-Rosen psiepsilonRack peptide composition and method for protection against tissue damage due to ischemia
CA2434643C (en) 2001-01-18 2013-10-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Peptides for activation and inhibition of.delta.pkc
US20030091640A1 (en) 2001-02-08 2003-05-15 Srinivasan Ramanathan Enhanced oral and transcompartmental delivery of therapeutic or diagnostic agents
US20030036627A1 (en) 2001-02-16 2003-02-20 Montelaro Ronald C. Virus derived antimicrobial peptides
CA2439178C (en) 2001-02-23 2013-06-04 Polyphor Ltd. Template-fixed peptidomimetics with antimicrobial activity
US6790833B2 (en) * 2001-08-08 2004-09-14 The Research Foundation Of The State University Of New York Antifungal and antibacterial agents
WO2003013543A1 (en) 2001-08-08 2003-02-20 Genomed, Llc Treatment or prevention of acute renal failure
US7060023B2 (en) 2001-09-25 2006-06-13 The Foundry Inc. Pericardium reinforcing devices and methods of using them
JP2005287302A (ja) 2002-04-03 2005-10-20 Haruhiko Fujiwara ポリペプチドの架橋方法
US20040018976A1 (en) 2002-05-14 2004-01-29 Feder John N. Polynucleotide encoding novel human G-protein coupled receptors, and splice variants thereof
ATE377023T1 (de) 2003-11-05 2007-11-15 Pevion Biotech Ltd Zusammensetzungen, die von melittin abgeleitet sind und peptide enthalten, und verfahren zur potenzierung von immunreaktionen gegen target- antigene
KR20070004571A (ko) 2003-12-11 2007-01-09 더 보드 오브 트러스티스 오브 더 리랜드 스탠포드 쥬니어 유니버시티 단백질 키나제 ｃ의 동종효소-특이적 길항제
WO2005072340A2 (en) 2004-01-27 2005-08-11 Compugen Ltd. Novel polynucleotides encoding polypeptides and methods using same
US20060052303A1 (en) * 2004-07-27 2006-03-09 Sampath Kuber T Use of thyrotropin for regeneration of bone
US7265092B2 (en) * 2004-09-30 2007-09-04 Kai Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulation
DE102005013846A1 (de) 2005-03-24 2006-10-05 Ganymed Pharmaceuticals Ag Identifizierung von Oberflächen-assoziierten Antigenen für die Tumordiagnose und -therapie
KR100687932B1 (ko) * 2005-08-09 2007-02-27 삼성전자주식회사 영상표시장치 및 영상표시방법
WO2007027510A2 (en) * 2005-08-30 2007-03-08 Acologix, Inc. Regulation of mineral and skeletal metabolism
WO2008067199A2 (en) * 2006-11-16 2008-06-05 Kai Pharmaceuticals, Inc. Polycationic calcium modulator peptides for the treatment of hyperparathyroidism and hypercalcemic disorders
KR101775929B1 (ko) 2007-01-19 2017-09-07 카이 파마슈티컬즈 안정성 및 전달 효율을 증가시키기 위한 펩타이드 조성물의 변형
EP2197495A2 (en) 2007-10-02 2010-06-23 MDRNA, Inc. Lipopeptides for delivery of nucleic acids
US8716437B2 (en) 2007-12-07 2014-05-06 Steven A. Goldstein Identification of toxin ligands
US20090318351A1 (en) * 2008-03-12 2009-12-24 Kevin Grimes Method of treating acute st-elevation myocardial infarction with a delta pkc antagonist
PL3192520T3 (pl) 2009-07-29 2019-08-30 Kai Pharmaceuticals, Inc. Środki lecznicze do zmniejszania poziomów parathormonu
BR112013031539A2 (pt) 2011-06-08 2019-07-30 Kai Pharmaceuticals Inc agentes terapêuticos para regular fósforo sérico
AU2012335009B2 (en) 2011-11-10 2017-08-31 Kai Pharmaceuticals, Inc. Calcimimetics and methods for their use

Also Published As

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SMT201700014B (it) 2017-03-08
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