RU2012153785A - Способ культивирования одиночной в-клетки - Google Patents
Способ культивирования одиночной в-клетки Download PDFInfo
- Publication number
- RU2012153785A RU2012153785A RU2012153785/15A RU2012153785A RU2012153785A RU 2012153785 A RU2012153785 A RU 2012153785A RU 2012153785/15 A RU2012153785/15 A RU 2012153785/15A RU 2012153785 A RU2012153785 A RU 2012153785A RU 2012153785 A RU2012153785 A RU 2012153785A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- cell
- antibody
- interleukin
- carried out
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract 25
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract 6
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 claims abstract 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract 4
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims abstract 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims 4
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 claims 3
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 claims 3
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims 3
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 claims 3
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 claims 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims 3
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 claims 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 claims 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 claims 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 claims 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 claims 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims 1
- 102100030704 Interleukin-21 Human genes 0.000 claims 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 claims 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 claims 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 claims 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 claims 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 3
- 239000012881 co-culture medium Substances 0.000 abstract 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0635—B lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/60—Buffer, e.g. pH regulation, osmotic pressure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/70—Undefined extracts
- C12N2500/72—Undefined extracts from bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2301—Interleukin-1 (IL-1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/231—Interleukin-10 (IL-10)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2321—Interleukin-21 (IL-21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/24—Interferons [IFN]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/25—Tumour necrosing factors [TNF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/11—Coculture with; Conditioned medium produced by blood or immune system cells
- C12N2502/1114—T cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/11—Coculture with; Conditioned medium produced by blood or immune system cells
- C12N2502/1157—Monocytes, macrophages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/11—Coculture with; Conditioned medium produced by blood or immune system cells
- C12N2502/1185—Thymus cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/70—Non-animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/149—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry specially adapted for sorting particles, e.g. by their size or optical properties
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/01—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials specially adapted for biological cells, e.g. blood cells
- G01N2015/016—White blood cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
1. Способ отбора В-клетки, включающий следующие этапы:а) совместное культивирование каждой В-клетки из популяции В-клеток, которые были сохранены как одиночные клетки, с фидерными клетками,б) выбор В-клеточного клона, пролиферирующего и секретирующего антитело на этапе а).2. Способ получения антитела, связывающегося с антигеном-мишенью, включающий следующие этапы:а) совместное культивирование каждой В-клетки из популяции В-клеток, которые были сохранены как одиночные клетки в отдельных контейнерах, в присутствии фидерных клеток и фидерной смеси,б) выбор В-клеточного клона, продуцирующего антитело, специфически связывающееся с антигеном-мишенью,в) культивирование клетки, которая содержит нуклеиновую кислоту, которая кодирует антитело, которое продуцируется В-клеточным клоном, выбранным в этапе б), или его гуманизированный вариант, и выделение этого антитела из клетки или культурального супернатанта и тем самым получение антитела.3. Способ по п.1 или 2, также включающий этап инкубации популяции В-клеток в среде для совместного культивирования перед сохранением одиночной клетки.4. Способ по п.3, который характеризуется тем, что инкубация осуществляется при температуре 37°C в течение примерно одного часа.5. Способ по п.1 или 2, также включающий этап центрифугирования одиночных сохраненных В-клеток перед совместным культивированием.6. Способ по п.5, который характеризуется тем, что центрифугирование осуществляется в течение 5 мин со скоростью примерно 300 g.7. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что популяцию В-клеток выделяют путем центрифугирования в градиенте плотности.8. Способ по п.1 или 2, который характери�
Claims (21)
1. Способ отбора В-клетки, включающий следующие этапы:
а) совместное культивирование каждой В-клетки из популяции В-клеток, которые были сохранены как одиночные клетки, с фидерными клетками,
б) выбор В-клеточного клона, пролиферирующего и секретирующего антитело на этапе а).
2. Способ получения антитела, связывающегося с антигеном-мишенью, включающий следующие этапы:
а) совместное культивирование каждой В-клетки из популяции В-клеток, которые были сохранены как одиночные клетки в отдельных контейнерах, в присутствии фидерных клеток и фидерной смеси,
б) выбор В-клеточного клона, продуцирующего антитело, специфически связывающееся с антигеном-мишенью,
в) культивирование клетки, которая содержит нуклеиновую кислоту, которая кодирует антитело, которое продуцируется В-клеточным клоном, выбранным в этапе б), или его гуманизированный вариант, и выделение этого антитела из клетки или культурального супернатанта и тем самым получение антитела.
3. Способ по п.1 или 2, также включающий этап инкубации популяции В-клеток в среде для совместного культивирования перед сохранением одиночной клетки.
4. Способ по п.3, который характеризуется тем, что инкубация осуществляется при температуре 37°C в течение примерно одного часа.
5. Способ по п.1 или 2, также включающий этап центрифугирования одиночных сохраненных В-клеток перед совместным культивированием.
6. Способ по п.5, который характеризуется тем, что центрифугирование осуществляется в течение 5 мин со скоростью примерно 300 g.
7. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что популяцию В-клеток выделяют путем центрифугирования в градиенте плотности.
8. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что В-клетки являются зрелыми В-клетками.
9. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что мечение осуществляется двумя или тремя флуоресцентными метками.
10. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что мечению подвергается от 0,1% до 2,5% клеток от общей В-клеточной популяции.
11. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что В-клетки являются В-клетками мыши, В-клетками хомяка или В-клетками кролика.
12. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что фидерные клетки являются мышиными клетками EL-4 B5.
13. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что совместное культивирование осуществляется в среде RPMI 1640 с добавлением 10% (объем/объем) FCS, 1% (вес/объем) 200 мМ раствора глутамина, которая включает пенициллин и стрептомицин, 2% (объем/объем) 100 мМ раствора пирувата натрия и 1% (объем/объем) 1 М HEPES-буфера (2-(4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазин)-этансульфокислота).
14. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что В-клетки имеют мышиное происхождение, и мечение представляет собой IgG+CD19+-В-клетки и/или IgG-CD138+-B-клетки.
15. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что В-клетки получены от хомяка, и осуществляется мечение IgG+IgM--B-клеток.
16. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что В-клетки получены от кролика, и осуществляется мечение IgG+-B-клеток, и/или CD138+-B-клеток, или CD138+IgG+-В-клеток, и/или IgG+IgM--B-клеток.
17. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что совместное культивирование осуществляется в присутствии синтетической фидерной смеси, которая содержит интерлейкин-1 бета, фактор некроза опухоли альфа, интерлейкин-2, интерлейкин-10 и клетки золотистого стафилококка штамма Cowans.
18. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что совместное культивирование осуществляется в присутствии синтетической фидерной смеси, которая содержит интерлейкин-1 бета, фактор некроза опухоли альфа, интерлейкин-2, интерлейкин-10 и интерлейкин-21.
19. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что совместное культивирование осуществляется в присутствии синтетической фидерной смеси, которая содержит интерлейкин-1 бета, фактор некроза опухоли альфа, интерлейкин-2, интерлейкин-10 и В-клеточный фактор активации из семейства фактора некроза опухоли (BAFF).
20. Способ по п.1 или 2, который характеризуется тем, что совместное культивирование осуществляется в присутствии культурального супернатанта тимоцитов в качестве фидерной смеси.
21. Способ по п.20, который характеризуется тем, что культуральный супернатант тимоцитов получают из тимоцитов тимуса молодого животного.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP10005602.7 | 2010-05-28 | ||
| EP10005602.7A EP2400298B1 (en) | 2010-05-28 | 2010-05-28 | Single B-cell cultivation method and specific antibody production |
| PCT/EP2011/058616 WO2011147903A1 (en) | 2010-05-28 | 2011-05-26 | Single b-cell cultivation method |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015155197A Division RU2709531C2 (ru) | 2010-05-28 | 2011-05-26 | Способ культивирования одиночной в-клетки |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012153785A true RU2012153785A (ru) | 2014-07-10 |
| RU2575569C2 RU2575569C2 (ru) | 2016-02-20 |
Family
ID=
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2015155197A (ru) | Способ культивирования одиночной в-клетки | |
| JP2017169579A5 (ru) | ||
| CN103946236B (zh) | 表达cd40l的哺乳动物细胞及其用途 | |
| Cao et al. | An optimized assay for the enumeration of antigen-specific memory B cells in different compartments of the human body | |
| RU2013125717A (ru) | Мыши adam6 | |
| RU2013130006A (ru) | Средства и способы получения высокоаффинных антител | |
| AU2003207399A1 (en) | Isolation and culture-expansion methods of mesenchymal stem/progenitor cells from umbilical cord blood, and differentiation method of umbilical cord blood-derived mesenchymal stem/progenitor cells into various mesenchymal tissues | |
| EP2724157B1 (en) | Method for screening cells | |
| JP2013526286A5 (ru) | ||
| JP2011092142A (ja) | 抗原特異的ｂ細胞集団の製造方法 | |
| US8703486B2 (en) | Method for polyclonal immunoglobulin G production by human B cells | |
| WO2014109696A1 (en) | Method for immortalization of b cells and uses thereof | |
| JP7166342B2 (ja) | Ｂ細胞培養法 | |
| Zambrano et al. | Prolonged Ex vivo expansion and differentiation of naïve murine CD43− B splenocytes | |
| Di Stefano et al. | Very rapid and efficient generation of induced pluripotent stem cells from mouse pre-B Cells | |
| Kouro et al. | In vitro differentiation and measurement of B cell progenitor activity in culture | |
| Walker et al. | Production of PfEMP1-Specific Human Monoclonal Antibodies from Naturally Immune Individuals | |
| RU2575569C2 (ru) | Способ культивирования одиночной в-клетки | |
| US20130029424A1 (en) | Method for the generation of monoclonal antibodies derived from human b cells |