RU2011125656A

RU2011125656A - Очистка полипептидов

Info

Publication number: RU2011125656A
Application number: RU2011125656/04A
Authority: RU
Inventors: Яис Розе БЬЕЛКЕ
Original assignee: Ново Нордиск Хелс Кеа Аг
Priority date: 2008-12-02
Filing date: 2009-12-01
Publication date: 2013-01-10
Also published as: KR101821143B1; CN102239175A; MX2011005474A; AU2009324204A1; JP2012510500A; ES2576109T3; EP2373677A1; JP5788803B2; KR20110099251A; WO2010063717A1; EP2373677B1; AU2009324204B2; CA2742246A1; RU2544860C2; BRPI0922716A2; US20110287518A1

Abstract

1. Способ очистки полипептида, имеющего желаемое содержание гамма-карбоксиглутаминовой кислоты, из образца, содержащего смесь вариантов указанного полипептида, имеющего разные содержания гамма-карбоксиглутаминовой кислоты, при этом указанный способ включает стадии:(a) загрузки указанного образца на анионообменный хроматографический материал;(b) элюирования указанного полипептида с использованием раствора при рН менее чем рН 9,0, содержащего по меньшей мере одну соль, выбранную из ацетата аммония, хлорида аммония и ацетата натрия;(c) отбора фракции, полученной после указанного элюирования, при этом полипептиды в данной фракции имеют желаемое содержание гамма-карбоксиглутаминовых кислот.2. Способ по п.1, включающий следующие стадии:(a) уравновешивания анионообменного материала буфером при рН менее 9,0;(b) загрузки указанного образца на анионообменный материал;(c) возможно промывки анионообменного материала буфером при рН менее 9,0;(d) элюирования указанного полипептида из ионообменного материала с использованием раствора при рН менее 9,0, содержащего по меньшей мере одну соль, выбранную из ацетата аммония, хлорида аммония и ацетата натрия; и(e) отбора фракции, полученной после указанного элюирования, при этом полипептиды в данной фракции имеют желаемое содержание гамма-карбоксиглутаминовых кислот.3. Способ по п.1, где полипептид, подлежащий очистке, выбран из фактора IX, фактора VII, фактора VIIa, фактора X, протромбина, белка-S, белка-С, белка Z, остеокальцина, матриксного gla-белка, продуктов 6 генов блокировки роста, пролин-обогащенного Gla-1, пролин-обогащенного Gla-2, пролин-обогащенного Gla-3 и пролин-обогащенного Gla-4.4. Способ по п

Claims

1. Способ очистки полипептида, имеющего желаемое содержание гамма-карбоксиглутаминовой кислоты, из образца, содержащего смесь вариантов указанного полипептида, имеющего разные содержания гамма-карбоксиглутаминовой кислоты, при этом указанный способ включает стадии:

(a) загрузки указанного образца на анионообменный хроматографический материал;

(b) элюирования указанного полипептида с использованием раствора при рН менее чем рН 9,0, содержащего по меньшей мере одну соль, выбранную из ацетата аммония, хлорида аммония и ацетата натрия;

(c) отбора фракции, полученной после указанного элюирования, при этом полипептиды в данной фракции имеют желаемое содержание гамма-карбоксиглутаминовых кислот.

2. Способ по п.1, включающий следующие стадии:

(a) уравновешивания анионообменного материала буфером при рН менее 9,0;

(b) загрузки указанного образца на анионообменный материал;

(c) возможно промывки анионообменного материала буфером при рН менее 9,0;

(d) элюирования указанного полипептида из ионообменного материала с использованием раствора при рН менее 9,0, содержащего по меньшей мере одну соль, выбранную из ацетата аммония, хлорида аммония и ацетата натрия; и

(e) отбора фракции, полученной после указанного элюирования, при этом полипептиды в данной фракции имеют желаемое содержание гамма-карбоксиглутаминовых кислот.

3. Способ по п.1, где полипептид, подлежащий очистке, выбран из фактора IX, фактора VII, фактора VIIa, фактора X, протромбина, белка-S, белка-С, белка Z, остеокальцина, матриксного gla-белка, продуктов 6 генов блокировки роста, пролин-обогащенного Gla-1, пролин-обогащенного Gla-2, пролин-обогащенного Gla-3 и пролин-обогащенного Gla-4.

4. Способ по п.3, где полипептид представляет собой фактор IX.

5. Способ по п.4, где указанный способ включает отбор фракции, полученной после указанного элюирования, которая имеет увеличение доли форм (1-11)-Gla и/или (1-12)-Gla фактора IX по сравнению с долей форм (1-11)-Gla и/или (1-12)-Gla фактора IX в образце перед его очисткой.

6. Способ по п.4, где указанный способ включает отбор фракции полученной после указанного элюирования, которая имеет уменьшение доли формы (1-10)-Gla фактора IX по сравнению с долей формы (1-10)-Gla фактора IX в образце перед его очисткой.

7. Способ по п.3, где полипептид представляет собой фактор VII или фактор VIIa.

8. Способ по п.7, где указанный способ включает отбор фракции, полученной после указанного элюирования, которая имеет увеличение доли форм (1-10)-Gla и/или (1-11)-Gla фактора VII или фактор VIIa по сравнению с долей форм (1-10)-Gla и/или (1-11)-Gla фактора VII или фактора VIIa в образце перед его очисткой.

9. Способ по п.7, где указанный способ включает отбор фракции, полученной после указанного элюирования, которая имеет уменьшение доли формы (1-9)-Gla фактора VII или фактора VIIa по сравнению с долей формы (1-9)-Gla фактора VII или фактора VIIa в образце перед его очисткой.

10. Способ по любому из пп.1-9, где указанный элюирующий буфер имеет рН от 5,0 до 8,5.

11. Способ по любому из пп.1-9, где ацетат аммония, хлорид аммония или ацетат натрия присутствует в элюирующем буфере в концентрации от 0,1 М до 2,0 М.

12. Способ по п.11, где ацетат аммония, хлорид аммония или ацетат натрия присутствует в элюирующем буфере в концентрации приблизительно 0,6 М.

13. Способ по любому из пп.1-9, где для указанной ионообменной хроматографии используют уравновешивающий буфер при рН от 5,0 до 8,5.

14. Полипептидная композиция, изготовленная способом по любому из пп.1-13.