RU2003109477A

RU2003109477A - Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий, обладающих повышенной экспрессией гена pcka

Info

Publication number: RU2003109477A
Application number: RU2003109477/13A
Authority: RU
Inventors: Андрей Юрьевич Гулевич; Ирина Владимировна Бирюкова; Данила Вадимович Зименков; Александра Юрьевна Скороходова; Александр Дмитриевич Киверо; Алла Валентиновна Беларева; Сергей Владимирович Машко
Original assignee: Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика"
Filing date: 2003-04-07
Publication date: 2004-10-20

Claims

1. Бактерия, принадлежащая к роду Escherichia, - продуцент L-аминокислоты, отличающаяся тем, что такая бактерия модифицирована с целью увеличения активности PEP карбоксикиназы.

2. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что активность PEP карбоксикиназы увеличена за счет модификации нуклеотидной последовательности, контролирующей экспрессию гена PEP карбоксикиназы, в хромосоме указанной бактерии таким образом, что экспрессия указанного гена увеличивается.

3. Бактерия по п.2, отличающаяся тем, что природный промотор указанного гена заменен на более сильный промотор.

4. Бактерия по п.2, отличающаяся тем, что природная последовательность SD указанного гена заменена на более эффективную последовательность SD.

5. Бактерия по любому из пп.2-4, отличающаяся тем, что ген PEP карбоксикиназы получен из бактерии, принадлежащей к роду Escherichia.

6. Бактерия по п.5, отличающаяся тем, что ген PEP карбоксикиназы кодирует следующие белки (А) или (В): (A) белок, который представлен последовательностью аминокислот, приведенной в списке последовательностей под номером 2, (B) белок, который представлен последовательностью аминокислот, включающей делеции, замены, вставки или добавление одной или нескольких аминокислот в последовательность аминокислот, приведенную в списке последовательностей под номером 2, и который обладает активностью PEP карбоксикиназы.

7. Бактерия по п.5, отличающаяся тем, что ген PEP карбоксикиназы содержит следующую ДНК (а) или (b) (a) ДНК, которая представлена последовательностью нуклеотидов с 1 по 1623, приведенной в списке последовательностей под номером 1, (b) ДНК, которая гибридизуется в жестких условиях с последовательностью нуклеотидов с 1 по 1623, приведенной в списке последовательностей под номером 1, или с зондом, приготовленным на основании указанной последовательности нуклеотидов, и кодирует белок, обладающий активностью PEP карбоксикиназы.

8. Бактерия по п.7, отличающаяся тем, что жесткими условиями являются условия, при которых отмывка осуществляется при 60°С, а концентрация соли соответствует 1xSSC и 0,1% SDS.

9. Бактерия по любому из пп.1-8, отличающаяся тем, что указанная бактерия далее модифицирована с целью повышения экспрессии открытой рамки считывания yddG.

10. Бактерия по любому из пп.1-9, отличающаяся тем, что L-аминокислотой является ароматическая L-аминокислота, выбранная из группы, состоящей из L-триптофана, L-фенилаланина и L-тирозина.

11. Способ получения ароматической L-аминокислоты, включающий стадии выращивания бактерии по любому из пп.1-10 в питательной среде и выделения из культуральной жидкости произведенной и накопленной в ней L-аминокислоты.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что L-аминокислотой является L-триптофан.

13. Способ по п.12, отличающийся тем, что указанная бактерия обладает повышенной экспрессией генов биосинтеза триптофана.