RS55813B2 - Hromanil derivati za tretiranje mitohondrijalne bolesti - Google Patents

Hromanil derivati za tretiranje mitohondrijalne bolesti

Info

Publication number
RS55813B2
RS55813B2 RS20170348A RSP20170348A RS55813B2 RS 55813 B2 RS55813 B2 RS 55813B2 RS 20170348 A RS20170348 A RS 20170348A RS P20170348 A RSP20170348 A RS P20170348A RS 55813 B2 RS55813 B2 RS 55813B2
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
compound
chr
levels
absent
co2h
Prior art date
Application number
RS20170348A
Other languages
English (en)
Inventor
Richard Hendrik Blaauw
Ruben Gerardus George Leenders
Geert Jan Sterk
Pedro Harold Han Hermkens
Original Assignee
Khondrion Ip B V
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=49916367&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS55813(B2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Khondrion Ip B V filed Critical Khondrion Ip B V
Publication of RS55813B1 publication Critical patent/RS55813B1/sr
Publication of RS55813B2 publication Critical patent/RS55813B2/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/58—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4
    • C07D311/66—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/4973—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom
    • A61K8/498—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom having 6-membered rings or their condensed derivatives, e.g. coumarin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

Opis
Oblast ovog pronalaska
[0001] Ovaj pronalazak odnosi se na oblast ljudske i životinjske bolesti i kozmetike. Ovaj pronalazak određenije odnosi se na jedinjenja kao što su Trolox™-derivati za tretiranje stanja koja su povezana sa mitohondrijalnom disfunkcijom ili mitohondrijalnim deficijencijama, uključujući štetne efekte lekova koji izazivaju mitohondrijalnu disfunkciju, za tretiranje neoplastičnih bolesti i za kozmetičku primenu protiv starenja kože.
Pozadina ovog pronalaska
[0002] Mitohondrije su esencijalne organele koje konstituišu 'elektrane' ćelija. Defekti u ovim organelama često vodi ka različitim teškim metaboličkim poremećajima koji utiču na organe koji imaju visoko energetske zahteve, kao što su mišić i mozak. Sa incidecom od najmanje 1 u 5000 pojedinaca, smatra se najučestalijom grupom urođenih grešaka metabolizma. Štaviše, kako je programirana ćelijska smrt (apoptoza) aktivirana od strane mitohondrija, defekti u ovim organelama imaju posledice van ovih bolesti, koje ih inicijalno dovode do naše pažnje, i uključeni su u kancerogene i neurodegenerativne bolesti kao što su Alchajmer i Parkinson pokazali. Mnogi uobičajeno korišćeni lekovi kao NRTI, neki antibiotici i anti-epileptični lekovi, mogu da izazovu mitohondrijalnu disfunkciju. Do sada nije bio dostupan efektivan tretman koji bi lečio ili poboljšavao ova stanja bolesti.
[0003] Jedna od primarnih funkcija mitohondrija je oksidativna fosforilacija (OXPHOS). Molekul adenozin trifosfata (ATP) funkcioniše kao energetski "opticaj" ili energetski nosač u ćeliji, a eukariotske ćelije derivatizuju većinu njihovog ATP iz biohemijskih procesa koje izvode mitohondrije, uključujući ciklus limunske kiseline, koji generiše redukovan NADH H<+>iz oksidisanog NAD<+>, i OXPHOS, tokom kojeg NADH H<+>se oksidiše nazad u NAD<+>. Elektroni oslobođeni oksidacijom NADH H<+>prebacuju se niz serije proteinskih komplekasa (Kompleks I, Kompleks II, Kompleks III, i Kompleks IV) poznati kao mitohondrijalni respiratorni lanac. Ovi kompleksi ugrađeni su u unutrašnjoj membrani mitohondrija. Kompleks IV, na kraju ovog lanca, transferuje elektrone u kiseonik, koji se redukuje u vodu. Energija oslobođena kako ovi elektroni prelaze komplekse koristi se da generiše neki protonski gradijent kroz unutrašnju membranu mitohondrija, što stvara elektrohemijski potencijal duž unutrašnje membrane. Još jedan proteinski kompleks, Kompleks V (koji nije direktno povezan sa Kompleksima I, II, III i IV) koristi energiju uskladištenu od strane elektrohemijskog gradijenta kako bi se ADP konvertovao u ATP.
[0004] Doprinos mitohondrijalne disfunkcije u humanoj bolesti prepoznat je već kasnih 1980-tih, kada se za materalno nasledne tačkaste mutacije, kao i delecije koje nastaju spontano tokom razvoja, dokazalo da su povezane sa retkim neurološkim sindromima. Mitohondrijalna disfunkcija doprinosi mnogim stanjima bolesti. Neke mitohondrijalne bolesti nastaju usled mutacija ili delecija u mitohondrijalnom genomu. Ukoliko je granična proporcija mitohondrija u ćeliji defektivna, i ako granična proporcija takvih ćelija unutar tkiva ima defektivne mitohondrije, mogu se pojaviti simptomi disfunkcije tkiva ili organa. Praktično, bilo koje tkivo može biti zahvaćeno, i mogu biti prisutni razni simptomi, u zavisnosti od obima u kojem su različita tkiva uključena. Neki primeri mitohondrijalnih bolesti su Fridrajhova Ataksija (FRDA), Leberova nasledna optička neuropatija (LHON), dominantna optička atrofija (DOA); mitohondrijalna miopatija, encefalopatija, laktatna acidoza, i šlog (MELAS), sindrom mioklonusne epilepsije povezane sa nepravilnim crvenim vlaknima (MERRF), Leighov sindrom, i oksidativni fosforilacioni poremećaji. Najveći broj mitohondrijalnih bolesti uključuju decu koja pokazuju znake i simptome ubrzanog starenja, uključujući neurodegenerativne bolesti, šlog, slepilo, oštećenje sluha, dijabetes, i otkazivanje srca.
[0005] Tek nekoliko tretmana je dostupno za pacijente koji boluju od ovih mitohondrijalnih bolesti. Lek idebenon (CoQ10varijanta) odobren je za tretiranje Fridrajhove Ataksije (Bénit et al., 2010, Trends Mol Med, 16:210-7; Klopstock et al., 2011, Brain,134:2677-86). Još jedno jedinjenje, MitoQ10(mitokvinon), predloženo je za tretiranje mitohondrijalnih poremećaja (US 7,179,928), ali klinički rezultati za MitoQ još uvek nisu prijavljeni. Uspešna tretmanska strategija razvijena je za pacijente sa sekundarnim mitohondrijalnim poremećajem koji uključuje Ulrihovu kongenitalnu mišićnu distrofiju i Bethlemovu miopatiju. Patogeni mehanizam u ovim miopatijama uključuje neodgovarajuće otvaranje mitohondrijalnih propustljivo tranzicionih pora. Ova aktivnost je sprečena kod pacijenata tretiranih sa desenzibilatorom CSA propustljivo tranzicionih pora (ciklosporin A; Angelin et al., 2007, Proc Natl Acad Sci USA, 104:991-6; Merlini et al., 2008, Proc Natl Acad Sci U S A, 105:5225-9).
[0006] Pregled trenutnih kliničkih ispitivanja koja su povezana sa mitohondrijalnom bolesti, mogu se pronaći online (www.clinicaltrials.gov/ct2/results?term=mitochondrial+disease); ona uključuju ispitivanja CoQ10za tretiranje mišićne slabosti i mitohondrijalnih bolesti, dijetetske suplemente za MELAS, EPI-743 za mitohondrijalne bolesti, humani hormon rasta za gojaznost, nutriciona terapija za dijabetes, pioglitazon za dijabetes, idebenon za MELAS, i vitamin E za mitohondrijalni nedostatak trofunkcijalnog proteina.
[0007] WO 2012/019032 opisuje postupke tretiranja, prevencije, ili suzbijanja simptoma povezanih sa mitohondrijalnim poremećajem i/ili modulisanje, normalizovanje, ili poboljšanje jednog ili više energetskih biomarkera jedne ili više energija, kod kojih se daju analozi vitamina K.
[0008] WO 2012/019029 opisuje postupke tretiranja, prevencije, ili suzbijanja simptoma povezanih sa mitohondrijalnim poremećajem i/ili modulisanje, normalizovanje, ili poboljšanje jednog ili više energetskih biomarkera jednog ili više energetski, kod kojih se daju naftokvinoni i njihovi derivati.
[0009] Distelmaier et al. (Antioxid Redox Signal.2012, June 13 (in press), PMID 22559215) opisuju da Trolox™ (6-hidroksi-2,5,7,8-tetrametilhroman-2-karboksilna kiselina) redukuje nivoe ROS, povišenu mitohondrijalnu filamentaciju posredovanu mitofusinima i ekspresiju mitohondrijalnog kompleksa I, aktivnost citratne sintaze i OXPHOS enzima i ćelijsku O2potrošnju kod kultivisanih fobroblasta zdrave ljuske kože.
[0010] Međutim, i dalje postoji potreba u ovoj oblasti za efektivnim sredstvom za modulisanje mitohondrijalne funkcije kako bi se one primenile u tretiranjima mitohondrijalne bolesti i/ili stanja povezanog sa mitohondrijalnom disfunkcijom, u tretiranju neoplastične bolesti ili za kozmetičku primenu.
Suština ovog pronalaska
[0011] U prvom aspektu ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenje opšte formule (I):
gde
- L je linker koji obuhvata 1 do 10 opciono supstituisanih atoma kičme odabranih od ugljenika, azota i kiseonika, pri čemu se L bira od L<2>-L<26>; i
- R<1>i R<2>su svaki nezavisno odabrani od vodonika i C1-C6alkila, ili R<1>i R<2>su međusobno spojeni radi obrazovanja drugog linkera između atoma amidnog azota i atoma katjonskog azota, ili R<1>je spojen sa R<1’>u 4-10-članoj cikličnoj strukturi i/ili R<2>je spojen sa R<2’>u 4-10-članoj cikličnoj strukturi; i
- R<3>je odabran od vodonika i C1-C6alkila, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka, ili R<3>je odsutan kada je atom katjonskog azota deo iminskog ostatka; i
- R<4>je odabran od vodonika i C1-C6alkila, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka; i
- R<5>je spojen sa R<5’>u 4-10-članoj cikličnoj strukturi, i
- X<->je farmaceutski prihvatljiv anjon,
pri čemu to jedinjenje nije:
(i)jedinjenje formule (I), u kojem L = -(CH2)3-(L<3>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H i X = Cl;
(iii)jedinjenje formule (I), u kojem L = -(CH2)3-(L<3>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = TFA, koje je u S-konfiguraciji na 2-položaju;
[0012] Poželjno jedinjenje prema ovom pronalasku je jedinjenje u kojem:
- L = L<2>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<3>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<4>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili
- L = L<5>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili
- L = L<6>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili
- L = L<3>, R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= Me; X = I; ili
- L = L<7>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<8>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<9>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<10>, R<1>-R<1'>= L<1>, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili
- L = L<11>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<12>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<13>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<14>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<15>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<11>, R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<16>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<17>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<16>, R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<18>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<3>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<19>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<3>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<20>, R<1>= H, R<2>= H, R<6>-R<6'>= L<3>, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<21>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<1>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<22>, R<1>-R<1'>= L<1>, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<23>, R<1>-R<1'>= L<1>, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<24>, R<1>-R<1'>= L<3>, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<25>, R<1>-R<1'>= L<3>, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<26>, R<1>= H, R<2>= H, R<6>-R<6'>= L<1>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<19>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<3>, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<19>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<1>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<21>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<1>, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl.
[0013] U jednom poželjnom ostvarenju, jedinjenje prema ovom pronalasku je jedinjenje u kojem:
- L = L<5>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili
- L = L<8>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<11>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<12>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X<->= Cl; ili
- L = L<17>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<16>, R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<19>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<3>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<21>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<1>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<26>, R<1>= H, R<2>= H, R<5>-R<5'>= L<1>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<19>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<3>, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<21>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<1>, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl.
[0014] U još jednom poželjnom ostvarenju, jedinjenje prema ovom pronalasku je jedinjenje u kojem:
- L=L<3>, R<1>=H, R<2>=Me, R<3>=Me, R<4>=Me; X=I; ili
- L=L<1>, R<1>=H, R<2>=Me, R<3>=Me, R<4>=Me; X=I.
[0015] U drugom aspektu, ovaj pronalazak odnosi se na farmaceutsku ili kozmetičku kompoziciju koja obuhvata jedinjenje prema ovom pronalasku.
[0016] U trećem aspektu, ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenje prema ovom pronalasku, za upotrebu kao lek.
[0017] U četvrtom aspektu, ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenje prema ovom pronalasku, za upotrebu u modulisanju najmanje jedne mitohondrijalne morfologije i ekspresije OXPHOS enzima.
[0018] U petom aspektu, ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenje prema ovom pronalasku, za upotrebu u tretiranju, prevenciji, ili suzbijanju simptoma povezanih sa mitohondrijalnim poremećajem ili sa stanjem povezanim sa mitohondrijalnom disfunkcijom, gde, poželjno jedinjenje je jedinjenje u kojem:
- L = L<5>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili
- L = L<8>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<11>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<12>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X<->= Cl; ili
- L = L<17>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<16>, R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<19>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<3>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<21>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<1>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<26>, R<1>= H, R<2>= H, R<5>-R<5'>= L<1>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<19>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<3>, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<21>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<1>, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl.
[0019] Poželjno u petom aspektu, mitohondrijalni poremećaj je poremećaj odabran iz grupe koju čine: Mioklona epilepsija; Mioklona epilepsija sa nepravilnim crvenim vlaknima (MERRF); Leberova nasledna optička neuropatija (LHON); neuropatija ataksija i retinitis pigmentosa (NARP); Mitohondrijalna miopatija, encefalopatija, laktatna acidoza, šlog (MELAS); Leighov sindrom; Sindrom nalik leighovom sindromu; Dominantna optička atrofija (DOA); Kearns-Sayre sindrom (KSS); Maternalno nasleđen dijabetes i Nagluvost (MIDD); Alpers-Huttenlocher sindrom; Ataksija neuropatija spektar; Hronična progresivna spoljna oftalmoplegija (CPEO); Pirsonov sindrom; Mitohondrijalna neuro-gastro-intestinalna encefalopatija (MNGIE); Sengersov sindrom; 3-metilglutakonska aciduria, senzorineuralna nagluvost, encefalopatija i neuroradiološki nalazi sindroma nalik leighovom sindromu (MEGDEL); miopatija; mitohondrijalna miopatija; kardiomiopatija; i encefalomiopatija, SURFS (COX deficijentan Leighov sindrom usled deficijencije presićenosti proteina kompleksa IV) i izolovane ili kombinovane OXPHOS deficijencije sa do sada nerešenim genetskim defektom uključujući poremećenu oksidaciju piruvata i ATP plus PCr stope proizvodnje.
[0020] Poželjno u petom aspektu, stanje povezano sa mitohondrijalnom disfunkcijom je stanje odabrano iz grupe koju čine: Fridrajhova Ataksija (FRDA); renalna tubularna acidoza; retinopatija, Parkinsonova bolest; Alchajmerova bolest; amiotrofična lateralna skleroza (ALS); Hantingtonova bolest; razvojni pervazivni poremećaji; gubitak sluha; nagluvost; dijabetes; starenje i štetni efekti lekova koji vode ka mitohondrijalnoj disfunkciji.
[0021] Dalje je poželjno da se, u petom aspektu, merljivi klinički marker koristi za određivanje efikasnosti terapije koja koristi jedinjenja ovog pronalaska, kod kojih, poželjno, klinički marker je jedan ili više markera odabranih iz grupe koju čine nivoi mlečne kiseline (laktata), bilo u celokupnoj krvi, plazmi, cerebrospinalnoj tečnosti, ili cerebralnoj ventrikularnoj tečnosti; nivoi pirogrožđane kiseline (piruvata), bilo u celokupnoj krvi, plazmi, cerebrospinalnoj tečnosti, ili cerebralnoj ventrikularnoj tečnosti; odnosi laktata/piruvata, bilo u celokupnoj krvi, plazmi, cerebrospinalnoj tečnosti, ili cerebralnoj ventrikularnoj tečnosti; amino kiseline, određenije alanin, citrulin i prolin u celokupnoj krvi, plazmi ili cerebrospinalnoj tečnosti, organske kiseline u telesnim tečnostima; FGF21 u serumu i mišićima skeleta; nivoi fosfokreatina, NADH (NADH H<+>) ili NADPH (NADPH H<+>) nivoi; NAD ili NADP nivoi; ATP nivoi; anaerobni prag; nivoi redukovanog koenzima Q (CoQ<red>); nivoi oksidiranog koenzima Q (CoQ<ox>; nivoi ukupnog koenzima Q (CoQ<tot>); nivoi oksidiranog citohroma C; nivoi redukovanog citohroma C; odnos oksidiranog citohroma C/redukovanog citohroma C; nivoi acetoacetata, nivoi beta-hidroksi butirata, odnos acetoacetata/betahidroksi butirata, nivoi 8-hidroksi-2’-deoksigvanozina (8-OHdG); nivoi reaktivnih kiseoničnih vrsta; i nivoi potrošnje kiseonika (VO2), nivoi izlaza ugljen dioksida (VCO2), i respiratorni koeficijent (VCO2/VO2).
[0022] U šestom aspektu, ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenje prema ovom pronalasku, za upotrebu u tretiranju, prevenciji, ili suzbijanju simptoma povezanih sa nekom neuroplastičnom bolesti, gde, poželjno jedinjenje je jedinjenje u kojem:
- L=L<3>, R<1>=H, R<2>=Me, R<3>=Me, R<4>=Me; X=I; ili
- L=L<1>, R<1>=H, R<2>=Me, R<3>=Me, R<4>=Me; X=I.
[0023] Poželjno u tom šstom aspektu neoplastična bolest je kancer, poželjno kancer odabran iz grupe koja obuhvata karcinom bazalnih ćelija, kancer kostiju, kancer creva, kancer mozga, kancer dojke, cervikalni kancer, leukemiju, kancer jetre, kancer pluća, limpfon, melanom, kancer ovarijuma, kancer pankreasa, kancer prostate ili kancer tiroidne žlezde.
[0024] U sedmom aspektu, ovaj pronalazak odnosi se na kozmetički postupak za tretiranje ili odlaganje daljeg starenja kože kod subjekta, pri čemu postupak obuhvata fazu nanošenja na kožu subjekta efektivne količine kompozicije koja obuhvata jedinjenje prema ovom pronalasku, gde poželjno jedinjenje je jedinjenje u kojem:
- L = L<5>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili
- L = L<8>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<11>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<12>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X<->= Cl; ili
- L = L<17>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<16>, R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<19>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<3>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<21>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<1>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<26>, R<1>= H, R<2>= H, R<5>-R<5'>= L<1>, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<19>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<3>, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili
- L = L<21>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<1>, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl.
[0025] U osmom aspektu, ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenje ovog pronalaska za upotrebu u postupku tretiranja, prevencije, ili suzbijanja simptoma povezanih sa mitohondrijalnim poremećajem ili sa stanjem povezanim sa mitohondrijalnom disfunkcijom, pri čemu postupak obuhvata davanje subjektu neke efektivne količine jedinjenja prema ovom pronalasku. U tom postupku mitohondrijalni poremećaj poželjno je poremećaj kako je prethodno definisan ili stanje poželjno je stanje kako je prethodno definisano. Dalje je poželjno, u tom postupku, da se merljivi klinički marker koristi za određivanje efikasnosti terapije koja koristi jedinjenja ovog pronalaska, kod kojih je, poželjno, klinički marker jedan ili više markera odabranih iz grupe koju čine nivoi mlečne kiseline (laktata), bilo u celokupnoj krvi, plazmi, cerebrospinalnoj tečnosti, ili cerebralnoj ventrikularnoj tečnosti; nivoi pirogrožđane kiseline (piruvata), bilo u celokupnoj krvi, plazmi, cerebrospinalnoj tečnosti, ili cerebralnoj ventrikularnoj tečnosti; odnosi laktata/piruvata, bilo u celokupnoj krvi, plazmi, cerebrospinalnoj tečnosti, ili cerebralnoj ventrikularnoj tečnosti; nivoi fosfokreatina, NADH (NADH H<+>) ili NADPH (NADPH H<+>) nivoi; NAD ili NADP nivoi; ATP nivoi; anaerobni prag; nivoi redukovanog koenzima Q (CoQ<red>); nivoi oksidiranog koenzima Q (CoQ<ox>; nivoi ukupnog koenzima Q (CoQ<tot>); nivoi oksidiranog citohroma C; nivoi redukovanog citohroma C; odnos oksidiranog citohroma C/redukovanog citohroma C; nivoi acetoacetata, nivoi beta-hidroksi butirata, odnos acetoacetata/betahidroksi butirata, nivoi 8-hidroksi-2’-deoksigvanozina (8-OHdG); nivoi reaktivnih kiseoničnih vrsta; i nivoi potrošnje kiseonika (VO2), nivoi izlaza ugljen dioksida (VCO2), i respiratorni koeficijent (VCO2/VO2).
Opis ovog pronalaska
[0026] U prvom aspektu ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenje koje je derivat 6-hidroksi-2,5,7,8-tetrametilhroman-2-karboksilne kiseline, koje je takođe poznato pod tržišnim imenom Trolox™. U jedinjenju ovog pronalaska, ostatak karboksilne kiseline zamenjen je nekim amidnim ostatkom, gde je atom azota amidnog ostatka povezan linkerom sa katjosnkim atomom azota. Ovaj katjosnki atom azota poželjno formalno potiče iz protonacije ili alkilacije, poželjno protonacije ili metilacije trivalentnog atoma azota. Trivalentni atom azota poželjno je aminski ostatak, bilo primarni, sekundarni ili tercijarni, ili neki iminski ostatak, bilo primarni ili sekundarni. Kontrajon (X-) atoma katjonskog azota je negativno naelektrisani jon, poželjno monovalentan negativno nalektrisan jon, poželjnije neki anjon kako je prethodno indikovano.
[0027] Sinteza jedinjenja ovog pronalaska ne moraju da obuhvataju protonaciju ili alkilaciju nekog aminskog ili iminskog atoma azota. Atom katjonskog azota takođe može biti obrazovan različitom putanjom. Ako je tako, atom katjonskog azota samo "formalno" potiče od protonacije ili alkilacije nekog aminskog ili iminskog atoma azota.
[0028] Jedinjenje ovog pronalaska može biti identifikovano opštom formulom (I):
u kojoj
- L je linker koji obuhvata 1 do 10 opciono supstituisanih atoma kičme odabranih od ugljenika, azota i kiseonika, pri čemu se L bira od L<2>-L<26>; i
- R<1>i R<2>su svaki nezavisno odabrani od vodonika i C1-C6alkila, ili R<1>i R<2>su međusobno spojeni radi obrazovanja drugog linkera između atoma amidnog azota i atoma katjonskog azota, ili R<1>je spojen sa R<1’>u 4-10-članoj cikličnoj strukturi i/ili R<2>je spojen sa R<2’>u 4-10-članoj cikličnoj strukturi; i
- R<3>je odabran od vodonika i C1-C6alkila, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka, ili R<3>je odsutan kada je atom katjonskog azota deo iminskog ostatka; i
- R<4>je odabran od vodonika i C1-C6alkila, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka; i
- R<5>je spojen sa R<5’>u 4-10-članoj cikličnoj strukturi, i
- X<->je farmaceutski prihvatljiv anjon,
pri čemu to jedinjenje nije:
(i)jedinjenje formule (I), u kojem L = -(CH2)3-(L<3>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H i X = Cl;
1
(iii)jedinjenje formule (I), u kojem L = -(CH2)3-(L<3>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = TFA, koje je u S-konfiguraciji na 2-položaju;
[0029] Jedinjenje identifikovano opštom formulom (I) obuhvata najmanje jedan hiralni atom ugljenika (stereocentar), tj. atom na 2-položaju Trolox™-ostatka. Oba i jedinjenje koje ima S-konfiguraciju kao i jedinjenje koje ima neku R-konfiguraciju atoma ugljenika na 2-položaju obuhvaćena su u ovom pronalasku, kao i mešavine različitih stereoizomera. Takva mešavina može imati jednu od konfiguracija u enantiomernom višku, ili mogu biti racemske. Kada god je dodatni stereocentar prisutan u jednjenju prema ovom pronalasku, na primer u linkeru, on može postojati kao S-konfiguracija, kao R-konfiguracija, ili kao mešavina obe konfiguracije. Takva mešavina može imati jednu od konfiguracija u enantiomernom višku, ili mogu biti racemske. Ukoliko je više od jednog stereocentra prisutno u jednjenju prema ovom pronalasku, prethodno se odnosi za svaki stereocentar nezavisno.
[0030] Kada je atom katjonskog azota deo iminskog ostatka, linker L obuhvata najmanje jednu dvostruku vezu, smeštena između atoma katjonskog azota i naspramnog linkera atoma kičme. U tom slučaju, R<3>je odsutan. Kada je atom katjonskog azota deo nekog aminskog ostatka, povezan je za linker putem jednostruke veze, a R<3>je prisutan. U slučaju da je R<3>prisutan, R<3>je odabran od vodonika (H) ili C1-C6alkila, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka, poželjno R<3>je H ili C1-C4alkil, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka, poželjnije R<3>je H ili C1-C2alkil, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka. Atomi halogena uključuju fluor (F), hlor (Cl), brom (Br), jod (I), i astatin (At), poželjno atom halogena je fluor (F). Poželjni alkoksi ostaci uključuju metoksi i etoksi. Kod haloalkoksi ostataka, najmanje jedan atom vodonika nekog alkoksi ostatka zamenjen je atomom halogena, poželjno sa F. Odgovarajući ostaci za R<3>uključuju, poželjno si ograničeni na, H, metil (Me), trifluorometil (-CF3), etil (Et), izopropil (iPr), ciklopropil (-cPr), metilen ciklopropil (-CH2cPr), n-propil (n-Pr), 2,2,2-trifluoroetil (-CH2CF3), metoksimetil (-CH2OCH3). Poželjnije R<3>je H ili metil (Me), najpoželjnije R<3>je H. Alternativno, R<3>je poželjno C1-C4alkil, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka, poželjnije R<3>je C1-C2alkil, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka. Poželjni ostaci koji obuhvataju iminski ostatak uključuju gvanidin i amidin, gde jedan od atoma azota je supstituisan radi obrazovanja veze sa atomom amidnog azota pomoću linkera L.
[0031] R<4>je supstituent na atomu katjonskog azota, koji potiče od formalne protonacije ili alkilacije aminskog ili iminskog ostatka. Dakle, jedinjenje prema ovom pronalasku, u pogledu prisustva atoma katjonskog azota i X-, je neka so, poželjno neka farmaceutski prihvatljiva so. Farmaceutski prihvatljive soli su one soli koje se mogu davati kao lekovi ili farmaceutici ljudima i/ili životinjama. Farmaceutski prihvatljive soli aminskog ili iminskog ostatka jedinjenja prema ovom pronalasku su one poznate stručnjacima iz ove oblasti, i koje potiču od formalnog tretiranja jedinjenja nekom kiselinom ili agensom za alkilaciju. Pogodne kiseline uključuju organske kiseline ili neorganske kiseline. Primeri neorganskih kiselina uključuju, ali nisu ograničeni na, hlorovodoničnu kiselinu (HCl), bromovodoničnu kiselinu (HBr), jodovodoničnu kiselinu (HI), sumpornu kiselinu (H2SO4), azotnu kiselinu (HNO3), trifluorsirćetneu kiselinu (TFAH ili CF3CO2H) i fosfornu kiselinu (H3PO4). Primeri organskih kiselina uključuju, ali nisu ograničeni na, mravlju kiselinu, sirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, glikolnu kiselinu, pirogrožđanu kiselinu, oksalnu kiselinu, maleinsku kiselinu, malonsku kiselinu, ćilibarnu kiselinu, fumarnu kiselinu, vinsku kiselinu, limunsku kiselinu, benzojevu kiselinu, cimetnu kiselinu, bademovu kiselinu, sulfonsku kiselinu i salicilnu kiselinu. Kada se neka od ovde navedenih kiselina primeni za formalno pripremanje soli, R<4>je vodonik, a vrsta kiseline određuje kontra jon X. Alternativno, ta se se može obrazovati formalnim tretiranjem sa agesnom za alkilaciju. Pogodni agensi za alkilaciju uključuju, ali nisu ograničeni na, C1-C6alkil halogenide (kao što su metil jodid , etil jodid , propil jodid , butil hlorid, butil fluorid, butil bromid), dimetil sulfat, dimetil karbonat, metil triflat, metil fluorosulfonat, metil hlorosulfonat, metil metansulfonat i metil benzensulfonat. Ova so se može pripremiti konkretnim tretiranjem ne-slanog jedinjenja nekom kiselinom ili agensom za alkilaciju, kako je prethodno indikovano, ili drugim sredstvima poznatim u ovoj oblasti i/ili kako je dodatno opisano u nastavku.
[0032] R<4>je odabran od vodonika (H) ili C1-C6alkila, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka, poželjno R<4>je H ili C1-C4alkil, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka, poželjnije R<4>je H ili C1-C2alkil, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka. Atomi halogena uključuju fluor (F), hlor (Cl), brom (Br), jod (I), i astatin (At), poželjno atom halogena je fluor (F). Poželjni alkoksi ostaci uključuju metoksi i etoksi. Kod haloalkoksi ostataka, najmanje jedan atom vodonika alkoksi ostatka zamenjen je atomom halogena, poželjno sa F. Pogodni ostaci za R<4>uključuju, poželjno su ograničeni na, H, metil (Me), trifluorometil (-CF3), etil (Et), izopropil (iPr), ciklopropil (-cPr), metilen ciklopropil (-CH2cPr), n-propil (n-Pr), 2,2,2-trifluoroetil (-CH2CF3), metoksimetil (-CH2OCH3). Još poželjnije R<4>je H ili metil (Me), najpoželjnije R<4>je H. X može biti bilo koji anjon, poželjno fiziološki ili farmaceutski prihvatljiv anjon, poželjnije monovalentan anjon. X je poželjno odabran od F, Cl, Br, I, HSO4, NO3, TFA (CF3CO2), formata, acetata, propionata, glikolata, piruvata, oksalata, maleata, malonata, sukcinata, fumarata, tartarata, citrata, benzoata, cinamata, mandelata, sulfonata i salicilata. Poželjno, X je Cl, I, TFA ili format, poželjnije Cl, I ili TFA, najpoželjnije X je Cl. Kada atom katjonskog azota potiče od formalne protonacije, ta protonacija poželjno se izvodi vodonik hloridom (HCl), trifluorosirćetnom kiselinom (TFAH ili CF3CO2H) ili mravljom kiselinom (HCOOH), poželjnije sa HCl ili TFAH. Formalna metilacija poželjno se izvodi metil jodidom (MeI). Dakle, u jednom poželjnom ostvarenju, R<4>= Me kada X<->= I-, a R<4>= H kada X<->= Cl-, TFA<->ili format.
[0033] Pored pojava opisanih u nastavku, R<1>i R<2>su svaki nezavisno odabrani od vodonika (H) ili C1-C6alkila. Poželjno, R<1>je H ili C1-C2alkil, poželjnije R<1>je H ili metil (Me), najpoželjnije R<1>je H. Poželjno, R<2>je H ili C1-C2alkil, poželjnije R<2>je H ili metil (Me), najpoželjnije R<2>je Me.
[0034] U jednom ostvarenju, atom amidnog azota je povezan sa atomom katjonskog azota drugim linkerom. Ovaj drugi linker definisan je međusobnim spajanjem R<1>na atom amidnog azota i R<2>na atom katjonskog azota. Prema tome, atom amidnog azota, atom katjonskog azota, prvi linker i drugi linker zajedno obrazuju cikličnu strukturu, poželjno 4 - 10-člana ciklična struktura, poželjnije 5 - 8-člana ciklična struktura, najpoželjnije 6-člana ciklična struktura. U jednom poželjnom ostvarenju, drugi linker je -CH2-CH2- ili -CH2-CH2-CH2- most, najpoželjnije -CH2-CH2- most, gde su dva ili tri, poželjno dva, atoma ugljenika prisutni između atoma amidnog azota i atoma katjonskog azota.
[0035] U još jednom ostvarenju, atom amidnog azota je povezan sa atomom kičme linkera, čime se obrazuje ciklična struktura, poželjno 4 - 10-člana ciklična struktura, poželjnije 5 - 8-člana ciklična struktura, najpoželjnije 6-člana ciklična struktura. Atom kičme linkera za koji je povezan atom azota u ovom smislu ima supstituent R<1'>koji je međusobno spojen sa R<1>na atom amidnog azota. U ovom ostvarenju, atom katjonskog azota nije uključen u cikličnu strukturu, već je samo deo kičme linkera uključen. U jednom poželjnom ostvarenju, veza između atoma amidnog azota i atoma kičme linkera je -CH2-CH2- ili -CH2-CH2-CH2- most, najpoželjnije -CH2-CH2- most, gde su dva ili tri, poželjno dva, atoma ugljenika prisutna između atoma amidnog azota i atoma kičme linkera.
[0036] U još jednom ostvarenju, atom katjonskog azota je povezan sa atomom kičme linkera, čime se obrazuje ciklična struktura, poželjno 4 - 10-člana ciklična struktura, poželjnije 5 - 8-člana ciklična struktura, najpoželjnije 6-člana ciklična struktura. Atom kičme linkera za koji je povezan atom azota u ovom smislu ima supstituent R<2'>, koji je međusobno spojen sa R<2>na atom katjonskog azota. U ovom ostvarenju, atom amidnog azota nije uključen u cikličnu strukturu, već je samo deo kičme linkera uključen. U jednom poželjnom ostvarenju, veza između atoma katjonskog azota i atoma kičme linkera je -CH2-CH2- ili -CH2-CH2-CH2- most, najpoželjnije -CH2-CH2- most, gde su dva ili tri, poželjno dva, atoma ugljenika prisutni između atoma katjonskog azota i atoma kičme linkera. Takođe je moguće da veza postoji između R<1>na atomu amidnog azota i R<1'>supstituent na linkeru i između R<2>na atomu katjonskog azota i R<2>supstituenta na linkeru.
1
[0037] U jednom poželjnom ostvarenju, ratsvorljivost jedinjenja ovog pronalaska u vodi, izražena kao log(Pow) je između 2.0 i 5.0, poželjno između 2.5 i 4.5, poželjnije između 3.0 i 4.0. Log(Pow), logaritam particionog koeficijenta između 1-oktanola i vode, dobeo je poznata mera vodene rastvorljivosti.
Jedinjenja sa log(Pow) vrednost između 3 i 4 idealno su izbalansirani između dovoljne vodene rastvorljivosti za pripremanje vodenih rastvora ili suspenzije i dovoljne lipofilnosti radi obezbeđivanja efikasnog transporta jedinjenja kroz ćelijske membrane. Stručnjak će ceniti kako da odredi koja kombinacija L, R<1>, R<2>, R<3>, R<4>i X kako je prethodno opisano, obezbeđuje jedinjenje sa log(Pow) vrednosti između 3 i 4. Pogodni testovi za definisanje log(Pow) vrednosti jedinjenja dobro su poznati stručnjacima, i uključuju, ali nisu ograničeni na postupak protreasanja u bočici, ITIES, postupak ukapavanja ili primenom HPLC. Log(Pow) jedinjenja takođe se mogu predvideti primenom QSPR algoritama.
[0038] Pogodni linkeri L za povezivanje atoma amidnog azota sa atomom katjonskog azota, su linkeri koji poželjno obuhvataju 1 do 10 opciono supstituisanih atoma kičme poželjnije koji obuhvataju 1 do 8 opciono supstituisanih atoma kičme. L prema tome može da obuhvata 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 opciono supstituisanih atoma kičme. Ovde, atomi kičme su oni atomi koji sačinjavaju najkraći lanac između atoma amidnog azota i atoma katjonskog azota. Kičma može biti linearna struktura, ali takođe može biti deo ciklične strukture. Kada je kičma deo ciklične strukture, kičma je definisana kao najkraći lanac između atoma amidnog azota i atoma katjonskog azota. U takvim instancama jedan od atoma kičme obuhvata supstituent R<5>, a jedan od atoma kičme obuhvata supstituent R<5'>, poželjno dva različita atoma kičme obuhvataju supstituente R<5>i R<5>, gde su R<5>i R<5'>spojeni kako bi obrazovali cikličnu strukturu, poželjno 4 - 10-člana ciklična struktura, poželjnije 5 - 8-člana ciklična struktura, najpoželjnije 6-člana ciklična struktura. U ovom ostvarenju, atom amidnog azota i atom katjonskog azota nisu uključeni u cikličnu strukturu, već je samo deo kičme linkera uključen. U jednom poželjnom ostvarenju, veza između atom kičme(a) linkera, koja nosi R<5>i R<5>supstituente, je -(CH2)nmost, gde n = 1 - 6, poželjno -CH2-CH2- ili -CH2-CH2-CH2- most, gde su jedan do šest, poželjno dva ili tri, atoma ugljenika prisutni između the supstituisanih atoma kičme(i) linkera.
[0039] U jednom poželjnom ostvarenju, atomi kičme su odabrani od ugljenika, azota i kiseonika, poželjno od uglenika i azota. Takva kičma prema ovom poželjnom ostvarenju može biti identifikovana kao Cn-mNm, gde n označava ukupan broj atoma u kičmi, a m broj atoma azota u kičmi. Svako od n i m je ne-negativni ceo broj. Pogodni linkeri imaju n = 1 - 10 i m = 0 - 4, poželjno n = 2 - 7 i m = 0 - 3, poželjnije n = 4 - 7 i m = 0 - 2. Naročito poželjni linkeri imaju kičmu identifikovanu kao Cn-mNm, gde n = 2 i m = 0 (C2); n = 5 i m = 1 (C4N); n = 3 i m = 0 (C3); n = 4 i m = 1 (C3N); n = 7 i m = 2 (C5N2); n = 4 i m = 0 (C4); n = 6 i m = 1 (C5N); ili n = 5 i m = 0 (C5). Najpoželjnije, svi atomi kičme su atomi ugljenika (m = 0).
[0040] Kako bi se ispunili njihovi valentni zahtevi, atomi ugljenika i azota kičme linkera mogu nositi atome vodonika, mogu biti supstituisani, ili mogu biti prisutne dvostruke ili trostruke veze između naspramnih atoma kičme, što je uobičajeno shvaćeno kod stručnjaka iz ove oblasti. U kontekstu ovog pronalaska, vodonik se ne smatra supstituentima. Kada god je neki atom kiseonika prisutan kao atom kičme u linkeru, stručnjak će podrazumevati da taj atom kiseonika kičme ne nosi atome vodonika, supstituente ili dvostruke ili trostruke veze. Trostruke veze mogu biti prisutne između dva atoma ugljenika kičme. Atomi kičme, zajedno sa atomima vodonika i/ili supstituentima, sačinjavaju linker. U kontekstu ovog pronalaska, "opciono supstituisani" primenjuje se da ukaže da (kičma) atom može da nosi najmanje jedan ili više supstituenata, ili ne mora da nosi supstituente već umesto njih mogu biti prisutni 0 - 3 vodonika, kako bi se ispunili valentni zahtevi pomenutog (kičme) atoma.
[0041] Pogodni supstituenti uključuju ali nisu ograničeni na halogen, NH2, NHR<6>, N(R<6>)2, NHNH2, N3, NHC(=O)R<6>, NHC(=O)NHR<6>, NHC(=O)NH2, NHC(=O)OR<6>, OH, OR<6>, OC(=O)R<6>, R<6>(npr. alkil, cikloalkil), aralkil, alkenil, alkinil, aril, heteroaril, OC(=O)OR<6>, OC(=O)NHR<6>, O(SO2)R<6>, O(SO2)OH, O(PO2)OH, SH, SR<6>, C(=O)R<6>, alkil-NH2, alkil-OH, alkil-SH, C(=O)CF3, C(=O)OR<6>, C(=O)OH, C(=O)H, C(=O)OR<6>, C(=O)NH2, C(=O)NMe2, C(=O)N(R<6>)2, C(=S)NH2C(=S)SH, CN, NC, CNO, ONC, OCN, SCN, SNC, CNS, S(=O)R<6>, S(=O)2R<6>, S(=O)2(OH), P(=O)(OH)2ili P(=O)(OH)(OR<6>). Atomi sa dve ili više preostalih valenci, kao što su atomi ugljenika kičme, mogu da nose dvostruko vezan supstituent, kao što su okso (=O), imino (=NH ili =NR<6>), tiokso (=S), alkiliden (=CH2ili =CHR<6>ili =C(R<6>)2). Pored toga, dva supstituenta na istom atomu ili na različitim atomima može se spojiti radi obrazovanja cikličnih struktura. Ukoliko su dva supstituenta na jednom atomu kičme spojeni u cikličnoj strukturi, ova ciklična struktura može se smatrati povezanom preko spiro skraćenjem na kičmi. Ukoliko su dva supstituenta na različitim atomima kičme spojeni u cikličnoj strukturi, deo te ciklične strukture je (deo) kičma, a kičma se smatra najkraćim lancem atoma između atoma amidnog azota i atoma katjonskog azota. Kako je dalje naznačeno u nastavku, ciklična struktura takođe može biti obrazovana spajanjem jednog supstituenta na atomu kičme sa R<1>na atomu amidnog azota ili sa R<2>na atomu katjonskog azota. Ciklične strukture ovako obrazovane mogu biti u potpunosti ugljenične ili mogu obuhvatati 0-3 heteroatoma (npr. N, O, S i/ili P), i mogu da obuhvataju 0-3 dvostruke veze. Svi atomi u ovim cikličnim strukturama mogu opciono biti supstituisani. Primeri pogodnih cikličnih struktura su opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani cikloheteroalkil, opciono supstituisani aril ili opciono supstituisani heteroaril. Ovde iznad, svako R<6>je nezavisno alkilni ostatak, poželjno C1-C6alkilni ostatak, poželjnije C1-C2alkilni ostatak. Unutar R<6>, jedan ili više CH2ostataka mogu svaki nezavisno biti zamenjen jednim od O, S ili NH, i/ili jedan ili više CH ostataka mogu biti zamenjeni sa N.
1
[0042] U kontekstu ovog pronalaska, izraz "alkil" odnosi se zasićene alifatične grupe uključujući ravno lančane, razgranate, ciklične grupe, i njihove kombinacije, sa brojem atoma ugljenika kako je specificirano, ili ukoliko broj nije specificiran, poželjno sa do 12 atoma ugljenika. "Ravno lančana alkil" ili "linearna alkil" grupa odnosi se alkilne grupe koje nisu ni ciklične niti razgranate, često označene kao "nalkil" grupe. Jeda podskup alkil grupa je C1-C6alkil, koji uključuje grupe kao što su metil, etil, n-propil, izopropil, butil, n-butil, izobutil, sek-butil, t-butil, pentil, n-pentil, heksil, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, i bilo koju drugu alkil grupu koja sadrži između jednog i šest atoma ugljenika, pri čemu C1-C6alkil grupe mogu biti prikačene putem bilo koje valencije na C1-C6alkil grupama.
[0043] Poželjni supstituenti atoma kičme su alkil, kao što su metil (Me ili -CH3), karboksi (-C(=O)OH), okso (=O), primarni amino (-NH2).
[0044] Poželjni linkeri identifikovani su u nastavku kao L<2>do L<26>:
1
1
1
[0045] Ovde, isprekidana veza na levoj strani svake od struktura za L<2>do L<26>označava vezu između linkera i atoma amidnog azota, a isprekidana veza na desnoj strani svake od struktura za L<2>do L<26>označava vezu između linkera i atoma katjonskog azota. Linkeri prikazani kao hemijske formule orijentisani su u istom pravcu, tj. obešena veza na levoj strani svake od hemijskih formula za L<2>do L<26>označava vezu između linkera i atoma amidnog azota, a isprekidana veza na desnoj strani svake od hemijskih formula za L<2>do L<26>označava vezu između linkera i atoma katjonskog azota.
[0046] Svako pojavljivanje R<1'>je most između linkera i atoma amidnog azota, gde R<1'>je spojen sa R<1>preko pomenutog mosta, čime se formira 4 - 10-člana ciklična struktura, poželjno 5 - 8-člana ciklična struktura, najpoželjnije 6-člana ciklična struktura, koji je izgrađena od atoma amidnog azota, 1-4 atoma kičme linkera, i 1-4 atoma koji izvode veći deo spajanja R<1>i R<1'>Slično tome, svako pojavljivanje R<2'>je most između linkera i atoma katjonskog azota, gde R<2'>je spojen sa R<2>preko pomenutog mosta, čime se formira 4 - 10-člana ciklična struktura, poželjno 5 - 8-člana ciklična struktura, najpoželjnije 6-člana ciklična struktura, koja je izgrađena od atoma katjonskog azota, 1-4 atoma kičme linkera, i 1-4 atoma koji izvode veći deo spajanja R<2>i R<2'>. Slično tome, svako pojavljivanje R<5>i R<5'>je most između jednog atoma kičme linkera, koji nosi R<5>, i drugog atoma kičme linkera, koji nosi R<5>, gde R<5>je spojen sa R<5>preko pomenutog mosta, čime se formira 4 - 10-člana ciklična struktura, poželjno 5 - 8-člana ciklična struktura, najpoželjnije 6-člana ciklična struktura, koji je izgrađena od 2-5 atoma kičme linkera, i 1-5 atoma koji izvode veći deo spajanja R<5>i R<5>. Prema tome, kod linkera L<10>, L<22>, L<23>, L<24>i L<25>, R<1'>je spojen sa R<1>putem mosta, poželjno -CH2-CH2- ili -CH2-CH2-CH2- most, poželjnije -CH2-CH2- most. Prema tome, u jedinjenju koje obuhvata linker L<10>, gde R<1'>i R<1>su spojeni putem -CH2-CH2-mosta, atom amidnog azota je ugrađen u šesto-članu cikličnu strukturu, koja je izgrađena od atoma amidnog azota, dva atoma ugljenika i jednog atoma azota kičme linkera, i još dva atoma ugljenika koji izgrađuju most R<1>i R<1'>. Ovaj -CH2-CH2- most između atoma amidnog azota i centralnog atoma azota u kičmi linkera L<10>može biti prikazan kao L<1>. Slično tome, kod linkera L<18>, L<19>i L<21>, R<2'>je spojen sa R<2>putem mosta, poželjno -CH2-CH2- or-CH2-CH2-CH2-mosta, poželjnije -CH2-CH2-CH2- mosta. Slično tome, kod linkera L<20>i L<26>, R<5'>je spojen sa R<5>putem mosta, poželjno -CH2-CH2- ili -CH2-CH2-CH2- mosta, poželjnije -CH2-CH2- mosta.
[0047] Linkeri L<11>, L<12>, L<13>, L<14>, L<15>, L<18>(sve dok R<2>-R<2'>nije -C(O)-), L<19>(sve dok R<2>-R<2'>nije -CH2-), L<20>(sve dok R<5>-R<5'>nije -CH2-), L<21>(sve dok R<2>-R<2'>nije -CH2-CH2-), L<22>(sve dok R<1>-R<1'>nije -CH2-CH2-), L<23>(sve dok R<1>-R<1'>nije -CH2-CH2-), L<24>(sve dok R<1>-R<1'>nije -CH2-) i L<25>(sve dok R<1>-R<1'>nije -CH2-) obuhvataju dodatni
1
stereocentar. Prethodni stereoizomer, kada je prikazan u strukturama tih linkera, zamišljen je kao ilustrativan, ne kao ograničavajući. Kako je dalje prethodno ukazano, svaki stereocentar prisutan u jedinjenjima prema ovom pronalasku može pojedinačno biti prisutan u svakom od njegovih stereoizomernih oblika, bilo S ili R, ili kao mešavina oba izomera u bilo kom odnosu. Linker L<26>obuhvata disupstituisani cikloalkilni ostatak, poželjno disupstituisani cikloheksilni ostatak, te prema tome može se pojaviti bilo u cis-obliku ili trans-obliku, poželjno u trans-obliku.
[0048] U jednom ostvarenju ovog pronalaska, naročito poželjni linkeri su L<5>, L<8>, L" i L<12>, poželjniji linkeri su L<8>i L<11>, a najpoželjniji linker prema ovom ostvarenju ovog pronalaska je L<11>. Dodatni poželjni linkeri prema ovom ostvarenju su L<16>, L<17>, L<19>, L<21>i L<26>, poželjnije L<16>i L<19>. Prema tome, prema ovom ostvarenju, Poželjni linkeri su L<5>, L<8>, L<11>, L<12>, L<16>, L<17>, L<19>, L<21>i L<26>, poželjnije L<8>, L<12>, L<16>, L<17>, L<19>, L<21>i L<26>, najpoželjnije L<16>i L<19>. Poželjno, L<19>je kombinovan sa R<2>-R<2'>= L<1>ili L<3>, najpoželjnije sa R<2>-R<2'>= L<3>. Poželjno, L<21>je kombinovan sa R<2>-R<2'>= L<1>ili L<3>, najpoželjnije sa R<2>-R<2'>= L<1>. Poželjno, L<26>je kombinovan sa R<5>-R<5'>= L<1>ili L<3>, poželjnije with R<5>-R<5'>= L<1>, najpoželjnije sa R<5>-R<5'>= L<1>, gde je cikloheksil trans-1,4-disupstituisan. Naročito poželjna je kombinacija linkera L'<9>sa R<2>-R<2>= L<3>i R<3>= H, Me, Et, iPr, CH2OCH3ili CH2CF3, poželjnije R<3>= Me, Et, iPr ili CH2CF3.
[0049] U još jednom ostvarenju ovog pronalaska, još poželjniji linker je L<7>.
[0050] Poželjna jedinjenja prema ovom pronalasku identifikovana su u nastavku kao jedinjenja A do O, koja su definisana opštom formulom (I), u kojoj:
- za jedinjenje C: L = L<2>, R<1>=H, R<2>=H, R<3>=H, R<4>=H; X<->= Cl-;
- za jedinjenje D: L=L<3>, R<1>=H, R<2>=H, R<3>=H, R<4>=H; X-=Cl-;
- za jedinjenje E: L = L<4>, R<1>=H, R<2>=H, R<3>=odsutan, R<4>=H; X-=TFA-;
- za jedinjenje F: L = L<5>, R<1>=H, R<2>=H, R<3>=odsutan, R<4>=H; X-=TFA-;
- za jedinjenje G: L = L<6>, R<1>= H, R<2>=H, R<3>=odsutan, R<4>=H; X-=TFA-;
- za jedinjenje H: L = L<3>, R<1>=H, R<2>=Me, R<3>=Me, R<4>=Me; X-=I-;
- za jedinjenje J: L=L<7>, R<1>=H, R<2>= H, R<3>=odsutan, R<4>=H; X-=Cl-;
- za jedinjenje K: L = L<8>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>=odsutan, R<4>=H; X-=Cl-;
- za jedinjenje L: L = L<9>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>=odsutan, R<4>=H; X-=Cl-; ,
- za jedinjenje M: L =L<10>, R<1>-R<1'>=L<1>, R<2>=H, R<3>=odsutan, R<4>=H; X-=TFA-;
- za jedinjenje N: L =L<11>, R<1>=H, R<2>=H, R<3>=H, R<4>=H; X-= Cl-;
- za jedinjenje O: L =L<12>, R<1>=H, R<2>=H, R<3>= odsutan, R<4>=H; X-=Cl-.
2
[0051] Dodatna poželjna jedinjenja prema ovom pronalasku identifikovana su u nastavku kao jedinjenja P do AH, koja su definisana opštom formulom (I), u kojoj:
- za jedinjenje P: L = L<13>, R<1>=H, R<2>=H, R<3>=H, R<4>=H; X-=Cl-; = Cl-;
- za jedinjenje Q: L=L<14>, R<1>=H, R<2>=H, R<3>=H, R<4>=H; X-=Cl-;
- za jedinjenje R: L=L<15>, R<1>=H, R<2>=H, R<3>=H, R<4>=H; X-=Cl-;
- za jedinjenje S: L=L<11>, R<1>=H, R<2>=Me, R<3>=Me, R<4>=H; X-=Cl-;
- za jedinjenje T: L = L<16>, R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X<->= Cl-;
- za jedinjenje U: L =L<17>, R<1>=H, R<2>=H, R<3>=H, R<4>=H; X-= Cl-;
- za jedinjenje V: L =L<16>, R<1>=H, R<2>=Me, R<3>=Me, R<4>=H; X-=Cl-;
- za jedinjenje W: L =L<8>R<1>=H, R<2>-R<2'>=L<3>, R<3>=H, R<4>= H; X<->= Cl-;
- za jedinjenje X: L =L<19>, R<1>=H, R<2>-R<2'>=L<3>, R<3>= H, R<4>= H; X-= Cl-;
- za jedinjenje Y: L =L<20>, R<1>=H, R<2>=H, R<5>-R<5'>=L<3>, R<3>=odsutan, R<4>=H; X-=Cl-;
- za jedinjenje Z: L=L<21>, R<1>=H, R<2>-R<2'>=L<1>, R<3>= H, R<4>= H; X-= Cl-;
- za jedinjenje AA: L =L<22>, R<1>-R<1>=L<1>, R<2>= H, R<3>=H, R<4>= H; X-=Cl-;
- za jedinjenje AB: L =L<23>, R<1>-R<1'>=L<1>, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X<->= Cl-;
- za jedinjenje AC: L =L<24>, R<1>-R<1>=L<3>, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X-=Cl-;
- za jedinjenje AD: L =L<25>, R<1>-R<1'>=L<3>, R<2>=H, R<3>=odsutan, R<4>=H; X<->=Cl-;
- za jedinjenje AE: L = L<26>, R<1>=H, R<2>= H, R<5>-R<5'>= L<1>, R<3>= H, R<4>=H; X-= Cl-.
- za jedinjenje AF: L = L<19>, R<1>=H, R<2>-R<2'>=L<3>, R<3>=Me, R<4>= H; X-= Cl-;
- za jedinjenje AG: L = L<19>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<1>, R<3>= H, R<4>= H; X<->= Cl-;
- za jedinjenje AH: L = L<21>, R<1>= H, R<2>-R<2'>= L<1>, R<3>= Me, R<4>= H; X<->= HCOO-
[0052] U jednom ostvarenju, jedinjenje ovog pronalaska nije jedinjenje D, a poželjno je odabrano iz grupe koju čine jedinjenja C i E do H i J do AH, poželjnije iz grupe koju čine jedinjenja C i E do H i J do P.
[0053] U jednom ostvarenju ovog pronalaska, naročito poželjna jedinjenja su jedinjenja F, K, N i O. Poželjnija jedinjenja prema ovom pronalasku su jedinjenja K i N. Najpoželjnija jedinjenje prema ovom ostvarenju ovog pronalaska je jedinjenje N. Dodatna poželjna jedinjenja prema ovom ostvarenju su jedinjenja U, V, T, X, Z, AE, AF, AG i AH, poželjnije jedinjenja U, V, X, Z, AE, AF i AH, najpoželjnije jedinjenja V, X i AF. Prema tome, prema ovom ostvarenju, poželjna jedinjenja su F, K, N, O, U, V, T, X, Z, AE, AF, AG i AH, poželjnije K, N, U, V, X, Z, AE, AF i AH, najpoželjnije V, X i AF.
[0054] Jedinjenje F može imati R-konfiguraciju, S-konfiguraciju ili neku njihovu mešavinu, poželjno jedinjenje F je mešavina R- i S-enantiomera, poželjnije racemska mešavina. Jedinjenje K može imati Rkonfiguraciju, S-konfiguraciju ili neku njihovu mešavinu, poželjno jedinjenje K je mešavina R- i S-enantiomera, poželjnije racemska mešavina. Jedinjenje N može imati R,R-konfiguraciju, R,S-konfiguraciju, S,R-konfiguraciju, S,S-konfiguraciju ili bilo koju njihovu mešavinu, poželjno jedinjenje N je mešavina R- i S-diastereomera, poželjnije 1/1 (mol/mol) mešavina. Jedinjenje O može imati R,R-konfiguraciju, R,S-konfiguraciju, S,R-konfiguraciju, S,S-konfiguraciju ili bilo koju njihovu mešavinu, poželjno jedinjenje O je mešavina R- i S-diastereomera poželjnije 1/1 (mol/mol) mešavina. Jedinjenje U može imati R-konfiguraciju, S-konfiguraciju ili neku njihovu mešavinu, poželjno jedinjenje U ima R-konfiguraciju ili S-konfiguraciju. Jedinjenje V može imati R-konfiguraciju, S-konfiguraciju ili neku njihovu mešavinu, poželjno jedinjenje V ima R-konfiguraciju. Jedinjenje T može imati R-konfiguraciju, S-konfiguraciju ili neku njihovu mešavinu, poželjno jedinjenje T ima R-konfiguraciju ili S-konfiguraciju. Jedinjenje X može imati R,R-konfiguraciju, R,S-konfiguraciju, S,R-konfiguraciju, S,S-konfiguraciju ili bilo koju njihovu mešavinu, poželjno jedinjenje X ima S,R-konfiguraciju. Jedinjenje Z može imati R-konfiguraciju, S-konfiguraciju ili neku njihovu mešavinu, poželjno jedinjenje Z je mešavina R- i S-enantiomera, poželjnije racemska mešavina. Jedinjenje AE može imati R,trans-konfiguraciju, R,ciskonfiguraciju, S,trans-konfiguraciju, S,cis-konfiguraciju ili bilo koju njihovu mešavinu, poželjno jedinjenje AE ima R,trans-konfiguraciju ili S,trans-konfiguraciju. Jedinjenje AF može imati R,R-konfiguraciju, R,S-konfiguraciju, S,R-konfiguraciju, S,S-konfiguraciju ili bilo koju njihovu mešavinu, poželjno jedinjenje AF ima S,R-konfiguraciju. Jedinjenje AG može imati R,R-konfiguraciju, R,S-konfiguraciju, S,R-konfiguraciju, S,S-konfiguraciju ili bilo koju njihovu mešavinu, poželjno jedinjenje AG ima S,S-konfiguraciju ili S,R-konfiguraciju. Jedinjenje AH može imati R-konfiguraciju, S-konfiguraciju ili neku njihovu mešavinu, poželjno jedinjenje AH ima S-konfiguraciju. Ovde, prva oznaka (R ili S) konfiguracije je za 2-položaj Trolox ostatka, i u slučaju da je dodatni stereocentar prisutan u jednjenju prema ovom pronalasku, čiju konfiguraciju definiše druga oznaka. Najpoželjnija jedinjenja prema ovom pronalasku su jedinjenje V u R-konfiguraciji (R-V), jedinjenje X u S,R-konfiguraciji (S,R-X) i jedinjenje AF u S,R-konfiguraciji (S,R-AF).
[0055] U još jednom ostvarenju ovog pronalaska, još poželjnije jedinjenje je jedinjenje J.
[0056] Ovaj pronalazak takođe uključuje sve stereoizomere i geometrijske izomere jedinjenja, uključujući diastereomere, enantiomere, i cis/trans (E/Z) izomeri. Ovaj pronalazak takođe uključuje mešavine stereoizomera i/ili geometrijskih izomera u bilo kom odnosu, uključujući, ali ne ograničavajući se na, racemske mešavine.
[0057] U jednom ostvarenju, jedinjenje prema ovom pronalasku nije jedinjenje predstavljeno formulom (I), u kojoj:
- L = -(CH2)3-(L<3>), R<1>= H, R2= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; i/ili
- L = -(CH2)2-CHR<1>-CH2-NH-(CH2)4-, R<1>-R<1'>= -(CH2)2-(L<1>), R<2>= H, R<3>=-(CH2)2-CH3(propil), R<4>= H; X = Cl; i/ili
- L = -(CH2)3-(L<3>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = TFA, koje je u S-konfiguraciji na 2-položaju Trolox™-ostatka.
[0058] Ova jedinjenja mogu se davati u obliku proleka. Prolekovi su derivati jedinjenja koja su sama po sebi relativno neaktivna, ali koja se konvertuju u aktivno jedinjenje kada se uvede u subjekta kod kojeg se primenjuju, hemijskim ili biološkim postupkom in vivo, kao što su enzimska konverzija. Pogodne formulacije proleka uključuju, ali nisu ograničene na, peptidne konjugate jedinjenja ovog pronalaska i estarska jedinjenja ovog pronalaska. Dalji opis pogodnih prolekova obezbeđen je od strane H.
Bundgaard, Design of Prodrugs (New York: Elsevier, 1985); in R. Silverman, The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action (Boston: Elsevier, 2004); in R. L. Juliano , Biological Approaches to the Controlled Delivery of Drugs (Annals of the New York Academy of Sciences, volume 507, New York: N. Y. Academy of Sciences, 1987); and in E. B. Roche, Design of Biopharmaceutical Properties Through Prodrugs and Analogs (Symposium sponsored by Medicinal Chemistry Section, APhA Academy of Pharmaceutical Sciences, November 1976 national meeting, Orlando, Florida), published by The Academy in Washington, 1977.
[0059] Različita jedinjenja ovog pronalaska mogu se davati bilo kao terapeutski ili kozmetički agensi u i od njih samih, ili kao prolekovi koji se konvertuju u druge efektivne supstance u telu.
[0060] Jedinjenja ovog pronalaska korisna su za modulisanje mitohondrijalne morfologije, tj. bilo mitohondrijalne fragmentacije ili mitohondrijalne filamentacije, i/ili za modulisanje ekspresije (tj. nivoi ustaljenog stanja) OXPHOS enzima, kao što su kompleks I i kompleks II. Prema tome, u jednom aspektu ovaj pronalazak odnosi se na upotrebu jedinjenja ovog pronalaska u terapeutskim i/ili kozmetičkim postupcima za modulisanje najmanje jedne od mitohondrijalnih morfologija i ekspresija OXPHOS enzima.
[0061] U jednom ostvarenju, efekat jedinjenja ovog pronalaska uključuje jednu ili više od indukcije mitohondrijalne filamentacije, prevencije ili redukcije mitohondrijalne fragmentacije, i povećane ekspresije OXPHOS enzima. Poželjna jedinjenja ovog ostvarenja su jedinjenja gde su linkeri L<5>, L<8>, L<11>, L<12>, L<16>, L<17>, L<19>, L<21>i L<26>, poželjno u ovim jedinjenja linkeri su L<8>, L<11>, L<16>, L<17>, L<19>, L<21>i L<26>, a najpoželjniji linkeri prema ovom ostvarenju ovog pronalaska su L<16>i L<19>. Određenije, poželjna jedinjenja ovog pronalaska sa jednim ili više ovih efekata su jedinjenja F, K, N, O, U, V, T, X, Z, AE, AF, AG i AH. Poželjnija jedinjenja
2
prema ovom pronalasku sa jednim ili više ovih efekata su jedinjenja K, N U, V, X, Z, AE, AF i AH.
Najpoželjnija jedinjenja prema ovom ostvarenju ovog pronalaska su jedinjenja V, X i AF.
[0062] U još jednom ostvarenju, efekat jedinjenja ovog pronalaska uključuje jednu ili više od redukovane mitohondrijalne filamentacije, indukciju mitohondrijalne fragmentacije, i redukovane ekspresije OXPHOS enzima. Poželjna jedinjenja ovog ostvarenja su jedinjenja gde je linker L<7>.
Određenije, još poželjnije jedinjenje sa jednim ili više ovih efekata je jedinjenje J.
[0063] U još jednom aspektu, ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenje ovog pronalaska kako je prethodno definisano za upotrebu kao lek. Lek se može primeniti i za medicinske (na čoveku) i za veterinarske (na životinji) primene.
[0064] U daljem aspektu, ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenje ovog pronalaska za upotrebu u postupku tretiranja, prevencije, ili suzbijanja simptoma povezanih sa mitohondrijalnim poremećajem ili sa stanjem povezanim sa mitohondrijalnom disfunkcijom, pri čemu postupak obuhvata davanje subjektu neke efektivne količine jednog ili više jedinjenja ovog pronalaska kako je prethodno definisan.
Alternativno, ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenje ovog pronalaska kako je prethodno definisano, za upotrebu u postupku tretiranja, prevencije, ili suzbijanja simptoma povezanih sa mitohondrijalnim poremećajem ili sa stanjem povezanim sa mitohondrijalnom disfunkcijom. Postupci ovog pronalaska, poželjno obuhvataju davanje subjektu neke efektivne količine jednog ili više jedinjenja ovog pronalaska kako je prethodno definisano, i prihvatljivog nosača, ekscipijensa ili vozila, poželjno farmaceutski ili fiziološki prihvatljivog nosača, ekscipijensa ili vozila.
[0065] Poželjna jedinjenja ovog pronalaska za tretiranje mitohondrijalnog poremećaja i/ili stanja povezanog sa mitohondrijalnom disfunkcijom su jedinjenja čiji efekat uključuje jedno ili više od indukcije mitohondrijalne filamentacije, prevencije ili redukcije mitohondrijalne fragmentacije, i povećane ekspresija OXPHOS enzima, kako je prethodno definisano.
[0066] Poželjno, mitohondrijalni poremećaj i/ili stanje povezano sa mitohondrijalnom disfunkcijom je stanje okarakterisano OXPHOS deficijencijom. Svakoj ćeliiji je potrebna energija. Manjak energije prema tome utiče na aktivnost svake ćelije. Stoga, u principu, na svaku ćeliju utiče se podoptimalnom količinom jednog ili više OXPHOS kompleksa. Međutim, stvarna količina koja je podoptimalna varira od ćelije do ćelije. Ćelije koje imaju relativno visoku potrošnju energije kao što su ćelije mozga i mišića, obično zahtevaju veće količine OXPHOS sistemskih kompleksa od ćelija koje imaju nižu potrošnju energije, kao što su mirujuće T-ćelije. Prema tome, ćelije na koje se utiče pomenutom deficijencijom povezanom sa deficijencijom oksidativne fosforilacije su obično, ali ne i nužno, mišićne ćelije ili moždane ćelije.
Mitohondrijalni poremećaji su pleiotropni u svojim kliničkim manifestacijama. Mogu biti pogo0đena različita tkiva kao što je na primer pankreas, srce, jetra, oko, unutrašnje uho, krv, kolon i bubreg. Pored toga, i ćelije iz neklinički pogođenih tkiva kao što su fibroblasti, često pokazuju mitohondrijalni defekt. Ćelije pogođene nekom OXPHOS deficijencijom mogu se tretirati i biti obezbeđene sa većom količinom OXPHOS kompleksa obezbeđivanjem ćelije sa jedinjenjem ovog pronalaska. Ćelija je pogođena OXPHOS deficijencijom kada je OXPHOS kapacitet niži od normalnog (tj. sa uporedivom ćelojom iste vrste od zdravog pojedinca). Kapacitet je obično niži tokom produženog vremenskog perioda. Pored toga što su izvedene od pojedinca sa nekom OXPHOS deficijencijom, postoji nekoliko postupaka za određivanje da li ćelija ima neku OXPHOS deficijenciju, kao što je test koji obuhvata, ali nije ograničen na potrošnju kiseonika, ATP produkcioni kapacitet, i enzimatske aktivnosti pojedinačnih OXPHOS kompleksa (Chretien and Rustin J Inherit Metab Dis.2003;_26_(2-3): 189-98). Začuđujuće je pronađeno da davanjem jedinjenja ovog pronalaska ćeliji, rezultira u većim količinama OXPHOS kompleksa, (tj. mitohondrija tih ćelija).
[0067] Poželjno, mitohondrijalni poremećaj je poremećaj odabran iz grupe koju čine: Mioklona epilepsija; Mioklona epilepsija sa nepravilnim crvenim vlaknima (MERRF); Leberova nasledna optička neuropatija (LHON); neuropatija, ataksija i retinitis pigmentosa (NARP); Mitohondrijalna miopatija, encefalopatija, laktatna acidoza, šlog (MELAS); Leighov sindrom; Sindrom nalik leighovom sindromu; Dominantna optička atrofija (DOA); Kearns-Sayre sindrom (KSS); Maternalno nasleđen dijabetes i Nagluvost (MIDD); Alpers-Huttenlocher sindrom; Ataksija neuropatija spektar; Hronična progresivna spoljna oftalmoplegija (CPEO); Pirsonov sindrom; Mitohondrijalna neuro-gastro-intestinalna encefalopatija (MNGIE); Sengersov sindrom; 3-metilglutakonska aciduria, senzorineuralna nagluvost, encefalopatija i neuro-radiological nalazi sindroma nalik leighovom sindromu (MEGDEL); SURF1 Leighov sindrom; miopatija; mitohondrijalna miopatija; kardiomiopatija; i encefalomiopatija i izolovani ili kombinovani poremećaji oksidativne fosforilacije
[0068] Poželjno, stanje povezano sa mitohondrijalnom disfunkcijom je stanje odabrano iz grupe koju čine: Fridrajhova Ataksija (FRDA); renalna tubularna acidoza; Parkinsonova bolest; Alchajmerova bolest; amiotrofična lateralna skleroza (ALS); Hantingtonova bolest; Bartov sindrom (takođe poznat i kao 3-Metilglutakonska aciduria tip II); degeneracija makule, poželjno degeneracija makule povezanasa starenjem; razvojni pervazivni poremećaji; gubitak sluha, nagluvost; dijabetes; starenje; štetni efekti lekova koji onemogućavaju (normalnu) mitohondrijalnu funkciju, uključujući npr. mitohondrijalnu disfunkciju izazvanu inhibitorima nukleozidne analogno reverzne transkriptaze (NRTI), određenim antibioticima i anti-epileptičnim lekovima; i ishemijska i reperfuziona povreda, poželjno ishemijska
2
reperfuziona povreda nakon akutnog miokardijalnog infarkta (AMI), nakon šloga, uključujući perinatalni šlog, nakon hemoragijskog šoka, nakon intestinalne ishemije, nakon hitne koronarne operacije nakon neuspele perkutane transluminalne koronarne angioplastike (PCTA), anakon vaskularne operacije sa unakrsnim stezanjem kvrnih sudova (npr. aorte, što dovodi do ishemije mišića skeleta), nakon pankreatitisa posle namipulisanja pankreatnih ili žučnih puteva (ERCP), i/ili posle transplantacije organa.
[0069] "Subjekat", "pojedinac", ili "pacijent" ovde označava neki pojedinačni organizam, poželjno kičmenjaka, poželjnije sisara, najpoželjnije čoveka.
[0070] "Tretiranje" neke bolesti ovim jedinjenjima i postupcima ovde opisanim, definisano je kao davanje jednog ili više jedinjenja ovde opisanih, sa ili bez dodatnim terapeutskim agensima, radi redukovanja ili eliminisanja bilo te bolesti ili jednog ili više simptoma te bolesti, ili kako bi se usporilo napredovanje te bolesti ili jednog ili više simptoma te bolesti, ili kako bi se redukovala ozbiljnost bolesti ili jednog ili više simptoma te bolesti. "Suzbijanje" bolesti ovde opisanim jedinjenjima i postupcima definisano je davanjem jednog ili više jedinjenja ovde opisanih, sa ili bez dodatnim terapeutskim agensima, kako bi se suzbila klinička manifestacija bolesti, ili za suzbijanje manifestacije štetnih simptoma te bolesti. Razlika između tretiranja i suzbijanja ogleda se u tome što se tretiranje izvodi pošto se štetni simptomi te bolesti pokažu kod subjekta, dok se suzbijanje izvodi pre nego što se štetni simptomi te bolesti pokažu kod subjekta. Suzbijanja može biti parcijalno, suštinski potpuno ili potpuno. Pošto je većina mitohondrijalnih poremećaja nasledna, može se koristiti genetski skrinig kako bi se identifikovali pacijenti u riziku od bolesti. Ova jedinjenja i postupci ovog pronalaska tada se mogu davati asimptomatičnim pacijentima u riziku od razvijanja kliničkih simptoma te bolesti, kako bi se suzbilo pojavljivanje bilo kojih štetnih simptoma. "Terapeutska upotreba" jedinjenja ovde opisanih definisana je kao primena jednog ili više jedinjenja ovde opisanih za tretiranje ili suzbijanje neke bolesti, kako je prethodno definisano. Neka "efektivna količina" jedinjenja je neka količina jedinjenja koja, kada se daje nekom subjekat, je dovoljna da redukuje ili eliminiše bilo koji ili više simptoma bolesti, ili da uspori progresiju jednog ili više simptoma bolesti, ili da redukuje ozbiljnost jednog ili više simptoma bolesti, ili da suzbije manifestacije bolesti, ili da suzbije manifestacije štetnih simptoma bolesti. Neke efektivne količine mogu se dati u jednom ili više davanja.
[0071] Nekoliko lako merljivih kliničkih markera korišćeno je kako bi se odredilo metaboličko stanje pacijenata sa mitohondrijalnim poremećajima. Ovi markeri takođe se mogu primeniti kao indikatori efikasnosti terapije primenom ovih jedinjenja ovog pronalaska, kako se nivo markera pomera od patološke vrednosti do zdrave vrednosti. Ovi klinički markeri uključuju, ali nisu ograničeni na, jedan ili više energetskih biomarkera, kao što su nivoi mlečne kiseline (laktata), bilo u celokupnoj krvi, plazmi,
2
cerebrospinalnoj tečnosti, ili cerebralnoj ventrikularnoj tečnosti; nivoi pirogrožđane kiseline (piruvata), bilo u celokupnoj krvi, plazmi, cerebrospinalnoj tečnosti, ili cerebralnoj ventrikularnoj tečnosti; odnosi laktata/piruvata, bilo u celokupnoj krvi, plazmi, cerebrospinalnoj tečnosti, ili cerebralnoj ventrikularnoj tečnosti; amino kiseline, određenije alanin, citrulin i prolin bilo bilo u celokupnoj krvi, plazmi, cerebrospinalnoj tečnosti, organske kiseline u telesnim tečnostima, FGF21 u serumu i mišićima skeleta, nivoi fosfokreatina, NADH (NADH H<+>) ili NADPH (NADPH H<+>) nivoi; NAD ili NADP nivoi; ATP nivoi; anaerobni prag; nivoi redukovanog koenzima Q (CoQ<red>); nivoi oksidiranog koenzima Q (CoQ<ox>; nivoi ukupnog koenzima Q (CoQ<tot>); nivoi oksidiranog citohroma C; nivoi redukovanog citohroma C; odnos oksidiranog citohroma C/redukovanog citohroma C; nivoi acetoacetata, nivoi beta-hidroksi butirata, odnos acetoacetata/betahidroksi butirata, nivoi 8-hidroksi-2’-deoksigvanozina (8-OHdG); nivoi reaktivnih kiseoničnih vrsta; i nivoi potrošnje kiseonika (VO2), nivoi izlaza ugljen dioksida (VCO2), i respiratorni koeficijent (VCO2/VO2). Neki od ovih kliničkih markera mereni su rutinski u fiziološkim laboratorijama za vežbe, i obezbedili su pogodno određivanje metaboličkog stanja subjekta. U jednom ostvarenju ovog pronalaska, nivo jednog ili više energetskih biomarkera kod pacijenta koji boluje od mitorhondrijalne bolesti, kao što su Fridrajhova Ataksija, Leberova nasledna optička neuropatija, dominantna optička atrofija, Leighov sindrom, SURF1, MERRF, MELAS, ili KSS, poboljšan je unutar dve standardne devijacije prosečnog nivoa kod zdravog subjekta. U još jednom ostvarenju ovog pronalaska, nivo jednog ili više od ovih energetskih biomarkera kod pacijenta koji boluje od mitorhondrijalne bolesti, kao što su Fridrajhova Ataksija, Leberova nasledna optička neuropatija, dominantna optička atrofija, Leighov sindrom, SURF1, MERRF, MELAS, ili KSS, poboljšan je unutar jedne standardne devijacije prosečnog nivoa kod zdravog subjekta. Netolerancija na vežbanje takođe se može primeniti kao indikator efikasnosti date terapije, gde poboljšanje u toleranciji na vežbanje (tj. smanjenje u netoleranciji na vežbanje) ukazuje na efikasnost date terapije.
[0072] Nekoliko metaboličkih biomarkera već je primenjeno za procenu efikasnosti CoQ10, a ovi metabolički biomarkeri mogu se pratiti kao energetski biomarkeri za upotrebu u postupcima ovog pronalaska. Piruvat, proizvod anaerobnog metabolizma glukoze, uklonjen je redukcijom do mlečne kiseline u anaerobnom podešavanju ili oksidativnim metabolizmom, koji je zavisan od funkcionalnog mitohondrijalnog OXPHOS. Disfunkcija OXPHOS može voditi ka neadekvartnom uklanjanu laktata i piruvata iz cirkulacije, a povišeni odnosi laktata/piruvata primećeni su kod mitohondrijalnih citopatija (videti Scriver CR, The metabolic and molecular bases of inherited disease, 7th ed., New York: McGraw-Hill, Health Professions Division, 1995; and Munnich et al., J. Inherit. Metab. Dis.15(4):448-55 (1992)). Odnos laktata/piruvata u krvi (Chariot et al., Arch. Pathol. Lab. Med.118(7):695-7 (1994)) prema tome je široko primenjen kao neinvazivni test za detekciju mitohondrijalne citopatije (videti ponovo Scriver CR, The metabolic and molecular bases of inherited disease, 7th ed., New York: McGraw-Hill, Health
2
Professions Division, 1995; and Munnich et al., J. Inherit. Metab. Dis.15(4):448-55 (1992)) i toksične mitohondrijalne miopatije (Chariot et al., Arthritis Rheum.37(4):583-6 (1994)). Promene u redoks stanju mitohondrija jetre mo\e se ispititati merenjem odnosa arterijskog ketona u telu (acetoacetat/3-hidroksibutirat: AKBR) (Ueda et al., J. Kardiol.29(2):95-102 (1997)). urinarna ekskrecija 8-hidroksi-2'-deoksigvanozina (8-OHdG) često se koristi kao biomarker za određivanje stepena popravke ROS-indukovanog DNK ošećenja i u kliničkim i u okupacionim podešavanjima (Erhola et al., FEBS Lett.
409(2):287-91 (1997); Honda et al., Leuk. Res.24(6):461-8 (2000); Pilger et al., Free Radic. Res.
35(3):273-80 (2000); Kim et al., Environ Health Perspect 112(6):666-71 (2004)).
[0073] Spektrometrija magnetnom rezonancom (MRS) korisna je za dijagnostikovanje mitohondrijalne citopatije pokazujući povećanja u cerebrospinalnoj tečnosti (CSF) i laktatu kortikalne bele materije primenom protonske MRS (<1>H-MRS) (Kaufmann et al., Neurology 62(8):1297-302 (2004)). Fosforna MRS (<31>P-MRS) koristi se kako bi se pokazali niski nivoi kortikalnog fosfokreatina (PCr) (Matthews et al., Ann. Neurol.29(4):435-8 (1991)), i kašnjenje u kinetikama PCr oporavka praćeno vežbanjem mišića skeleta (Matthews et al., Ann. Neurol.29(4):435-8 (1991); Barbiroli et al., J. Neurol.242(7):472-7 (1995); Fabrizi et al., J. Neurol. Sci.137(1):20-7 (1996)). Nizak PCr mišića skeleta takođe je potvrđen kod pacijenata sa mitohondrijalnom citopatijom direktnim biohemijskim merenjima.
[0074] Testiranje vežbanja naročito je korisno sredstvo za procenjivanje i skrining mitohondrijalnih miopatija. Jedna od karakterističnih karakteristika mitohondrijalne miopatije je redukcija u maksimalnoj potrošnji kiseonika celog tela (VO2max) (Taivassalo et al., Brain 126(Pt 2):413-23 (2003)). Uzevši u obzir da se VO2max određuje srčanim izlazom (Qc) i razlikom periferne ekstracije kiseonika (ukupni sadržaj arterijsko-venskog kiseonika), neke mitohondrijalne citopatije utiču na srčanu funkciju kod koje se može izmeniti dostava; međutim, većina mitohondrijalnih miopatija pokazuju karakteristični deficit u ekstrakciji perifernog kiseonika (A-V 02 razlika) i pojačane dostave kiseonika (hiperkinetička cirkulacija) (Taivassalo et al., Brain 126(Pt 2):413-23 (2003)). Ovo može biti pokazano manjkom vežbi indukovano deoksigenacijom vnske krvi direktnim AV merenjima balansa (Taivassalo et al., Ann. Neurol.51(1):38-44 (2002)) i neinvanzivno blizom infracrvenom spektroskopijom (Lynch et al., Muscle Nerve 25(5):664-73 (2002); van Beekvelt et al., Ann. Neurol.46(4):667-70 (1999)).
[0075] Neki od ovbih energetskih biomarkera opisani su detaljnije u nastavku. Treba naglasiti da, iako su određeni energetski biomarkeri ovde opisani i nabrojani, ovaj pronalazak nije ograničen na modulaciju, normalizaciju ili poboljšanje samo ovih nabrojanih energetskih biomarkera.
[0076] Nivoi mlečne kiseline (laktata) : Mitohondrijalna disfunkcija obično rezultira u abnormalnim
2
nivoima mlečne kiseline, budući da se nivoi piruvata povećavaju, a piruvat se konvertuje u laktat kako bi se održao kapacitet za glikolizu. Mitohondrijalna disfunkcija takođe može rezultirati u abnormalnim nivoima NADH H<+>, NADPH H<+>, NAD, ili NADP, budući da se redukovani nikotinamidni adeninski dinukleotidi ne obrađuju efikasno od strane respiratornog lanca. Nivoi laktata mogu se izmeriti uzimanjem uzoraka pogodnih telesnih tečnosti kao što su celokupna krv, plazma, ili cerebrospinalna tečnost. Primenom magnetne rezonance, nivoi laktata mogu se izmeriti u virtuleno bilo kojoj poželjnoj zapremini tela, kao što je mozak.
[0077] Merenja cerebralne mlečne acidoze primenom megnetne rezonance kod MELAS pacijenata, opisano je od strane Kaufmann et al., Neurology 62(8):1297 (2004). Vrednosti nivoa mlečne kiseline u bočnim komorama mozga daju dve mutacije koje rezultiraju kao MELAS, mt.3243A>G i mt.8344A>G. Nivoi laktata u celokupnoj krvi, plazmi, i cerebrospinalnoj tečnosti može se izmeriti komercijalno dostupnom opremom kao što je YSI 2300 STAT Plus analizator glukoze i laktata (YSI Life Sciences, Ohajo).
[0078] NAD, NADP, NADH i NADPH nivoi: Merenje NAD, NADP, NADH (NADH H<+>) ili NADPH (NADPH H<+>) mogu se izmeriti različitim fluorescentim, enzimatičnim, ili elektrohemijskim tehnikama, npr. , elektrohemijskim ogledom opisanim u US2005/0067303.
[0079] Potrošnja kiseonika (vO2ili VO2), izlaz ugljen dioksida (vCO2ili VCO2), i respiratorni koeficijent (VCO2/VO2): vO2se obično meri bilo tokom mirovanja (mirujući vO2) ili pri maksimalnom intezitetu vežbanja (vO2max). Optimalno, obe vrednosti se mere. Međutim, za pacijente sa teškim invaliditetom, merenje vO2max može biti nepraktično. Merenje oba oblika v O2postiže se lako primenom standardne opreme različitih dobavljača, npr. Korr Medical Technologies, Inc. (Salt Lake City, Utah). VCO2 se takođe može lako izmeriti, a odnos VCO2 prema VO2 pod istim uslovima (VCO2/VO2, bilo u stanju mirovanja ili pri maksimalnom intezitetu vežbanja) obezbeđuje respiratorni koeficijent (RQ).
[0080] Oksidisan Citohrom C, redukovan Citohrom C, i odnos oksidisanog Citohroma C prema redukovanom Citohromu C: Citohrom C parameteri, kao što su nivoi oksidiranog citohroma C (Cyt C<ox>), nivoi redukovanog citohroma C (Cyt C<red>), i odnos odnosa oksidiranog citohroma C/redukovanog citohroma C (Cyt C<ox>)/(Cyt C<red>), mogu se izmeriti in vivo bliskom infracrvenom spektroskopijom. Videti, npr. , Rolfe, P., " In vivo near-infrared spectroscopy, "Annu. Rev. Biomed. Eng.2:715-54 (2000) i Strangman et al., " Non-invasive neuroimaging using near-infrared light " Biol. Psychiatry 52:679-93 (2002).
[0081] Tolerancija na vežbanje/Netolerancija na vežbanje: Netolerancija na vežbanje je definisana kao
2
"redukovana sposobnost izvođenja aktivnosti koje uključuju donamično pomeranje velikih mišića skeleta zbog simptoma dispneje ili umora" (Pina et al., Circulation 107:1210 (2003)). Netolerancija na vežbanje često je udržena sa mijoglobinuriom, usled cepanja mišićnog tkiva i naknadnog izlučivanja mišićnog mijoglobina u urin. Mogu se primeniti razna merenja netolerancije na vežbanje, kao što su vreme provedeno u šetanju ili trčanju na pokretnoj traci pre iscrpljivanja, vreme provedeno na biciklu za vezbanje (stonom biciklu) pre iscrpljivanja, i slično. Tretiranje ovim jedinjenjima ili postupcima ovog pronalaska mogu rezultirati sa oko 10% ili više poboljšanja u toleranciji na vežbanje (na primer, oko 10% ili više povećano vreme do iscrpljenosti, npr. od 10 minuta do 11 minuta), oko 20% ili veće poboljšanje u toleranciji na vežbanje, oko 30% ili veće poboljšanje u toleranciji na vežbanje, oko 40% ili veće poboljšanje u toleranciji na vežbanje, oko 50% ili veće poboljšanje u toleranciji na vežbanje, oko 75% ili veće poboljšanje u toleranciji na vežbanje, ili oko 100% ili veće poboljšanje u toleranciji na vežbanje. Kako tolerancija na vežbanje nije, strogo-govoreći, neki energetski biomarker, za svrhe ovog pronalaska, modulacija, normalizacija, ili poboljšanje energetskih biomarkera uključuje modulaciju, normalizaciju, ili poboljšanje tolerancije na vežbanje.
[0082] Slično, testovi za normalne i abnormalne vrednosti nivoa pirogrožđane kiseline (piruvata), odnosa laktata/piruvata, ATP nivoa, anaerobnog praga, nivoa redukovanog koenzima Q (CoQ<red>), nivoa oksidiranog koenzima Q (CoQ<ox>), nivoa ukupnog koenzima Q (CoQ<tot>), nivoa oksidiranog citohroma C, nivoa redukovanog citohroma C, odnosa oksidiranog citohroma C/redukovanog citohroma C, nivoa acetoacetata, nivoa beta-hidroksi butirata, odnosa acetoacetata/betahidroksi butirata, nivoa 8-hidroksi-2’-deoksigvanozina (8-OHdG), i nivoa reaktivnih kiseoničnih vrsta poznati su u stanju tehnike i mogu se primeniti kako bi se procenila efikasnost jedinjenja i postupaka ovog pronalaska. (Za svrhe ovog pronalaska, modulacija, normalizacija, ili poboljšanje energetskih biomarkera uključuje modulaciju, normalizaciju, ili poboljšanje anaerobnog praga).
[0083] Tabela 1, koja sledi, ilustruje efekat koje različite disfunkcije mogu da imaju na biohemiju i energetske biomarkere. Ona takođe pokazuje fizičku posledicu (kao što su neki simptom bolesti ili neki drugi efekat disfunkcije) obično povezana sa datom disfunkcijom. Treba imati na umu da se bilo koji od energetskih biomarkera navedenih u donjoj tabeli, pored energetskih biomarkera nabrojanih drugde, takođe mogu modulisati, pojačati, ili normaliovati ovim jedinjenjima i postupcima ovog pronalaska. RQ=respiratorni koeficijent; BMR=brzina bazalnog metabolizma; HR (CO)=otkucaji srca (srčani izlaz); T=telesna temperatura (poželjno merena kao unutrašnja temperatura); AT=anaerobni prag; pH= pH krvi (venska i/ili arterijska).
Tabela 1
1
[0084] Tretiranje subjekta pogođenog sa mitohondrijalnom bolesti može rezultirati kao povođenje redukcije ili ublažavanja simptoma kod subjekta, npr. da zaustavi dalju progresiju poremećaja.
[0085] Delimično ili potpuno suzbijanja mitohondrijalne bolesti može rezultirati u smanjivanju ozbiljnosti jednog ili više simptoma koje bi subjekat inače osećao. Na primer, delimično suzbijanje MELAS može da rezultira kao redukcija u broju pojavljivanja epizoda nalik šlogu ili napadu.
[0086] Bilo koji energetski biomarker ili bilo koja kombinacija energetskih biomarkera ovde opisanih obezbeđuje pogodno merljive repere na osnovu kojih se meri efektivnost tretiranja ili supresivne terapije. Dodatno, stručnjacima iz ove oblasti poznati su i drugi energetski biomarkeri koji se mogu pratiti radi ocenjivanja efikasnosti tretiranja ili supresivne terapije.
[0087] Mitohondrijalna disfunkcija je čest uzrok nasledne multisistemske bolesti koja često uključuje nervni sistem. Uprkos značajnom napretku u našem razumevanju patofiziologije mitohondrijalnih bolesti, kliničko upravljanje ovih stanja ostaje podržavajuće u velikoj meri. Primenom sistematičnog pristupa (Pfeffer et al., 2013, Nat, Rev. Neurol, (in press) PMID: 23817350), identifikovano je 1,039 publikacija o tretmanima za mitohondrijalne bolesti, od kojih samo 35 uključuje observacije na više od pet pacijenata. Izveštaji pozitivnog ishoda na osnovu biomarkera nedokazanog kliničkog značaja česti su u nenasumičnim i neslepim ispitivanjima, što ukazuje da publikacija teži ka pozitivnim ali slabo izvedenim ispitivanjima. Iako se dizajn ispitivanja poboljšava, postoji kritična potreba za razvojem novih biomarkera mitohondrijalne bolesti. Kliničko ispitivanje jedino pouzdano kada ima ishod, te je prema tome pažljivo i sistematično biranje merenja ishoda veoma značajno. Trenutno, odabir merenja ishoda kliničkih ispitivanja dizajniranih da procene novi lek na pacijentima sa mitohondrijalnim poremećajima je neefikasan i nije usmeren sistematski. Uzevši da se značajni podaci mogu dobiti samo iz ispitivanja kod koji su ishodi ocenjeni primenom validnih instrumenata, pojedinac treba prvo da se fokusira na validaciju seta odabranih instrumenata u ciljanoj populaciji. Primenom obimnog pretraživanja objavljenje literature, sistematski je sačinjen alat sa merama ishoda na osnovu primarne pretrage mogućih instrumenata (Koene et al., 2013, Dev, Med. Child Neurol.55:698-706). Naknadno, ovaj alat je redukovan primenom striktnog kriterijuma koji je prilagođen od strane primene hrane i lekova USA. U godinama koji dolaze, mora se steći više iskustva primenom ovih merenja ishoda kod dece sa različitim
2
fenotipovima mitohondrijalne bolesti pre podvlačenja pouzdanih zaključaka koji se odnose na validnost ovih instrumenata.
[0088] Prema tome, u jednom poželjnom ostvarenju, efikasnost tretiranja ili supresivna terapija sa postupcima ovog pronalaska mogu se odrediti primenom jednog ili više merenja ishoda alata navedenih u Tabela 1 od Koene et al (2013, gore), poželjnije ta efikasnost određuje se primenom jednog ili više od merenja ishoda "zajedničkog jezgrovitog skupa" u Tabeli 1 kod Koene et al (2013, gore).
[0089] U daljem aspektu ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenje ovog pronalaska za upotrebu u postupku tretiranja, prevencije, ili suzbijanja simptoma neoplastične bolesti, pri čemu postupak obuhvata davanje subjektu neke efektivne količine jednog ili više jedinjenja ovog pronalaska kako je prethodno definisano. Alternativno, ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenje ovog pronalaska kako je prethodno definisano, za upotrebu u postupku tretiranja, prevencije, ili suzbijanja simptoma neoplazme. Poželjno postupak obuhvata davanje subjektu neke efektivne količine jednog ili više jedinjenja ovog pronalaska kako je prethodno definisano, i nekog prihvatljivog nosača, ekscipijensa ili vozila, poželjno farmaceutski ili fiziološki prihvatljivog nosača, ekscipijensa ili vozila. Svakoj ćeliji, uključujući neoplastične ćelije, potrebna je energija. Uskraćivanje energije prema tome utiče na aktivnost svake ćelije i u principu na svaku ćeliju u principu deluje se pod-optimalnim funkcionišućim mitohondrijama. Međutim, stvarna količina koja je pod-optimalna varira od ćelije do ćelije. Ćelije koje imaju relativno visoku potrošnju energije kao što su radipno deljujuće neoplastične ćelije, obično zahtevaju veću količinu OXPHOS kompleksa od ćelija koje imaju manju potrošnju energije, kao što mirujuće ćelije. Prema tome, neoplastične ćelije su osetljivije na regulaciju nadole mitohondrijalne funkcije uključujući OXPHOS u odnosu na regularne ćelije. Jedinjenja ovog pronalaska sa efektom jedne ili više od redukovanih mitohondrijalnih filamentacija, indukcije mitohondrijalne fragmentacije, i redukovane ekspresije OXPHOS enzima, stoga će imati jači efekat na aktivnost i rast neoplastičnih ćelija u odnosu na regularne ćelije. Kao takva, ova jedinjenja sa ovim efektima mogu se primeniti za redukovanje ili inhibiranje rasta ili čak ubijanje neoplastičnih ćelija.
[0090] U jednom poželjnom ostvarenju postupka tretiranja, prevencije, ili suzbijanje simptoma neke neoplastične bolesti, neoplastična ili proliferativna bolest je kancer. U određenijim ostvarenjima, kancer može biti odabran iz grupe koju čine karcinom bazalnih ćelija, kancer kostiju, kancer creva, kancer mozga, kancer dojke, kancer grlića materice, leukemija, kancer jetre, kancer pluća, limfom, melanom, kancer ovarijuma, kancer pankreasa, kancer prostate ili kancer tiroidne žlezde. U drugim ostvarenjima, kancer može biti odabran iz grupe koju čine akutna limfoblastična leukemija, akutna mijeloidna leukemija, adrenokortikalni karcinom, kanceri povezani sa SIDA, analni kancer, kancer slepog creva, astrocitom, limfom B-ćelija, karcinom bazalnih ćelija, kancer žučnih puteva, kancer bešike, kancer kostiju, kancer creva, gliom moždanog stabla, tumor mozga, kancer dojke, bronhijalni adenomi/karcinoidi, Burkitov limfom, karcinoidni tumor, cerebralni astrocitom/maligni gliom, kancer grlića materice, kanceri iz detinjstva, hronična limfocitna leukemija, hronična mijelogena leukemija, hronični mijeloproliferativni poremećaji, kancer kolona, kožni T-ćelijski limfom, dezmoplastični tumor malih okruglih ćelija, endometrijalni kancer, ependimom, kancer jednjaka, ekstrakranijalni tumor klice ćelija, ekstragonadalan tumor klica ćelija, ekstrahepatični kancer žučnih puteva, očni kancer, intraokularni melanom/retinoblastom, kancer žučne kese, kancer želuca, gastrointestinalni karcinoidni tumor, gastrointestinalni stromalni tumor (GIST), tumor klica ćelija, gestacijski trofoblastni tumor, gliom, gastrični karcinoid, kancer glave i/ili vrata, kancer srca, hepatocelularni (jetre) kancer, hipofaringealni kancer, kancer hipotalamusa i vizuelnog puta, Kapozi sarkom, kancer bubrega, kancer grkljana, leukemija (akutna limfoblastična/akutna mijeloidna/hronična limfocitna/hronična mijelogena/dlakavih ćelija), kancer usne i/ili usne duplje, kancer jetre, nemikrocelularni karcinom pluća, mikrocelularni karcinom pluća, limfom (Povezani sa SIDA/Burkitov/kožni T-ćelijski/ Hodžkinov/ne-Hodžkinov/primarnog centralnog nervnog sistema), makroglobulinemia, maligni fibrozni histiocitom kostiju/osteosarkom, meduloblastom, melanom, karcinom Merkelovih ćelija, mezoteliom, metastatični skvamozni kancer vrata, kancer usta, sindrom multiple endokrine neoplazije, multiple mijeloma/neoplazma ćelija plazme, mikozni fungoidi, mijelodisplastični sindromi, mijelodisplastična/mijeloproliferativna bolesti, mijelogena leukemija, mijeloidna leukemija, mijeloproliferativni poremećaji, kancer nosne duplje i/ili paranazalnih sinusa, nazofarinksni karcinom, neuroblastom, ne- Hodžkinov limfom, nemikrocelularni karcinom pluća, oralni kancer, orofaringealni kancer, osteosarkom/maligni fibrozni histiocitom kostiju, kancer ovarijuma, kancer epitelijalnog ovarijuma, ovarijarni tumor klica ćelija, kancer pankreasa, kancer ćelija ostrvaca, kancer paranazalnih sinusa i nosne šupljine, paratiroidni kancer, kancer penisa, kancer ždrela, feohromocitom, pinealni astrocitom, pinealni germinom, pineoblastom i/ili goretentorialni primitivni neuroektodermalni tumori, adenom hipofize, neoplazija ćelija plazme/multiple mijeloma, pleuropulmonarni blastom, primarni limfom centralnog nervnog sistema, kancer prostate, rektalni kancer, karcinom renalnih ćelija, retinoblastom, rabdomiosarkom, kancer pljuvačne žlezde, Juingov sarkom, Kapozijev sarkom, sarkom mekog tkiva, sarkom materice, Sezarijev sindrom, kancer kože (nemelanom), kancer kože (melanom), karcinom kože (Merkelova ćelija), mikrocelularni karcinom pluća, kancer tankog creva, sarkom mekog tkiva, karcinom skvamoznih ćelija, primarni skvamozni kancer vrata sa skrivenim metastazama, kancer želuca, goretentorialni primitivni neuroektodermalni tumor, T-ćelijski limfom, kancer testisa, kancer grla, timom i/ili timični karcinom, tiroidni kancer, tranzicioni kancer, trofoblastni tumor, kancer uretera i/ili bubrežne karlice, uretralni kancer, endometrijalni kancer materice, materični sarkom, vaginalni kancer, gliom vizuelne putanje i hipotalamusa, kancer vulve, Valdenstromova makroglobulinemia ili Vilmsov tumor.
4
[0091] U još jednom aspektu ovaj pronalazak odnosi se na kozmetičku upotrebu jedinjenja ovog pronalaska. Jedinjenja ovog pronalaska prema tome mogu se koristiti (u postupcima) radi oživljavanja kože tretiranog pojedinca, naročito kod pojedinca sa ostarelom kožom, bilo usled starenja ili usled preteranom izlaganju suncu. Oba stanja su povezana sa proizvodnjom slobodnih radikala u koži.
Najmanje jednom od indukcija mitohondrijalne filamentacije, prevencije ili redukcije mitohondrijalne fragmentacije, i povećane ekspresije OXPHOS enzima u ćelijama pomenutog pojedinca, moguće je sniziti aktivnost slobodnoh radikala u koži i najmanje dalje starenje kože. Kao tako, neko bi takođe mogao da primeni kompoziciju ovog pronalaska kao profilaktičku, tj. da najmanje redukuje slobodne radikale koji bi bili sposobni da deluju na kožu, ukoliko se ostavi netretirana. Prema tome poželjno je u aspektu ovog pronalaska da nanešena jedinjenja ovog pronalaska imaju efekat koji uključuje jedno ili više između indukcije mitohondrijalne filamentacije, prevencije ili redukcije mitohondrijalne fragmentacije, i povećane ekspresije OXPHOS enzima. Poželjna jedinjenja sa ovim efektima, prethodno su naznačena.
[0092] Jedinjenja ovog pronalaska takođe se mogu primeniti u istraživačkim primenama, kao što su in vitro, in vivo, ili ex vivo eksperimenti kako bi se modulisao jedan ili više energetskih biomarkera u eksperimentalnom sistemu. Takvi eksperimentalni sistemi mogu biti ćelijski uzorci, tkivni uzorci, ćelijske komponente ili mešavine ćelijskih komponenti, delovi organa, celi organi, ili organizmi. Takve istraživačke primene mogu da uključuju, ali nisu ograničeni na, upotrebu kao ispitni reagensi, razjašnjavanje biohemijskih puteva, ili evaluaciju efekata drugih agenasa na metaboličko stanje eksperimentalnog sistema u prisustvu/odsustvu jednog ili više jedinjenja ovog pronalaska.
[0093] Dodatno, jedinjenja ovog pronalaska mogu se primeniti u biohemijskim testovima ili ispitivanjima. Takvi testovi mogu da uključuju inkubaciju jednog ili više jedinjenja ovog pronalaska sa tkivnim ili ćelijskim uzorkom iz subjekta kako bi se evaluirao potencijalni odgovor subjekta (ili odgovor specifičnog podskupa subjekata) na davanje pomenutog jednog ili više jedinjenja, ili kako bi se odredilo koje jedinjenje ovog pronalaska proizvodi optimalni efekat kod specifičnog subjekta ili podgrupi subjekata. Jedan takav test ili ispitivanje mogu da uključe 1) obezbeđivanje ćelijskog uzorka ili tkivnog uzorka od subjekta ili skupa subjekata na kojima se može ispitati modulacija jednog ili više energetskih biomarkera; 2) primenjivanje jednog ili više jedinjenja ovog pronalaska na ćelijski uzorak(ke) ili tkivni uzorak(ke); i 3) određivanje količine modulacije jednog ili više energetskih biomarkera nakon davanja jednog ili više jedinjenja, u poređenju sa statusom energetskog biomarkera pre davanja jednog ili više jedinjenja.
[0094] Još jedan takav test ili ispitivanje uključili bi 1) obezbeđivanje ćelijskog uzorka ili tkivnog uzorka od subjekta ili skupa subjekata na kojima se može ispitati modulacija jednog ili više energetskih biomarkera; 2) primenjivanje najmanje dva dva jedinjenja ovog pronalaska na ćelijski uzorak(ke) ili tkivni uzorak(ke); 3) određivanje količine modulacije jednog ili više energetskih biomarkera nakon primenjivanja najmanje dva jedinjenja, u poređenju sa statusom energetskog biomarkera pre primenjivanja najmanje dva jedinjenja, i 4) odabir jedinjenje za upotrebu u tretiranju, suzbijanju, ili modulaciju na osnovu količine modulacije određene u fazi 3).
[0095] Kompozicije koje obuhvataju jedinjenja ovog pronalaska, kakva su ovde opisana, mogu se pripremiti kao medicinski ili kozmetički preparati ili u obliku drugih različitih medijuma, kao što su hrana za ljude i životinje, uključujući medicinsku hranu i dijetetske suplemente. "Medicinska hrana" je proizvod namenjen za specifično dijetetsko vođenje bolesti ili stanja za koje postoje specifične nutricione potrebe. Na primer, ali bez ograničenja, medicinska hrana može da uključi vitaminsk i mineralne formulacije uvedene putem cevi za hranjenje (odnosi se na enteralno davanje)."Dijetetski suplement" označava proizvod koji namenjen da dopuni ljudsku ishranu i obično se obezbeđuje u obliku pilule, kapsule, i tablete ili sličnih formulacija. Na primer, ali bez ograničenja, dijetetski suplement može da uključi jedno ili više od sledećih sastojaka: vitamine, minerale, biljke, tečnosti iz biljaka; amino kiseline, dijetetske supstance namenjene da dopune ishranu povećavajući ukupan dijetetski unos, i koncentrate, metabolite, konstituente, ekstrakte ili kombinacije bilo kojih od prethodno navedenih. Dijetetski suplementi takođe mogu biti implementirani u hranu, uključujući, ali ne ograničavajući se na, hranljive štangle, napici, praškovi, žitarice, skuvana hrana, aditivi hrane i slatkiši; ili ostala funkcionalna hrana dizajnirana da promoviše cerebralno zdravlje ili da spreči ili uspori progresiju neurodegenerativne bolesti koja uključuje mitohondrijalnu disfunkciju. Ako se daje kao medicinski preparat, kompozicija se može davati bilo kao profilaksa ili tretiranje, pacijentu u bilo kom broju postupaka. Kompozicije se mogu davati same ili u kombinaciji sa ostalim farmaceutskim ili kozmetičkim agensima i mogu se kombinovati sa njihovim fiziološki prihvatljivim nosačima. Efektivna količina i postupak davanja određene formulacije mogu varirati u odnosu na pojedinačne subjekte, stanje ili stadijum bolesti, i ostalih faktora očiglednih stručnjaku iz ove oblasti. Tokom toka tretiranja, koncentracija predmetnih kompozicije može se pratiti kako bi se bilo sigurno da se željeni nivo održava. Predmetne kompozicije mogu biti sastavljene sa ostalim fiziološki prihvatljivim materijali koji se mogu svariti uključujući, ali ne ograničavajući se na, hranu.
[0096] Jedinjenja opisana ovde mogu se formulisati kao farmaceutske ili kozmetičke kompozicije formulacijama i aditivima kao što su farmaceutski ili fiziološki prihvatljiv ekscipijensi, nosači, i vozila. Pogodni farmaceutski ili fiziološki prihvatljiv ekscipijensi, nosači i vozila uključuju procesne agense i modifikatore isporuke leka i pojačivače, kao što su, na primer, kalcijum fosfat, magnezijum stearat, talk, monosaharidi, disaharidi, skrob, želatin, celuloza, metil celuloza, natrijum karboksimetil celuloza, dekstroza, hidroksipropil-P-ciklodekstrin, polivinilpirolidinon, voskove niske tačke topljenja, jono izmenjivačke smole, i slično, kao i kombinacije bilo kojih od jednog ili dva prethodno navedena. Drugi pogodni farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi opisani su u "Remington's Pharmaceutical Sciences, " Mack Pub. Co. , New Jersey (1991), i "Remington: The Science and Practice of Pharmacy, " Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 20th edition (2003) i 21" edition (2005), uključeni ovde kao referenca.
[0097] Farmaceutska ili kozmetička kompozicija može da obuhvata jediničnu doznu formulaciju, pri čemu je jedinična doza doza dovoljna da ima terapeutski ili supresivni efekat ili neka količina efektivna da moduliše, normalizuje, ili pojača neki energetski biomarker. Jedinična doza može biti dovoljna kao pojedinačna doza kako bi imala terapeutski ili supresivan efekat ili neka količina efektivna da modulišee, normaluje, ili pojača neki energetski biomarker. Alternativno, jedinična doza može biti doza data periodično tokom tretiranja ili suzbijanja poremećaja, ili radi modulisanja, normalizovanja ili pojačavanja nekog energetskog biomarkera.
[0098] Farmaceutske ili kozmetičke kompozicije koje sadrže jedinjenja ovog pronalaska mogu biti u bilo kom obliku pogodnom za namenjeni postupak davanja, uključujući, na primer, rastvor, suspenziju, ili emulziju. Tečni nosači obično se koriste u pripremanju rastvora, suspenzija, i emulzija. Tečni nosači razmatrani za upotrebu u praksi ovog pronalaska uključuju, na primer, vodu, slani rastvor, farmaceutski prihvatljiv organski rastvarač(e), farmaceutski prihvatljiva ulja ili masti, i slično, kao i mešavine dva ili više od navedenih. Tečni nosač može da sadrži neke druge pogodne farmaceutski prihvatljive aditive kao što su sredstva za rastvaranje, emulgatori, hranljive materije, puferi, prezervativi, agensi za suspendovanje, progušćivači, regulatori viskoziteta, stabilizatori, i slično. Pogodni organski rastvarači uključuju, na primer, monohidroksilne alkohole, kao što su etanol, i polihidroksilne alkohole, kao što su glikoli.
Pogodna ulja uključuju, na primer, sojino ulje, kokosovo ulje, maslinovo ulje, suncokretovo ulje, laneno ulje, i slično. Za parenteralno davanje, nosač takođe može biti bilo koji uljani estar kao što su etil oleat, izopropil miristat, i slično. Kompozicije ovog pronalaska takođe mogu biti u obliku mikročestica, mikrokapsula, lopozomalnih enkapsulata, i slično, kao i kombinacije bilo kojih od jednog ili dva prethodno navedena.
[0099] Mogu se koristiti sistemi dostave postepenog oslobađanja ili kontrolisanog solobađanja, kao što su sistem matrice kontrolisan difuzijom ili neki erodibilni sistem, kako je opisano na primer u: Lee, "Diffusion-Controlled Matrix Systems", pp.155-198 i Ron and Langer, "Erodible Systems", pp.199-224, u "Treatise on Controlled Drug Delivery", A. Kydonieus Ed. , Marcel Dekker, Inc. , New York 1992. Matrica može biti, na primer, biorazgradivi materijal koji može da se degradira spontano in situ i in vivo, na primer, hidrolizom ili enzimatičnim cepanjem, npr. , proteazom. Sistem dostave može biti, na primer, neki prirodni ili sisntetički polimer ili kopolimer, na primer u obliku hidrogela. Primerni polimeri sa vezama koje se mogu pocepati uključuju poliestre, poliortoestre, polianhidride, polisaharidi, poli(fosfoestre), poliamide, poliuretane, poli(imidokarbonate) i poli(fosfazene).
[0100] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se davati enteralno, oralno, parenteralno, podjezično, inhalacijom (npr. raspršivači ili sprejevi), rektalno, ili topikalno u doznim jediničnim formulacijama koje sadrže konvencionalne nontoksične farmaceutski ili fiziološki prihvatljive nosače, adjuvanse, i vozilas ukoliko su potrebna. Na primer, pogodni načini davanja uključuju oralno, potkožno, transdermalno, transmukozalno, jonoforetično, intravenozno, intraarterijsko, intramuskularno, intraperitonealno, intranazalno (npr. putem mukoze nosa), subduralno, rektalno, gastrointestinalno, i slično, i direktno do specifičnog ili pogođenog organa ili tkiva. Za dostavu do centralnog nervnog sistema, mogu se primeniti spinalno ili epiduračno davanje, ili davanje u cerebralne ventrikule. Topikalno davanje može da uključi upotrebu transdermalnih davanja kao što su transdermalni flasteri ili jonoforezioni uređaji. Izraz parenteralno kako se ovde koristi uključuje potkožne injekcije, intravenozne, intramuskularne, intrasternalne injekcije, ili infuzione tehnike. Ova jedinjenja umešavaju se sa farmaceutski prihvatljivim nosačima, adjuvansima, i vozilima pogodnim za željenu putanju davanja. Oralno davanje je poželjna putanja davanja, a formulacije pogodne za oralno davanje su poželjne formulacije. Jedinjenja opisana ovde za upotrebu, mogu se davati čvrstom obliku, u tečnom obliku, u aerosolnom obliku, ili u obliku tableta, pilula, praškastih mešavina, kapsula, granula, injekcija, krema, rastvora, supozitorija, klizmi, sredstava za ispiranje kolona, emulzija, disperzija, premiksa hrane, i u drugim pogodnim oblicima. Ova jedinjenja takođe se mogu davati u lipozomalnim formulacijama. Ova jedinjenja takođe se mogu davati kao prolekovi, pri čemu taj prolek prolazi kroz transformaciju kod tretiranog subjekta u oblik koji je terapeutski efektivan. Dodatni postupci davanja poznati su u struci.
[0101] Injektabilni preparati, na primer, sterilne injektabilne vodene ili uljane suspenzije, mogu se formulisati u skladu sa strukom primenom pogodnih dispersgujućih ili agenasa za vlaženje i agenasa za suspendovanje. Sterilni injektabilni preparat takođe može biti neki sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u nekom netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer, kao rastvor u propilen glikolu. Među prihvatljivim vozilima i rastvaračima koji se mogu uposliti su voda, Ringerov rastvor, i izotonični rastvor natrijum hlorida. Pored toga, sterlina, fiksna ulja koncencionalno se upošljavaju kao rastvarač ili medijum za suspendovanje. U tom cilju, bilo koje blago masno ulje može se primeniti uključujući sintetičke mono- ili digliceride. Pored toga, masne kiseline kao što je oleinska kiselina pronalaze upotrebu u pripremanju injekcija.
[0102] Supozitorije za rektalno davanje nekog leka mogu se pripremiti umešavanjem tog leka sa pogodnim neiritirajućim ekscipijensom kao što su kakao buter i polietilen glikoli koji su čvrsti na sobnoj temperaturi, ali tečni na rektalnoj temperaturi te se stoga tope u rektumu i oslobađaju lek.
[0103] Čvrsti dozni oblici za oralno davanje mogu da uključe kapsule, tablete, pilule, praškove, i granule. Kod takvih doznih oblika, aktivna jedinjenje mogu se mešati sa najmanje jednim inertnim razblaživačem kao što su saharoza, laktoza ili skrob. Takvi dozni oblici takoše mogu da obuhvataju dodatne supstance pored inertnih razblaživača, npr., agense za podmazivanje kao što su magnezijum stearat. U slučaju kapsule, tablete, i pilule, dozni oblici mogu takođe da obuhvataju puferujuće agense. Tablete i pilule dodatno se mogu pripremiti sa enteričnim premazima.
[0104] Tečni dozni oblici za oralno davanje mogu da uključe farmaceutski prihvatljive emulzije, rastvore, suspenzije, sirupe, i eliksire koji sadrže inertne razblaživače koji se uobičajeno primenjuju u struci, kao što su voda. Takve kompozicije mogu takođe da obuhvataju adjuvanse, kao što su agensi za vlaženje, agensi za emulzifikovanje i agensi za suspendovanje, ciklodekstrine, i agense za zaslađivanje, aromu, miris.
[0105] Jedinjenja ovog pronalaska tako se mogu davati u obliku lipozoma. Kao što je poznato u struci, lipozomi se generalno izvode iz fosfolipida ili drugih lipidnih supstanci. Liposomi obrazovani mono- ili multilamelamim hidriranim tečnim kristalima koji su dispergovani u nekom vodenom medijumu. Bilo koji netoksičan, fiziološki prihvatljiv i metaboličan lipid sposoban da obrazuje lipozome može sew primeniti. Ove kompozicije u lipozomalnom obliku mogu a sadrže, pored jedinjenja ovog pronalaska, stabilizatore, prezervative, ekscipijense, i slično. Poželjni lipidi su fosfolipidi i fosfatidilni holini (lecitini), i prirodni i sintetički. Postupci za obrazovanje lipozoma poznati su ustruci. Videti, na primer, Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N. Y., p.33 et seq (1976).
[0106] Ovaj pronalazak also obezbeđuje uputsva proizvodnje i komplete koji sadrže materijale korisne za tretiranje, prevenciju, ili suzbijanje simptoma povezanih sa mitohondrijalnim poremećajem ili sa stanjem povezanim sa mitohondrijalnom disfunkcijom. To uputstvo proizvodnje obuhvata kontejner sa oznakom. Pogodni kontejneri uključuju, na primer, boce, bočice, i test eprivete. Kontejneri mogu biti izrađeni od različitih materijala kao što su staklo ili plastika. Kontejner sadrži kompoziciju koja ima neki aktivan agens koji je efektivan za tretiranje, prevenciju, ili suzbijanje simptoma povezanih sa mitohondrijalnim poremećajem ili sa stanjem povezanim sa mitohondrijalnom disfunkcijom. Aktivni agens u kompozicije je jedan ili više jedinjenja ovog pronalaska. Oznaka na kontejneru poželjno ukazuje da se kompozicija primenjuje se tretiranje, prevenciju, ili suzbijanje simptoma povezanih sa mitohondrijalnim poremećajem ili sa stanjem povezanim sa mitohondrijalnom disfunkcijom, i takođe može ukazivati na smernice bilo za in vivo ili in vitro upotrebu, kao što prethodno opisane.
[0107] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje komplete koji obuhvataju bilo koje jedno ili više jedinjenja ovog pronalaska. U nekim ostvarenjima, komplet prema ovog pronalaska obuhvata prethodno opisan kontejner. U drugim ostvarenjima, komplet ovog pronalaska obuhvata ovde opisan kontejner i neki drugi kontejner koji obuzhvata pufer. On dalje može da uključi druge materijala poželjne sa komericijalnog ili korisničkog stanovišta, uključujući druge pufere, razblaživače, filtere, igle, špriceve, i umetke sa uputstvima za izvođenje bilo kog ovde opisanog postupka.
[0108] U ostalim aspektima, kompleti se mogu primeniri za bilo koji ovde opisan postupak, uključujući, na primer, postupke za tretiranje, prevenciju, ili suzbijanje simptoma povezanih sa mitohondrijalnim poremećajem ili sa stanjem povezanim sa mitohondrijalnom disfunkcijom.
[0109] Količina aktivnog sastojka koja s može kombinovati sa materijalima nosača kako bi se proizveo jedan dozni oblik zavisiće od domaćina kome se aktivni sastojak daje i određenog načina davanja.
Međutim, podrazumeva se da će specifičan dozni nivo za svakog određenog pacijenta zavisiti od različitih faktora uključujući aktivnost specific uposlenog jedinjenja, starosti, telesne mase, telesne površine, indeksa telesne težine (BMI), opšteg zdravstvenog stanja, pola, ishrane, vremena davanja, putanje davanja, brzine otpuštanja, kombinacij lekova, i vrste, progresije, i ozbiljnosti određene bolesti koje je pod terapijom ili stanja koje se trtira. Odabrana jedinična doza obično je proizvedena i daje se kako bi se obezbedila konačna koncentracija leka u krvi, tkivima, organima, ili drugim ciljanim regionima tela. Efektivna količina za datu situaciju lako se može odrediti rutinskim eksperimentisanjem koje je unutar sposobnosti i procene prosečnog lekara ili stručnjaka.
[0110] Primeri doziranja koji se mogu primeniti su neke efektivne količine jedinjenja ovog pronalaska unutar doznog opsega od oko 0.1 µg /kg do oko 300 mg/kg, ili unutar oko 1.0 µg /kg do oko 40 mg/kg telesne mase, ili unutar oko 1.0 µg/kg do oko 20 mg/kg telesne mase, ili unutar oko 1.0 µg /kg do oko 10 mg/kg telesne mase, ili unutar oko 10.0 µg /kg do oko 10 mg/kg telesne mase, ili unutar oko 100 µg/kg do oko 10 mg/kg telesne mase, ili unutar oko 1.0 mg/kg do oko 10 mg/kg telesne mase, ili unutar oko 10 mg/kg do oko 100 mg/kg telesne mase, ili unutar oko 50 mg/kg do oko 150 mg/kg telesne mase, ili unutar oko 100 mg/kg do oko 200 mg/kg telesne mase, ili unutar oko 150 mg/kg do oko 250 mg/kg telesne mase, ili unutar oko 200 mg/kg do oko 300 mg/kg telesne mase, ili unutar oko 250 mg/kg do oko 300 mg/kg telesne mase. Ostale doze koje se mogu primeniti su oko 0.01 mg/kg telesne mase, oko 0.1
4
mg/kg telesne mase, oko 1 mg/kg telesne mase, oko 10 mg/kg telesne mase, oko 20 mg/kg telesne mase, oko 30 mg/kg telesne mase, oko 40 mg/kg telesne mase, oko 50 mg/kg telesne mase, oko 75 mg/kg telesne mase, oko 100 mg/kg telesne mase, oko 125 mg/kg telesne mase, oko 150 mg/kg telesne mase, oko 175 mg/kg telesne mase, oko 200 mg/kg telesne mase, oko 225 mg/kg telesne mase, oko 250 mg/kg telesne mase, oko 275 mg/kg telesne mase, ili oko 300 mg/kg telesne mase. Jedinjenja ovog pronalaska mogu se davati pojedinačnoj dnevnoj dozi, ili se ukupna dnevna doza može davati u podeljenim dozama dva, tri ili četiri puta na dan.
[0111] Dok se jedinjenja ovog pronalaska mogu davati kao jedini aktivni farmaceutski ili kozmetički agens, ona se takođe mogu primeniti u kombinaciji sa jednim ili više ostalih agenasa koji se koriste u tretiranju ili suzbijanju poremećaja. Reprezentativni agensi korisni u kombinaciji sa jedinjenjima ovog pronalaska za tretiranje, prevenciju, ili suzbijanje simptoma povezanih sa mitohondrijalnim poremećajem ili sa stanjem povezanim sa mitohondrijalnom disfunkcijom uključuju, ali nisu ograničeni na, Koenzim Q, vitamin E, idebenon, MitoQ, EPI-743, vitamin K i njihove analoge, naftokvinone i njihove drivate, druge vitamine, i antioksidansna jedinjenja.
[0112] Kada se dodatni aktivni agensi koriste u kombinaciji sa ovim jedinjenjima pronalaska, dodatni aktivni agensi mogu se generalno uposliti u terapeutskim količinama kako je naznačeno u Informacijama o lekovima i supstancama (PDR) 53. izdanje (1999), koje je inkorporirano kao referenca, ili takvim terapeutski korisnim količinama koje su poznate stručnjaku iz ove oblasti. Jedinjenja ovog pronalaska i drugi terapeutski aktivni agensi mogu se davati u predloženoj maksimalnoj kliničkoj dozi ili u nižim dozama. Dozni nivoi aktivnog jedinjenja u kompozicijama ovog pronalaska mogu da variraju kako bi se dobio željeni terapeutski odgovor u zavisnosti od putanje davanja, ozbiljnosti bolesti i odgovora pacijenta. Kad se daju u kombinaciji sa drugim terapeutskim agensima, terapeutski agensi se mogu biti formulisani kao odvojene formulacije koje se daju u isto vreme ili različita vremena, ili se terapeutski agensi mogu davati kao jedna kompozicija.
[0113] U ovom dokumentu i njegovim patentnim zahtevima, glagol "obuhvatati" i njegove promene primenjuju se u njegovom neograničavajućem značenju kako bi se označilo da su stavke koje slede posle te reči uključene, ali da stavke koje nisu posebno naznačene nisu isključene. Pored toga, pozivanje na neki element upotrebom "neki" ili "jedan" ne isključuje mogućnost da je prisutno više od jednog elementa, ukoliko kontekst jasno ne zahteva da može biti prisutan jedan i samo jedan od tih elemenata. Izrazi "neki" ili "jedan" prema tome obično označavaju "najmanje jedan".
[0114] Sve patentne i literaturne reference navedene u ovoj specifikaciji su na taj način inkorporirane kao referenca u svojoj celosti.
[0115] Primeri koji slede predloženi su samo u ilustrativne svrhe, i nemaju nameru da ograniče obim ovog pronalaska ni na koji način.
Opisa slika
[0116]
FIG.1. Nivoi proteinske ekspresije kompleksa I i II kako je određeno Vestern blot analizom nakon izlaganja ćelija tokom 72 sata jedinjenju F (KH001; FIG.1a), jedinjenju K (KH002; FIG.1b) ili jedinjenju N (KH003; FIG.1c) pri naznačenim koncentracijama. CT je kontrolna humana ćelijska linija fibroblasta kože 5120-C, P1 je ćelijska linija pacijenta 7206-S7, P2 je ćelijska linija pacijenta 5175-S7, C I je u potpunosti sastavljen proteinski kompleks I, a C II je u potpunosti sastavljeni proteinski kompleks II.
FIG.2. Proteinski nivoi u potpunosti sastavljenog proteinskog kompleksa I (FIG.2a) ili kompleksa II (FIG.
2b) određeni su nakon izlaganja kontrolne ćelijske linije 5120-C ili ćelijske linije pacijenta 5175-S7 jedinjenju N (KH003) pri indikovanim koncentracijama tokom 72 sata. Brojevi u stupcima ukazuju na broj nezavisnih eksperimenata. *, ** i *** ukazuju na značajne razlike (P<0.05, P<0.01 i P<0.001) u odnosu na kontrolne ćelije tretirane vozilom i ćelije pacijenata.
FIG.3. Ćelijske linije pacijenata kakve su naznačene u crtežima, koje sadrže različita mutacije u kompleks I podjedinici, inkubisane su sa povećanim koncetracijama jedinjenja F (KH001; FIG.3a), jedinjenja K (KH002; FIG.3b) ili jedinjenja N (KH003; FIG.3c). Nakon 72 sata, Obrazovanje CM-DCF mereno je kao indirektni pokazatelj intraćelijskih ROS nivoa. N ukazuje na broj nezavisnih eksperimenata, n ukazuje na broj uzoraka unutar svakog eksperimenta, a veh (vozilo je određeno kao 100%) ukazuje na to da je ćelijska linija tretirana samo sa 0.1% DMSO.
FIG.4. In vivo efekat jedinjenja N (KH003) na jačinu stezanja kod Ndufs4 knockout miševa, testiranih kako je opisano u Primeru 4. KO = Ndufs4 knockout miševi; WT = odgovarajući divlji tip miševa; Vozilo = kontrolne injekcije bez aktivnog sastojka; KH003 = injekcije sa jedinjenjem N kao aktivnim sastojskom.
Lista skraćenica
[0117]
8-OHdG 8-hidroksi-2'-deoksigvanozin
Ac acetat
ACBT ε-aminokapronska kiselina i Bis-Tris/HCl
ADP adenozin difosfat
AKBR acetoacetat/3-hidroksibutirat
ALS amiotrofična lateralna skleroza
AT anaerobni prag
ATP adenozin trifosfat
Boc tert-butoksikarbonil
BMI indeks telesne težine
BMR brzina bazalnog metabolizma
BN-PAGE Elektroforeza prirodnim plavim poliakrilamidnim gelom CM-H2DCFDA 5-(i-6)-hlorometil-2',7'-dihlorodihidrofluorescein diacetat CO srčani izlaz
CPEO Hronična Progresivna Spoljna Oftalmoplegija
CSA ciklosporin A
CT kontrolne humane primarne ćelijske linije fibroblasta kože CYT C citohrom c
DCM dihlorometan
DIPEA N,N-diizopropiletilamin
DMF dimetilformamid
DMSO dimetil sulfksid
DOA dominantna optička atrofija
EDCI 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid
EDTA etilendiamintetrasirćetna kiselina
Et etil
FRDA Fridrajhova Ataksija
Gly glicil
HEPES 4-(2-hidroksietil)-1-piperazintansulfonska kiselina HOBt hidroksibenzotriazol
HPLC tečna hromatografija visokih performansi
HR otkucaji srca
ITIES interfejsi između dva nemešljiva rastvora elektrolita KSS Kearns-Sayre sindrom
LHON Leberova nasledna optička neuropatija
Me metil
4
MEGDEL 3-metilglutakonska aciduria, senzorineuralna nagluvost, encefalopatija i neuroradiološki nalazi sindroma nalik leighovom sindromu
MELAS mitohondrijalna miopatija, encefalopatija, laktatna acidoza, i šlog MERRF Mioklonusna epilepsija povezana sa nepravilnim crvenim vlaknima
MIDD Maternalno nasleđen dijabetes i Nagluvost
MitoQ10mitokvinon
MNGIE Mitohondrijalna neuro-gastro-intestinalna encefalopatija
MRS spektrometrija magnetnom rezonancom
NAD<+>nikotinamid adenin dinukleotid
NADH redukovani nikotinamid adenin dinukleotid
NARP neuropatija, ataksija i retinitis pigmentosa
NMM N-metilmorfolin
Orn ornitil
OXPHOS oksidativna fosforilacija
PBS fosfat-puferovani slani rastvor
PCr fosfokreatin
PDR Informacije o lekovima i supstancama
PVDF poliviniliden difluorid
Qc srčani izlaz
QSPR Kvantitativni odnos Strukture-Svojstva
ROS reaktivne kiseonične vrste
RQ respiratorni koeficijent
Su sukcinimid
THF tetrahidrofuran
TFA trifluoroacetat
TFAH trifluorosirćetna kiselina
VCO2 nivoi izlaza ugljen dioksida
VO2 nivoi potrošnje kiseonika
VO2max potrošnja kiseonika celog tela
Z benziloksikarbonil
Primeri
Primer 1: Sinteza jedinjenja
1.1 Sinteza jedinjenja F, K, N i O
1.1.1 Opšte informacije
[0118] Ukoliko nije drugačije naznačeno, materijali su kupljeni od komercijalnih dobavljača i primenjeni čim su primljeni. CH2Cl2je sveže destilovan iz kalcijum hidrida. Sve reakcije osetljive na vazduh i vlažnost izvedene su pod inertnom atmosferom suvog azota. Hromatografija na koloni izvedena je primenom Acros silika gela (0.035-0.070 mm, 6 nm).
1.1.2 Sinteza Trolox™ 2-gvanidinoglicilaminoetilamid trifluoroacetat (jedinjenje F)
[0119] FAZA A: U rastvor Trolox™ (1.2 g, 4.65 mmol) u DMF (45 mL) dodat je HOBt (0.691 g, 5.12 mmol), praćeno EDCI (0.981 g, 5.12 mmol). Mešavina je umešavana dok nije dobijen providan rastvor. Zatim, DIPEA (0.891 mL, 5.12 mmol) dodat je ukapavanjem. Rastvor je ohlađen do 4 °C (ledeno kupatilo) i Bocetilendiamin (0.811 mL, 4.88 mmol) je dodat. Mešavina je umešavana na 4 °C tokom 5 min, ostavljena da se zagreje na sobnoj temperauri i umešavana tokom dodatnih 1 h. Mešavina je zatim razblažena sa EtOAc (200 mL) i oprana vodenom limunskom kiselinom (10 mas.%, 2 × 60 mL). Kombinovane vodene faze su ekstrahovane sa EtOAc (60 mL), nakon čega su organske faze kombinovane i oprane sa H2O (60 mL), zas.vod. NaHCO3(60 mL), H2O (60 mL) i fiziološkim rastvorom (60 mL), osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncetrovane in vacuo. Dobijeni INTERMEDIJER A (1.8 g) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0120] FAZA B: U rastvor INTERMEDIJERA A (1.75 g, 4.46 mmol) u EtOAc (25 mL) dodat je sveže pripremljen zasićeni rastvor HCl u EtOAc (45 mL). Rastvor je umešavan tokom 45 min, tokom koga je obrazovan beli talog. Suspenzija je zatim razblažena sa Et2O (150 mL) , a rezultujuća mešavina je umešavana dodatnih 30 min. Čvrste materije sakupljene su filtracijom, oprane sa Et2O (2 × 30 mL) i osušene in vacuo. Dobijeni INTERMEDIJER B (1.36 g) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0121] FAZA C: Rastvor INTERMEDIJERA B (1.32 g, 4.0 mmol) u DMF (40 mL) ohlađen je do 4 °C (ledeno kupatilo). Zatim, DIPEA (1.5 mL, 8.8 mmol) dodat je ukapavanjem, praćeno dodavanjem u porcijama Boc-Gly-OSu (1.1 g, 4.0 mmol). Mešavina je ostavljena da se zagreje na sobnoj temperauri i umešavana tokom 1.5 h. Nakon toga, mešavina je razblažena sa EtOAc (250 mL) i oprana vodenom limunskom kiselinom (10 mas.%, 2 × 50 mL), H2O (50 mL), zas.vod. NaHCO3(2 × 50 mL), H2O (50 mL) i fiziološkim rastvorom (50 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncetrovana in vacuo. Dobijeni INTERMEDIJER C (1.52 g) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0122] FAZA D: U rastvor INTERMEDIJERA C (1.42 g, 3.16 mmol) u EtOAc (20 mL) dodat je sveže pripremljen zasićeni rastvor HCl u EtOAc (40 mL). Rastvor je umešavan tokom 1 h, tokom koga je obrazovan beli talog. Suspenzija je zatim razblažena sa Et2O (120 mL) , a rezultujuća mešavina je
4
umešavana dodatnih 30 min. Čvrste materije sakupljene su filtracijom, oprane sa Et2O (2 × 25 mL) i osušene in vacuo. Dobijeni INTERMEDIJER D (925 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0123] FAZA E: U rastvor INTERMEDIJERA D (200 mg, 0.52 mmol) u DMF (3 mL) dodat je NMM (0.15 mL, 1.35 mmol), praćeno 1,3-di-Boc-2-(trifluorometilsulfonil)gvanidinom (223 mg, 0.57 mmol). Rezultujuća mešavina je umešavana tokom 16 h. Zatim, mešavina je razblažena sa EtOAc (15 mL), ekstrahovana iz vodene limunske kiseline (10 mas.%, 2 × 5 mL), H2O (5 mL), fiziološkog rastvora (2 × 5 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncetrovana in vacuo. Prečišćavanjem fleš hromatografijom na koloni (EtOAc/heptan 2:1) dobijen je INTERMEDIJER E (259 mg) kao bela čvrsta materija.
[0124] FAZA F: Rastvor INTERMEDIJERA E (144 mg, 0.24 mmol) u TFA/DCM (1:1 v/v, 4 mL) umešavan je tokom 2 h. Rastvor je zatim razblažen toluenom (2 × 10 mL) i koncetrovan in vacuo. Ostatak je skinut sa H2O (2 × 10 mL) i liofilizovan iz H2O (3 mL), dajući Trolox™ 2-gvanidinoglicilamino-etilamid trifluoroacetat (123 mg) kao beli prah.
<1>H NMR jedinjenja F (D2O, 400 MHz): δ (ppm) = 3.74 (s, 2H), 3.44-3.21 (m, 4H), 2.72-2.60 (m, 1H), 2.54-2.41 (m, 1H), 2.35-2.25 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.88-1.77 (m, 1H), 1.50 (s, 3H).
1.1.3 Trolox™ 2-acetamidinoglicilaminoetilamid hidrohlorid (jedinjenje K)
[0125] FAZA G: U rastvor INTERMEDIJERA D (136 mg, 0.35 mmol) u metanolu (4 mL), dodat je NH3u metanolu (7N, 0.2 mL), praćeno dodavanjem u porcijama etil acetimidat hidrohlorida (65 mg, 0.53 mmol). Mešavina je umešavana tokom 15 min. Zatim, silika gel (400 mg) dodat je rastvoru, a rezultujuća mešavina koncentrovana je pod redukovanim. Prečišćavanjem fleš hromatografijom na koloni (DCM/metanol 9:1 do 8:2), praćeno liofilizacijom iz H2O (3 mL) dobijen je Trolox™ 2-acetamidinoglicilaminoetilamid hidrohlorid (120 mg) kao eličasti prah.
<1>H NMR jedinjenja K (D2O, 400 MHz): δ (ppm) = 3.86-3.75 (m, 2H), 3.46-3.23 (m, 4H), 2.72-2.63 (m, 1H), 2.51-2.47 (m, 1H), 2.35-2.28 (m, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.87-1.78 (m, 1H), 1.51 (s, 3H).
1.1.4 Trolox™ ornitilamid hidrohlorid (jedinjenje N)
[0126] FAZA H: Rastvor Z-Orn(Boc)-OH (2.5 g, 6.8 mmol) u DMF (7 mL) ohlađen je do 4 °C (ledeno kupatilo), nakon čega je u porcijama dodat kalijum karbonat (0.94 g, 6.8 mmol). Rezultujuća suspenzija ostavljena je da se umešava tokom 5 min, nakon čega je dodat ukapavanjem jodometan (0.51 mL, 8.2 mmol). Mešavina je ostavljena da se zagreje na sobnoj temperauri i umešavana tokom 2.5 h. Zatim, dodata je H2O (10 mL), a vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi
4
oprani su sa vodenim Na2S2O5(2.5 mas.%, 5 mL) i fiziološkim rastvorom (5 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncetrovani in vacuo. Dobijeni INTERMEDIJER H (2.43 g) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0127] FAZA I: U rastvor INTERMEDIJERA H (2.4 g, 6.4 mmol) u izo-propanolu (54 mL) dodata je sirćetna kiselina ukapavanjem (0.4 mL, 7 mmol), praćeno suspenzijom paladijuma na ugljeniku (10 mas.%, 0.68 g, 0.64 mmol) u H2O (6 mL). Rezultujuća crna suspenzija smeštena je pod atmosferu H2i umešavana tokom 3 h. Zatim, reakciona mešavina produvana je gasom azota tokom 5 min, nakon čega je mešavina filtrirana kroz Celit. Filtrat je koncentrovan in vacuo, dajući INTERMEDIJER I (1.76 g) kao bezbojno ulje koje je upotrebljeno u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0128] FAZA J: U rastvor Trolox™ (0.72 g, 2.8 mmol) u DMF (22 mL) dodat je HOBt (0.42 g, 3.1 mmol), praćeno EDCI (0.59 g, 3.1 mmol). Mešavina je umešavana dok nije dobijen providan rastvor. Zatim, DIPEA (0.54 mL, 3.1 mmol) dodat je ukapavanjem. Rastvor je ohlađen do 4 °C (ledeno kupatilo) i INTERMEDIJER I (900 mg, 2.94 mmol) je dodat. Mešavina je umešavana na 4 °C tokom 5 min, ostavljena da se zagreje na sobnoj temperauri i umešavana tokom dodatnih 1 h. Mešavina je zatim razblažena sa EtOAc (120 mL) i oprana vodenom limunskom kiselinom (10 mas.%, 2 × 40 mL). Kombinovane vodene faze su ekstrahovane sa EtOAc (40 mL), nakon čega su organske faze kombinovane i oprane sa H2O (40 mL), zas.vod. NaHCO3(40 mL), H2O (40 mL) i fiziološkim rastvorom (40 mL), osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncetrovane in vacuo. Prečišćavanjem fleš hromatografijom na koloni (EtOAc/heptan 1:1) dobijen je INTERMEDIJER J (1.1 g) kao bela pena.
[0129] FAZA K: Rastvor INTERMEDIJERA J (587 mg, 1.23 mmol) u THF (2.5 mL) ohlađen je do 4 °C (ledeno kupatilo). Zatim, vodeni NaOH (1M, 2.5 mL, 2.5 mmol) dodat je ukapavanjem. Rastvor je ostavljen da se zagreje na sobnoj temperauri, a mešavina je umešavana tokom 1 h. Nakon toga, mešavina je razblažena sa H2O (15 mL) i Et2O (15 mL). Slojevi su umešani, a zatim razdvojeni. Vodena faza je oprana sa Et2O (15 mL), zakiseljena do pH = 2.5 primenom zas.vod. KHSO4, i ekstrahovana sa Et2O (2 × 10 mL). Poslednje dve organske faze su kombinovane, oprane sa zas.vod. NH4Cl (2 × 10 mL), fiziološkim rastvorom (10 mL), osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncetrovane in vacuo. Dobijeni INTERMEDIJER K (490 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0130] FAZA L: Rastvor INTERMEDIJERA K (170 mg, 0.36 mmol) u EtOAc (4 mL) produvan je sa HCl(g) tokom 25 min. Zatim, rastvor je produvan argonom tokom 15 min, što je rezultiralo obrazovanjem taloga. Mešavina je razblažena sa Et2O (20 mL), umešavana tokom 15 min nakon čega su obrazovane čvrste materije sakupljene filtracijom. Čvrste materije liofilizovane su iz H2O (3 mL), dajući Trolox™
4
ornitilamid hidrohlorid (115 mg) kao beličasta čvrsta materija.
<1>H NMR jedinjenja N (1:1 mešavina diasteromera, D2O, 400 MHz): δ (ppm) = 4.38-4.23 (m, 2 × 1H), 3.01-2.93 (m, 2H), 2.73-2.27 (m, 2H 2 × 3H), 2.21 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.15 (s, 2 × 3H), 2.05 (s, 2 × 3H), 2.00-1.73 (m, 2 × 3H), 1.68-1.51 (m, 2 × 1H), 1.58 (s, 3H), 1.55 (s, 3H), 1.12-0.94 (m, 2 × 1H).
1.1.5 Trolox™ arginilamid hidrohlorid (jedinjenje O)
[0131] FAZA M: U rastvor Trolox™ (0.49 g, 1.9 mmol) u DMF (20 mL) dodat je HOBt (0.29 g, 2.1 mmol), praćeno EDCI (0.40 g, 2.1 mmol). Mešavina je umešavana dok nije dobijen providan rastvor. Zatim, DIPEA (0.37 mL, 2.1 mmol) je dodat ukapavanjem. Rastvor je ohlađen do 4 °C (ledeno kupatilo) i dodat je H-Arg(PMC)-OtBu (1.0 g, 2.0 mmol). Mešavina je umešavana na 4 °C tokom 5 min, ostavljena da se zagreje na sobnoj temperauri i umešavana tokom dodatnih 1 h. Mešavina je zatim razblažena sa EtOAc (100 mL) i oprana vodenom limunskom kiselinom (10 mas.%, 2 × 30 mL). Kombinovane vodene faze su ekstrahovane sa EtOAc (30 mL), nakon čega su organske faze kombinovane i oprane sa H2O (30 mL), zas.vod. NaHCO3(30 mL), H2O (30 mL) i fiziološkim rastvorom (30 mL), osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncetrovane in vacuo. Dobijeni INTERMEDIJER M (1.31 g) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0132] FAZA N: Rastvor INTERMEDIJERA M (200 mg, 0.27 mmol) in DCM/TFA (1:1 v/v, 3 mL) je umešavan tokom 30 min. Zatim, mešavina je razblažena toluenom (10 mL) i koncetrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je skinut toluenom (2 × 10 mL) i prenet u vodu (10 mL). Rezultujuća suspenzija zakiseljena je primenom vodenog HCl (1M, 55 mL), razblažena sa Et2O (10 mL) i snažno umešavana tokom 15 min. Slojevi su razdvojeni i vodena faza je oprana sa Et2O (2 × 10 mL). Liofilizacijom vodene faze dobijen je Trolox™ arginilamid hidrohlorid (120 mg) kao beličasta čvrsta materija.
<1>H NMR jedinjenja O (1:1 mešavina diasteromera, D2O, 400 MHz): δ (ppm) = 4.35 (dd, J = 8.6, 4.0 Hz, 1H), 4.24 (dd, J = 8.6, 4.8 Hz, 1H), 3.08 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.59-2.33 (m, 2 × 3H), 2.23 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.16 (s, 2 × 3H), 2.07 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.98-1.73 (m, 2 × 3H), 1.62 (s, 3H), 1.57 (s, 3H), 1.57-1.30 (m, 2 × 1H), 1.00-0.76 (m, 2 × 1H).
1.2 Sinteza jedinjenja R-T, S-T, R-U, S-U, R-V, S-V, R,R-X, R,S-X, S,R-X, S,S-X, rac-Z, R,trans-AE, S,trans-AE, S,R-AF, S,R-AG, S,S-AG i S-AH.
1.2.1 Opšte informacije
[0133] OPŠTI POSTUPAK A za EDCl/HOAt kuplovanje amina sa Trolox™: U mešavinu Trolox™ (1 eq) i amina (1 eq) u DMF (suv, ∼0.2M) pod atmosferom azota dodati su EDCl.HCl (1.1 eq) i HOAt (0.1 eq). Mešavina je umešavana na sobnoj temperaturi do potpune konverzije (LCMS). Mešavina je razblažena sa H2O (20 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 20 mL). Kombinovane organske faze sukcesivno su oprane
4
sa 0.5M KHSO4(20 mL), zas.vod. NaHCO3(20 mL) i fiziološkim rastvorom (3 x 20 mL). Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncetrovana in vacuo.
[0134] OPŠTI POSTUPAK B za BOC-deprotekciju: U rastvor INTERMEDIJERA A (1 eq) u DCM (-0.03M) dodat je 4N HCl u dioksanu (36 eq). Mešavina je umešavana na sobnoj temperaturi do potpune konverzije (LCMS), koncetrovana, kouparena sa DCM (2x), prečišćena reverzno faznom hromatografijom na koloni (H2O 0.01% (mas.) mravlja kiselina/MeCN) i osušena zamrzavanjem.
1.2.2 Trolox™ piperidin-3-amid hidrohlorid (jedinjenje X, R,R-stereoizomer)
[0135] FAZA A: U skladu sa opštom procedurom A INTERMEDIJER Xa je pripremljen, primenom (R)-Trolox™ (250 mg) i (R)-3-amino-1-N-Boc-piperidina (200 mg). INTERMEDIJER Xa (349 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0136] FAZA B: U skladu sa opštom procedurom B FINALNO JEDINJENJE R,R-X (209 mg) je pripremljeno.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO): δ □ (ppm): 8.23 (1H, s), 7.55 (1H, br s), 7.30 (1H, d, J=8.4 Hz), 3.85 - 3.73 (1H, m), 2.99 - 2.90 (1H, m), 2.89 - 2.79 (1H, m), 2.73 - 2.64 (1H, m), 2.64 - 2.37 (3H, m), 2.23 - 2.14 (1H, m), 2.11 (3H, s), 2.07 (3H, s), 1.99 (3H, s), 1.79 - 1.67 (1H, m), 1.54 - 1.45 (1H, m), 1.44 - 1.26 (3H, m), 1.39 (3H, s).
1.2.3 Trolox™ piperidin-3-amid hidrohlorid (jedinjenje X, R,S-stereoizomer)
[0137] FAZA A: U skladu sa opštom procedurom A INTERMEDIJER Xb je pripremljen, primenom (R)-Trolox™ (100 mg) i (S)-3-amino-1-N-Boc-piperidina (80 mg). INTERMEDIJER Xb (143 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0138] FAZA B: U skladu sa opštom procedurom B FINALNO JEDINJENJE R,S-X (68 mg) je pripremljeno.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO): δ (ppm): 8.25 (1H, s), 7.53 (1H, br s), 7.26 (1H, d, J=8.4 Hz), 3.78 - 3.64 (1H, m), 2.83 - 2.71 (2H, m), 2.63 - 2.34 (4H, m), 2.17 - 2.03 (1H, m), 2.09 (3H, s), 2.07 (3H, s), 1.99 (3H, s), 1.82 - 1.72 (1H, m), 1.72 - 1.55 (2H, m), 1.54 - 1.41 (2H, m), 1.36 (3H, s).
1.2.4 Trolox™ 4-diemtilaminobutilamid hidrohlorid (jedinjenje V, R-stereoizomer)
[0139] U skladu sa opštom procedurom A FINALNO JEDINJENJE R-V je pripremljeno, primenom (R)-Trolox™ (100 mg) i 4-(Dimetilamino)butilamina (46 mg). Kada je reakcija dostigla potpunu konverziju, mešavina je ugašena sa H2O (20 mL), bazifikovana sa zas.vod. Na2CO3do pH ∼9 i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 40 mL). Kombinovane organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncetrovane in vacuo. Sirovi materijal prečišćen je hromatografijom na koloni silicijum dioksida (DCM/7N NH3in MeOH),
4
rastvoren u dietil etru (5 mL) i tretiran 1N HCl u dietil etru (1 mL). Mešavina je koncentrovana in vacuo, kouparena sa DCM (3x) i osušena zamrzavanjem (H2O/MeCN) kako bi se dobilo FINALNO JEDINJENJE R-V (86 mg).<1>H NMR (400 MHz, DMSO): δ (ppm): 10.14 (1H, s), 7.53 (1H, br s), 7.46 - 7.38 (1H, m), 3.17 -2.99 (2H, m), 2.98 - 2.87 (2H, m), 2.63 (6H, s), 2.57 - 2.35 (2H, m), 2.22 - 2.13 (1H, m), 2.10 (3H, s), 2.07 (3H, s), 1.99 (3H, s), 1.78 - 1.65 (1H, m), 1.50 - 1.29 (4H, m), 1.37 (3H, s).
1.2.5 Trolox™ 4-diemtilaminobutilamid hidrohlorid (jedinjenje V, S-stereoizomer)
[0140] U skladu sa opštom procedurom A FINALNO JEDINJENJE S-V je pripremljeno, primenom (S)-Trolox™ (100 mg) i 4-(Dimetilamino)butilamina (46 mg). Kada je reakcija dostigla potpunu konverziju, mešavina je ugašena sa H2O (20 mL), bazifikovana sa zas.vod. Na2CO3do pH ∼9 i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 40 mL). Kombinovane organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncetrovane in vacuo. Sirovi materijal prečišćen je hromatografijom na koloni silicijum dioksida (DCM/7N NH3in MeOH), rastvoren u dietil etru (5 mL) i tretiran 1N HCl u dietil etru (1 mL). Mešavina je koncentrovana in vacuo, kouparena sa DCM (3x) i osušena zamrzavanjem (H2O/MeCN) kako bi se dobilo FINALNO JEDINJENJE S-V (92 mg).<1>H NMR (400 MHz, DMSO): δ (ppm): 10.12 (1H, s), 7.53 (1H, br s), 7.42 (1H, t, J=5.92 Hz), 3.16 -2.99 (2H, m), 2.98 - 2.86 (2H, m), 2.63 (6H, s), 2.58 - 2.35 (2H, m), 2.23 - 2.14 (1H, m), 2.11 (3H, s), 2.07 (3H, s), 1.99 (3H, s), 1.78 - 1.64 (1H, m), 1.53 - 1.29 (4H, m), 1.37 (3H, s).
1.2.6 Trolox™ piperidin-3-amid hidrohlorid (jedinjenje X, S,R-stereoizomer)
[0141] FAZA A: U skladu sa opštom procedurom A INTERMEDIJER Xc je pripremljeno, primenom (S)-Trolox™ (5.49 g) i (R)-3-amino-1-N-Boc-piperidina (4.39 g). Nakon prečišćavanja hromatografijom na koloni silicijum dioksida (Heptan/EtOAc) INTERMEDIJER Xc (6.11 g) upotrebljen je u sledećoj fazi.
[0142] FAZA B: U skladu sa opštom procedurom B, bez prečišćavanja reverzno faznom hromatografijom na koloni, FINALNO JEDINJENJE S,R-X (4.43 g) je pripremljeno.1H NMR (400 MHz, DMSO): δ (ppm): 8.95 (2H, s), 7.58 - 7.48 (2H, m), 4.03 - 3.88 (1H, m), 3.16 - 3.05 (1H, m), 3.03 - 2.93 (1H, m), 2.76 - 2.62 (2H, m), 2.60 - 2.37 (2H, m), 2.18 - 2.03 (1H, m), 2.08 (3H, s), 2.07 (3H, s), 2.00 (3H, s), 1.86 -1.72 (3H, m), 1.72-1.45 (2H, m), 1.36 (3H, s).
1.2.7 Trolox™ piperidin-3-amid hidrohlorid (jedinjenje X, S,S-stereoizomer)
[0143] FAZA A: U skladu sa opštom procedurom A INTERMEDIJER Xd je pripremljeno, primenom (S)-Trolox™ (100 mg) i (S)-3-amino-1-N-Boc-piperidina (80 mg). INTERMEDIJER Xd (158 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0144] FAZA B: U skladu sa opštom procedurom B FINALNO JEDINJENJE S,S-X (122 mg) je pripremljeno.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO): δ (ppm): 8.24 (1H, s), 7.56 (1H, br s), 7.28 (1H, d, J = 8.4 Hz), 3.82 - 3.69 (1H, m), 2.95 - 2.85 (1H, m), 2.85 - 2.73 (1H, m), 2.70 - 2.61 (1H, m), 2.61 - 2.35 (3H, m), 2.23 - 2.13 (1H, m), 2.11 (3H, s), 2.07 (3H, s), 1.99 (3H, s), 1.79 - 1.66 (1H, m), 1.53 - 1.42 (1H, m), 1.42 - 1.24 (3H, m), 1.39 (3H, s).
1.2.8 Trolox™ 1-metilpiperidinium-4-amid format (jedinjenje AH, S-stereoizomer)
[0145] U mešavinu (S)-Trolox™ (100 mg) i 1-metilpiperidin-4-amina (46 mg) u DMF (suv, 2 ml) dodat je PyBOP (249 mg, 1.2 eq). Nakon umešavanja tokom noći na sobnoj temperaturi mešavina je ugašena sa H2O (20 ml). Dodat je zas.vod. NaHCO3(30 ml), a vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 ml). Kombinovane organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncetrovane in vacuo. Sirovi materijal prečišćen je reverzno faznom hromatografijom na koloni ((H2O 0.01% (mas.) mravlja kiselina/MeCN) i osušena zamrzavanjem kako bi se dobilo FINALNO JEDINJENJE S-AH (75 mg).<1>H NMR (400 MHz, DMSO): δ (ppm): 8.21 (1H, s), 7.57 (1H, br s), 6.91 (1H, d, J = 7.32 Hz), 3.64 - 3.43 (1H, m), 2.62 - 2.27 (4H, m), 2.24 - 2.01 (3H, m), 2.14 (3H, s), 2.10 (3H, s), 2.07 (3H, s), 1.98 (3H, s), 1.78 - 1.62 (2H, m), 1.57 - 1.42 (2H, m), 1.42 - 1.29 (1H, m), 1.38 (3H, s).
1.2.9 Trolox™ 4-aminocikloheksilamid hidrohlorid (jedinjenje AE, R,trans-stereoizomer)
[0146] FAZA A: U skladu sa opštom procedurom A INTERMEDIJER AEa je pripremljen, primenom (R)-Trolox™ (100 mg) i N-Boc-trans-1,4-cikloheksandlamina (86 mg). INTERMEDIJER AEa (186 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0147] FAZA B: U skladu sa opštom procedurom B FINALNO JEDINJENJE R,trans-AE (102 mg) je pripremljeno.<1>H NMR (400 MHz, DMSO): δ (ppm): 8.42 (1H, s), 7.57 (2H, br s), 6.92 (1H, d, J = 8.3 Hz), 3.79 - 2.98 (1H, m), 2.84 - 2.69 (1H, m), 2.61 - 2.36 (2H, m), 2.19 - 1.91 (1H, m), 2.07 (3H, s), 2.06 (3H, s), 1.99 (3H, s), 1.89 - 1.65 (4H, m), 1.61 - 1.46 (1H, m), 1.40 - 1.05 (4H, m), 1.35 (3H, s).
1.2.10 Trolox™ 4-aminocikloheksilamid hidrohlorid (jedinjenje AE, S,trans-stereoizomer)
[0148] FAZA A: U skladu sa opštom procedurom A INTERMEDIJER AEb je pripremljen, primenom (S)-Trolox™ (100 mg) i N-Boc-trans-1,4-cikloheksandiamina (86 mg). INTERMEDIJER AEb (182 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0149] FAZA B: U skladu sa opštom procedurom B FINALNO JEDINJENJE S,trans-AE (84 mg) je pripremljeno.1H NMR (400 MHz, DMSO): δ (ppm): 8.43 (1H, s), 7.57 (2H, br s), 6.93 (1H, d, J = 8.4 Hz), 3.53 - 3.35 (1H, m), 2.86 - 2.72 (1H, m), 2.60 - 2.36 (2H, m), 2.21 - 1.92 (1H, m), 2.08 (3H, s), 2.07 (3H, s), 1.98 (3H, s), 1.90 - 1.66 (4H, m), 1.61 - 1.47 (1H, m), 1.41 - 1.08 (4H, m), 1.35 (3H, s).
1
1.2.11 Trolox™ 4-aminobutilamid hidrohlorid (jedinjenje T, R-stereoizomer)
[0150] FAZA A: INTERMEDIJER Ta je pripremljen, primenom (R)-Trolox™ (200 mg) i N-Boc-1,4-butanediamina (150 mg). U ohlađenu (0°C) mešavina reaktanata u DMF (suv, 0.05 M) pod atmosferom azota dodati su EDCl.HCl (1.1 eq) i HOAt (0.1 eq). Mešavina je umešavana 1 sat na 0°C i ostavljena da dostigne sobnu temperaturu i umešavana do potpune konverzije (LCMS). Reakciona mešavina je usuta u 10 eq (to DMF) vode i ekstrahovana sa EtOAc (3x 50 mL). Kombinovane organske faze sukcesivno su oprane sa 0.5M KHSO4(50 mL), zas.vod. NaHCO3 (50 mL) i fiziološkim rastvorom (3x 50 mL). Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncetrovana in vacuo. INTERMEDIJER Ta (100 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0151] Faza B: U skladu sa opštom procedurom B FINALNO JEDINJENJE R-T (66 mg) je pripremljeno.<1>H NMR(400 MHz, DMSO): δ (ppm): 8.41 (1H, s), 7.34 (2H, t, J=6.0 Hz), 3.14 - 2.95 (2H, m), 2.72 - 2.59 (2H, m), 2,54 (1H, s), 2.47 - 2.34 (2H, m), 2,21 - 2.12 (1H, m), 2,09 (3H, s), 2,07 (3H, s), 1,99 (3H, s), 1.79 - 1.65 (1H, m), 1.45- 1.27 (4H, m), 1.35 (3H, s).
1.2.12 Trolox™ 4-aminobutilamid hidrohlorid (jedinjenje T, S-stereoizomer)
[0152] Faza A: INTERMEDIJER Tb je pripremljen, primenom (S)-Trolox ™ (200 mg) i N-Boc-1,4-butanediamina (150 mg). U ohlađenu (0°C) mešavina reaktanata u DMF (suv, 0.05 M) pod atmosferom azota dodati su EDCl.HCl (1.1 eq) i HOAt (0.1 eq). Mešavina je umešavana 1 sat na 0°C i ostavljena da dostigne sobnu temperaturu i umešavana do potpune konverzije (LCMS). Reakciona mešavina je usuta u 10 eq (to DMF) vode i ekstrahovana sa EtOAc (3x 50 mL). Kombinovane organske faze sukcesivno su oprane sa 0.5M KHSO4(50 mL), zas.vod. NaHCO3 (50 mL) i fiziološkim rastvorom (3x 50 mL). Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncetrovana in vacuo. INTERMEDIJER Tb (100 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0153] Faza B: U skladu sa opštom procedurom B FINALNO JEDINJENJE S-T (67 mg) je pripremljeno.1H NMR (400 MHz, DMSO): δ (ppm): 8.41 (1H, s), 7,37 - 7.30 (1H, m), 3.13 - 2.97 (3H, m), 2.68 - 2.61 (2H, m), 2.20 - 2.11 (1H, m), 2.09 (3H, s), 2.07 (3H, s), 1.99 (3H, s), 1.79 - 1.66 (1H, m), 1.46 - 1.23 (4H, m), 1.35 (3H, s).
1.2.13 Trolox™ 5-aminopentilamid hidrohlorid (jedinjenje U, R-stereoizomer)
[0154] Faza A: INTERMEDIJER Ua je pripremljen, primenom (R)-Trolox™ (200 mg) i 1-Boc-amino-1,5-pentanediamina (162 mg). U ohlađenu (0°C) mešavina reaktanata u DMF (suv, 0.05 M) pod atmosferom azota dodati su EDCl.HCl (1.1 eq) i HOAt (0.1 eq). Mešavina je umešavana 1 sat na 0°C i ostavljena da
2
dostigne sobnu temperaturu i umešavana do potpune konverzije (LCMS). Reakciona mešavina je usuta u 10 eq (u DMF) vode i ekstrahovana sa EtOAc (3x 50 mL). Kombinovane organske faze sukcesivno su oprane sa 0.5M KHSO4(50 mL), zas.vod. NaHCO3(50 mL) i fiziološkim rastvorom (3x 50 mL). Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncetrovana in vacuo. INTERMEDIJER Ua (232 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0155] Faza B: U skladu sa opštom procedurom B FINALNO JEDINJENJE R-U (134 mg) je pripremljeno.1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.51 (1H, s), 7.22 - 6.45 (2H, širok s), 6.29 - 6.16 (1H, m), 3.64 - 3.41 (1H, m), 2.89 - 2.72 (1H, m), 2.69 - 2.40 (5H, m), 2.19 (3H, s), 2.18 (3H, s), 2.08 (3H, s), 1.83 - 1.68 (1H, m), 1.55 (3H, s), 1.45 - 1.33 (2H, m), 1.33 - 1.21 (1H, m), 1.20 - 1.03 (1H, m), 0.80 - 0.58 (2H, m).
1.2.14 Trolox™ 5-aminopentilamid hidrohlorid (jedinjenje U, S-stereoizomer)
[0156] Faza A: INTERMEDIJER Ub je pripremljen, primenom (S)-Trolox™ (200 mg) i 1-Boc-amino-1,5-pentanediamina (162 mg). U ohlađenu (0°C) mešavina reaktanata u DMF (suv, 0.05 M) pod atmosferom azota dodati su EDCI.HCl (1.1 eq) i HOAt (0.1 eq). Mešavina je umešavana 1 sat na 0°C i ostavljena da dostigne sobnu temperaturu i umešavana do potpune konverzije (LCMS). Reakciona mešavina je usuta u 10 eq (to DMF) vode i ekstrahovana sa EtOAc (3x 50 mL). Kombinovane organske faze sukcesivno su oprane sa 0.5M KHSO4(50 mL), zas.vod. NaHCO3(50 mL) i fiziološkim rastvorom (3x 50 mL). Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncetrovana in vacuo. INTERMEDIJER Ub (242 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0157] Faza B: U skladu sa opštom procedurom B FINALNO JEDINJENJE S-U (164 mg) je pripremljeno.1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.51 (1H, širok s), 6.26 - 6.23 (2H, dd), 3.64 - 3.37 (1H, m), 2.91 - 2.74 (1H, m), 2.72 - 2.61 (3H, m), 2.60 - 2.42 (3H, m), 2.19 (3H, s), 2.18 (3H, s), 2.08 (3H, s), 1.83 - 1.67 (1H, m), 1.55 (3H, s), 1.47 - 1.34 (2H, m), 1.34 - 1.22 (1H, m), 1.21 - 1.05 (1H, m), 0.80 - 0.62 (2H, m).
1.2.15 Trolox™ 1-metilpiperidin-3-amid hidrohlorid (jedinjenje AF, S,R-stereoizomer)
[0158] Faza A: INTERMEDIJER AFa je pripremljen, primenom (R)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (200 mg). Supstrat je rastvoren u THF (suv, 0.1M) i ohlađen do 0°C ledenim kupatilom. LiAlH4(5 eq 2.4 M u THF) dodat je ukapavanjem u ohlađeni rastvor. Reakciona mešavina je umešavana tokom 15 minuta na 0°C i ostavljena da dostigne sobnu temperaturu. Mešavina je zatim refluksovana do potpune konverzije (GCMS). Mešavina je ohlađena do 0°C i sekvencijalno ugašena vodom (0.2 mL), 15% NaOH rastvorom (0.2 mL) i vodom (0.6 mL) i umešavana tokom 1 sat. Talog je filtriran, a 4M HCl u dioksanu dodat je tom filtratu. Filtrat je koncentrovan in vacuo i triturisan u MeCN/MeOH kako bi se dobila bela čvrsta materija.
[0159] Faza B: FINALNO JEDINJENJE S,R-AF je pripremljeno primenom (S)-Trolox™ (60 mg) i INTERMEDIJERA AFa (45 mg). Oba reaktanta rastvorena su u DMF (suv, 0.25M). Trietilamin (2.5 eq) i PyBOP (1.2 eq) dodati su, a reakciona mešavina je umešavana na sobnoj temperaturi do potpune konverzije (LCMS). Mešavina je ugašena sa H2O (20 ml). Dodat je zas.vod. NaHCO3(30 ml) , a vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 ml). Kombinovane organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncetrovane in vacuo. Sirovi materijal prečišćen je reverzno faznom hromatografijom na koloni ((H2O 0.01% (mas.) mravlja kiselina/MeCN) i osušen zamrzavanjem kako bi se dobilo FINALNO JEDINJENJE S,R-AF (34 mg).<1>H NMR (400 MHz, DMSO): δ (ppm): 8.19 (1H, s), 7.53 (1H, širok s), 7.14 -7.12 (1H, d), 3.70 (1H, širok s), 2.59 - 2.36 (2H, m), 2.36 - 2.25 (1H, m), 2.24 - 2.11 (2H, m), 2,08 (3H, s), 2.07 (3H, s), 2.03 (3H, s), 1.99 (3H, s), 1.91 - 1.82 (1H, m), 1.81 - 1.68 (1H, m), 1.65 - 1.51 (1H, m), 1.50 -1.40 (3H, m), 1.39 - 1.33 (3H, m).
1.2.16 Trolox™ piperidin-4-amid hidrohlorid (jedinjenje Z, racemate)
[0160] Faza A: INTERMEDIJER Za je pripremljen primenom Trolox™ (500 mg) i tert-butilaminopiperidin-1-karboksilata (400 mg). U ohlađenu (0°C) mešavinu reaktanata u DMF (suv, 0.05 M) pod atmosferom azota dodati su EDCI.HCl (1.1 eq) i HOAt (0.1 eq). Mešavina je umešavana 1 sat na 0°C i ostavljena da dostigne sobnu temperaturu i umešavana do potpune konverzije (LCMS). Reakciona mešavina je usuta u 10 eq (to DMF) vode. Formiran je beli talog koji je filtriran. Ostatak je opran sa vodom u filteru i osušen. INTERMEDIJER Za (80 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0161] Faza B: U skladu sa opštom procedurom B FINALNO JEDINJENJE Z (60 mg) je pripremljeno.1H NMR (400 MHz, DMSO): δ (ppm): 8.32 (1H, s), 7.14 - 7.12 (1H, d), 3.78 - 3.63 (1H, m), 3.61 - 3.45 (1H, m), 3.13 - 3.02 (1H, m), 3.01 - 2.91 (1H, m), 2.83 - 2.65 (2H, m), 2.62 - 2.36 (2H, m), 2.24 - 2.13 (1H, m), 2.09 (3H, s), 2.07 (3H, s), 1.99 (3H, s), 1.86 - 1.68 (2H, m), 1.67 - 1.44 (2H, m), 1.43 - 1.24 (1H, m), 1.38 (3H, s).
1.2.17 Trolox™ pirolidin-3-amid hidrohlorid (jedinjenje AG, S,R-stereoizomer)
[0162] Faza A: : U skladu sa opštom procedurom A INTERMEDIJER AGa je pripremljen, primenom (S)-Trolox™ (100 mg) i (R)-tert-Butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata (74 mg). INTERMEDIJER AGa (110 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0163] Faza B: U skladu sa opštom procedurom B FINALNO JEDINJENJE S,R-AG (80 mg) je pripremljeno.
1H NMR (400 MHz, DMSO): δ (ppm): 8.36 (1H, širok s), 7.60 - 7.59 (1H, d), 4.37 - 4.01 (2H, m), 3.15 - 2.98 (2H, m), 2.97 - 2.79 (1H, m), 2.77 - 2.59 (1H, m), 2.58 - 2.38 (2H, m), 2.26 - 2.10 (2H, m), 2.09 (3H,s), 2.07 (3H, s), 1.99 (3H, s), 1.85 - 1.54 (2H, m), 1.35 (3H, s).
4
1.2.18 Trolox™ pirolidin-3-amid hidrohlorid (jedinjenje AG, S,S-stereoizomer)
[0164] Faza A: U skladu sa opštom procedurom A INTERMEDIJER AGb je pripremljen, primenom (S)-Trolox™ (100 mg) i (S)-tert-Butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata (74 mg). INTERMEDIJER AGb (115 mg) upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
[0165] Faza B: U skladu sa opštom procedurom B FINALNO JEDINJENJE S,S-AG (80 mg) je pripremljeno.
1H NMR (400 MHz, DMSO): δ (ppm): 9.11 (2H, širok s), 7.74 - 7.72 (1H, d), 7.52 (1H, s), 4.48 - 4.20 (1H, s), 3,33 - 3.18 (2H, m), 3.17 - 3.09 (1H, m), 3.08 - 2.99 (1H, m), 2.62 - 2.38 (2H, m), 2.22 - 2.12 (1H, m), 2.10 (3H, s), 2.06 (3H, s), 1.99 (3H, s), 1.82 -1.62 (2H, m), 1.37 (3H, s).
Primer 2: Efekat jedinjenja na nivoe proteinske ekspresije na potpunosti sastavljeni proteinski kompleks I i kompleks II kod zdravih ćelija i čelija pacijenata
2.1 Postupci i materijali
2.1.1 Izolovanje mitohondrija i OXPHOS kompleksa
[0166] Kako bi se odredio efekat jedinjenja na nivoe Kompleksa I i II kod normalnih i nivoe in normal i fibroblasta humane kože pacijenata, ćelije su tretirane jedinjenjem F(300 µM), jedinjenjem K (300 µM) ili jedinjenjem N(10 ili 100 nM). Fibroblasti kože pacijenta izvedeni su od pacijenata sa mutacijom na različitim podjedinicama Kompleksa I, a kontrolne ćelije su fibroblasti humane kože izvedeni iz zdravih kontrola.
[0167] Nakon 72 sata inkubacije sa jedinjenjem, (otprilike 2×10<6>) ćelije su sakupljene tripsinacijom i oprane dva puta sa ledeno hladnim fosfatom puferovanim slanim rastvorom (PBS; Life Technologies, Bleiswijk, Holandija). Zatim, ćelijske suspenzije centrifugirane su tokom 5 min; 287 ×g; 4 °C, a ćelijski peleti trenutno su zamrznuti u tečnom azotu.
[0168] Pre izolovanja mitohondrija i OXPHOS kompleksa, peleti su otopljeni na ledu i resuspendovani u 100 µl ledeno hladnog PBS. Za pripremanje mitohondrijom obogaćene frakcije, dodato je 100 µl (4 mg/ml) digitonina (Sigma, Zwijndrecht, Holandija), a ćelijska suspenzija ostavljea je na ledu tokom 10 min. Digitonin odavaja membrane koje sadrže holesterol. Prema tome, on odavaja ćelijske membrane i spoljne mitohondrijalne membrane, ali ne unutrašnje mitohondrijalne membrane. Zatim, 1 ml ledeno hladnog PBS dodato je kako bi se razblažio digitonin, praćeno centrifugiranjem (10 min; 15,600 ×g; 4 °C). Nakon centrifugiranja, peleti sadrže ćelijsku frakciju koja je obogaćena za mitoplaste. Supernatant je uklonjen, a peleti resuspendovani u 100 µl ledeno hladnog PBS. Naknadno 1 ml ledeno hladnog PBS dodato je i suspenzija je centrifugirana (5 min; 15,600 ×g; 4 °C) ponovo, praćeno uklanjanjem supernatanta i resuspenzijom peleta u 100 µl ledeno hladnog PBS, dodavanjem 1 ml ledeno hladnog PBS i centrifugiranjem (5 min; 15,600 ×g; 4 °C). Supernatant je uklonjen špricom i iglom, a peleti koji sadrže frakciju mitoplasta ostavljeni su tokom noći (-20 °C).
[0169] Kompleksi OXPHOS sistema ekstrahovani su iz unutrašnje membrane sa β- lauril maltozidom i aminokapronskom kiselinom. β- lauril maltozid je blagi deterdžent koji rastvara mitohondrijalne membrane, a aminokapronska kiselina ekstrahuje komplekse. Aminokapronska kiseline je cviterjonska so koja ima neto naelektrisanje od nula pri pH 7 i, prema tome, ne utiče na elektroforezu. Prema tome za izolovanje OXPHOS kompleksa, peleti su otopljeni na ledu i rastvoreni u 100 µl ACBT pufera koji sadrži 1.5 M ε-aminokapronsku kiselinu (Serva, Amsterdam, Holandija) i 75 mM Bis-Tris/HCl (pH 7.0) (Sigma). Naknadno je dodato 10 µl 20% (w/v) β-lauril maltozid (Sigma) i suspenzija je ostavljena na ldu tokom 10 min. Zatim, suspenzije su centrifugirane (30 min; 15,600 ×g; 4 °C), a supernatanti koji sadrže izolovane komplekse, transferovani su u čistu epruvetu (L.G. Nijtmans, N.S. Henderson, I.J. Holt, Blue Native elektroforeza to study mitochondrial and other protein complexes, Methods 26 (2002) 327-334.).
2.1.2 Proteinsko ispitivanje
[0170] Koncentracije proteina izolovanih OXPHOS kompleksa određene su primenom Biorad Proteinskog Ogleda (Biorad, Veenendaal, Holandija). Standardna kriva sa 0, 2, 4, 6, 8, 10 ili 15 µl 1 mg/ml BSA (Sigma) pripremljena je u duplikatu. U svaki uzorak standardne krive, dodato je 5 µl ACBT/LM koji se sastoji od 150 µl ACBT kako je opisano pod 2.1.1 i 15 µl 20% β-lauril maltozida. Koncentrat reagensa boje 5x (Biorad) 5x je razblažen sa Milli Q i 2 ml razblaženog reagensa dodato je u uzorak standardne krive ili u 5 µl uzoraka koji sadrže izolovane OXPHOS komplekse. Nakon inkubacionog perioda od između 5 i 60 min, izumiranje je mereno na 595 nm.
2.1.3 BN-PAGE
[0171] Elektroforeza prirodnim plavim poliakrilamidnim gelom (BN-PAGE) odvaja pet OXPHOS kompleksa jedan od drugog bez njihovogdisociranja na njihove podjedinice. Odvajanje je na osnovu molekularne mase. Tokom elektroforeze Serva Blue G (Serva) se primenjuje kako bi proteinski kompleksi dobili naelektrisanje za elektroforetičku mobilnost, bez disociranja kompleksa. Elektroforeza se izvodi u gradijentnom gelu radi boljeg odvajanja kompleksa.
[0172] Nativni PAGE 4-16% Bis-Tris Gel (Life Technologies) sakupljen je u XCell SureLock Mini-Cell (Life Technologies) u skladu sa instrukcijama proizvođača. Prorezi su isprani Katodnim puferom A, koji se sastoji od 50 mM Tricina (Sigma), 15 mM Bis-Tris pH 7.0 (Sigma) i 0.02% Serva Blue G (Serva). Prorezi si ispunjeni sa katodnim puferom B, koji se sastoji od 50 mM Tricina i 15 mM Bis-Tris pH 7.0. U svaki uzorak, uzorak plavog nativnog pufera dodat je 1:10 zapremnskom odnosu. Ovaj puferski uzorak sastoji se od 750 mM ε-aminokapronske kiseline, 50 mM Bis-Trisa, 0.5 mM EDTA (Merck, Schiphol-Rijk, Holandija), 5% Serva Blue G pH 7.0 i 20 µg proteina svakog uzorka koji je uveden na gel. Spoljni odeljci ispunjeni su sa 500 ml anodnog pufera (50 mM Bis-Tris pH 7.0) , a unutrašnji odeljci ispunjeni su sa katodnim puferom. Gel je pušten u rad 30 min 50V, 30 min 150V, a naknadno katodni pufer A zamenjen je katodnim puferom B. Gel je ponovo pušten u rad na 150V dok plavi sloj nije stigao do svakog dna gela (L.G. Nijtmans, N.S. Henderson, I.J. Holt, Blue Native electrophoresis to study mitochondrial and other protein complexes, Methods 26 (2002) 327-334.).
2.1.4 Detektovanje proteina kompleksa I ili kompleksa II
[0173] Kako bi se vizualizovala količina kompleksa I ili kompleksa II prisutna u BN-PAGE gelovima, proteini su transferovani na PVDF membranu (Millipore, Amsterdam, Holandija) primenom standardnih Vestern blot tehnika i detektiovani imunobojenjem. Nakon blotinga, a pre blokiranja PVDF membrane sa 1:1 PBS-razblaženim Odyssey puferom za blokiranje (Li-cor Biosciences, Cammost, UK), PVDF blot je odvojen puferom za odvajanje tokom 15 min na 60°C. Pufer za odvajanje sastoji se od PBS, 0.1% Tween-20 (Sigma) i 2% SDS (Serva). Za detektovanje Kompleksa I, korišćeno je monoklonalno primarno antitelo protiv NDUFA9 (39 kDa) (Molecular probes, Leiden, Holandija) pri konačnoj konvetraciji od 1 µg/ml. Kako bi se detektovao Kompleks II, upotrebljeno je monoklonalno antitelo protiv 70 kDa subjedinice kompleksa II (Molecular probes) pri finalnoj koncetraciji od 0.5 µg/ml. Oba primarna antitela razblažena su u PBS, 0.1% Tween-20 i 2.5% Protifar Plus (Nutricia, Cuijk, Holandija) ostavljena da se vežu za kompleks tokom 4 sata na sobnoj temperaturi ili preko noći na 4°C. Vezana primarna antitela naknadno su detektovana pomoću IRDye 800 CW konjugovanim anti-mišjim antitelom (Li-cor Biosciences) pri finalnoj koncetraciji od 0.1 µg/ml. Nakon sušenja blota tokom 2 sata u mraku, IRDye je detektovano primenom Odyssey Infracrvenog sistema za uslikavanje.
2.1.5 Statistička analiza
[0174] Statistička analiza izvedena je primenom Origin Pro Plus softvera (verzija 6.1; iliiginLab Corporation, Northampton, MA, USA). Proseci su upoređeni primenom neuparenog nezavisnog Studentovog t-testa sa Bonferroni korekcijom. Stubići greške ukazuju na standardnu devijaciju (SD).
2.2 Rezultati
[0175] Dodavanje jedinjenja F čekijskoj liniji izvedenoj od pacijenta koja sadrži neku mutaciju u podjedinici kompleksa I rezultiralo je kao potpuno sastavljeni nivoi proteina kompleksa I (FIG.1A). Takođe, jedinjenje K povećava nivoe proteina kompleksa I u istoj ćelijskoj liniji izvedenoj od pacijenta (FIG.1B). Štaviše, dozno zavisno povećanje u nivoima proteina kompleksa I, primećeno je nakon dodavanja 10 nM ili 100 nM jedinjenja N ćelijama izvedenim od pacijenta (FIG.1 C). Povećanje u prethodnim nivoima kvantifikovano je u FIG.1 za kompleks I (ploča A) i kompleks II (ploča B). Statistički značajno povećanje u nivoima kompleksa I primećeno je nakon dodavanja različitih koncentracija jedinjenja N čelijskoj liniji izvedenoj od pacijenta. Takođe je primećeno povećanje u nivou poptuno sastavljenog proteina kompleksa II pri najvišoj koncentraciji jedinjenja N. Ovi podaci ukazuju da načini delovanja jedinjenja F, K i N mogu uključiti povećanje količine potpuno sastavljenih nivoa proteina kompleksa I i potencijalno kompleksa II.
Primer 3: Efekat jedinjenja na povećane nivoe CM-H2DCF-oksidacione reaktivne kiseonične vrste (ROS) na ćelije pacijenata
3.1 Postupci i materijali
[0176] CM-H2DCFDA je ćelija-propusni reporter molekul za reaktivne kiseonične vrste (ROS) koje se konvertuju u ne-fluorescentni i membrana-nepropusni CM-H2DCF praćeno uklanjanjem njegovih acetatnnih grupa intraćelijskom esterazom. Nakon oksidacije pomoću ROS, CM-H2DCF se konvertuje u fluorescentni CM-DCF. Široko je prihvaćeno da širok spektar različitosti ROS može biti odgovoran za CM-H2DCF oksidaciju, čineći ga pogodnim reporterom ćelijskih oksidativnih nivoa. Prosečan intezitet ćelijske CM-DCF fluorescencija smatra se kao indirektno merenje ćelijskih ROS nivoa.
[0177] Kako bi se izmerio efekat jedinjenja na intraćelijske ROS nivoe na različitim fibroblastima humane kože pacijenata, ćelije su zasejane pri gustini od 1500 ćelije/bunarčić u format sa 96-bunarčića i inkubisane povećavanjem koncentracija jedinjenja F, K i N. Tri dana nakon tretiranja, medijum kulture zamenjen je sa 100 µl CM-H2DCFDA/bunarčić pri konačnoj koncetraciji od 1 µM (Life Technologies). CM-H2DCFDA rastvor pripremljen je razblaživanjem 1 mM već spremnog rastvora (CM-H2DCFDA rastvoren u DMSO (Sigma)) 1:1000 u HT-puferu pH 7.4. HT-pufer sastoji se od 132 mM NaCl, 4 mM KCI, 1 mM MgCl2, 10 mM HEPES, 1 mM CaCl2i 5 mM D-glukoze).
[0178] Ploča ćelijske kulture koja sadrži CM-H2DCFDA, sneštena je tačno 10 minuta na 37°C ili sobnu temperaturu. Zatim, ćelije su dvaputa oprane sa PBS, a 100 µl 1x HT-pufer dodat je u svaki bunarčić koji sadrži ćelije pored 4 prazna bunarčića. U još 4 prazna bunarčića, dodato je 100 µl (5 pM) Fluoresceina (Sigma) rastvorenog u HT-puferu. Bunarčići bez ćelija, ali bilo sa HT-puferom ili sa HT-puferom i Fluoresceinom služili su kao korekcija za respektivno pozadinsku fluorescenciju ili neujednačeno osvetljenje.
[0179] CM-DCF fluorescencija izmerena je sa BD Pathway 855 sistemom, primenom parametara:
Ekspozicija: 0.4; Snaga: 10; Offset: 255. Primenom BD pathway korekcione procedure sva merenja ispravljena su za bilo kakvu pozadinsku fluorescenciju i imali su korekciju ravnog polja kako bi se uklonila neujednačena osvetljenja uvedena od strane BD pathway 855 sistema. Vrednosti su izražene kao srednji CM-DCF intezitet/ćelijski pikseli/bunarčić, a vrednosti izvedene iz ćelijskih linija pacijenata izračunate su kao procenat prosečnih vrednosti u kontrolnoj ćelijskoj liniji C5120 tretirana samo sa 0.1% DMSO.
3.2.1 Resulti za jedinjenja F, K i N
[0180] kako bi se odredilo da li ova jedinjenja imaju efekat na intraćelijske ROS nivoe, jedna ili nekoliko ćelijskih linija pacijenata sa povećanim ROS nivoima (W.J.H. Koopman, S. Verkaart, H.J. Visch, S.E. van Emst-de Vries, L.G. Nijtmans, J.A. Smeitink, P.H. Willems, Human NADH:ubiquinone oxidoreductase deficiency: radical changes in mitochondrial morphology?, Am J Physiol Cell Physiol 293 (2007) C22-C29) izložeme su povećavajučim koncentracijama jedinjenja F (FIG.3A), K (FIG.3B) ili N (FIG.3C). Za sva tri jedinjenja, postojala je negativna korelacija primećena između koncetracije jedinjenja i ROS nivoa, što je značilo da povećane koncentracije rezultiraju snižavanjm u ROS nivoima kako je određeno CM-DCF formacijom. Kako se mitohondrijalne fragmentacije mogu pojaviti kao posledica previsokih ROS nivoa (W.J.H. Koopman, S. Verkaart, H.J. Visch, S.E. van Emst-de Vries, L.G. Nijtmans, J.A. Smeitink, P.H.
Willems, Human NADH:ubiquinone oxidoreductase deficiency: radical changes in mitochondrial morphology?, Am J Physiol Cell Physiol 293 (2007) C22-C29; Distelmaier F., Valsecchi, F., Forkink, M., van Emst-de Vries, S., Swarts, H., Rodenburg, R., Verwiel, E., Smeitink, J., Willems, P.H.G.M., Koopman, W.J.H. (2012) Trolox™-sensitive ROS regulate mitochondrial morphology, oxidative phosphorylation and cytosolic calcium handling in healthy cells. Antioxidants and redox signaling. (in press), PMID 22559215)) ova jedinjenja mogu makar delimično da pokažu svoj terapeutski efekat putem snižavanja ROS nivoa nazad do fizioloških nivoa.
3.2.2 Rezultati za dalja jedinjenja
[0181] Dalja jedinjenja sposobna za redukovanje intraćelijskih ROS nivoa, navedena su u Tabeli 2. Ova jedinjenja ispitana su na njihov efekat na snižavanje intraćelijskih ROS nivoa u ćelijskoj liniji pacijenta (S7-5175 ćelije, koje su fibroblasti iz nekog pacijenta sa mutacijom u NDUFS7 genu) sa povećanim ROS nivoima, u DCFDA ispitivanju, suštinski kakva su ovde opisana u 3.1. Dozno zavisna kriva koja je određena za svako navedeno jedinjenje, čije su EC50(potencija), tj. koncentracija jedinjenja koja daje polu maksimalan odgovor, izračunate i prikazane u Tabeli 2.
Tabela 2: Potencije jedinjenja u DCFDA ispitivanju.
Primer 4: Efekat jedinjenja I i J na nivoe ekspresije proteina potpuno sastavljenog kompleksa I [0182] Jedinjenja I i J proizvode blagu redukciju u ekspresiji kompleksa I kod zdravih kontrolnih ćelijskih linija, dok ova jedinjenja proizvode značajnu redukciju u ekspresiji kompleksa I kod ćelijskih linija pacijenata, kod kojih je efekat jedinjenja J jači od efekta jedinjenja I.
Primer 5: In vivo efekat jedinjenja N na jačinu stezanja kod Ndufs4 knockout miševa
[0183] Životinje i Tretiranja: Ndufs4 knockout (KO) i divlji tip (WT) miševa generisani su ukrštanjem Ndufs4 heterozigornih mužijaka i ženki (Kruse SE, et al., 2008, Cell Metab 7:312-320). Ukupan broj (n) životinja koji je upotrebljen za ovaj projekat je bio kako sledi: Vozilo WT: 7, jedinjenje N (KH003) WT: 7, Vozilo KO: 5, jedinjenje N KO: 5. Životinje su testirane na 3, 5 i 6 nedelji života. Životinje su primile ili injekcije vozila (kontrola), koje se sastoje od sterilne vode, ili jedinjenje N pri dozi od 400 mg/kg, sa doznom zapreminom od 4 ml/kg. Životinje su primale injekcije dva puta na dan (2 ml/kg po injekciji). Injekcije su počele tokom 3 nedelje života, i nastavljane dnevno do zaključivanja eksperimenta u 6 nedelji.
[0184] Analiza podataka: svi podaci su izraženi kao sredna vrednost ± SEM. Podaci su analizirani primenom jednosmerne ANOVA u SPSS verziji 20.0. Značajni ukupni efekti (tj. genotip, tretiranje i/ili interakcija genotip*tretiranje) dalje su analizirani primenom Fisher's PLSD post-hoc analizama.
[0185] Paradigma jačine stezanja: Ispitivanje jačine stezanja konstruisan je za merenje mišićne snage kod glodara. Uređaj se sastoji od pojedinačne šipke, koji životinja grabi instiktivno. Pošto zgrabi šipku, izvođač eksperimenta nežno povlači životinju dok životinja nije prisiljena da pusti šipku. Količina sile ispoljena od strane životinje na šipku, meri se u Pondima (p) (1 p = 1 gram). Ispitivanje jačine stezanja ponovljeno j 5 puta, a prosečna ispoljena sila primenjuje se kao kvantitativno očitavanje. Sva merenja su korigovana na telesne mase, primenom sledeće jednačine:
Zbir jačine stezanja = (( nedelja X ispitivanja 1+2+3+4+5)/5)/ prosečna telesna masa nedelja X(g) (Nedelja X=nedelja 3, 5 ili 6)
[0186] Procedura testiranja: na dane testiranja, životinje su primile njihovu jutarnju injekciju 30 minuta pre vremena testiranja. Nakon injekcija, životinje su smeštene u sobu za testiranje tokom 30 minutnog aklimacionog perioda.
[0187] Rezultati: Hronično tretiranje jedinjenjem N rezultiralo je značajno poboljšanom jačinom stezanja kod KO životinja 6 nedelje testiranja, u poređenju sa grupom vozilo knockout (p < 0.002) kako je prikazano na FIG.4. Takođe, KO životinje tretirane jedinjenjem N nisu e značajno razlikovale od divljeg tipa u obe tretirane grupe 6 nedelje, što ukazuje da je tretiranje jedinjenjem N značajno poboljšalo performanse mišićne snage, šo ga je učinilo uporedivim sa divljim tipovima, do tog vremenskog perioda. Nije bilo značajnih razlika između grupa u nedeljama 3 i 5.
[0188] Slični rezultati dobijeni sa jedinjenjem N, dobijeni su i sa jedinjenjem S,R-X (KH176), kada je
1
davano pri 10 puta nižoj dozi u poređenju sa jedinjenjem N, tj. dozi od 40 mg/kg, sa doznom zapreminom od 4 ml/kg (2 ml/kg injekcije dva puta na dan) (podaci nisu prikazani).
2

Claims (1)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje opšte formule (I):
    u kojoj - L je linker koji obuhvata 1 do 10 opciono supstituisanih atoma kičme odabranih od ugljenika, azota i kiseonika, pri čemu se L bira od -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-(L<2>), -CH2-CH2-CH2-(L<3>), -CH2-CH2-NH-C(NH2)=(L<4>), -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-NH-C(NH2)=(L<5>), -CH2-CH2-CH2-NH-C(NH2)=(L<6>), -CH2-CH2-NH-C(Me)=(L<7>), -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-NH-C(Me)=(L<8>), -CH2-CH2-CH2-NH-C(Me)=(L<9>), -CH2-CH2-NR<1>'-C(NH2)=(L<10>), -C(CO2H)-CH2-CH2-CH2-(L<11>), -C(CO2H)-CH2-CH2-CH2-NH-C(NH2)=(L<12>), -C(CO2H)-CH2-(L<13>), -C(CO2H)-CH2-CH2-(L<14>), -C(CO2H)-CH2-CH2-CH2-CH2-(L<15>), -CH2-CH2-CH2-CH2-(L<16>), -CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-(L<17>), -CHR<2>'-C(O)-(L<18>), -CHR<2>'-CH2-(L<19>), -CHR<5>-CH2-NR<5>'-C(Me)=(L<20>), -CHR<2>'-CH2-CH2-(L<21>), -CH2-CH2-CHR<1>'-(L<22>), -CH2-CH2-CHR<1>'-NH-C(O)-C(Me)-(L<23>), -CH2-CHR<1>'-(L<24>), -CH2-CHR<1>'-NH-C(Me)=(L<25>), ili -CHR5-CH2-CH2-CHR<5'>-(L<26>); i - R<1>i R<2>su svaki nezavisno odabrani od vodonika i C1- C6alkila, ili R<1>i R<2>su međusobno spojeni radi obrazovanja drugog linkera između atoma amidnog azota i atoma katjonskog azota, ili R<1>je spojen sa R<1’>u 4-10-članoj cikličnoj strukturi i/ili R<2>je spojen sa R<2’>u 4-10-članoj cikličnoj strukturi; i - R<3>je odabran od vodonika i C1- C6alkila, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka, ili R<3>je odsutan kada je atom katjonskog azota deo iminskog ostatka; i - R<4>je odabran od vodonika i C1- C6alkila, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka; i -R<5>je spojen sa R<5’>u 4-10-članoj cikličnoj strukturi, i - X<->je farmaceutski prihvatljiv anjon, pri čemu to jedinjenje nije: (i) jedinjenje formule (I), u kojoj L = -(CH2)3-(L<3>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H i X = Cl; (ii) jedinjenje formule (I), u kojoj L = -(CH2)3-(L<3>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = TFA, koje je u S-konfiguraciji na 2-položaju; 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, u kojem X = Cl, I, TFA ili format. 3. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-2, u kojem - L = -(CH2)2NHC(O)CH2-(L<2>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili 4 - L = -(CH2)2NHC(NH2)= (L<4>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili - L = -(CH2)2NHC(O)CH2NHC(NH2)= (L<5>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili - L = -(CH2)3NHC(NH2)= (L<6>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili - L = -(CH2)3- (L<3>), R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= Me; X = I; ili - L = -(CH2)2NHC(Me)= (L<7>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)2NHC(O)CH2NHC(Me)= (L<8>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)3NHC(Me)= (L<9>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)2NR<1'>C(NH2)= (L<10>), R<1>-R<1'>= -(CH2)2- (L<1>), R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili - L = -C(CO2H)(CH2)3- (L<11>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -C(CO2H)(CH2)3NHC(NH2)=(L<12>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -C(CO2H)CH2- (L<13>), R<1>= H,R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -C(CO2H)(CH2)2- (L<14>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -C(CO2H)(CH2)3- (L<15>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -C(CO2H)(CH2)3- (L<11>), R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)4- (L<16>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)5- (L<17>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)4- (L<16>), R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>C(O)- (L<18>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)3- (L<3>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>CH2- (L<19>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)3- (L<3>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<5>CH2NR<5'>C(Me)= (L<20>), R<1>= H, R<2>= H, R<5>-R<5'>= -(CH2)3- (L<3>), R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>(CH2)2- (L<21>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)2- (L<1>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)2CHR<1'>- (L<22>), R<1>-R<1'>= -(CH2)2- (L<1>), R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)2CHR<1'>NHC(O)C(Me)- (L<23>), R<1>-R<1'>= -(CH2)2- (L<1>), R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CH2CHR<1'>- (L<24>), R<1>-R<1'>= -(CH2)3- (L<3>), R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CH2'CHR<1'>NHC(Me)= (L<25>), R<1>-R<1'>= -(CH2)3- (L<3>), R<2'>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<5>(CH2)2CHR<5'>- (L<26>), R<1>= H, R<2>= H, R<5>-R<5'>= -(CH2)2- (L<1>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>CH2- (L<19>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)3- (L<3>), R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>CH2- (L<19>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)2- (L<1>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>(CH2)2- (L<21>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)2- (L<1>), R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl. 4. Jedinjenje prema zahtevu 34, u kojem - L = -(CH2)2NHC(O)CH2NHC(NH2)= (L<5>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili - L = -(CH2)2NHC(O)CH2NHC(Me)= (L<8>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -C(CO2H)(CH2)3- (L<11>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -C(CO2H)(CH2)3NHC(NH2)= (L<12>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)5- (L<17>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)4- (L<16>), R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>CH2- (L<19>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)3- (L<3>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>(CH2)2- (L<21>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)2- (L<1>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<5>(CH2)2CHR<5'>- (L<26>), R<1>= H, R<2>= H, R<5>-R<5'>= -(CH2)2- (L<1>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>CH2- (L<19>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)3- (L<3>), R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>(CH2)2- (L<21>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)2- (L<1>), R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl. 5. Jedinjenje prema zahtevu 34, u kojem - L = -(CH2)3- (L<3>), R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= Me; X = I 6. Jedinjenje opšte formule (I):
    u kojem - L= -(CH2)2- (L<1>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H: X = Cl; ili - L = -(CH2)2- (L<1>), R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= Me: X = I. 7. Farmaceutska ili kozmetička kompozicija koja obuhvata jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 - 6 i fiziološki prihvatljiv nosač. 8. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 - 6, za upotrebu kao lek. 9. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 - 6, za upotrebu u modulisanju najmanje jedne mitohondrijalne morfologije i ekspresije OXPHOS enzima. 10. Jedinjenje za upotrebu u tretiranju, prevenciji, ili suzbijanju simptoma povezanih sa mitohondrijalnim poremećajem, gde je to jedinjenje jedinjenje opšte formule (I):
    u kojoj - L je linker koji obuhvata 1 do 10 opciono supstituisanih atoma kičme odabranih od ugljenika, azota i kiseonika, pri čemu se L bira od -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2- (L<2>), -CH2-CH2-CH2- (L<3>), -CH2-CH2NH-C(NH2)= (L<4>). -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-NH-C(NH2)= (L<5>), -CH2-CH2-CH2-NH-C(NH2)= (L<6>), -CH2-CH2-NH-C(Me)= (L<7>), -CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-NH-C(Me)= (L<8>), -CH2-CH2-CH2-NH-C(Me)= (L<9>), -CH2-CH2-NR<1'>-C(NH2)= (L<10>), -C(CO2H)-CH2)-CH2-CH2- (L<11>), -C(CO2H)-CH2)-CH2-CH2-NH-C(NH2)= (L<12>), -C(CO2H)-CH2-(L<13>), -C(CO2H)-CH2-CH2)- (L<14>), -C(CO2H)-CH2)-CH2)-CH2-CH2- (L<15>), -CH2-CH2-CH2-CH2- (L<16>), -CH2-CH2-CH2-CH2-CH2- (L<17>), -CHR<2>'-C(O)- (L<18>), -CHR<2>'-CH2- (L<19>), -CHR<5>-CH2-NR<5>'-C(Me)= (L<20>), -CHR<2>'-CH2-CH2- (L<21>), -CH2-CH2-CHR<1>'- (L<22>), -CH2-CH2-CHR<1>'-NH-C(O)-C(Me)- (L<23>), -CH2-CHR<1>'- (L<24>), -CH2-CHR<1>'-NH-C(Me)= (L<25>), ili -CHR<5>-CH2-CH2-CHR<5>'- (L<26>); i - R<1>i R<2>su svaki nezavisno odabrani od vodonika i C1- C6alkila, ili R<1>i R<2>su međusobno spojeni radi obrazovanja drugog linkera između atoma amidnog azota i atoma katjonskog azota, ili R<1>je spojen sa R<1’>u 4-10-članoj cikličnoj strukturi i/ili R<2>je spojen sa R<2’>u 4-10-članoj cikličnoj strukturi; i - R<3>je odabran od vodonika i C1- C6alkila, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka, ili R<3>je odsutan kada je atom katjonskog azota deo iminskog ostatka; i - R<4>je odabran od vodonika i C1- C6alkila, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka; i -R<5>je spojen sa R<5’>u 4-10-članoj cikličnoj strukturi, i - X<->je farmaceutski prihvatljiv anjon. 11. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 10, u kojem - L = -(CH2)2NHC(O)CH2NHC(NH2)= (L<5>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili - L = -(CH2)2NHC(O)CH2NHC(Me)= (L<8>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -C(CO2H)(CH2)3- (L<11>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -C(CO2H)(CH2)3NHC(NH2)= (L<12>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)5- (L<17>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)4- (L<16>), R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>CH2- (L<19>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)3- (L<3>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>(CH2)2- (L<21>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)2- (L<1>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<5>(CH2)2CHR<5'>- (L<26>), R<1>= H, R<2>= H, R<5>-R<5'>= -(CH2)2- (L<1>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>CH2- (L<19>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)3- (L<3>), R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>(CH2)2- (L<21>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)2- (L<1>), R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl. 12. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 10 ili 11, gde je mitohondrijalni poremećaj poremećaj odabran iz grupe koju čine: Mioklona epilepsija; Mioklona epilepsija sa nepravilnim crvenim vlaknima (MERRF); Leberova nasledna optička neuropatija (LHON); neuropatija ataksija i retinitis pigmentosa (NARP); Mitohondrijalna miopatija, encefalopatija, laktatna acidoza, šlog (MELAS); Leighov sindrom; Sindrom nalik leighovom sindromu; Dominantna optička atrofija (DOA); Kearns-Sayre sindrom (KSS); Maternalno nasleđen dijabetes i nagluvost (MIDD); Alpers-Huttenlocher sindrom; Ataksija neuropatija spektar; Hronična progresivna spoljna oftalmoplegija (CPEO); Pirsonov sindrom; Mitohondrijalna neurogastro-intestinalna encefalopatija (MNGIE); Sengersov sindrom; 3-metilglutakonska aciduria, senzorineuralna nagluvost, encefalopatija i neuroradiološki nalazi sindroma nalik leighovom sindromu (MEGDEL); miopatija; mitohondrijalna miopatija; kardiomiopatija; i encefalomiopatija, SURF1 (COX deficijentan Leighov sindrom usled deficijencije presićenosti proteina kompleksa IV) i izolovane ili kombinovane OXPHOS deficijencije sa do sada nerešenim genetskim defektom uključujući poremećenu oksidaciju piruvata i ATP plus PCr stope proizvodnje. 13. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 3-6, za upotrebu u tretiranju, prevenciji, ili suzbijanju simptoma povezanih sa stanjem povezanim sa mitohondrijalnom disfunkcijom, gde, poželjno jedinjenje je jedinjenje prema zahtevu 5. 14. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 13, gde je stanje povezano sa mitohondrijalnom disfunkcijom stanje odabrano iz grupe koju čine: Fridrajhova Ataksija (FRDA); renalna tubularna acidoza; Parkinsonova bolest; Alchajmerova bolest; amiotrofična lateralna skleroza (ALS); Hantingtonova bolest; razvojni pervazivni poremećaji; gubitak sluha; nagluvost; dijabetes; starenje; i neželjena dejstva lekova koja ometaju mitohondrijalnu funkciju. 15. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od zahteva 10 - 14, gde se merljivi klinički marker koristi za određivanje efikasnosti terapije koja koristi jedinjenja ovog pronalaska. 16. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 15, gde je klinički marker jedan ili više markera odabranih iz grupe koju čine nivoi mlečne kiseline (laktata), bilo u celokupnoj krvi, plazmi, cerebrospinalnoj tečnosti, ili cerebralnoj ventrikularnoj tečnosti; nivoi pirogrožđane kiseline (piruvata), bilo u celokupnoj krvi, plazmi, cerebrospinalnoj tečnosti, ili cerebralnoj ventrikularnoj tečnosti; odnosi laktata/piruvata, bilo u celokupnoj krvi, plazmi, cerebrospinalnoj tečnosti, ili cerebralnoj ventrikularnoj tečnosti; aminokiseline, određenije alanin, citrulin i prolin u celokupnoj krvi, plazmi ili cerebrospinalnoj tečnosti, organske kiseline u telesnim tečnostima; FGF21 u serumu i mišićima skeleta; nivoi fosfokreatina, NADH (NADH H<+>) ili NADPH (NADPH H<+>) nivoi; NAD ili NADP nivoi; ATP nivoi; anaerobni prag; nivoi redukovanog koenzima Q (CoQ<red>); nivoi oksidiranog koenzima Q (CoQ<ox>; nivoi ukupnog koenzima Q (CoQ<tot>); nivoi oksidiranog citohroma C; nivoi redukovanog citohroma C; odnos oksidiranog citohroma C/redukovanog citohroma C; nivoi acetoacetata, nivoi beta-hidroksi butirata, odnos acetoacetata/betahidroksi butirata, nivoi 8-hidroksi-2’-deoksigvanozina (8-OHdG); nivoi reaktivnih kiseoničnih vrsta; i nivoi potrošnje kiseonika (VO2), nivoi izlaza ugljen dioksida (VCO2), i respiratorni koeficijent (VCO2/VO2). 17. Jedinjenje za upotrebu u tretiranju, prevenciji, ili suzbijanju simptoma povezanih sa nekom neuroplastičnom bolesti, gde je to jedinjenje jedinjenje opšte formule (I):
    u kojoj - L = -(CH2)3- (L<3>), R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= Me; X = I; ili - L = -(CH2)2- (L<1>), R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= Me; X = I. 18. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 17, gde je neoplastično bolest kancer, poželjno kancer odabran iz grupe koja obuhvata karcinom bazalnih ćelija, kancer kostiju, kancer creva, kancer mozga, kancer dojke, cervikalni kancer, leukemiju, kancer jetre, kancer pluća, limpfon, melanom, kancer ovarijuma, kancer pankreasa, kancer prostate ili kancer tiroidne žlezde. 19. Kozmetički postupak za tretiranje ili odlaganje daljeg starenja kože kod subjekta, pri čemu postupak obuhvata fazu nanošenja na kožu subjekta efektivne količine kompozicije koja obuhvata jedinjenje opšte formule (I):
    u kojoj - L je linker koji obuhvata 1 do 10 opciono supstituisanih atoma kičme odabranih od ugljenika, azota i kiseonika; i - R<1>i R<2>su svaki nezavisno odabrani od vodonika i C1- C6alkila, ili R<1>i R<2>su međusobno spojeni radi obrazovanja drugog linkera između atoma amidnog azota i atoma katjonskog azota, ili R<1>je spojen sa atomom kičme linkera L u cikličnoj strukturi i/ili R<2>je spojen sa atomom kičme linkera L u cikličnoj strukturi; i - R<3>je odabran od vodonika i C1- C6alkila, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka, ili R<3>je odsutan kada je atom katjonskog azota deo iminskog ostatka; i - R<4>je odabran od vodonika i C1- C6alkila, gde alkilni ostatak može biti supstituisan jednim ili više atoma halogena ili (halo)alkoksi ostataka; i - X<->je farmaceutski prihvatljiv anjon. 20. Postupak prema zahtevu 19, gde - L = -(CH2)2NHC(O)CH2NHC(NH2)= (L<5>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = TFA; ili - L = -(CH2)2NHC(O)CH2NHC(Me)= (L<8>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -C(CO2H)(CH2)3- (L<11>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -C(CO2H)(CH2)3NHC(NH2)= (L<12>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= odsutan, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)5- (L<17>), R<1>= H, R<2>= H, R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -(CH2)4- (L<16>), R<1>= H, R<2>= Me, R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>CH2- (L<19>), R<1>= H, R<2>- R<2'>= -(CH2)3- (L<3>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>(CH2)2- (L<21>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)2- (L<1>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<5>(CH2)2CHR<5'>- (L<26>), R<1>= H, R<2>= H, R<5>-R<5'>= -(CH2)2- (L<1>), R<3>= H, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>CH2- (L<19>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)3- (L<3>), R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl; ili - L = -CHR<2'>(CH2)2- (L<21>), R<1>= H, R<2>-R<2'>= -(CH2)2- (L<1>), R<3>= Me, R<4>= H; X = Cl. 1
RS20170348A 2012-07-12 2013-07-12 Hromanil derivati za tretiranje mitohondrijalne bolesti RS55813B2 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261670644P 2012-07-12 2012-07-12
EP12176128 2012-07-12
EP13759838.9A EP2872497B2 (en) 2012-07-12 2013-07-12 Chromanyl derivatives for treating mitochondrial disease
PCT/NL2013/050528 WO2014011047A1 (en) 2012-07-12 2013-07-12 Chromanyl derivatives for treating mitochondrial disease

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RS55813B1 RS55813B1 (sr) 2017-08-31
RS55813B2 true RS55813B2 (sr) 2019-12-31

Family

ID=49916367

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20170348A RS55813B2 (sr) 2012-07-12 2013-07-12 Hromanil derivati za tretiranje mitohondrijalne bolesti

Country Status (16)

Country Link
EP (1) EP2872497B2 (sr)
JP (1) JP6292721B2 (sr)
KR (1) KR102137450B1 (sr)
CN (1) CN104662011B (sr)
AU (1) AU2013287347B2 (sr)
CA (1) CA2878567C (sr)
DK (1) DK2872497T4 (sr)
ES (1) ES2622190T5 (sr)
HU (1) HUE033757T2 (sr)
LT (1) LT2872497T (sr)
PL (1) PL2872497T5 (sr)
PT (1) PT2872497T (sr)
RS (1) RS55813B2 (sr)
SI (1) SI2872497T2 (sr)
SM (1) SMT201700195T1 (sr)
WO (1) WO2014011047A1 (sr)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3154694B1 (en) 2014-06-13 2025-01-29 Children's Medical Center Corporation Products and methods to isolate mitochondria
MX388654B (es) * 2015-05-22 2025-03-20 Sulfateq Bv Derivados de cromano y uso de los mismos en el tratamiento de daño en un órgano diabético, tal como un riñón.
WO2016190852A1 (en) * 2015-05-26 2016-12-01 Stealth Peptides International, Inc. Therapeutic compositions including chromanyl compounds, variants and analogues thereof, and uses thereof
US10815211B2 (en) 2015-10-08 2020-10-27 Khondrion Ip B.V. Compounds for treating mitochondrial disease
EP3402490B1 (en) 2016-01-15 2022-06-01 The Children's Medical Center Corporation Therapeutic use of mitochondria and combined mitochondrial agents
KR101816277B1 (ko) * 2016-10-06 2018-01-08 가천대학교 산학협력단 8-옥소-데옥시구아노신(8-oxo-2'-deoxyguanosine) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 각막 손상 치료용 약학적 조성물
MX2019011692A (es) 2017-04-05 2020-02-10 Khondrion Ip B V Nuevo tratamiento de enfermedades mitocondriales.
MX2020005238A (es) 2017-11-22 2020-08-24 Khondrion Ip B V Compuestos novedosos como inhibidores mpges-1.
EP3713563B1 (en) 2017-11-22 2025-02-19 Khondrion Ip B.V. Amide derivatives of chromanyl or chromanyl quinones for use in treating depression and migraine
EP3914239A1 (en) 2019-01-25 2021-12-01 Universitat Autònoma de Barcelona Cannabidiol and/or derivatives thereof for use in the treatment of mitochondrial diseases
IL291898A (en) 2019-10-04 2022-06-01 Stealth Biotherapeutics Inc Quinone-, hydroquinone- and naphthoquinone-analogues of vatiquinone for treatment of mitochondrial disorder diseases
NL2024431B1 (en) 2019-12-11 2021-09-07 Sulfateq Bv Compounds for treatment of alzheimer’s disease
WO2021202986A1 (en) 2020-04-03 2021-10-07 Stealth Biotherapeutics Corp Compositions and methods for the prevention and/or treatment of mitochondrial disease, including friedreich's ataxia
NL2025730B1 (en) * 2020-06-02 2022-01-20 Sulfateq Bv Compounds for treatment of sepsis
NL2026511B1 (en) 2020-09-21 2022-05-24 Sulfateq Bv Compounds for treatment of heart failure
NL2031091B1 (en) 2022-02-28 2023-09-07 Sulfateq Bv Chromanol compounds for treatment or prophylaxis of ageing and ageing-associated disorders
WO2025242849A1 (en) 2024-05-24 2025-11-27 Khondrion Ip B.V. Chromanyl derivatives for use in the treatment of bone disorders

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1338012C (en) 1987-04-27 1996-01-30 John Michael Mccall Pharmaceutically active amines
JPH02250831A (ja) * 1989-03-23 1990-10-08 Kuraray Co Ltd ３，４―ジヒドロ―２ｈ―ベンゾピラン誘導体及びそれを有効成分とする抗消化性潰瘍剤
FR2676056B1 (fr) 1991-05-03 1993-07-16 Adir Nouveaux derives du benzopyranne leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
JP3093170B2 (ja) * 1996-09-19 2000-10-03 株式会社ジャパンエナジー ヒドロキノン誘導体及びその医薬用途
FR2764889B1 (fr) * 1997-06-20 2000-09-01 Sod Conseils Rech Applic Nouveaux derives du 2-(iminomethyl)amino-phenyle, leur preparation, leur application a titre de medicaments et les compositions pharmaceutiques les contenant
FR2761066B1 (fr) * 1997-03-24 2000-11-24 Sod Conseils Rech Applic Nouveaux derives du 2-(iminomethyl)amino-phenyle, leur preparation, leur application a titre de medicaments et les compositions pharmaceutiques les contenant
JPH11106371A (ja) * 1997-07-04 1999-04-20 Nisshin Flour Milling Co Ltd アシルヒドラゾン誘導体
AR019190A1 (es) * 1998-07-08 2001-12-26 Sod Conseils Rech Applic Derivados de 2-aminopiridinas, productos intermedios para su preparacion, medicamentos y composiciones farmaceuticas que los contienen y su uso para preparar medicamentos
CA2339123A1 (en) * 1998-07-31 2000-02-10 Nippon Soda Co., Ltd. Phenylazole compounds, process for producing the same and drugs for hyperlipemia
FR2783519B1 (fr) * 1998-09-23 2003-01-24 Sod Conseils Rech Applic Nouveaux derives d'amidines, leur preparation, leur application a titre de medicaments et les compositions pharmaceutiques les contenant
AU2001262200A1 (en) * 2000-04-25 2001-11-07 Schering Aktiengesellschaft Benzoxazine derivatives and benzothiazine derivatives having nos-inhibitory and antioxidant properties
GR1003725B (el) 2000-07-12 2001-11-27 Νεες ενωσεις με συνδυασμενη αντιοξειδωτικη και αντιαρρυθμικη δραση
JP2002047272A (ja) 2000-07-26 2002-02-12 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd ポリアミンアミド誘導体
NZ513547A (en) 2001-08-13 2002-09-27 Antipodean Biotechnology Ltd Synthesis of triphenylphosphonium quinols (e.g. mitoquinol) and/or quinones (e.g. mitoquinone)
JP2003212872A (ja) * 2002-01-23 2003-07-30 Japan Energy Corp 新規クロマン誘導体及びその医薬用途
GB0204232D0 (en) 2002-02-22 2002-04-10 Isis Innovation Assay
EP1650206A4 (en) * 2003-08-01 2006-12-20 Nippon Soda Co PHENYLAZOLE COMPOUNDS, PROCESS FOR THEIR PRODUCTION AND ANTIOXIDANTS
WO2005032544A1 (en) 2003-09-19 2005-04-14 Galileo Pharmaceuticals, Inc. Treatment of mitochondrial diseases
JP2008019188A (ja) * 2006-07-11 2008-01-31 Hamari Chemicals Ltd 新規カルノシン誘導体及び組成物
HUE028502T2 (en) * 2007-11-06 2016-12-28 Edison Pharmaceuticals Inc 4- (P-Quinonyl) -2-hydroxybutanamide derivatives for the treatment of mitochondrial diseases
US20140031432A1 (en) 2010-08-06 2014-01-30 Ampere Life Sciences, Inc. Treatment of mitochondrial diseases with vitamin k
SG187744A1 (en) 2010-08-06 2013-03-28 Edison Pharmaceuticals Inc Treatment of mitochondrial diseases with naphthoquinones
NL2010010C2 (en) 2012-12-19 2014-06-23 Sulfateq B V Compounds for protection of cells.

Also Published As

Publication number Publication date
KR20150036035A (ko) 2015-04-07
CN104662011A (zh) 2015-05-27
PL2872497T3 (pl) 2017-07-31
SMT201700195T1 (it) 2017-05-08
CN104662011B (zh) 2017-09-29
ES2622190T3 (es) 2017-07-05
EP2872497A1 (en) 2015-05-20
PL2872497T5 (pl) 2020-02-28
KR102137450B1 (ko) 2020-07-27
CA2878567A1 (en) 2014-01-16
EP2872497B2 (en) 2019-10-09
SI2872497T2 (sl) 2019-12-31
AU2013287347A1 (en) 2015-01-22
SI2872497T1 (sl) 2017-08-31
ES2622190T5 (es) 2020-04-23
JP6292721B2 (ja) 2018-03-14
RS55813B1 (sr) 2017-08-31
DK2872497T3 (en) 2017-04-24
LT2872497T (lt) 2017-04-25
WO2014011047A1 (en) 2014-01-16
CA2878567C (en) 2021-02-23
DK2872497T4 (da) 2019-11-25
AU2013287347B2 (en) 2017-11-30
JP2015522067A (ja) 2015-08-03
HUE033757T2 (en) 2017-12-28
PT2872497T (pt) 2017-04-24
EP2872497B1 (en) 2017-03-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS55813B2 (sr) Hromanil derivati za tretiranje mitohondrijalne bolesti
US11530190B2 (en) Compounds for treating mitochondrial disease
ES2886361T3 (es) Uso de (2R,6R)-hidroxinorketamina y otros metabolitos hidroxilados estereoisómeros de (R,S)-ketamina en el tratamiento de depresión y dolor neuropático
JP2018531250A6 (ja) ミトコンドリア疾患を治療する新規化合物
CA2906194A1 (en) Benzimidazole derivatives and uses thereof
US9388156B2 (en) Chromanyl derivatives for treating mitochondrial disease
EP3279188A1 (en) Axially chiral isomers, and preparation methods therefor and pharmaceutical uses thereof
US11078222B2 (en) Hydroxybenzoic acid derivatives, methods and uses thereof
JP2014529628A (ja) 皮膚色素沈着を調節するための方法
Wang et al. Efficient synthesis and antioxidant activities of N-heterocyclyl substituted Coenzyme Q analogues
Li et al. Monitoring and inhibition of Plk1: amphiphilic porphyrin conjugated Plk1 specific peptides for its imaging and anti-tumor function
EP3116881B1 (en) Aminothiazine compounds
HK1209425B (en) Chromanyl derivatives for treating mitochondrial disease
CN111527069B (zh) 一类喹啉衍生物
Khomenko et al. New type of anti-influenza agents based on benzo [d][1, 3] dithiol core
EP4470608A1 (en) Lysophosphatidylserine analogue, and lysophosphatidylserine analogue-containing phamaceutical composition for treating or preventing fibrosis
HK1257665B (en) Novel compounds for treating mitochondrial disease
WO2022051384A1 (en) Compounds and methods for inhibition of bax-mediated cell death
TW201544494A (zh) 胰高血糖素樣肽第一型（ｇｌｐ－１）受體調控子及其於調節血糖濃度之用途