RO127570A2 - Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic utilizat în tehnica elisa de dozare a pesticidului acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic - Google Patents
Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic utilizat în tehnica elisa de dozare a pesticidului acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic Download PDFInfo
- Publication number
- RO127570A2 RO127570A2 ROA201001271A RO201001271A RO127570A2 RO 127570 A2 RO127570 A2 RO 127570A2 RO A201001271 A ROA201001271 A RO A201001271A RO 201001271 A RO201001271 A RO 201001271A RO 127570 A2 RO127570 A2 RO 127570A2
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- dichloro
- methoxybenzoic acid
- glutaraldehyde
- nanoparticles
- serum albumin
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N dicamba Chemical compound COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 17
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 title claims abstract description 10
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 title claims description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 10
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract 2
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 title abstract 2
- 239000010703 silicon Substances 0.000 title abstract 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims abstract description 40
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 12
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 12
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 11
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 10
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 10
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 8
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 5
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 claims description 4
- 229910052681 coesite Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910052906 cristobalite Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 4
- 229910052682 stishovite Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910052905 tridymite Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 claims description 3
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 abstract 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 4
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 4
- 239000005504 Dicamba Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- JBHRGAHUHVVXQI-UHFFFAOYSA-N 1-triethoxysilylpropan-1-amine Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)C(N)CC JBHRGAHUHVVXQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 2
- 229910018540 Si C Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229910010271 silicon carbide Inorganic materials 0.000 description 2
- RYCZAOMNZBMFAU-UHFFFAOYSA-N 1-ethoxysilylpropan-1-amine Chemical compound NC(CC)[SiH2]OCC RYCZAOMNZBMFAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- -1 glutaraldehyde-activated SiO Chemical class 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052814 silicon oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Prezenta invenţie se referă la un procedeu de obţinere a unui nanoimunosorbent bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehidă-albumină serică de bovină-acid 3,6-diclor-2-metoxibenzoic, cu utilizare în tehnica ELISA de dozare a acidului 3,6-diclor-2-metoxibenzoic, prin tratarea nanoparticulelor de SiOcu soluţie 10% de HNO, incubarea la 70°C cu derivatul de silciu, activarea nanoparticulelor separate şi spălate cu glutaraldehidă 0,1%, suspendarea nanoparticulelor izolate şi spălate în tampon fosfat, adăugarea conjugatului imunogen albumină serică de bovină-acid 3,5-diclor-2-metoxibenzoic, obţinut separat, cu agitare timp de 2 h, după care, prin centrifugare, spălare cu tampon fosfat şi din nou centrifugare, este separat imunosorbentul sub formă de nanoparticule.
Description
Invenția se referă la un procedeu de obținere a nanoimunosorbentului nanoparticulă de (SiO2)(C2H5O)3Si-C3H6-N=CH-(CH2)2-CH=N-albumina serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic utilizat în tehnica ELISA (engl.: Enzyme Linked Immunosorbent Assay) de dozare a pesticidului acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic (dicamba) din probe de mediu. în prezent sunt cunoscute pe plan mondial tehnici ELISA de dozare a pesticidelor ce utilizează în principal ca imunosorbent faze solide tip mase plastice ce fixează prin adsorbție fizică la suprafață antigenul sau anticorpul. Dezavantajul acestor metode este suprafața limitată și desorbția componentelor imune în procesul de dozare putând conduce la scăderea sensibilității respectiv a acurateții analizei.
Procedeul conform invenției constă în cuplajul covalent al antigenului conjugatului imunogenalbumina serica de bovina- acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic la nanoparticule de bioxid de siliciu având avantajul unei suprafețe specifice mari (> 200 m2/g) comparativ cu metoda clasică (cm2/g), cuplarea covalentă elimină desorbția antigenului din metoda clasică cât și scăderea timpului de analiză in tehnica ELISA în faza omogenă față de tehnica clasică în care reacția antigen anticorp este heterogenă (are loc la suprafața tubului de reacție).
Procedeul conform invenției constă în aceea că 2 g de nanoparticule de bioxid de siliciu de mărime Φ=14 nm (14* 10’9 m) și arie 200 m2/g sunt tratate cu HNO3 10% timp de 1 oră la temperatura de 60°C urmat de incubare cu soluție de a-aminopropiltrietoxisilan 10% în apă distilată pentru 3 ore la 70°C. Se spală cu apă distilată de 3 ori apoi cu alcool etilic și se depozitează la 4°C în vederea cuplării cu antigenul proteină-pesticid. Procedeul conform invenției constă în aceea că legarea covalentă a antigenului proteină-pesticid de nanoparticulă folosește glutaraldehidă ca agent de cuplaj.
Procedeul constă în 5 etape, Ei, E2, E3, E4 si E5:
El: Obținerea nanoparticulelor S1O2 grefate cu a-aminopropiletoxisilan: 2 g de nanoparticule de S1O2 (Φ=14 nm și arie specifică 200 m2/g) și 100 ml HNO3 10% sunt agitate timp de 1 oră la temperatura de 60°C. După îndepărtarea supernatantului prin centrifugare la 1500xg timp de 10 minute nanoparticulele sunt colectate și tratate cu 100 ml de a-aminopropiltrietoxisilan 10% în apă
A-2 010-01271-0 2 -12- 2010 distilată sub continuă agitare, la temperatura de 70°C timp de 3 ore. Amestecul este centrifugat la 1500xg timp de 10 minute, supematantul fiind înlăturat iar nanoparticulele de SiCh-^HsOTSi-QHeNH2 sunt colectate și spălate de 3 ori cu apă distilată (30 ml) urmată de o spălare cu un volum de 20 ml de alcool etilic.
E2: Activarea nanoparticulei funcționalitate cu glutaraldehidă: la 1,5 g nanoparticule rezultate din etapa El se adăugă un volum de 50 ml soluție de glutaraldehidă 0,1 % în apă distilată sub continuă agitare la temperatura de 35 °C timp de 15 minute urmată de centrifugare la 1500xg timp de 15 minute și îndepărtarea supernatantului. Nanoparticulele activate cu glutaraldehidă sunt folosite imediat pentru cuplarea cu antigenul albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic.
E3: Reacția de activare a acidului 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic: 100 mg acid 3,6-dicloro-2metoxibenzoic, 50 mg N-hidroxisuccinimidă și 200 mg de carbodiimidă în 3,5 ml dimetilformamidă sunt puse în reacție timp de 4 ore sub agitare magnetică la temperatura camerei în vederea activării grupării carboxi al pesticidului.
E4: Cuplarea albuminei serice de bovină de pesticidul activat: 2 ml din amestecul activat de pesticid se adaugă picătură cu picătură la 8 ml soluție de albumină serică de bovină 20 mg/ml în tampon carbonat de sodiu 50mM pH 9,6. Reacția de cuplare la proteină se efectuează timp de 24 ore sub continuă agitare la temperatura camerei. Produsul obținut acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoicalbumină serică de bovină se purifică pe cromatografie pe coloană de Sephadex G25 având ca solvent de eluție tamponul fosfat 50mM pH 7,24.
E5: Cuplarea conjugatului imunogen la nanoparticula funcționalizată: Nanoparticulele activate rezultate din etapa E2 se suspendă în 50 ml tampon fosfat 50 mM pH 8,6 apoi se adaugă 1 ml soluție conjugat imunogen albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic 2 mg/ml la temperatura de 35 °C sub agitare continuă timp de 2 ore urmată de centrifugare la 1500xg timp de 15 minute și îndepărtarea supernatantului apoi spălate de 3 ori cu tampon fosfat 50 mM pH 8,6, nanoparticulele de imunosorbent SiO2-(C2H5)3Si-C3H6-N=HC-(CH2)3-CH=N-albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxi benzoic obținute în urma centrifugării se depozitează la 4 °C în vederea utilizării în tehnica ELISA de dozare a acidului 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic.
Reacțiile chimice de obținere a nanoimunosorbentului nanoparticulă de (SiO2)-(C2H5O)3SiC3H6-N=CH-(CH2)2-CH=N-albumină serică de bovină- acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic sunt prezentate în continuare:
drGÎ’IH, ^DCvlMicplae Vîkțtor Zamf i r <P Cf·’·..;·';
(^-2 0 1 0 - 0 1 2 7 1 -0 2 -12- 2010
Reacția 1: Obținerea nanoparticulelor de bioxid de siliciu funcționalitate
țiU^U JUHUUJ
(nanoparticula de SiO2 grefata cu
Qk-aminopropiltri
-etoxisilan)
Reacția 2: Activarea nanoparticulei funcționalitate cu glutaraldehida
+OHC-(CH2)3-CHO (glutaraldehida)
-OII ^O-C2H5
SiO-Si-Cfl^N^CII-lCHfi^CHO ^O-C2H5 nanoparticula de SiO2 activata cu glutaraldehida
f 't>i rector fe^neral IFIN-HH, ^ DrXNîc^l^ Victor Zamfir
C\-2 Ο 1 Ο - Ο 1 27 1 - - /
Ο 2 -12- 2010
Reacția 3: Reacția de activare a acidului 3,6-dicloro-2-metoxi benzoic
C=O
OH (Acidul 3,6-dicloro-2 metoxi benzoic) (Dicamba) _|_ R-N=C=N-R (carbodiimida)
R-NH-C=N-R
(N-hidroxi succinimida)
(dicamba activat)
<“2010-01271-- 4
2 -12- 2010
Reacția 4: Cuplarea albuminei serice de bovina de pesticidul activat
—COO-N^
II o
+h2n-ASB-nh2 (albumina serica de bovina) ( \-co-nh-ASB-nh2
CI (conjugat imunogen
ASB-Dicamba)
Reacția 5: Cuplarea conjugatului imunogen la nanoparticula activata cu glutaraldehida
xO-C2Hs
Si-O-Si-CjHg-N^H-fCH^CHO + \-C2H5 (d=14nm) l—
O-CHj
-co.nh-ASB-nh2
CI nanoparticula de SiO2 activata cu glutaraldehida
0-fiSi-OH (d=14nm) /fii
Si-O-Si-C^g-NCH-jCH^rCH^N-ASB-NH-CO \-C2H5
Ci
Imunosorbent: nanoparticula de bioxid de siliciu-andnopropiltrietoxisilan-glutaraldehid- albumina serica de bovina-acid 3,6-dicloro-2-metoxi benzoic g '(sPinect neral IFIN-HH, μ Victor Zamfir \·.*
c\- 2 Ο 1 Ο - Ο 1 2 7 1 - Ο 2 -12- 2010
Procedeul conform invenției prezintă avantajul că, prin utilizarea nanoparticulelor de oxid de siliciu de mărime 14 nm și suprafață specifică de 200 m2/g rezultă nanoimunosorbenți ce pot fi utilizați în tehnica ELISA în fază omogenă, reacția antigen anticorp fiind mai rapidă decât în tehnica ELISA clasică (fază heterogenă), ceea ce conduce la reducerea timpului de analiză, iar separarea complexului imun se face simplu, prin centrifugarea nanoimunosorbentului cuplat cu antigenul iar cantitatea de nanoimunosorbent utilizat la o imunoanaliză este extrem de mică datorită suprafeței specifice mari.
Se prezintă mai jos un exemplu de aplicare a procedeului conform invenției pentru obținerea nanoimunosorbentului nanoparticulă de bioxid de siliciu-aminopropil-trietoxisilan-glutaraldehidalbumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic ce conține obiectul acestei invenții.
Potrivit invenției 2 g de nanoparticule de SiO2 de mărime Φ=14 nm și arie 200 m2/g se tratează cu o soluție de HNO3 10% timp de o oră urmată de incubare cu a aminopropiltrietoxisilan 10% în apă distilată pentru 3 ore la 70°C urmată de spălarea cu 30 ml apă distilată de 3 ori și 20 ml alcool etilic o dată, iar supematantul este îndepărtat ffrin centrifugare la 1500xg timp de 10 minute urmată de tratarea nanoparticulelor în vederea activării cu 50 ml soluție de glutaraldehidă 0,1 % în apă distilată, sub agitare continuă la temperatura de 35°C, supematantul este îndepărtat prin centrifugare la 1500xg timp de 15 minute iar nanoparticulele activate rezultate se suspendă în tampon fosfat 50 mM pH 8,6 urmat de adăugarea de 1 ml conjugat imunogen-albumină serică de bovină- acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic obținut prin reacția E3 de activare a acidului 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic, amestec de reacție dintre 100 mg acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic, 50 mg N-hidroxisuccinimidă și 200 mg carbodiimidă în 3,5 ml dimetilformamidă, reacție desfășurată timp de 4 ore sub agitare, urmat de cuplarea albuminei serice de bovină de pesticidul activat, reacția E4 realizată prin adaosul de 2 ml din amestecul activat de pesticid la 8 ml soluție de albumină serică de bovină 20 mg/ml în tampon carbonat de sodiu 50 mM pH 9,6, reacție ce se desfășoară timp de 24 ore iar conjugatul imunogen rezultat, albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic este purificat prin cromatografie pe coloană de Sephadex G25 având ca solvent de eluție tampon fosfat 50 mM pH 7,24, iar conjugatul imunogen purificat de concentrație 2 mg/ml în apă distilată se adaugă la nanoparticulele activate cu glutaraldehidă, amestecul de reacție rezultat se agită timp de 2 ore apoi se centrifughează la 1500xg timp de 15 minute, supematantul se îndepărtează iar precipitatul nanoparticule de imunosorbent rezultat se spală de 3 ori cu tampon fosfat 50 mM pH 8,6, centrifugate la 1500xg cu îndepărtarea supernatantului, imunosorbentul nanoparticule de bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-albumină serică de bovină- acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic se depozitează la 4°C în vederea utilizării în tehnica ELISA de dozare a acidului 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic.
Director («ețmral IFIN-HH,
DENicolaS Victor Zamfir
Claims (1)
- REVENDICĂRIProcedeul de obținere a nanoimunosorbentului nanoparticulâ de bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic este ocaracterizat prin aceea că 2 g de nanoparticule de S1O2 de mărime Φ=14 nm și arie 200 m /g se tratează cu o soluție de HNO3 10% timp de o oră urmată de incubare cu a aminopropiltrietoxisilan 10% în apă distilată pentru 3 ore la 70°C urmată de spălarea cu 30 ml apă distilată de 3 ori și 20 ml alcool etilic o dată, iar supernatantul este îndepărtat prin centrifugare la 1500xg timp de 10 minute urmată de tratarea nanoparticulelor în vederea activării cu 50 ml soluție de glutaraldehidă 0,1 % în apă distilată, sub agitare continuă la temperatura de 35°C supernatantul este îndepărtat prin centrifugare la 1500xg timp de 15 minute iar nanoparticulele activate rezultate se suspendă în tampon fosfat 50 mM pH 8,6 urmat de adăugarea de 1 ml conjugat imunogen-albumină serică de bovină- acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic obținut prin reacția E3 de activare a acidului 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic, amestec de reacție dintre 100 mg acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic, 50 mg N-hidroxisuccinimidă și 200 mg carbodiimidă în 3,5 ml dimetilformamidă, reacție desfășurată timp de 4 ore sub agitare, urmat de cuplarea albuminei serice de bovină de pesticidul activat, reacția E4 realizată prin adaosul de 2 ml din amestecul activat de pesticid la 8 ml soluție de albumină serică de bovină 20 mg/ml în tampon carbonat de sodiu 50 mM pH 9,6, reacție ce se desfășoară timp de 24 ore iar conjugatul imunogen rezultat, albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic este purificat prin cromatografie pe coloană de Sephadex G25 având ca solvent de eluție tampon fosfat 50 mM pH 7,24, iar conjugatul imunogen purificat de concentrație 2 mg/ml în apă distilată se adaugă la nanoparticulele activate cu glutaraldehidă, amestecul de reacție rezultat se agită timp de 2 ore apoi se centrifughează la 1500xg timp de 15 minute, supernatantul se îndepărtează iar precipitatul nanoparticule de imunosorbent rezultat se spală de 3 ori cu tampon fosfat 50 mM pH 8,6, centrifugate la 1500xg cu îndepărtarea supematantului, imunosorbentul nanoparticule de bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-albumină serică de bovină- acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic se depozitează la 4°C în vederea utilizării în tehnica ELISA de dozare a acidului 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201001271A RO127570B1 (ro) | 2010-12-02 | 2010-12-02 | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201001271A RO127570B1 (ro) | 2010-12-02 | 2010-12-02 | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO127570A2 true RO127570A2 (ro) | 2012-06-29 |
| RO127570B1 RO127570B1 (ro) | 2013-07-30 |
Family
ID=46319402
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA201001271A RO127570B1 (ro) | 2010-12-02 | 2010-12-02 | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RO (1) | RO127570B1 (ro) |
-
2010
- 2010-12-02 RO ROA201001271A patent/RO127570B1/ro unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RO127570B1 (ro) | 2013-07-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6325553B2 (ja) | エールリヒア抗体の検出のためのペプチド、デバイス、および方法 | |
| CN105651999B (zh) | 一种基于二硫化钼的传感器及其制备方法和应用 | |
| JPH10502366A (ja) | ヘリコバクター・ピロリ抗原タンパク質調製品およびイムノアッセイ | |
| JP2010540925A (ja) | カスケード酵素免疫測定法 | |
| CN102411051A (zh) | 有机磷农药多残留的免疫检测方法 | |
| CN110412261A (zh) | 一种基于磁分离与量子点标记幽门螺杆菌快速检测方法和试剂盒 | |
| CN101382542A (zh) | 一种微囊藻毒素-lr的免疫荧光pcr检测方法 | |
| WO2006047928A1 (fr) | Préparation et applications de puces immunodétectrices pour la détection de cellules cancéreuses | |
| CN113447658A (zh) | 一种检测抗过氧化物还原酶-1-IgG抗体的试剂盒 | |
| CN113588942B (zh) | 一种检测抗原肌球蛋白1-IgG抗体的试剂盒 | |
| Chiang et al. | Binding of lipoteichoic acid of group A streptococci to isolated human erythrocyte membranes | |
| RO127570A2 (ro) | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-albumină serică de bovină-acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic utilizat în tehnica elisa de dozare a pesticidului acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic | |
| CN109856076B (zh) | 检测细胞的组合物及检测方法 | |
| WO1992021952A1 (fr) | Instrument servant a echantillonner une quantite minuscule d'un specimen | |
| KR100368756B1 (ko) | 비형 간염 표면 항원에 대한 항체 진단 시약의 제조방법,이를 이용하여 수득되는 비형 간염 항원에 대한 항체 진단시약 및 비형 간염 바이러스 항체 진단 시약 | |
| JP4578401B2 (ja) | 固定化抗体の製造方法 | |
| RO128870A2 (ro) | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului nanoparticulă de bioxid de siliciu-aminopropiltrietoxisilan-glutaraldehid-ovalbumină-trenbolonă utilizat în tehnica elisa de dozare a trenbolonei | |
| EP2470908A1 (fr) | Proteines utilisees pour le diagnostic d'une borreliose de lyme | |
| JPH04505623A (ja) | イムノアッセイにおいて利用するためのシステインチオール保護ペプチド | |
| JP4217516B2 (ja) | ストレプトコッカス・ミュータンスに対するポリクローナル抗体の製造方法 | |
| JP7787563B2 (ja) | 新型コロナウイルスの検出に使用可能な融合タンパク質およびその用途 | |
| JPS60130600A (ja) | 抗犬ジステンバ−モノクロ−ナル抗体及びそれを使用する測定方法 | |
| RO136004A4 (ro) | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului tip anticorp antidicamba de înaltă afinitate pe bază de nanoparticule de aur utilizat în tehnica nanoelisa pentru detecţia pesticidului dicamba din probe alimentare şi de mediu | |
| RU2265611C1 (ru) | Способ получения иммуносорбента | |
| US9201070B2 (en) | Antigenic structure and uses thereof for screening trypanosomiases in humans and animals |