RO136004A4 - Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului tip anticorp antidicamba de înaltă afinitate pe bază de nanoparticule de aur utilizat în tehnica nanoelisa pentru detecţia pesticidului dicamba din probe alimentare şi de mediu - Google Patents
Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului tip anticorp antidicamba de înaltă afinitate pe bază de nanoparticule de aur utilizat în tehnica nanoelisa pentru detecţia pesticidului dicamba din probe alimentare şi de mediu Download PDFInfo
- Publication number
- RO136004A4 RO136004A4 ROA202100122A RO202100122A RO136004A4 RO 136004 A4 RO136004 A4 RO 136004A4 RO A202100122 A ROA202100122 A RO A202100122A RO 202100122 A RO202100122 A RO 202100122A RO 136004 A4 RO136004 A4 RO 136004A4
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- dicamba
- nanoimmunosorbent
- gold nanoparticles
- antibody
- antibodies
- Prior art date
Links
- 239000005504 Dicamba Substances 0.000 title claims abstract description 52
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 239000010931 gold Substances 0.000 title claims abstract description 31
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 30
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N dicamba Chemical compound COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 235000013305 food Nutrition 0.000 title claims abstract description 10
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 5
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229910052681 coesite Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 229910052906 cristobalite Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 229910052682 stishovite Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 229910052905 tridymite Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 10
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 6
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 5
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 claims description 4
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 claims description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 37
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 4
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 11
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JBHRGAHUHVVXQI-UHFFFAOYSA-N 1-triethoxysilylpropan-1-amine Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)C(N)CC JBHRGAHUHVVXQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 3-amino(3'aminopropyl)carbodiimide Chemical compound 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010061711 Gliadin Proteins 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000002210 biocatalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000005543 nano-size silicon particle Substances 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000447 pesticide residue Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 229910052814 silicon oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la un procedeu de obţinere a unui imunosorbent de tip anticorp anti acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic (anti-dicamba) de înaltă afinitate pe bază de nanoparticule de aur utilizat în tehnica nanoELISA pentru detecţia pesticidului dicamba din probe alimentare şi de mediu. Procedeul, conform invenţiei, constă în reacţiile :1-sinteza nanoparticulelor de aur, 2-obţinerea anticorpilor anti-dicamba, 3-separarea γ-globulinelor specifice şi nespecifice prezente în antiserul anti-dicamba, 4-obţinerea nanoimunosorbentului de tip antigen pe bază de dioxid de siliciu, 5-reacţia acestuia cu IgG specifică, 6- separarea anticorpilor specifici anti-dicamba labili la pH 1, 7-separarea anticorpilor specifici anti-dicamba labili la pH 0,5 şi 8-obţinerea nanoimunosorbentului de tip anticorp anti-dicamba pe bază de particule de aur, care este suspendat în tampon fosfat şi depozitat la 4°C, în vederea utilizării în metoda de detecţie a pesticidului dicamba din probe alimentare şi de mediu.
Description
• ''DESCRIERE
Procedeu de obținere a nanoimunosorbentului tip anticorp antidicamba dc inaita afinitate pe baza de nanoparticule de aur utilizat in tehnica nanoELISA pentru detecția pesticidului dicamba din probe alimentare si de mediu
Invenția se refera la o metoda de obținere a nanoimunosorbentului tip anticorp pe baza de nanoparticule de aur la suprafața carora sunt cuplate molecule de anticorp antidicamba de inaita afinitate folosit ca reactiv de baza in tehnica ELISA (engleza: Enzyme Linked Immunosorbent Assay) neconventionala de dozare a pesticidului acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic (dicamba) din probe alimentare si de mediu. Tehnica imunochimica ELISA este o tehnica de dozare in faza omogena bazata pe imunosorbenti- componente imune antigen sau anticorp cuplate covalent la suprafața fazei solide si markeri enzimatici tip antigen sau anticorp-enzima utilizând recunoașterea specifica antigenanticorp si proprietățile biocatalitice ale enzimelor [1] si se aplica in diagnosticul clinic, in controlul calitatii alimentelor si in monitorizarea mediului. In tehnica ELISA clasica se folosește ca faza solida de legare a complexului imun suprafața interioara a tuburilor de analiza sau a godeurilor plăcilor de tip ELISA, legarea componentelor imune, antigenul sau anticorpul, la suprafața realizandu-se prin adsorbtia fizica. Dezavantajul fiind suprafața limitata a fazei solide accesibila, posibilitatea desorbtiei componentelor imune si viteza redusa de atingere a echilibrului chimic dintre antigenul dicamba si anticorpul antidicamba. In vederea creșterii sensibilității metodei au fost sintetizate nanomateriale noi cu proprietăți optice, electrice, magnetice si catalitice unice pe baza de nanoparticule de aur, nanoparticule de siliciu, nanoparticule de fier, nanoparticule de platina etc. De suprafața acestor nanoparticule se pot cupla diferite macromolecule biologice: anticorpi, enzime, acizi nucleici etc. De exemplu, in vederea determinării concentrației Pb (II) din apa prin metoda ELISA s-au utilizat nanoparticule de aur pe a căror suprafața specifica mare s-au cuplat anticorpul si enzima obtinanduse amplificarea semnalului substratului oxidat catalitic si imbunatatirea sensibilității (limita de detecție: 9 pg/ml) [2] sau in cazul detecției prin tehnica ELISA a gliadinei, componenta a glutenului din grâu, pe suprafața nanoparticulelor de aur s-au cuplat anticorpii si enzima ceea ce a dus Ia creșterea sensibilității metodei ELISA si la scăderea timpului de analiza [3]. Cuplarea covalenta sau necovalenta a anticorpilor de nanoparticulele de aur se efectuează prin mai multe metode in funcție de scopul utilizării acestora [4],
Problema pe care e rezolva invenția consta in obținerea nanoimunosorbentului de tip anticorp antidicamba de inaita afinitate pe baza de nanoparticule de aur utilizat in tehnica nanoELISA pentru detecția pesticidului dicamba din probe alimentare si de mediu astfel: prin utilizarea nanoimunosorbentului de tip antigen dioxid de siliciu-albumina serica de capra-dicamba in cromatografia de afinitate se caracterizarea antiserurile policlonale antidicamba repartizând astfel anticorpii separati pe clase de afinitate: anticorpi cu constanta de afinitate mica obținuți in cazul utilizării eluentului glicina-acid clorhidric 10 mM pH 1 si anticorpi cu constanta de afinitate mare obținuți in cazul utilizării eluentului glicina-acid clorhidric 10 înM pH 0,5. Anticorpii cu afinitate crescută se utilizează la obținerea nanoimunosorbentului de tip anticorp antidicamba de inaita afinitate pe baza de nanoparticule de aur utilizat in tehnica nanoELISA.
Avantajele invenției sunt: i) separarea anticorpilor antidicamba in doua clase de afinitate: anticorpi de afinitate scăzută si anticorpi de afinitate ridicata care vor fi utilizati in tehnica nanoELISA; ii) utilizarea nanoparticulelor de aur in tehnica nanoELISA cuplate cu anticorpi antidicamba de afinitate inaita va conduce la creșterea sensibilității de analiza a metodei.
Sinteza nanoimunosorbentului tip anticorp antidicamba de inaita afinitate pe baza de nanoparticule de aur conform invenției cuprinde opt reacții, reacția 1, reacția 2, reacția 3, reacția 4, reacția 5, reacția 6, reacția 7 si reacția 8 si sunt descrise in cele ce urmeaza:
Reacția 1: Sinteza nanoparticulelor de aur mg acid tetracloroauric (111) se dizolva in 120 ml apa bidistilata, se adauga la soluția data 110 ing citrat de sodiu. Amestecul format este agitat si adus la temperatura de 60-70 °C pana la formarea unei soluții de culoare roșie de nanoparticule de aur. Nanoparticulele de aur sunt separate prin centrifugare
Inventatori: Dorobanțu loan, Neagu Livia, Stoica Ra'uca-Diana
JECRETD&SERVICIU la 1500 x g timp de 15 min, supemantantul este îndepărtat iar nanoparticulele de aur sunt resuspendate in 10 ml apa bidistilata, din nou centrifugate si spalate si suspendate in final in 5 ml apa bidistilata. Randamentul de recuperare al procedeului este de 57-60 % iar diametrul mediu al nanoparticulelor obținute este de 20 nm, aria tuturor nanoparticulelor de aur obținute fiind de 0,202 m2.
Reacția 2: Obținerea anticorpilor anti acid 3,6-dicloro-2-metoxibenzoic (anti-dicamba)
Antiserul antidicamba a fost obtinut prin imunizarea animalelor de experiența, iepuri rasa Noua Zeelanda, efectuandu-se opt imunizări succesive la interval de o luna, utilizandu-se in acest scop conjugatul imunogen albumina serica de bovina (ASB)-dicamba (15 rezidii pesticidice cuplate la o molecula de albumina serica de bovina) in prezenta adjuvantului Freund complet/incomplet.
Conjugatul imunogen albumina serica de bovina-dicamba a fost realizat prin cuplarea a 100 mg albumina serica de bovina cu 34 mg dicamba activat in prealabil cu 20 mg N-hidroxisuccinimida si 200 mg 3-amino(3’aminopropil)carbodiimida in 2 ml dimetilformamida pentru 3 h sub continua agitare, pus in reacție cu 6 ml tampon carbonat 10 mM, pH 9,6 timp de 24 h si apoi purificat pe coloana cromatografica de Sephadex G25 avand ca tampon de elutie tampon fosfat 5 mM pH 7,2.
Reacția 3: Reacția de separare a gama-globulinelor specific si nespecifice prezente in antiserul anti-dicamba
După cea de-a opta imunizare, 1 ml antiser antidicamba recoltat (brut) a fost separat prin utilizarea a 1 ml sulfat de amoniu ((NH4)2SO4) 50 %, centrifugat la 1500 x g, timp de 15 minute, in supcmatant fiind prezente proteinele plasmatice cu Mw< 150000 Da (ex. Albumine etc) iar in precipitat gamaglobulinele totale, specifice si nespecifice.
Reacția 4: Reacția de obținere a nanoimunosorbentului de tip antigen pe baza de SiOz
Pentru funcțional izarea nanoparticulelor de dioxid de siliciu, S1O2 s-au spalat 200 mg S1O2 avand diamentrul de 14 nm si suprafața de cca 200 m2/g cu acid azotic 10 % la temperatura de 70 °C, timp de 2 h, apoi au fost puse in reacție cu 10 ml alfa-aminopropiltrietoxisilan (APTS) 10 % si încălzit timp de 2 h la 60-70 °C urmat de spalare cu apa bidistilata in in final supuse reacției cu 2 ml glutaraldehida 25 %, timp de 6 h pana la obținerea unei culori roșiatice. Capacitatea de cuplaj a nanoparticulelor de S1O2 functionalizate este următoarea: 1 mg de proteina se cuplează la 3 mg de nanoparticule de S1O2. 100 mg nanoparticule de S1O2 functionalizate se pun in reacție cu 50 mg albumina-serica de capra-dicamba, in apa distilata, timp de 24 h, cu agitare continua pana la cuplarea covalenta a albuminei serice de capra-dicamba cu nanoparticulele de S1O2 prin intermediul glutarladehidei ce reacționează cu grupările amino libere ale Uzinei din structura albuminei serice de capra obtinandu-se nanoimunosorbentul tip antigen dioxid de siliciu-albumina serica de capradicamba. Procedura de obținere a conjugatului albumina serica de capra-dicamba este identica cu cea a conjugatului imunogen albumina serica de bovina-dicamba. Nanoimunosorbentul tip antigen dioxid de siliciu-albumina serica de capra-dicamba va fi utilizat la determinarea cantitatii de gamaglobulina specifica (prin metoda spectofotometrica UV-Vis sau prin metoda Bradford) cat si la purificarea anticorpilor antidicamba cu constanta de afinitate mare. S-a utilizat la obținerea nanoimunosorbentului de tip antigen albumina serica de capra pentru a preîntâmpina cuplarea anticorpilor anti-ASB existenti in gama globulinele specifice formate din anticorpi antidicamba si anticorpi anti-ASB) de suprafața nanoimunosorbentului.
Reacția 5: Reacția dintre nanoimunosorbentul tip antigen pe baza de S1O2 si IgG specifica
Se pune in reacție 1 ml gama-globulina specifica antidicamba cu 20 mg nanoimunosorbent tip antigen, la temperature camerei, sub continua agitare, timp de 24 h, urmat de centrifugare la 1500 x g, timp de 15 minute, urmat de determinarea concentrației totale de gama-globuline nespecifice antidicamba existente in supematant si a concentrației gama-globulinei specifice totale, si anume cantitatea de anticorpi policlonali cuplati pe nanoimunosorbent. In urma acestei reacții se obține complexul imun antigen-anticorp specific existent la suprafața nanoparticulei de S1O2.
Reacția 6: Separarea anticorpilor specifici antidicamba labili la pH 1
Nanoimunosorbentul de tip antigen pe baza de S1O2 a fost obtinut in vederea utilizării iu cromatografia de afinitate pentru purificarea anticorpilor policlonali antidicamba avand ca eluent tamponul glicina-acid clorhidric la diferite pH-uri si in final, soluțiile fiind tamponate la pH neutru cu o soluție de Tris-baza (2-amino-2(hidroximetil)-l,3-prQpandiol)) 2 M pH 10,88, obtinandu-se in
Inventatori: Dorobanțu loan, Neagu Livia, Stoica Raluca-Diana
RO 136004 Α4 /
SECRKJLD&^eRVIClU final anticorpi antidicamba pe diferite clase de afinitate.
Pe coloana cromatografica de Sephadex G25 de înălțime 3 cm s-a introdus 5 mg nanoirnunosorbent de tip antigen pe baza de S1O2 care conține 1 mg de anticorp antidicamba specifici urmat de trecerea pe coloana a 2 ml eluent glicina -acid clorhidric 10 mM pH 1 si se indeparteaza anticorpii antidicamba cu constanta de afinitate mica (labili), ramanand pe coloana nanoimunosorbentul de tip antigen SiO2albumina serica de capra-dicamba-anticorpi antidicamba stabili la pH 1.
Reacția 7: Separarea anticorpilor specifici antidicamba labili la pH 0,5
Peste nanoimunosorbentul de tip antigen SiO2-albumina serica de capra-dicamba-anticorpi antidicamba stabili la pH 1 ramas pe coloana se trece un volum de 2 ml eluent glicina -acid clorhidric 10 mM pH 0,5 obtinandu-se anticorpii antidicamba cu constanta de afinitate mare care se colectează si soluția se aduce la pH 7 cu ajutorul tamponului Tris baza 2 M pH 10,88.
Reacția 8: Obținerea nanoimunosorbentului de tip anticorp antidicamba pe baza de ananoparticule de Au mg anticorpi antidicamba cu constanta de afinitate mare, obținuți in reacția 7, vor reacționa in soluție apoasa cu 10 mg nanoparticule de aur (Φ=20 nm), la temperatura camerei, cu agitare continua timp de 30 minute obtinandu-se nanoimunosorbentul de tip anticorp antidicamba pe baza de nanoparticule de aur care este suspendat in 10 ml tampon fosfat 10 mM pH 7,2 si depozitat la temperatura de 4 °C in vederea utilizaii in tehnica nanoELISA pentru detecția pesticidului dicamba din probe alimentare si de mediu.
Reacțiile chimice de obținere a nanoimunosorbentului tip anticorp sunt următoarele:
Reacția 1: Sinteza nanoparticulelor de aur
Reacția 2: Obținerea anticorpilor anii acid 3.6-dicloro-2-metoxibenzoic ( anti-dicambai
Iepuri rasa Noua Zeelanda imunizări cu conjugat — ASB-Dicamba (15 rezidii) (ASB-albumina serica de bovina) ► antiser anti-dicamba
Inventatori: Dorobanțu loan, Neagu Livia, Stoica Raluca-Di?jia
RO 136004 Α4 < SECREXDB-SERVÎCÎU
Reacția 3: Reacția de separare a gama-slobulinelor specifice si nespecifice prezente in antiserul anti-dicamba antiser anti-dicamba (sulfat de amoniu)
gama globuline specifice (IgG anti-dicamba) gama globuline nespecifice (precipitat)
Reacția 4: Reacția de obținere a nanoimunosorbentului de tip antisen pe baza de SiO^
Nanoparticule f unctionalizate cu APTS si glutaraldehida
Nanoimunosorbent tip antigen dioxid de siliciu-albumina serica de capra-dicamba
Reacția 5: Reacția dintre nanoimunosorbentul tip antisen pe baza de SiO^ si IgG specifica
Ig-G specifica anti-dicamba
Nanoimunosorbent tip antigen dioxid de siliciu-albumina
Complex imun Ag-Ac specif ic existent la suprafața nanoparticulei serica de capra-dicamba
Metoda Bradford este folosita pentru dozarea IgG specific legat din IgG total cspecific~ctotaTcnespecific unde ctotai -concentrația IgG totale înainte de adaugarea nanoimunosorbentului Cnespecific -concentrația totala IgG nespecif ice antidicamba existente in supernatant rezultat in urma separării prin centrif ugare
Inventatori: Dorobanții loan, N Li via, Stoica Raluca-Diana
SECRETJiE-SERVÎClU
Reacția 6: Separarea anticorpilor specifici antidicamba labili la pH 1
Nanoimunosorbent de tip Ag SiO2-ASC-dicamba-anticorpi antidicamba stabili la pH 1
Reacția 7: Separarea anticorpilor specifici antidicamba labili la pH 0,5
| L (14 nm) l | _|_ ~ HCl Glicina-acid clorhidric pH 0,5 Ac specif ici antidicamba X'-- ^{AȘCj> SiO2 (14 n^ V Inventatori: Dorobanții loan, Neagu Livia, Stoica Raluca-Diana 5 //i4 |
SECRET D.
Reacția 8: Obținerea nanoimunosorbentului de tip anticorp antidicamba pe baza de nanoparticule de Au
nanoparticule de aur φ= 20 nm
Ac spectf ici antidicamba labili lapH0,5
Nanoimunosorbent de tip anticorp antidicamba pe baza nanoparticule de aur
Bibliografie
1. Q. Zhao, D. Lu, G. Zhang, D. Zhang, X. Shi, Recent improvements in enzyme-linked immunosorbent assays based on nanomaterials, Talanta, voi. 223, article ID 121722, 2021;
2. Y. Zhou, X.-L. Tian, Y.-S. Li, F.-G. Pan, Y.-Y. Zhang, J.-H. Zhang, L. Yang, X.-R. Wang, H.L. Ren, S.-Y. Lu, Z.-H. Li, Q.-J. Chen, Z.-S. Liu, J.-Q. Liu, An enhanced ELISA based on modified colloidal gold nanoparticles for the detection of Pb (II), Biosensors and Bioelectronics, voi. 26, pp. 3700-3704,2011;
3. P. Ciaurriz, F. Femandez, E. Tellechea, J.F. Moran, A.C. Asensio, Compaiison of four functionalization methods of gold nanoparticles for enhancing the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Beilstein Journal of Nanotechnology, voi. 8, pp. 244-253, 2017;
4. M.H. Jazayeri, H. Amâni, A. A. Pourfatollah, H. Pazoki-Toroudi, B. Sedighimoghaddam, Various methods of gold nanoparticles (GNPs) conjugation to antibodies, Sensing and Bio-Sensing Research, voi. 9, pp. 17-22, 2016.
Inventatori: Dorpbanțu loan, Neagu Livia, Stoica Raluca-Diana 6
Claims (1)
- Procedeul de obținere a nanoimunosorbentului tip anticorp antidicamba de înalta afinitate pe baza de nanoparticule de aur utilizat in tehnica nanoELISA pentru detecția pesticidului acid 3,6dicloro-2-metoxibenzoic (dicamba) din probe alimentare si de mediu este caracterizat prin aceea ca 50 mg acid tetracloroauric se dizolva in 120 ml apa bidistilata la care se adauga o cantitate de 110 mg citrat de sodiu iar amestecul de reacție rezultat este adus la temperatura de 60-70 °C sub continua agitare pana la formarea unei soluții de culoare roșie de nanoparticule de aur ce sunt separate prin centrifugare la 1500 x g timp de 15 min apoi spalate cu 10 ml apa bidistilata si suspendate in final in 5 ml apa bidistilata iar 10 mg nanoparticule de aur se adauga la 1 mg anticorpi antidicamba cu constanta de afinitate mare in soluție apoasa pH 7 obținuți prin separare pe coloana de afinitate cu Sephadex G25 cu inaltimea de 3 cm utilizând nanoimunosorbentul de tip antigen SiO2-albumina serica de capra-dicamba-anticorpi antidicamba stabili la pH 1 avand ca eluent un volum glicina-acid clorhidric 10 mM pH 0,5 ulterior 5 mg nanoimunosorbentul de tip antigen care conține 1 mg de anticorp antidicamba specifici eluat pe coloana de Sephadex G25, înălțime 3 cm cu 2 ml glicina -acid clorhidric 10 mM pH 1, 20 mg nanoimunosorbent tip antigen pe baza de SiO? reacționează cu 1 ml gama-globulina specifica la temperature camerei, timp de 24 h apoi centrifugat la 1500 x g timp de 15 minute, rezultând ca faza intermediara calculul cantitatii anticorpilor specifici antidicamba prin metoda spectrofotometrica sau metoda Bradford, nanoimunosorbentului tip anticorp antidicamba de înalta afinitate pe baza de nanoparticule de aur obfmut este suspendat in 10 ml tampon fosfat 10 mM pH 7,2 si depozitat la temperature de 4 °C in vederea utilizaii in tehnica nanoELISA pentru detecția pesticidului dicamba din probe alimentare si de mediu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA202100122A RO136004A4 (ro) | 2021-03-19 | 2021-03-19 | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului tip anticorp antidicamba de înaltă afinitate pe bază de nanoparticule de aur utilizat în tehnica nanoelisa pentru detecţia pesticidului dicamba din probe alimentare şi de mediu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA202100122A RO136004A4 (ro) | 2021-03-19 | 2021-03-19 | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului tip anticorp antidicamba de înaltă afinitate pe bază de nanoparticule de aur utilizat în tehnica nanoelisa pentru detecţia pesticidului dicamba din probe alimentare şi de mediu |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO136004A4 true RO136004A4 (ro) | 2022-09-30 |
Family
ID=83445004
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA202100122A RO136004A4 (ro) | 2021-03-19 | 2021-03-19 | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului tip anticorp antidicamba de înaltă afinitate pe bază de nanoparticule de aur utilizat în tehnica nanoelisa pentru detecţia pesticidului dicamba din probe alimentare şi de mediu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RO (1) | RO136004A4 (ro) |
-
2021
- 2021-03-19 RO ROA202100122A patent/RO136004A4/ro unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Park | Orientation control of the molecular recognition layer for improved sensitivity: A review | |
| CN102703453B (zh) | 特异性识别链霉素的dna适配体及其应用 | |
| Ye et al. | An electrochemical immunoassay for Escherichia coli O157: H7 using double functionalized Au@ Pt/SiO2 nanocomposites and immune magnetic nanoparticles | |
| Liao et al. | Enhanced sandwich immunoassay based on bivalent nanobody as an efficient immobilization approach for foodborne pathogens detection | |
| CN105651999B (zh) | 一种基于二硫化钼的传感器及其制备方法和应用 | |
| Xiong et al. | Ultrasensitive direct competitive FLISA using highly luminescent quantum dot beads for tuning affinity of competing antigens to antibodies | |
| AU2010232305B2 (en) | Method for detecting substance in biological sample | |
| Liu et al. | An ultrasensitive ELISA to assay femtomolar level SARS-CoV-2 antigen based on specific peptide and tyramine signal amplification | |
| CN105651992A (zh) | 三唑磷生物条形码免疫分析测定试剂盒及其应用 | |
| CN108802360B (zh) | 一种血清中可交换铜和铜蓝蛋白一步同时检测用试剂盒、制备方法及应用 | |
| Yang et al. | A label-free fluorescent magnetic dual-aptasensor based on aptamer allosteric regulation of β-lactoglobulin | |
| CN116355908B (zh) | 一种用于检测β-乳球蛋白的磁性适配体生物传感器 | |
| Yin et al. | Combining hybrid nanoflowers with hybridization chain reaction for highly sensitive detection of SARS-CoV-2 nucleocapsid protein | |
| RO136004A4 (ro) | Procedeu de obţinere a nanoimunosorbentului tip anticorp antidicamba de înaltă afinitate pe bază de nanoparticule de aur utilizat în tehnica nanoelisa pentru detecţia pesticidului dicamba din probe alimentare şi de mediu | |
| CN105203769B (zh) | 基于磁性分离和量子点标记的人肺炎衣原体快速检测方法和试剂盒 | |
| JP2003183299A (ja) | 抗体および免疫学的測定方法 | |
| KR102309495B1 (ko) | 사스 코로나바이러스 2 항체 검출용 나노선 기반 면역형광 키트 및 이의 용도 | |
| Wang et al. | Detection of β-amyloid peptide aggregates by quartz crystal microbalance based on dual-aptamer assisted signal amplification | |
| CN115718134A (zh) | 一种基于镧系纳米探针同时检测多种乳腺癌生物标志物的分析方法 | |
| De Liu et al. | Light scattering sensing detection of pathogens based on the molecular recognition of immunoglobulin with cell wall-associated protein A | |
| CN102914520B (zh) | 检测结核的表面等离子共振生物传感器,制备方法及其应用 | |
| Parvaneh et al. | Efficient conjugation of anti-HBsAg antibody to modified core-shell magnetic nanoparticles (Fe3O4@ SiO2/NH2) | |
| CN116559467A (zh) | 一种基于适配体的快速检测黏蛋白1的比色方法 | |
| CN105277713A (zh) | 基于磁性分离和量子点标记的人肺炎链球菌快速检测方法和试剂盒 | |
| Wang et al. | A rapid triple-mode fluorescence switch assay for immunoglobulin detection by using quantum dots-gold nanoparticles nanocomposites |