RU2265611C1 - Способ получения иммуносорбента - Google Patents
Способ получения иммуносорбента Download PDFInfo
- Publication number
- RU2265611C1 RU2265611C1 RU2004119996/04A RU2004119996A RU2265611C1 RU 2265611 C1 RU2265611 C1 RU 2265611C1 RU 2004119996/04 A RU2004119996/04 A RU 2004119996/04A RU 2004119996 A RU2004119996 A RU 2004119996A RU 2265611 C1 RU2265611 C1 RU 2265611C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- immunosorbent
- solution
- tularemia
- preparing
- aerosil
- Prior art date
Links
Landscapes
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Изобретебние относится к иммунохимии и может быть использовано в диагностике для выявления специфической реакции антиген-антитело с использованием иммуноферментного анализа и реакции иммунофлуоресценции. Способ получения иммуносорбента включает модифицирование аэросила раствором хитозана в уксусной кислоте совместно с формиатом железа с последующим окислением и иммобилизацией белкового лиганда. 1 табл.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к иммунохимии и может быть применено для выявления специфической реакции антиген-антитело в диагностике особо опасных инфекций с помощью иммуноферментного анализа, реакции иммунолуоресценции.
Уровень техники
Известен способ получения иммуносорбента на основе полиакриламидных полимеров, включающий иммобилизацию иммуноглобулинов. Недостатками способа являются: низкий уровень специфической емкости, нестабильность при хранении, кроме того, сорбенты механически не прочны (Пушкарь В.Г., Ефременко В.И., Климова И.М. и др. Приготовление и применение магнитных сорбентов для изучения антигенов микроорганизмов // ЖМЭИ, 1985, №12, с.30-34).
Наиболее близким к предлагаемому способу является способ получения иммуносорбента (Патент РФ №2102134, В 01 У 20/10. Способ получения иммуносорбента, Авторы: Брыкалов А.В., Жарникова И.В. опубл. 20.01.98 г., Бюллетень №2).
Способ включает модифицирование кремнеземного сорбента органическим полимером декстраном, окислением продукта перхлоратом натрия с последующим взаимодействием с чумными и туляремийными иммуноглобулинами.
Недостатком указанного способа является низкий уровень специфической активности иммуносорбента.
Цель изобретения - повышение специфической емкости чувствительности иммуносорбента, имеющего в структуре магнитосоставляющий компонент.
Раскрытие изобретения
Цель достигается тем, что для повышения уровня специфической емкости, чувствительности иммуносорбента проводят модифицирование кремнеземного носителя - аэросила раствором хитозана в 3% уксусной кислоте совместно с формиатом железа с последующим окислением раствором перхлората натрия.
Сущность способа получения иммуносорбента
Сущность предлагаемого способа заключается в том, что проводится модифицирование сорбента хитозаном, который представляет собой полимер -поли[(1-4)-2-амино-2-дезокси-β-Д-глюкозы].
При последующем окислении сорбента раствором перхлората натрия носитель активирован альдегидными группами, способными к химическому взаимодействию с туляремийными иммуноглобулинами. В процессе синтеза сорбента на начальных этапах происходит разложение формиата железа с последующим образованием в структуре сорбента магнетита.
Применение разработанных магносорбентов с магнитными свойствами обеспечит упрощение и ускорение манипуляций на всех этапах иммуноферментного анализа, исключит необходимость предварительного концентрирования микроорганизмов на мембранных фильтрах или путем центрифугирования, и при этом повышается вероятность выделения микробов туляремии из больших объемов исследуемых проб.
Осуществление изобретения
Содержание предлагаемого способа иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. К 5 г аэросила А-380 добавляли 3% раствор хитозана в 3% уксусной кислоте и 2 г формиата железа. Затем полученный продукт высушивали при температуре 160-175°С в течение 30 минут. К полученному сорбенту в последующем добавляли 40 мл водного раствора, содержащего 2,5 г перхлората натрия, инкубировали смесь в течение 40 минут в темноте. Затем сорбент отмывали 80 мл дистиллированной воды. К 0,02 г магносорбента приливали 1 мл туляремийных иммуноглобулинов с концентрацией по белку 5 мг/мл. Смесь оставляли при 23°С в течение 1,5 часа, далее надосадочную жидкость удаляли, а носитель трижды по 10 мл приливали 0,9% раствором хлорида натрия.
Для получения результатов определения специфической емкости и специфичности иммуносорбентов осуществляли метод иммунофлуоресценции, иммуноферментный анализ. Для этого к 5 мл 10% суспензии иммуносорбента приливали 7 мл туляремийного микроба в концентрации 103 микробных тел/мл и инкубировали смесь 1 час при 24°С. Сорбент отмывали 50 мл 0,9% раствора хлорида натрия. Вносили 0,5 мл иммуноглобулинов туляремийных люминесцирующих в рабочем разведении и инкубировали 30 мин. Отмывали сорбент 0,9% раствором хлорида натрия и проводили регистрацию результатов в люминесцирующем микроскопе Люмам Р-2 по общепринятой DASS-системе. Параллельно с опытной пробой измеряли люминесценцию контрольной пробы (иммуносорбент без контакта с туляремийным микробом).
Чувствительность иммуносорбента, измеренная методом иммунофлуоресценции, составляет 103 м.т/мл туляремийного микроба.
Для проведения иммуноферментного анализа к 0,2 мл 10% взвеси магноиммуносорбента добавляли 1 мл туляремийного микроба в концентрации 109 м.т/мл смесь инкубировали при температуре 27°С в течение 20 минут, затем трехкратно промывали фосфатным буфером с рН 7,2-7,4. На следующем этапе вносили 0,2 мл коньюгата пероксидазного туляремийного и инкубировали в течение 30 минут при температуре 23°С. После четырехкратного промывания вносили по 0,2 мл субстрат-индикаторной смеси (10 мл 0,1 М цитратного буферного раствора рН 5,0 с 0,02 мл 33% перекиси водорода и 5 мг о-фенилендиамина). Через 4 минуты реакцию останавливали 2 М раствором серной кислоты в объеме 0,1 мл. Результаты учитывали на анализаторе иммуноферментном АКИ-Ц-0,1.
Чувствительность иммуносорбента, измеренная иммуноферментным анализом, составляет 103 м.т/мл туляремийного микроба.
Пример 2. Способ получения магноиммуносорбента осуществляли по методике примера 1, но для модифицирования аэросила использовали 3,5% раствор хитозана в 3% растворе уксусной кислоты. Специфическая емкость по флуоресцентному анализу составила 15 у.е/мг, а чувствительность метода по ИФА составила 102 м.т. туляремийного микроба.
Пример 3. Способ получения магноиммуносорбента осуществляли по методике примера 1, но для модифицирования аэросила использовали 4,5% раствор хитозана в 3% растворе уксусной кислоты. Специфическая емкость по флуоресцентному анализу составила 15 у.е/мг, а чувствительность метода по ИФА составила 102 м.т. туляремийного микроба.
Пример 4. Способ получения магноиммуносорбента осуществляли по методике примера 1, но для модифицирования аэросила использовали 5% раствор хитозан в 3% растворе уксусной кислоты. Специфическая емкость по флуоресцентному анализу составила 15 у.е./мг, а чувствительность метода по ИФА составила 102 м.т. туляремийного микроба.
Сравнительные результаты предлагаемого способа и прототипа представлены в таблице.
В отличие от прототипа предлагаемый способ получения иммуносорбента повышает специфическую емкость препарата в 1,8 раза, увеличивает чувствительность на порядок.
Эксперименты показали, что для модифицирования аэросила оптимален 3,5-4,5% раствор хитозана. При увеличении концентрации полимера до 5% не наблюдается увеличения специфической емкости иммуносорбента, тогда как уменьшение концентрации активатора до 3% снижает специфическую емкость.
Основные преимущества и положительный эффект способа получения иммуносорбента определяется на основании того, что в процессе синтеза одновременно осуществляется активирование поверхности сорбента хитозаном и образование в структуре носителя магнитной составляющей.
При последующем окислении функциональных групп хитозана образуются альдегидные группы, реагирующие с иммуноглобулинами туляремийными. Синтез иммуносорбентов отличается простотой и обеспечивает при их использовании в иммуноферментном анализе повышение специфической емкости, чувствительности.
Claims (1)
- Способ получения иммуносорбента, предусматривающий ковалентную иммобилизацию лиганды белковой природы с модифицированным носителем, таким, как аэросил, отличающийся тем, что модифицирование проводят 3,5-5%-ным раствором хитозана в уксусной кислоте совместно с формиатом железа с последующим окислением раствором перхлората натрия.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004119996/04A RU2265611C1 (ru) | 2004-06-30 | 2004-06-30 | Способ получения иммуносорбента |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004119996/04A RU2265611C1 (ru) | 2004-06-30 | 2004-06-30 | Способ получения иммуносорбента |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2265611C1 true RU2265611C1 (ru) | 2005-12-10 |
Family
ID=35868679
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004119996/04A RU2265611C1 (ru) | 2004-06-30 | 2004-06-30 | Способ получения иммуносорбента |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2265611C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113447646A (zh) * | 2021-06-22 | 2021-09-28 | 浙江理工大学 | 一种利用C-SiO2吸附材料加速ELISA检测过程的方法 |
-
2004
- 2004-06-30 RU RU2004119996/04A patent/RU2265611C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113447646A (zh) * | 2021-06-22 | 2021-09-28 | 浙江理工大学 | 一种利用C-SiO2吸附材料加速ELISA检测过程的方法 |
| CN113447646B (zh) * | 2021-06-22 | 2024-03-19 | 浙江理工大学 | 一种利用C-SiO2吸附材料加速ELISA检测过程的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Du et al. | G-Quadruplex-based DNAzyme for colorimetric detection of cocaine: Using magnetic nanoparticles as the separation and amplification element | |
| JP3110839B2 (ja) | スクシンイミド含有ポリマー由来の生物学的活性試薬の製造方法及びそれを含んでなる分析要素並びにその用途 | |
| CN113351182B (zh) | 表面两性离子聚合物修饰的磁性微球及其制备方法和应用 | |
| JP5171958B2 (ja) | カスケード酵素免疫測定法 | |
| CN110108881B (zh) | 一种双功能生物传感器hrp@zif-8/dna的制备方法及其应用 | |
| CN106706907A (zh) | 一种基于量子点微球和抗生素的金黄色葡萄球菌快速层析试纸条 | |
| CN113588752A (zh) | 一种电致化学发光适配体传感器的制备方法及应用 | |
| US5047318A (en) | Imidazole leuco dye composition containing 4'-hydroxyacetanilide, diagnostic kit and method using same | |
| RU2265611C1 (ru) | Способ получения иммуносорбента | |
| JP4434015B2 (ja) | 化学発光増強剤 | |
| CN112179875B (zh) | 一种一型透明质酸酶荧光纳米传感器的制备及应用 | |
| CN111693721A (zh) | 基于普鲁士蓝纳米酶标记物的酶联免疫吸附实验的制备方法及应用 | |
| CN115436335B (zh) | 一种基于苝衍生物探针免标记检测凝血酶的方法 | |
| CN108760695B (zh) | 一种基于pret的磷光探针定量检测凝血酶的方法 | |
| US20150268234A1 (en) | Density Amplification in Magnetic Levitation to Detect Binding Events of Large Molecules | |
| CN114152757B (zh) | 一种β银环蛇毒检测用生物材料、一种非诊断目的检测β银环蛇毒的方法 | |
| CN108918873A (zh) | 一种基于PS@Au双重抑制ZnCdS的光电化学凝血酶适配体传感器的制备方法及应用 | |
| RU2102134C1 (ru) | Способ получения иммуносорбента | |
| RU2253871C1 (ru) | Способ получения иммуносорбента | |
| RU2138813C1 (ru) | Способ получения иммуносорбента (варианты) | |
| RU2246968C2 (ru) | Способ получения магноиммуносорбента для обнаружения бактериальных антигенов | |
| RU2232992C1 (ru) | Способ определения функциональной активности компонента с3 комплемента человека по альтернативному пути активации | |
| KR20110130384A (ko) | 효소가 집적된 미세튜브를 이용한 정량분석법 | |
| RU2363732C1 (ru) | Способ получения иммуносорбента | |
| EP0280557A2 (en) | Test kit, extraction device and method for the determination of streptococcus a antigen |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060701 |