RO121851B1 - HIDRAT CRISTALIN AL CLORHIDRATULUI DE 6-HIDROXI-3-(4-[2-PIPERIDIN-1-IL)ETOXI]-FENOXI)-2-(4-METOXIFENIL)BENZO[b]TIOFEN, PROCEDEU DE PREPARARE ŞI COMPOZIŢII FARMACEUTICE CARE ÎL CONŢIN - Google Patents

HIDRAT CRISTALIN AL CLORHIDRATULUI DE 6-HIDROXI-3-(4-[2-PIPERIDIN-1-IL)ETOXI]-FENOXI)-2-(4-METOXIFENIL)BENZO[b]TIOFEN, PROCEDEU DE PREPARARE ŞI COMPOZIŢII FARMACEUTICE CARE ÎL CONŢIN Download PDF

Info

Publication number
RO121851B1
RO121851B1 ROA200000736A RO200000736A RO121851B1 RO 121851 B1 RO121851 B1 RO 121851B1 RO A200000736 A ROA200000736 A RO A200000736A RO 200000736 A RO200000736 A RO 200000736A RO 121851 B1 RO121851 B1 RO 121851B1
Authority
RO
Romania
Prior art keywords
phenoxy
piperidin
benzo
ethoxy
hydrochloride
Prior art date
Application number
ROA200000736A
Other languages
English (en)
Inventor
Julie Kay Bush
Preston Charles Conrad
Merlyn Gerard Flom
Wayne Douglas Luke
Original Assignee
Eli Lilly And Company
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eli Lilly And Company filed Critical Eli Lilly And Company
Publication of RO121851B1 publication Critical patent/RO121851B1/ro

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/50—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D333/52—Benzo[b]thiophenes; Hydrogenated benzo[b]thiophenes
    • C07D333/62—Benzo[b]thiophenes; Hydrogenated benzo[b]thiophenes with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D333/64—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4535—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a heterocyclic ring having sulfur as a ring hetero atom, e.g. pizotifen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A61K31/567—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in position 17 alpha, e.g. mestranol, norethandrolone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A61K38/09—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH], i.e. Gonadotropin-releasing hormone [GnRH]; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • A61P5/30—Oestrogens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • A61P5/32—Antioestrogens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

Invenţia se referă la un nou hidrat cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen(arzoxifen), la procedeul de preparare a acestuia ?i la compoziţiile farmaceutice utilizate în tratamentul stărilor maladive asociate cu lipsa de estrogen.

Description

Invenția d e față se referă la un nou hidrat cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen (arzoxifen), la procedeul lui de preparare și la compoziții farmaceutice utilizate în tratamentul stărilor maladive asociate cu lipsa de estrogen.
Clorhidratulde6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxi-fenil)benzo [bjtiofen (arzoxifen)(SERM III) a fost inițial descris în mod generic în Brevetul US 5510357 și a fost acoperit în mod specific în Brevetul US 5723474 (*474) și în cererea de Brevet European 0729956. Arzoxifenul este un estrogen mixt nonsteroidic, antagonist/agonist, între altele, util pentru reducerea nivelului colesterolului în ser și pentru inhibarea hiperlipidemiei, osteoporozei, cancerului dependent de estrogen incluzând cancerul mamar și uterin, endometrioza, bolile sistemului nervos central incluzând maladia lui Alzheimer, proliferarea celulară a mușchiului neted al aortei și restenoza.
Arzoxifenul este util în special și este sub evaluare clinică, pentru tratamentul cancerului mamar metastatic pozitiv receptor; tratamentul adjuvant al pacienților pozitiv receptori, urmând după terapia sistemică sau locală corespunzătoare; reducerea recurenței cancerului mamar invaziv și neinvaziv; și reducerea incidenței cancerului mamar invaziv și a carcinomului ductal in s/fu(DCIS). Arzoxifenul este, de asemenea, util în combinație cu radioterapia, inhibitorii de aromatază, analogii LHRH, și inhibitorii de acetilcolinesterază (AChE).
Difracția de raze X în pulbere (XRD), termogravimetria (TGA), rezonanța magnetică nucleară a protonului (1H RMN) și analiza Karl Fischer (KF) aplicate arzoxifenului brut izolat prin procedeele prezentate anterior în brevetul european '474 au indicat faptul că materialul respectiv era hidratat, slab cristalin, și conținea în structură cantități variabile dintr-un volatil organic (acetat de etil).
Pentru prepararea compozițiilor farmaceutice sunt de obicei mai puțin dorite materialele slab cristaline față de cele înalt cristaline. în plus, în general, nu este de dorit să se realizeze compoziții farmaceutice care să conțină cantități substanțiale de solvent organic (de exemplu, acetat de etil) datorită potențialei toxicități a solventului pentru receptor, ca și a modificărilor efectului medicamentului în funcție de solvent.
Deși arzoxifenul preparat prin procedeele prezentate în brevetul european '474 ar putea fi utilizat în farmaceutică, ar fi mult mai avantajos și de preferat să se găsească o formă mai cristalină a arzoxifenului, care să nu conțină un solvent organic în structura sa cristalină, care să fie reproductibilă și preparabilă în mod eficient la scară comercială.
Problema tehnică pe care invenția de față o rezolvă constă în obținerea unei forme înalt cristaline a arzoxifenului, care să nu conțină cantități substanțiale de solvent organic în structura sa, pentru a se obține o structură reticulară mai bună și mai stabilă necesară condiționării farmaceutice a compozițiilor care conțin arzoxifen.
Prezenta invenție se referă la o nouă formă cristalină hidratată nestoechiometrică a clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]fenoxi)-2-(4-metoxife-nil)benzo[b]tiofen (F-l), al cărei tipar de difracție în raze X conține următoarele vârfuri: 7,9 ± 0,2, 10,7 ± 0,2, 14,9 ± 0,2,15,9 ± 0,2,18,3 ± 0,2 și 20,6 ± 0,2° în 2Θ; atunci când se obține dintr-o sursă de radiație cu cupru.
Mai mult, prezenta invenție se referă la o compoziție farmaceutică conținând hidratul cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]fenoxi)-2-(4-metoxifenil) benzo[b]tiofen (F-l), unul sau mai mulți purtători, diluanți sau excipienți și, opțional, estrogen, opțional progestin, opțional un inhibitor de aromatază, opțional un analog LHRH și opțional un inhibitor al acetilcolinesterazei (AChE).
RO 121851 Β1 în plus, prezenta invenție se referă la metodele de utilizare a hidratului cristalin al 1 clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxi-fenil)benzo[b]tiofen (F-l) pentru inhibarea condițiilor patologice selectate dintr-un grup constând din: fibroza 3 uterină, endometrioză, proliferarea celulară a mușchiului neted aortal, restenoză, cancer mamar, cancer uterin, cancer de prostată, hiperplazie prostatică benignă, decalcifiere, osteo- 5 poroză, tulburări cardiovasculare, hiperlipidimie, tulburări ale sistemului nervos central și maladia lui Alzheime, și pentru utilizarea F-l la fabricarea unui medicament pentru inhibarea 7 acestora.
Prezenta invenție se mai referă și la metode de utilizare a hidratului cristalin al 9 clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxi-fenil)benzo[b]tiofen (F-l) pentru reglarea colinacetiltransferazei (ChAT) și la utilizarea F-l pentru fabricarea unui 11 medicament destinat reglării acesteia.
Invenția de față se referă și la un procedeu pentru prepararea hidratului cristalin al 13 clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1 -il)etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxi- fenil)benzo [b] tiofen (F-l), procedeu care constă în cristalizarea la temperatură ambiantă a clorhidratului de 15 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4- metoxifenil)benzo[b]tiofen din tetrahidrofuran conținând 1 ...10% în volum apă în primă etapă și din tetrahidrofuran anhidru proaspăt 17 în a doua etapă, urmată de îndepărtarea apei prin distilare atmosferică.
Invenția prezintă următoarele avantaje:19
- noua formă de hidrat cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il) etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen este înalt cristalină și nu conține solvent organic21 în structura sa, fiind mai stabilă la temperatură ambiantă, mai puțin higroscopică și preparabilă în mod eficient la scară comercială;23
- datorită lipsei de solvent organic în structura cristalină a noii forme de arzoxifen, pot fi preparate compoziții farmaceutice care să nu conțină cantități substanțiale de solvent 25 organic, datorită potențialei toxicități a solventului organic pentru receptor, ca și a modificărilor efectului medicamentului în funcție de solvent. 27
Arzoxifenul (SERM III) brut preparat prin procedeul prezentat în brevetul european '474 (exemplul 41, cristalizare dintr-un amestec de etanol și acetat de etil, filtrare și uscarea 29 turtei de filtrare in vacuo până la masă constantă la temperatura camerei) a fost caracterizat prin XRD și s-a constatat că este slab cristalin. 1H RMN a confirmat că materialul brut con- 31 ținea 6% acetat de etil.
Procedeul de cristalizare prezentat în brevetul european '474 a fost apoi modificat 33 astfel încât s-a adăugat etanol unei suspensii de arzoxifen brut în acetat de etil refluxat.
După răcire și filtrarea în vid, solidul care rezultă din acest procedeu modificat este un solvat 35 înalt cristalin amestecat de acetat de etil/apă al arzoxifenului (la care se va face referire în continuare ca S-II), care s-a găsit mai târziu a fi o materie primă pentru F-l (o altă formă 37 polimorfă a arzoxifenului SERM III).
F-l poate fi preparat prin îndepărtarea acetatului de etil din structura cristalină a S-II 39 prin uscarea în vid /călirea S-ll la temperaturi înalte. Durata de timp și temperatura necesare călirii S-ll în scopul preparării F-l va varia de la lot la lot, dar valorile tipice sunt de ordinul a 41 cinci zile și în jurde 100°C. Pentru efectuarea prin acest procedeu a conversiei S-ll la F-l sunt necesare temperaturi înalte, dat fiind faptul că punerea în suspensie a S-ll în apă la 43 temperatura ambiantă sau stocarea unui eșantion la o umiditate relativă de 98% timp de trei săptămâni nu au condus la conversia la F-l. în plus, uscarea S-ll într-un cuptor cu convecție 45 la temperatură înaltă nu a desolvatat materialul, ceea ce sugerează că este necesară de asemenea aplicarea vacuum-ului pentru a scoate acetatul de etil din structura S-ll. 47
RO 121851 Β1
Hidratul cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), conform invenției de față, poate fi însă preparat și izolat cu ușurință la temperatura ambiantă prin cristalizarea arzoxifenului (sau a oricărui polimorf/solvat al acestuia) din tetrahidrofuran. Această cristalizare este de preferință realizată prin dizolvarea inițială a arzoxifenului în tetrahidrofuran umed (1...10% din volum apă, preferabil 2,5...7,5%, și cel mai preferabil 4,5...5,5%), urmată de îndepărtarea apei respective prin distilare atmosferică. Un exemplu de astfel de cristalizare este prezentat mai jos, în exemplul 2. Atunci când F-l este preparat prin această procedură, este de așteptat un nivel total de substanțe asociate (TRS) mai mic de 0,5%.
Arzoxifenul ca materie primă adecvată pentru cristalizarea prezentată mai sus include, dar nu se limitează la S-II, F-III, arzoxifen preparat prin procedurile descrise în brevetul european '474, sau orice amestec al acestora. Nu are importanță cu care anume formă de arzoxifen se începe, deoarece cristalizarea din tetrahidrofuran, conform procedeului descris anterior, conduce la obținerea cristalelor de hidratului cristalin al clorhidratului de 6hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1 -il)etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l) conform invenției. Pentru sinteza pe scară comercială a F-l, poate fi avantajoasă inițierea cristalizării cu o sămânță de F-l.
F-l11, un alt hidrat nestoechiometric al arzoxifenului, este preparat și izolat cu ușurință la temperatura camerei prin cristalizarea arzoxifenului (sau a oricărui polimorf/solvat al acestuia) dintr-un amestec de alcool isopropilic (IPA) și apă. Raportul între apă și IPA (volum: volum) este în general în gama 1:1 la 9:1. Mai preferabil, raportul este între 2,5 și 5,6:1. Cel mai preferabil, raportul este între 3 și 5,6:1. Raportul dintre IPA și apă nu este critic pentru cristalizarea F-lII, dar afectează randamentul. Pentru sinteza pe scară comercială a F-III, poate fi avantajoasă inițierea cristalizării cu o sămânță de F-III. Arzoxifenul ca materie primă adecvată pentru cristalizarea prezentată mai sus include, dar nu se limitează la, S-ll, F-l, arzoxifen preparat prin procedeele descrise în brevetul european '474, sau orice amestec al acestora.
Caracterizarea și diferențierea între S-ll, F-l și F-III
Pentru caracterizarea S-ll, F-l și F-III au fost utilizate metodele DSC/TGA și XRD. TGA este adesea foarte utilă pentru a distinge între diferitele forme solide ale unui material, deoarece temperatura sau temperaturile la care apar modificări fizice într-un material sunt uzual caracteristici al polimorfului sau solvatului. DSC este o tehnică utilizată adesea pentru identificarea compușilor care formează polimorful și solvatul. în sfârșit, XRD este o tehnică ce detectează ordonarea pe distanțe mari a materialului cristalin.
Arzoxifenul preparat prin procedurile descrise în brevetul european '474 a oferit tipare XRD cu un raport semnal/zgomot slab și o linie de bază ridicată, ceea ce indică un material slab cristalin. De aceea, comparațiile pentru F-l și F-III sunt efectuate față de materialul (S-ll) produs prin procedura de cristalizare a arzoxifenului discutată anterior (adăugarea de etanol la o suspensie de arzoxifen în acetat de etil refluxat).
Curbele reprezentative DSC/TGA pentru S-ll, F-l și F-III sunt prezentate în fig. 1, 2 și respectiv 3. Curba DSC pentru S-ll prezintă o endotermă largă începând la aproximativ 62‘C, corespunzând pierderii acetatului de etil și apei din structură. Endotermă care începe la aproximativ 152°C reprezintă o topire. Pierderea de masă TGA de aproximativ 2,5% are loc simultan cu prima tranziție, în timp ce pierderea de masă rămasă, de 0,5%, are loc până la începerea topirii, ceea ce sugerează că unele molecule de solvent sunt menținute mai strâns în interiorul structurii.
RO 121851 Β1
Curba DSC a F-l prezintă o endotermă largă începând la aproximativ 75°C, urmată 1 de o a doua endotermă începând la aproximativ 155°C, corespunzătoare unei topiri. Curba TGA a F-l, obținut conform invenției, prezintă o pierdere graduală de masă de 0,3%, urmată 3 de o pierdere abruptă de 1,5%, care reprezintă împreună dehidratarea structurii. începutul primei tranziții DSC și pierderea de masă TGA corespunzătoare sunt ușor decalate datorită 5 diferenței între ratele de încălzire. Pierderea inițială de masă reprezintă apa de hidratare menținută slab, în timp ce a doua pierdere de masă este consistentă cu aproximativ 0,5 moli 7 de apă prezentă în structură la umidități relative foarte joase (sub 5% - vezi datele sorbției umezelii). 9
Curba DSC a F-l II prezintă o endotermă largă, de joasă temperatură, la aproximativ 30°C, urmată de o a doua endotermă începând la aproximativ 70°C, și o tranziție finală 11 începând la aproximativ 146°C, corespunzătoare unei topiri. Pierderea abruptă de masă de 1,5% (-0,5 moli) în TGA, care coincide cu prima endotermă, corespunde eliberării mole- 13 culelor de apă menținute slab, în timp ce pierderea adițională de masă de circa 1,6% la peste 60°C reprezintă eliberarea moleculelor de apă menținute mai strâns, adică a acelora care 15 sunt prezente la umidități relative foarte mici. Pierderea de masă observată după temperatura de 170°C corespunde descompunerii F-III. 17
Tiparele XRD ale F-l și F-III prezintă vârfuri ascuțite și o linie de bază plată, ceea ce indică materiale înalt cristaline. în tabelul de mai jos sunt listate pozițiile angulare ale vârfu- 19 rilorîn 20 și datele l/l0 pentru eșantioanele reprezentative ale F-l, F-III și S-II. Deși multe din reflexiile intense au loc în general la unghiuri de difracție similare, fiecare dintre forme 21 prezintă un tipar diferit în pulbere, permițând o distincție clară între S-II, F-l și F-III.
în tehnica cristalografică este binecunoscut faptul că, pentru un polimorf dat, 23 intensitățile relative ale vârfurilor de difracție pot varia datorită orientării preferențiale rezultate din factori cum ar fi morfologia cristalului. Acolo unde sunt prezente efectele orientării prefe- 25 rențiale, intensitățile de vârf sunt alterate, dar pozițiile vârfurilor caracteristice ale polimorfului rămân neschimbate. A se vedea, de exemplu, The United States Pharmacopeia #23, 27
Național Formulary #18, paginile 1843-1844,1995. Astfel, pe baza intensităților vârfurilor, ca și a pozițiilor acestora, hidratul cristalin al clorhidratul de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1- 29 il)etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), conform invenției, poate fi identificat prin prezența vârfurilor la 7,9 ± 0,2,10,7 + 0,2,14,9 ±0,2,15,9 ±0,2,18,3 ±0,2 și 20,6+ 0,2° în 31 2Θ; atunci când tiparul este obținut dintr-o sursă de radiație cu cupru.
S-II F-l F-III
29 (’) l/l0(%) 29 (“) l/lo(%) 29 O l/l0 (%)
4,67 1,3 4,92 2,6 4,63 20,8
5,03 6 7,69 34,6 7,82 100
6,83 5,8 7,91 100 9,29 16,9
7,17 16,1 9,89 2,5 10,16 22,7
7,73 100 10,22 2 10,35 5,4
9,03 1,3 10,74 7,4 13,77 10,7
9,31 1,7 14,86 9,1 13,97 15,2
9,66 2,4 15,45 2,3 15,06 6,9
10,27 1,6 15,92 15,9 15,71 22,3
RO 121851 Β1
Tabel (continuare)
S-II F-l F-III
29 0 l/l0(%) 29 0 l/l0(%) 29 0 l/l0(%)
10,47 2,2 16,67 1,7 15,87 7,4
10,91 6,3 16,98 3,1 16,35 34,5
13,63 2,1 18,28 17,8 16,77 12,3
14,09 4,6 18,56 7 17,28 10
15,10 4,1 20,58 13,1 17,62 47,9
15,52 10,5 20,85 8,8 18,09 43,9
16,45 9,1 21,64 3,9 20,43 42
16,67 7,6 22,19 4,8 20,80 33,6
17,21 4,9 22,65 2,9 21,31 42,7
17,53 2,4 23,28 3,4 21,71 13
18,33 28,2 23,97 11,8 21,85 14,5
18,69 11,1 24,31 6,3 22,13 12,8
19,37 3,5 25,52 3,9 22,26 16,3
20,29 3,6 26,20 3,4 23,51 13,2
20,64 17,2 26,47 3,1 23,69 15,9
21,02 12,7 28,84 6,4 23,91 25,6
21,68 5,1 30,13 3,5 24,31 38,7
22,01 8,3 31,12 2,9 25,22 8
22,29 8 25,67 8,9
23,17 7,8 27,05 18,9
23,39 9,1 27,89 13,3
24,30 13,6 28,24 8,6
25,76 3,4 28,71 21,3
26,05 4 29,89 8,9
26,63 5,5 30,24 18,7
27,01 3,1 30,88 5,8
27,49 2,8 31,44 7,6
28,10 1,8 33,06 4,5
28,73 10,9 34,36 6
29,42 3,2
30,00 3,7
30,89 2,1
31,34 2,4
31,70 1,1
32,81 1
32,91 0,8
33,48 2
RO 121851 Β1
Caracterizarea suplimentară pentru F-l și F-III 1
Asupra F-l și F-l II au fost efectuate studii de higroscopicitate. Izotermele de sorbție a umezelii pentru F-l și F-l11 sunt prezentate în fig. 4. După expunerea inițială a eșantioanelor 3 la o umiditate relativă de aproximativ 5%, a apărut imediat o creștere de masă datorată umezelii de 1,5% și respectiv 1,7% pentru F-l și respectiv F-l11, echivalentul a aproximativ 0,5 moli 5 de apă. Ambele forme prezintă o sorbție continuă a umezelii în întreaga gamă de umiditate, ceea ce se datorează încorporării moleculelor de apă în structurile cristaline. 7
Diferența în absorbția umezelii pentru cele două forme reflectă cantitatea de apă care poate fi încorporată în cele două structuri cristaline (adică volumul spațiului disponibil în 9 structură care poate primi molecule de apă). Absența histerezisului la izotermele sorbție desorbție pentru F-l și F-III indică faptul că formele cristaline se echilibrează rapid la orice 11 umiditate dată.
Profilele sorbției umezelii pentru F-l și F-III dezvăluie faptul că aceste forme sunt în 13 esență hidrați nestoechiometrici. La umiditatea relativă ambiantă (circa 50%), F-l conține aproximativ 1,7% apă, corespunzând la 0,5 moli de apă, în timp ce F-III a sorbit circa 3,0% 15 apă, ceea ce corespunde cu aproximativ 0,85 moli de apă. Formele brute ale F-l și F-III se echilibrează rapid cu atmosfera, astfel încât conținutul de apă observat prin tehnici analitice 17 este o reflectare a umidității relative din momentul colectării datelor. Diferențele de la lot la lot observate în datele DSC rezultă probabil din faptul că eșantioanele au fost hidratate în 19 procente diferite, datorită condițiilor ambiante diferite de stocare.
Tiparele XRD au fost obținute din eșantioane de F-l și F-III stocate la diferite umidități 21 relative (0,22,50 și 80%). Apare o deplasare graduală a vârfurilor F-III inițiale (la umiditate relativă 0%) la circa 13,8,17,6,18,0,20,5 și 24,0° în 2Θ ca și o ușoară deplasare a vârfurilor 23 mai puțin intense, pe măsură ce umiditatea relativă este crescută. Aceste modificări observate în tiparele XRD ale F-III indică faptul că dimensiunile celulei unitate se modifică, 25 probabil pentru a permite legarea slabă a moleculelor de apă atunci când umiditatea relativă este crescută. Deplasarea continuă a vârfurilor cu umiditatea se corelează bine cu datele de 27 sorbție a umezelii, care arată un câștig gradual de greutate în această gamă de umidități relative, furnizând dovezi pentru formarea hidratului variabil. 29
Un experiment similar a fost efectuat asupra F-l pentru a determina dacă variația umidității relative va avea un efect similar asupra structurii sale (0,25,52, 73 și 95% umidi- 31 tate relativă). Pe măsură ce umiditatea relativă este crescută, se observă o deplasare foarte slabă a vârfurilor de la umiditate relativă 0% la circa 7,7, 18,3, 18,5, 20,5 și 20,8° în 2Θ. 33
Vârfurile de la 7,7, 20,8 și 24,1 par de asemenea să devină ușor mai largi și mai puțin precise la umidități relative mai mari, indicând faptul că apa este sorbită în componentele amorfe 35 (sau plasticizează solidul), în particular la 73 și 95% umiditate relativă. Deplasarea vârfurilor în tiparul XRD al F-l este mai puțin dramatică decât deplasarea vârfurilor observată atunci 37 când F-III a fost expus unor umidități relative diferite. Aceasta sugerează că structura F-l nu suferă aceeași expandare și /sau comprimare ca matricea F-III. 39
F-l și F-III au fost găsite a fi stabile în întregul domeniu de umidități relative, în ciuda abilității F-III de a sorbi aproape de două ori mai multă apă. S-a găsit că cele două forme au 41 dimensiuni ale cristalelor, morfologii, solubili tați în apă și rate de dizolvare comparabile.
A fost realizat un studiu al uscării pentru a monitoriza desolvatarea S-II în funcție de 43 timpul de uscare și de temperatură (vezi fig. 5). Au fost ridicate tipare XRD la diferite momente de timp pe perioada experimentului de desolvatare. Multe vârfuri de difracție din 45 studiul de desolvatare al S-II apar la unghiuri similare cu cele ale F-l, confirmând faptul că structurile cristaline ale S-II și F-l sunt foarte similare. Dispariția vârfurilor de difracție la circa 47 6,8, 7,2 și 14° în 2Θ după o uscare minimă sugerează faptul că aceste reflexii pot fi atribuite planelor cristalografice conținând densitățile parțiale de electroni ale moleculelor de acetat 49 de etil.
RO 121851 Β1
Călirea extinsă în vid la temperatură înaltă a materialului solvatat a furnizat F-l. F-l preparat pe această cale a prezentat la XRD un înalt grad de cristalinitate. în consecință, materialul generat prin cristalizare dintr-o soluție de etanol și acetat de etil, urmată de uscare în vacuum pentru numai câteva ore, așa cum se arată în brevetul european '474, a prezentat o cristalinitate foarte slabă deoarece o asemenea procedură conduce la obținerea de S-ll parțial desolvatat.
F-l și F-III au mai multe avantaje asupra formei de arzoxifen cunoscută în stadiul tehnicii și descrisă anterior. în ceea ce privește arzoxifenul produs prin procedeele prezentate în brevetul european '474, F-l și F-III sunt mai stabile la temperatura ambiantă și sunt deci mai adecvate dezvoltării farmaceutice, adică a dezvoltării de formule de dozare. în plus, F-l și F-III sunt mult mai cristaline decât forma descrisă în '474. Materialele cristaline sunt în general mai puțin higroscopice și mai stabile (adică mai puțin supuse degradării chimice, menținând o potentă ridicată) decât materialele amorfe și sunt, astfel, mai potrivite pentru procesarea compozițiilor. Mai mult, spre deosebire de forma de arzoxifen produsă prin procedurile descrise în '474, care conține în structură acetat de etil și apă, F-l și F-III conțin numai apă.
Metode de caracterizare
Măsurătorile DSC au fost efectuate cu un aparat DSC modulat de tip 2920 de la TA Instrumente, atașat unui Thermal Analyst 3100 și echipat cu un sistem de răcire cu refrigerator. Eșantioanele (3...5 mg) au fost încălzite în containere de aluminiu ondulat, de la 10 la 240°C, cu o rată de încălzire de 2’C/min.
Analizele TGA au fost efectuate cu un analizator termogravimetric 2050 de la TA Instrumente atașat unui Thermal Analyst 3100. Eșantioanele (5...10 mg) au fost încălzite în containere deschise, de la 25 la 250°C, cu o rată de încălzire de 5°C/min.
Tiparele XRD au fost obținute cu un difractometru cu raze X din pulbere de tip Siemens D5000, echipat cu o sursă CuKa (A = 1,54056 A) și un detector solid Kevex, operând la 50 kV și 40 mA. Fiecare eșantion a fost scanat între 4’ și 35° în 26. Eșantioanele au fost lăsate să se echilibreze timp de cel puțin 30 de minute la temperatura dorită și/sau la umiditatea relativă dorită înaintea colectării datelor.
Măsurătorile de higroscopicitate au fost efectuate pentru F-l și F-III utilizând metoda VTI după cum urmează. Fiecare eșantion a fost uscat în vacuum la temperatura de 60°C până când nu a mai fost detectată nici o pierdere de masă, moment în care camera eșantionului a fost adusă la o umiditate relativă de 0%. Izotermele de sorbție a umezelii au fost obținute la temperatura de 25°C utilizând o balanță VTI de umezeală în vacuum, în următoarele condiții: dimensiunea eșantionului 10...15 mg, domeniul de absorbție/desorbție 0...95% umiditate relativă, intervalul pasului 5%, interval de eșantionare 10 minute.
Se dau în continuare trei exemple în legătură și cu figurile care reprezintă:
- fig.1, graficul calorimetriei cu scanare diferențială (DSC)/TGA pentru S-ll;
- fig.2, graficul DSC/TGA pentru F-l;
- fig.3, graficul DSC/TGA pentru F-III;
- fig.4, izotermele sorbției de umezeală pentru F-l și F-III;
- fig. 5, desolvatarea S-ll ca funcție de timpul de uscare și de temperatură.
Următoarele exemple ilustrează procedeele pentru prepararea hidratului care face obiectul prezentei invenții. Exemplele nu intenționează să limiteze domeniul acestor procese, în nici un aspect, și nu trebuie considerate astfel.
Exemplul 1. Preparare F-l din S-ll
Prepararea 1: S-ll Arzoxifen brut (1,58 g de material preparat prin procedura din exemplul 41 în brevetul US 5723474, al cărui conținut este încorporat aici prin referință) a fost pus în suspensie în 28 ml acetat de etil și apoi încălzit sub reflux. A fost adăugat etanol
RO 121851 Β1 (18 ml) pentru a efectua dizolvarea. Soluția a fost menținută la reflux timp de 20 min și apoi 1 i s-a permis să se răcească la temperatura camerei. Precipitatul a fost izolat prin filtrare în vacuum și a fost spălat cu 30 ml acetat de etil pentru a se obține 1,05 g dintr-o materie solidă 3 albă, sub formă de pulbere.
Preparare F-l din S-II 5
S-II a fost uscat într-un cuptor cu vacuum (-25 in. Hg) la temperatura de 100°C timp de 118 h pentru a se obține F-l. 7
Exemplul 2. Procedeu ameliorat de preparare a F-l din arzoxifen
Un flacon de 1 I cu baza sferică și trei gâturi, echipat cu un condensator de reflux și 9 un agitator de suprafață, este încărcat cu 25,0 g arzoxifen, 475 ml tetrahidrofuran și 25 ml apă. Vasul de reacție este apoi echipat pentru distilare simplă. Amestecul de reacție este 11 încălzit la reflux și se îndepărtează 250 ml de distilat. Se oprește pentru scurt timp încălzirea și se adaugă în vas 250 ml de tetrahidrofuran anhidru proaspăt. Distilarea atmosferică este 13 continuată cu îndepărtarea unei cantități adiționale de 250 ml de distilat. Se oprește pentru scurt timp încălzirea, se adaugă 250 ml tetrahidrofuran proaspăt, și se îndepărtează încă 15 250 ml de distilat. Se mai adaugă o cantitate de 250 ml de tetrahidrofuran, iar amestecul de reacție este ținut la reflux. Odată cu această adiție de tetrahidrofuran se formează un 17 precipitat alb. Amestecul de reacție aflat sub agitare este lăsat să se răcească lent timp de trei ore, timp în care precipită materii solide adiționale, iar nămolul atinge temperatura 19 ambiantă. Nămolul cristalin este filtrat și uscat în vacuum la temperatura de 50°C timp de 48 h cu o ușoară suflare de azot. Se obțin 22,50 g (randament 90,0%). Analiza XRD a arătat 21 că spectrul turtei umede și spectrul solidului uscat sunt substanțial identice, și sunt substanțial identice cu cel al F-l preparat anterior. Analiza DSC a obținut un punct de topire de 23 157°C, în timp ce analiza TGA a demonstrat o pierdere de masă de 1,5% între temperatura ambiantă și temperatura de 100°C. Puritatea HPLC calculată ca bază liberă a fost de 88,1 %, 25 față de o potentă teoretică de 92,9%. Analiza HPLC a arătat un nivel total de substanțe asociate de 0,44%.27
Exemplul 3. F-l din [6-benziloxi-3-[4-[2-(piperidin-1-il)etoxi)fenoxi]-2-(4-metoxifenil)J benzo[b]tiofen-(S-oxid)29
Tetrahidrofuran (261 ml), apă (45 ml), acid sulfuric concentrat (6,14 g) și [6-benziloxi3-[4-[2-(piperidin-1 -il)etoxi)fenoxi]-2-(4-metoxifenil)]benzo[b]tiofen-(S-oxid) (potentă HPLC31
99%, nivel total HPLC de substanțe asociate 0,35%) au fost amestecate și agitate până la omogenizare. S-a adăugat 10% Pd/C (5,6 g în suspensie în 22 ml apă) cu o clătire cu 5 ml 33 apă. Nămolul rezultat a fost evacuat și întins cu hidrogen la 60 psi. Temperatura de reacție a fost ajustată la 30’C. După două ore s-a adăugat 10% Pd/C (5,6 g) cu apă (30 ml). 35
Hidogenarea la 60 psi și 30°C a fost continuată timp de încă 22 h. S-au mai adăugat 4,40 g de 10% Pd/C în 30 ml apă și hidrogenarea la 60 psi și 30°C a continuat încă 2,5 h. Catali- 37 zatorul a fost îndepărtat prin filtrare și pH-ul filtratului a fost ajustat la 7,24 cu hidroxid de sodiu 50%. S-a adăugat clorură de sodiu (8,66 g) dizolvată în apă (18 ml), iar soluția bifazică 39 a fost agitată timp de 30 de minute. Fazele au fost separate, iar faza apoasă a fost extrasă cu 50 ml tetrahidrofuran. Fazele organice au fost combinate și concentrate prin distilare 41 atmosferică până la un volum de 50 ml. Concentratului aflat la temperatura de 24°C i s-au adăugat 180 ml de metanol, în decurs de o oră. Nămolul cristalin rezultat a fost agitat timp 43 de 30 de minute la temperatura de 24°C, apoi răcit la 0°C și agitat timp de o oră. Solidele au fost izolate prin filtrare și spălate succesiv cu 39 ml apă și 39 ml metanol, după care a urmat 45 uscarea în vacuum până a doua zi, la temperatura de 50°C. S-au obținut 15,52 g (randament 67,8%). ’ 47
O porție din produsul obținut mai sus (10 g) este recristalizată din tetrahidrofuran și apă așa cum s-a descris în exemplul 2. 49
RO 121851 Β1 în sensul în care este utilizat aici, termenul „cantitate eficientă înseamnă o cantitate de F-l care este capabilă să inhibe condițiile, sau efectele negative ale acestora, descrise aici. Atunci când F-l este co-administrat împreună cu estrogen, progestin, un inhibitor de aromatază, un analog LHRH, sau un inhibitor de AChE, termenul „cantitate eficientă înseamnă de asemenea o cantitate de astfel de agent, capabilă să producă efectul dorit.
Termenii „inhibare și „a inhiba includ înțelesul lor general acceptat, adică prevenirea, împiedicarea, restrângerea, reducerea, ameliorarea, încetinirea, stoparea sau inversarea progresării sau severității unei condiții patologice, sau ale sechelelor acesteia, descrise aici.
Termenii „a preveni, „prevenire, „profilaxie, „profilactic și „previne sunt utilizați aici interschimbabil și se referă la reducerea probabilității ca persoana căreia i se administrează F-l să contracteze sau să dezvolte oricare dintre condițiile patologice, sau sechelele acestora, descrise aici.
Termenii „privat de estrogen și „privare de estrogen se referă la o condiție, fie apărută natural, fie indusă clinic, în care o femeie nu poate produce suficienți hormoni estrogenici endogeni pentru a menține funcțiile dependente de estrogen, adică ciclul menstrual, homeostaza masei osoase, funcțiile neurale, condițiile cardiovasculare etc. Asemenea condiții de privare de estrogen apar din, dar fără a fi limitate la, menopauză și ovarectomie chirurgicală sau chimică, incluzând echivalentul funcțional al acesteia, adică medicația cu un inhibitor de aromatază, agoniști sau antagoniști GnRH, IC1182780 sau similare. Stările de boală asociate cu o stare de privare de estrogen includ, dar nu sunt limitate la: decalcifiere osoasă, osteoporoză, afecțiuni cardiovasculare și hiperlipidimie.
în sensul în care este utilizat aici, termenul „estrogen include compuși steroidali având activitate estrogenică, cum arfi, de exemplu, 17(3-estradiol, estron, estrogen conjugat (Premarin®), estrogen cabalin 17(3-etinil estradiol, și altele asemenea. Un compus preferat bazat pe estrogen este Premarin®, și de asemenea noretilnodrel.
în sensul în care este utilizat aici, termenul „progestin include compuși având activitate progestațională, cum arfi, de exemplu, progesteron, noretilnodrel, nongestrel, acetat de megestrol, noretindronă și altele asemenea. Noretindrona este un agent preferat bazat pe progestin.
în sensul în care este utilizat aici, termenul „inhibitor de aromatază include compuși capabili să inhibe aromatază, de exemplu inhibitori disponibili comercial cum ar fi aminoglutemida (CYTANDREN®), Anastrazole (ARIMIDEX®), Letrozol, (FEMARA®), Formestane (LENATRON®), Exemestane (AROMASIN®) și altele asemenea.
în sensul în care este utilizat aici, termenul „analog LHRH se referă la un analog al hormonului de eliberare a hormonului de luteinizare care inhibă producerea de estrogen la femeia premenopauzală, incluzând, de exemplu, goserlin (ZOLADEX®), leuprolide (LUPRON®) și altele asemenea.
în sensul în care este utilizat aici, termenul „inhibitor de AChE include compuși care inhibă acetilcolinesteraza ca, de exemplu, salicilat de fisostigmină, clorhidrat de tacrină, clorhidrat de donepezil și altele asemenea.
Termenul „reglare ChAT se referă la creșterea activității enzimatice a ChAT, adică îmbunătățirea conversiei colinei la acetilcolina. Această îmbunătățire va include o creștere a eficienței și/sau a ratei de reacție a ChAT și colinei și/sau o creștere a cantității de ChAT prezent la locul acțiunii. Această creștere a cantității de enzimă prezentă poate fi datorată reglării genetice sau altei faze de sinteză din formarea enzimei și/sau unei scăderi în dezactivarea enzimei și metabolism.
RO 121851 Β1
Metode de testare selectate 1
Metoda generală de pregătire a șobolanilor: șobolanii femelă din rasa Sprague Dawley în vârstă de 75 de zile (dacă nu se indică altfel) și având greutatea între 200 și 225 g, 3 au fost obținuți de la Charles River Laboratories (Portage, Ml). Animalele sunt fie ovarectomiate bilateral (OVX) fie supuse unei proceduri chirurgicale Sham la Charles River 5 Laboratories, și apoi livrate după o săptămână. La primire, animalele sunt închise în cuști metalice suspendate în grupuri de 3 sau 4 pe cușcă și au acces adlibitum la hrană (conținut 7 de calciu aproximativ 0,5%) și apă timp de o săptămână. Temperatura camerei este menținută la o valoare de 22,2°C ± 1,7°C cu o umiditate relativă minimă de 40%. Fotoperioada 9 camerei a fost de 12 h lumină și 12 h întuneric.
Regimul de dozare și colectarea de țesuturi: după o perioadă de aclimatizare de o 11 săptămână (deci la două săptămâni după OVX) este inițiată administrarea zilnică de F-l. 17a-etinil estradiol sau F-l sunt administrate oral, dacă nu se specifică altfel, sub formă de 13 suspensie în carboximetilceluloză 1 % sau dizolvate în ciclodextrin 20%. Animalele primesc doza zilnic timp de patru zile. După regimul de administrare, animalele sunt cântărite și 15 anesteziate cu un amestec ketamină: Xilazină (2:1, volum:volum), după care se recoltează un eșantion sanguin prin puncție cardiacă. Animalele sunt apoi sacrificate prin asfixie cu C02, 17 uterul este îndepărtat printr-o incizie mediană și se determină greutatea uterului umed. 17aetinil estradiolul este obținut de la Sigma Chemical Co., St. Louis, MO. 19
Afecțiuni cardiovasculare/hiperlipidimie
Eșantioanele de sânge recoltate anterior au fost lăsate timp de două ore la tempe- 21 ratura camerei, iar serul este obținut prin centrifugare timp de 10 minute la 3000 rpm. Colesterolul din ser este determinat utilizând un test de colesterol de înaltă performanță 23 BoehringerMannheim Diagnostics. Colesterolul este în scurt timp oxidat la colest-4-en-3-onă și peroxid de hidrogen. Peroxidul de hidrogen este apoi pus în reacție cu fenol și 4- 25 aminofenazonă în prezența peroxidazei pentru a produce o p-chinonă imină colorată, care este citită spectrofotometric la 500 nm. Concentrația de colesterol este apoi calculată după 27 o curbă standard. întregul test este automatizat utilizând o stație automată Biomek.
Testul de peroxidază uterină eosinofil (EPO) 29
Uterele recoltate anterior sunt păstrate la temperatura de 4°C până în momentul analizei enzimatice. Uterele sunt apoi omogenizate în 50 de volume de buffer Tris 50 mM 31 (pH 8,0) conținând 0,005% Triton X-100. La adăugarea de peroxid de hidrogen 0,01% și ofenilendiamină 10 mM (concentrație finală) în buffer Tris, creșterea de absorbție este 33 monitorizată timp de un minut la 450 nm. Prezența eosonofilelor în uter este o indicație a activității estrogenice a compusului. Viteza maximă într-un interval de 15 s este determinată 35 în porțiunea inițială, liniară, a curbei de reacție.
Metoda de testare a inhibării decalcifierii oaselor (osteoporozei) 37
După metoda generală de pregătire descrisă mai sus, șobolanii sunt tratați zilnic timp de 35 de zile (câte 6 șobolani în fiecare grup tratat) și apoi sacrificați prin asfixiere cu bioxid 39 de carbon în cea de-a treizeci și șasea zi. Perioada de timp de 35 de zile este suficientă pentru a permite reducerea maximă a densității oaselor, măsurată prin metoda descrisă aici. 41 După sacrificare, uterul este recoltat, sunt îndepărtate țesuturile externe, iar conținutul fluid este eliminat înaintea determinării greutății umede în scopul confirmării deficienței de 43 estrogen asociate cu ovarectomia completă. Ca răspuns la ovarectomie, greutatea uterină este de obicei redusă cu 75%. Uterele sunt apoi plasate în formalină tamponată neutră 10% 45 pentru a permite analizele histologice ulterioare.
RO 121851 Β1
Femurele din dreapta sunt excizate, iar imaginile digitizate de raze X sunt generate și analizate cu ajutorul unui program de analiză de imagine (imagine NIH) la metafiza distală. Aspectul proximal al tibiei de la aceste animale este de asemenea scanat prin tomografie computerizată cantitativă. în conformitate cu procedurile de mai sus, sunt administrate oral F-l sau etinil estradiol (EE2)în hidroxipropil (3-ciclodextrin 20% pentru a testa animalele. F-l este de asemenea util în combinație cu estrogen sau progestin.
Testul de proliferare MCF-7
Celule de adenocarcinom mamar MCF-7 (ATCC HTB 22) sunt menținute în MEM (mediu esențial minim, fenol limpede (red-free), Sigma, St. Louis, MO) suplimentat cu 10% serfetal de bovine (FBS) (VA/), L-glutamină (2 mM), piruvat de sodiu (1 mM), HEPES {acid (N-[2-hidroxietil]piperazin-N'-[2-etansulfonic] 10 mM}, aminoacizi non-esențiali și insulina bovină (1 |ig/ml) (mediu de menținere). Cu zece zile înainte de test, celulele MCF-7 sunt mutate în mediu de menținere suplimentat cu 10% serfetal bovin din cărbune acoperit cu dextran (mediu de testare DCC-FBS) în loc de 10% FBS pentru a reduce rezervele interne de steroizi. Celulele MCF-7 sunt îndepărtate din flacoanele de menținere utilizând mediu de disociere celulară (HBSS lipsit de Ca++/Mg++ (fenol red-free) suplimentat cu HEPES 10mM și EDTA 2 mM). Celulele sunt spălate de două ori cu mediu de testare și ajustate la o concentrație de 80.000 celule/ml. Aproximativ 100 ml (8.000 celule) sunt plasați în godeuri de microcultură cu baza plată (Costar 3596) și incubați la temperatura de 37°C într-un incubator umidificat cu 5% C02 timp de 48 h pentru a permite celulelor aderarea și echilibrarea după transfer. în mediul de testare sunt preparate serii de diluții ale medicamentelor sau DMSO ca diluant de control, iar 50 ml sunt transferați în microculturi triplicate, la care se adaugă încă 50 ml mediu de testare pentru un volum final de 200 ml. După o perioadă adițională de timp de 48 de ore la temperatura de 37°C într-un incubator umidificat cu 5% CO2, microculturile sunt pulsate cu timidină tritiată (1 pCi/godeu) timp de 4 h. Culturile sunt terminate prin înghețare la temperatura de -70’C timp de 24 h, după care urmează dezghețarea și colectarea microculturilor utilizând un colector semiautomatic de celule Skatron. Eșantioanele sunt numărate prin scintilație în lichid utilizând un numărător (3 Wallac BetaPlace.
Inhibarea tumorilor mamare induse de DMBA
Tumori mamare dependente de estrogen sunt produse la șobolanii femelă SpragueDawley care sunt achiziționați de la Harlan Industries, Indianapolis, Indiana. La vârsta de aproximativ 55 de zile, șobolanii primesc pe cale orală o singură doză de 20 mg de 7,12dimetilbenz[a]antracen (DMBA). La aproximativ șase săptămâni după administrarea DMBA, glandele mamare sunt palpate la intervale săptămânale pentru a depista apariția tumorilor. Ori de câte ori apar una sau mai multe tumori, cel mai lung și cel mai scurt diametru ale fiecărei tumori sunt măsurate cu ajutorul unui calibru metric, măsurătorile sunt înregistrate, iar animalul este selectat pentru experimentare. Se încearcă distribuirea uniformă a diverselor dimensiuni ale tumorilor în grupurile tratate și cele de control, astfel încât tumorile de dimensiune medie să fie distribuite echivalent între grupurile de test. Grupurile de control și cele de test pentru fiecare experiment conțin 5 până la 9 animale.
F-l este administrat fie prin injectare intraperitoneală în acacia 2%, fie oral. Compușii administrați oral sunt fie dizolvați, fie puși în suspensie în 0,2 ml ulei de porumb. Fiecare tratament, incluzând tratamentele de control cu acacia sau ulei de porumb, este administrat o dată pe zi pentru fiecare animal testat. După măsurarea inițială a tumorilor și selectarea animalelor de test, tumorile sunt măsurate în fiecare săptămână prin metoda menționată anterior. Tratamentul și măsurătorile animalelor continuă timp de 3 până la 5 săptămâni, după care sunt determinate suprafețele finale ale tumorilor. Pentru fiecare compus și tratament de control, se determină modificările apărute în suprafața medie a tumorii.
RO 121851 Β1
Metode de testare a fibrozei uterine 1
Testul 1: Se administrează F-l unui număr cuprins între 3 și 20 de femei având fibroză uterină. Cantitatea de compus administrat este de la 0,1 și până la 1000 mg/zi, iar perioada 3 de administrare este de 3 luni. Femeile sunt observate în timpul perioadei de administrare, și până la 3 luni după întreruperea administrării, pentru a se constata efectele asupra fibrozei 5 uterine.
Testul 2: Este utilizată aceeași procedură ca și în cazul estului 1, cu excepția 7 perioadei de administrare, care este de 6 luni.
Testul 3: Este utilizată aceeași procedură ca și în cazul estului 1, cu excepția 9 perioadei de administrare, care este de 1 an.
Testul 4: Se utilizează stimularea prelungită a estrogenului pentru a induce 11 leiomyomata la femele mature de porci guinea. Animalelor li se administrează estradiol de 3 - 5 ori pe săptămână prin injectare, timp de 2 până la 4 luni sau până când apare 13 tumoarea. Tratamentul, constând din F-l sau un vehicul, este administrat zilnic timp de 3 până la 16 săptămâni și apoi animalele sunt sacrificate iar uterele sunt colectate și analizate 15 pentru a se studia regresia tumorilor.
Testul 5: Țesuturi de leiomyomas uman sunt implantate în cavitatea peritoneală 17 și/sau myometrium uterin al femelelor mature sexual, castrate, de șoareci. Este furnizat estrogen exogen pentru a induce creșterea țesuturilor implantate. în unele cazuri, celulele 19 tumorale recoltate cunt cultivate in vitro înainte de implantare. Tratamentul constând din F-l sau un vehicul este furnizat prin spălare gastrică zilnică, timp de 3 până la 16 săptămâni, 21 după care implanturile sunt extirpate și măsurate pentru creștere sau regresie. în momentul sacrificării, uterul este colectat pentru a se testa starea organului. 23
Testul 6: Țesuturi de tumori fibroide uterine umane sunt recoltate și păstrate, in vitro, cu rol de culturi primare netransformate. Specimenele obținute chirurgical sunt trecute 25 printr-o sită sau țesătură sterilă, sau sunt separate printr-o altă metodă de țesutul înconjurător, pentru a produce o suspensie de celule singulare. Celulele sunt păstrate într-un 27 mediu conținând 10% ser și antibiotic. Sunt determinate ratele de creștere în prezența sau absența estrogenului. Celulele sunt testate pentru abilitatea lor de a produce componenta 29 complementară C3 și răspunsul la factorii de creștere și hormonul de creștere. Culturile in vitro sunt testate pentru răspunsul proliferativ după tratamentul cu progestine, GnRH, F-l și 31 vehicul. Nivelele de receptori ai hormonului steroid sunt testate săptămânal pentru a se determina care caracteristici celulare importante sunt menținute in vitro. Sunt utilizate 33 țesuturile de la 5 - 25 pacienți.
Testul 7: Abilitatea F-l de a inhiba proliferarea stimulată de estrogen a liniilor celulare 35 ELT derivate din leiomyomas este măsurată așa cum se arată în Fuchs-Young, et al., „Inhibition of Estrogen-Stimulated Growth of Uterine Leiomyomas by Selective Estrogen 37 Receptor Modulators”, Mol. Car., 17(3): 151-159 (1996), al cărei conținut este încorporat aici prin referință. 39
Metode de testare a endometriozei
Testul 1: Ca animale de test sunt utilizate 12 până la 30 femele de șobolan adulte, 41 din rasa CD. Acestea sunt împărțite în trei grupuri, fiecare grup având un număr egal de membri. Este monitorizat ciclul estral al tuturor animalelor. în ziua proestratiei, se efectuează 43 intervenția chirurgicală asupra fiecărei femele. Femelelor din fiecare grup li se îndepărtează cornul uterin stâng, care este secționat în pătrate mici, iar aceste pătrate sunt suturate în 45 mod liberîn diverse locuri adiacente fluxului sanguin mezenteric. în plus, femelelor din grupul nr. 2 li se îndepărtează ovarele. în ziua care urmează intervenției chirurgicale, animalelor din 47 grupurile 1 și 2 li se administrează injecții intraperitoneale cu apă timp de 14 zile, în timp ce
RO 121851 Β1 animalelor din grupul nr. 3 li se administrează injecții intraperitoneale cu 1,0 mg de F-l per kilogram de masă corporală, pentru aceeași durată de timp. După 14 zile de tratament, fiecare femelă este sacrificată și implanturile endometriale, glandele adrenale, uterul rămas și ovarele, dacă este cazul, sunt îndepărtate și preparate pentru examinare histologică. Ovarele și glandele adrenale sunt cântărite.
Testul 2: Ca animale de test sunt utilizate 12 până la 30 femele de șobolan adulte, din rasa CD. Acestea sunt împărțite în două grupuri egale. Este monitorizat ciclul estral al tuturor animalelor. în ziua proestratiei, se efectuează intervenția chirurgicală asupra fiecărei femele. Femelelor din fiecare grup li se îndepărtează cornul uterin stâng, care este secționat în pătrate mici, iar aceste pătrate sunt suturate în mod liber în diverse locuri adiacente fluxului sanguin mezenteric. La aproximativ 50 de zile după efectuarea intervenției chirurgicale, animalelor din grupul nr. 1 li se administrează injecții intraperitoneale cu apă timp de 21 de zile, în timp ce animalelor din grupul nr. 2 li se administrează injecții intraperitoneale cu 1,0 mg de F-l per kilogram de masă corporală, pentru aceeași durată de timp. După 21 de zile de tratament, fiecare femelă este sacrificată, iar implanturile endometriale și glandele adrenale sunt îndepărtate și cântărite. Implanturile sunt măsurate ca o indicație a creșterii. Ciclurile estrale sunt monitorizate.
Testul 3: Autogrefe de țesut endometrial sunt utilizate pentru a induce endome-trioză la șobolani și/sau iepuri. Animalele femelă aflate la maturitate reproductivă sunt supuse histerectomiei bilaterale, iar estrogenul este furnizat exogen astfel încât să se asigure un nivel specific și constant al hormonului. Țesutul endometrial propriu este implantat în peritoneul a 5 - 150 de animale și apoi se furnizează estrogen pentru a induce creșterea țesuturilor implantate. Tratamentul constând dintr-un compus descris de către prezenta invenție este furnizat prin spălare gastrică zilnică timp de 3 până la 16 săptămâni, după care implanturile sunt îndepărtate și măsurate pentru determinarea creșterii sau regresiei. în momentul sacrificării, cornul intact al uterului este recoltat pentru a se testa starea endometrium-ului.
Testul 4: Țesut provenit de la leziuni endometriale umane este implantat în peritoneul de șoarece femelă matură, castrată. Este furnizat estrogen exogen pentru a se induce creșterea țesutului implantat. în unele cazuri, celulele endometriale recoltate sunt cultivate in vitro înainte de implantare. Tratamentul constând în F-l este asigurat prin spălare gastrică zilnică timp de 3 până la 16 săptămâni, după care implanturile sunt îndepărtate și măsurate pentru determinarea creșterii sau regresiei. în momentul sacrificării, uterul este recoltat pentru testarea stării endometrium-ului intact.
Testul 5: Țesut provenit de la leziuni endometriale umane este recoltat și păstrat in vitro cu rolul de cultură primară netransformată. Specimenele obținute chirurgical sunt trecute printr-o sită sau țesătură sterilă, sau sunt separate printr-o altă metodă de țesutul înconjurător, pentru a produce o suspensie de celule singulare. Celulele sunt păstrate într-un mediu conținând 10% ser și antibiotic. Sunt determinate ratele de creștere în prezența sau absența estrogenului. Celulele sunt testate pentru abilitatea lor de a produce componenta complementară C3 și răspunsul la factorii de creștere și hormonul de creștere. Culturile in vitro sunt testate pentru răspunsul proliferativ după tratamentul cu progestine, GnRH, F-l și vehicul. Nivelele de receptori ai hormonului steroid sunt testate săptămânal pentru a se determina care caracteristici celulare importante sunt menținute in vitro. Sunt utilizate țesuturile de la 5 - 25 pacienți.
RO 121851 Β1
Afecțiunile sistemului nervos central, inclusiv maladia lui Alzheimer 1
Estrogenii, cum ar fi 17(3-estradiol, reglează transcripția genelor prin legarea la receptorii de estrogen (ER) care rezidă în citoplasmă anumitor populații celulare. Activarea 3 ligandului ER este o necesitate preliminară pentru transportul nuclear al complexului în care legarea la o secvență de consens ADN palindromică cu 13 perechi de baze (element de 5 răspuns la estrogen, sau ERE) începe asamblarea unui aparat transcripțional care culminează cu activarea genelor țintă adecvate. Au fost identificate o varietate de gene care sunt 7 reglate prin intermediul estrogenului. Acestea includ proteinele citoscheletale, enzimele neurotransmițătoare biosintetice și metabolice și receptorii, ca și alți hormoni și neuropeptide. 9 ERE a fost identificat în multe gene care reacționează la estrogen, incluzând vitelogenina, c-fos, prolactina și hormonul luteinizant. 11 în ceea ce privește importanța pentru sistemul nervos central, secvențe de tip ERE au fost identificate în p75ngr și trkA, ambele servind ca molecule de semnalizare pentru 13 neurotrofine: factorul de creștere a nervilor (NGF), factorul de creștere a nervilor derivat din creier (BDNGF) și neurotrofina-3. 15
S-a constatat că BDNGF, ca și NGF, ajută supraviețuirea neuronilor colinergici în cultură. S-a postulat că dacă interacțiunea dintre neurotrofine și estrogeni este importantă 17 pentru dezvoltarea și supraviețuirea neuronilor bazali ai creierului anterior (care degenerează în cazul maladiei lui Alzheimer), atunci condițiile clinice în care există o deficiență de estro- 19 gen (cum ar fi după menopauză) pot contribui la pierderea acestor neuroni.
Experimentul următor este efectuat asupra șobolanilor ovarectomiați (pregătiți așa 21 cum s-a arătat anterior) pentru a determina similaritățile și/sau diferențele dintre F-l și estrogen în ceea ce privește exprimarea genelor în diferite regiuni ale creierului. Șobolanilor în 23 vârstă de șase săptămâni li s-a administrat zilnic o injecție subcutanată cu benzoat de estradiol (0,03 mg/kg), F-l sau vehicul (control). După cinci săptămâni de tratament, anima- 25 lele au fost sacrificate, iar creierele lor au fost îndepărtate, hipocampurile fiind colectate prin microdisecție. Hipocampurile sunt înghețate rapid în azot lichid și stocate la -70°C. ARN-ul 27 întreg este preparat din țesutul adunat de la grupurile care au primit tratamentul adecvat, respectiv de la grupurile de control și apoi este transcris invers utilizând un primer oligo- 29 nucleotidă 3' care este selectat pentru populațiile specifice mARN (poli-A+). Reacțiile în lanț ale polimerazei (POR) sunt realizate într-un amestec constând din: oligonucleotide 5' alea- 31 toare (cu lungimea de 10 perechi de baze; un total de 150), tampon de reacție, polimerază Taq și un 32PdTCP. 33
După40 de reprize de amplificare, produsele de reacție suntfracționate după dimensiune într-un gel de 6% uree-TBE, uscate și expuse la un film în raze X. Tiparele de afișare 35 rezultate pentru mARN sunt comparate între grupele de tratament.
Utilizarea F-l în combinație cu estrogen 37
Femeile aflate în preajma sau după menopauză se supun adesea terapiei de înlocuire a hormonilor (HRT) pentru a combate consecințele negative asociate cu căderea în 39 circulația estrogenului endogen, adică pentru tratarea „cărnii fierbinți. Totuși, HRT a fost asociată cu un risc crescut de apariție a diferite cancere incluzând cancerul uterin și mamar. 41 F-l poate fi utilizat în combinație cu HRT pentru a inhiba aceste riscuri.
Utilizarea F-l în combinație cu un inhibitor de aromatază 43
Prin definiție, ovarele unei femei aflate la menopauză nu funcționează. Singura sa sursă de estrogen este prin conversia androgenilor adrenali la estrogen cu ajutorul enzimei 45 aromatază, care se găsește în țesuturile periferice (inclusiv grăsime, mușchi și chiar în tumorile mamare). Astfel, medicamentele care inhibă aromatază (inhibitorii de aromatază) 47 sărăcesc organismul femeii aflate la menopauză de estrogenul din circulație. Lipsirea de
RO 121851 Β1 estrogen datorată inhibitorilor de aromatază este o opțiune importantă de tratament pentru pacientele cu cancer mamar metastatic. Pe durata terapiei cu inhibitor de aromatază, lipsa estrogenului din circulație poate cauza efecte secundare negative neintenționate, de exemplu asupra nivelelor lipidelor în ser. F-l poate fi utilizat pentru inhibarea acestor efecte negative.
Utilizarea F-l în combinație cu un analog LHRH
Expunerea continuă la un analog LHRH (hormonul de eliberare a hormonului de luteinizare) inhibă producerea de estrogen la femeia premenopauzală prin desensibilizarea glandei pituitare, care nu mai stimulează ovarele să producă estrogen. Efectul clinic este o „histerectomie medicală care este reversibilă prin oprirea analogului LHRH). Pe durata terapiei cu un analog LHRH, lipsa estrogenului din circulație poate cauza efecte secundare negative neintenționate, de exemplu asupra nivelelor lipidelor în ser. F-l poate fi utilizat pentru inhibarea acestor efecte negative.
Creșterea nivelelor de acetilcolină
Se cunoaște faptul că pacienții suferind de maladia lui Alzheimer prezintă un nivel semnificativ mai mic al neuronilor colinergici din hipocampus decât cei care nu suferă de această maladie. Pierderea progresivă a acestor neuroni colinergici pare să se reflecte în pierderea progresivă a memoriei și a funcțiilor cognitive ale acestor pacienți.
Se cunoaște că o cauză a declinului acestor neuroni este pierderea sau scăderea funcției neurotransmițătorului acetilcolină.
Nivelul acetilcolinei într-un neuron este determinat în mod fundamental de echilibrul care are loc între biosinteza și biodegradarea sa. Enzima colinacetiltransferază (ChAT) este în primul rând responsabilă pentru sinteză, iar acetilcolinesteraza (AChE) pentru degradarea sa.
în scopul determinării efectului F-l asupra nivelului ChAT, se realizează următorul experiment: După procedura generală de pregătire a șobolanilor, descrisă anterior, 40 de șobolani sunt tratați zilnic prin injecții subcutanate sau gavaj oral cu F-l, în doză de 3 mg/kg/zi într-un vehicul conținând 10% ciclodextrină, benzoat de estradiol în doză de 0,03 sau 0,3 mg/kg/zi, sau vehicul de control. Animalele sunt tratate timp de 3 sau 10 zile. Se utilizează 20 de animale pentru fiecare regim de dozare. La intervale de timp adecvate, animalele sunt sacrificate și creierele lor sunt disecate. Porțiunile particulare ale creierelor sunt omogenizate și supuse testării. Omogenații obținuți din hipocampus și din cortexul frontal sunt procesați și se realizează determinarea activității ChAT prin testarea cu radiomarcare a biosintezei acetilcolinei. Această procedură poate fi găsită în Schoepp et al., J. Neural. Transmiss., 78:183-193,1989, al cărui conținut este încorporat aici prin referință.
După cum este de așteptat, la animalele OVX nivelele ChAT sunt reduse cu mai mult de 50% (p < 0,001) în comparație cu animalele de control cu operație simulată.
într-un alt aspect al prezentei invenții, F-l este utilizat în combinație cu un inhibitor de AChE. Utilizarea unui inhibitor de AChE crește nivelele de acetilcolină prin blocarea degradării sale datorate inhibării AChE.
Hiperplazia prostatică benignă (BPH)
Pentru amănunte privind legătura dintre acțiunea estrogenului și tratamentul BPH și al carcinomului de prostată, a se vedea cererea PCT nr. WO 98/07274, cu data de publicare internațională: 15 octombrie 1998.
în experimentele descrise în continuare, este evaluată abilitatea F-l de a se lega la receptorii de estrogen pentru câteva linii celulare de cancer prostatic uman.
RO 121851 Β1
Uzații liniilor celulare de cancer prostatic uman LNCaP, DU-45 și PC-3 sunt pregătiți 1 într-un mediu TEG conținând 50 nM Tris*HCI pH 7,4,1,5 mM acid etilendiamină tetraacetic (EDTA), 0,4 M KCI, 10% glicerol, 0,5 mM 2-ME și 10 mM molibdat de sodiu, conținând în 3 plus inhibitorii de protează pepstatin (1 mg/ml), leupeptin (2 mg/ml), aprotinin (5 mg/ml) și fluorură de fenilmetilsulfonil (PSF, 0,1 mM) (TEGP). 5
Uzații celulari sunt centrifugați, iar granulele sunt repuse în suspensie în TEGP rece (1 ml TEGP/100 mg granule) și supuse unui tratament sonic timp de 30 de secunde (factor 7 de umplere 70%, ieșire 1,8) într-un sonificator Branson Model 450. Lizații sunt granulați prin centrifugare la 10.000 x G timp de 15 min la temperatura de 4°C, după care supematanții 9 sunt separați și fie sunt folosiți imediat, fie sunt stocați la -70°C.
Testul competitiv de legare: tamponul de legare este TEG în care cei 0,4 M KCI sunt 11 înlocuiți cu 50 mM NaCI și în care se adaugă în plus 1 mg/ml albumină (TEGO). F-l este diluat la 20 nM în TEGO, din care sunt preparate de trei ori diluții seriale. Testele sunt efec- 13 tuate în microplatouri de polipropilenă cu baza rotundă, în microgodeuri triplicate. Fiecare godeu primește 35 ml de 17P-estradiol tritiat (0,5 nM, activitate specifică 60,1 Ci/mmol, 15 DuPont- New England Nuclear, Boston, MA) și 35 ml compus de test competitor rece (0,1 nM - 5 mM) sau TEGO și, după incubarea timp de 5 min la temperatura de 4°C cu 17 agitare, 70 ml de lizat de linie celulară MCF-7.
Platourile sunt incubate timp de 24 h la temperatura de 4°C după care se adaugă 19 ml de cărbune acoperit cu dextran (DCC) în fiecare godeu și se agită viguros timp de 8 min la temperatura de 4°C. Platourile sunt apoi centrifugate la 1500 x G timp de 10 min la 21 temperatura de 4°C. Supernatantul este recoltat din fiecare godeu într-un microplatou flexibil din polistiren pentru efectuarea numărătorii de scintilații într-un numărător Wallac Microbeta 23 Model 1450. Radioactivitatea este exprimată în dezintegrări pe minut (DPM) după corecția de eficiență a numărării (35...40%) și de fundal. Controale suplimentare sunt numărul total 25 și numărul total + DCC pentru a defini limita minimă a numărătorii DCC extractibil. Rezultatele acestor teste competitive de legare sunt exprimate ca procent mediu de legare 27 (% legare) +/-deviația standard utilizând formula:
% legam = —+ DCC χ ioo compus test ~ DPMnurn£. țoțsj + DCC 31
Prevenirea cancerului mamar 33
Prezenta invenție se referă de asemenea la administrarea F-l unui primitor care prezintă riscul dezvoltării de novo a cancerului mamar. Termenul „de novo așa cum este 35 utilizat aici, înseamnă lipsa transformării sau metamorfozei celulelor mamare normale în celule canceroase sau maligne în prima instanță. O asemenea transformare poate apărea 37 în etape, în aceleași celule sau în celule fiice printr-un proces evolutiv, sau poate apărea printr-un singur eveniment central. Acest proces de novo este în contrast cu metastaza, 39 colonizarea sau împrăștierea celulelor deja transformate sau maligne de la locul tumorii primare către noi locații. 41
O persoană care nu prezintă un risc particular de dezvoltare a cancerului mamar este una care poate dezvolta cancer mamar de novo, nu are dovezi sau suspiciuni asupra 43 potențialului de apariție a afecțiunii peste riscul normal, și căreia nu i s-a pus niciodată diagnosticul respectiv. Cel mai mare factor de risc care contribuie la dezvoltarea carcino- 45 mului mamar este un istoric personal al existenței acestei boli, sau o apariție timpurie a bolii, chiar dacă este în remisie fără dovezi ale prezenței sale. Alt factor de risc este apariția bolii 47 în istoricul familiei.
RO 121851 Β1
Inducerea de tumori mamare la șobolani prin administrarea de N-nitrozo-N-metiluree carcinogenă este un model animal acceptat pentru studiul cancerului mamar și a fost găsit ca adecvat pentru analiza efectului agenților chemopreventivi.
în două studii separate, șobolanilor femelă Sprague-Dawley în vârstă de 55 de zile le este administrată intravenos (Studiul 1) sau intraperitoneal (Studiul 2) o doză de 50 mg de N-nitrozo-N-metiluree per kilogram de masă corporală cu o săptămână înainte de hrănirea ad libitum cu o dietă în care au fost introduse cantități variabile de F-l, bază (Z)-2-[4(1,2-difenil-1-butenil)fenoxi]-N,N-dimetiletanamină (bază ta-moxifen) sau substanță de control. în studiul nr. 1, dozele dietare de 60 mg/kg de dietă și 20 mg/kg de dietă se transformă grosier în doze comparabile de 3 și 1 mg/kg de greutate corporală pentru animalele de test. în studiul nr. 2, dozele dietare de 20, 6, 2 și 0,6 mg/kg de dietă se transformă grosier în doze comparabile de 1, 0,3, 0,1 și 0,03 mg/kg de greutate corporală pentru animalele de test.
Șobolanii sunt ținuți sub observație pentru dovezi de toxicitate și sunt cântăriți și palpați o dată pe săptămână pentru constatarea formării de tumori. Animalele sunt sacrificate după 13 săptămâni (Studiul nr. 1) sau 18 săptămâni (Studiul nr. 2) iar tumorile sunt confirmate și cântărite la autopsie.
Arzoxifenul conform invenției poate fi condiționat în compoziții farmaceutice.
Termenul „farmaceutic, atunci când este utilizat aici ca adjectiv înseamnă substanțial nedăunător pentru mamiferul primitor. Prin „compoziție farmaceutică se înțelege că purtătorul, diluantul, excipienții și ingredientul sau ingredienții activi trebuie să fie compatibili cu ceilalți ingredienți ai compoziției și să nu fie dăunători pentru primitorul acesteia.F-l este formulat preferabil înainte de administrare. Alegerea compoziției trebuie să fie decisă de către medicul curant, luând în considerare aceiași factori implicați în determinarea cantității eficiente.
Totalul de ingredienți activi în asemenea compoziții reprezintă între 0,1% și 99,9% din greutatea compoziții. Preferabil, o compoziție nu conține mai mult de doi ingredienți activi. Aceasta înseamnă că se preferă compoziția F-l împreună cu un ingredient activ secundar, selectat dintre estrogen, progestin, inhibitor de aromatază, analog LHRH și inhibitor AChE. Cele mai preferate compoziții sunt acelea în care F-l este singurul ingredient activ. Compozițiile farmaceutice descrise de către prezenta invenție sunt preparate prin proceduri cunoscute în stadiul tehnicii utilizând ingredienți binecunoscuți și disponibili cu ușurință. De exemplu, F-l, fie singur, fie în combinație cu un compus estrogen, progestin, inhibitor de aromatază, analog LHRH și inhibitor AChE, este formulat împreună cu excipienți, diluanți sau purtători comuni și format în tablete, capsule, suspensii, soluții, injectabile, aerosoli, pulberi și așa mai departe.
Compozițiile farmaceutice descrise de către prezenta invenție pentru administrare parenterală constau din soluții apoase sau ne-apoase, dispersii, suspensii sau emulsii sterile, ca și din pulberi sterile care se constituie imediat înainte de utilizare în soluții sau suspensii sterile. Exemple de purtători, diluanți, solvenți sau vehicule sterile apoase sau ne-apoase includ apă, soluție salină fiziologică, etanol, polioli (cum ar fi glicerol, propilenglicol, poli (etilenglicol) și altele asemenea), și amestecuri adecvate ale acestora, uleiuri vegetale (cum ar fi uleiul de măsline), și esteri organici injectabili cum ar fi oleatul de etil. Fluiditatea necesară este menținută, de exemplu, prin utilizarea materialelor de acoperire cum ar fi lecitina, prin menținerea dimensiunilor corespunzătoare ale particulelor în cazul dispersiilor și suspensiilor, și prin utilizarea surfactanților.
RO 121851 Β1
Compozițiile parenterale pot conține de asemenea adjuvanți cum ar fi conservanți, 1 agenți de umectare, agenți de emulsificare și agenți de dispersie. Prevenirea acțiunii microorganismelor este asigurată prin includerea de agenți antibacteriali și antifungici, ca de 3 exemplu paraben, clorobutanol, acid fenol sorbicși altele asemenea. Este de asemenea de dorit să se includă agenți izotonici cum ar fi zahăr, clorură de sodiu și altele asemenea. 5 Absorbția prelungită a compozițiilor injectabile poate fi realizată prin includerea de agenți care întârzie absorbția, cum ar fi monostearatul de aluminiu și gelatina. 7 în unele cazuri, în scopul de a prelungi efectul medicamentului, este de dorit să se încetinească absorbția medicamentului după injectarea subcutanată sau intramusculară. 9 Aceasta se poate realiza prin utilizarea suspensiilor lichide de material cristalin cu solubilitate redusă în apă sau prin dizolvarea sau punerea în suspensie a medicamentului într-un vehicul 11 de tip ulei. în cazul injectării subcutanate sau intramusculare a unei suspensii conținând o formă a medicamentului cu solubilitate redusă în apă, rata de absorbție a medicamentului 13 depinde de rata sa de dizolvare.
Compozițiile de F-l injectabile de tip „depozit sunt realizate prin formarea de matrice 15 microîncapsulate de medicament în polimeri biodegradabili cum ar fi poli(acid lactic), poli(acid glicolic), copolimeri ai acidului lactic sau glicolic, poli(ortoesteri) și poli(anhidride), 17 aceste materiale fiind descrise în tehnică. Depinzând de raportul dintre medicament și polimer și de caracteristicile polimerului particular utilizat, rata de eliberare a medicamentului 19 poate fi controlată.
Compozițiile injectabile sunt sterilizate, de exemplu, prin filtrarea prin filtre de retenție21 a bacteriilor sau prin pre-sterilizarea componentelor amestecului înainte de introducerea lor în amestec, fie în momentul fabricației, fie chiar înainte de administrare (ca în exemplul 23 utilizării unei seringi cu cameră dublă).
Formele de dozare solide pentru administrare orală includ capsule, tablete, pilule,25 pulberi și granule. în asemenea forme de dozare solide, F-l este amestecat cu cel puțin un purtător farmaceutic inert cum ar fi citrat de sodiu sau fosfat de calciu și/sau (a) un material27 de umplutură sau de extindere cum ar fi amidonuri, zaharuri incluzând lactoză și glucoza, manitol și acid silicic, (b) agenți de legătură cum ar fi carboximetil celuloză și alți derivați 29 celulozici, alginați, gelatină, poli(vinilpirolidină), zaharoză sau acacia, (c) umectanți precum glicerolul, (d) agenți de dezintegrare precum agar-agar, carbonat de calciu, bicarbonat de 31 sodiu, amidon de cartofi sau de tapioca, acid alginic, silicați și carbonat de sodiu, (e) agenți de înmuiere cum ar fi glicerol, (f) agenți de întârziere a soluției cum ar fi parafina, (g) agenți 33 de accelerare a absorbției cum arfi compușii cuaternari de amoniu, (h) agenți de umezire cum ar fi alcool cetilic și monostearat de glicerina, (i) absorbanți precum caolinul sau cleiul 35 de bentonită și (j) lubrifianți cum ar fi talc, stearat de calciu, stearat de magneziu, poli(etilenglicoli) solizi, laurii sulfat de sodiu, și amestecuri ale acestora. în cazul capsulelor, tabletelor 37 și pilulelor, forma de dozare poate conține de asemenea agenți tampon.
Compozițiile solide de tip similar pot de asemenea consta în capsule gelatinoase moi 39 sau dure umplute, utilizând excipienți cum ar fi lactoza, ca și poli(etilenglicoli) cu masă moleculară mare sau altele asemenea. 41
Formele de dozare solide cum arfi tabletele, drajeurile, capsulele, pilulele și granulele pot fi de asemenea preparate cu acoperiri sau cochilii cum ar fi acoperiri enterice sau alte 43 acoperiri bine cunoscute în tehnica de compoziție farmaceutică. Acoperirile pot conține agenți de opacizare sau agenți care eliberează ingredientul sau ingredienții activi într-o 45 anumită porțiune a tractului digestiv, cum arfi, de exemplu, acoperiri solubile în acizi pentru eliberarea ingredientului sau ingredienților activi în stomac, sau acoperiri solubile în baze 47 pentru eliberarea ingredientului sau ingredienților activi în tractul intestinal.
RO 121851 Β1
Ingredientul sau ingredienții activi pot de asemenea să fie microîncapsulați într-o acoperire cu eliberare susținută, microcapsulele făcând parte din compozițiea unei pilule sau a unei capsule.
Formele de dozare lichide pentru aministrarea orală a F-l includ soluții, emulsii, suspensii, siropuri și elixire. Pe lângă componentele active, compozițiile lichide pot include diluanți inerți utilizați în mod comun în tehnică, precum apa sau alți solvenți farmaceutici, agenți de solubilizare și emulsificatori cum arfi etanol, izopropanol, carbonat de etil, acetat de etil, alcool benzilic, benzoat de benzii, propilenglicon, 1,3-butilenglicol, dimetil formamidă, uleiuri (în particular uleiuri de semințe de bumbac, alune de pământ, porumb, germeni, măsline, răpită și susan), glicerol, alcool tetrahidro-furfuril, polietilenglicol), esteri de sorbitol ai acizilor grași și amestecuri ale acestora.
Pe lângă diluanții inerți, compozițiile de dozare lichide pot include de asemenea adjuvanți precum agenți de umezire, agenți de emulsifiere și suspendare, și agenți de îndulcire, aromare și parfumare.
Suspensiile lichide, pe lângă ingredientul sau ingredienții activi, pot conține agenți de suspendare cum arfi alcooli de isostearil etoxilați, esteri de polioxietilen sorbitol și sorbitan, celuloză microcristalină, metahidroxid de aluminiu, clei de bentonită, agar-agar, tragacanth și amestecuri ale acestora.
Compozițiile pentru administrare rectală sau intravaginală sunt preparate prin amestecarea F-l cu excipienți adecvați neiritanți cum ar fi unt de cocos, polietilenglicol sau orice ceară pentru supozitoare care este solidă la temperatura camerei, dar lichidă la temperatura corpului și deci se topește în rect sau în cavitatea vaginală pentru a elibera componentele active. Compușii sunt dizolvați în ceara topită, turnați în forma dorită, apoi se permite întărirea în compozițiea finală a supozitoarelor.
Hidratul cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4—[2-(piperidin-1 il)etoxi]- fenoxi)-2(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), conform invenției, poate fi de asemenea administrat sub formă de lipozomi. După cum se cunoaște în tehnică, lipozomii sunt derivați în general din fosfolipide și alte substanțe lipide. Compozițiile cu lipozomi sunt formate din cristale lichide hidratate mono- sau multilamelare care sunt dispersate într-un mediu apos. Orice lipid netoxic, farmaceutic și metabolizabil, capabil de a forma lipozomi, poate fi folosit. Compozițiile actuale sub formă de lipozomi pot conține, pe lângă F-l, stabilizatori, excipienți, conservanți, și altele asemenea. Lipidele preferate suntfosfolipidele și fosfatidilcolinele (lecitinele), atât naturale cât și sintetice.
Metodele pentru formarea lipozomilorsunt cunoscute în tehnică așa cum se descrie, de exemplu, în Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y. (1976), p. 33 etseq.
Următoarele compoziții sunt numai ilustrative și nu intenționează să limiteze acoperirea prezentei invenții.
Capsule gelatinoase
Capsulele de gelatină tari sunt preparate utilizând următorii ingredienți: Cantitate (mg/capsulă)
F-l 0,1 -1000
Amidon, NF 0-650
Pulbere fluidă de amidon 0-650
Silicon fluid 350 centistokes 0-15
RO 121851 Β1
Compoziția de mai sus poate fi modificată în conformitate cu variațiile rezonabile 1 furnizate.
O compoziție sub formă de tablete este preparată utilizând ingredientele de mai jos: 3
Tablete
Ingredient Cantitate (mg/tabletă)
F-l 2,5 -1000
Celuloză microcristalină 200 - 650
Dioxid de siliciu, afumat 10-650
Acid stearat 5-15
Componentele sunt mixate și comprimate pentru a forma tablete.
Tablete conținând aproximativ 10 și respectiv 50 mg de F-l pot fi preparate după cum urmează:
Ingredient Cantitate (mg/tabletă) Cantitate (mg/tabletă)
F-l 11,3 56,5
Lactoză anhidră 176,8 128,2
Lactoză spray uscată special 44,2 32,0
Povidone 11,0 13,0
Polysorbate 80 2,5 2,6
Crosspovidone (intern) 6,25 6,24
Crosspovidone (extern) 6,25 6,5
Stearat de magneziu 1,5 1,7
Celuloză microcristalină (extern) 0,0 13,0
Componentele sunt mixate și comprimate pentru a forma tablete. Alternativ, tablete care să conțină fiecare câte 2,5 - 1000 mg de F-l sunt fabricate după cum urmează:
Tablete
Ingredient Cantitate (mg/tabletă)
F-l 2,5-1000
Amidon 45
Celuloză microcristalină 35
Polivinilpirolidonă (ca soluție 10% în apă) 4
Carboximetilceluloză de sodiu 4,5
Stearat de magneziu 0,5
Talc 1
RO 121851 Β1
F-l, amidonul și celuloza sunt trecute printr-o sită cu ochiuri nr. 45 și sunt amestecate împreună. Soluția de polivinilpirolidonă este amestecată cu pulberea rezultată, iar amestecul este trecut printr-o sită cu ochiuri nr. 14. Granulele astfel produse sunt uscate la temperatura de 50 - 60’0 și trecute printr-o sită cu ochiuri nr. 18. Carboximetilceluloză de sodiu, stearatul de magneziu și talcul, trecute în prealabil printr-ο sită cu ochiuri nr. 60, sunt apoi adăugate granulelor, care, după mixare, sunt comprimate într-o mașină de tabletat pentru a se obține tabletele.
Suspensii conținând între 0,1 și 1000 mg de medicament la doza de 5 ml sunt realizate după cum urmează:
Suspensii
Ingredient Cantitate (mg/tabletă)
F-l 0,1 - 1000 mg
Carboximetilceluloză de sodiu 50 mg
Sirop 1,25 mg
Soluție de acid benzoic 0,10 ml
Aromatizant vezi text
Colorant vezi text
Apă purificată până la 5 ml
Medicamentul este trecut printr-o sită cu ochiuri nr. 45 și amestecat cu carboximetilceluloză de sodiu și siropul pentru a forma o pastă fină. Soluția de acid benzoic, aromatizantul și colorantul sunt diluate cu o parte din apă și adăugate, cu agitare. Se adaugă apoi suficientă apă pentru a produce volumul dorit.
O soluție de tip aerosol este preparată cu următoarele ingrediente: Aerosol
Ingredient Cantitate (% din greutate)
F-l 0,25
Etanol 25,75
Propellant 22 (Clorodifluorometan) 70,00
F-l este amestecat cu etanol, iar amestecul este adăugat unei porții de propellant 22, răcit la temperatura de 30°C, și apoi transferat într-un dispozitiv de umplere. Cantitatea necesară este apoi introdusă într-un container din oțel inoxidabil și diluată cu propellant-ul rămas. Se montează apoi valva la container.
Supozitoarele se prepară după cum urmează: Supozitoare
Ingrededient Cantitate (mg/supozitor)
F-l 250
Gliceride ale acizilor grași saturați 2.000
RO 121851 Β1
F-l este trecut printr-o sită cu ochiuri nr. 60 și pus în suspensie în gliceridele de acizi grași saturați, topite în prealabil utilizând doar cantitatea de căldură minim necesară. Amestecul este apoi turnat într-o matriță pentru supozitoare cu capacitatea nominală de 2 g după care i se permite să se răcească.
O compoziție intravenoasă este preparată după cum urmează: Soluție intravenoasă
Ingredient Cantitate (mg/supozitor)
F-l 25 mg
Soluție salină izotonică 1.000 ml
Soluția conținând ingredientele de mai sus este administrată pacientului intravenos, cu o rată de circa 1 ml pe minut. Capsule combinație I
Ingredient Cantitate (mg/capsulă)
F-l 50
Premarin 1
Avicel pH 101 50
Amidon 1500 117,50
Ulei siliconic 2
Tween 80 0,50
Cab-O-Sil 0,25
Capsule combinație II
Ingredient Cantitate (mg/capsulă)
F-l 50
Noretilnodrei 5
Avicel pH 101 82,50
Amidon 1500 90
Ulei siliconic 2
Tween 80 0,50
Tablete combinație 31
Ingredient Cantitate (mg/tabletă)
F-l 50
Premarin 1
Amidon de porumb NF 50
Povidone, K29-32 6
Avicel pH 101 41,50
Avicel pH 102 136,50
Crospovidone XL 10 2,50
Stearat de magneziu 0,50
Cab-O-Sil 0,50
RO 121851 Β1
Doza specifică de hidrat cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1 -îl) etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen(F-l), administrată conform prezentei invenții este determinată de circumstanțele particulare ale fiecărei situații. Aceste circumstanțe includ calea de administrare, antecedentele medicale ale receptorului, condițiile patologice sau simptomul care este tratat, severitatea condițiilor/simptomului tratat, vârsta și sexul receptorului.
în general, o doză zilnică minimă eficientă de F-l este de circa 1,5,10,15 sau 20 mg. Tipic, doza maximă eficientă poate fi de 800, 100, 60, 50 sau 40 mg. Mai tipic, gama de dozare este între 15 mg și 60 mg. Doza exactă poate fi determinată în conformitate cu practica standard în tehnica medicală de „testare a dozei pentru receptor; aceasta înseamnă că se administrează inițial o doză scăzută de compus, care este treptat crescută până când este observat efectul terapeutic dorit.
Deși ar putea fi necesară o testare a dozei pentru receptor în ceea ce privește terapiile combinate discutate anterior, dozele tipice de ingrediente active, altele decât F-l, sunt după cum urmează: estrogen etinil (0,01 - 0,03 mg/zi), mestranol (0,05 - 0,15 mg/zi), hormoni estrogenici conjugați (de exemplu Premarin®, Wyeth-Ayerst; 0,3 - 2,5 mg/zi), medroxiprogesteron (2,5 -10 mg/zi), noretilnodrel (0,5 - 2,0 mg/zi), amino-glutamidă (250 1250 mg/zi, preferabil 250 mg de patru ori pe zi), anastrazol (1-5 mg/zi, preferabil 1 mg o dată pe zi), letrozol (2,5 -10 mg/zi, preferabil 2,5 mg o dată pe zi), formestan (250 - 1250 mg/săptămână, preferabil 250 mg de două ori pe săptămână), examestan (25 - 100 mg/zi, preferabil 25 mg o dată pe zi), goserlin (3 -15 mg/trei luni, preferabil 3,6 - 7,2 mg o dată la fiecare trei luni) și leuprolidă (3-15 mg/lună, preferabil 3,75 - 7,5 mg o dată pe lună).
Calea de administrare
Hidratul cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1 -il)etoxi]-fenoxi)-2-(4metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), conform invenției, poate fi administrat pe o varietate de căi, inclusiv pe cale orală, rectală, transdermală, subcutanat, intravenos, intramuscular și intranazal. Metoda de administrare a fiecărui agent bazat pe estrogen sau progestin este cea cunoscută în tehnică. F-l, singur sau în combinație cu estrogen, progestin sau un inhibitor de AchE, va fi administrat într-o compoziție convenabilă.
Compozițiile farmaceutice descrise de către prezenta invenție pot fi administrate oamenilor sau altor mamifere (de exemplu, câini, pisici, cai, porci sau altele) oral, rectal, intravaginal, parenteral, local, bucal sau sublingual, sau nazal. Termenul „administrare parenterală se referă în acest context la modurile de administrare printre care intravenos, intramuscular, intraperitoneal, intrasternal, subcutanat, sau prin injectare sau infuzie intraarticulară.
Modul/durata de administrare
Pentru majoritatea metodelor prezentei invenții, hidratul cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), conform invenției, este administrat continuu, o dată până la de trei ori pe zi sau ori de câte ori este necesar pentru a asigura pentru receptor o cantitate eficientă de F-l. Terapia ciclică poate fi utilă în special în tratamentul endometriozei sau poate fi utilizată în mod acut pe durata atacurilor dureroase ale bolii. în cazul restenozei, terapia poate fi limitată la un interval scurt (1-6 luni) după proceduri medicale cum ar fi angioplastia.

Claims (16)

  1. Revendicări
    1. Hidrat cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-1), caracterizat prin aceea că are un tipar de difracție în raze X care conține următoarele vârfuri: 7,9 ± 0,2, 10,7 ± 0,2, 14,9 ± 0,2, 15,9 ± 0,2, 18,3 ± 0,2 și 20,6 ± 0,2 în 2Θ; obținut dintr-o sursă de radiație cu cupru.
    RO 121851 Β1
  2. 2. Compoziție farmaceutică, caracterizată prin aceea că, conține hidratul cristalin 1 al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxifenil) benzo [b] tiofen (F-l), unul sau mai mulți purtători, diluanți sau excipienți farmaceutici și opțional estro- 3 gen, opțional progestin, opțional un inhibitor de aromatază, opțional un analog LHRH și opțional un inhibitor al acetilcolinesterazei (AchE). 5
  3. 3. Compoziție farmaceutică, conform revendicării 2, caracterizată prin aceea că conține hidratul cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4- 7 metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), unul sau mai mulți purtători, diluanți sau excipienți farmaceutici și estrogen. 9
  4. 4. Compoziție farmaceutică, conform revendicării 3, caracterizată prin aceea că estrogenul este Primarin®.11
  5. 5. Compoziție farmaceutică, conform revendicării 2, caracterizată prin aceea că conține hidratul cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4-13 metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), unul sau mai mulți purtători, diluanți sau excipienți farmaceutici și progestin.15
  6. 6. Compoziție farmaceutică, conform revendicării 6, caracterizată prin aceea că progestinul este selectat din grupul constând în noretilnodrel și noretindronă.17
  7. 7. Compoziție farmaceutică conform revendicării 2, caracterizată prin aceea că conține hidratul cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4- 19 metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), unul sau mai mulți purtători, diluanți sau excipienți farmaceutici și un inhibitor de AChE. 21
  8. 8. Compoziție farmaceutică conform revendicării 7, caracterizată prin aceea că inhibitorul de AChE este selectat din grupul format din: salicilat de fisostigmină, clorhidrat de 23 tacrină și clorhidrat de donepezil.
  9. 9. Compoziție farmaceutică conform revendicării 2 caracterizată prin aceea că 25 conține hidratul cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1 -il)etoxi]- fenoxi)-2-(4metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), unul sau mai mulți purtători, diluanți sau excipienți farma- 27 ceutici, estrogen și progestin.
  10. 10. Hidrat cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2- 29 (4-metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este utilizat pentru inhibarea unei condiții patologice selectate dintr-un grup constând în: fibroză 31 uterină, endometrioză, proliferarea celulară a mușchiului neted aortal, restenoză, cancer mamar, cancer uterin, cancer prostatic, hiperplazie prostatică benignă, decalcifiere a oaselor, 33 osteoporoză, boli cardiovasculare, hiperlipidimie, boli ale sistemului nervos central și maladia lui Alzheimer. 35
  11. 11. Hidrat cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), conform revendicării 10, caracterizat prin aceea că este 37 utilizat pentru inhibarea cancerului mamar.
  12. 12. Hidrat cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1 -il)etoxi]-fenoxi)-2- 39 (4-metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), conform revendicării 11, caracterizat prin aceea că modul de inhibare este profilactic. 41
  13. 13. Hidrat cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1 -il)etoxi]-fenoxi)-2(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), conform revendicării 10, caracterizat prin aceea că este 43 utilizat pentru inhibarea cancerului ovarian.
  14. 14. Hidrat cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2- 45 (4-metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), conform revendicării 10, caracterizat prin aceea că este utilizat pentru inhibarea cancerului endometrial. 47
    RO 121851 Β1
    1
  15. 15. Hidrat cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1 -îl)etoxi]-fenoxi)-2(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că este 3 utilizat pentru reglarea colinacetiltransferazei (ChAT) la mamifere.
  16. 16. Procedeu pentru prepararea hidratului cristalin al clorhidratului de 6-hidroxi-3-(45 [2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen (F-l), conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că constă în cristalizarea la temperatură ambiantă a clorhidratului
    7 de 6-hidroxi-3-(4-[2-(piperidin-1-il)etoxi]-fenoxi)-2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofen din tetrahidrofuran conținând 1-10% în volum apă în primă etapă și din tetrahidrofuran anhidru
    9 proaspăt în a doua etapă, urmată de îndepărtarea apei prin distilare atmosferică.
ROA200000736A 1999-07-29 2000-07-21 HIDRAT CRISTALIN AL CLORHIDRATULUI DE 6-HIDROXI-3-(4-[2-PIPERIDIN-1-IL)ETOXI]-FENOXI)-2-(4-METOXIFENIL)BENZO[b]TIOFEN, PROCEDEU DE PREPARARE ŞI COMPOZIŢII FARMACEUTICE CARE ÎL CONŢIN RO121851B1 (ro)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14628699P 1999-07-29 1999-07-29
US14757099P 1999-08-06 1999-08-06
US14977399P 1999-08-19 1999-08-19

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RO121851B1 true RO121851B1 (ro) 2008-06-30

Family

ID=27386379

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ROA200000736A RO121851B1 (ro) 1999-07-29 2000-07-21 HIDRAT CRISTALIN AL CLORHIDRATULUI DE 6-HIDROXI-3-(4-[2-PIPERIDIN-1-IL)ETOXI]-FENOXI)-2-(4-METOXIFENIL)BENZO[b]TIOFEN, PROCEDEU DE PREPARARE ŞI COMPOZIŢII FARMACEUTICE CARE ÎL CONŢIN

Country Status (45)

Country Link
EP (1) EP1204656A2 (ro)
JP (1) JP2001064277A (ro)
KR (1) KR100697177B1 (ro)
CN (1) CN1138770C (ro)
AR (1) AR031073A1 (ro)
AT (1) AT502318A1 (ro)
AU (1) AU6335600A (ro)
BE (1) BE1013411A3 (ro)
BR (1) BR0003209A (ro)
CA (1) CA2314682A1 (ro)
CO (1) CO5180570A1 (ro)
CZ (1) CZ299311B6 (ro)
DE (1) DE10036854A1 (ro)
DK (1) DK200001151A (ro)
DZ (1) DZ3060A1 (ro)
FI (1) FI20001722A (ro)
FR (1) FR2796944B1 (ro)
GB (1) GB2352717A (ro)
GR (1) GR1004084B (ro)
HK (1) HK1035370A1 (ro)
HR (1) HRP20000503B1 (ro)
HU (1) HUP0003001A2 (ro)
ID (1) ID27078A (ro)
IL (1) IL137553A (ro)
IT (1) IT1318660B1 (ro)
LT (1) LT4790B (ro)
LU (1) LU90617B1 (ro)
LV (1) LV12623B (ro)
MD (1) MD2336G2 (ro)
MX (1) MXPA00007461A (ro)
MY (1) MY128764A (ro)
NL (1) NL1015821C2 (ro)
NO (1) NO20003879L (ro)
PE (1) PE20010385A1 (ro)
PL (1) PL341749A1 (ro)
PT (1) PT102502A (ro)
RO (1) RO121851B1 (ro)
SE (1) SE0002792L (ro)
SG (1) SG91296A1 (ro)
SI (1) SI20426A (ro)
SV (1) SV2002000132A (ro)
TR (1) TR200002206A2 (ro)
TW (1) TWI276437B (ro)
UA (1) UA72885C2 (ro)
WO (1) WO2001009116A2 (ro)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2208384T3 (es) * 1999-07-29 2004-06-16 Eli Lilly And Company Forma cristalina de clorhidrato de 6 hidroxi-3-(4-(2-(piperidin-1-il)-etoxi)-fenoxi)2--(4-metoxifenil)-benzo(b)tiofeno.
EP1757291A3 (en) * 2000-05-08 2009-07-15 Eli Lilly &amp; Company Stabilized formulations of 6-hydroxy-3-(4-[2-(piperidin-1-YL)ethoxy]phenoxy)-2-(4-methoxyphenyl)benzo[b]thiophene and salts thereof
US7122203B2 (en) 2000-05-08 2006-10-17 Eli Lilly And Company Stabilized formulations of 6-hydroxy-3-(-4-[2-(piperidin-1-yl) ethoxy]phenoxy)-2-(4-methoxyphenyl) benzo[b]thiophene and salts thereof
DZ3376A1 (fr) * 2000-05-08 2001-11-15 Lilly Co Eli Formulations stabilisees de 6-hydroxy-3-(4-[2-(piperidin-1-yl) ethoxy]phenoxy)-2-(4-methoxyphenyl) benzo[b]thiophene et sels de ces composes
EP1157996A1 (de) * 2000-05-23 2001-11-28 JENAPHARM GmbH Neue Festkörperformen des Mesoprogestins 11Beta-[4E-(Hydroxyiminomethyl)-phenyl]-17Alpha-methoxymethyl-17Beta-methoxy-estra-4,9-dien-3-on
BR0114792A (pt) * 2000-10-20 2003-08-12 Lilly Co Eli Composto cristalino, anidro, não solvatado, de cloridreto de 6-hidróxi-3-(-4-[2-piperidin-1-il)-etóxi]-fenóxi)-2-(4-metóx i-fenil)-benzol[b]tiofeno (f-v), formulação farmacêutica, processo para preparar um composto, e uso de um composto
US6921827B2 (en) 2000-11-27 2005-07-26 Eli Lilly And Company Process for preparing 3-aryl-benzo{b} thiophenes
CA2393720C (en) * 2002-07-12 2010-09-14 Eli Lilly And Company Crystalline 2,5-dione-3-(1-methyl-1h-indol-3-yl)-4-[1-(pyridin-2-ylmethyl)piperidin-4-yl]-1h-indol-3-yl]-1h-pyrrole mono-hydrochloride
ES2349798T3 (es) * 2004-07-22 2011-01-11 Eli Lilly And Company Hidrato variable cristalino de la sal hemisuccinato de (s)-6-(4-(2-((3-(9h-carbazol-4-iloxi)-2-hidroxipropil)amino)-2-metilpropil)fenoxi)-3-piridinocarboxamida.

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PE44597A1 (es) * 1995-02-28 1997-10-13 Lilly Co Eli Compuestos de benzotiofeno, productos intermedios, composiciones y procedimientos
US5510357A (en) 1995-02-28 1996-04-23 Eli Lilly And Company Benzothiophene compounds as anti-estrogenic agents
ZA9710262B (en) * 1996-11-19 1999-05-13 Lilly Co Eli Process for the synthesis of benzothiophenes
ZA982877B (en) * 1997-04-09 1999-10-04 Lilly Co Eli Treatment of central nervous system disorders with selective estrogen receptor modulators.

Also Published As

Publication number Publication date
MD20000162A (ro) 2001-04-30
SE0002792D0 (sv) 2000-07-28
GB0018641D0 (en) 2000-09-13
HK1035370A1 (en) 2001-11-23
FR2796944A1 (fr) 2001-02-02
CN1288007A (zh) 2001-03-21
MD2336F2 (ro) 2003-12-31
CA2314682A1 (en) 2001-01-29
MXPA00007461A (es) 2004-07-16
HUP0003001A2 (hu) 2002-04-29
NL1015821C2 (nl) 2002-01-03
LV12623B (en) 2001-07-20
AR031073A1 (es) 2003-09-10
WO2001009116A2 (en) 2001-02-08
ITMI20001759A0 (it) 2000-07-28
BE1013411A3 (fr) 2001-12-04
AU6335600A (en) 2001-02-19
IL137553A0 (en) 2001-07-24
SI20426A (sl) 2001-06-30
BR0003209A (pt) 2001-03-20
TR200002206A2 (tr) 2001-03-21
CO5180570A1 (es) 2002-07-30
MD2336G2 (ro) 2004-06-30
IT1318660B1 (it) 2003-08-27
CN1138770C (zh) 2004-02-18
PT102502A (pt) 2001-01-31
DE10036854A1 (de) 2001-03-01
FI20001722A0 (fi) 2000-07-28
NO20003879L (no) 2001-01-30
HRP20000503A2 (en) 2001-06-30
ITMI20001759A1 (it) 2002-01-28
LV12623A (en) 2001-03-20
AT502318A1 (de) 2007-02-15
KR20010049916A (ko) 2001-06-15
FI20001722A (fi) 2001-01-30
JP2001064277A (ja) 2001-03-13
GB2352717A (en) 2001-02-07
IL137553A (en) 2005-09-25
SE0002792L (sv) 2001-01-30
KR100697177B1 (ko) 2007-03-21
LU90617B1 (fr) 2001-06-15
SG91296A1 (en) 2002-09-17
LT2000076A (lt) 2001-02-26
GR20000100265A (el) 2001-03-30
ID27078A (id) 2001-02-22
NL1015821A1 (nl) 2001-01-30
IE20000605A1 (en) 2001-04-04
LT4790B (lt) 2001-05-25
FR2796944B1 (fr) 2003-01-31
DK200001151A (da) 2001-01-30
HRP20000503B1 (en) 2008-04-30
UA72885C2 (uk) 2005-05-16
SV2002000132A (es) 2002-06-07
CZ20002716A3 (en) 2001-05-16
MY128764A (en) 2007-02-28
CZ299311B6 (cs) 2008-06-18
PE20010385A1 (es) 2001-04-06
PL341749A1 (en) 2001-02-12
NO20003879D0 (no) 2000-07-28
WO2001009116A3 (en) 2001-05-17
TWI276437B (en) 2007-03-21
HU0003001D0 (en) 2000-10-28
DZ3060A1 (fr) 2004-05-22
GR1004084B (el) 2002-12-11
EP1204656A2 (en) 2002-05-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH11501031A (ja) ２−ベンジル−３−アリールベンゾチオフェン
KR100733094B1 (ko) 6-히드록시-3-(4-[2-(피페리딘-1-일)에톡시]-페녹시)-2-(4-메톡시페닐)벤조[ｂ]티오펜 히드로클로라이드의 신규한결정형태
RO121851B1 (ro) HIDRAT CRISTALIN AL CLORHIDRATULUI DE 6-HIDROXI-3-(4-[2-PIPERIDIN-1-IL)ETOXI]-FENOXI)-2-(4-METOXIFENIL)BENZO[b]TIOFEN, PROCEDEU DE PREPARARE ŞI COMPOZIŢII FARMACEUTICE CARE ÎL CONŢIN
US20040014672A1 (en) Novel crystalline form of 6-hydroxy-3-(4-[2-(piperidin-1-yl)ethoxy]phenoxy)-2-(4-methoxyphenyl)benzo[b]thiophene hydrochloride
US6610706B1 (en) Crystalline form of 6-hydroxy-3-(4-[2-(piperidin-1-yl)ethoxy]phenoxy)-2-(4-methoxyphenyl)benzo[b]thiophene hydrochloride
AU780211B2 (en) Crystalline form of 6-hydroxy-3-(4-(2-(piperidin-1-yl) ethoxy)phenoxy)-2-(4-methoxyphenyl)benzo[b]thiophene hydrochloride
US6653479B1 (en) Crystalline form of 6-hydroxy-3-(4-[2-(piperidin-1-yl)ethoxy]phenoxy)-2-(4-methoxyphenyl)benzo[b] thiophene hydrochloride
NZ506046A (en) A novel crystalline form of 6-hydroxy-3-(4-[2-(piperidin-1-yl)ethoxy]phenoxy)-2-(4-methanoxyphenyl)benzo[b]thiophene hydrochloride
IE83296B1 (en) A novel crystalline form of 6-hydroxy-3-(4-[2-(piperidin-1-yl)ethoxy]phenoxy)-2-(4-methoxyphenyl)benzo[b]thiophene hydrochloride