RO116344B1

RO116344B1 - Metoda de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu

Info

Publication number: RO116344B1
Application number: RO97-02247A
Authority: RO
Inventors: Marlene L Cohen
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-06-04
Publication date: 2001-01-30
Also published as: ES2210373T3; NO975561D0; DE69630523D1; JPH11506788A; MX9709468A; EP0831822A4; EP0831822A1; NO975561L; IL122459A0; CA2223711A1; EA199800033A1; WO1996040134A1; PL324086A1; PL183998B1; AU6091996A; HUP9900916A3; UA43895C2; CZ382897A3; CZ288546B6; EP0831822B1

Abstract

Inventia se refera la o metoda de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu care consta in aceea ca se administreaza unui animal cu sange cald, 0,1...1000 mg/zi, de la 1 pana la 3 ori pe zi, pe cale orala, un compus cu formula (I): sau o sare acceptabila farmaceutic a acestui compus,in care: R1 si R3 sunt in mod independent hidrogen, C1-C4 alchil, -CO-(C1-C6 alchil) sau -CH2Ar, -CO-Ar, unde Ar este fenil sau fenil substituit, R2 este ales dintr-un grup care consta din pirolidina, hexametilenimina si piperidina, in scopul tratarii unor disfunctii cardiace, dereglari vascular cerebrale, dereglari renale si intestinale, si hipertensiunii.

Description

Invenția se referă la o metodă de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu, utilizată în medicină.

Se cunoaște că terapia de înlocuire cu estrogen produce efecte benefice asupra sistemului cardiovascular la femei în postmenopauză [Knopt, Obstet.Gynecol., 72, 23-40 (1988)]. La femeile în postmenopauză care primesc estrogeni, rata mortalității cardiovasculare se reduce,cu circa 30 până la circa 50%, iar rata mortalității cerebrovasculare se reduce cu circa 50%. [Stampfer et al., N.Engl. J.Med., 325, 756-762 (1991)]. Deși aceste efecte cardiovasculare benefice pot implica alterări în profilul lipidelor, date recente sugerează că estrogenul poate avea, de asemenea, efecte benefice asupra răspunsurilor vasculare ale arterelor coronare aterosclerotice [Gisclard et al., J.Pharmacol. And Experimental Therapeutics, 244, 19-22 (1988); Williams etal., Circulation, 81, 1680-1687(1990); Gangaretal., Lancet, 388, 839842 (1991); și Williams et al., JACC, 20, 452-457 (1992)]. Atât efecte endotelial dependente, cât și efecte endotelial independente ale estrogenului au fost descrise în țesutul vascular. [Jiang et al., Br.J.Pharmacol., 104, 1033-1037 (1991); Jiang et.al., American Journal of Physiology, 32, H271-H275 (1992); Cheng and Gruetter, European Journal Of Pharmacol., 215, 171-176 (1992); Mîigge et al., Cardiovas.Res., 27, 1939-1942 (1933); Salas et al., European Journal of Pharmacol., 258, 47-55 (1944); Williams et al., Circulation, 81, 1680-1687 (1990); Cheng etal., Life Sciences, 10, 187-191 (1994); Gilligan etal., Circulation, 89,2545-2551 (1944); și Reis et al., Circulation, 89, 52-60 (1994)]. Unele comunicări au arătat,de asemenea, că efectele vasodilatatoare ale estradiolului și/sau capacitatea lui de a atenua răspunsurile contractile pot fi mediate prin inhibarea influxului de calciu pe calea canalelor de calciu dependente de tensiune electrică. [Jiang et al., Br.J.Pharmacol., 104, 1033-1037 (1991); Jiang et.al., American Journal of Physiology, 32, H271-H275 (1992); Collins et al., Lancet, 341, 1264 (1993); Muck et al., Med.Sci.Res., 22, 19 (1994); și Salas et al., European Journal of Pharmacol., 258, 47-55 (1994)). Alții au arătat că estradiolul poate să intensifice conținutul de GMP ciclic și AMP ciclic sau să înmulțească numitele canale de potasiu sensibile la ATP. [Muge et al., Cardiovas.Res., 27, 1939-1942 (1993)].

Se cunoaște brevetul US 5441365, care descrie compuși care inhibă trombina.

Compușii 2-aril-3-aroilbenzo (b) tiofen, care sunt folosiți în metodele, conform prezentei invenții, au fost realizați prima oară de către Jones și Suarez ca agenți pentru antifertilitate. Brevetul de invenție US 4133814 (emis la data de 9 ianuarie, 1979)]. Acești compuși sunt utili, în general, în suprimarea creșterii tumorilor mamare. Jones a constatat mai târziu că un grup din acești compuși sunt deosebit de utili pentru terapia cu antiestrogen și antiendrogen, în special, în tratamentul tumorilor prostatice și mamare. Brevetul de invenție US 4418068 (emis la data de 29 noiembrie 1983)]. Unul din acești compuși, 6-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-3-[4-(2piperidino-etoxi)benzoil]benzo (b) tiofen, a fost studiat clinic pentru tratamentul cancerului de sân. Acest compus este numit raloxifen, mai înainte keoxifen.

Invenția se referă la o metodă de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu care se administrează unui animal cu sânge cald, 0,1 -1000 mg/zi, de la 1

RO 116344 Bl până la 3 ori pe zi, pe cale orală, un compus cu formula (I) sau o sare acceptabilă 45 farmaceutic a acestui compus:

în care:

R¹ și R³ sunt, în mod independent, hidrogen, C.,-C₄ alchil, -00-(0,-¾ alchil), sau -CH^r, -CO-Ar, unde Ar este fenil sau fenil substituit

R^a este ales dintr-un grup care constă din pirolidină, hexametilenimină și piperidină, în scopul tratării unor disfuncții cardiace, dereglări vascular cerebrale, 60 dereglări renale și intestinale, și hipertensiunii; R¹ și R^a pot fi în mod independent, hidrogen, C,-C₄ alchil, -00-(0,-¾ alchil), sau benzii și R^a este pirolidină sau piperidină: R¹ și R³ pot fi în mod independent, hidrogen, 0,-04 alchil și R² este pirolidină sau piperidină; R¹ și R³ pot fi hidrogen și R^a este pirolidină sau piperidină: R² poate fi piperidină: sarea acceptabilă farmaceutic este clorhidrat; R² poate fi pirolidină; sarea 65 acceptabilă farmaceutic este clorhidrat; dereglarea cardiacă pe care o tratează metoda este anghina variabilă, angina de efort, angina instabilă, leziunea miocardului datorată ischemiei de reperfuzie și, aritmia; dereglarea vascular cerebrală pe care o tratează metoda este un spasm de vas cerebral provocat de ruperea arterială, lovire și durere de cap cu migrenă. 7o

Prezenta invenție asigură, de asemenea, folosirea compușilor cu formula I sau sărurilor acceptabile farmaceutic ale acestora pentru fabricarea unui medicament, în vederea antagonizării sau blocării canalelor de calciu din țesutul vascular.

- fig. 1, Răspunsuri contractile la norepinefrină (sus), serotonină (mijloc) și U

46619 (jos), în inele aortice de șobolan, în prezența și absența endoteliului. Integrita- 75 tea endoteliului a fost măsurată prin provocare cu acetilcolină.așa cum s-a indicat la metode. Punctele reprezintă valori medii, iar barele verticale reprezintă eroarea standard a mediei pentru numărul de inele indicate în paranteză.

- fig. 2, Efectul lui 16 asupra răspunsului contracții la norepinefrină (sus), serotonină (mijloc) și U46619 (jos) în aorta de șobolan care posedă endoteliu intact. 8 o Punctele reprezintă valori medii, iar barele verticale reprezintă eroarea standard a mediei pentru numărul de inele indicate în paranteză.

- fig. 3, Efectul lui 16 asupra răspunsului contracții la norepinefrină (sus), serotonină (mijloc) și U 46619 (jos) în inele aortice de șobolan fără endoteliu intact. Punctele reprezintă valori medii, iar barele verticale reprezintă eroarea standard a 85 mediei pentru numărul de inele indicate în paranteză.

- fig. 4, Efectul lui 14 asupra răspunsului contracții la serotonină în aortă de șobolan cu (sus) și fără (jos) endoteliu intact. Punctele reprezintă valori medii, iar barele verticale reprezintă eroarea standard a mediei pentru numărul de inele indicate în paranteză.

RO 116344 Bl

- fig. 5, Efectul lui 14 asupra răspunsului contracții la nerepinefrină în inele aortice de șobolan cu (sus) și fără (jos) endoteliu intact. Punctele reprezintă valori medii, iar barele verticale reprezintă eroarea standard a mediei pentru numărul de inele indicate în paranteză.

-fig. 6, Efectul lui /2-estradiol (sus) și 16 (jos) asupra răspunsului contracții al aortei de șobolan, care posedă endoteliu intact, la Bayk. Punctele reprezintă valori medii, iar barele verticale reprezintă eroarea standard a mediei pentru numărul de inele indicate în paranteză.

-fig. 7, Efectul lui ^estradiol (sus) și 16 (jos) asupra răspunsului contracții al aortei de șobolan, fără endoteliu intact, la BayK. Punctele reprezintă valori medii, iar barele verticale reprezintă eroarea standard a mediei pentru numărul de inele indicate în paranteză.

- fig. 8, Efectul lui 14 (1CT⁶ și 1CT⁷ M) asupra răspunsului contracții la BayK 8644 în aortă de șobolan lipsită de endoteliu. Punctele reprezintă valori medii, iar barele verticale reprezintă eroarea standard a mediei pentru numărul de țesuturi indicate în paranteză.

Prezenta invenție se referă la constatarea că 2-aril-3-aroilbenzo(b) tiofene, compuși, cu formula I, sunt antagoniști ai canalului de calciu. Deci, prezenta invenție asigură metode de antagonizare sau blocare a canalelor de calciu din țesut vascular. Un aspect al invenției privește o metodă de tratare a disfuncțiilor cardiace, inclusiv, dar fără limitare la aceasta, angină variată, angină de efort, angină instabilă, leziune de reperfuzie ischemică la miocard și aritmii. Un alt aspect se referă la o metodă de tratare a disfuncțiilor vasculare, cerebrale, inclusiv spasm vascular, cerebral provocat de o rupere arterială, o lovitură, și dureri de cap cu migrenă dar fără limitare la acestea. Un alt aspect se referă la o metodă de tratare a disfuncțiilor renale prin creșterea spațiului renal datorită unor creșteri în fluxul sangvin renal, metoda fiind utilă pentru încetinirea deficiențelor renale. Un alt aspect privește o metodă de tratare a unor disfuncții gastrointestinale inclusiv boli legate de diaree, de exemplu, IBS și IBD, diaree predominantă, dar fără limitare la acestea. Un alt aspect privește o metodă de tratare a hipertensiunii. Tratamentele terapeutice prevăzute de prezenta invenție sunt practicate prin administrare, unui animal cu sânge cald care are nevoie de acestea, a unei cantități eficiente farmaceutic dintr-un compus, cu formula I, sau o sare a acestuia, acceptabilă farmaceutic.

în formula de mai sus, termenul “C^-Cg alchil” reprezintă o catenă alchil liniară, ciclică sau ramificată având de la unu până la șase atomi de carbon. Grupări alchil C_rC₆, tipice, includ metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, sec-butil, t-butil, n-pentil, izopentil, n-hexil, ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil și altele asemenea. Termenul C₁-C_B alchil” reprezintă o catenă alchil liniară sau ramificată având unu până la patru atomi de carbon. Grupări alchil tipice, includ etil, n-propil, izopropil, nbutil, sec-butil, izobutil, și t-butil.

Termenul “Ar” reprezintă grupări cum ar fi fenil și fenil substituit·: Termenul “fenil substituit”, așa cum este folosit aici, reprezintă o grupare fenil substituită cu una sau mai multe fracțiuni alese din gruparea care constă din halogen, hidroxi, ciano, nitro, alchil, C.|-C₄ alcoxi, acetil, formil, triclormetil, și trifluormetil. Exemple ale unei grupări de fenil substituit includ 4-clorfenil, 2,6-diclorfenil, 2,5-diclorfenil, 3,4diclorfenil, 3-clorfenil, 3-bromfenil, 4-bromfenil, 3,4-dibromfenil, 3-clor-4-fluorfenil, 2RO 116344 Bl

140 fluorfenil, 4-hidroxifenil, 3-hidroxifenil, 2,4-dihidroxifenil, 3-nitrofenil, 4-nitrofenil, 4cianofenil, 4-metilfenil, 4-etilfenil, 4-metoxifenil, 4-propilfenil, 4-n-butilfenil, 4-t-butilfenil, 3-fluor-2-metilfenil, 2,3-difluorfenil, 2,6-difluorfenil, 2,6-dimetilfenil, 2-fluor-5-metilfenil, 2,4,6-trifluorfenil, 2-trifluormetilfenil, 2-clor-5-trifluormetilfenil, 3,5-bis (trifluormetiljfenil, 2-metoxifenil, 3-metoxifenil, 3,5-dimetoxifenil, 4-hidroxi-3-metilfenil, 3,5dimetil-4-hidroxifenil, 2-metil-4-nitrofenil, 4-metoxi-2-nitrofenil, 2,4-dinitrofenil, și altele asemenea. Termenul “CȚ-C4 alcoxi” reprezintă grupări cum ar fi metoxi, etoxi, npropoxi, izopropoxi, n-butoxi, t-butoxi, și altele asemenea. Termenul “halogen” reprezintă fluor, clor, brom și iod.

Termenul “blocare sau “antagonizare” arată că, compușii cu formula I, se leagă de canalele de calciu din țesutul vascular și prin aceasta inhibă fluxul de calciu.

Termenul “cantitate eficientă farmaceutic” este folosit aici pentru a reprezenta o cantitate de compus, cu formula I, care este capabilă să antagonizeze sau să blocheze canale de calciu din țesutul vascular. Doza particulară de substanță, cu formula I, va fi, desigur, determinată de circumstanțele particulare în care se află cazul, inclusiv compusul administrat, traseul de administrare starea particulară tratată și alte considerente similare.

Termenul “animal cu sânge cald”, așa cum este folosit aici, include: oameni, animale de companie, de exemplu, câini și pisici, și animale domestice de exemplu cai, bovine, oi, porci, capre și găini. Preferabil, animalul cu sânge cald este un om sau un animal de companie. Preferabil, animalul cu sânge cald este un om.

în timp ce toți compușii, cu formula I, sunt utili pentru antagonizarea sau blocarea canalelor de calciu în țesutul vascular, anumiți compuși sunt preferați. Preferabil, R¹ și R³ sunt, în mod independent, hidrogen, C.1-C4 alchil, -CO- (C^ alchil) sau benzii, iar R^a este piperidină sau pirolidină. Compuși reprezentativi din această grupă preferată includ 6-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-3-[4-(2-pirolidinetoxi)benzoil]-benzo [bjtiofen, 6-metoxi-2-(4-metoxifenil)-3-{4-(2-piperidinetoxi)benzoil]benzo-[b]tiofen₁ 6acetoxi-2-(4-acetoxifenil)-3-(4-(2-pirolidinetoxi)benzoil]-benzo[b]tiofen și 6-benziloxi-2-(4benziloxifenil)-3-[4-(2-piperidinetoxi)benzoil]-benzo[b]tiofen.

Mai bine, R¹ și R³ sunt, în mod independent, hidrogen sau C-t-Q, alchil, iar R⁷este piperidină sau pirolidină. Compuși reprezentativi din această grupă, mai preferată, includ 6-hidroxi-2-{4-hidroxifenil)-3-{4-{2-pirolidin-etoxi)benzoil]benzo[b]tiofen, 6-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-3-[4-(2-piperidinetoxi) benzoil] benzo [bjtiofen, 6-metoxi-2-(4metoxifenil]-3-{4-(2-pirolidinetoxi)-benzoil]benzo[b]tiofenși6-metoxi-2-(4-metoxifenil)-3-[4(2-piperidinetoxi)benzoil]benzo[b]tiofen. Cel mai bine, R¹ și R³ sunt hidrogen și R² este pirolidină. Cel mai preferat compus este 6-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-3-[4-(2-pirolidinetoxi) benzoil]-benzo[b]tiofen.

Compușii cu formula I folosiți în metodele, conform prezentei invenții, pot fi preparați conform unor procedee stabilite, de exemplu,cele descrise în brevetele de invenție US 4133814, 4418068 și 4380635. în general, procedeul începe cu 6hidroxi-2-(4-hidroxifenil) benzo(b) tiofen. Acest compus de pornire este protejat, acilat la C-3 cu o grupare 4-(2-aminoetoxi)benzoil și opțional, de protejat pentru a forma compuși cu formula I. Exemplele de preparare a unor astfel de compuși sunt date în brevetele de invenție SUA despre care s-a vorbit mai sus.

Compușii folosiți în metodele prezentei invenții formează acid acceptabil farmaceutic și unde R¹ și/sau R³ este hidrogen, săruri de adiție de bază cu o largă varietate

145

150

155

160

165

170

175

180

RO 116344 Bl de acizi organici și anorganici și baze, inclusiv sărurile acceptabile fiziologice care, adesea, sunt folosite în chimia farmaceutică. Acizi anorganici, tipici, folosiți pentru a forma astfel de săruri includ acid clorhidric, acid bromhidric, acid iodhidric, acid nitric, acid sulfuric, acid fosforic, acid hipofosforic și alții asemenea. Săruri derivate din acizi organici, de exemplu, acizi monocarboxilici și dicarboxilici, alifatici, acizi alcanoici fenilsubstituiți, acizi hidroxialcanoici și hidroxialcandioici, acizi aromatici, acizi alifatici și acizi sulfonici, aromatici pot fi.de asemenea, folosiți. Astfel de săruri acceptabile farmaceutic includ acetat, fenilacetat, trifluoracetat, acrilat, ascorbat, benzoat, clorbenzoat, dinitrobenzoat, hidroxibenzoat, metoxibenzoat, metilbenzoat, o-acetoxibenzoat, naftalen-2-benzoat, bromid, izobutirat, fenilbutirat, și b-hidroxibutirat, butin-

1,4-dioat, hexin-1,6-dioat, caprat, caprilat, clorid, cinamat, citrat, format, fumarat, glicolat, heptanoat, decanoat, hipurat, lactat, malat, maleat, hidroximaleat, malonat, mandelat, mesilat, nicotinat, ihonicotinat, nitrat, oxalat, ftalat, tereftalat, fosfat, monohidrogenfosfat, dihidrotgenfosfat, metafosfat, pirofosfat, propiolat, propionat, fenilpropionat, salicilat, sebacat, succinat, suberat, sulfat, bisulfat, pirosulfat, sulfit, bisulfit, sulfonat, benzensulfonat, p-bromfenilsulfonat, clorbenzensulfonat, etansulfonat, 2-hidroxietansulfonat, metansulfonat, naftalen-1-sulfonat, naftalen-2-sulfonat, ptoluensulfonat, xilensulfonat, tartrat și altele de acest fel. Sarea, cea mai preferată, este sarea de clorhidrat.

Sărurile de adiție acidă acceptabile farmaceutic sunt formate, în mod tipic, prin punerea în reacție a unui compus, cu formula I cu o cantitate echimolară sau în exces de acid. Reactanții sunt, în general, combinați într-un solvent organic, de exemplu, metanol, eter etilic, sau benzen. Sarea precipită, în mod normal, din soluție într-un interval, de circa o oră până la 10 zile și poate fi izolată prin filtrare, sau solventul poate fi stripat (separat) prin mijloace clasice.

Baze folosite în mod obișnuit pentru formare de săruri includ hidroxid de amoniu, alcali și hidroxizi de metal alcalino-pământos, carbonați precum și amine primare, secundare și terțiare, alifatice și diamine alifatice. Baze utile,în mod special, la prepararea unor săruri de adiție includ hidroxid de amoniu, carbonat de potasiu, metilamină, dietilamină, etilendiamină și ciclohexilamină. Aceste săruri se prepară, în general, prin punerea în reacție a unui compus.cu formula I, în care R¹ și/sau R³ sunt hidrogen, cu una din bazele de mai sus într-un solvent organic, de exemplu, metanol, eter etilic sau benzen. Sărurile sunt izolate cum s-a descris în paragraful precedent.

Aceste săruri acceptabile farmaceutic au, în general, caracteristici de solubilitate sporită comparativ cu compusul din care ele derivă și astfel, adesea, sunt mai capabile de a fi aduse la o formulare sub formă de lichide sau emulsii.

Compușii cu formula I sunt, preferabil, formulați înainte de administrare, de exemplu, într-o formulare farmaceutică cuprinzând un compus, cu formula I și un suport acceptlabil farmaceutic, undiluant sau un excipient. Aceste formulări farmaceutice sunt preparate prin procedee cunoscute, folosind ingrediente bine cunoscute și ușor disponibile. La prepararea acestor compoziții, ingredientul activ va fi amestecat, de obicei, cu un suport (purtător), diluat cu ajutorul unui purtător sau inclus întrun purtător care poate fi, sub formă de capsulă, săculeț, hârtie sau un alt recipient. Când purtătorul servește ca diluant, el poate fi un material solid, semisolid sau lichid care acționează ca vehicul, excipient sau mediu pentru ingredientul activ. Compozițiile pot fi sub formă de tablete, pilule, pulberi, săculeți, cașete, elixiruri, suspensii, emulsii,

RO 116344 Bl soluții, siropuri, aerosoli, unguenți care conțin, de exemplu, până la 10%, în greutate, compus activ, capsule de gelatină tari sau moi, pansamente dermice, supozitoare, soluții injectabile sterile și pulberi ambalate, sterile.

Unele exemple de suporturi convenabile, excipientele și diluanți includ lactoză, dextroză, zaharoză, sorbitol, manitol, amidoane, gumă, gumă arabică, fosfat de calciu, alginați gumă tragacantă, gelatină, silicat de calciu, celuloză microcristalină, polivinilpirolidonă, polivinilpirolidonă reticulată, celuloză sau derivate ale acesteia, sirop cu apă, metilceluloză, hidroxibezoați metilici și propilici, talc, stearat de magneziu și ulei mineral. Suplimentar, formulările pot include agenți lubrifianți, agenți de umectare (de exemplu, un agent tensioactiv), agenți de emulsifiere și suspendare, agenți de dezintegrare, agenți de conservare, agenți de îndulcire și agenți de aromatizare. Compozițiile, conform invenției, pot fi formulate, astfel, încât să asigure o degajare rapidă, susținută sau întârziată a ingredientului activ după ce a fost administrat pacientului prin aplicarea unor procedee bine cunoscute la stadiul anterior al tehnicii.

Dozajul particular al compusului de formula I, cerut pentru antagonizarea sau blocarea canalelor de calciu în țesut vascular, conform acestei invenții, vor depinde de severitatea stării, traseul de administrare și factori înrudiți care vor fi deciși de către medicul curant. în general, doze zilnice, eficiente vor avea valori cuprinse, între circa 0,1 și circa 1000 mg/zi și, mai specific, între circa 50 și 250 mg/zi. Astfel de dozaje vor fi administrate subiectului care are nevoie de ele, începând de la o dată până la de trei ori pe zi și, mai frecvent, după cum este necesar pentru a trata eficient starea sau simptomul.

De obicei se preferă ca, un compus de formula I, să fie administrat sub forma unei sări de adiție acidă, așa cum se practică la administrarea substanțelor farmaceutice care poartă o grupare bazică, de exemplu, o grupare de piperidină. Pentru astfel de scopuri sunt disponibile următoarele forme de dozaj oral.

în formulările ce urmează, “ingredient activ” înseamnă, compus cu formula I.

Formularea 1: Capsule de gelatină

Capsulele de gelatină tare se prepară folosind următoarele componente:

230

235

240

245

250

255

Ingredient	Cantitate (mg/capsulă)
Ingredient activ	0,1 - 1000
Amidon necurgător	0-650
Amidon curgător, pulbere	0-650
Fluid siliconic, 350 cSt	0- 15

260

Modul de preparare este următorul:

Se amestecă ingredientele, se trec printr-o sită nr.45 mesh, și se umplu capsulele de gelatină tare.

Exemple cu formulări de capsule specifice de raloxifenă care au fost preparate, sunt prezentate mai jos.

Formularea 2: Capsulă de raloxifenă

265

270

Ingredient	Cantitate (mg/capsulă)
Raloxifenă	1
Amidon necurgător	112
Amidon curgător, pulbere	225,3
Fluid siliconic, 350 cSt	1.7

275

RO 116344 Bl

Formularea 3: Capsulă de raloxifenă

Ingredient	Cantitate (mg/capsulă)
Raloxifenă	5
Amidon necurgător	108
Amidon curgător, pulbere	225,3
Fluid siliconic, 350 cSt	1,7

Formularea 4: Capsulă de raloxifenă

Ingredient	Cantitate (mg/capsulă]
Raloxifenă	10
Amidon necurgător	108
Amidon curgător, pulbere	225,3
Fluid siliconic, 350 cSt	1.7

Formularea 5: Capsulă de raloxifenă

Ingredient	Cantitate (mg/capsulă)
Raloxifenă	50
Amidon necurgător	150
Amidon curgător, pulbere	397
Fluid siliconic, 350 cSt	3,0

Formulările specifice de mai sus pot fi modificate în conformitate cu variații rezonabile.

O formulare de tabletă se prepară folosind ingredientele de mai jos:

Formularea 6: Tablete

Ingredient	Cantitate (mg/tabletă)
Ingredient activ	0,1 -1000
Celuloză, microcristalină	0-650
Dioxid de silicon, fumegat	0-650
Acid stearic	0-15

Se amestecă componentele și se comprimă pentru a forma tablete.

Ca alternativă, tablete care conțin, fiecare, 0,1 - 1OOO mg de ingredient activ se prepară după cum urmează:

RO 116344 Bl

320

Formularea 7: Tablete

Ingredient	Cantitate (mg/tabletă)
Ingredient	0,1 -1000
Amidon	45
Celuloză, microcristalină	35
Polivinilpirolidonă	4
(soluție de 10% în apă]
Carboximetil celuloză sodică	4,5
Stearat de magneziu	0,5
Talc	1

325

Ingredientul activ, amidonul și celuloza sunt trecute printr-o sită nr. 45 mesh, și se amestecă bine. Soluția de pirolidonă se amestecă cu pulberile ce rezultă,care apoi sunt trecut eprint-ro sită nr.14 mesh. Granulele astfel produse se usucă, la 50 60°C și se trec printr-o sită nr.18 mesh. Amidonul carboximetil de sodiu, stearatul de magneziu și talcul, trecute în prealabil printr-o sită nr.6O, se adaugă la respectivele granule, care, după amestecare, sunt comprimate pe o mașină de produs tablete.

Suspensii, fiecare conținând 0,1 - 100 mg de ingredient activ per doză de 5 ml, se prepară astfel:

Formularea 8: Suspensii

330

335

Ingredient	Cantitate (mg/5 ml)
Ingredient activ	0,1 -1000 mg
Carboximetil celuloză sodică	50 mg
Sirop	1,25
Soluție de acid benzoic	0,10 ml
Aromă	g.v.
Culoare	G.v.
Apă purificată, până la	5 ml

340

345

Ingredientul activ este trecut printr-o sită nr.45 mesh și se amestecă cu celuloză carboximetil de sodiu și sirop pentru a forma o pastă omogenă. Soluția de acid benzoic, aroma și culoarea sunt diluate cu ceva apă și se adaugă, sub agitare. Apoi, se adaugă suficientă apă pentru a se produce volumul cerut.

în tabelul 1 sunt prezentați compuși ilustrativi ce pot fi folosiți în metodele, conform prezentei invenții.

350

RO 116344 Bl

Tabelul 1

Compus nr.	R¹ și R³	R²	Formă
1	-C(O) F	piperidină	bază
2	-C(O) F	piperidină	HCI
3	-C(O)	piperidină	bază
4	-C(O)	piperidină	HCI
5	-C(0)CH₂CH₂CH₃	piperidină	bază
6	-C(0)CH₂CH₂CH₃	piperidină	HCI
7	-C(0)C(CH₃)₃	piperidină	bază
8	-C(0)C(CH₃)₃	piperidină	HCI
9	-C(0)CH₂C(CH₃)₃	piperidină	bază
10	-C(0)CH₂C(CH₃)₃	piperidină	HCI
11	-C(O) CH₃	piperidină	HCI
12	-C(O)	piperidină	bază
13	H	piperidină	bază
14	H	piperidină	HCI
15	H	pirolodină	bază
16	H	pirolodină	HCI
17	H	hexametilenimină	HCI
18	ch₃	piperidină	HCI

Se dă mai jos metoda la care se referă invenția:

Șobolani Wistar, masculi, (250 - 350 g Laboratoarele Charles River, Portage, Ml) se sacrifică prin dislocare cervicală. Aorta se scoate se curăță de țesut străin și se taie în segmente inelare, fiecare având lungimea.de aproximativ 4...5 mm. La unele țesuturi, endoteliul se îndepărtează prin rotirea segmentului inelar, în jurul vârfului unui forceps, de zece ori. Lipsa de relaxare a țesutului la acetilcolină (lO^M), după contracție cu norepinefrină (1O⁷M), este folosită ca dovadă privind endoteliul dezgolit. Țesuturile cu endoteliu intact se relaxează la acetilcolină cu o relaxare de 88,5 ± 1,6% (n = 11).

Se așază segmentele inelare între două cârlige de oțel inoxidabil și se montează în băi de organe izolate care conțin 10 ml dintr-o soluție tampon de bicarbonat Krebs, modificată cu următoarea compoziție (mM): NaCI, 118,2; Kcl, 4,6; CaCI.2H₂0, 1,6; KH₂P0₄, 1,2; MGS0₄, 1,2; glucoză, 10; și NaHC0₃, 24,8. Soluțiile pentru baie de organe se aerează, cu 95% 0₂/5% C0₂ și se menține, la temperatura, de 37°C. Se plasează țesuturile sub o forță optimă, de 4 g și se echilibrează, timp de o oră cu spălare la fiecare 15 min. Modificările de forță se înregistrează și analizează cu un sistem de culegere a datelor Biopac MP 100 prin traductori Sensotec.

RO 116344 Bl

395

Toate țesuturile sunt tratate inițial cu KCI (67 mM) pentru a stabili viabilitatea. Curbele concentrație - răspuns sunt generate sub formă cumulativă și sunt raportate ca procente dintr-o contracție inițială (67 mM) produsă în fiecare țesut. Un solvent, /^estradiol, 14 sau 16, se adaugă la țesuturi, cu 60 min, înainte de inițierea curbelor concentrație - răspuns, agoniștilor. în studii cu BayK 8644, țesuturile se expun la KCI, 10 mM, înainte de inițierea curbelor concentrație - răspuns pentru Bayk 8644. în fiecare țesut se generează numai o curbă concentrație de agonist - răspuns. Toate rezultatele se exprimă ca medie ± SE unde n reprezintă numărul de inele examinate.

Substanțe chimice

Substanțele 5-HT, acetilcolină, norepirefrină, U46619 și β-estradiol se procură de la firma Sigma Chemical Co. (St.Louis, MO). Bayk 8644 se procură de la Research Biochemicals Inc. (Wayland, MA). Diltiazem, nifedipin, nitredipin și compus nr.14 și 16 (în continuare 14 și 16) sunt sintetizate la Lilly Research Laboratories (Indianapolis, IN).

Rezultate

Răspunsul contracții al aortei de șobolan la norepinefrină, serotonin și tromboxan mimetic, U 46619 depinde în mod clar de endoteliu (fig. 1). Pentru fiecare agonist, răspunsul contracții a fost mai mare în absența endoteliului sugerând că răspunsul contracții este modulat de către un agonist (agoniști) eliberat din respectivul endoteliu.

Derivatul 16 de benzotiofen nesteroidal (10⁶ și 10⁵ M) a inhibat răspunsurile contractile la norepirefrină, serotonin și U 46619 în aorta de șobolan, iar inhibiția răspunsului contracții apare independent de endoteliu (fig. 2 și 3). După cum s-a văzut anterior cu /^-estradiol, 16 este mai puternic în inhibarea răspunsului contracții la serotonin față de norepinefrină sau U 46619.

Ca și cu 16, 14 inhibă, de asemenea, răspunsurile contractile la serotonin (fig.4), inhibiție care este mai mare decât cu norepinefrină (fig.5); efecte care sunt independente de un endoteliu intact.

O contracție indusă de serotonin se cunoaște că folosește calciu extracelular, prin canale de calciu, în funcție de o tensiune electrică, în timp ce o contracție vasculară la norepinefrină este mai puternic dependentă de activarea întoarcerii fosfoinositidei și utilizarea depozitelor intracelulare ale calciului. în acest fel, contracțiile la serotonin sunt mai sensibile la inhibiție de către antagoniști ai canalului de calciu, decât contracțiile la norepinefrină.[Cohen și Berkowitz, Bload Vessels, 13, 139-154 (1976); și Gow et al., Naunyn-Schmiedeberg’s Arch.Pharmacol., 339, 533-539 (1989)]. întrucât 14 și 16 se dovedesc a exercita cea mai mare eficacitate pentru a inhiba răspunsurile contractile induse de serotonin, 14 și 16 pot acționa ca antagonist al canalului de calciu. Din acest motiv s-a analizat eficacitatea, atât a lui 14, cât și a lui 16 pentru a inhiba răspunsurile contractile induse de agonistul de calciu BayK 8644. [Brown et al., Nature, 311, 570 - 572 (1984)].

în absența unui endoteliu intact, inhibiția contracției la BayK 8644 a apărut cu și 16 (fig.7 și 8). Aceste date cu BayK 8644 argumentează inhibiția răspunsului contracții la acest agonist de calciu, atât către 14, cât și de către 16.

Discuție

Capacitatea estrogenului de a bloca canalele de calciu poate contribui la efectele benefice ale estrogenului când este folosit ca terapie de înlocuire la femei aflate

400

405

410

415

420

425

430

435

RO 116344 Bl la postmenopauză. Estrogenul este cunoscut că posedă activitate de antagonist al canalului de calciu, efect care a fost observat în artere coronare de porc și de iepure. Recent au fost încercate câteva grupe pentru a identifica compuși care ar putea imita efectele hemodinamice benefice ale estrogenului, în timp ce minimizează efectele uterotropice sau nedorite ale estrogenului când sunt folosiți ca terapie de înlocuire. în această privință, o serie de compuși parțial agoniști ai structurii de benzotiofen au fost descriși, dintre care 14 și 16 sunt exemple. Deși 14 și 16 posedă afinitate similară pentru receptorul de estrogen ca /^stradiol hidroxi 17, se cunoaște puțin în privința efectelor vasculare. [Uchiumi et al., Intl.J.Cancer, 47, 80-85 (1991). Noi putem demonstra că 14 și 16 pot antagoniza răspunsuri contractile, vasculare induse de către agonistul de calciu Bay 8644, care confirmă activitatea de antagonist a canalului de calciu. în această privință 16 este mai puternic decât 14, concluzie care concordă cu capacitatea lor de a inhiba contracția la agonistul de calciu BayK 8644 și efectul lor inhibitor, pronunțat, asupra răspunsurilor contractile la norepinefrină, serotonin și U 46619.

Activitatea de antagonist al canalului de calciu a lui 14 și 16 nu are probabil legătură cu capacitatea lor de a se lega la receptorul de estrogen, din câteva motive, în primul rând, ambii compuși au avut afinitate similară la receptorul de estrogen (Uchiumi et al., 1991), iar 16 a fost încă mai puternic, ca antagonist al canalului de calciu, decât 14. în al doilea rând, capacitatea de a inhiba răspunsuri contractile au apărut în mod acut în aceste studii, care sugerează că nu a fost necesar un eveniment nuclear.

în acest fel, prezentele studii stabilesc un efect acut in vitro a lui 14 și 16 pentru a inhiba canale de calciu într-un țesut vascular, folosind aorta de șobolan, care demonstrează inhibiția contracției induse a lui BayK-8644, un efect independent al endoteliului. Derivatul 16 de benzotiofen care se leagă cu afinitate similară la receptorul de estrogen ca 17 /2-estradiol, este un antagonist al canalului de calciu mai puternic în vasul vascular decât un estrogen. Mai mult decât atât, aceste studii comparative asigură date suplimentare pentru a susține afirmația că blocada canalului de calciu de către 14 și 16 nu are legătură cu capacitatea acestor agenți de a se lega la receptorul de estrogen. Dacă o inhibiție a canalului de calciu contribuie la efectele clinice ale unui estrogen, atunci 14 și 16 pot avea unele avantaje importante referitoare la estrogen ca terapie de înlocuire la femei în postemenopauză.

Claims

1. Metodă de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu, caracterizat prin aceea că se administrează unui animal cu sânge cald, 0,1 -1000 mg/zi, de la 1 până la 3 ori pe zi, pe cale orală, un compus cu formula (I) sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestui compus:

RO 116344 Bl în care:

R¹ și R³ sunt, în mod independent, hidrogen, C,-C₄ alchil, -00-(0,-CȚ alchil), sau -CHgAr, -CO-Ar, unde Ar este fenil sau fenil substituit;

R² este ales dintr-un grup care constă din pirolidină, hexametilenimină și piperidină, în scopul tratării unor disfuncții cardiace, dereglări vascular cerebrale, dereglări renale și intestinale, și hipertensiunii.

2. Metodă de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că R¹ și R³ sunt, în mod independent, hidrogen, C,-C₄ alchil, -ΟΟ-ίΟ,-Οθ alchil), sau benzii și R² este pirolidină sau piperidină.

3. Metodă de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu, conform revendicării 2,caracterizată prin aceea că R¹ și R³ sunt, în mod independent, hidrogen, alchil și R² este pirolidină sau piperidină.

4. Metodă de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu, conform revendicării 3, caracterizată prin aceea că R¹ și R³ sunt hidrogen și R² este pirolidină sau piperidină.

5. Metodă de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu, conform revendicării 4, caracterizată prin aceea că R² este piperidină.

6. Metodă de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu, conform revendicării 5, caracterizată prin aceea că sarea acceptabilă farmaceutic este clorhidrat.

7. Metodă de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu, conform revendicării 4, caracterizată prin aceea că R² este pirolidină.

8. Metodă de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu, conform revendicării 7, caracterizată prin aceea că R¹ sarea acceptabilă farmaceutic este clorhidrat.

9. Metodă de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu, conform revendicării 1 .caracterizată prin aceea că dereglarea cardiacă pe care o tratează este anghina variabilă, angina de efort, angina instabilă, leziunea miocardului datorată ischemiei de reperfuzie și aritmia.

10. Metodă de antagonizare sau de blocare a canalului de calciu, conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că dereglarea vascular cerebrală pe care o tratează este un spasm de vas cerebral provocat de ruperea arterială, lovire și durere de cap cu migrenă.