RO109815B1 - Procedeu de obtinere a unui extract vegetal, cu activitate antineoplazica si preparate farmaceutice - Google Patents
Procedeu de obtinere a unui extract vegetal, cu activitate antineoplazica si preparate farmaceutice Download PDFInfo
- Publication number
- RO109815B1 RO109815B1 RO93-00096A RO9300096A RO109815B1 RO 109815 B1 RO109815 B1 RO 109815B1 RO 9300096 A RO9300096 A RO 9300096A RO 109815 B1 RO109815 B1 RO 109815B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- components
- process according
- pittosporum
- extract
- phase
- Prior art date
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 27
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 51
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 29
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 19
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 18
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 17
- 241001092090 Pittosporum Species 0.000 claims description 14
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 13
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 10
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 6
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 6
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000000829 suppository Substances 0.000 claims description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 241000167562 Pittosporum tobira Species 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 2
- 238000002803 maceration Methods 0.000 claims description 2
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 claims description 2
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 claims description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 claims 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 22
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 abstract description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 abstract description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 abstract description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 abstract 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 abstract 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 20
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 7
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 3
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241001092092 Pittosporaceae Species 0.000 description 2
- 241000863480 Vinca Species 0.000 description 2
- -1 aliphs Substances 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000001354 calcination Methods 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000002481 ethanol extraction Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 2
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 2
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZFHXNMJGZBQGTO-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethylhexane-1-sulfonic acid Chemical compound CC(C)(C)CCCCS(O)(=O)=O ZFHXNMJGZBQGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 241000189665 Colchicum autumnale Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 206010050789 Hypochromasia Diseases 0.000 description 1
- LPGWZGMPDKDHEP-HLTPFJCJSA-N Leurosine Chemical compound C([C@]1([C@@H]2O1)CC)N(CCC=1C3=CC=CC=C3NC=11)C[C@H]2C[C@]1(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC LPGWZGMPDKDHEP-HLTPFJCJSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005089 vacuolized cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Description
Prezenta invenție se referă la un procedeu de obținere a unui extract vegetal cu activitate antineoplazică și preparate farmaceutice cu acest extract.
Una din cele mai importante căi de cercetare este îndreptată spre tratarea îmbolnăvirilor neoplazice folosind chimioterapia antitumorală. Agenții de antiproliferare, care au fost izolați până în prezent, au origini din cele mai variate și caracteristici chimice eterogene. Printre acești agenți de anti- proliferare sunt anumite substanțe extrase din plante, cum ar fi colchicina din Colchicum Autumnale și vincaleucoblastina din Vinca Roșea. Deși aceste substanțe de antiproliferare sunt mai mult sau mai puțin prevăzute cu o anumită activitate antitumorală specifică, selectivitatea lor față de celulele degenerate este în general destul de scăzută. Pericolul care decurge de la posibilitatea interferării lor cu metabolismul celulelor sănătoase, constituie astfel un obstacol important în utilizarea lor pe scară largă.
Sunt cunoscute procedee de obținere a unor extracte vegetale din plante, cu acțiune antineoplazică, cum ar fi, procedeul de extracție din planta Vinca Rosae, ce constă în aceea că materialul vegetal uscat se extrage cu soluție apoasă de H2SO4 N/25 la pH 5 ... 6, apoi pH 4 ... 5 și pH 3 ... 4, după care soluțiile extractive se reunesc și se supun extragerii succesive cu un amestec de benzen : cloroform (9 : 1) în aceleași condiții de extragere (pH) ca la extragerea cu soluție apoasă, după care în final extractele obținute se reunesc și se supun liofilizării și se aduc la pH 6. Se cunoaște, de asemenea, procedeul de obținere a unui extract din planta Vinca Minor ce constă în aceea că planta uscată se extrage cu metanol concentrat, sub agitare și la temperatura de 40 ... 50°C în contracurent, se concentrează, se debalastează cu soluție de HCI 1% și apoi se alcalinizează cu NH4OH la pH 9 ... 10, se extrage cu dicloretan, se concentrează la sec și se reia cu benzen, după care se cromatografiază pe coloană de A12O3 și se reia cu ciclohexambenzen (1:7).
Prezenta invenție face posibil să se învingă limitările menționate, prin aceea că prevede un agent antineoplazic chimioterapeutic de origine vegetală și prevăzut cu o mare activitate antitumorală selectivă și un nivel de toxicitate mult mai scăzut decât al altor substanțe antitumorale.
Procedeul, conform invenției, constă în aceea că părți și/sau produse din plantele din familia Pittosporaceae, în orice stadiu de dezvoltare sau Ia maturitate, sunt extrase prin macerare într-un solvent organic, cu eventuala agitare sau amestecare a soluției conținând extractul cu un alt solvent cel puțin parțial miscibil cu primul pentru a distribui componentele extractului în fazele formate, eventual tratarea fiecărei faze, independent una de alta, cu cel puțin un lichid organic având proprietăți de solvent pentru cel puțin una din componentele extractului, urmată de filtrarea oricărei suspensii formate și dizolvarea fazei solide într-un solvent adecvat, eventual separarea componentelor din fiecare fază lichidă și colectarea componentelor separate cu activitate antineoplazică și a celor fără activitate antineoplazică, respectivele extracte fiind în mod facultativ uscate și purificate înainte de fiecare etapă a procedeului. Plantele sunt din genul Pittosporum și sunt alese dintre ondulatum, Pittosporum coriaceum, Pittosporum viridicolor, Pittosporum rhombipholium, Pittosporum engenoides, Pittosporum crossifolium, Pittosporum tobira sau amestecuri ale acestora. Solventul este ales din grupul alcoolilor și de preferință este etanolul, iar raportul volumetric dintre solventul organic și părți din plantă este de 1 : 10 și 10:1. Durata tratamentului este cuprinsă între 5 min și 3 luni, iar temperatura este cuprinsă între 5°C și 100°C. Separarea componentelor extractului se face prin cromatografie pe o coloană cu silicagel sau pe o coloană preparativă HPLC folosind etanol, iar componentele au timpi de retenție în jurul valorilor de 1,157, 1,545, 1,883, 2,051, 2,273, 2,572 și 2,743 ei fiind separați și colectați folosind tehnica HPLC. După extracția cu etanol, soluția etanolică este agitată cu cloroform pentru a forma două faze, și anume, faza alcool : cloroform de culoare verde-închis, în care sunt prezenți compușii cu activitate antineoplazică și o fază apoasă de culoare galben-portocaliu. Separarea componentelor cu activitate antineoplazică se face cromatografie, de preferință prin HPLC, după uscarea fazei alcool: cloroform și resolubilizarea solventului în metanol, și se colectează componentele având un timp de retenție de 1,969, 2,296 și 2,756. Soluția alcool: cloroform este evaporată până ce volumul se reduce la 1/35 din volumul inițial al soluției alcoolice și se adaugă alcool izopropilic, pentru a forma o suspensie care se filtrează, faza solidă se usucă și se macină, obținându-se o pulbere verzuie, și faza solidă se solubilizează în amestec de etanol: apă (4:1), este trecută printr-o coloană cromatografică cu cărbune activ, obținând o soluție limpede și fără culoare, care, după concentrare, este cristalizată prin adăugare de alcool izopropilic, după care se usucă, obținându-se o pulbere albă, care, prin HPLC, prezintă două picuri principale cu valorile RT de 1,131 (suprafața 87,54%) și 1,551 (suprafața 6,16 %).
Componentele solidului dizolvate în metanol sunt separate prin HPLC și apoi colectate componentele care au un timp de retenție în jurul valorilor de 1,157, 1,545 și 2,264. In continuare componentele care au activitate antineoplazică sunt folosite pentru prepararea unor produse farmaceutice într-o formă aleasă din grupul format din săruri, compuși, complecși sau amestecurile acestora, pentru a le conferi solubilitatea în apă.
Preparatele farmaceutice conțin cel puțin unul din principiile active cu activitate antineoplazică, obținute cum s-a arătat mai sus, și sunt sub formă de soluție apoasă, capsule, supozitoare, ovule sau unguente, alifii, creme sau gel care sunt destinate administrării sub formă parenterală, orală, rectală, vaginală sau locală.
Fiolele conțin 0,1 ... 2,5 g, de preferință 0,1 ... 1,5 g și mai preferabil 0,2 ... 1 g principiu activ. Capsulele conțin 0,1 ... 2 g, de preferință 0,8 ... 1,2 g principiu activ. Supozitoarele conțin 0,2 ... 2,5 g, de preferință 0,3 ... 1,3 g sau 1,2 ... 1,7 g principiu activ. Ovulele conțin 0,1 ... 2,5 g, de preferință 0,5 ...
2,5 g sau 0,3 ... 1,7 g principiu activ. Unguentul, alifia, crema sau gelul conțin 0,5 ... 12 %, de preferință 3 ... 7 % în greutate principiu activ.
Avantajul prezentei invenții este acela că se obțin un extract vegetal și produse farmaceutice cu o bună activitate antineoplazică.
Plantele din familia Pittosporaceae sunt de preferat cele din genul Pittosporum. In acest sens, plantele pot fi selectate din grupele care cuprind plantele arătate mai sus.
Solventul poate fi un alcool. Rezultatele bune s-au obținut folosind alcoolul etilic. Raportul volumetric între solventul organic și plantele arătate mai sus și care sunt tratate pentru extracție este de preferat cuprins între 1:10 și 10:1.
Timpii de tratament sunt de preferat cuprinși între 5 min și 3 luni, iar temperaturile de tratament pot varia, de preferat între 5°C și 100°C.
Separarea componentelor din extract poate fi, de preferat, de tip cromatografie. Rezultate bune au fost obținute utilizând cromatografia pe o coloană de silicagel sau pe o coloană EPLC preparativă.
Extracția poate fi realizată utilizând etanol și colectând componentele care au timpi de retenție în HPLC în jurul valorilor 1,157, 1,545, 1,883, 2,051, 2,273, 2,572 și 2,743. (Trebuie de menționat că testele analitice în HPLC, atât în acest caz, cât și în următoarele cazuri, au fost obținute utilizând un cromatograf cu o coloană de 125 mm. 4 mm RP 18 și o fază mobilă conținând metanol : apă (80:20) și o lungime de undă de 210 nm).
După extracție cu etanol, soluția astfel obținută poate fi agitată cu cloroform formând două faze: o fază alcool - cloroformică de culoare verde-intens și o fază apoasă de culoare galben-portocaliu. In acest caz componentele care au activitate antineoplazică se găsesc în faza alcool-cloroform. Colectarea acestor componente s-a realizat cromatografie după ce s-a uscat faza alcool-cloroformică și după ce s-a resolubilizat substanța solidă în metanol. Realizând cromatografia în soluție metanolică și utilizând tehnica HPLC, au fost colectate componentele care au timpi de retenție în jurul valorilor de 1,969, 2,296 și 2,756. Soluția alcool-cloroformică poate fi concentrată prin evaporare și se poate adăuga alcool izopropilic pentru a forma o suspensie ce poate fi filtrată. Faza solidă a fost uscată la cald și apoi transformată în pulbere (la mojar). Apoi, după ce a fost resolubilizată în solventul etanol: apă, se poate purifica utilizând o coloană cromatografică de cărbune activ. Două fracții solide (impură și pură) dizolvate în amestecul de etanol: apă sau în metanol, pot fi cromatografiate utilizând tehnica HPLC și colectând componentele cu timpi de retenție în jurul valorilor de 1,157, 1,545 și 2,264.
Substanțele și compozițiile având o activitate antineoplazică pot fi tratate pentru a forma săruri, amestecuri sau complecși, în scopul de a-i face solubili în apă. Preparatele farmaceutice conțin cel puțin unul din principiile active ale substanțelor sau compozițiilor selectate din grupările de substanțe sau compoziții care au activitate antineoplazică, care se obțin prin procedeul descris mai sus, sau combinații ale acestora.
Invenția se referă, în plus, la utilizarea componentelor care se obțin utilizând procedeul de extracție, separarea, colectarea arătate mai sus, fie singure, fie în combinație, pentru prepararea medicamentelor utilizate în tratamentul diferitelor patologii, altele decât cele neoplazice.
Până acum obiectele prezentei invenții au fost descrise într-o manieră generală. Cu ajutorul exemplelor următoare, va fi dată o descriere mai detaliată pentru a clarifica întinderea, caracteristicile, avantajele și metodele de operare ale invenției.
Exemplul 1. Metodă pentru extracția și purificarea principiilor active kg de fructe necoapte de Pittosporum Tobira au fost mârunțite fin și infuzate, la temperatura camerei, cu o cantitate suficientă de alcool etilic de 95°C pentru a acoperi fructele (aproximativ 1 : 1 în volume). Amestecul este lăsat apoi să stea cel puțin 30 de zile, după care s-au filtrat 100 ml extract alcoolic care s-a introdus într-o pâlnie de separare împreună cu același volum de cloroform. După o agitare de mai multe ori, are loc o separare care este completă după 24 h de la amestecare; și anume, la partea inferioară a pâlniei s-a separat o soluție alcool-cloroformică de culoare intensă verde, iar în partea superioară a pâlniei o soluție apoasă de culoare galben-portocaliu (fracțiunea solubilă, care va fi notată în continuare cu OSF), care conține substanțele hidrosolubile extrase din apa prezentă inițial în fruct. Fracțiunea OSF este prezentă în cantități de aproximativ 20% în volume și este formată aproape în exclusivitate de componente care au un RT în HPLC de 1,14 (suprafață de 3,45%), 1,440 (suprafață de 24,46 %) și 1,593 (suprafață de 61,93%). Substanța OSF, egală cu aproximativ 73% în greutate substanță uscată din extractul alcoolic, este formată dintr-o pulbere alb-gălbuie, care nu este numai complet inactivă față de tumorile experimentale, dar ajută evoluția lor și cauzează o evoluție mai rapidă a bolii. Această substanță este îndepărtată. In continuare, soluția alcool-cloroformică este evaporată Ia 30°C întrun rotavapor și apoi uscată. Se obține o substanță amorfă, de culoare verde-închis, care, după ce a fost solubilizată în alcool metilic (1 mg/l) este analizată în HLPC și arată o concentrație notabilă a picurilor active cu timpi de retenție variind de la 1,969 (suprafață de 7,83%) la 2,296 (suprafața de 40,12%) la 2,756 (suprafața de 1,47%).
Exemplul 2. Purificarea principiilor active
Soluția alcool-cloroformică obținută după operațiile descrise în exemplul 1 (preparată din extractul alcoolic total, fără OSF) este evaporată într-un balon, într-un rotavapor la temperatura de 45 °C până este concentrată la un volum de aproximativ 30 ml(aproximativ 1/35 din cantitatea totală de la care s-a pornit), de extract alcoolic. In acest moment, este adăugat în balon, o cantitate de alcool izopropilic egală cu 30% din extractul alcoolic inițial (30ml). Se formează o suspensie ce conține o parte din substanțele obținute în extractul alcoolic total, dar fără OSF, și care este solubilă atât în etanol, cât și în metanol, dar nu este prea solubilă în alcool izopropilic. Suspensia astfel obținută este supusă rapid pe hârtie de filtru. Precipitatul obținut, de pe hârtia de filtru, este uscat la temperatura de 45°C, și după uscare este mărunțit într-un mojar. Se obțin aproximativ 1500 mg de pulbere galben-verzuie. Această pulbere (care în continuare va fi numită CIDI) este solubilizată în metanol și apoi examinată în HPLC după metode cunoscute, arătând RTS de 1,157 (suprafață 78,83%), 1,545 (suprafață 16,25%) și 2,264 (suprafață 4,91%).
In mod alternativ, utilizând o coloană Supercosil LC-NH2-5 μ-sferică, cu faza mobilă CH3-CN-H2O (3:1) pentru o viteză de curgere de 1,5 ml/m și un detector de UV la 217nm, sau obținut următoarele valori pentru RT: l,889(concentrație 53,88%), 2,640 (20,89%), 3,145(4,61%), 3,420(5,08), 3,942(6,16),
4,722(4,53%), 5,255(3,253%), 6,287(0,90%) și
6,982(0,66%).
Pe o coloană Chromopack-Lichrosorb
RP 18-10 μ-neregulată, cu același eluant, debit și market, s-au obținut următoarele picuri : 1,46 (concentrație 65,98%), 1,965 (concentrație 20,87%), 2,535(concentrație 1,86%), 2,704 (concentrație 2,05%), 3,097 (concentrație 1,74%), 3,39 (concentrație 3,38%), 4,324 (concentrație 0,85%), 4,609 (concentrație 0,93%), 9,597 (concentrație 0,88%) și 10,017 (concentrație 1,42%).
Substanța CIDI prezintă un reziduu la calcinare de 3,17%. Analiza elementară, exprimată în procente în greutate (fără a se lua în calcul și reziduul), este următoarea: C = 54,25%; H = 7,58% ; O = 38,17 % cu o formulă empirică descrisă ca C]5H25Og și un punct de topire(cu descompunere) 196 + 222°C. Spectrul IR, în mediu KBr, concentrație 1 mg/100 mg, arată următoarele benzi observabile: la 3400 cm'1 vibrația de întindere a OH-ului asociat ; la 2960 cm’1 vibrații de întindere asimetrică a CH3 ; la 2920 cm'1 vibrația de întindere asimetrică a CH2; Ia 1720 cm'1 vibrația de întindere a legăturii C = O ; la 1610 cm’1 vibrația de întindere asimetrică a C = O din COO' ; la 1460 cm1 vibrația de deformație a CH3 ; la 1380 cm’1 vibrația de deformație a CH3 (tipică pentru gruparea OCOCH3); la 1250 cm-1 vibrația de deformație a OH ; la 1150 cm'1 , 1080 cm’1 și la 1040 cm' 1 vibrația de întindere a C-O.
Spectrul UV(Cu spectrofotometru vizibil) arată următoarele :
Soluția în CH3OH-H,O(4:1), concentrație 6.102 mg/ml, absorbție maximă la 202 nm; absorbția descrește rapid la 260 nm și rămâne constantă în limitele 260 + 330 nm și apoi descrește din nou.Soluția în CH3CNH2O(3:1), concentrație 6.10'2 mg/ml, absorbția descrște rapid de la 200 la 260 nm, rămâne aproape constantă la valoarea 260 + 330 nm și apoi descrește din nou.
Pulberea CIDI este insolubilă în acetonă, benzen, cloroform, eter etilic, eter de petrol, alcool etilic, alcool izopropilic și ester solubilă în alcool metilic și apă. Soluția apoasă de. CIDI are pH = 6,5. Doza letală LD50 la șoareci Cri: CD-l(ICR) ; BR este 1274,9 mg/kg limitele de referire 1041,2 - 1561,0 mg/kg) oral și 25 mg/kg(limitele de referință 23,0 ... 27,2 mg/kg) intraperitoneal.
Exemplul 3. Operație suplimentară de purificare a principiilor active g pulbere de CIDI, obținută conform procedeului descris în exemplele 1 și 2, au fost solubilizate în 1000 ml soluție amestec alcool etilic:apă(4:l), obținându-se o soluție de concentrație 1%, de culoare verde. S-a preparat o coloană cromatografică cu un diametru de 4,5 cm prevăzută cu un separator poros. Pe separator este întins un strat de vată, apoi un strat de nisip de aproximativ 3 cm înălțime. Se introduce, în continuare, o suspensie ce conține 35 g cărbune activ în etanol și după ce cărbunele a fost îndesat foarte bine, soluția de pudră CIDI(solubilizată așa cum s-a arătat mai sus) este trecută prin această coloană cromatografică. După ce s-a trecut toată această soluție, coloana cromatografică a fost spălată prin trecerea a 1000 ml solvent alcool etilic:apă (4:1). Se obține o soluție limpede și fără culoare care este concentrată la limita maximă, într-un rotavapor și la temperatura de 45°C. După adăugarea de alcool izopropilic are loc cristalizarea substanței, care a fost uscată încă odată în rotavapor. Această substanță s-a măcinat întrun mojar și s-a obținut o pulbere albă care în continuare se va numi ca CIDI pură.
Pudra de CIDI pură, solubilizată în alcool metilic și examinată în cromatografie HPLC uzuală, arată două picuri principale cu valoarea RT de 1,131 (87,54% suprafață) și 1,551 (6,16 % suprafață). Din contră, HPLC cu detector UV Ia 217 nm, faza mobilă CH3-CNH2O(3:1), viteza de curgere 1,5 ml/ml arată următoarele RT(picuri principale):
Pe coloană sferică Supercosil LC-NH2-5 μ; 1,885 (concentrație 19,6%) și 16,259 (concentrație 67,51% 7, iar pe o coloană neregulată Chrompack-Lichrosorb RP 18 - 10 μ; 1,617 (concentrație 87,74%7, 1,985 (concentrație 3,69%) și 2,134 (concentrație 2,20%).
CIDI pură este sub formă solidă, de culoare albă, solubilă în apă și are un reziduu la calcinare de 3,05%.
Analiza elementară, în procente în greutate (fără a lua în calcul și reziduul )este de: C = 48,82% , H = 7,06% și O = 44,12%, cu o formulă empirică C6H10O4 și punct de topire (cu descompunere) de 205 ... 244°C. Spectrul IR este, practic, același cu cel al produsului CIDI. Spectrul UV (Spectrofotometru vizibil) arată; soluția în CH3OH109815
H2O, concentrație 6,0'2 mg/ml are maxim de absorbție la 203 nm; absorbția descrește rapid și practic nu s-a observat nici o absotbție desupra lui 260 nm, iar soluția în CH3CN -H2O(3:1), concentrație 6,10‘2mg/ml, absorbția descrește rapid de la 200 la 260 nm și apoi rămâne constantă la un nivel apropiat de zero.
Solubilitatea CIDI pur este aceași cu cea a CIDI și de asemenea pH-ul soluției apoase este același.
LD50 intraperitoneal a CIDI pur pe șobolani Cri: CD-1(ICR), BR este de 20,2 mg/kg (limitele de referință 17,8 ... 22,0 mg/kg). Spectrele RMN au fost realizate cu un aparat Brukner AC 200 la 200 MHz(proton) și 50 MHz(carbon). Mostrele au fost preparate prin dizolvarea a 90 mg de produs în 0,60 ml de DMSO - d6 cu adăugare de 10 mg de sare de sodiu de 3-(trimetiletilil)-propansulfonic acid (DSS) ca standard intern. Pentru spectrul Ή au fost acumulați 1000 pasageri, prin utilizarea unui impuls de 30°, FID a fost supus unei multiplicări Gausiene în scopul creșterii rezoluției. Schimbarea protonilor mobili a fost realizată prin adăugare de D2O și CH3COOH. Pentru spectrele cu 13C au fost acumulați 6200 pasageri(CIDI) și 14.900 pasageri (CIDI pur), prin utilizarea unui impuls de 90°, cu decuplare enteronucleară în CPD.
Din examinarea spectrelor ’H reiese prezența diferiților protoni mobili în catena 3+5 ppm. Prezența unui număr de protoni de tip alchilic este ramarcată, protonii alchilici descrescând la catenele mai mici. Posibila prezență a câtorva protoni vinilici și absența protonilor aromatici. Spectrele 13C confirmă datele de mai sus, cu prezența unui mare număr de carbon alchilici mai mult sau mai puțin substituiți. Prezența câtorva picuri în catena vinilică și a câtorva picuri în lanțul carbonil sunt notate, gruparea carbonilică fiind de tipul acid sau ester. Examinarea spectrelor nu evidențiază diferențe substanțiale între cele două amestecuri. însă, o diferență în procentul diferitelor componente ar părea să fie posibil.
Exemplul 4. Separarea cromatografică a principiilor active
Soluția alcool etilic-cloroformică, obținută în conformitate cu cele prezentate în exemplul 1, este uscată într-un rotavapor și apoi resolubilizată într-o cantitate mică de alcool metilic(100 ml). Utilizând această soluție, separarea cromatografică este efectuată atât pe o coloană de silicagel, cât și cu foarte multă grijă, pe o coloană HPLC preparativă. Fracțiunile pure, care s-au obținut astfel, corespund picurilor 1,157,1,545,1,883,2,051, 2,273, 2,572 și 2,743.
S-au efectuat teste pentru evidențierea activității antineoplazice, atât in vitro, cât și in vivo.
Substanțele și/sau compozițiile obținute conform cu exemplele precedente, fie solubile sau fie după ce au fost solubilizate utilizând agenți activi de suprafață (Polisorbat 80 sau Geronol) în apă, arată activitate antineoplazică pronunțată, împreună cu nivelurile de toxicitate acceptabile și o absență a activității imunopresante. Activitatea antineoplazică selectivă notabilă asupra celulelor tumorale a fost demonstrată la un nivel histologic, atât in vitro cât și in vivo, prin evidente schimbări în celulele tumorale care cresc în volum, conglutinează, arată o expansiune și deformare a membranei celulare, o citoplasmă extrem de vacuolată și spumoasă cu hipocromia cromatinei nuclear și cu nucleoni decolorați. Dovada înaltei selectivități posedată de aceste substanțe este dată de faptul că toate leziunile enumerate mai sus sunt absente total la celule normale care au fost supuse aceluiași tratament.
In vivo, activitatea antineoplazică a substanțelor menționate mai sus a fost testată pe 180 șoareci SWISS, în general utilizând o doză de la 2 la 25 mg/zi- în funcție de substanța utilizată-administrată intraperitoneal 8 zile consecutiv, începând cu ziua următoare a transplantului. In comparație cu o valoare medie a ratei de supraviețuire de 25,8 zile la animalele de control, respingerea tumorii a fost observată la 90% din animalele tratate, care sunt considerate ca singure supraviețuitoare.
Pentru aplicații terapeutice, substanțele conform invenției și sărurile lor, amestecuri sau complecși sunt utilizate de preferință sub formă de soluții apoase pentru injecții intramusculare, intravenoase sau intracavitare.
Exemplul 5. La obținerea preparatelor farmaceutice se folosesc substanțele active, în următoarele concentrații :
Fiolele conțin 0,1 ... 2,5 g, de preferință 0,1 ...
1,5 g și mai preferabil 0,2 ... 1 g principiu activ.
Capsulele conțin 0,1 ... 2 g, de preferință 0,8 ...
1,2 g principiu activ.
Supozitoarele conțin 0,2 ... 2,5 g, de preferință 0,3 ... 1,3 g sau 1,2 ... 1,7 g principiu activ.
Ovulele conțin 0,1... 2,5 g, de preferință 0,5 ...
2,5 g sau 0,3 ... 1,7 g principiu activ.
Unguentul, alifia, crema sau gelul conțin 0,5 ... 12 %, de preferință 3 ... 7% în greutate principiu activ.
Claims (17)
- Revendicări1. Procedeu pentru obținerea unui extract cu activitate neoplazică, caracterizat prin aceea că părți și/sau produse din plantele din familia Pittosporacea- în orice stadiu al dezvoltării lor sau la maturitate, sunt extrase prin macerare într-un solvent organic, cu eventuala agitare sau amestecare a soluției conținând extractul cu un alt solvent, cel puțin parțial miscibil cu primul, pentru a distribui componentele extractului în fazele formate, eventual tratarea fiecărei faze, independent una de alta, cu cel puțin un lichid organic având proprietăți de solvent pentru cel puțin una din componentele extractului, urmată de filtrarea oricărei suspensii formate și dizolvarea fazei solide într-un solvent adecvat, eventual separarea componentelor din fiecare fază lichidă și colectarea componentelor separate cu activitate neoplazică și a celor fără activitate antineoplazică, respectivele extracte fiind, în mod facultativ, uscate și purificate, înainte de fiecare etapă a procedeului.
- 2. Procedeu, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că plantele sunt din genul Pittosporum, alese din grupele conținând Pittosporum ondulatum, Pittosporum coriaceum, Pittosporum viridicolor,Pittosporum rhombipholium, Pittosporum engenoides, Pittosporum crossifolium,Pittosporum tobira sau amestecuri ale acestora.
- 3. Procedeu, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că solventul este ales din grupul alcoolilor, de preferință etanol, iar raportul volumetric solvent organic : părți din plantă care urmează a fi tratate este cuprins între 1:10 și 10:1.
- 4. Procedeu, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că durata tratamentului este cuprinsă între 5 min și 3 luni și temperatura poate fi între 5°C și 100°C.
- 5. Procedeu, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că separarea componentelor extractului se face prin cromatografie pe o coloană cu silicagel sau pe o coloană preparativă HPLC.
- 6. Procedeu, conform revendicărilor 1 și 5, caracterizat prin aceea că separarea componentelor extractului se face folosind etanol și componentele au timpii de retenție în jurai valorilor de 1,157, 1,545, 1,883, 2,051, 2,572 și 2,743, ei fiind separați și colectați folosind tehnica HPLC.
- 7. Procedeu, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că extracția se efectuează cu etanol, soluția etanolică este agitată cu cloroform, pentru a forma două faze, o fază alcool-cloroform de culoare verde, intens și o fază apoasă de culoare galben-portocaliu, compușii cu activitate antineoplazică fiind prezenți în faza verde-intens.
- 8. Procedeu, conform revendicărilor 1 și 7, caracterizat prin aceea că separarea componentelor cu activitate neoplazică se face cromatografie, de preferință prin HPLC, după uscarea fazei alcool-cloroform și resolubilizarea solventului în metanol, și se colectează componentele având un timp de retenție de 1,969, 2,296 și 2,756.
- 9. Procedeu, conform revendicărilor 1 și 7, caracterizat prin aceea că soluția alcoolcloroform este evaporată până ce volumul se reduce la 1/35 din volumul inițial al soluției alcoolice și se adaugă alcool izopropilic, pentru a forma o suspensie care se filtrează, faza solidă se usucă și se macină, obținându-se o pulbere verzuie și faza solidă se solubilizează în alcool etilic-apă (4:1), este trecută printr-o coloană cromatografică cu cărbune activ, obținând o soluție limpede, fără culoare, care, după concentrare este cristalizată prin adăugare de alcool izopropilic, după care se usucă, obținându-se o pulbere albă, care prin HPLC prezintă două picuri principale cu valorile RT de 1,131 (suprafața 87,54%) și 1,551 (suprafața 6,16%).
- 10. Procedeu, conform revendicărilor 1, 7 și 9, caracterizat prin aceea că componentele solidului dizolvat în metanol sunt separate prin HPLC și colectate componentele care au un timp de retenție în jurul valorilor de 1,157, 1,545 și 2,264.
- 11. Procedeu, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că componentele având activitate antineoplazică, sunt folosite pentm prepararea unor produse farmaceutice, într-o formă aleasă din grupul format din săruri, compuși, complecși sau amestecuri ale acestora, pentru a le conferi solubilitate în apă. 5
- 12. Preparate farmaceutice, caracterizate prin aceea că cel puțin unul din principiile active reprezintă un component cu activitate neoplazică, obținut prin procedeul conform revendicărilor 1 -s- 11, preparate sub io formă de soluție apoasă, capsule, supozitoare, ovule sau unguente, alifii, creme sau gel, destinate administrării sub formă parenterală, orală, rectală, vaginală sau local.
- 13. Preparat farmaceutic, conform 15 revendicării 12, caracterizat prin aceea că este preparat în fiole, fiecare fiolă conținând între 0,1 și 2,5 g, de preferință între 0,1 și 1,5 și mai preferabil între 0,2 și 1,0 g principiu activ. 2 0
- 14. Preparat farmaceutic, confonn revendicării 12, caracterizat prin aceea că este sub formă de capsulă, fiecare capsulă conținând între 0,1 și 2,0 g, de preferință între 0,8 și 1,2 g principiu activ.
- 15. Preparat farmaceutic, conform revendicării 12, caracterizat prin aceea că este sub formă de supozitoare, fiecare supozitor conținând între 0,2 și 2,5 g, de preferință între 0,3 și 1,3 g sau între 1,2 și 1,7 principiu activ.
- 16. Preparat farmaceutic, conform revendicării 12, caracterizat prin aceea că este sub formă de ovule, fiecare ovul conținând între 0,1 și 2,5 g, de preferință între 0,5 și 2,5 g sau între 0,3 și 1,7 g principiu activ.
- 17. Preparat farmaceutic, conform revendicării 12, caracterizat prin aceea că este sub formă de unguent, alifie, cremă sau gel, fiecare conținând între 0,5 și 12%, de preferință între 3 și 7% în greutate principiu activ.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITRM910372A IT1245700B (it) | 1991-05-29 | 1991-05-29 | Chemioterapico antineoplastico di origine vegetale, ad elevata selettivita' e tossicita' fortemente ridotta e procedimento per la sua preparazione |
| PCT/IT1992/000057 WO1992021359A1 (en) | 1991-05-29 | 1992-05-22 | Antineoplastic chemotherapeutic of plant origin, having high selectivity and greatly reduced toxicity, and process for the preparation thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO109815B1 true RO109815B1 (ro) | 1995-06-30 |
Family
ID=11400166
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RO93-00096A RO109815B1 (ro) | 1991-05-29 | 1992-05-22 | Procedeu de obtinere a unui extract vegetal, cu activitate antineoplazica si preparate farmaceutice |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5558866A (ro) |
| EP (1) | EP0541780B1 (ro) |
| JP (1) | JPH0784390B2 (ro) |
| KR (1) | KR960014790B1 (ro) |
| AT (1) | ATE142886T1 (ro) |
| AU (1) | AU654034B2 (ro) |
| BG (1) | BG61639B1 (ro) |
| BR (1) | BR9205264A (ro) |
| CA (1) | CA2087600C (ro) |
| DE (1) | DE69213886T2 (ro) |
| DK (1) | DK0541780T3 (ro) |
| ES (1) | ES2094914T3 (ro) |
| FI (1) | FI101042B (ro) |
| GR (1) | GR3021825T3 (ro) |
| HU (1) | HUT64233A (ro) |
| IE (1) | IE921545A1 (ro) |
| IL (1) | IL101908A (ro) |
| IT (1) | IT1245700B (ro) |
| MX (1) | MX9202547A (ro) |
| NO (1) | NO309306B1 (ro) |
| PL (1) | PL168348B1 (ro) |
| PT (1) | PT100526B (ro) |
| RO (1) | RO109815B1 (ro) |
| RU (1) | RU2104707C1 (ro) |
| UA (1) | UA26321C2 (ro) |
| WO (1) | WO1992021359A1 (ro) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AUPP574298A0 (en) * | 1998-09-07 | 1998-10-01 | Jacobs, David Ian | Pharmaceutical preparation |
| US7704957B2 (en) * | 2001-04-09 | 2010-04-27 | Rural Development Administration | Composition for inhibiting HIV activity extracted from Paecilomyces sp. (Tochu-kaso) J300 |
| US20090240684A1 (en) * | 2007-06-02 | 2009-09-24 | Steven Newell | Image Content Categorization Database |
| EP2219620B1 (en) * | 2007-11-13 | 2017-07-19 | Surmodics, Inc. | Viscous terpolymers as drug delivery platform |
| US20100158978A1 (en) * | 2008-12-23 | 2010-06-24 | Peter Markland | Bioactive spray coating compositions and methods of making and uses thereof |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1249447B (it) * | 1991-08-28 | 1995-02-23 | Arrigo Claudio D | Farmaco antineoplastico di estrazione vegetale. procedimento per la sua preparazione. |
-
1991
- 1991-05-29 IT ITRM910372A patent/IT1245700B/it active IP Right Grant
-
1992
- 1992-05-18 IL IL101908A patent/IL101908A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-05-22 PL PL92297647A patent/PL168348B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1992-05-22 KR KR1019930700247A patent/KR960014790B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-05-22 HU HU9300244A patent/HUT64233A/hu unknown
- 1992-05-22 US US07/961,695 patent/US5558866A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-22 WO PCT/IT1992/000057 patent/WO1992021359A1/en active IP Right Grant
- 1992-05-22 ES ES92913139T patent/ES2094914T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-22 RU RU93004848A patent/RU2104707C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1992-05-22 EP EP92913139A patent/EP0541780B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-22 DE DE69213886T patent/DE69213886T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-05-22 DK DK92913139.9T patent/DK0541780T3/da active
- 1992-05-22 JP JP5500363A patent/JPH0784390B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-22 CA CA002087600A patent/CA2087600C/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-05-22 AT AT92913139T patent/ATE142886T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-05-22 RO RO93-00096A patent/RO109815B1/ro unknown
- 1992-05-22 UA UA93004208A patent/UA26321C2/uk unknown
- 1992-05-22 BR BR9205264A patent/BR9205264A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-05-22 AU AU21506/92A patent/AU654034B2/en not_active Ceased
- 1992-05-28 MX MX9202547A patent/MX9202547A/es not_active IP Right Cessation
- 1992-05-28 PT PT100526A patent/PT100526B/pt not_active IP Right Cessation
- 1992-07-01 IE IE154592A patent/IE921545A1/en not_active Application Discontinuation
-
1993
- 1993-01-27 FI FI930336A patent/FI101042B/fi active
- 1993-01-27 NO NO930271A patent/NO309306B1/no unknown
- 1993-01-28 BG BG97371A patent/BG61639B1/bg unknown
-
1996
- 1996-11-28 GR GR960403216T patent/GR3021825T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2349337C2 (ru) | Фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины, способ ее получения и ее применение | |
| CN101787061A (zh) | 曲札茋苷在制备防治心脑缺血疾病制剂中的应用及其制备方法 | |
| CN101343225A (zh) | 高纯度二咖啡酰奎宁酸类化合物的制备方法 | |
| RO109815B1 (ro) | Procedeu de obtinere a unui extract vegetal, cu activitate antineoplazica si preparate farmaceutice | |
| US5556626A (en) | Antineoplastic drug of plant origin and process for the preparation thereof | |
| CN103739652A (zh) | 一种新的23,29-降齐墩果烷酸化合物及其制备方法和在制备糖苷酶抑制剂药物中的用途 | |
| JP4117029B2 (ja) | ハルパゴフィタム プロカンベンス及び／又はハルパゴフィタム ゼイヘリ デンスから精製された抽出物、その製造方法及びその使用 | |
| CN108033984B (zh) | 一种咖啡酸糖苷类化合物、其制备方法及应用 | |
| CN101041652B (zh) | 从龙血竭中分离纯化的黄酮类化合物及其制备方法 | |
| KR100303641B1 (ko) | 알로에바아바덴시스로부터유리된신나모일-c-글리코시드크로모네 | |
| JPH0348694A (ja) | 新規サポニン物質 | |
| JPH0633303B2 (ja) | アスパラガス廃棄物からのサポニン回収方法 | |
| RU2237488C1 (ru) | Средство "чай байкальский-6", обладающее диуретической активностью и способ его получения | |
| CN115300498A (zh) | 阿格拉宾在制备治疗或预防糖尿病肾病药物中的应用及其提取方法 | |
| EP2572713A1 (en) | Extracts and isolated flavonoids from Euphorbia cuneata useful as anti-ulcer agents | |
| BR102013002190A2 (pt) | processo de obtenção da bergenina, bergenina obtida por processo de extração | |
| JP2000281698A (ja) | 生理活性物質ファークレアスタチンおよび制癌剤 |