JPH0348694A - 新規サポニン物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、食用アスパラガスより単離した新規なステロ
イドサボニンに関し、特に下記構造式を有する新規サボ
ニン物質の提供に関する。

（以下余白） ［従来の技術］ 従来、サボニン物質の特性については、例えば特公昭５
９−４３９６０号「新規サボニン物質」に開示されてい
るように、大豆がら単離回収されるソーヤサボニンが抗
酸化剤としての効果を有することなどが知られている。

また、上記大豆以外の植物あるいはナマコ等の海中動物
からも、各種サボニン物質が検出されているほか、本発
明で原料として使用する食用アスパラガス中にも、何種
類かのサボニン物質が含まれていることがわかっている
（例えば、＾ｇｒｉｃ。

Ｂｌｏｌ、　ＣｈｅＩｍ、　１９７５、第１９９９〜２
００２頁参照）。

［発明が解決しようとする課題］ 食用アスパラガス中に含まれるサボニン物質のうち抗真
菌活性を有するサボニンについては、その特性から推ｎ
１シて文献未記載のサボニン物質であると判断されたた
め、その分離・回収を研究していたところ遂にその構造
を突き止めることができた。すなわち、本発明者による
先行出願である特公昭６３−２７９３４９号「アスパラ
ガス廃棄物からのサボニン回収方法」に開示した手段で
アスパラガス中のサボニン物質を抽出してその特性を調
べたところ、これらのサボニン物質は特に優れた抗真菌
特性を有するものであることが判明したため、このサボ
ニン物質を主成分とする抗真菌剤の発明を達成し、すで
に、特願昭６３−３０９８６６号「抗真菌剤」として特
許出願したが、この時点においては、抗真菌活性を有す
るサボニン物質の特定は未だなされていなかったのであ
る。

［課題を解決するための手段］ 本発明者等は、上述の特願昭６３−２７９３４９号に開
示する手段で抽出し、さらに高速液体クロマトグラフィ
ー（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）によって精製、単離したしたサボニ
ン物質を、核磁気共鳴スペクトル等の機器分析法で分析
検討し、その特性をあらゆる可能な手段で充分に調べた
結果、新規なサボニン物質であることを確認し、その構
造を特定して本発明を達成することができたのである。

すなわち本発明は、（２５Ｓ）−５β−スピロスタン−
３β−オール−３−０−β−Ｄ−グルコピラノシル（１
→２）−〔β−Ｄ−キシロピラノシル（１→４）〕−β
−Ｄ−グルコピラノサイドと記すことのできる化学構造
を持つ新規なサボニン物質を提供するものである。

［作　用］ 本発明の新規サボニン物質である（２５Ｓ）−５β−ス
ピロスタン−３β−オール−３−０−β−Ｄ−グルコピ
ラノシル（１→２）−〔β−り一キシロピラノシル（１
→４）〕−β−Ｄ−グルコピラノサイドは、食用アスパ
ラガス中に含まれる数種のサボニンのうちの１種であっ
て、抗真菌活性の活性主体をなす重要なものであり、こ
の新規なサボニン物質は特にトリコツイートン・ルブル
ムあるいはマイクロスプラム・ジブセウム等を含むカビ
、酵母に対する優れた抗菌作用を有するものであること
が確認された。

本発明のサボニン物質は、例えば次のような方法で分離
することができる。

すなわちアスパラガス廃棄物を出発原料として用い、該
原料をアルコールに浸漬した後濃縮エキスを得る第１工
程； 第１工程で得られた濃縮エキスに溶媒を添加して抽出す
る第２工程； 第２工程で得られた抽出液を濃縮、溶媒留去して抽出エ
キスを得る第３工程： 第３工程で得られた抽出エキスから脂質成分を除去する
ための脱脂を行なう第４工程；第４工程で得られた脱脂
工程液に溶媒を添加して有機層にサボニン成分を抽出さ
せた後、濃縮、乾固して粗サボニン含有エキスを得る第
５工程；第５工程で得られた粗サボニン含有エキスを有
機溶媒で溶解した後、該溶解液をエーテル中に移して、
粗サボニンの沈殿物を分離回収する第６エ程；および、 第６エ程で得られた粗サボニンを液体クロマトグラフィ
ー（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）で処理することによって単離サボニ
ンを得る第７エ程からなるものである。

ただし、上記の単離法は一例であって、類似の性質を示
す溶媒ないし溶媒系の使用や、その他の条件の変更も可
能であり、通常の植物サボニンを単離するための公知の
方法を利用することもできる。

以下、実施例により詳細に説明する。

［実施例１］ 原料として生ホワイトアスパラガス根本部分を２３．６
５０ｇ　（新鮮重量として）測定し、次いでアルコール
濃度が６０％となるように調整してエタノールを添加し
た。

これらを食品用ミキサー（ナショナルＭＸ−Ｍ３）を用
いて粉砕して、混合物を得た。

次いでこれらの原料と溶媒からなる混合物をポリバケツ
に入れて、室温下、−昼夜静置して抽出を行った後、吸
引濾過により抽出液を吸引濾過ビンに回収した。

抽出残渣には再度６０％エタノールを２５Ｊ７加え、前
述の操作を繰り返した後、抽出液的［１６ｇをロータリ
エバポレーターにより濃縮、溶媒留去して褐色の濃縮エ
キスをｔ、ｏｏｏｇ得た（第１工程）。

次いで該濃縮エキスが全て溶解する迄、ｎ−ブタノール
と水（１：　１）の混合溶媒を加え、よく振とうした後
、遠心分離機で約１万回転、３０分間の遠心分離を行っ
て、サボニン成分等をｎ−ブタノール層に抽出分離した
（第２工程）。

次いで該ｎ−ブタノール層を、ロータリーエバポレータ
ーにより濃縮、溶媒留去して約ｔｉｏ　ｇのエキスを得
た（第３工程）。

次いで該エキスに水とベンゼンを当量ずつ加えて懸濁さ
せ、乳白色の溶液を得た。この溶液を遠心分離機を用い
て１万回転、３０分間遠心分離を行い、分離したベンゼ
ン層を遠心管を傾は上層のベンゼンを捨てるか、或はピ
ペット管で上層だけを吸い取って取り除くと共にエキス
中の脂質成分の除去を行うと共に、更に残った水層部に
、新たなベンゼンを同量加えて同様な操作を行った。該
脱脂工程は、ベンゼンだけの添加だけでも良いが、クロ
ロホルムやエーテルのような他の溶媒を用いると効率良
い脱脂を行うことができることを確認している（第４工
程）。

次いで得られた水層部分より、ロータリーエバポレータ
ーによって水分を濃縮、乾固しく第５工程）、ｎ−ブタ
ノールと水（１：　１）の混合溶媒約１ｇを添加してエ
キスを溶解させ、分液ロート内で一昼夜静止してサボニ
ン成分をブタノール層に抽出した。

次いでブタノール層を、ロータリーエバポレーターによ
り濃縮、乾固して約１８ｇの粗サボニン（褐色エキス）
を得た（第５工程）。

次いで該褐色エキスに３００１のメタノールを加えて溶
解し、注射針を用いて７５Ｊずつ、別家用意したエチル
エーテル（２ｇ）の中にゆっくり滴下させて白色の沈殿
を生成せしめ、しばらく静置させた後、傾しゃ法により
エーテルを大部分除去し、更に吸引濾過により沈殿を集
め、その沈殿物の上から新しいエーテルで数回洗って、
夾雑物の溶けたエーテルを洗い流した。

この様な操作で得られたほぼ白色の沈殿物を、真空デシ
ケータ中で乾燥した後、乳鉢で粉砕して、約１１ｇの粗
サボニン成分を得た（第６エ程）。

次いで第６エ程で得た粗サボニン約２５０ｎｇを液体ク
ロマトグラフィー（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）で処理することによ
って、アスパラガスサボニン−１を単離した（第７エ程
）。単離したアスパラガスサボニン−１の収量は約２Ｂ
であり、この物質は白色・無臭の粉末であった。

該物質の性質は、 ■ＦＡＢ−ＭＳ　　ＩＩ／ｚ：　　８７３（Ｍｉｌｌ）
、　８９５（Ｍ＋Ｎａ）。

９１１（Ｍ＋Ｋ） ７４１（Ｍ＋Ｈ−１３２）、　７１１（Ｍ＋Ｈ−１６２
）５７９（Ｍ＋Ｈ−１３２−１６２） ４１７（Ｍｉｌｌ−１６２−１３２−１８２）３９９（
Ｍｉｌｌ−１６２−１３２−１６２−１８）（０１３Ｃ
−核磁気共鳴スペクトル（δｐｐＩ！ｌ、ｄ、−ピリジ
ン中） アグリコン部炭素番号 １　　　３０．８ ２　　　２６．８ ３　　　８０．６ ４　　　３０．７ ５　　　３６．６ ６　　　２７．５ ２６．８ ３５，５ ４０．３ ３５．２ ２１．１ ４０．２ ４０．９ ５６．４ ３２．１ ８１．３ ６１．７ １Ｂ、６ ２４．０ ４２．５ １４．９ １０９．７ ２７．０ ２６．４ ２６．２ ６５．１ 糖鎖部分 グルコース （内側） グルコース （外側） キシロース ７ １６．３ １’　　　　ｌｏｔ。７ ２’　　　　　８１．４ ３’　　　　　７５．３ ４’　　　　　７６．２ ５’　　　　　７Ｂ、３ ６’　　　　　６１．７ １’　　　　１０５．４ ２’　　　　７７．１ ３’　　　　７７．９ ４’　　　　７１．９ ５’　　　　７８．６ ６’　　　　Ｅｉ３．０ １′″　　　１０５．５ ２″”　　　　７５．０ ３′″　　　７８．４ ４＃″　　　７０．８ ５”’　　　　８７．４ （以下余白） ■プロトン核磁気共鳴スペクトル （δｐｐＩＩ１．　ＣＤ３０Ｄ中） グルコース１’　　　４．４７　（ＬＨ，ｄ、　Ｊ−８
＞（内側）　　２’　　　３．６２　（ＩＨ，ｄｄ、　
Ｊ−８，９）３’　　　３．７１　（ＬＨ，ｔ、　Ｊ−
９）４’　　　３．５２　（ＩＩＬ　ｔ、　Ｊ−９）５
’　　　３．３８　（ＬＨ，ｍ　） ６’　　　３．８１　＜ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ−４，１２）
３．８７　（ｉｌｌ、ｄｄ、　Ｊ−２，１２）グルコー
ス１’　　４．７０　（ＩＨ，ｄ、　Ｊ−８）（外側）
　　２’　　８．１７　（ＬＨ，ｄｄ、　Ｊ−８，９）
３’　　３４Ｂ　（ＩＩＬ　ｔ、　Ｊ−９）４’　　３
．２１　（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ−８，９）５’　　３．２
５　（ＬＨ，ｍ） ６’　　３．８Ｂ　（ＬＨ，ｄｄ、　Ｊ−５，１２）３
．８４　（１１（、ｄｄ、　Ｊ−２，１２）キシロース
１〜４．３４　（１１１，ｄ、　Ｊ−８）２〜３．１９
　（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ−８，９）３”’　　３．３１　
（ｌ）Ｉ、　ｔ、　Ｊ−９）４〜３．４９　（ｌｔｌ、
　ｗ） ５”’　　３．２５　　（ＩＨ，ｄｄ、　　Ｊ−１０，
１２）３．９０　　（ＬＨ，ｄｄ、　　Ｊ−５，１０）
（イ）溶解性はメタノール、ピリジンに溶は易く、水に
溶けにくい。

■シリカゲルを用いた薄層クロマトグラフィー（展開溶
媒クロロホルム：メタノール：水筒６５　：　８５　：
　１０．下層）に洪した時Ｒｆ値０．５１を示す。

また、薄層クロマトグラフィー上５％アニスアルデヒド
＋５％硫酸の発色剤を噴霧後１１０℃、５分間加熱する
ことにより黄緑色を呈する。

これらの結果から本物質は、（２５Ｓ）−５β−スピロ
スタン−３β−オール−３−〇−β−Ｄ−グルコピラノ
シル（１→２）−〔β−Ｄ−キシロピラノシル（１→４
）〕−β−Ｄ−グルコピラノサイドからなる新規サボニ
ン物質であることが判明した。

［実施例２〕 実施例１で単離された新規サボニン物質の抗真菌活性を
試験するため、供試菌株としてトリコフィートン・ルブ
ルムＩＦ０５８０８およびマイクロスプラムΦジブセウ
ムＩ　Ｆ０８３０７を用いた。

先ず、ＭＹ寒天培地（酵母エキス３ｇ、麦芽エキス３ｇ
、ペプトン５ｇ、ブドウ糖１０ｇ　、寒天１５ｇ＃！、
ｐＨ８）のプレートで培養した前述のカビ胞子（トリコ
ツイートン・ルブルムＩ　Ｆ０５８０８およびマイクロ
スプラム・ジブセウムＩＦ０８３０７）を各々０．１％
ツイーン８０１０　、９％食塩水に懸濁せしめてカビ胞
子懸濁液を作り、予め用意したＭＹ液体培地（前述の培
地から寒天を除いたもの）　５ｍｌを分注した試験管に
加え、胞子濃度を５Ｘ１０’個ｌ−になるように調整し
た。

該調整液に、実施例１で得た新規サボニン物質を１，２
．３．４および５［／−濃度になるように測定したもの
を加え、３０℃の条件下で１週間静置培養した後、カビ
の増殖を阻止するサボニン濃度を求めＭＩＣ（ｑ／ｍＮ
）とした。その結果を第１表に示す。

（以下余白） 第１表 ［発明の効果〕 以上のように本発明の新規サボニン物質は、食用アスパ
ラガスの廃棄根部等から回収できるため安価に製造でき
る上、抗真菌剤としての効力も少量で十分に担える利点
を有している。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （２５Ｓ）−５β−スピロスタン−３β−オール−３−
   Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−〔β−Ｄ−
   キシロピラノシル（１→４）〕−β−Ｄ−グルコピラノ
   サイドからなる新規サボニン物質。