KR100458003B1 - 방울비짜루(남옥대)로부터 분리한 신규 항암활성 화합물 및 그 정제방법 - Google Patents

방울비짜루(남옥대)로부터 분리한 신규 항암활성 화합물 및 그 정제방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 방울비짜루(남옥대)로부터 분리한 신규 항암활성 화합물 및 그 정제방법에 관한것으로, 화학식 1로 표시되는 신규 스테로이드계 사포닌 화합물 및 그 정제방법에 관한 것이다. 상기 화합물은 탁월한 항암 활성을 나타내므로 항암 보조제를 비롯한 신기능성 의약품과 식품 첨가물, 음료 첨가물 및 건강기능식품 등에 유용하게 사용될 수 있다.
(화학식 1)

Description

방울비짜루(남옥대)로부터 분리한 신규 항암활성 화합물 및 그 정제방법{New anticancer compound and its purification from Asparagus oligoclonos}
방울비짜루(Asparagus oligoclonosMaxim.)는 백합과(Liliacea)에 속하는 다년생 초본으로 약간 육질인 뿌리줄기를 약용으로 쓰며 예로부터 해수(咳嗽), 천식(喘息) 및 가래(痰)가 배출되는 증상에 사용하였다(중국본초도감, 려강출판사, p185). 아스파라거스 속의 식물종은 중국, 일본, 한국 및 러시아에 주로 분포하고 있다. 아스파라거스의 수종에 대해 이미 많은 성분 연구가 진행되었는데 그 중에는 스테로이드계 사포닌을 함유한 것이 많이 보고 되었다(Konishi & Shoji, 1979; Sharma, Chand & Sati, 1982; Sharma & Thakur, 1996; Shao, Poobrasert, Kennelly, Chin, Ho, Huang, Garrison & Cordell, 1997). 그러나 우리나라 자생식물 중의 하나인 방울비짜루의 성분이나 활성에 관한 연구는 미진하였는데, 본 발명자들이 최근 방울비짜루로부터는 처음으로 2종의 스테로이드계 사포닌 성분을 분리하고 인체유해세균에 대한 항균활성을 보고하였으며(김금숙, 성재덕, 박승용, 오세량, 곽용호 (2000) 방울비짜루(Asparagus oligoclonos)로부터 분리한 스테로이드계 사포닌의 항균활성. 한국농화학회지. 43(2) : 136-140), 천연에서는 처음인 신규 스테로이드계 사포닌 1종을 분리하여 아스파올리고닌으로 명명한 바 있었다.(대한민국 특허출원 제 99-33413호).
본 발명은 방울비짜루(Asparagus oligoclonos)로부터 처음으로 분리되는 스테로이드계 사포닌을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 목적은 방울비짜루(Asparagus oligoclonos)로부터 처음으로 분리되는 스테로이드계 사포닌을 정제하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기의 신규 화합물의 항암활성을 확인하고 이를 포함하는 약학적 조성물의 신기능성 의약품 및 건강기능식품으로서의 새로운 용도를 제공하는 것이다.
도 1 은 아스파올리고닌 B의 화학 구조도이고,
도 2 는 화학식 1의 화합물의 질량분석스펙트럼도이고,
도 3 은 화학식 1의 화합물의 수소핵자기공명스펙트럼도이고,
도 4 는 화학식 1의 화합물의 탄소핵자기공명스펙트럼도이고,
도 5 는 화학식 1의 화합물의 무변조증강극성전달스펙트럼(DEPT 135)도이고,
도 6 은 화학식 1의 화합물의 수소-수소 상관성분광스펙트럼(1H-1H COSY)도이고,
도 7 은 화학식 1의 화합물의 헤테로핵다중양자상관성스펙트럼(HMQC)도이고,
도 8 은 화학식 1의 화합물의 헤테로핵다중결합연결스펙트럼(HMBC)도이다.
상기한 본 발명의 목적을 달성하기 위해 첫째, 본 발명은 항암활성을 나타내는 방울비짜루(남옥대)로부터 분리된 신규 스테로이드계 사포닌인 하기 화학식 1를 제공하며, 둘째로 방울비짜루(남옥대)로부터 분리된 신규 스테로이드계 사포닌인 하기 화학식 1의 정제방법을 제공하며, 세째로 화학식 1로 표시되는 방울비짜루로부터 분리한 신규 스테로이드계 사포닌인 화학식 1을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 방울비짜루(Asparagus oligoclonos)로부터 분리되는, 하기 화학식 1로 표시되는 신규 스테로이드계 사포닌을 제공한다. 이 신규 스테로이드계 사포닌은 아스파올리고닌 B(aspaoligonin B) 라 명명한다.
(화학식 1)
상기 화합물은 (25S)-5β-스피로스탄-3β,17α-다이올-3-O-β-D-자일로피라노실-(1→2)-[α-L-람로피라노실-(1→4)]-β-D-글루코피라노사이드이다.
둘째, 본 발명은 방울비짜루(남옥대)로부터 유기용매를 사용하여 반복 추출하는 단계, 얻어진 추출물을 용매분배하는 단계 및 크로마토그래피 기법을 사용하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 화학식 1인 화합물을 순수 분리하고정제하는 방법을 제공한다. 즉 방울비짜루 뿌리줄기를 메탄올을 사용하여 추출하고 여과액을 모아 진공 농축한 후 메탄올 추출물을 얻은 다음 메탄올 추출물을 증류수에 현탁하여 에틸아세테이트와 수포화 부탄올로 순차적으로 용매 분획을 한 다음 최종 부탄올 분획물을 얻는다. 농축된 부탄올 분획물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피, 실리카겔 60 RP-18 칼럼 크로마토그래피, 분취용 HPLC(High performance Liquid Chromatography) 등을 이용하여 정제하여 화학식 1의 화합물을 얻는다.
셋째, 본 발명은 폐암, 난소암, 피부암, 중추신경암, 결장암 치료를 위한 상기 화학식 1의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다. 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 항암활성을 조사하기 위하여 에스알비 법(sulforhodamine B, SRB 법, Skehan,et al., Prox. Am. Assoc. Cancer Res., 30 : 612, 1989)을 사용하여 폐암, 난소암, 피부암, 중추신경암, 결장암 등 5종의 세포주의 성장억제 정도를 측정하였다. 이때 인체암세포주로는 폐암세포주인 A549, 난소암세포주인 SK-OV-3, 피부암세포주인 SK-MEL-2, 중추신경암세포주인 XF498, 결장암세포주인 HCT15를 사용하였다. 그 결과 상기 화화식 1의 화합물이 5종의 암세포주에 대해 성장을 강하게 억제하는 활성을 나타냄을 확인하였다. 대조군과의 상대적 활성 비교에서 특히 난소암세포와 중추신경암세포에 더욱 강한 활성을 나타내었다. 이 때 대조군으로 합성 함암제인 아드리아마이신(adriamycin)을 사용하였는데 상기 화학식 1의 화합물이 대조군보다 전체적으로 세포독성이 상대적으로 약하였지만 이 화합물이 천연물질로서 인체에 안정함을 고려할 때 천연소재의 항암제 및 건강보조식품 보조제로서 우수한 천연활성화합물임이 확인되었다.
따라서 상기 화합물은 암세포주에 대한 강한 성장 억제 활성을 나태내므로 암치료 보조제 및 건강기능식품으로서 유용하게 사용될 수 있다. 상기 목적을 위하여 본 발명의 조성물은 약제학적 분야에서 통상적으로 허용되는 담체(carrier), 부형제(forming agent), 희석제 등과 혼합하여 분말, 과립, 정제, 캡슐제 또는 주사제 등의 제형으로 제조되어 사용될 수 있다. 이렇게 제조된 약제학적 제제는 경구적으로 투여되거나 비경구적으로 국소적용될 수 있다.
이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명의 예시일 뿐이므로 본 발명이 하기의 실시예에 의하여 한정되는 것으로 간주되어서는 안된다.
(실시예 1)
방울비짜루로부터 화학식 1의 화합물의 분리 및 정제 1
방울비짜루로부터 아스파올리고닌 B을 분리하는 방법에 관하여 하기에서 상세히 설명한다.
방울비짜루(남옥대)로부터
(a)유기용매를 사용하여 반복 추출하는 단계,
(b)상기 (a) 단계를 통해서 얻어진 추출물을 용매분배하는 단계 및
(c)상기 (b) 단계를 통해서 얻어진 추출물을 크로마토그래피 기법에 적용하여 정제하는 단계를 통하여 화합물 1을 분리, 정제한다.
보다 구체적으로는 방울비짜루의 뿌리줄기로 부터,
(a) 상기 유기용매를 사용하여 반복 추출하는 단계는
(i) 메탄올을 사용하여 추출하는 단계 및
(ii) 상기 (i)단계에서 얻은 여과액을 모아 진공 농축한 후 메탄올 추출물을 얻는 단계,
(b) 상기 (a)단계를 통해서 얻어진 추출물을 용매분배하는 단계는
(iii) 상기 (ii)단계에서 얻은 메탄올 추출물을 증류수에 현탁하여 에틸아세테이트와 수포화 부탄올로 순차적으로 용매 분획을 하여 최종 부탄올 분획물을 얻는 단계,
(c) 상기 (b) 단계를 통해서 얻어진 추출물을 크로마토그래피 기법에 적용하여 정제하는 단계는
(iv) 상기 농축된 부탄올 분획물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하는 단계 및
(v) 상기 (iv)단계에서 얻어진 분획물을 분취용 HPLC(High performance Liquid Chromatography)을 이용하여 정제하는 단계을 사용하여서 화학식 1의 화합물을 분리, 정제한다.
보다 구체적으로는 건조된 방울비짜루 뿌리줄기 3킬로그램을 분쇄하여 실온에서 메탄올(MeOH)을 사용하여 5회 추출하고 여과액을 모아 진공농축하여 1062그램의 추출물을 얻었다. 이 추출물을 증류수에 현탁하여 에틸아세테이트(EtOAc)로 3회 용매 분배한 후, 수층을 다시 수포화 부탄올(n-BuOH)를 사용하여 5회 분배하고 수층과 부탄올층으로 분획하여 최종 125그램의 부탄올 분획을 얻었다. 부탄올 분획 30그램을 대상으로 실리카겔(Merck 70-230mesh) 350그램을 충진시킨 지름 5센티미터의 칼럼에서 클로로포름/메탄올/물(20:3:1→6:4:1)을 전개용매로 기울기 용리로써 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 수행하여 총 15개의 분획을 얻었다, 이 중 15번 분획을 대상으로 지름 2센티미터의 분취용 오디에스 (Prep-ODS ) HPLC 컬럼을 사용한 분취 HPLC를 수행하여 화학식 1의 화합물 20밀리그램을 분리하였다. 이때 전개용매 및 기울기 용리의 조건은 20분간 30% 아세토나이트릴, 이어서 10분간 30%에서 55% 아세토나이트릴, 이어서 20분간 85% 메탄올을 사용하는 것이었다.
(실시예 2)
방울비짜루로부터 화학식 1의 화합물의 분리 및 정제 2
상기 실시예 1의 (c)의 (v)에서, 실리카겔 60 RP-18 칼럼 크로마토그래피를 수행하여 정제하는 단계를 제외하고는 실질적으로 동일하게 실시하여, 화학식 1의 화합물을 분리, 정제하였다.
보다 구체적으로는,
상기 실시예 1에서 수득한 부탄올 분획 30그램을 대상으로 실리카겔(Merck 70-230mesh) 350그램을 충진시킨 지름 5센티미터의 칼럼에서 클로로포름/메탄올/물(20:3:1→6:4:1)을 전개용매로 기울기 용리로써 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 수행하여 50개의 분획을 얻었다, 이 중 16번과 17번를 혼합한 분획을 대상으로 지름 3센티미터 칼럼에서 실리카겔 60 RP-18 칼럼 크로마토그래피를 수행하였으며 이때 전개용매는 20% 메탄올에서 100% 메탄올까지 메탄올 농도를 5%씩 증가시키면서 기울기 용리로 15미리리터씩 분획을 분취하였다. 단계적 기울기 용리로 수행하였다. 그 결과 최종 225번에서부터 237번 분획으로부터 모두 화학식1로 표시되는 화합물을 얻었으며 상기 13개의 분획에서 얻은 이 화합물의 총량은 42밀리그램이었다. 상기 화학식 1의 화합물의 이화학적 특성은 하기와 같다.
(1) 물질의 성상 : 흰색가루상
(2) 분자량 : 872 ( FAB+m/z: 895. 1848 [M+Na]+ )
화학식 1의 화합물의 질량분석(MS) 스펙트럼은 도 2에 제시하였다.
(3) 분자식 : C44H72O17
(4) 수소핵자기공명스펙트럼:
피리딘-d5(pyridin-d5)을 용매로 하여 측정한 수소 핵자기공명스펙트럼 결과는 하기와 같고, 도 3에서 화학식 1의 화합물의 수소핵자기공명스펙트럼을 제시하였다.
(피리딘-d5, δ)- 0.93 (3H, s), 1.04 (3H, d,J=7.08 Hz), 1.08 (3H, s), 1.20 (3H, d,J=7.08 Hz), 4.79 (1H, d,J=6.84 Hz, H-1 of inner glucose), 4.99 (1H, d,J=7.80 Hz, H-1 of xylose), 6.33 (1H, d,J=1.20 Hz, H-1 of rhamnose)
(5) 탄소핵자기공명스펙트럼:
피리딘-d5(pyridin-d5)을 용매로 하여 측정한 비당부의 탄소 핵자기공명스펙트럼 결과는 다음과 같고, 표 1에 화학식 1의 화합물의 비당부의 각 탄소에 대한 스텍트럼 데이터를 제시하였다.
(피리딘-d5, δ)- 9.48, 16.23, 17.44, 21.05, 23.85, 25.72, 26.52, 26.73, 26.78, 26.87, 27.37, 30.79, 31.01, 31.62, 32.54, 35.30, 36.15, 37.21, 40.18,45.29, 45.49, 52.90, 64.92, 76.00, 90.07, 90.35, 110.25
피리딘-d5(pyridin-d5)을 용매로 하여 측정한 당부의 탄소 핵자기공명스펙트럼 결과는 다음과 같다.
(피리딘-d5, δ)- 18.77, 61.82, 67.33, 69.47, 70.75, 72.34, 72.70, 74.03, 74.92, 76.17, 76.94, 77.61, 78.32, 81.72, 101.59, 101.85, 105.71
도 4에 화학식 1의 화합물의 탄소 핵자기공명스펙트럼을 제시하였다.
도 5에 무변조증강극성전달스펙트럼(DEPT)를 제시하였다. 도 6에 화학식 1의 화합물의 수소-수소 상관성분광스펙트럼(1H-1H COSY)을 제시하였다. 도 7에는 화학식 1의 화합물의 헤테로핵다중양자상관성스펙트럼(HMQC)을 제시하였으며 도 8에는 헤테로핵다중결합연결스펙트럼( HMBC)를 제시하였다.
(실시예 3)
화학식 1인 화합물의 항암활성
실시예 1에서 얻은 방울비짜루의 화학식 1의 화합물을 이용하여 인체 암세포에 대한 항암활성을 에스알비 법(sulforhodamine B, SRB 법, Skehan,et al., Prox. Am. Assoc. Cancer Res., 30 : 612, 1989)으로 조사하였다. 이때 인체암세포주로는 폐암세포주인 A549, 난소암세포주인 SK-OV-3, 피부암세포주인 SK-MEL-2, 중추신경암세포주인 XF498, 결장암세포주인 HCT15를 사용하였다. 항암활성 조사방법을 보다 상세히 설명하면 하기와 같다.
계대배양 중인 상기의 암세포주를 트립신-시디티에이(trypsin-CDTA)용액으로 부착 면으로부터 분리시키고, 96 웰 프레이트 바텀 마이크로플레이트(96 well flatbottom microplate)에 웰당 세포수가 5×10³(A549, HCT15), 1×10⁴(SK-MEL-2, XF498), 2×10⁴(SK-OV-3)이 되도록 분주하였다. 여기서 6농도의 로그 농도(log dose)로 배양액에 희석된 시료용액들을 웰에 각각 100마이크로리터씩 넣어주고 48시간 더 배양하였다. 배양후 각 웰의 배양액을 제거하고 10% 트리클로로아세테이트(trichloroacetic acid,TCA)를 100마이크로리터씩 가하여 4℃에서 1시간 방치하여 세포들을 플레이트 바닥 면에 고정시켰다. 세포의 고정이 끝난 후 플레이트를 물로 5∼6회 세척하여 남아있는 티시에이(TCA)용액을 완전히 제거하고 실온에서 남은 물기가 없도록 건조시켰다. 완전히 건조된 플레이트는 웰당 100마이크로리터 1% 초산 용액에 0.4% 에스알비(SRB)를 녹인 염색용액을 가하여 30분간 세포를 염색하고 다시 1% 초산 용액으로 5∼6회 세척하여 세포에 결합하지 않은 에스알비(SRB)를 제거하였다. 이렇게 염색된 셀 플레이트들은 다시 실온에서 건조시킨 뒤 웰당 100마이크로리터의 10 미리몰(mM) 트리스마베이스(trismabase) 용액을 가하여 적정용기 진탕기(titer plate shaker)로 10분간 진탕하여 염색약을 용출시킨 후 마이크로플레이트 리덜(microplate reader)를 사용하여 520 나노미터(nm)에서 흡광도를 측정하였다. 암세포들에 대한 화합물의 효과를 계산하기 위하여 화합물을 가할 때의 세포수(Tz)와 화합물이 들어있지 않은 배양액을 가하여 48시간 배양했을 때의 세포수(C) 및 각농도의 화합물과 함께 48시간 배양했을 때의 세포수(T) 등을 측정하여 다음의 수식에 의해 항암활성을 계산하였다. Tz〉T인 경우에는 [(T-Tz)/(C-Tz) x 100]으로 계산하고 Tz〈T인 경우에는 [(T-Tz)/Tz] x 100의 수식으로 계산하였다. 이렇게 계산된 값들로부터 로터스 프로그램(LOTUSprogram)의 자료회귀(data regression)을 이용하여 화합물이 암세포의 성장을 50%억제하는 농도인 50% 유효농도(effective dose, ED50)를 계산하여 각 화합물의 항암활성도를 비교하였다. 그 결과를 표 1에 나타내었다.
화학식 1의 화합물의 인체 암세포주에 대한 세포 독성(단위 ED50: ㎍/㎖)
화합물 폐암세포(A549a) 난소암세포(SK-OV-3b) 피부암세포(SK-MEL-2c) 중추신경암세포(XF498d) 결장암(HCT15e)
화학식 1 2.05 2.43 2.41 2.56 2.47
아드리아마이신 0.04 0.18 0.03 0.12 0.08
표 1에 나타낸 바와 같이, 화학식 1인 화합물이 5종의 암세포주에 대해 성장을 강하게 억제하는 활성을 나타냄을 확인하였다. 대조군과의 상대적 활성 비교에서 특히 난소암세포와 중추신경암세포에 더욱 강한 활성을 나타내었다. 이 때 대조군으로 합성 함암제인 아드리아마이신(adriamycin)을 사용하였는데 화학식 1인 화합물이 대조군보다 전체적으로 세포독성이 상대적으로 약하였지만 이들 화합물들이 천연물질로서 인체에 안정함을 고려할 때 천연소재의 항암제 및 건강보조식품 보조제로서 우수한 천연활성화합물임이 확인되었다. 따라서 상기 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품, 기능성 음료 또는 이들의 첨가물을 또한 제공할 수 있다.
상기한 목적을 달성하기 위해 본 발명을 첨부 도면에 의거하여 좀더 상세히 설명하면서 더욱 명백해질 것이다.
방울비짜루로부터 기능성 유용물질을 분리할 수 있는 방법을 제시함으로써 기능성 유용 물질의 이용도를 높였다. 천연으로부터 신규 스테로이드계 사포닌 1종을 분리하므로써 신기능성 유용 물질개발 가능성을 제공하고 있다. 또한 방울비짜루로부터 분리한 신규 스테로이드계 사포닌 화합물은 인체암세포주인 폐암세포주 A549, 난소암세포주 SK-OV-3, 피부암세포주 SK-MEL-2, 중추신경암세포주 XF498, 결장암세포주 HCT15에 대한 세포독성을 확인하여,우수하여 항암치료 보조제 및 건강보조식품으로 이용가능성을 제공한다. 또한 전통 민간 생약인 방울비짜루(남옥대)의 유효성분을 밝혀냄으로 방울비짜루의 생약자원으로서의 활용도를 증진한다. 또한 천연물 소재 신약개발을 위한 기능성 유용 식물자원 확보에 기여한다. 또한 농가에서 방울비짜루를 신 약용작물로 재배함으로써 수입원이 증가되는 효과가 있다.

Claims (7)

  1. 화학식 1로 표시되는 (25S)-5β-스피로스탄-3β,17α-다이올-3-O-β-D-자일로피라노실-(1→2)-[α-L-람로피라노실-(1→4)]-β-D-글루코피라노사이드 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
    (화학식 1)
  2. 방울비짜루(남옥대)로부터
    (a)유기용매를 사용하여 반복 추출하는 단계,
    (b)상기 (a) 단계를 통해서 얻어진 추출물을 용매분배하는 단계, 및
    (c)상기 (b) 단계를 통해서 얻어진 추출물을 크로마토그래피 기법을 사용하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제 1 항 기재 화합물을 추출하는 방법.
  3. 제 2 항에 있어서,
    방울비짜루의 뿌리줄기를
    (a) 상기 유기용매를 사용하여 반복 추출하는 단계는
    (i) 메탄올을 사용하여 추출하는 단계, 및
    (ii) 상기 (i)단계에서 얻은 여과액을 모아 진공 농축한 후 메탄올 추출물을 얻는 단계,
    (b) 상기 (a)단계를 통해서 얻어진 추출물을 용매분배하는 단계는
    (iii) 상기 (ii)단계에서 얻은 메탄올 추출물을 증류수에 현탁하여 에틸아세테이트와 수포화 부탄올로 순차적으로 용매 분획을 하여 최종 부탄올 분획물을 얻는 단계,
    (c) 상기 (b) 단계를 통해서 얻어진 추출물을 크로마토그래피 기법을 사용하는 단계는
    (iv) 상기 농축된 부탄올 분획물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분획하는 단계 및
    (v) 상기 (iv)단계에서 얻어진 분획물을 분취용 HPLC(High performance Liquid Chromatography)을 이용하여 정제하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제 1 항의 항암활성 화합물을 추출하는 방법.
  4. 제 2 항에 있어서,
    방울비짜루의 뿌리줄기를
    (a) 상기 유기용매를 사용하여 반복 추출하는 단계는
    (i) 메탄올을 사용하여 추출하는 단계, 및
    (ii) 상기 (i)단계에서 얻은 여과액을 모아 진공 농축한 후 메탄올 추출물을 얻는 단계,
    (b) 상기 (a)단계를 통해서 얻어진 추출물을 용매분배하는 단계는
    (iii) 상기 (ii)단계에서 얻은 메탄올 추출물을 증류수에 현탁하여 에틸아세테이트와 수포화 부탄올로 순차적으로 용매 분획을 하여 최종 부탄올 분획물을 얻는 단계,
    (c) 상기 (b) 단계를 통해서 얻어진 추출물을 크로마토그래피 기법을 사용하는 단계는
    (iv) 상기 농축된 부탄올 분획물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분획하는 단계 및
    (v) 상기 (iv)단계에서 얻어진 분획물을 실리카겔 60 RP-18 칼럼 크로마토그래피를 수행하여 정제하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제 1 항의 항암활성 화합물을 추출하는 방법.
  5. 폐암, 난소암, 피부암, 중추신경암, 또는 결장암 치료를 위한 청구항 제1항의 화합물을 포함하는 약학적 조성물.
  6. 제 1항의 화합물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품.
  7. 제 1항의 화합물을 유효성분으로 포함하는 기능성 음료.
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KR200449799Y1 (ko) * 2008-01-11 2010-08-11 동아베스텍 주식회사 케이블타이용 절단기

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH02129198A (ja) * 1988-11-07 1990-05-17 Dowa Mining Co Ltd アスパラガス廃棄物からのサポニン回収方法
JPH02247196A (ja) * 1989-03-22 1990-10-02 Dowa Mining Co Ltd アスパラガスから精製サポニンを回収する方法
JPH0348694A (ja) * 1989-07-18 1991-03-01 Dowa Mining Co Ltd 新規サポニン物質
JPH06239755A (ja) * 1993-02-16 1994-08-30 Dowa Mining Co Ltd 抗真菌剤
KR20010017748A (ko) * 1999-08-13 2001-03-05 김강권 방울비짜루(남옥대)로부터 단리되는 신물질인 아스파올리고닌

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH02129198A (ja) * 1988-11-07 1990-05-17 Dowa Mining Co Ltd アスパラガス廃棄物からのサポニン回収方法
JPH02247196A (ja) * 1989-03-22 1990-10-02 Dowa Mining Co Ltd アスパラガスから精製サポニンを回収する方法
JPH0348694A (ja) * 1989-07-18 1991-03-01 Dowa Mining Co Ltd 新規サポニン物質
JPH06239755A (ja) * 1993-02-16 1994-08-30 Dowa Mining Co Ltd 抗真菌剤
KR20010017748A (ko) * 1999-08-13 2001-03-05 김강권 방울비짜루(남옥대)로부터 단리되는 신물질인 아스파올리고닌

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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