KR100685516B1 - 신규 항암활성 트리테르펜계 화합물 및 그 제조방법 - Google Patents

신규 항암활성 트리테르펜계 화합물 및 그 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 붉나무 줄기로부터 분리된 신규 항암활성 화합물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 하기 화학식 1로 표시되는 신규 트리테르펜계 화합물 및 그 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 신규 트리테르펜계 화합물은 탁월한 항암활성을 나타내므로 항암 보조제를 비롯한 신기능성 의약품과 식품 첨가물, 음료 첨가물 및 건강기능식품 등에 유용하게 사용될 수 있다.
화학식 1
Figure 112005001146348-pat00001
항암활성, 트리테르펜계 화합물, 붉나무, 3-옥소담마르-20,24E-다이엔-26-오익 엑시드

Description

신규 항암활성 트리테르펜계 화합물 및 그 제조방법{New anticancer triterpene compound and its preparation}
도 1은 본 발명의 화학식 1로 표시되는 항암활성 트리테르펜계 화합물의 질량분석스펙트럼도이고,
도 2는 본 발명의 화학식 1로 표시되는 항암활성 트리테르펜계 화합물의 수소핵자기공명스펙트럼도이고,
도 3은 본 발명의 화학식 1로 표시되는 항암활성 트리테르펜계 화합물의 탄소핵자기공명스펙트럼도이고,
도 4는 본 발명의 화학식 1로 표시되는 항암활성 트리테르펜계 화합물의 무변조증강극성전달스펙트럼(DEPT 135)도이고,
도 5는 본 발명의 화학식 1로 표시되는 항암활성 트리테르펜계 화합물의 수소-수소 상관성분광스펙트럼(1H-1H COSY)도이고,
도 6은 본 발명의 화학식 1로 표시되는 항암활성 트리테르펜계 화합물의 헤테로핵다중양자상관성스펙트럼(HMQC)도이고, 그리고
도 7은 본 발명의 화학식 1로 표시되는 항암활성 트리테르펜계 화합물의 헤테로핵다중결합연결스펙트럼(HMBC)도이다.
본 발명은 신규 항암활성 트리테르펜계 화합물 및 그 제조방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로는 탁월한 항암활성을 나타내어 항암 보조제를 비롯한 신기능성 의약품과 식품 첨가물, 음료 첨가물 및 건강기능식품 등에 유용하게 사용될 수 있는 붉나무 줄기로부터 분리된 항암활성 트리테르펜계 화합물 및 그 제조방법에 관한 것이다.
붉나무(Rhus chinensis Mill.)는 옻나무과(Anacardiaceae)의 낙엽소교목으로 오배자나무라고도 하는데, 잎자루 날개에 진딧물의 1종이 기생하여 벌레혹(충영)을 만들며 이것을 오배자(五倍子, Galla rhois)라고 한다. 오배자는 타닌이 많이 들어 있어 약용하거나 잉크의 원료로 한다. 상기 벌레혹 안에는 날개가 달린 암벌레 1만 마리 내외가 들어 있으며, 근처의 이끼 틈에서 겨울을 지낸다. 한국·일본·중국·인도 등지에 주로 분포하고 있다. 민간에서는 지혈과 피부병, 충독, 설사를 다스리는 약재로 쓰이며, 강한 쓴맛으로 탄닌을 다량 함유하여 강력한 수렴작용을 한다. 또한, 매염재를 섞어 천연염료로도 사용한다.
최근에는 이러한 오배자 추출물이 가축질병 균주에 대한 항균활성(최 일., 2003, 한국식품영양과학회지, 32(8):1214-1220), 식후 장에서의 탄수화물 흡수를 저해함으로써 혈당상승을 억제하는 효과(Shim et. al., 2003, Journal of Ethnopharmacology 85:283-287)) 및 타이로신네이즈 저해제(tyrosinase inhibitor) 로서 미백효과(Kim et al., 1997, Journal of Food Science and Nutrition) 등이 있는 것으로 보고되었고, 붉나무의 수피 추출물의 항산화 효과(이연재 등, 1993, 한국식품과학회지 25(6):677-682) 등도 보고되었다. 특히, 항산화, 항암효과는 주로 갈릭 엑시드(gallic acid), 메틸갈레이트(metyl gallate) 등 페놀성 화합물의 작용에 기인하는 것으로 알려져 있다.
상기 붉나무 수피의 성분으로는 그 외 엘라직 엑시드(ellagic acid), 시키믹 엑시드(sikimic acid), 퀘시트린(quercitrin), 마이리시트린(myricitrin), 갈로타닌(gallotannin), 스코폴레틴(scopoletin), 스코폴린(scopolin), 오시놀(orcinol), 오시놀 배당체(orcinol-β-D-glucoside) 등이 보고되었다(정선채 등, 1999, 한국생약학회지 30(3):295-300; Matsuda, 1966, Chemical and Pharmaceutical Bulletin 14(8):877-883).
한편, 최근에는 역시 붉나무 수피로부터 세미아라틱 엑시드(semialactic acid)를 비롯하여 세미아락톤(semialactone), 아이소포퀴에론 퍼록사이드(isofouquierone peroxide)와 포퀴에론(fouquierone) 등의 신물질이 보고되기도 하였다(Lee et al., 2001, Chemical and Pharmaceutical Bulletin 49(8):1024-1026).
그러나, 화학식 1의 화합물은 붉나무 뿐 아니라 천연의 어떤 생물자원으로부터도 보고된 바 없으며 그 정제방법과 생리활성에 대해서도 보고된 바 없었다.
이에 본 발명에서는 전통 민간 생약으로 알려진 붉나무의 유효성분을 밝히기 위하여 광범위한 연구를 거듭하는 과정에서 붉나무 줄기로부터 분리한 신규 화합물 이 우수한 항암활성 효과가 있음을 발견하였고, 본 발명은 이에 기초하여 완성되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 붉나무로부터 천연에서 처음으로 분리되는 신규 트리테르펜계 화합물 및 그 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 신규 화합물의 항암활성을 확인하고 이를 포함하는 약학적 조성물의 신기능성 의약품 및 건강기능식품으로서의 새로운 용도를 제공하는 것이다.
상기 목적 및 기타 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 첫째, 항암활성을 나타내는, 붉나무 줄기로부터 분리된 신규 트리테르펜계 화합물을 제공하며, 둘째로 붉나무 줄기로부터 분리된 신규 트리테르펜계 화합물의 제조방법을 제공하며, 셋째로 붉나무 줄기로부터 분리된 신규 트리테르펜계 화합물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물, 및 신규 트리테르펜계 화합물 또는 이를 함유하는 식물 추출물을 포함하는 식용 제품을 제공한다.
이하 본 발명을 좀 더 구체적으로 살펴보면 다음과 같다.
첫째, 본 발명에 따르면,
붉나무 줄기로부터 분리된 신규 트리테르펜계 화합물로서, 하기 화학식 1로 표시되는 3-옥소담마르-20,24E-다이엔-26-오익 엑시드(3-oxodammar-20,24E-dien-26-oic acid) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.
화학식 1
Figure 112005001146348-pat00002
둘째, 본 발명에 따르면,
붉나무 줄기를 제1유기용매로 추출한 후 진공 농축하여 추출물을 얻는 단계, 상기 추출물을 제2유기용매로 용매분배한 후 진공 농축하여 분획추출물을 얻는 단계, 및 상기 분획추출물을 크로마토그래피를 수행하여 항암활성 물질을 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 화학식 1로 표시되는 신규 트리테르펜계 화합물의 제조방법이 제공된다.
좀 더 구체적으로는, 우선, 붉나무 줄기를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 헥산 및 이들의 혼합용매 등으로부터 선택된 제1유기용매, 바람직하게는 메탄올을 사용하여 추출하고 여과액을 모아 진공 농축한 후 유기용매 추출물을 얻는다.
다음으로, 상기 제1유기용매 추출물을 증류수에 현탁한 후, 에틸아세테이트, 에테르, 클로로포름 및 이들의 혼합용매 등으로부터 선택된 제2유기용매, 바람직하게는 에틸아세테이트를 사용하여 용매 분배를 반복 실시하여 최종 제2유기용매 분획물을 얻는다.
마지막으로, 상기 제2유기용매 분획물의 농축물을 실리카 겔 칼럼 크로마토 그래피(silica gel column chromatography), 세파덱스 LH-20 겔(sephadex LH-20 gel) 칼럼 크로마토그래피 및 엠씨아이 겔 칼럼 크로마토그래피(MCI gel column chromatography)로부터 선택된 크로마토그래피 기법, 바람직하게는 실리카 겔 칼럼 흡착 크로마토그래피 기법으로 분리 및 정제하여 상기 화학식 1로 표시되는 신규 트리테르펜계 화합물을 얻는다.
셋째, 본 발명에 따르면, 상기 화학식 1로 표시되는 신규 트리테르펜계 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물, 및 상기 화학식 1로 표시되는 신규 트리테르펜계 화합물 또는 이를 함유하는 추출물을 포함하는 식용 제품이 제공된다.
본 발명의 바람직한 실시태양에 따르면, 상기 화학식 1로 표시되는 신규 트리테르펜계 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 폐암, 난소암, 피부암, 중추신경암 및 결장암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종의 질병의 예방 또는 치료에 사용된다.
상기 화학식 1로 표시되는 신규 트리테르펜계 화합물의 항암활성을 조사하기 위하여 에스알비 법(sulforhodamine B, SRB 법, Skehan, et al., Prox. Am. Assoc. Cancer Research, 30 : 612)을 사용하여 폐암, 난소암, 피부암, 중추신경암 및 결장암 등 5종의 세포주의 성장억제 정도를 측정하였다. 이때, 인체암세포주로는 폐암세포주인 A549, 난소암세포주인 SK-OV-3, 피부암세포주인 SK-MEL-2, 중추신경암세포주인 XF498, 결장암세포주인 HCT15를 사용하였다. 그 결과, 상기 화학식 1의 신규 트리테르펜계 화합물이 5종의 암세포주에 대해 성장을 강하게 억제하는 활성을 나타냄을 확인하였다. 상대적 활성 비교에서 특히 난소암세포와 결장암세포에 더욱 강한 활성을 나타내었는 바, 천연물질로서는 상대적으로 강한 항암활성을 보 유함을 확인하였다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시태양에 따르면, 상기 화학식 1로 표시되는 신규 트리테르펜계 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 파네실전달 효소(Farnesyl-protein transferase, FPTase) 저해제로서 사용된다.
파네실전달 효소는 세포의 증식과 분화를 조절하는 신호전달 과정에 관여하는 효소의 하나로서, 파네실 피로포스페이트(farnesyl pyrophosphate)의 파네실 그룹(farnesyl group)을 라스 단백질(ras protein)에 전달하는 기능을 하며, 라스 단백질은 성장조절인자를 통한 신호전달과정에서 가장 중요한 역할을 하는 단백질로서 라스 프로모토 옹코진(ras proto oncogenes)에 의해 발현되는데, 이 라스 유전자(ras gene)는 사람의 악성종양과 관련이 있는 것으로 알려져 있어 파네실전달 효소(Farnesyl-protein transferase, FPTase)의 저해제 개발은 효과적인 암 치료제 개발의 주요 타겟(target)이 되고 있다.
이에 본 발명에서는 상기 화학식 1로 표시되는 신규 트리테르펜계 화합물의 파네실전달 효소(FPTase)의 저해 활성을 조사하기 위하여 흰쥐의 뇌에서 분리한 파네실전달 효소(FPTase)를 분리한 후 정제하여 사용하였으며, 파네실전달 효소(FPTase)의 활성측정은 섬광근접접근법(SPA, Scintilation Proximity Assay) (Reiss et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology 3 : 242-245)에 의해 측정하였다. 그 결과, 상기 화학식 1의 신규 트리테르펜계 화합물이 파네실전달 효소(FPTase) 저해 활성이 아주 우수한 것으로 확인되어 5종의 세포주에 대한 강한 성장 억제 활성이 파네실전달 효소(FPTase)의 저해 활성과도 어느 정도 연관이 있을 것으로 판단되었다.
뿐만 아니라, 상술한 바와 같이, 상기 화학식 1의 신규 트리테르펜계 화합물은 암세포주에 대한 강한 성장 억제 활성을 나타내는 동시에, 파네실전달 효소(FPTase)에 대해서도 강한 저해 활성을 나타내므로, 상기 신규 트리테르펜계 화합물을 유효성분으로 포함하거나 또는 이를 함유하는 붉나무 줄기 추출물을 주원료 또는 부원료로 사용하여 천연소재의 암치료 보조제와 같은 건강기능식품, 기능성 음료, 및 식품 또는 음료 첨가물 등의 식용 제품으로 유용하게 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 필요에 따라서 약제학적 분야에서 통상적으로 허용되는 담체(carrier), 부형제(forming agent), 희석제 등과 혼합하여 분말, 과립, 정제, 캡슐제 또는 주사제 등의 제형으로 제조되어 사용될 수 있다. 이렇게 제조된 약제학적 제제는 경구적으로 투여되거나 비경구적으로 국소적용될 수 있다.
이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명의 예시일 뿐이므로 본 발명이 하기의 실시예에 의하여 한정되는 것으로 간주되어서는 안 된다.
(실시예 1)
- 붉나무 줄기로부터 화학식 1로 표시되는 신규 트리테르펜계 화합물의 분리 및 정제
건조된 붉나무 줄기 6kg을 분쇄하여 실온에서 메탄올(MeOH)을 사용하여 5회 추출하고 여과액을 모아 진공 농축하여 365.2g의 메탄올 추출물을 얻었다. 이 메탄올 추출물을 증류수에 현탁하여 에틸아세테이트(EtOAc)로 수차례 용매 분배한 후 진공농축하여 최종 165g의 에틸아세테이트 분획을 얻었다.
이중에서 에틸아세테이트 분획 60g을 대상으로 실리카겔(Merck 70-230mesh) 1000g을 충진시킨 지름 7㎝의 칼럼에서 헥산/에틸아세테이트(15:1에서 1:20) 및 에틸아세테이트/메탄올(20:1에서 5:1)을 전개용매로 기울기 용리로써 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 수행하여 500㎖씩 총 516개의 분획을 분취한 후 티엘씨(TLC) 분석으로 유사한 성분패턴의 분석을 서로 합쳐 최종 45개의 소분획을 얻었다. 이 중 18번 분획에서 메탄올 처리시 용해되지 않는 불용성 침전물을 분리, 회수하여 농축 후, 상기 화학식 1로 표시되는 신규 트리테르펜계 화합물 25㎎을 얻었다.
상기 화학식 1의 화합물의 이화학적 특성은 하기와 같다.
(1) 물질의 성상 : 흰색가루상
(2) 분자량 : 454 ( EIMS (m/z) [M]+ = 454 )
상기 화학식 1의 화합물의 질량분석(MS) 스펙트럼은 도 2에 제시하였다.
(3) 분자식 : C30H46O3
(4) 수소핵자기공명스펙트럼:
클로르포름-d(CDCl3)을 용매로 하여 측정한 수소 핵자기공명스펙트럼 결과는 하기와 같고, 도 3에 상기 화학식 1의 화합물의 수소핵자기공명스펙트럼을 제시하였다.
(클로르포름-d, δ) - 0.900 (3H, s), 0.927 (3H, s), 0.977 (3H, s), 1.037 (3H, s), 1.080 (3H, s), 1.915 (3H, s), 4.900 (1H, s), 4.952 (1H, s), 6.093 (2H, t, J=6.94 Hz)
(5) 탄소핵자기공명스펙트럼:
클로르포름-d(CDCl3)을 용매로 하여 측정한 탄소 핵자기공명스펙트럼 결과는 다음과 같고, 도 4에 상기 화학식 1의 화합물의 탄소 핵자기공명스펙트럼을 제시하였다.
(클로르포름-d, δ) - 15.417, 16.030, 16.690, 19.652, 20.455, 20.953, 22.411, 24.957, 26.682, 28.157, 28.633, 32.994, 34.068, 34.246, 36.790, 37.826, 39.865, 40.635, 43.675, 44.807, 47.390, 49.823, 50.147, 55.229, 109.598, 126.251, 146.316, 151.188, 173.327, 218.321
(6) 이차핵자기공명스펙트럼
도 5에 상기 화학식 1의 화합물의 무변조증강극성전달스펙트럼(DEPT)을 제시하였다. 도 6에 상기 화학식 1의 화합물의 수소-수소 상관성분광스펙트럼(1H-1H COSY)을 제시하였다. 또한, 도 7에는 화학식 1의 화합물의 헤테로핵다중양자상관성스펙트럼(HMQC)을 제시하였으며, 도 8에는 헤테로핵다중결합연결스펙트럼(HMBC)을 제시하였다.
(실시예 2)
- 항암활성 비교평가
실시예 1에서 얻은 화학식 1로 표시되는 신규 트리테르펜계 화합물을 이용하여 인체 암세포주에 대한 세포독성을 에스알비 법(sulforhodamine B, SRB 법, Skehan, et al., Prox. Am. Assoc. Cancer Research, 30 : 612)으로 조사하였다.
이때 인체암세포주로는 폐암세포주인 A549, 난소암세포주인 SK-OV-3, 피부암세포주인 SK-MEL-2, 중추신경암세포주인 XF498, 결장암세포주인 HCT15를 사용하였다. 항암활성 조사방법을 보다 상세히 설명하면 하기와 같다.
계대배양 중인 상기의 암세포주를 트립신-시디티에이(trypsin-CDTA) 용액으로 부착 면으로부터 분리시키고, 96 웰 프레이트 바텀 마이크로플레이트(96 well flat bottom microplate)에 웰당 세포수가 5×103 (A549, HCT15), 1×104 (SK-MEL-2, XF498), 2×104 (SK-OV-3)이 되도록 분주하였다. 여기서 6농도의 로그 농도(log dose)로 배양액에 희석된 시료용액들을 웰에 각각 100㎕ 씩 넣어주고 48시간 더 배양하였다. 배양 후 각 웰의 배양액을 제거하고 10% 트리클로로아세테이트(trichloroacetic acid,TCA)를 100㎕ 씩 가하여 4℃에서 1시간 방치하여 세포들을 플레이트 바닥 면에 고정시켰다. 세포의 고정이 끝난 후 플레이트를 물로 5~6회 세척하여 남아있는 티시에이(TCA) 용액을 완전히 제거하고 실온에서 남은 물기가 없도록 건조시켰다. 완전히 건조된 플레이트는 웰당 100㎕ 1% 초산 용액에 0.4% 에스알비(SRB)를 녹인 염색용액을 가하여 30분간 세포를 염색하고 다시 1% 초산 용액으로 5~6회 세척하여 세포에 결합하지 않은 에스알비(SRB)를 제거하였다. 이렇게 염색된 셀 플레이트들은 다시 실온에서 건조시킨 뒤 웰당 100㎕의 10mM 트리스 마베이스(trismabase) 용액을 가하여 적정용기 진탕기(titer plate shaker)로 10분간 진탕하여 염색약을 용출시킨 후 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 사용하여 520nm에서 흡광도를 측정하였다. 암세포들에 대한 화합물의 효과를 계산하기 위하여 화합물을 가할 때의 세포수(Tz)와 화합물이 들어있지 않은 배양액을 가하여 48시간 배양했을 때의 세포수(C) 및 각 농도의 화합물과 함께 48시간 배양했을 때의 세포수(T) 등을 측정하여 Tz〉T인 경우에는 하기 수학식 1에 따라서, 그리고 Tz〈T인 경우에는 하기 수학식 2에 따라서 항암활성을 계산하였다.
[(T-Tz)/(C-Tz) × 100]
[(T-Tz)/Tz × 100]
이렇게 계산된 값들로부터 자료회귀(data regression)를 이용하여 화합물이 암세포의 성장을 50% 억제하는 농도인 50% 유효농도(effective dose, ED50)를 계산하여 각 화합물의 항암활성도를 비교하였다. 대조약물로는 합성 항암제인 독소루비신(doxorubicin)을 사용하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
화학식 1의 화합물의 인체 암세포주에 대한 세포 독성(단위 ED50 : ㎍/㎖)
화합물 폐암세포 (A549) 난소암세포 (SK-OV-3) 피부암세포 (SK-MEL-2) 중추신경암세포 (XF498) 결장암 (HCT15)
화학식 1 5.51 3.84 2.62 3.88 3.99
독소루비신 0.09 0.16 0.07 0.04 0.13
상기 표 1에서 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물이 5종의 암세포주에 대해 성장을 강하게 억제하는 활성을 나타냄을 확인하였다. 상대적 활성 비교에서 특히 난소암세포와 결장암세포에 더욱 강한 활성을 나타내었다. 이때 대조군으로서 합성 항암제인 독소루비신(doxorubicin)을 사용하였는데, 상기 화학식 1의 화합물이 대조군보다 전체적으로 세포독성이 상대적으로 약하였지만 천연물질로서는 강한 항암활성을 보유한 것으로 인정되었다.
(실시예 3)
- 파네실전달 효소(FPTase) 저해활성 평가
실시예 1에서 얻은 화학식 1의 화합물을 이용하여 파네실전달 효소(Farnesyl-protein transferase, FPTase)의 저해활성을 에스피에이 방법(Scintilation Proximity Assay, SPA, Reiss et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology 3 : 242-245)으로 조사하였다. 파네실전달 효소 저해활성의 조사방법을 보다 상세히 설명하면 하기와 같다.
파네실전달 효소(FPTase)는 논문에 발표된 방법(Reiss et al., Cell 62 : 81-88)에 따라 흰쥐(Male Sprague-Dowley, 100~150g)의 뇌에서 분리한 후 음이온 교환 큐-세파로즈(anion exchange Q-Sepharose) 칼럼을 이용하여 부분 정제하였다. 그리고, (FPTase)의 활성측정은 섬광근접접근법(Scintilation Proximity Assay, SPA)으로 측정하였는데, 즉, 20㎕의 트리튬으로 치환된 파네실 파이로포스페이트(3H-Farnesyl pyrophosphate, 3H-FPP), 20㎕의 바이오틴 라민 비 펩타이드(biotin lamin B peptide), 10㎕의 시료(화학식 1 의 화합물), 10㎕의 검정 완충용액(50mM Tris-HCl, pH 7.5, 25mM MgCl2, 2mM KCl, 5mM Na2HPO4, 0.01% Triton X-100)을 넣고 3분 동안 전 배양한 후 40㎕의 파네실전달 효소(FPTase)를 넣어주고 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 배양이 끝난 후 150㎕의 에스피에이 비드와 반응 완결 시약이 혼합된 용액(SPA bead/stop reagent)을 넣고 섞어주고(vortex), 30분간 상온에서 방치한 후 액체 신티레이션 카운터(liquid scintilation counter)로 반응정도를 측정하였다. 효소 억제도는 % 저해도(inhibition)로서 하기 수학식 3에 따라 계산하였다.
[1-(시료-B2)/(C-B1)] × 100
블랭크 1(Blank1, B1)은 시료와 효소가 모두 없는 것이고, 블랭크 2(Blank2, B2)는 시료는 있고 효소가 없는 것이고, 컨트롤(Control, C)은 시료는 없고 효소만 있는 것이다. 이렇게 계산된 값들로부터 자료회귀(data regression)를 이용하여 화합물이 암세포의 성장을 50% 억제하는 농도인 50% 유효농도(effective dose, ED50)를 계산하여 각 화합물의 파네실전달 효소(FPTase) 저해활성을 조사하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
화학식 1의 화합물의 파네실전달 효소(FPTase) 저해활성
화합물 농도 (㎍/㎖) 효소저해도 (%) EC50
100 80.9 57.1 ㎍/㎖ (125 nM)
50 44.5
20 23.3
10 14.3
1 12.8
표 2에 나타낸 바와 같이, 상기 화학식 1로 표시되는 신규 트리테르펜계 화합물이 파네실전달 효소(FPTase)에 대하여 강하게 저해 활성을 나타냄을 확인하였다. 또한, 상기 화학식의 1로 표시되는 화합물은 식물에서 유래한 강력한 파네실전달 효소(FPTase) 중 하나인 알테미놀라이드(arteminolide, EC50=360 nM)와 비교하여 그 활성이 오히려 더 강한 것으로 인정되었다.
이러한 결과로부터, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물은 천연물질로서 인체에 안정함을 고려할 때 천연소재의 항암치료 보조제 및 건강기능식품 보조제로서 우수한 천연활성화합물임이 확인되었다. 따라서, 상기 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품, 기능성 음료 또는 이들의 첨가물, 또는 상기 화합물을 조성물로 하는 붉나무 등의 식물의 추출물을 또한 제공할 수 있다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면, 붉나무로부터 분리된 기능성 유용물질 및 그 분리, 정제를 통한 제조방법을 제시함으로써 기능성 유용 물질의 이용도를 높였다. 또한, 천연으로부터 신규 트리테르펜계 화합물 1종을 분리함으로써 신기 능성 유용 물질개발 가능성을 제공하고 있다.
아울러, 붉나무로부터 분리한 신규 트리테르펜계 화합물은 인체암세포주인 폐암세포주 A549, 난소암세포주 SK-OV-3, 피부암세포주 SK-MEL-2, 중추신경암세포주 XF498, 결장암세포주 HCT15에 대한 우수한 세포독성과 파네실전달 효소(FPTase)에 대하여 강한 저해 활성을 나타내므로, 상기 신규 트리테르펜계 화합물 및/또는 이를 함유하는 붉나무 등의 식물 추출물을 이용하여 항암치료 보조제 및 건강기능식품으로의 이용가능성을 제공한다. 뿐만 아니라, 전통 민간 생약인 붉나무의 유효성분을 밝혀냄으로 붉나무의 생약자원으로서의 가치 및 부가가치를 증진하는 효과가 있다.
본 발명의 기술적 사상 또는 범위내에서 당 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의해 그 변형이나 개량이 가능함이 명백하다. 따라서, 본 발명의 단순한 변형 내지 변경은 모두 본 발명의 영역에 속하는 것으로 본 발명의 구체적인 보호 범위는 첨부된 특허청구범위 및 그 동등범위에 의하여 명확해질 것이다.

Claims (8)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 3-옥소담마르-20,24E-다이엔-26-오익 엑시드(3-oxodammar-20,24E-dien-26-oic acid) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
    화학식 1
    Figure 112005001146348-pat00003
  2. (a) 붉나무(Rhus chinensis Mill.) 줄기를 제1유기용매로 추출한 후 진공 농축하여 추출물을 얻는 단계;
    (b) 상기 추출물을 제2유기용매로 용매분배한 후 진공 농축하여 분획추출물을 얻는 단계; 및
    (c) 상기 분획추출물을 크로마토그래피를 수행하여 항암활성 물질을 얻는 단계;
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 제1항에 따른 화합물의 제조방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 제1유기용매는 메탄올, 에탄올, 헥산, 아세톤 또는 이들의 혼합물이고, 상기 제2유기용매는 에틸아세테이트, 에테르, 클로로포름 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제2항에 있어서, 상기 크로마토그래피는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 세파덱스 LH-20 겔(sephadex LH-20 gel) 칼럼 크로마토그래피, 또는 엠씨아이 겔 칼럼 크로마토그래피(MCI gel column chromatography)인 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제1항에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하며, 폐암, 난소암, 피부암, 중추신경암 및 결장암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종의 질병의 예방 또는 치료에 사용되는 약학적 조성물.
  6. 제1항에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하며, 파네실전달 효소(FPTase) 저해제로서 라스 암 유전자 발현억제 효능을 가지는 항암제로 사용되는 약학적 조성물.
  7. 삭제
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