BG61639B1

BG61639B1 - Антинеопластичен химиотерапевтик от растителен произход иметод за получаването му

Info

Publication number: BG61639B1
Application number: BG97371A
Authority: BG
Inventors: Claudio D'arrigo
Original assignee: Claudio D'arrigo
Priority date: 1991-05-29
Filing date: 1993-01-28
Publication date: 1998-02-27
Also published as: AU2150692A; UA26321C2; RO109815B1; HU9300244D0; BG97371A; IT1245700B; DE69213886D1; PT100526A; MX9202547A; US5558866A; DE69213886T2; DK0541780T3; BR9205264A; PT100526B; NO930271D0; PL168348B1; FI101042B; GR3021825T3; ATE142886T1; HUT64233A

Description

Предмет на настоящото изобретение са вещества и състави с антинеопластична активност, екстрахирани от растения от семейство Pittosporacea, фармацевтични препарати на основата на поне едно от споменатите вещества и състави, метод за тяхното екстрахиране и респективно техни рецептури.

Както е известно, една от най-перспективните насоки в изследването на неопластичните заболявания, поне от теоретична гледна точка, е антитуморната химиотерапия. Антипролиферационните агенти, изолирани до сега, са от най-различен произход и с различни химични характеристики. Сред тези агенти са също различни растителни екстракти като colchicine u vincaleucoblastin, първият екстрахиран от Colchicum Autumnale, а вторият от Vinca Rosea. Въпреки, че тези вещества повече или по-малко се отличават със специфична антитуморна активност, тяхната селективност по отношение на изродените клетки обикновено е твърде лоша. Опасността от възможното им разсейване успоредно с метаболизма на здравите клетки е важна пречка за тяхната широка употреба.

Изненадващо е установено, че с помощта на настоящото изобретение, осигуряващо химиотерапевтичен антинеопластичен агент на основата на активен компонент от растителен произход с високоселективна антитуморна активност и много по-ниска в сравнение с други антитуморни лекарства токсичност, е възможно да се превъзмогнат гореспоменатите ограничения.

Преди всичко обект на настоящото изобретение е метод за получаване на вещества и/ или състави с антинеопластична активност, характеризиращ се с това, че части и/или продукти на растения от семейство Pittosporacea, в който и да е стадий на тяхното развитие или зрелост, се подлагат на следната обработка:

а) екстракция на компонентите чрез накисване в органичен разтворител;

б) възможно разбъркване или разклащане на разтвора, съдържащ екстракта с друг разтворител, поне частично смесваем с пър10 вия с цел разделяне на компонентите на екстракта в образуваните фази;

в) възможна обработка на всяка фаза, независимо една от друга, с поне една органична течност със свойства на разтворител по отношение на поне един от компонентите на екстракта, последвана от филтриране на всяка суспензия, която може да се образува, отделяне на твърдата фаза и внимателно пречистване;

г) възможно разделяне на компонентите във всяка от течните фази; и

д) отделяне на разделените компоненти с антинеопластична активност от тези без антинеопластична активност.

Екстрактите могат да се сушат и пречистват преди всеки следващ етап на метода.

Растенията от семейство Pittosporacea са за предпочитане от рода Pittosporum. В този аспект растенията могат да бъдат подбрани например от групата, съдържаща Pittosporum ondulatum, Pittosporum coriaceum, Pittosporum viridicolor, Pittosporum rhombipholium, Pittosporum eugenoides, Pittosporum crossifolium u Pittosporum Tobira и техни комбинации.

Разтворителят може да бъде алкохол. Добри резултати са получени при използване на етилов алкохол.

Обемното съотношение между органичния разтворител и обработваните части на растенията е за предпочитане между 1:10 и 10:1.

Времето за обработка е за предпочитане от 5 min до 3 месеца. Температурата на обработка може да варира за предпочитане от 5°С до 100°С.

За предпочитане е компонентите на екстракта да се разделят хроматографски. Добри резултати са получени при използване на колонна хроматография през силикагел или препаративна колонна HPLC.

Екстракцията може да се осъществи с помощта на етанол и времената на задържане при отделяне на компонентите посредством HPLC са около следните стойности: 1.157, 1.545, 1.883, 2.051, 2.273, 2.572 и 2.743.

(Трябва да се уточни, че аналитичните тестове, и в този случай и при следващите, се извършват на хроматограф Perkin-Elmer 250, снабден с колона 125 mm ± 4 mm RP 18 с подвижна фаза, съдържаща метанол и вода в съотношение 80:20 и дължина на вълната равна на 210 nm).

След екстракцията с етанол, така полу61639 ченият разтвор се разклаща с хлороформ до получаване на две фази, алкохол-хлороформена фаза с интензивен зелен цвят и водна фаза с оранжево-жълт цвят. В този случай, компонентите с антинеопластична активност се намират в алкохол-хлороформената фаза. Отделянето на компонентите с антинеопластична активност се извършва хроматографски след изсушаване на алкохол-хлороформената фаза и разтваряне в метанол. При хроматографиране на метанолния разтвор чрез HPLC се отделят компонентите, които имат времена на задържане около 1.969, 2.296 и 2.756.

Алкохол-хлороформеният разтвор може да се концентрира чрез изпарение и да се прибави изопропилов алкохол за образуване на суспензия, която се филтрува, твърдата фаза се изсушава термично и се разпрашава в хаван. След последващо разтваряне в етанол-вода се пречиства през хроматографска колона с активен въглен. Двете твърди фракции (замърсена и чиста), разтворени в етанол-вода или метанол могат да се хроматографират посредством HPLC, като се отделят компонентите, които имат времена на задържане около 1.157, 1.545 и 2.264.

Изобретението също се отнася до самите вещества и състави, което е следствие от факта, че те могат да се получат по описания по-горе метод.

Предмет на настоящото изобретение са също вещества и състави, имащи антинеопластична активност, които могат да бъдат получени по описания по-горе метод.

От веществата и съставите с антинеопластична активност могат да се получат соли, съединения и комплекси, с цел първите да станат водоразтворими.

Настоящото изобретение още се отнася до фармацевтични препарати, които съдържат поне един активен компонент - вещество или състав, избран от групата вещества или състави, или комбинация от тях, с антинеопластична активност и които са получени по описания по-горе метод.

Фармацевтичният препарат може да бъде подбран от групата, съдържаща воден разтвор за парентерална употреба, капсули за орално приемане, свещички за ректално и вагинално приложение, унгвенти, мехлеми, кремове и гелове.

Водният разтвор може да се постави в ампули. Всяка ампула съдържа 0,1-2,5 g активен елемент, за предпочитане 0,1-1,5 g и найвече 0,2-1,0 g активен елемент.

В случая, когато фармацевтичният препарат е под формата на капсули, всяка капсула съдържа 0,2-2,0 g активен елемент, за предпочитане 0,8-1,2 g активен елемент.

В случая, когато фармацевтичният препарат е под формата на свещички за ректална употреба, всяка свещичка съдържа 0,2-2,5 g активен елемент, за предпочитане 0,3-1,0 g или 1,2-1,7 g активен елемент.

В случая, когато фармацевтичният препарат е под формата на свещички за вагинално приложение, всяка свещичка съдържа 0,12,5 g активен елемент, за предпочитане 0,52,5 g, най-вече 0,3-1,7 g активен елемент.

В случая, когато фармацевтичният препарат е под формата на унгвент, мехлем, крем или гел, локалният носител съдържа от 0,5 до 12 % активен елемент, за предпочитане от 3 до 7 % активен елемент.

Изобретението се отнася също и до употребата на компонентите, получени чрез екстракция и разделяне съгласно описания по-горе метод, сами или в комбинация, за получаване на медикаменти за лечение на различни патологии, различни от неопластичните.

Обектите на изобретението са описани най-общо с помощта на следващите примери ще бъде представено детайлно описание на целта, характеристиките, предимствата и методите за приложение на изобретението.

Пример 1. Метод за екстракция и пречистване на активните елементи kg зелени плодове от Pittosporum Tobira се смилат фино и се заливат при стайна температура с такова количество етилов алкохол 95° достатъчно да покрие смлените плодове (около 1:1 об.). Сместа се оставя да кисне в продължение поне на 30 дни, след което се филтрира. 1000 ml от алкохолния екстракт, получен, както е описано по-горе, се поставя в делителна фуния заедно със същия обем хлороформ. След неколкократно разбъркване настъпва разделяне, което завършва след 24 h разбъркване: от долната част на фунията се отделя алкохол-хлороформеният интензивно зелен разтвор; в горната част на фунията се образува воден разтвор с жълто-оранжев цвят (оранжева разтворима фракция = OSF) на водоразтворими вещества, екстрахирани от вода3 та, която първоначално се намира в плодовете. OSF е в количество около 20 % об. и се образува почти изключително от компонентите с време на задържане при HPLC 1.141 (3.45 % площ), 1.440 (24.46 % площ) и 1.593 (61.93 % площ). OSF субстанцията, равна на приблизително 73 % тегл. сухо вещество от общия алкохолен екстракт, се образува като жълтеникавобял прах, който е не само напълно неактивен спрямо експерименталните тумори, но подпомага тяхното развитие, като го ускорява. Следователно тази субстанция се отстранява. Останалият алкохол-хлороформен разтвор се изпарява при 30°С в ротационен вакуумизпарител и се суши. Получава се аморфно вещество, тъмнозелено на цвят, което, когато се разтвори в метанол (1 mg/ml) и се анализира посредством HPLC, показва забележима концентрация на активни пикове с времена на задържане от 1.969 (7.83 % площ) до 2.296 (40.12 % площ) до 2.756 (1.47 % площ).

Пример 2. Метод за пречистване на активните съставки

Алкохол-хлороформеният разтвор, останал от обработката, описана в пример 1 (целия алкохолен екстракт без OSF) се изпарява в колба в ротационен вакуумизпарител при 45°С, докато се концентрира до обем около 30 ml (приблизително 1/35 от първоначалния алкохолен екстракт). Тогава към колбата се прибавя изопропилов алкохол в количество равно на 30 % от общия първоначален алкохолен екстракт (300 ml). Образува се суспензия, тъй като част от веществата, получени в общото количество алкохолен екстракт без OSF, е разтворима и в етанол и в метанол, но вече не се разтваря в изопропанол.

Така получената Суспензия се филтрира през бързофилтриращ филтър. Утайката, която остава върху филтъра се суши при температура 45°С. След като се изсуши, се разпрашава в порцеланов хаван. Така се получават приблизително 1500 mg жълто-зеленикав прах. Този прах (който по-нататък ще наричаме CIDI), разтворен в метанол и изследван посредством обичаен HPLC метод показва времена на задържане 1.157 (78.83 % Фющ), 1.545 (16.25 % площ) и 2.264 (4.91 % площ).

Възможно е, при използване на Supercosil LC-NHj-5/и-сферична колона, подвижна фаза CHjCN-HjO (3:1) за скорост на изтичане 1,5 ml/m u UV детектор при 217 nm да се получат следните стойности на времената на задържане: 1.889 (концентрация 53.88); 2.640 (20.89);

3.145 (4.61); 3.420 (5.08); 3.942 (6.16); 4.722 (4.53); 5.255 (3.253); 6.287 (0.90) и 6.982 (0.66).

При използване на Chromopack-Lichrosorb RP 18-10/и-нерегулярна колона, със същите елуент, скорост на изтичане и маркер, се получават следните пикове: 1.460 (концентрация 65.98); 1.965 (20.87); 2.535 (1.86); 2.704 (2.05); 3.097 (1.74); 3.395 (3.38); 4.324 (0.85); 4.609 (0.93); 9.597 (0.88); 10.017 (1.42).

При калциниране веществото CIDI показва наличие на 3,17 % утайка. Елементният анализ в тегл. % (без да се смята утайката) е следният: С 54,25 %; Н 7,58 %; О 38,17 %, който съответства на емпирична формула, близка до С^Н^О, и т.т.(разл.) 196-222°С. В инфрачервения спектър (спектрофотометър за ИЧС Perkin-Elmer мод.683) в среда на КВг, концентрация 1 mg/100 mg, се наблюдават следните ивици:

3400 спг¹ валентни асоциирани ОН; 2960 спг¹ асиметрични валентни СН3; 2920 спг¹ асиметрични валентни СН2; 1720 спг¹ валентни С=О; 1610 спг¹ асиметрични валентни С=О на СОО'; 1460 спг* вибрационни СН3; 1380 cm¹вибрационни СН3 (типични за ОСОСН₃); 1250 cm¹ вибрационни ОН; 1150, 1080 и 1040 спг¹валентни С-О.

UV спектър (спектрофотометър UV-vis Perkin-Elmer мод. Lambda 5):

1) Разтвор в СН₃ОН-Н₂О (4:1), концентрация 6.10² mg/ml: максимална абсорбция при 202 nm; абсорбцията бързо намалява до 260 nm, остава постоянна в областта от 260 до 330 nm, и след това отново намалява;

2) Разтвор в CH₃CN-H₂O (3:1), концентрация 6.10'²mg/ml; абсорбцията бързо намалява от 200 до 260 nm, остава постоянна от 260 до 330 nm и след това отново намалява.

C1DI под формата на прах е неразтворим в ацетон, бензол, хлороформ, етилов етер, петролев етер, етилов алкохол, изопропилов алкохол; разтворим е в метанол и вода.

Водният разтвор на CIDI има pH 6,5.

LD₃₀ върху мишки: CD-I (ICR) BR е 1274.9 mg/kg (базови граници 1041.2-1561.0 mg/kg) орално и 25 mg/kg (базови граници 23.0-27.2 mg/kg) интраперитонеално.

Пример 3. Следващ метод за пречистване на активните съставки g C1DI под формата на прах, получен по метода съгласно примери 1 и 2, се разтваря в 1000 ml разтвор на етилов алкохол и вода (4:1), като се получава 1 %-ен разтвор със зелен цвят. Приготвя се хроматографска колона с порест сепаратор с диаметър 4,5 cm. Върху сепаратора се поставя слой от памучна вата, а върху него слой пясък с височина приблизително 3 cm. След това се излива суспензия, съдържаща 35 g активен въглен в етанол. Когато активният въглерод се уплътни добре, разтворът на CIDI прах (разтворен, както е описано по-горе) се пропуска през хроматографската колона. Когато целият разтвор на CIDI премине през хроматографската колона, колоната се промива чрез пропускане на 1000 ml чист разтворител (етилов алкохол-вода 4:1).

Получава се прозрачен, безцветен разтвор, който се концентрира максимално в ротационен вакуумизпарител при температура 45°С.

След прибавяне на изопропилов алкохол настъпва кристализация. След сушене, отново в ротационен вакуумизпарител и разпрашаване в хаван, се получава бял прах, който понататък ще наричаме чист CIDI. Чистият CIDI съответства на 60 % тегл. CIDI.

Чистият CIDI прах, разтворен в метанол и изследван посредством HPLC метод, показва два основни пика с времена на задържане 1.131 (87.54 % площ) и 1.551 (6.16 % площ).

Обратно, HPLC с UV детектор при 217 nm, подвижна фаза CH₃CN-H₂O (3:1), скорост на изтичане 1,5 ml/m показва следните RT (основните пикове):

1) При използване на Supercosil LC-NH₂5/и-сферична колона: 1.885 (концентрация 19.60); 16.259 (концентрация 67.51);

2) При използване на Chromopack-Lichrosorb RP 18-10/и-нерегулярна колона: 1.617 (концентрация 87.74); 1.985 (3.69) и 2.134 (2.20).

Чистият CIDI представлява бяло водоразтворимо твърдо вещество, което има утайка при калциниране 3,05 %. Елементният анализ в тегл. % (без да се смята утайката) е следният: С 48,82 %; Н 7,06 %; О 44,12 %, който съответства на емпирична формула близка до С₆Н₁₀О₄ и т.т. (разл.) от 205 до 255°С.

Инфрачервеният спектър е практически еднакъв с този на продукта CIDI.

UV-спектър (спектрофотометър UV-vis Perkin-Elmer мод. Lambda 5):

1) Разтвор в СН₃ОН-Н₂О (4:1), концентрация 6.1 (У² mg/ml: максимална абсорбция при 203 nm; абсорбцията бързо намалява, практически никаква абсорбция не се наблюдава над 260 nm;

2) Разтвор в CH₃CN-H₂O (3:1), концентрация 6.10'² mg/ml; абсорбцията бързо намалява от 200 до 260 nm, след това остава постоянна близко до нулата.

Разтворимостта на чистия CIDI е същата като тази на CIDI, както и pH на водния разтвор е същият.

Интраперитонеалната LD₃₀ на чисти CIDI върху мишки: CD-I (ICR) BR е 20,2 mg/ kg (базови граници 17,8-22,0 mg/kg).

ЯМР спектри на CIDI и чист CIDI:

ЯМР спектрите са получени на апарат Broker АС 200 при 200 MHz (прогонен) и 50 MHz (въглероден). Пробите се приготвят чрез разтваряне на 90 mg продукт в 0,6 ml DMSOd6 при прибавяне на 10 mg натриева сол на 3(триметилсилил) пропан-сулфонова киселина (DSS) като вътрешен стандарт.

При *Н спектрите се акумулират 1000 сканирания чрез използване на импулс 30°; FID е предмет на Gaussian усилване, за да се увеличи разделителната способност. Обменът на подвижни протони се извършва чрез прибавяне на DjO + CF₃COOH.

При ¹³С спектрите се акумулират 6200 сканирания (CIDI) и 14900 сканирания (чист CIDI) чрез използване на импулс 90° с хетероядрено декуплиране в CPD.

Qt ‘Н спектрите се вижда наличие на различни подвижни протони в областта 3-5 ppm. Забелязва се наличие на редица протони от алкилен тип, алкидните протони намаляват в по-ниските области/ Възможно е присъствие на винилови протони; и отсъствие на ароматни протони. ¹³С спектрите потвърждават горепосочените данни с наличието на голям брой повече или по-малко заместени алкилни въглеродни атоми. Забелязва се наличие на няколко пика във виниловата област и няколко пика в карбонилната област като карбонилните групи са от киселинен или естерен тип.

Спектрите доказват отсъствие на съществени разлики между двете смеси. Възможна е разлика в процентно отношение между различните компоненти.

Пример 4. Метод за хроматографско разделяне на активните съставки

Алкохол-хлороформеният екстракт, получен съгласно пример 1, се изсушава в ротационен вакуумизпарител и се разтваря в малко количество метанол (100 ml). Този разтвор се подлага на хроматографско разделяне, както през колона със силикагел, така и много внимателно, през препаративна HPLC колона. Така се получават чисти фракции, които, както е описано по-горе, съответстват на пикове 1.157, 1.545, 1.883, 2.051, 2.273, 2.572 и 2.743.

Пример 5. Тестове за потвърждаване на антинеопластичната активност in vitro u in vivo Веществата и/или съставите, получени съгласно предишните примери, които са или разтворими, или солюбилизирани с помощта на повърхностно активни вещества (Polisorbato 80 или Geronol) във вода, показват забележима антинеопластична активност, заедно с приемливо ниво на токсичност и отсъствие на имунопотискаща активност. Наблюдава се селективна спрямо туморните клетки антинеопластична активност на хистологично ниво, както in vitro, така и in vivo, чрез доказано изменение в туморните клетки, което се проявява в увеличаване на обема, слепване, обръщане и скъсване на клетъчната мембрана,напълно безжизнена цитоплазма, съпроводена с хипохромия на ядрения хроматин и слаби нуклеоли. Доказателство за високата селективност, постигната от тези вещества е фактът, че всички посочени по-горе поражения на клетките напълно отсъстват при нормалните клетки, които са подложени на същото третиране.

In vivo, антинеопластичната активност на веществата, описани по-горе е изпитана върху Sa 180 на Швейцарска мишка (Swiss mouse), като най-общо се прилагат в граници от 2 до 25 mg/kg/смъртоносна доза, в зависимост от използваното вещество, приемано интраперитонеално в продължение на 8 последователни дни, като се започне от деня след трансплантацията. В сравнение със средния период на преживяване 25,8 дни при контролните животни, отхвърлянето на тумора се наблюдава при 90% от третираните животни, които определено се считат, че са преживели.

За терапевтични цели веществата съгласно настоящото изобретение и техните соли, съединения или комплекси, за предпочитане се използват под формата на воден разтвор за интрамускулни, ендовенозни или ендокавитарни инжекции.

Claims

1. Метод за получаване на вещества и/ или състави с антинеопластична активност, характеризиращ се с това, че части и/или продукти на растения от семейство Pittosporacea, в който и да е стадий на тяхното развитие или зрелост, се подлагат на следната обработка:

б) възможно разбъркване или разклащане на разтвора, съдържащ екстракта с друг разтворител, поне частично смесваем с първия с цел разделяне на компонентите на екстракта в образуваните фази;

в) възможна обработка на всяка фаза, независимо една от друга с поне една органична течност със свойства на разтворител по отношение на поне един от компонентите на екстракта, последвано от филтриране на всяка суспензия, която може да се обработва и разтваряне на твърдата фаза в подходящ разтворител;

г) възможно разделяне на компонентите във всяка от течните фази и

д) отделяне на разделените компоненти с антинеопластична активност от тези без антинеопластична активност, възможно изсушаване на споменатите екстракти и пречистване преди всеки следващ етап на метода.

2. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че растенията принадлежат на рода Pittosporum.

3. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че растенията са подбрани от групата, съдържаща Pittosporum ondulatum, Pittosporum coriaceum, Pittosporum viridicolor, Pittosporum rhombipholium, Pittosporum eugenoides, Pittosporum crossifolium u Pittosporum Tobira и техни комбинации.

4. Метод съгласно която и да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че разтворителят е подбран от групата на алкохолите.

5. Метод съгласно претенция 4, характеризиращ се с това, че алкохолът е етанол.

6. Метод съгласно която и да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че обемното съотношение между органичния разтворител и обработените части на растението е между 1:10 и 10:1.

7. Метод съгласно която и да е от пре дишните претенции, характеризиращ се с това, че времето за обработка е от 5 min до 3 месеца.

8. Метод съгласно която и да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че температурата на обработка се поддържа от 5° до 100°С.

9. Метод съгласно която и да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че разделянето на компонентите на екстракта се извършва хроматографски.

10. Метод съгласно претенция 9, характеризиращ се с това, че разделянето на екстрахираните компоненти се извършва през колона със силикагел.

11. Метод съгласно претенция 9, характеризиращ се с това, че разделянето на екстрахираните компоненти се извършва посредством препаративна колона ВЕТХ.

12. Метод съгласно която и да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че екстракцията се извършва с помощта на етанол и времената на задържане при отделяне на компонентите посредством ВЕТХ са около следните стойности: 1.157, 1.545, 1.883, 2.051, 2.273, 2.572 и 2.743.

13. Метод съгласно която и да е от предишните претенции, характеризиращ се с това, че екстракцията се извършва с помощта на етанол, полученият разтвор се разклаща с хлороформ до образуване на две фази, алкохолхлороформената фаза е с интензивен зелен цвят, а водната фаза е с жълто-оранжев цвят, като компонентите с антинеопластична активност се намират в интензивната зелена фаза.

14. Метод съгласно претенция 13, характеризиращ се с това, че разделянето на компонентите с антинеопластична активност се извършва хроматографски след изсушаване на алкохол-хлороформената фаза и разтваряне в метанол.

15. Метод съгласно претенция 14, характеризиращ се с това, че разделянето на компонентите с антинеопластична активност се извършва посредством ВЕТХ, като се отделят компонентите с времена на задържане 1.969, 2.296 и 2.756.

16. Метод съгласно претенция 13, характеризиращ се с това, че алкохол-хлороформеният разтвор се изпарява, докато обемът му се намали до около 1/35 от обема на изходния алкохолен разтвор, прибавя се изопропилов алкохол за получаване на суспензия, която се филтрира, твърдата фаза се изсушава термично и се разпрашава, като се получава зеленикав прах.

17. Метод съгласно претенция 13, характеризиращ се с това, че твърдата фаза, разтворена в етилов алкохол-вода (4:1), преминава през хроматографска корона с активен въглен, като се получава прозрачен безцветен разтвор, който, когато се концентрира, кристализира при прибавяне на изопропилов алкохол и се суши, като се получава бял прах, който при използване на ВЕХТ показва два основни пика с времена на задържане 1.131 (87,54 % площ) и 1.551 (6,16 % площ).

18. Метод съгласно претенции 16 и 17, характеризиращ се с това, че компонентите на твърдото вещество, разтворено в метанол, се разделят чрез ВЕТХ, като се отделят компонентите с времена на задържане 1.157, 1545 и 2.264.

19. Вещества и състави с антинеопластична активност, характеризиращи се с това, че могат да се получат по метода съгласно претенции от 1 до 18.

20. Вещества и състави с антинеопластична активност съгласно претенция 19, под форма, избрана от групата, съдържаща соли на съединения, комплекси и комбинации от тях, с цел да бъдат водоразтворими.

21. Фармацевтичен препарат, характеризиращ се с това, че съдържа поне един от активните компоненти, вещества и състави, подбрани от групата продукти с антинеопластична активност и които могат да се получат по метода съгласно претенции 1 до 18.

22. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че се получава под формата на воден разтвор за парентерална употреба.

23. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че се получава под формата на капсули за орално приемане.

24. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че се получава под формата на свещички за ректално приложение.

25. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че се получава под формата на свещички за вагинално приложение.

26. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че се получава под формата на унгвент, мехлем, крем или гел.

27. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 22, характеризиращ се с това, че се 5 получава в ампули, всяка ампула съдържа от 0,1 до 2,5 g активен елемент.

28. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 27, характеризиращ се с това, че всяка ампула съдържа с предпочитание от 0,1 до 1,5 g и най-вече от 0,2 до 1,0 g активен елемент.

29. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 23, характеризиращ се с това, че се получава под формата на капсули, всяка капсула съдържа от 0,1 до 2,0 g активен елемент.

30. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 29, характеризиращ се с това, че всяка капсула съдържа от 0,8 до 1,2 g активен елемент.

31. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 24, характеризиращ се с това, че се получава под формата на свещички за ректално приложение, като всяка свещичка съдържа от 0,2 до 2,5 g активен елемент. 25

32. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 31, характеризиращ се с това, че всяка свещичка съдържа от 0,3 до 1,0 g или от 1,2 до 1,7 g активен елемент.

33. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 25, характеризиращ се с това, че се получава под формата на свещички за вагинално приложение, всяка от тях съдържа от 0,1 до 2,5 g активен елемент.

34. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 33, характеризиращ се с това, че всяка свещичка съдържа за предпочитане от 0,5 до 2,5 g и най-вече от 0,3 до 1,7 g активен елемент.

35. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 26, характеризиращ се с това, че се получава под формата на унгвент, мехлем, крем или гел с инертен носител за локална употреба, съдържащ от 0,5 до 12 % активен елемент.

36. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 35, характеризиращ се с това, че носителят за локална употреба съдържа от 3 до 7 % тегл. активен елемент.