CN115300498A - 阿格拉宾在制备治疗或预防糖尿病肾病药物中的应用及其提取方法 - Google Patents

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CN115300498A CN202211107755.2A CN202211107755A CN115300498A CN 115300498 A CN115300498 A CN 115300498A CN 202211107755 A CN202211107755 A CN 202211107755A CN 115300498 A CN115300498 A CN 115300498A
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Abstract

本发明属于天然产物提取技术领域，具体涉及阿格拉宾在制备治疗和/或预防糖尿病肾病药物中的应用及其提取方法。本发明提供了阿格拉宾在制备治疗和/或预防糖尿病肾病药物中的应用。本发明以由链脲佐菌素诱导的小鼠模型研究Arglabin治疗和/或预防糖尿病肾病，得出以下结论：本发明提供的Arglabin能降低空腹血糖，同时降低小鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的含量，降低小鼠炎症因子TNF‑α、IL‑6及IL‑1β的表达，升高肾损伤组织中谷胱甘肽(GSH)及超氧化物歧化酶(SOD)，降低丙二醛(MDA)含量，从而实现对糖尿病肾病的治疗和/或预防。本发明为糖尿病肾病的预防和药物治疗提供了一种新选择。

Description

阿格拉宾在制备治疗或预防糖尿病肾病药物中的应用及其提 取方法
技术领域
本发明属于天然产物提取技术领域，具体涉及阿格拉宾在制备治疗或预防糖尿病肾病药物中的应用及其提取方法。
背景技术
糖尿病肾病是指在糖尿病发展的过程中肾脏组织发生了病理变化，是糖尿病患者最常见的微血管并发症之一，发病率约占糖尿病患者的40％，也是糖尿病患者终末期肾脏疾病的主要因素，具有动脉粥样硬化的风险。糖尿病肾病早期主要表现为肾小球肥大、肾小球基底膜增厚等病理改变；在后期，肾脏改变主要包括肾小球硬化、肾小管间质纤维化等病理改变。临床特征表现为肾小球滤过率升高、出现微量白蛋白尿，后期尿蛋白明显增多，最终进展为终末期肾病。
阿格拉宾(Arglabin)为一种愈创木倍半萜内酯类化合物，具有显著抗癌作用，作用机制是抑制法尼基转移酶，其二甲胺基盐酸盐已被开发成抗癌药物在哈萨克斯坦共和国上市，主要用于治疗肝癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌和卵巢癌。Arglabin最早由生长在哈萨克斯坦亮绿蒿(Artemisia glabella Kar.et Kir.)的地上部分提取分离得到，但含量较低，只有0.27％；产于我国的多花蒿(ArtemisiamyrianthaWall.et Bess.)中也含有此化学成分，平均含量为0.82％。此外，也有采用化学合成的方法获得Arglabin，但大多反应步骤长，产率低，工业化生产的成本高。
发明内容
本发明的目的在于提供阿格拉宾在制备治疗或预防糖尿病肾病药物中的应用及其提取方法，本发明将阿格拉宾应用于制备治疗或预防糖尿病肾病药物，为糖尿病肾病的预防和药物治疗提供了一种新选择。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了阿格拉宾在制备治疗和/或预防糖尿病肾病药物中的应用。
本发明提供了一种治疗和/或预防糖尿病肾病的药物，包括药物活性成分和辅料，所述药物活性成分包括阿格拉宾。
优选的，所述药物的剂型包括散剂、片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、注射剂或粉针剂。
优选的，所述药物的剂型为片剂，所述片剂中阿格拉宾的质量百分含量为5～10wt％。
本发明提供了一种阿格拉宾的提取方法，包括以下步骤：
将蒿属植物的地上部分和极性有机溶剂混合浸提，固液分离后将液相组分浓缩，得到提取物浸膏；
将所述提取物浸膏和水混合，得到混悬液；
将所述混悬液和有机萃取剂混合萃取，将萃取有机相浓缩，得到萃取物浸膏；所述有机萃取剂包括石油醚和/或正己烷；
以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂作为洗脱剂，对所述萃取物浸膏进行第一硅胶柱层析分离，得到阿格拉宾初提物；所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为100:1；
以石油醚和二氯甲烷的混合溶剂作为洗脱剂，对所述阿格拉宾初提物进行凝胶柱层析分离，得到阿格拉宾粗提物；所述石油醚和二氯甲烷的体积比为1:1；
以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂作为洗脱剂，对所述阿格拉宾粗提物进行第二硅胶柱层析分离，得到阿格拉宾；所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为6:1。
优选的，所述蒿属植物为臭蒿，所述臭蒿中阿格拉宾的质量百分含量≥2.4wt％。
优选的，所述极性有机溶剂包括醇溶剂和/或乙酸乙酯。
优选的，所述浸提的料液比为1g:(10～20)mL，所述浸提的温度为30～60℃，所述浸提的保温时间为10～15min。
优选的，所述浸提在超声辅助的条件下进行，所述超声的功率为150～300W。
优选的，所述萃取的次数为3次。
本发明提供了阿格拉宾在制备治疗和/或预防糖尿病肾病药物中的应用。本发明以由链脲佐菌素诱导的小鼠模型研究Arglabin治疗或预防糖尿病肾病，得出以下结论：Arglabin能降低空腹血糖，同时降低小鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的含量，降低小鼠炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β的表达，升高肾损伤组织中谷胱甘肽(GSH)及超氧化物歧化酶(SOD)，降低丙二醛(MDA)含量，从而实现对糖尿病肾病的治疗或预防。本发明为糖尿病肾病的预防和药物治疗提供了一种新选择。
本发明提供了一种阿格拉宾的提取方法，包括以下步骤：将蒿属植物的地上部分和极性有机溶剂混合浸提，固液分离后将液相组分浓缩，得到提取物浸膏；将所述提取物浸膏和水混合，得到混悬液；将所述混悬液和有机萃取剂混合萃取，将萃取有机相浓缩，得到萃取物浸膏；所述有机萃取剂包括石油醚和/或正己烷；以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂作为洗脱剂，对所述萃取物浸膏进行第一硅胶柱层析分离，得到阿格拉宾初提物；所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为(60～140):1；以石油醚和二氯甲烷的混合溶剂作为洗脱剂，对所述阿格拉宾初提物进行凝胶柱层析分离，得到阿格拉宾粗提物；所述石油醚和二氯甲烷的体积比为1:1；以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂作为洗脱剂，对所述阿格拉宾粗提物进行第二硅胶柱层析分离，得到阿格拉宾；所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为6:1。本发明提供的提取方法依次通过极性有机溶剂浸提、有机萃取剂萃取、硅胶柱层析粗分离、凝胶柱层析纯化分离以及硅胶柱层析进一步分离；同时，本发明选择有机萃取剂、两次硅胶柱层析洗脱剂以及凝胶柱层析洗脱剂的具体种类，实现了提取得到的阿格拉宾不仅纯度高其收率高。
附图说明
图1为Arglabin对糖尿病肾病大鼠ScrBUN的影响(
Figure BDA0003842059190000031
n＝6)；
图2为Arglabin对糖尿病肾病大鼠肾组织病理变化的影响结果图。
具体实施方式
本发明提供了阿格拉宾在制备治疗和/或预防糖尿病肾病药物中的应用。
在本发明中，若无特殊说明，所有制备原料/组分均为本领域技术人员熟知的市售产品。
在本发明中，所述阿格拉宾(Arglabin)的结构式如式1所示：
Figure BDA0003842059190000041
本发明研究发现Arglabin能降低空腹血糖，同时降低血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的含量，降低炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β的表达，升高肾损伤组织中谷胱甘肽(GSH)及超氧化物歧化酶(SOD)，降低丙二醛(MDA)含量，从而实现对糖尿病肾病的治疗或预防。
本发明首次提出将Arglabin用于制备治疗和/或预防糖尿病肾病药物，为糖尿病肾病的预防和治疗提供了一种新选择。
本发明提供了一种治疗和/或预防糖尿病肾病的药物，包括药物活性成分和辅料，所述药物活性成分包括阿格拉宾。
在本发明中，所述药物的剂型优选包括散剂、片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、注射剂或粉针剂。
本发明提供了一种治疗和/或预防糖尿病肾病的保健品，包括保健品活性成分和辅料，所述保健品活性成分包括阿格拉宾。
在本发明中，所述药物或所述保健品的给药方式优选为包括口服或胃肠外给药。
在本发明中，所述药物中Arglabin的质量百分含量为0.1～99wt％。
在本发明中，所述药物的剂型为片剂，所述片剂中阿格拉宾的质量百分含量优选为5～10wt％。
在本发明中，所述辅料优选包括稀释剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、芳香剂和甜味剂中的一种或多种。
在本发明中，所述稀释剂优选包括淀粉、预胶化淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、微晶纤维素、甘露醇、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙和轻质氧化镁中的一种或多种。
在本发明中，所述药物为颗粒剂时，所述稀辅料包括淀粉、预胶化淀粉、糊精、蔗糖、乳糖和微晶纤维素中的一种或多种时，有利于所述药物的捏合利于制粒。
在本发明中，所述润湿剂包括纯化水。
在本发明中，所述黏合剂优选包括淀粉浆、甲基纤维素、羟丙纤维素、羟丙甲纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、聚维酮、糖浆、胶浆和聚乙二醇中的一种或多种。
在本发明中，所述崩解剂优选包括干淀粉、羧甲淀粉钠、低取代羟丙纤维素、交联羧甲纤维素钠、交联聚维酮和泡腾崩解剂中的一种或多种。
在本发明中，所述润滑剂优选包括硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石粉、微粉硅胶、氢化植物油、聚乙二醇类和月桂醇硫酸镁中的一种或多种。
在本发明中，所述着色剂优选包括天然色素和/或合成染料。
在本发明中，所述着色剂便于改善外观和便于识别。
本发明对所述药物的制备方法没有特殊要求。
本发明提供的一种Arglabin片剂，所述Arglabin片剂包括Arglabin、淀粉和硬脂酸镁；所述Arglabin片剂每片重0.3g，每片含Arglabin 25mg。
本发明提供的一种Arglabin速释微丸，以质量份数剂，所述Arglabin速释微丸包括Arglabin 3份、微晶纤维素7份、乙醇和水混合溶剂7份；所述乙醇和水混合溶剂中乙醇的体积含量为70％；所述Arglabin速释微丸的粒径为20～30目。
本发明提供的一种Arglabin胶囊，所述Arglabin胶囊包括Arglabin、淀粉和乳糖；所述Arglabin胶囊每粒含Arglabin 12.5mg。
本发明提供了一种阿格拉宾的提取方法，包括以下步骤：
将蒿属植物的地上部分和极性有机溶剂混合浸提，固液分离后将液相组分浓缩，得到提取物浸膏；
将所述提取物浸膏和水混合，得到混悬液；
将所述混悬液和有机萃取剂混合萃取，将萃取有机相浓缩，得到萃取物浸膏；所述有机萃取剂包括石油醚和/或正己烷；
以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂作为洗脱剂，对所述萃取物浸膏进行第一硅胶柱层析分离，得到阿格拉宾初提物；所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为1001；
以石油醚和二氯甲烷的混合溶剂作为洗脱剂，对所述阿格拉宾初提物进行凝胶柱层析分离，得到阿格拉宾粗提物；所述石油醚和二氯甲烷的体积比为1:1；
以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂作为洗脱剂，对所述阿格拉宾粗提物进行第二硅胶柱层析分离，得到阿格拉宾；所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为6:1。
本发明将蒿属植物的地上部分和极性有机溶剂混合浸提，固液分离后浓缩，(以下称为第一浓缩)，得到提取物浸膏。
在本发明中，所述蒿属植物优选为臭蒿。
在本发明中，所述臭蒿中阿格拉宾的质量百分含量优选≥2.4wt％。
在本发明中，所述有极性机溶剂包括醇溶剂和/或乙酸乙酯，更优选包括甲醇、乙醇或乙酸乙酯。
在本发明中，所述浸提的料液比优选为1g:(10～20)mL，更优选为1g:(12～15)mL。
在本发明中，所述浸提的温度优选为30～60℃，更优选为35～55℃。
在本发明中，所述浸提的保温时间优选为10～15min，更优选为12～14.5min。
在本发明中，所述浸提优选在超声助的条件下进行，所述超声的功率优选为150～300W，更优选为180～250W。
在本发明中，所述固液分离优选为过滤。
本发明优选对所述固液分离的液相组份进行所述第一浓缩。
本发明对所述第一浓缩的具体实施没有特殊要求，采用本领域技术人员熟知的浓缩操作即可，具体例如旋转蒸发。
得到提取物浸膏后，本发明将所述提取物浸膏和水混合，得到混悬液。
在本发明中，所述提取物浸膏的质量与所述水的体积比优选为2.4g:100mL。
得到混悬液后，本发明将所述混悬液和有机萃取剂混合萃取，将萃取有机相浓缩(以下称为第二浓缩)，得到萃取物浸膏；所述有机萃取剂包括石油醚和/或正己烷。
在本发明中，所述有机萃取剂更优选为石油醚。
在本发明中，所述萃取的次数优选为3次。
在本发明中，每次萃取时，所述混悬液和所述有机萃取剂的体积比优选为1:1。
在本发明中，所述萃取的次数优选为3次时，本发明优选将每次萃取得到的萃取有机相合并后进行所述第二浓缩。
本发明对所述第二浓缩的具体实施没有特殊要求，采用本领域技术人员熟知的浓缩操作即可，具体例如旋转蒸发。
得到萃取物浸膏后，本发明以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂作为洗脱剂(以下称为第一洗脱剂)，对所述萃取物浸膏进行第一硅胶柱层析分离，得到阿格拉宾初提物；所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为100:1。
在本发明中，本发明优选将所述萃取物浸膏溶解于第一洗脱剂中进行所述第一硅胶柱层析分离，本发明对所述第一洗脱剂的用量没有特殊要求，能够将所述萃取物浸膏完全溶解即可。
在本发明中，所述第一硅胶柱层析分离洗脱时优选为梯度洗脱。
在本发明中，所述梯度洗脱的具体实施过程优选为：依次进行预洗脱和洗脱；在本发明中，所述预洗脱优选为：采用石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂以体积比为150:1进行预洗脱；在本发明中，所述预洗脱使用的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂的体积没有特殊要求，将所述预洗脱的目标杂质完全洗脱即可。在本发明中，所述洗脱优选为：采用石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂以体积比为100:1进行洗脱；在本发明中，所述洗脱使用的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂的体积没有特殊要求，将所述洗脱的目标产物完全洗脱即可。
得到阿格拉宾粗提物后，本发明以石油醚和二氯甲烷的混合溶剂作为洗脱剂，对所述阿格拉宾初提物进行凝胶柱层析分离，得到阿格拉宾粗提物；所述石油醚和二氯甲烷的体积比为1:1。
在本发明中，所述凝胶柱层析分离时，本发明优选采用薄层色谱对所述凝胶柱层析分离的馏分进行检识，合并薄层色谱检识时Rf值相同的馏分，得到四组馏分后，取薄层色谱检识的Rf值为0.2的馏分得到所述阿格拉宾粗提物。在本发明中，所述薄层色谱检识优选采用薄层硅胶板GF254，所述薄层色谱检识的具体实施方式优选为：将待检识样品毛细管点样后，置于含有展开剂的层析缸中，待层析完成后，用10％的硫酸乙醇显色，合并Rf值相同的馏分；在本发明中，所述展开剂优选为石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂，所述石油醚和乙酸乙酯的体积比优选为10:1。
在本发明中，所述凝胶柱层析分离得到阿格拉宾粗提物溶液，本发明优选将所述阿格拉宾粗提物溶液干燥，得到阿格拉宾粗提物。本发明多所述干燥的具体实施过程没有特殊要求。
得到阿格拉宾粗提物后，本发明以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂作为洗脱剂(以下称为第二洗脱剂)，对所述阿格拉宾粗提物进行第二硅胶柱层析分离，得到阿格拉宾；所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为6:1。
在本发明中，本发明优选将所述阿格拉宾粗提物溶解于第二洗脱剂中进行所述第二硅胶柱层析分离，本发明对所述第二洗脱剂的用量没有特殊要求，能够将所述阿格拉宾粗提物完全溶解即可。
在本发明中，所述第二硅胶柱层析分离优选为等度洗脱。
在本发明中，所述第二硅胶柱层析分离得到阿格拉宾溶液，本发明优选将所述阿格拉宾溶液干燥，得到所述阿格拉宾。本发明对所述干燥的具体实施过程没有特殊要求。
本发明提供了上述技术方案所述的提取方法得到的阿格拉宾，所述阿格拉宾的纯度为95～99.99％。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
取臭蒿干燥地上部分10g，用甲醇进行超声波提取，具体条件为：提取时间10min，提取温度45℃，超声功率200W，料液比1g:15mL。滤除药渣，将滤液浓缩后得到提取物浸膏2.4g，将提取物浸膏用100mL水混悬，得到混悬液；
将上述混悬液中加入石油醚进行萃取，每次石油醚用量100mL，萃取3次，合并有机萃取相将萃取液浓缩，得到萃取物浸膏0.8g；
将萃取物浸膏经硅胶柱色谱层析纯化，以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂进行梯度洗脱，以石油醚和乙酸乙酯混合溶剂(v:v为150:1)预洗脱，石油醚和乙酸乙酯混合溶剂(v:v为150:1用量为2mL，然后以石油醚和乙酸乙酯混合溶剂(v:v为100:1)洗脱，石油醚和乙酸乙酯混合溶剂(v:v为100:1)用量为1.5mL，得到阿格拉宾粗提物溶液干燥，得到阿格拉宾粗提物；
将阿格拉宾粗提物溶解于石油醚和二氯甲烷混合溶剂(v:v为1:1)中，经过凝胶柱色谱层析纯化，以体积比1:1的石油醚和二氯甲烷混合溶剂作为洗脱剂，薄层检识后合并得到流分fr.1、fr.2、fr.3和fr.4四个馏分；将fr.2再经过硅胶柱色谱，以体积比6:1的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂洗脱，得到化合物Arglabin溶液，干燥后得到Arglabin，称重为246mg，由本实施例制备得到的Arglabin为246mg，使用的臭蒿原料为10g，可以换算出臭蒿原料中Arglabin质量百分含量为2.46％。
将实施例1制备的Arglabin经NMR测定，确定其为Arglabin，其核磁数据表征如表1所示：
表1实施1制备的化合物Arglabin的1H和13C NMR数据
Figure BDA0003842059190000091
Figure BDA0003842059190000101
实施例2
取臭蒿干燥地上部分10g，用乙醇进行超声波提取，具体条件为：提取时间15min，提取温度45℃，超声功率200W，料液比1g:20mL。滤除药渣，将滤液浓缩后得到提取物浸膏2.6g，将浸膏用100mL水混悬，得到混悬液；
将上述混悬液中加入石油醚进行萃取，每次石油醚用量100mL，萃取3次，合并有机萃取相将萃取液浓缩，得到萃取物浸膏0.8g；
将萃取物浸膏经硅胶柱色谱层析纯化，以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂进行梯度洗脱，以石油醚和乙酸乙酯混合溶剂(v:v为150:1)预洗脱，石油醚和乙酸乙酯混合溶剂(v:v为150:1用量为2mL，然后以石油醚和乙酸乙酯混合溶剂(v:v为100:1)洗脱，石油醚和乙酸乙酯混合溶剂(v:v为100:1)用量为1.5mL，得到阿格拉宾粗提物溶液干燥，得到阿格拉宾粗提物；
将阿格拉宾粗提物溶解于石油醚和二氯甲烷混合溶剂(v:v为1:1)中，经过凝胶柱色谱层析纯化，以体积比1:1的石油醚和二氯甲烷混合溶剂作为洗脱剂，薄层检识后合并得到流分fr.1、fr.2、fr.3和fr.4四个馏分；将fr.2再经过硅胶柱色谱，以体积比6:1的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂洗脱，得到化合物Arglabin溶液，干燥后得到Arglabin，称重为261mg，换算为臭蒿原料中Arglabin质量百分含量为2.61％。
测试例
一、糖尿病肾病模型的建立及动物分组
健康的SPF级昆明种大鼠180～200g，雄性，由大连医科大学SPF实验动物中心提供，室温25±3℃，自由摄食饮水，随机分为5组：空白组、模型组、模型+Arglabin低剂量组、模型+Arglabin中剂量组和模型+Arglabin高剂量组，每组6只。除空白组大鼠外，其余大鼠饲喂高脂高糖饲料的同时腹腔注射(ip)给予链脲佐菌素60mg/kg，72h后检测血糖，以空腹血糖≥16.7mmol/L表明糖尿病模型制备成功。继续喂食高脂高糖饲料，28d后，以24h尿蛋白含量>30mg视为糖尿病肾病模型造模成功。模型+Arglabin低、中和高剂量组每天灌胃给药(ig)给药1次，连续28d。空白组给予同体积生理盐水。最后一次给药后，使用3％戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉大鼠，腹主动脉取血5mL，离心收集上清，分装保存于-20℃。采血后，处死各组大鼠，取大鼠肾组织，部分于冰上用小剪刀剪开，按肾组织:水＝1:9(v/v)的比例置0℃生理盐水中，制成10％肾组织匀浆；部分肾组织采用4％多聚甲醛固定液固定，石蜡包埋切片，-20℃保存。
二、生化指标的测定
1.一般情况观察
观察5个分组大鼠的活动状况，每两周称量体重并尾静脉取血检测其空腹血糖值，在检测之前小鼠禁食不禁水12h。
2.血液生化指标检测
给药28d后，使用3％戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉大鼠，腹主动脉取血5mL，离心分离血清后，用全自动生化分析仪分析检测Scr和BUN的值。
3.HE染色观察肾组织病理损伤
取制备好的石蜡包埋肾脏切片，常规脱蜡脱水后进行HE染色，每张切片于400倍显微镜下观察肾脏组织的结构形态与病理变化，并拍摄照片。
4.ELISA检测肾组织中的TNF-α、IL-6及IL-1β水平
取制备的肾组织匀浆，17000g离心10min，收集上清液，按照ELISA试剂盒说明书检测炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平。
5.试剂盒检测肾组织中GSH、SOD及MDA含量
取制备的肾组织匀浆，根据GSH、SOD及MDA测定试剂盒说明书分别测定肾组织匀浆中GSH、SOD及MDA的含量。
三、测定结果
1.Arglabin对糖尿病肾病大鼠血糖的影响，如表2所示。
表2 Arglabin对大鼠血糖的影响的作用(
Figure BDA0003842059190000111
n＝6)
Figure BDA0003842059190000112
Figure BDA0003842059190000121
与空白组比较*P<0.001；与模型组比较▲P<0.05，▲▲P<0.01
2.Arglabin对糖尿病肾病大鼠血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)的影响
与空白组相比，模型组大鼠的Scr、BUN水平升高(P<0.01)；与模型组相比，各给药组大鼠的Scr和BUN水平下降(P<0.05)。如图1所示。
3.Arglabin对糖尿病肾病大鼠肾组织损伤的影响
空白组肾小球结构完整，基质和系膜未见异常变化，肾小管结构完整。模型组大鼠和Arglabin 10mg/kg组肾组织坏死明显，肾小球萎缩，肾小管上皮细胞大量变性，并可见大量炎症细胞；与模型组相比，模型+Arglabin 30和100mg/kg组肾小球基底膜增厚程度明显改善，肾小球系膜基质增生程度明显减轻，差异均有统计学意义(P<0.05)，测试结果如图2所示。
4.Arglabin对糖尿病肾病大鼠炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平的影响
与空白组相比，模型组小鼠TNF-α、IL-6及IL-1β的表达升高(P<0.01)；与模型组相比，Arglabin低中高剂量组的IL-6及IL-1β和中高剂量组的TNF-α的表达下降(P<0.01)。如表3。
表3 Arglabin对糖尿病肾病大鼠炎症因子水平的影响(
Figure BDA0003842059190000122
n＝6)
Figure BDA0003842059190000123
与空白组比较**P<0.01；与模型组比较▲▲P<0.01
5.Arglabin对糖尿病肾病大鼠氧化应激GSH、SOD及MDA含量的影响
与空白组相比，模型组小鼠的GSH、SOD含量下降(P＜0.01)；MDA上升(P＜0.01)。与模型组相比，中高剂量组小鼠的GSH、SOD含量上升(P＜0.05)；而各给药组MDA的含量下降(P＜0.01)。如表4。
表4 Arglabin对糖尿病肾病大鼠氧化应激水平的影响(
Figure BDA0003842059190000131
n＝6)
Figure BDA0003842059190000132
与空白组比较**P<0.01；与模型组比较▲P<0.05，▲▲P<0.01。
综上所述，Arglabin在10-100mg/kg范围内，可以显著改善链脲佐菌素配合高脂饮食所致的糖尿病肾病，主要通过抑制炎症因子表达，改善急性氧化应激水平，可以用于糖尿病肾病的预防及治疗。
实施例3
取Arglabin 10g，加入淀粉110g，硬脂酸镁1.5g，充分混合均匀，压片，即Arglabin片剂，每片重0.3g，每片含Arglabin 25mg。
实施例4
取Arglabin 3份，微晶纤维素7份，混合均匀，加入乙醇体积含量为70％的乙醇和超纯水混合溶剂7份，不断捏合，制成软材，经挤出机筛板挤成直径相同、光滑致密的条状物，剪切后，滚制成丸，于40～50℃烘3～4h，筛分，得到20～30目速释微丸。
实施例5
取Arglabin 10g，加入淀粉以及乳糖150g，等量递加法混合均匀，经检验合格后，充填胶囊，包装，即得Arglabin胶囊成品。制得800粒胶囊，每粒含Arglabin 12.5mg。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (10)

1.阿格拉宾在制备治疗和/或预防糖尿病肾病药物中的应用。
2.一种治疗和/或预防糖尿病肾病的药物，其特征在于，包括药物活性成分和辅料，所述药物活性成分包括阿格拉宾。
3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型包括散剂、片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、注射剂或粉针剂。
4.根据权利要求2或3所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型为片剂，所述片剂中阿格拉宾的质量百分含量为5～10wt％。
5.一种阿格拉宾的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
将蒿属植物的地上部分和极性有机溶剂混合浸提，固液分离后将液相组分浓缩，得到提取物浸膏；
将所述提取物浸膏和水混合，得到混悬液；
将所述混悬液和有机萃取剂混合萃取，将萃取有机相浓缩，得到萃取物浸膏；所述有机萃取剂包括石油醚和/或正己烷；
以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂作为洗脱剂，对所述萃取物浸膏进行第一硅胶柱层析分离，得到阿格拉宾初提物；所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为100:1；
以石油醚和二氯甲烷的混合溶剂作为洗脱剂，对所述阿格拉宾初提物进行凝胶柱层析分离，得到阿格拉宾粗提物；所述石油醚和二氯甲烷的体积比为1:1；
以石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂作为洗脱剂，对所述阿格拉宾粗提物进行第二硅胶柱层析分离，得到阿格拉宾；所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为6:1。
6.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，所述蒿属植物为臭蒿，所述臭蒿中阿格拉宾的质量百分含量≥2.4wt％。
7.根据权利要求5或6所述的提取方法，其特征在于，所述极性有机溶剂包括醇溶剂和/或乙酸乙酯。
8.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述浸提的料液比为1g:(10～20)mL，所述浸提的温度为30～60℃，所述浸提的保温时间为10～15min。
9.根据权利要求8所述的提取方法，其特征在于，所述浸提在超声的条件下进行，所述超声的功率为150～300W。
10.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述萃取的次数为3次。
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