PT98885A - Processo para a preparacao de composicoes farmaceuticas contendo inibidores de quininogenase - Google Patents

Description

I

Descrição referente à patente de invenção de EERRING· PEPIIDE RESEARCH PARTNERSHIP XB, sueca, industrial e comercial, com sede em Vaktelgatan 8, S 431 33 MSlndal, Sueca, (inventores : Miehael Szelke, David Miehael Evans e David Miehael Jones, re sidentes na Inglaterra), para "PROCESSO PARÁ A PREPARAÇÃO DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS CONTENDO DERIVADOS DE POlIPfelDOS DE CADEIA CÚRIA COMO IHIBIDORBS DE QUIHINOGENASE".

DESCRIÇÃO

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se à inibição de enzimas e ao tratamento de doenças.

ENQUADRAMENTO GERAL DA INVENÇÃO - QUININAS

As quininas são peptidos vaso-activos naturais li bertados nos organismos a partir de preeursores de elevado pe so molecular (quininogénios) por acção de proteases selecti-vas conhecidas por quininogenases· H.A. . - 1 -

Ha a certeza de que existe o envolvimento das qui ninas nos seguintes estados patológicos: a) condições associadas com a vasodilatação e com a hipoten são, por exemplo, choque séptico, anafilático e hipovolé mico; sindroma carcinóide e sindroma depressiva; h) condições que envolvem a inflamação, por exemplo, artrite aguda, pancreatite, lesões térmicas locais, lesões provocadas por esmagamento e edema cerebral; c) condições que envolvem a broncoconstrição, especialmente por exemplo reacção alérgica aguda inicial na asma; d) inflamação alérgica, particularmente rinite alérgica e conjuntivite, conjuntamente conhecidas em geral como febre dos fenos, e inflamação dos brônquios e consequente oclusão que se verifica na fase inflamatória da asma não aguda mas séria e mesmo fatal.

As quininas (bradiquinina, calidina e Met-liys-bra diquinina) são poderosos mediadores da inflamação. As suas principais acções são as seguintes: a) aumentam a permeabilidade capilar, o que origina a forma ção de exsudatos e de edemas; b) são potentes vaso dilatadores das arteríolas e, portanto, reduzem a pressão sanguínea e aumentam o caudal do sangue; c) provocam dores; d) contraiem a musculatura lisa dos brônquios; e) activam a fosfolipase À2 e estimulam assim a biossíntese de prostaglandinas (PG) que medeiam algumas das suas acções· - 2 -

Pelo que diz respeito às prostaglandinas, pode no tar-se que certas acções das quininas, particularmente a dor e a permeabilidade vascular acima mencionadas, são potência-das pelas PG, muito embora as PG em si mesmas não provoquem dor nem provoquem a permeabilidade vascular nas concentrações que se verificam nos tecidos inflamados. Portanto, as PG ac-tuam como mediadores ou como potenciadores das quininas. Hão obtante o conhecimento acima referido sobre as quininas e as suas acções, tem-se dado relativamente pouca atenção à redução da sua acção. Ho tratamento da asma, por exemplo, a atenção dos clínicos dirige-se principalmente à re acçao de bronco constrição aguda, para a qual há fármacos eficazes. Às mortes continuam a ocorrer em virtude da oclusão dos brônquios que se desenvolve gradualmente e, presentemente, não só não há inibidores clinicamente efeetivos da libertação da quinina à venda mas o conceito da inibição da libertação da quinina, pelo menos no tratamento da inflamação alérgica, parece ser novo. A única substancia que de facto e um inibi-dor da libertação da quinina e que atingiu significado clínico e aprotinina ("Trasylol" da firma Bayer, marca registada), um inibidor da proteinase isolado de tecidos bovinos (pulmões, gánglios linfáticos e pâncreas). Ê uma proteína fortemente bá sica (pi * 10,5), de massa molecular igual a 6.500, que compreende uma unica cadeia de peptidos com cinquenta e oito resíduos. Ho entanto, a aprotinina I sobretudo um inibidor da tripsina (Ki 10” J M) e e aproximadamente 10 vezes menos activo contra a libertação da quinina. Yerificou-se que e mar ginalmente benéfica na pancreatite aguda, um estado mórbido em que ela inibe a activação provocada pela tripsina de zimó-genos de serina-proteinases prancreáticas e em choque traumático - hemorrágico. A aprotinina tem se ser administrada pa-rentericamente e origina frequentemente uma reacçao de dor no local da injecção. - 3 -

ENQUADRAMENTO GERAL BA IHVMQÍO - QUININOGENASES

As quininogenases são serina-proteinases, isto é, proteinases em que o grupo hidroxi de um resíduo de serina I o nueleófilo envolvido na formação do estado de transição do substrato. Libertam as quininas (bradiquinina, calidina) a partir dos quininogénios por proteólise limitada. Ha virias espécies de quininogenases: a) calicreína de tecidos (TE, também chamada calicreína glandular GT ou calicreína urinaria UK) que se encontra no pâncreas, nas glândulas salivares, nos intestinos, nos rins e na urina. Sem uma massa molecular igual a 50 000 e actua preferencialmente sobre o quininogénio de baixa massa molecular (MWE) para libertar a quinina calidina (EB). A calicreína dos tecidos não tem inibidor endógeno potente e de actuação rápida presente no plasma; b) calicreína do plasma (PE) ocorre no plasma como zimogénio inactivo que é aetivado pelo Factor Xlla e que faz parte da cascata intrínseca da coagulação. Sem uma massa molecular igual a 100.000 e o seu substrato preferido é o quininogénio de elevada massa molecular (HMWE), a partir do qual liberta bradiquinina (BE). A calicreína do plasma é rápida e efectivamente inibida no plasma por i-nibidores endógenos conhecidos como cl-inactivador e al-fag-macro globulina; c) a Requerente descobriu que a triptase de células mestras que, embora não seja tio activa como as calicreínas na libertação da quinina, ocorre em grandes quantidades nas células mestras do tecido pulmonar de asmáticos.

ENQUADRAMENTO GERAL BA INVENÇÃO - QUININOGÍNIOS

Os quininogénios que são os substratos naturais das quininogenases (actuam também como inibidores potentes, 4 · *

ki aproximadamente igual a IO-11, de cisteína-proteinases tais como catepsinas B, H e L, calpaína e papaína) ocorrem sob a forma de dois tipos: a) quinino génios de baixa massa molecular (MWK), com uma massa molecular compreendida entre 50.000 e 70.000, dependendo da espécie de origem e do grau de glieosilação; b) quininogénio de elevada massa molecular (HMWX), com uma massa molecular compreendida dentro do intervalo de 88.000 a 114.000 que, além de servir como precursor alternativo das quininas e como inibidor da eisteína-pro-teinase, também desempenha um papel obrigatório com a ca licreína do plasma na iniciação da cascata de coagulação intrínseca.

Os dois quinino génios, cujos mARN são transcritos a partir do mesmo gene, tem sequências primarias idênticas a-través da região da extremidade N ou da cadeia pesada (caâeia H), a região da quinina e os primeiros doze aminoácidos da ex tremidade C ou cadeia ligeira (cadeia L). Neste ponto, as suas estruturas divergem, tendo o HMWX uma cadeia 1 mais longa (massa molecular aproximadamente igual a 45 X) do que o IMWK (4,8 X). ▲ clivagem do HMVÍX humano pela calicreína do pias ma é, por exemplo, representada esquematicamente na íigura 1 com os pormenores da sequência nos sítios de clivagem referidos na íigura 2 e uma sequência mais pormenorizada na íigura 3, em que se representa a numeração convencional dos resíduos adjacentes ao sítio de clivagem para o sítio de clivagem 1. Depois da exçisão de uma ou da outra das sequências da quinina, as cadeias Hei são mantidas unidas por uma unica ponte de dissulfureto - 5

........ ΰ — ΰ _____ H-cadeia BK L-eadeia HMWK -100K t f

PK-1Ô0K i

+

BK

~1K FIGURA 1

Clivagem de KM¥K por BK : Esquema global

- 6 —

I I

Η Φ S •d © Ο Λ •Η ρ -Ρ ·Η *>Η Η 03 Ο Λ d d Tá •Η Η α) Ο ® S •ti © ο •Η -Ρ τ) Ή Η 03 Ο 81 > Η Η Η I§ (Μ *» Μ ΕΗ © Μ ΡΜ m ο ft © δ ϋ © ο •Η d d Ή %© Ο «Λ d Ο <© d d •Η σ d Φ •Η 03 & Φ d Φ •d © φ S U Φ ο W) d d φ ί> S *Η U γΗ ο Ο ΡΜ 7 ΡΚ,ΪΚ Ρ5 Ρ4 Ρ3 Ρ2 Ρ1 ρ» ρ» ρ» ρ» ρ» *1 Ρ 2 *3 5 -Phe-Ser-Pro-Phe-Arg

Ser-Ser-Arg-Ile — Gly 385 389 390 394 PIGURA 3

Sequências de Flanqueamento do SÍtio de Clivagem 1 em HMWK Humano

Como se mostra, a calicreína do plasma e a cali-ereína dos tecidos actuam num único sítio para libertar o sítio da extremidade C da quinina, clivando entre os resíduos 389 e 390, mas em sítios distanciados de um resíduo, ou ao la do do resíduo 380, para libertar a extremidade N da bradiqui-nina (por PE) ou de calidina (por TE). 0 papel de PE e de HMWE como factores de coagulação na cascata intrínseca não envolve a libertação enzimática de quininas. Ho entanto, muitos dos efeitos de PE e todos os efeitos de TE envolvem essa libertação, sendo mediados pelas quininas libertadas a partir dos respectivos substratos HMWK e IMWK por meio de proteólise selectiva. inpioaqCes

As principais indicações clínicas dos inibidores de quininogenase são condições inflamatórias, particularmente a inflamação alérgica (por exemplo, asma e febre dos fenos). Indica-se em seguida uma lista mais completa de indicaçõesí 1) inflamação alérgica, (por exemplo, asma, rinoconjuntivi te (febre dos fenos), rinorreia, urticária); - 8 -

2) inflamação (por exemplo, artrite» pancreatite» gastrite» doença inflamatória do intestino» lesão térmica» lesão de esmagamento, conjuntivite); 3) espasmos dos másculos lisos (por exemplo, asma, angina); 4) hipotensão (por exemplo, choque devido a hemorragia, sep ticémia ou anafilaxia, sindroma carcinóide, sindroma depressiva); 5) edema (por exemplo, queimaduras, trauma cerebral, edema ângio-neurótico resultante ou não de tratamento com ini-bidores da enzima de conversão da angiotensina); 6) dores e irritação (por exemplo, queimaduras, feridas, cortes, exantemas, ferroadas, picadas de insectos).

SUMARIO DA IHVMÇlO

Se acordo com um dos seus aspectos, a invenção re fere-se a um processo de tratamento (incluindo tratamento pro filáctico) de uma condição inflamatória ou outra condição referida nas indicações acima mencionadas, particularmente uma condição inflamatória alérgica, em que se administra uma quan tidade eficas de um péptido ou de um análogo de péptido inibi dor de quininogenase, tópica ou sistemicamente, a um paciente que sofre dessa condição ou se encontra em risco de sofrer dessa condição. Supõe-se que para se obter a actividade, a ad ministrabilidade e a estabilidade óptimas no organismo, os compostos não devem exceder o tamanho de um hexapéptido, isto é, não devem, compreender mais do que seis aminoácidos ou resí duos de análogos de aminoácidos; a presença de outros resíduos, particularmente num pró-fármaco de que os resíduos são clivados no organismo para originar o composto que principalmente exerce o efeito desejado, não é excluída, no entanto.

Particularmente, a invenção refere-se a um proces • so de tratamento da fase inflamatória alérgica da asma, carac - 9 -

terizado pelo facto de ae administrar topicamente ou sistemi-camente uma quantidade eficaz de um inibidor de quininogenase tal como um inibidor de triptase de cllulas de amarração a um paciente que sofra da referida condição ou que esteja em risco de sofrer dessa condição. A invenção refen-se ainda a um processo para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento tópico ou sistémico (incluindo o tratamento profiláctico) das condições como se indieam acima, particularmente para condições inflamatórias alérgicas e, especialmente, para o tratamento da asma, como se mencionou acima, caracterizado pelo facto de se associar um inibidor de quininogenase com um di-luente ou com um veículo farmaceuticamente aceitável e consti tuir o citado medicamento.

Nos casos acima referidos, o inibidor de quininogenase á convenientemente, mas nao essencialmente, do novo ti po descrito na presente memória descritiva, em que, de acordo com um outro aspecto, sem limitação a qualquer indicação clínica particular, a invenção proporciona compostos sintáticos de baixo peso molecular que selectivamente inibem as quinino-genases e bloqueiam assim a libertação de quininas a partir de quininogenios. Os inibidores desejavelmente são análogos de peptidos (como se refere acima) mas que não excedem o tarna nho de um hexapeptido em termos de aminoácidos ou de resíduos análogos, com base na sequencia de aminoácidos conhecida dos quininogenios no sítio de clivagem I, análogos esses que tem uma semelhança suficiente com a sequencia do sítio de clivagem para se ligarem ao sítio activo da quininogenase, mas que não são hidrolisáveis e mantem-se portanto ligados, inactivan do a enzima.

Os inibidores tem essencialmente a estrutura indi cada abaixo, na qual A representa o resíduo P^, B o resíduo 10 —

Ρ2> 0 o resíduo e ϊ representa um grupo de activação de carbonilo ou de ligação cuja formula de estrutura e

A - B - C - ϊ I na qual A, B, e C são grupos amino-acilo ou grupos análogos de amino-acilo ligados por ligações de peptidos ou os seus a-nálogos conformacionais que originam uma simulação de um pep-tido. Evidentemente, podem estar presentes outros resíduos a-lem dos essenciais» incluindo resíduos de amino-acilo ou de análogos de amino-acilo.

Sm termos mais definitivos, os compostos são representados pela formula de estrutura R1

A - B - N

I

R 0 na qual A e B representam grupos de amino-acilo (incluindo análogos de amino-acilo) iguais ou diferentes que formam um grupo dipeptídico, possuindo o aminoácido de A, opcionalmente, um grupo terminal (diferente de hidrogénio) e que I um resíduo qualquer de aminoácido ou de iminoáci-do (mas, preferivelmente, com a configuração 3>) e de B que é um resíduo de aminoácido lipofílico com a configu ração D ou X>, mas diferente de prolina ou de um análogo de prolina ou um análogo conformacional do referido gru 11

po dipeptídico em que a ligação peptídiea e substituída por -CH2-3SH- (“reduzido"), -GH(OH)-CH2- ("hidroxi"), -CO-CHg- ("eeto"), -CH2-CH2- ("hidrocarboneto") ou outra simulação conformacional da ligação de peptido, e no agrupamento da fórmula R»

III ·» a cadeia lateral RA e a cadeia de um aminoácido básico ou de um análogo de aminoácido (preferivelmente com a configuração 1) e R I H ou alquilo inferior em C^-C^ ou Galfa eu a ligação peptídiea que compreende -N(R)- e substituída originando uma simulação conformacional como se referiu acima. Por exemplo, Calfa pode ser substi tuído por azoto; representa um grupo reforçador da ligação ou que aetiva o grupe carbonilo, por exemplo, escolhido de H (mas só se A ou B forem ciclo-hexil-alanina, preferivelmente 1) se se tratar de A ou 1 se se tratar de B) ou alquilo em 0r020 ou fluor-alquilo em °2“012! oximetileno substituído; tiometileno; sulfoxi-metileno; salfonil-metile-no; amino-metileno; hidrazido-metileno; -GHg-Het (em que Het significa um heterociclo substituido ou não subs tituido); amino substituido (mas quando o composto resultante e uma alquilamida secundária, B não deve poder ser fenil-alanina); um grupo aminoácido ou um seu ester - 12

ou amida; uma amida secundaria ou uma amida primária de ácido carboxílico, quando B tem de ser um grupo li-pofílico volumoso, um aminoácido não aromático, por e-xemplo, eiclo-hexil-alanina, adamantil-alanina (não Ala leu Ile Vai Sfva Met Nle Phe 3?yr 2rp Nal (1)); ear-boxamida terciária; grupo carboxi-alquilo ou o seu éster ou amida·

Ho contexto acima mencionado, os substituintes são grupos funcionais apropriadamente comuns que aumentam a afinidade de ligação à enzima e/ou que melhoram as propriedades farmacológicas. Além disso, ao considerar os análogos con formacionais ou as simulações, uma simulação de um dipéptido é uma estrutura que contém resíduos de aminoáeidos não naturais (análogos de aminoáeidos) ou que é não peptídica e que em I conserva as cadeias laterais de A e B ou B e C e se encontram todos numa conformação semelhante à presente no pépti do parente quando ligado em um sítio activò da enzima. Pode tamhém possuir propriedades características favoráveis a outras interaeções com a enzima, por exemplo, ligação de hidrogénio· Pode escolher-se a simulação no trabalho publicado sobre estes análogos·

Por exemplo, os seguintes grupos são simulações do dipéptido B-Pro-Phe (Ph pode ser substituído por -CHgPh) ·

(i) Simulação "reduzida" (ii) Simulação de "hidroxi" ou de hidroxi-etileno - 13 -

(iii) Simulação de "eeto” ou (iv) de eeto-metileno

(▼) (vi) (Simulação de whidrocarboneto H) FIGURA 4 . Simulações de 33-Pro-Phe

Os compostos preferidos representados pela fórmula geral acima referida serão agora tomados em consideração.

Os resíduos preferidos para A são iminoácidos (por exemplo, B-prolina ou um análogo de prolina, por exemplo, ácido pipecolínico, ácido azetidino-carboxílico, etc·); amino ácidos lipofflicos (por exemplo, DOPhe, DCha, DChg); aminoáci-dos fortemente básicos (por exemplo, D-Arg ou uma guanidino--fenil-alanina) e para B são B-Phe, L-Cha, L-alfaNal, L-Tal, Ii-(4F)Rie, l-(NMe)Phe ou outras fenil-alaninas substituídas. A e B podem também ser análogos de N-alquilo em C^-C^ ou Cal-fa-alquilo em G^-O^ (por exemplo, metilo, benzilo) destes ami - 14 -

noácidos. Os grapos terminais apropriados para A incluem alquilo inferior (preferido) ou acilo (não excluindo amino-aci-lo), alquil-sulfonilo (de cadeia linear ou ramificada ou cíclica), amino-alquilo, carboxi-alquilo, hidroxi-alquilo ou qualquer outro grupo vulgar de proteeção que se encontre na química dos péptidos·

Os grupos apropriados como representando I são es pecíficos da presente invenção na medida em que eles são parte da estrutura que origina a ligação pretendida ao sítio ac-tivo e são grupos terminais que simplesmente não interferem· Formam um grupo de ligação que aumenta a afinidade para a enzima e/ou um grupo que activa o grupo carbonilo adjacente tor nando-o mais electrofílico. Os grupos específicos estão incluídos na formula geral seguinte

na qual numa ligação peptídica ao resíduo B, o ãtomo de azoto na posi ção alfa pode ser livre ou substituído, por exemplo, por meti lo ou outro grupo alquilo em 0.,-C, e assim R1 e R são como se * ·* τ' 1 referiu anteriormente, mas, partleularmente, R * 3-guanidino -propilo ou outro grupo guanidino-alquilo ou um grupo amidino -alquilo ou amino-alquilo ou também guanidino ou amidino-ben-zilo substituídos na posição para ou na posição meta ou formas protegidas dos grupos acima mencionados (os átomos de azo - 15 -

to básicos podem também ser alquilados, por exemplo, com Me,

Et) e na qual Y grupos como se descreve abaixo, primeiro em termos mais gerais e em seguida em termos de preferencias mais pormenorizadas, sujeitos em ambos os casos às condições ex pressas na definição dos compostos de acordo com a presente invenção anteriormente mencionados. As preferencias pormenorizadas são apresentadas em grupos designados por números romanos, que também são indicados dentro de parêntesis, sendo a primeira lista a seguintes I) Y * H (representando aldeídos) ou alquilo, incluindo flúor-alquilo (representando cetonas); Y * -CELQ, c o 2 2 2 em que Q * -0R ou -SR ou -SOR ou -SOgR ou R4 2 / -v -NHR ou - N ou -D) \5 R5 (note-se que -1^ representa um anel em que 1) é um átomo daquele anel) O A c em que R , λ e R*7 são como se descreve mais a-diante; Y = II-III-IV) \ V - VI) ou

-ch2 Cffir GON R- -ch2 ghr6 co-d) em que R4, R'* e R^ são como se descreve mais a-diante; VII-VIII) Y * amino-acilo ou um grupo que forma uma amida substituída ou hidrazida; - 16 -

ΙΧ-Χ-ΧΙ) Τ * um grupo que forma uma alfa-ceto-amida, por o exemplo, -COR ou -CO-D ou

R4

-COR

e em que, além disso, R2 * alquilo ou alquilo substituído incluindo ari lo ou aril-alquilo e -CHpR^ em que * fluor-al-quilo, R4 e são iguais ou diferentes, mas não são ambos hidrogénio * Ή ou alquilo em Cl”°20 (que pode ainda também ser substituído), acilo ou alquil--sulfonilo, -D^ é um anel heterocíclico, (o símbolo D representa um átomo de azoto ou carbono no grupo 17 e um átomo de azoto nos grupos VI e X), opcionalmente não saturado e opcionalmente com ainda hetero-átomos e substituintes, 0 símbolo R6 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo, hidroxi-alquilo, amino-alquilo, alquilamino-carbonilo, e 0 símbolo R^ representa um agrupamento -MHg ou sob a forma livre ou alquilada ou de amino-acilo. ▲ lista de preferências mais pormenorizadas, i-gualmente dentro das condições expressas antes é a seguinte.

Cr uno I: 0 símbolo Y representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo incluindo alquilo (C^-Cpo) ramificado; a-ril-alquilo; ou ciclo-alquilo (C^-CgQ); perfluor-alquilo ou . alquilo (Ορ-Ο^) pareialmente fluorado; (por exemplo, Y * Me; - 17 -

-CH(CH2CH2CH2CH3 )2; -OH(OH2CH2CH2GH5 )-GH2-ciclo-hexilo; -θΗ2αϊ2οι2σϊ·3ί -of2ch2ch2ch5).

Grupo II: O símbolo Y representa um radical -CHgQRg, em que o símbolo Q representa um átomo de oxigénio ou de enxofre ou um grupo de formula SO, SOg, HH e em que o símbolo R2 * alqui lo, alquilo ramificado ou acilo (C^-C.^); ou ciclo-alquilo (Ci-C20); ou arilo ou aril-alquilo; ou -GHgR^, em que o símbo lo representa um grupo períluor-alquilo ou alquilo (C^-C^) parcialmente fluorado, ramificado ou não ramificado.

Grupo III:

Y ΟΗλΝ \

R 5 em que os símbolos R^ e R^ são iguais ou diferentes e representam alquilo, alquilo ramificado, ciclo-alquilo, acilo, al-quil-sulf onilo, carboxi-alquilo (o grupo carboxilo pode ainda ser derivatizado para formar um ester ou uma amida com um ami noácido ou um diplptido), carbamoílo, sulfamoílo, N-dialquil-amino, aril-alquilo, halogeno-alquilo, incluindo fluor-alqui-lo, cianoalquilo, alcoxi-alquilo, hidroxi-alquilo, mercapto--alquilo, amino-alquilo e os seus derivados por exemplo, este res, amidas ou tiolsteres; ou um dos símbolos R^ ou representa um átomo de hidrogénio.

Grupo IV: Y * -ch2

I em que o símbolo D representa um átomo de azoto ou carbono e - 18 -

-BJ é um anel heterocíclico saturado ou não saturado ou um sistema de anel bicíclico, cada um dos quais e pentagonal, he xagonal, heptagonal ou octogonal, em que pode haver outros he tero-átomos (N, S, 0) e os átomos de carbono ou de azoto podem opcionalmente ser substituídos por alquilo, alquilo ramificado, ciclo-alquilo, carboxi-alquilo, earboxi (ligado ao átomo de carbono), amino, alcoxi, alcoxi-metilo ou (carbono) como carbonilo ou outros grupos benéficos para a interacção com a enzima.

Grupo Y: I « -ch2gh(r6)conr4e5 em que os símbolos R^ e R^ são como se definiu no Grupo III; e o símbolo R6 representa um átomo de hidrogénio, ou um radical alquilo inferior, alquilo ramificado, ciclo-alquilo, hi-droxi-alquilo, amino-alquilo, alquilamino-carbonilo.

Grupo VIi t» -ch2ch(r6)coÍT) em que o símbolo é como se definiu no Grupo V e é como se definiu no Grupo IV (mas com B * N).

Grupo VII: Θ símbolo ΐ representa um resíduo de um aminoáci-do ou qualquer amida (secundária ou terciária) ou éster desse resíduo, com a configuração 1 ou B. Os resíduos preferidos são os resíduos de aminoácidos lipofílicos, por exemplo, nor--leucina, ciclo-hexil-alanina, homociclo-hexil-alanina, ciel£ -hexil-glicina, tércio butil-glicina. - 19 - 8

Grupo VIII:

R - N-R em que o símbolo representa um átomo de hidrogénio (quando Λ no entanto, B não é fenil-alanina, a não ser que R seja car-boxi-alquilo ou carboxi-alquilo derivatizado); ou alquilo, al quilo (C^-C12) ramificado, ciclo-alquilo carboxi-al quilo ou bis-(carhoxil)-alquilo, que pode ser derivatizado no grupo de carboxilo para formar uma amida, por exemplo, com um aminoácido (o preferido é arginina) ou uma amina substituída; N1-dialquilamino, N*-alquilamino; λ 7 em que os símbolos R= R' são iguais ou diferentes, mas excluindo a significação de átomo de hidrogénio.

Grupo IX: Y » -CO-R^, mas so se o símbolo B for um aminoáci do lipofílico não aromático volumoso ou o seu derivado de Na— fa-alquilo (C-j-C^) (por exemplo, eiclo-hexil-alanina, mas excluindo Ala, leu, lie, Vai, Nva, Met, Nle, Phe, Tyr, Trp, Nal(l) e os seus derivados de N-metilo) e em que o símbolo R^ a NHg, N* -alquilamino (em que os grupos alquilo incluem alqui lo ramificado e/ou ciclo-alquilo); um resíduo de aminoácido.

Grupo X: Ϊ « -cq-b) -b) é como se definiu no Grupo IV (mas o símbolo D representa um átomo de azoto).

Grupo XI: - 20 -

Υ - -CO-NlAt5 em que os símbolos R* e são como se definiu no Grupo III, mas não significam átomos de hidrogénio·

Os seguintes Exemplos ilustram a presente invenção. São apresentados sob a forma de nove quadros de compostos com numeros de referencia, estruturas, iao molecular determinado por MB (bombardeamento com átomos rápidos), espectrometria e classe de compostos (a mesma que os "grupos" referidos ante-riormente na presente memória descritiva); - oito exemplos pormenorizados de síntese; - doze esquemas de síntese, como se refere nos exemplos pormenorizados; • tabela de abreviaturas; - descrição de ensaios in vitro de inibição de quininogena ses e ensaios in vivo de eficácia contra a asma·

Todas as estruturas dos produtos intermediários foram verificadas por ressonância magnética nuclear· QUADRO 1 Aldeídos M+H__7 Classe

5 Me-BPhe Cha Arg-H 473 I

- 21

QUADRO 2

Análogos de Tiometileno e Análogos de ___Sulfometileno__ +

Olasse 17 H-DPro Phe ArgCH2S(CH2)4Me 519 II 60 H-DPro Phe ArgCH2SnBu 505 II 61 H-DPro Phe DLArgCH2S02nBu 537 II QUADRO 3 Éteres £m+h:J+ Classe 23 H-EPro Phe ArgOH2OCH2(OP2)3CHP; 2 647 II 62 H-Pro Phe ArgGH2OGH2CP5 515 II 63 Boc-DPro Phe DLArgCHgOCHgCP^ 615 II 64 H-DPro Phe DLArgCH2OCH2CP5 515 II 65 H-DPro Cha DLArgCHgOCHgOP^ 521 II 66 H-DPro Phe ArgCH2OCH(Me)CP2CP2CP3 629 II 67 H-DPro Phe ArgOH2OCH2CP3 515 II 68 H-DCha Phe ArgCH2OGH2Cf3 571 II 69 H-BArg Phe ArgCH2OCH2CP3 574 II 70 H-DChg Phe ArgOH2OCH2CP3 557 II 54 H-DPro Phe ArgOH20(CH2)5CH3 517 II 55 H-DPro Phe ArgCHgOPh 509 II 22

QUADRO 4

Amlnometileno e Análogos Relacionados /“M+hJT1' Classe

31 H-DPro Phe ArgCH2N/“ (CH2)5Me_72 600 III 71 H-DPro Phe DArgCHg(RS)Tha 556 IV 72 H-DPro Phe ArgCH2(RS)Tha 556 IV 73 H-DPro Phe ArgCH2l-Pip-3-(KS)C02Et 572 IY 74 H-DPro Phe DLArgCH2 l-Pip-3-(RS)CH2G- (CH2)3Me 586 IY 75 H-DPro Phe DLArgCH2 l-Pip-3-(RS)CH2NEt2 585 IY 76 H-DPro Phe DLArgCH2 l-Pip-3-CONBfc2 599 IV 77 H-DPro Phe DLArgCH2 l-Pip-3-(RS)C0NHaBu 599 IV 78 H-DPro Phe DIArgCH2 l-Pip-3-(RS )GON(nBu)2 655 IV 79 H-DPro Phe DLArgCH2 l-Pip-4-(l‘-Pip) 583 IV 80 H-DPro Phe ArgGH2(HMe )AhaHHnBu, 615 IV 81 H-DPro Phe ArgCHg-Ahn 540 IV 82 H-DPro Phe ArgGH2-Hyp (OnBu )NHEt 629 IV 83 H-DPro Phe ArgCH2-Sar Pro NHBt 628 III 84 H-DPro Phe ArgCH2-%yp (QnBu. )BOnBu 644 IV 85 H-DPro Phe DMrgOH2Pic NEt, 641 IV 86 H-DPro Phe DLArgCH2tDHyp(OnBu)BOnBu 644 IV 87 H-DPro Phe DEArgCH2ProBCOIíEt2 599,9 IV " 88 H-DPro Phe DLArgCH2l-Pip-3(RS)C02H 544 IV 89 H-DPro Phe ArgCHgl-Pip-3(RS)CH2C0m 2 613 IV 90 H-DPro Phe ArgCH2H(GH2Ch) (CHg^Me $12 III 91 H-DPro Phe DLArgCH2N(Oc )2 657 III 92 H-DPro Phe ArgOH2H(Bfe)Cai 542 III - 23 -

QUADRO 4 (cont»)

Aminometileno-Oetonas e Análogos Relacionados

fmEj+ Olaese 93 H-DPro Phe ArgCH2N(Me)(CH2)4HH2 517 XII 94 H-DPro Phe ArgCH2N(Me)nBu 502 III 95 H-DPro Phe BLÀrgCHgrtug 544 III 96 H-DPro Phe DLArgCH2N/”nBu_7S02nBu 594 III 97 H-DPro Phe DLAcgCH2H/“nBu_7(0H2 )5CONH2 573 III 98 H-DPro Phe DIArgCH2N/“nHexJ7 ( 0¾ )7HH2 629.5 III 99 H-DPro Phe DLArgCH2N7“nHex_7(CH2 )5HH2 601 III 100 H-DPro Phe DIArgOH2N/^1Hexi7 (CH2 )3¾ 573 III 101 H-DPro Phe DLArgCH2N/"nBu7(eH2 ^4Ph 620 III 102 H-DPro Phe BLAr gCH2N/^Hex_7 ( CH2 )6CONH2 643 III 103 H-DPro Phe DLArgCH2N/“nHexJ7 ( CHg )gNHg 615 III 104 H-DPro Phe DMrgCH2H/“nHex_7(CH2 )?0H 630 III 105 H-DPro Phe DIArgCfô2H/"nHex_7 ( CH2 )^mko 671 III 106 H-DPro Phe DDArgCH2H/"nHexJ7(OH2 ^OOHHEt 671 III 107 H-DPro Phe DLArgOH2N/“nHex_7(CH2 )6C02Me 658 III 108 H-DPro Phe DIiArgCH2N7"nHex_7 (¾ )6<Χ>2Η 644 III 109 H-DPro Phe DLArgGH2N7“nBu_7 (CH2 ^COHEtg 629 III 110 H-DPro Phe DLArgOH2H/”nBuJ7(CH2 ^CONHEt 601 III

QUADRO 5

Oeto-iso-ésteres contendo Análogos

Classe 40 H-DPro Phe BLÁrg^ly Pro-NHEt 599 VI 111 H-DPro Phe Àrg^Gly Pro-NHEt 599 VI 112 H-DPro Phe Arg-Gly Arg-NH^ 530 V 113 H-DPro Phe DLArg^Gly Ala-NHg 545 V 114 H-DPro Phe DLArg^Gly Aha-NH2 587 V 115 H-DPro Phe DDArgfely Aha-NHnBu 643 V QUADRO 6 Análogos do Substrato m+h_7* Classe 45 H-DPro Phe Arg Chg-NH2 557 VII 116 CPr-CO Phe Arg Chg-NH2 X VII 117 MeSOgEPr® Phe Arg Ghg-NH2 635 VII 118 MeCO DPro Phe Arg Chg-NH2 599 VII 119 H-DArg Phe Arg Ser-NH2 X VII 120 H-DOha Phe Arg Ser-NH2 X VII 121 H-DPhe Phe Arg Ser-NH2 X VII 122 H-DPic Phe Arg Ser-NH2 X VII 125 H-DPic Phe Arg Chg-NH2 X VII 124 H-DPro Phe Arg Ser-NH2 X VII 125 H-DPro Cha Arg Ser-NH2 X VII 126 H-DPro Cha Arg Gly-NH2 X VII 127 H-DPro Phe Arg Ser-Arg-NH2 X VII - 25 -

QUADRO 6 (oont.) Análogos do Substrato

Classe 128 H-BPro Phe Arg Lys-NHg X VII 129 H-DPro Phe Arg Aha-NH^ X VII 130 H-DPro Phe Arg Phe-NHg 565 VII 131 H-DPro Phe Arg Deu-NHg 531 VII 132 H-DPro Phe Arg Ile-NH2 531 VII 133 H-DPro Nal Arg Ser-NH2 X VII 134 H-DPro Phe Arg BAha-NH2 531 VII 135 H-DPro Phe Arg Aha-NH(CH2)5Me 587 VII 136 H-DPro Phe Arg Nleucinol 518 VII 137 H-DPro Phe Arg SerOnBu NHg 561 VII 138 H-DPro Phe Arg Cha-NH2 571 VII 139 H-DPro Phe Arg Ada-NH2 623 VII 140 H-DPro Phe Arg Hch-NH2 585 VII 141 H-DPro Nal Arg Cha-NHg X VII 142 H-DPro Cha Arg Cha-NH2 X VII 143 H-DPro PheNOgArg Ser-NHg X VII 144 H-DPro Nal Arg Ile-NH2 X VII 145 H-DPro Phe Arg Ile Pro-NH2 X VII 146 H-DPro Phe Arg Aha Pro-NHg X VII 147 H-DPro Nal Arg Aha-NH2 X VII 148 H-DPro Cha Arg Npg-NHg X VII 149 H-DPro Cha Arg Hch-NH2 X VII 150 H-DPro Nal Arg Hch-NH2 X VII 26

QUADRO 6 (cont.) Análogos do Substrato CK+nJ* Classe 151 H-BPro Phe Arg Npg-NHg 545 VII 152 H-BPro Phe Arg Chg-l-Pip 625 VII 153 H-BPro Phe Arg Chg-NH(CH2)5Me 641 VII 154 H-DPro 4-Fph Arg Chg-NH2 575 VII * Obteve-se uma análise de aminoácidos sa-tís fator ia QUADRO 7 Amidas /"m+h_7+ Classe 47 H-BPro Phe Arg H/"(0H2)5Me_7-(OH2)3Oh 626 VIII 155 H-BPro Phe Arg N(Me)nBu 488 VIII 156 H-DPro Phe Arg NH(CH2)5COArg-NH2 at VIII 157 H-DPro Phe Arg IH(CH2)5NH2 475 VIII 158 H-BPro Phe Arg HH(CH2)4C0 Arg-NH2 X VIII 159 H-EPro Phe Arg NH(CH2)4NH2 X VIII 160 H-Pro Phe Arg HH(CH2)5CO Arg-NHg 687 VIII 161 H-BPro Phe Arg HH(CH2)5NH2 503 VIII 162 H-BPro Phe Arg HH(CH2)6C0 Arg-NH2 701 VIII 163 H-DPro Phe Arg NH(CH2)?CJ0 Arg-NH2 715 VIII 164 H-BPro Phe Arg HH(CH2)7C0HH-(CH2)3Me 615 VIII 165 H-BPro Phe Arg NH(CH2)7NHAc 573 VIII 27 - QUADRO 7 (cont.)

Amidas /”M+H_7+ Classe

166 H-DPro Phe Arg NH(0H2)7NH2 531 VIII 167 H-DPro Phe Arg ffi(CH2)7CONH2 559 VIII 168 H-DPro Phe Arg NH(CH2)7CO-Gly-Gly-Arg-NH2 829 VIII 169 H-DPro Phe Arg NH(CH2)7CO-Gly Arg--NHg 772 VIII 170 H-DPro Phe Arg HH(CH2 )7C0-Grly Gly--Gly Arg-NH2 886 VIII 171 H-DPro Phe Arg N^nHex_72 586 VIII 172 H-DPro Cha Arg NHÇHgCh 520 VIII 173 H-DPro odJal Arg HHCHgCh 564 VIII 174 H-DPro pal Arg NHCHgCh 564 VIII 175 H-DPro His Arg NHCH2Ch 504 VIII 176 H-DPro(4Me)Phe Arg HHOHgCh 528 VIII 177 H-DPro Phe Nar NHCH2Ch 500 VIII 178 H-DPic Phe Arg NHCHgCh 528 VIII 179 H-DIic Phe Arg NHCHgCH 576 VIII 180 H-DThi Phe Arg NHCHgCh 570 VIII 181 nBuDPro Phe Arg NHCHgCh 570 VIII

Obteve-se uma análise de aminoáeidos satisfatória. - 28 - QUADRO 8

Cetonas cM+HJ* Glasse

49 H-DPro Phe Arg CH^ 417 I 48 H-DEro Phe Arg(CF2)2CF5 3tSE I 53 H-DEro Phe ArgCH2GH/"nHex_72 XXX I XX Não se detectou o ião molecular QUADRO 9 Alfa-Cetoamidas CM+H_7+ Classe 11 H-EPro Phe DL Lys C0N/”nBu_72 530 XI 50 H-DPro Cha DL Arg C0N/“nBu_72 XXX XI xxx /M+H_7+ não disponível.

EXEMPLOS

Exemplo I

5 Me-DPhe-Cha-Arg-H

Realizou-se a síntese de 5 de acordo com o Esquema Heaccional I. Os algarismos árabes sublinhados, por exemplo 1, referem-se às estruturas deste esquema. Os números romanos entre parêntesis, por exemplo (i), referem-se a fases reaccio nais. i) Adicionou-se cloroformiato de isobutilo (10,2 milimoles) a uma solução de Boc-Arg(Z2)0H (9,23 milimoles) e N-me-til-morfolina (11,08 milimoles) no seio de THE isento de 29 -

água (25 centímetros cúbicos) a -20°C. Depois de vinte minutos, separou-se o solido por filtração e adicionou--se o filtrado a uma solução de boro-hidreto de sodio (10,3 milimoles) no seio de água (10 centímetros cúbicos) a O°0. Depois de três horas, adicionou-se XHSO^ 0,3 molar, extraíu-se o produto bruto com EtOAe e purificou -se por cromatografia rápida em sílica com EtOAc-petrá-leo (4 : 6)· O álcool 1 foi isolado sob a forma de um solido branco (97%). ii) Eliminou-se o grupo Boo de 1 (4,75 milimoles) com HC1/-dioxano saturado e acilou-se o produto com Boe-Cha-ONSu (9,5 milimoles) em GHgClg (20 centímetros eúbicos) a 0o C na presença de H-metil-morfolina. Depois de duas horas, processou-se a mistura reaccional empregando manei ras de proceder correntes e purificou-se o produto bruto por cromatografia rápida em sílica com EtOAc-petrú-leo (4 í 6). Isolou-se o álcool puro 2 sob a forma de um oleo incolor (90%). iii) Eliminou-se o grupo Boc de 2 (4,27 milimoles) com HC1/ /dioxano saturado e fez-se reagir o produto com Z(HMe)EPhe-0H (5,12 milimoles) na presença de HOBt (10,2 milimoles), carbodiimida solúvel em água (6,1 milimoles) e N-metil-morfolina no seio de DfóF (20 centímetros cúbicos) a 0°C. Depois de dezoito horas, prooes-sou-se a mistura reaccional utilizando maneiras de proceder correntes e purificou-se o produto por cromatogra fia rápida em sílica com EtOAc-petroleo (1 : 1). Isolou -se o álcool puro J5 sob a forma de um oleo incolor (52%). iv) Dissolveu-se o álcool 2 (2,22 milimoles) em CHgClg/AcOH (30 : 1) e adieionou-se periodinano de Dess-Martin (4,5 milimoles). Depois de duas horas e meia à temperatura - 30 -

ambiente, diluíu-se a mistura reaceional com EtOAc e despejou-se sobre uma solução de tiossulfato de sódio (32 milimoles) e solução saturada de NaHCO^. Purificou--se 0 produto bruto por cromatografia rápida em sílica com BtOAc-petróleo (3 s 7)* Isolou-se 0 aldeído puro 4 sob a forma de um óleo incolor (7596). y) Dissolveu-se 0 aldeído 4 (1,65 milimoles) em MeOH/HgO/ /AeOH (90 i 9 s 1, 50 centímetros cúbicos) e hidrogenou -se em presença de 5% de Pd/C. Purificou-se 0 material bruto por M3?LC em *Vydac (15 a 25 micro litros), u-sando MeGN/HgO/TSA para se obter £ puro (CH-851) sob a forma de um sólido branco (780 mg). Cromatografia em ca mada fina, Et0Ac-Py-Ac0H-H20 (30 í 20 : 6 : 11), Rf 0,66 em sílica. Depois da hidrólise a 110°C durante vin te e duas horas, com HC1 6 N, 0 teor de peptido baseado em Cha foi igual a 40%. Espectro de massa FAB (M + H)+» * 473 (cale. ra/Z *472).

Exemplo II 11 H-DPro-Phe-Iys-COl^Bug (ver Esquema Reaceional II) i) Adicionou-se TcboeONSu (14,8 milimoles) a uma solução de H-Lys(Z)-OMe. HC1 (12,2 milimoles) e trietilamina (14,8 milimoles) em GHgClg (50 centímetros cúbicos). De pois de trés horas à temperatura ambiente, processou-se a mistura reaceional utilizando maneiras de proceder correntes e purificou-se 0 produto por cromatografia rá pida em gel de sílica utilizando EtOAc-petróleo (7 :13)· Isolou-se 0 éster puro 6 sob a forma de um óleo incolor (100%). ii) Adicionou-se hidreto de di-isobutil-alumínio (solução 1,5 molar em tolueno, 50 milimoles) a uma solução de 6 (12,2 milimoles) em tolueno isento de água (100 centíme - 31

tros cúbicos) a -78°C durante um intervalo de tempo de vinte minutos. Depois de mais quinze minutos, adicionou •se metanol (10 centímetros cúbicos) seguido de uma solução saturada de sal de Rochelle (100 centímetros cúbi oos). Depois de duas horas e trinta minutos, processou--se,a mistura reaccional usando maneiras de proceder correntes e purificou-se o produto por cromatografia ra pida em sílica utilizando EtOAe-petróleo (3 : 7)* Isolou-se o aldeído puro 2 sob a forma de um óleo incolor (49%). iii) Adicionou-se cianeto de potássio (18 milimoles) e acido clorídrico 1 molar (30 centímetros cúbicos) a uma solução de 2 (5»98 milimoles) em acetato de etilo (30 centí metros cúbicos). Depois de dezoito horas à temperatura ambiente, processou-se a mistura reaccional empregando maneiras de proceder correntes e purifieou-se o produto por cromatografia rápida em sílica utilizando EtOAc-pe-tróleo (4 · 6). Isolou-se a ciano-hidrina pura 8 sob a forma de um oleo incolor (88%). iv) Adicionou-se uma solução 4 molar de HC1 em dioxano (50 centímetros cúbicos) a uma solução de 8 (5,28 milimoles) em metanol isento de água (15 centímetros cúbicos) a 0° C. Depois de dezoito horas à temperatura ambiente, adi-cionou-se uma mistura de gelo/água (15 centímetros cúbi eos). Depois de tres dias a 4°C» adicionou-se XHCO^ solido. Broeessou-se a mistura reaccional utilizando maneiras de proceder correntes e purificou-se o produto por cromatografia rápida em sílica usando EtOAe-petró-leo (11 : 9). Isolou-se o éster puro 8b sob a forma de um oleo amarelo (59%). v) Adioionou-se pó de zinco activado em pequenas porções a uma solução de 8b (3»1 milimoles) em ΑοΟΗ/Η^Ο (9 : 1, 25 centímetros cúbicos). Depois de uma hora e meia a - 32 -

temperatura ambiente, separou-se o resíduo por filtração, evaporou-se o filtrado em vácuo e tomou-se o resíduo em EtOAc. lavou-se esta solução com NaHCO^ saturado, e com salmoura, secou-se (MagSO^) e evaporou-se em vcU cuo. Isolou-se a amina <) sob a forma de um óleo incolor (S5%). vi) Acilou-se a amina 9 (2,63 milimoles) com Boe-Phe-ONSu (3»04 milimoles) em CH2C12 (30 centímetros cúbicos) na presença de N-metil-morfolina. Depois de tres boras, processou-se a mistura reaccional empregando maneiras de proceder correntes e purificou-se o produto bruto por cromatografia rápida em sílica com EtOAc-!ter de pe tróleo (6 : 4)· Isolou-se o éster puro 2Ό sob a forma de um óleo incolor (92%). vii) Eliminou-se o grupo Boc de 10a (2,41 milimoles) usando HCl/dioxano saturado e acilou-se o produto assim obtido com Boc-DPro-ONSu (2,92 milimoles) em CHgClj? (30 centímetros cúbicos) a 0°G, na presença de N-metil-morfoli-na. Depois de tres horas, processou-se a mistura reaccio nal utilizando maneiras de proceder correntes e purificou -se o produto por cromatografia rápida em sílica sando EtOAc/petróleo (3*1). Isolou-se o éster puro 10b sob a forma de um óleo incolor (64%)· viii) Adicionou-se hidróxido de lítio (1,6 milimoles) e água (3 centímetros cúbicos) a uma solução de 10b (1,34 oili moles) em THE (30 centímetros cúbicos). Depois de quatro horas à temperatura ambiente, eliminou-se ο THE em vácuo, ajustou-se o pH do resíduo a 4 com ácido cítrico 1 M e extraíu-se com OHCl^· Lavaram-se os extractos orgânicos com salmoura, secaram-se (Na2S0^) e evaporaram--se em vácuo. Isolou-se o ácido puro 10c sob a forma de um óleo incolor (70%). - 33 -

iX) Adicionou-se pentaflúor-fenol (1,3 milimoles) e earbo-diimida solúvel em agua (1,3 milimoles) a uma solução de 10o (1,07 milimoles) em CHgClg (20 centímetros cúbicos) a 0°C. Depois de duas horas e meia, adicionou-se dibutilamina (2,1 milimoles) a esta solução a 0°C e a-justou-se a 9 o pH com BIEA. Depois de dezoito horas à temperatura ambiente, processou-se a mistura reaccional utilizando maneiras de proeeder usuais e purificou-se o produto por cromatografia rápida em sílica usando BtOAc/ /petróleo (7 s3). Isolou-se a arnida pura lOd sob a forma de um óleo incolor (4896). x) Adicionou-se periodinano de Dess-Martin (0,97 milimole) a uma solução de lOd (0,52 milimole) em CHgClg (100 s 1; 40 centímetros cúbicos). Depois de duas horas à tempera tura ambiente, adicionou-se mais periodinano de Dess--Martin (0,52 milimole). Depois de mais tres horas, di-luíu-se a mistura reaccional com EtOAc e despejou-se nu ma solução de tiossulfato de sódio (7,3 milimoles) em água e adicionou-se solução de NaHOO^ saturada. Purificou-se o produto bruto por cromatografia rápida em síli ca com EtOAc-petróleo (9 s 11)· Isolou-se a ceto-amida lOe pura sob a forma de um óleo incolor (5796).

xi) Eliminou-se o grupo Boe de lOe (0,24 milimole) utilizan do HOl/dioxano saturado. Dissolveu-se o produto resultante em AcOH/HgO (9 : 1) e hidrogenou-se na presença de 596 de Pd/C. Purificou-se o material bruto por MPLC em VYDAC 0,o (15 a 25 micro litros) usando MeCN/H^O/lPA xO * * para se obter (GH-1463# 89,7 mg). HPIiO, Novapak C^g, 4 'microlitros (8 x 100 mm), gradiente linear 20—*8096, 0,196 de TEA/MeÇN em 0,196 de TIA/HgO durante vinte e cin co minutos a 1,5 ml minuto·"1 indica a presença de dois epímeros D-Arg (4096) a 11,2 minutos e L-Arg (6096) a 12,6 minutos. Depois de hidrólise a 110°0 durante vinte • * Marca Comercial Kegistada 34 e duas horas com HC1 6 normal, a análise de aminoácidos foi Rie 0,93, Pro 1,07.

Exemplo III 17 H-KPro-Phe-Arg-CH2S(CH2 (ver Esquema Reaccional 1) Dissolveu-se Boc-Arg(22)0H (46,1 milimoles) em ΪΗΡ isento de água (200 centímetros cúbicos), λ temperatura de -20°0, adicionou-se N-metil-morfolina (50,85 milimoles) e cloroformiato de isobutilo (50,73 milimoles). Depois de vinte minutos, adicionou-se esta mistura a uma solução de diazometano (0,1 mole) em EtgO a -5°C. Depois de duas horas, isolou-se a diazocetona 12 sob a forma de um solido amarelo. ii) Tratou-se a diazocetona 12 (46,1 milimoles) em THE isento de água com HBr (69,15 milimoles) em EtOAc a -20°G, seguido da adição de solução saturada de NaHCO^ depois áe quarenta e cinco minutos. E±traíu-se o produto bruto com EtOAc e cristalizou-se em EtOH para se obter Boc-Ar£ (Z2)CH2Br, 13 puro (85%). iii) Tratou-se 1-pentanotiol (1,27 milimoles) em DH3F isenta de água (5 centímetros cúbicos) com hidreto de sódio (1,4 milimoles). Depois de trinta minutos, adicionou-se Boc-Arg(Z2)CH2Br, 1£ (1,27 milimoles) a -40°C durante vinte minutos e a -5°C durante duas horas e meia. Depois da adição de KHSO^ 0,3 molar e extracção do produto bruto com EtOAc, a cromatografia rápida em sílica com EtOAc -petróleo (15 : 85) originou o composto de tiometileno puro 14 sob a forma de um óleo incolor (74%)· iv) Eliminou-se o grupo de protecção Boc de 14 (0,94 milimoles) utilizando HCl/dioxano saturado e acilou-se o produ to resultante com Boc-Phe-OPfp (1,13 milimoles) em CH2-

Clg a 0°C na presença de DIEA. Purificou-se o produto bruto por eromatografia rápida em sílica com EtQáe-pe-tróleo (3 · 7)> obtendo-se o análogo de tiometileno puro 1[5 sob a forma de um óleo incolor (55%). v) Eliminou-se o grupo de protecção Boc de 15 (0,52 mi limo le) utilizando HCl/dioxano saturado. Dissolveu-se o pro duto resultante em ΙΚΪ e tratou-se com Boc-DEPro-OH (0,65 milimoles) na presença de HOBt (1,05 milimoles), carbodiimida solúvel em água (0,76 milimole) e N-metil--morfolina. Depois do processamento nas condições usuais purificou-se o material bruto por eromatografia rápida em sílica com EtOAc-petróleo (4 s 6), obtendo-se o composto de tiometileno puro 16 sob a forma de um óleo incolor (74%). vi) Eliminou-se o grupo de protecção Boc de 16 (0,38 milimo le) utilizando HGl/dioxano saturado. Dissolveu-se o pro duto resultante em AcOH/HgO (9 s 1) e hidrogenou-se em presença de 5% de Pd/G. Purifieou-se o material bruto por MPIC em *Vydac C^g (15 a 25 microlitros), usando MeCN/H20/IPA para se obter rj[ puro (CH-575» 41 mg). 0 ensaio de HPLC, *Hovapak C^g, 4 microlitros (8 x 100 mm), gradiente linear 20 -*80% 0,1% IFA/MeON em 0,1% de ϊΡΑ/Η^Ο durante vinte e cinco minutos a 1,5 ml minuto"1 indica a presença de dois epímeros D-Arg (<5%) a 9,8 minutos e L-Arg (y 95%) a 11,1 minutos. Depois da hidró lise a 150°C/1,5 horas com HG1 6 normal, a análise de aminoácidos deu os áeguintes resultados: Phe > 0,80;

Pro * 1,00.

Iodos os análogos do Quadro 2 foram sintetizados pelo processo que se descreveu. 61 foi sintetizado por oxida ção de 60 com ácido metacloro-peroxi-benzóico. . X Marca comercial registada - 36 -

Exemplo IV 23 H-Bpro-Phe-Arg-CH2OGH2(GP^)^CHC]?2 (reja-se Esquema Reaç cional IV) i) Tratou-se IH,IH,5H-octaflúor-l-pentanol (2,45 milimoles) em IP Isento de água (8 centímetros cúbicos) com hidrato de sódio (1,83 milimoles). Depois de trinta minutos, adicionou-se a bromocetona 13 (1,65 milimoles) a -40°C e deixou-se reagir a esta temperatura durante trinta minu-tos e a -5 C durante duas horas e meia. A adiçao de solu ção 0,3 M de KHSO^ e a extraeção com EtOAc, originou o produto bruto, que foi purificado por cromatografia rápi da em sílica utilizando EtOAc-petróleo (15 : 85). Isolou -se o flúor-éter 18 puro sob a forma de um óleo incolor (69%). ii) Dissolveu-se o flúor-éter 18 (1,13 milimoles) em MeOH (40 centímetros cúbicos) e adicionou-se boro-hidreto de sódio (1,18 milimoles) a esta solução a 0°C. Depois de quinze minutos, adicionou-se solução 0,3 molar de KHSQ^ e extraíu-se a mistura com EtOAc, originando o composto puro lg sob a forma de um óleo incolor (88%). iii) Eliminou-se o grupo de protecçao Boc de 19 (1,0 milimoles) com HGl/dioxano saturado. Dissolveu-se o produto re sultante em CE^Clg e acilou-se com Boc-Phe-OPfp (1,2 milimoles) na presença de D1EA a 0°C. Depois de realizado o processamento corrente, purificou-se o produto bruto por cromatografia rápida em sílica com EtOAc-petróleo (3 : 7)> obtendo-se o produto puro 20 sob a forma de um óleo incolor (55%). iv) Desprotegeu-se 20 (0,55 miliraole) com HCl/dioxano satura do e acilou-se com Boc-BPro-OPfp (1,63 milimoles) em CHgGlg a 0°C na presença de ΒΓΕΑ. Depois do processamento corrente, purificou-se o produto bruto por cromatografia - 37 - rápida em sílica com EtOAc-petróleo (4 s 6), obtendo-se 0 produto puro 21 sob a forma de um óleo incolor (48%)· v) Dissolveu-se 0 composto 21 (0,24 mi li mole) em /AeOH (30 í 1) e adicionou-se periodinano de Dess-Mar-tin (0,48 milimoles). Depois de duas horas à temperatura ambiente, diluiu-se a mistura reaccional com EtOAc e despejou-se numa solução de tiossulfato de sódio (3*5 milimoles) em água e NaHGO^ saturada. Purificou-se 0 produto bruto por eromatografia rápida em sílica com EtOAc-petróleo (7 í 13), obtendo-se 0 flúor-éter 22 sob a forma de um óleo incolor (64%). vi) Desprotegeu-se 0 flúor-éter 22 (0,16 milimole) e purifi cou-se como se descreveu no Exemplo III (vi). Isolou-se 23 (GH-619) puro sob a forma de um sólido branco (50,9 mg). 0 ensaio de HP1C, *Novapak C^g, 4 microlitros (8 x x 100 mm), gradiente linear 20 —*>-80% 0,1% TFA/MeCN em 0,1% de TM/HgO durante vinte e cinco minutos a 1,5 ml minuto'"1 indicou a presença de um único produto (TR » « 11,5 minutos). Depois da hidrólise a 150°C/1,5 horas com HC1 6 normal, a análise de aminoácidos forneceu os seguintes resultados: Phe 1,00; Pro 1,2.

Iodos os análogos indicados no Quadro 3 foram sintetiza dos pelo processo descrito, excepto os análogos e que foram sintetizados pelos métodos delineados nos Eb-quemas Reaccionais XIII e XIV, respectivamente.

Exemplo Y 21 H-DPro-Phe-Arg-CH2lí(({ai2)5CÍH2)2 (veja-se 0 Esquema

BL Reaceional V - 38 1

Dissolveu-se Boe-Arg(Z2)OH (18,5 milimoles) em CHgClg s Marca comercial registada

(50 centímetros cúbicos). Â esta solução, à temperatura de 0°G, adicionou-se tricloro-etanol (20,35 milimoles), carbodiimida solúvel em água (22,2 milimoles) e dimetil amino-piridina (0,93 milimoles). Depois de três horas, processou-se a mistura reaccional usando maneiras de proceder correntes, obtendo-se o derivado de tricloro--etilo 24 puro sob a forma de um óleo incolor (10096). ii) Desprotegeu-se o composto 24 (18,1 milimoles) com HC1/ /dioxano saturado e acilou-se com Boc-Phe-ONSu (27,2 mi limoles) em GHgOlg a 0°C.na presença de N-metil-morfoli na. Depois de três horas, processou-se a mistura reaccional utilizando maneiras de proceder usuais e purifi-cou-se o produto bruto por cromatografia rápida em síli ca com BtOAc-petróleo (2 í 8), obtendo-se o produto puro 25 sob a forma de um sólido branco (9796). iii) Desprotegeu-se o produto 25 (17,4 milimoles) com HCl/ /dioxano saturado e acilou-se com Boc-BPro-ONSu (26,2 mi limoles) em CH2C12 a 0°C na presença de N-metil-morfoli na. Depois de três horas, processou-se a mistura reaccio nal usando maneiras de proceder correntes e purificou--se o produto bruto por cromatografia rápida em sílica com EtOAe-petróleo (35 : 65), obtendo-se o triplptido protegido puro 26 sob a forma de um óleo incolor (94%). iv) Adicionou-se pó de zinco activado a uma solução do produto 26 (16,47 milimoles) em ácido acético glacial. Depois de três horas à temperatura ambiente, separou-se o zinoo por filtração, evaporou-se o filtrado e purifi-cou-se o produto bruto por cromatografia rápida em síli ca cora EtOAe-petróleo-AeOH (74 s 25 s 1), obtendo-se o tripeptido puro 2£ sob a forma de um sólido branco (9196). v) Dissolveu-se o tripeptido 2J protegido (15 milimoles) - 39 -

em THF isento de água (40 centímetros cúbicos), adicionou-se N-metil-morfolina (18 milimoles) e cloroformiato de isobutilo (16,6 milimoles) à temperatura de -20®C. Depois de vinte minutos, adicionou-se a mistura a uma solução de diazometano (35 milimoles) em Et20 a -5°C. Depois de duas horas e meia, isolou-se a diazocetona 28 sob a forma de um óleo amarelo. vi) Tratou-se a diazocetona 28 (15 milimoles) no seio de THF seco com HBr (22,3 milimoles) em EtOAe a -20°C, seguido da adição de solução de NaHC0_ saturada depois de quarenta e cinco minutos. Extraiu-se o produto bruto com EtOAc e purificou-se por cromatografia rápida em sí lica com EtOAc-petróleo (1 $ 1). Isolou-se a bromoceto-na pura 29 sob a forma de um sólido branco.(72%). vii) Adicionou-se di-hexilamina (1,25 milimoles) e NaHCO, (0,8 milimole) a uma solução da bromocetona 2£ (0,23 mi limole) em THF isento de água (5 centímetros cúbicos). Depois de dezoito horas à temperatura ambiente, adicionou-se solução 0,3 M de ÉHSO^ à mistura reaccional e purificou-se o produto bruto por cromatografia rápida em sílica com EtOAc-petróleo (35 s 65)· Isolou-se a ami nometileno-eetona protegida J50 sob a forma de um óleo amarelo (54%)· viii) Desprotegeu-se a aminometileno-cetona 30 (0,12 milimole) e purificou-se como se descreveu no Exemplo III (vi). Isolou-se o composto 31 (CH-694) puro sob a forma de um sólido branco (41 mg). 0 ensaio de HP1C com gradi ente linear de 20-*80% 0,1% de TFA/MeCN em 0,1% de TFA/HgO durante vinte e cinco minutos a 1,5 ml minuto”1, indicou a presença de dois epímeros B-Arg (50%) a 11,2 minutos e I-Arg (50%) a 12,5 minutos. Depois da hidróli se a 110°/22 horas com HC1 6 N, a análise de aminoáci- — 40 —

dos foi a seguinte : Phe 0,91$ Pro 1,09*

Todos os análogos indicados no Quadro 4 foram sintetiza dos pelo método que se descreveu. As aminas necessárias foram sintetizadas por processos sintéticos habituais, tais como aminação redutora e rearranjo de Curtius*

Exemplo VI

K 42 H-DPro-Phe-Arg -Gly-Pro-NHEt (veja-se Esquema Reac-_m_ cional VI) i) Tratou-se HgCKCOgTce^ (6,81 milimoles) com hidreto de sódio (5,67 milimoles) em THE isento de água (30 eentíme tros cúbicos). Depois de quarenta e cinco minutos, adicionou-se a bromocetona 15 (4,52 milimoles) a -5°C. Depois de duas horas e meia, adicionou-se solução 0,3 molar de KHSO^, extraíu-se 0 produto bruto com EtOAc e purificou-se por cromatografia rápida em sílica com EtOAc--petróleo (2 : 8), Isolou-se 0 produto puro Boe-Arg(Z2)-GHgCHXCOgTceJg JJ2 sob a forma de um óleo incolor (83%)· ii) Adicionou-se zinco activado a uma solução de £2 (3,65 mi limoles) em ácido acético glacial. Depois de duas horas e meia à temperatura ambiente, separou-se 0 zinco por filtração, evaporou-se 0 filtrado e isolou-se o diácido 21· iii) Aqueceu-se a refluxo durante quarenta e cinco minutos u-ma solução do diácido 21 em tolueno. Evaporou-se 0 dissol vente e purificou-se 0 produto bruto por cromatografia rápida em sílica eom EtOAc-petróleo-ÀcOH (60 : 39 : 1). Isolou-se 0 Boc-Arg()^Gly-OH j54 sob a forma de um óleo incolor (70% a partir de 32). iv) Adicionou-se tricloro-etanol (2,82 milimoles), earbodii- - 41 -

mida solúvel em agua (2,81 milimoles) e dimetilamino-pi ridlna (0,117 milimole) a uma solução de 54 (2,54 milimoles) em OHgClg (50 centímetros cúbicos) a 0°C. Depois de duas horas e meia, processou-se a mistura reaccional usando maneiras de proceder correntes e purificou-se o produto bruto por cromatografia rápida em sílica com EtOAc-petróleo (85 : 15). Isolou-se o derivado de triclo ro-etilo £5 sob a forma de um óleo incolor (85%). v) Eliminou-se o grupo de protecção Boe de j55 (1,85 milimoles) utilizando HCl/dioxano aaturado e acilou-se o produ to resultante com Boc-Bie-OPfp (6,04 milimoles) em CH2-Cl2 na presença de BIEA. Depois de duas horas, processou -se a mistura reaccional usando maneiras de proceder cor rentes e purificou-se o produto bruto por cromato grafia rápida em sílica com EtOAc-petróleo (2 : 8). Isolou-se o produto puro j56 sob a forma de um óleo incolor (85%). vi) Eliminou-se o grupo de protecção Boe de J6 (1,58 milimoles ) utilizando HCl/dioxano saturado e acilou-se o produto resultante com Boc-DPro-OPfp (5,12 milimoles) em CHg-Cl2 na presença de DIEA. Depois de duas horas, processou -se a mistura reaccional utilizando maneiras de proceder correntes e purificou-se o produto bruto por eromatogra-fia rápida em sílica com EtOAc-petróleo (35 s 65). Iso-lou-se o produto puro 32 sob a forma de um óleo incolor (79%). vii) Adicionou-se pó de zinco activado a uma solução de composto 52 (1,13 milimoles) em ácido acético glacial. Depois de duas horas e meia a temperatura ambiente, sepa-rou-se o zinco por filtração, evaporou-se o filtrado e purificou-se o produto bruto por eromatografia rápida em sílica com EtOAc-petróleo-ÀcOH (70 í 29í 1). Isolou-se o produto 5§ sob a forma de um óleo incolor (76%). - 42 -

viii) íEransformou-ee o ceto-isoster protegido 38 (0,26 milinto le) no seu éster de Pfp por tratamento com Pfp-OH (0,29 milimole) e carbodiimlda solúvel em água (0,31 milimo-le) em CHgClg (8 centímetros cúbicos) a 0°C durante duas horas e meia. Este éster de Pfp foi acoplado ao sal de H-Pro-NHEt.HC1 (0,78 milimole) à temperatura de 0°0, na pressnça de DIEA. Depois de dezoito horas, processou -se a mistura reaccional utilizando maneiras de proceder correntes e purificou-se o produto por cromatogra-fia rápida em sílica com CHCl^-MeOH-AcOH (97 : 2 : 1). Isolou-se o produto 22 s°b a forma de um oleo incolor (91#). ix) Desprotegeu-se o análogo 22 (0,23 milimoles) contendo o ceto-isoster como se descreveu no Exemplo III (vi). Iso lou-se o produto 40 (CH-595)puro sob a forma de um soli do branco (40 mg). 0 ensaio de HP1>0, gradiente linear 10-*50# 0,1% de TFA/MeCN em 0,1% de TPA/HgO durante vinte e cinco minutos a 1,5 ml minuto***·, indicou a presença de dois epímeros, B-Arg (46%) a 10,1 minutos e L--Arg (54%) a 11,7 minutos. Depois da hidrólise a 150°0 durante 1,5 horas com HC1 6 N, a análise de aminoácidos proporcionou o seguinte resultado: Fhe 0,91; Pro 1,09.

Todos os análogos indicados no Quadro 5 foram sintetiza dos pelo processo descrito.

Exemplo VII 45 H-DPro-Phe-Arg-Ohg-NHg (veja-se Esquema Reaccional VII)

i) Dissolveu-se Boe-Phg-OH (19,9 milimoles) em AcOH/HgO (9:1; 100 centímetros cúbicos) e hidrogenou-se na pre sença de Rh/C a 4,2 kg/cm^ (60 psi) durante trés dias. Separou-se por filtração o catalisador e eliminou-se o dissolvente para se obter Boc-Chg-OH, (100%). - 43

ii) A uma solução de 41 (3,9 milimoles) em CHgClg/MF (2 ; : 1; 60 centímetros cúbicos) adicionou-se carbodiimida solúvel em água (4,1 milimoles) e HOBt (4,3 milimoles), à temperatura ambiente. Depois de trinta minutos, adi-cionou-se solução de amónia a 35% (0,8 centímetros cúbi eos). Depois de mais três horas à temperatura ambiente, processou-se a mistura reaccional empregando maneiras de proceder usuais e reeristalizou-se o produto em EtOH, para se obter a amida pura £2 sob a forma de um solido branco (60%). iii) Eliminou-se o grupo Boc de ^2 (0,77 milimole) com HC1/ /dioxano saturado para se obter a amida £5 sob a forma de um pó branco (100%). iv) Dissolveu-se o tripeptido pretegido 2J (0,38 milimole) em MF (5 centímetros cúbicos), λ temperatura de 0°C, a dicionou-se ^3 (0,76 milimole), HOBt (0,76 milimole), carbodiimida solúvel em água (0,46 milimole) e N-metil--morfolina. Depois de dezoito horas à temperatura ambiente, processou-se a mistura reaccional utilizando procedimentos usuais e purificou-se o produto por croma tografia rápida em sílica com CHCl^/MeOH (99 : 1). Isolou- se o tetrapeptido protegido puro 44 sob a forma de um eólido branco (69%)· v) Desprotegeu-se o tetrapeptido protegido 44 (0,27 milimo le) e purificou-se como se descreveu no Exemplo III (vi). Isolou-se 4£ (CH-640) puro sob a forma de um sóli do branco (58 mg). 0 ensaio de HPLC com gradiente linear 10 50% 0,156 de IFA/MeCN para 0,156 de TFA/Ho0 du- rante vinte e cinco minutos a 1,5 ml minuto"·1·, apresentou um único pico a 14,2 minutos. Depois da hidrólise a 110°C durante vinte e duas horas com HC1 6 N, a análise de aminoáeidos forneceu os seguintes resultados: Arg 0,96; lhe 1,00; Iro 0,95. 44 -

Todos os análogos indicados no Quadro 6 foram sintetiza dos como se descreveu neste método ou por outra métodolo gia usual de acoplamento de peptidos (M. Bodansky e A. Bodansky, wThe Practice of Peptide Synthesis", Springer -Verlag, 1984)·

Exemplo VIII 47 H-DPro-Phe-Arg-N((0H2)5CH3)(CH2)5Ch (veja-se o Esquema

Reaccional VIII) i) Dissolveu-se o tripéptido protegido 27 (0,52 milimole) em ME (5 centímetros cúbicos) e adicionou-se ΗΝΓ(ΟΗ2)5^3-.7(^2)30¾ (0,96 milimole), HOBt (0,64 mili mole), carbodiimida solúvel em água (0,58 milimole) e N--metil-morfolina, à temperatura de 0°C. Depois de dezoito horas à temperatura ambiente, processou-se a mistura reaccional empregando os procedimentos usuais e purificou-se 0 produto por eromatografia rápida em sílica utilizando EtOAc-hexano (4 : 6). Isolou-se a amida £6 sob a forma de um óleo incolor (32%). ii) Desprotegeu-se a amida do tripéptido protegido £6 (0,1 milimole) e purificou-se como se descreveu no Exemplo III (vi). Isolou-se £2 (OH-985) puro sob a forma de soli do branco (17 mg). 0 ensaio de HPI»C, gradiente linear 40—»90% 0,1% TEA/MeCN para 0,1% TFA/HgO durante vinte e cinco minutos com o caudal de 1,5 ml minuto"^, detee-tou um unico pico a 10,7 minutos. Depois da hidrólise a 110°0 durante vinte e duas horas, com HC1 6 I, a análise de aminoáeidos mostrou Phe 1,01; Pro 0,99.

Sintetizaram-se todos os análogos indicados no Quadro 7 pelo método descrito. Sintetizaram-se os precursores dos tripéptidos pretendidos de maneira semelhante a 22 ou pe la metodologia de acoplamento de peptidos usual. (M. Bo- - 45 -

dansky e A. Bodansky, "The Eratiee of Peptide Synthesis**, Spr inger-Ver lag, 1984). As aminas necessárias foram com pradas no comercio ou sintetizadas por rearranjo de Our tius. Sintetizou-se nBu-BPro-OH para 181 por aminação em condições redutoras.

- 46 -

Γ Boc-Arg-OH

ESQUEMA EMOCIONAI. 1 (Síntese do composto 5)

(i) iBuOCOCl/KMM/THF

NalH4/H20

Boc-Arg-OH 1 (ii) HCl/Bioxano Bo c-Cha-ONSu/NMM ®2012

I (iii) HCl/Moxano

I Z(NMe)DPhe-Oha-Arg -OH *- R,

Z(HMe )BPhe-QH HOBt/wscd NMM/DMF (iv) Periodinano de Bess Martin CHgCXg/AcOH

Boc-Gha-Arg-OH 2 Z(NMe)DPhe-Cha-Arg-H 1

(v) H2, Pd/C

Me-EPhe-Cha-Arg-H

MeOH/HgO/AcOH - 47 -

ESQUEMA EMOCIONAL II (síntese do composto II ) Z H-Iys-OMe .HG1 (i) TebocONSu 2

Et3H/CH0Cl -> Tcbo c- Lys-OMe 2VJ-2 6 (ii) DIBAL/Tolueno OH Icboc-lys—GN 8a

(iii) KGN hci/h2o EtOAc

Teboe-lys-H I

(iv) HOl/Moxano Me0H/0°0 H20/4°C Z H-Iys^JOgMe

(v) Zn/AcOH 2 I ΛΪΤ

Tcboc-lys-^GOgMe 8b (vi) Boc-Phe-ONSu

CHClg/MMM

Z I OH, (vii) HCl/Bioxano

Z I

Boc-BPro-Phe-Lys^^-COgMe < OH,

Boc-Phe-Iiys—OOgMe 10b

Boc-SPro-ONSu nmm/gh2ci2 10a i - 48 -

(viii} LiOH/H20 THF

2 I .OH,

(ix) PfpOH/wscd/OH2Gl2 2 \

Bo c-DPro-Phe-Iiys—C02H 10c nBu2NH/I)IEÂ » Bo c-DPro-Phe-lys—COt^Bu, lOd

(x) Periodinano de Bess Martin CHC12/AcOH

V 2 Boc-DPro-Phe-Lys-CoAug lOe (xi) HOl/Dioxano H-BPro-Phe-I.ys-COBpBUg «-

H2> Pd/C 11 Ac0H/H20

- 49 -

ESQUEMA EMOCIONAL III (Síntese do composto 17) Z i 2

(i) 1BuOCOGl/NMM/THP

Boe-Arg-OH (ii) CH2U2 b Boc-Arg-GHN2 12

(li) HBr/EtOAc THE

Z I 2

Boc-Arg-.S(OH2)4CH3

(iii) OH5(CH2)S’Na+ <- MF Z í 2

Boc-Arg-CH2Br

H ±2 (iv) HGl/Uioxano Boc-Phe-OPfp diea/gh2ci2 Ψ ^2 (v) HOl/Bioxano

Boc-Phe-Arg-CH2S(CH2)4CH5-> Boc-BPro-Phe-Arg-CH2S(CH2)40H3

Boc-nPro-OPfp biea/ch2ci2 (vi) HCl/Bioxano H2 Pd/C Ac0H/H20 H-BPro-Phe-Arg-CH2S(CH2)4CH3 π - 50 -

ffi o tr\ «-n rN O t£Γ§ 9 CM si iSotfiij I o(¾ ffi 0 © s \ Tf” S Θ 1

ESQUEMA REAOQIONAL IV '-N CM O -P 09 O Pi s o © o a 1 o o •d CM φ g 09 ÍO © P ,CM d N o m _CM w o CM N - (M m 0 1 50 & a

i M o •H MV. H O M

*H A Ή CM Ai H O O I CMi| O O « tj

CM (¾ ίΛ O CM N- CM Pi w «H o o p CM o d O H CM d 1 o W M O CM o o S «| •H cu O ©1 P pj s 60 N 1 < fj H o m - < O O H 1 Ol W R p <0 cm| £ P4 1 •H O o m - 51 -

Boc-DPro-Phe-Arg^CH2OCH2 (θϊ*2 ^OHFg 21

(v) Periodinano de Dess Martin CH2012/Ae0H

Z 2

V

Bo e-DPro-Phe-Arg-GH2OCaí2 ( 0I*2 ) ^GHPg 22

(vi) HCl/Bioxano H2 Pd/G acoh/h2o I2 H-BPro-Phe-Arg-GH2OGH2(CP£)5CHP2 21

- 52 -

ESQUEMA REACOIONAL Y (SÍntese do composto 31)

Boc-Arg-OH (i) Tee-OH/wscd map/ch2ci2 I* Boc-Arg-OTce a (ii) HCl/Dioxano Boc-Phe-ONSu ch2gi2/nmm (iii) HOl/Moxano

Boe-DPro-Phe-Arg-OTce <- 26

Boc-DPro-ONSu CH2C12/HMM

Boc-Phe-Arg-OTce 2S (iv)

Zn/AcOH V Z,

Bo c-DPro-Phe-Arg-OTce 22 (v) iBuOCOCl/HMM/THP ^2 -> Boc-UPro-Phe-Arg- -GHNo GH2U2/Et20 28 (yi) HBr/EtOAc

THE ?2 y Z2 »2 (vii) hn/"" (ch2 )^ch^__72 Boc-DPro-Phe-Arg-CSHgK- ^- Boe-DBro-Phe-Arg-CHgBr

NaHOOj/m Γ(ο%)5οη 3_72 2£ - 53 - 22 (viii) HCl/Dioxano H2, Pd/C, AeOH, H20

V H-DPro-Phe-Arg-GH2N/“ (CHg 2

- 54 -

ESQUEMA REAGCIONAIt VI (SÍntese do composto 40)

Boc-Arg-CH2Br (i) Na+“CH(C02íEce)2 4 Boc-Arg-C5E2CH(C02Tce)2 12 21

(ii) Zn/AeOH

X (iii) Tolueno/Δ Z,

Boe-Arg-Gly-OH <

Bo e-Arg-CHgCH ( COgH )2 21 22 (ív)

Tce-OH/wscd map/ch2cx2

Boe-Arg5jly-0Tee (v) HCl/Bioxano

I K,

Boc-Phe-Arg-Gly-OTce 22

Boc-Phe-OPfp biea/ch2ci2 2á (vi) HCl/Bioxano Boc-HPro-OPfp ch2ci2/biea

(vii) Zn/AcOH

IL Z,

Boc-DPro-Phe-Arg-Gly-OH ^ 1'

Boe-BPro-Phe-Arg-Grly-OTce 38 21 - 55 -

(viii) 2fpQH/wscd/CH2ai2 HEro-MHBt/MEà * |2 (ix) HCl/Bioxano

Boc-BPro-Phe-Arg-Gly-Pro-NHEt -^ H-IÍPro-Phe-Arg-Gly-

H2» ?d/C -Pro-NHE

- 56

ESQUEMA REAOCIOSTAL· VII (Síntese do composto 45)

-> Boe-Chg-OH

Boc-Phg-OH

(i) H2, Rh/C

AcOH/HqO/60 psi 41 (ii) HOBt/wscd bmf/ch2ci2 HH- (iii) HCl/Dioxano H-Chg-NHg HOl

Boc-Chg-NH2 âl 42 (iv)

Boc-DPro-Phe-Arg-OH HOBt/wsed/MF 27 (v) HOl/Dioxano

H2, Pd/C AcOH/HgO

Bo c-DPro-lhe-Arg-Chg-NHg 14 -> H-DPro-Phe-Arg-CShg-NHg

- 57 -

tO CM

IO s CM 4) IS) I Φ Λ ESQUEMA REACCIONAIi YIII (-S PM χί- O ο Λ â P O fl CQ to I O X o ft CM 0 a W R o O o fCt o 1 d to (D § «Q in Φ X •P CM ti Ή 8 W v-y to d o (25 >Xj -Pmow

•H

(SI W 04) N-â41 I 0 g R 1 o

ê to XN CM W O

I M o •H As. H O

O

CM

O « X Xd w PM O CM O m tn < to x\ CM jxj O vy4) a i o> Λ PM Iofi Ríi cm| - 58 -

ESQUEMA REACCIONAIi IX (Síntese do composto 48) Z, R,

Boe-Arg-OH

Perlodinano de

Dess-Martin

CH2C12/AcOH

Boc-Arg-H .OH, cp3op2ce2i 2n/THP/Ultrassons Z,

Boc-Arg—GPgO^CP^ HCl/Moxano

Boc-Phe-ONSu hmm/ch2ci2

Z2 I OH HCl/Bioxano

Boc-DPro-Phe-Arg Cí^Cí^Ci^ OH,

Bo c-íhe-Argii-CP2CP2CP^

Boe-BPro-ONSu nmm/ch2ci2

Periodinano de Dess-Martin CH2G12/AcOHZ„ HCl/Bioxano

Boc-DPro-Phe-Arg-CPgCPgOP^ -> H-DPro-Phe-Arg-CP2GP2-

H2, Pd/C AcOH/HgO -CF„ - 59 48

Z 2 ESQUEMA REAGGIONAI) X (Síntese do composto 49)

Boc-DPro-Phe-Arg-CHgEr

Zn/AcOH -»

Z I 2

Bo c-DPro-Phe-Arg- HCl/Bioxano h2, Pd/C AcOH/H20 y H-DPro-Phe-Arg-CH_ 5 49

- 60 -

ESQUEMA REAGCIONAL ΣΙ (Síntese do composto 50) £o ©

CS lz? o l CM N -

CVJ tsi- 1 CM o o H CM 4* o w cd CM O H hrj 1 o iaO m •H s H o U o © EH d | s © o CO Ό o Μ- S H m M s P ffi pq Sf cd EH M a S3 •H *H

eii.il I o o •H d Ό 1¾ M CMw o ϋ © Ό © O O •H u %φ O O +» 0$ H -P h 1¾ o CM κ s o S3 o o o © s d •H -P s*; I © © Ã © Ό to i o

w o CMw o CQ 2 S g o © © d < h \ •d CM O H *H O d CM © W Ph o

(ii) Br9/MeOH/H9G/NaHOO

EH O

N 60 O 1¾ - 61 -

φ s CM 8 CO

CM ea EH O, 60Asά ca

N ΐ O O4 £

(ti i o u I o (¾ a> TÍ

H I£ Ê W

CSJ

ca At 2 W o g W EH 1 {23 O \ cti s a> At k CM g O o H \ O m 1 O ffl Ό EH o CM O o fcri cti CM /“X ffl O tH •H O CM 0) v-t Λ CM O O ca w CM O o ca m EH. a o N ti 0 1 "St Ϊ o& i pn a

CM m EHo CM 65J — 60 •H Ή a 4» K o -¾ «d a O I •H U Q>At

CM rl CG OS JP <0 ffl R O

•H •H

CM 1.o o ca

M EH 60 I o f§ (0 Λ O I 0 u èn A 1 O o m

60 CM U Kl — <«J I 62

(i) HCl/Bioxano

(ii) H2 Pd/C MeOH/H^O HG1

V H-BPro-Giia-Arg-G02NnBu2 50

- 63 -

ESQUEMA REACCIONAL XII (Síntese do composto 53)

Boe-Orn-OH

lBuOCOC1/HMM/TElF

Z I

-> Boc-Orn-OH

NaBH^/HgQ H2 Pd/G AcOH/H20

Bzl

Boc-OriÂ)H <-

PhOHO/GH2Cl2/Et5N/MgSO^

Boc-OrrA)H ZONSu Et3N/CH2012

NaBH4/MeOH

Bzl,Z Periodinano de Dess-Martin Bzlt2

Boc-OrrA)H -> Boc-Om-H 51

CH2C12/AcOH

NaH/THP h2g(go2bzi)2 n nHexCH(GQ2Bzl)2

HexI

NaH/lHP

nHexl/60°C nHex20(G02H)2

H2 Pd/C "HeXgCCCOgBzDg

MeOH Δ/Tolueno η

I

Hex20HG02H

RedAl/Tolueno

-> nHex2OHCH2OH

MsGl/Et-N/CH2Gl2 liBr/Acetona nHex2CH0H2Br 4 nHex2CHCH2OMs 52

Ug/W n

Hex20H0H2Br 52 51 ΒζΙ,Ζ ^ Bo c-Orn—CHpCH^ex, HGl/Bioxano Boe-Phe-ONSu ch2ci2/mm ΒζΙ,Ζ ΒζΙ,ΖBoc-Phe-OraSScHgOH^e^ j HGl/Dioxano j Bo c-DPropPhe-Orn^GH9CHnHex?<- Α2ν“ Boc-ESPro-ONSu/HMM oh2ci2

H2 Pd/C AcOH/HgO

Boc-DiPro-Phe-OrníScHg- CHnHex0 m oh5s-o

NHZ Z,

.OH

EtOH/

BoCg-EPro-Phe-Arg-— GH2CHnHex2

Periodinano de Bess-Martin ch2ci2acoh - 65 -

i z, H-BPro-Phe-Árg-CHgCBpHex,

HCl/Dioxano "2 <-Boc-EPro-Phe-Arg-CHgCH- h2 Pd/C “Hex, 21

AeOH/HgO

- 66 -

s8 ESQUEMA RBACCIONAL XIII (Síntese do composto 54) CM tSJ - o ff! o O O CV CsJ Hi 8 8 1 íio ΪΚ) CM U ff N- < •s 1 Φ Φ s Pq s 1 1 W o o EH § \ O CM s 1 ffl o O N o (¾ K\ O m p

Pq Mffí CM88S

Cvl tSJ-

Pq

OJ

I taO

Is I

σ>| CM

o CM Jf in o CM tr\ Uio

CM οα

CM H O CM V tr\

in O O CMS i o CM£ W O -¾ '-ϋA £ Io g AAa Μ O O N •H Ã P-i > - O CMw w g in *"% CM W O O CM W O ά) Φ Λ fM I O u atè si 67 2i 2 ESQUMA REACOIONAL XIY (Síntese do composto 55)

Boc-DPro-Phe-Arg-OHgEr

PhOH/KF ->

ZI 2

Bo c-EBro-Phe-Arg-OHgOPh

WB 29 HCl/Bioxano H2 Pd/C AcOH/H20 t H-IflPro-Phe-Arg-GHgOPh

á - 68 -

LISTA MS ABREVIATURAS UTILIZAMS

Abn 3-Azabiciclo/"" 3.2.2^7-nonano Ac Acetilo AcOH Ácido acético Ada Adamantilalanina Aha Ácido 2-amino-hexanóico (Nor-leucina) Boc Tércio-butiloxiearbonilo Bu Butilo Oh Cielo-hexilo Cha Cielo-hexil-alanina Chg Ciclo-hexil-glicina Cpr Oiclopropilo DIEA Di-isopropil-etilamina DM AP 4-Dimetilamino-piridina BMP Dimetilformamida EtOAc Acetato de etilo 3PAB Bombardeamento com átomos rápidos 4-Pph 4-Pluorfenil-alanina Hch Homociclo-hexil-alanina HOBt 1-Hidroxi-benzo triazo1 hple Oromatografia em fase líquida de elevado rendimento Hyp 4-Hidroxiprolina Trans-4-hidroxiprolina K Ceto isostere -COCHg- Me Metilo MeCN Acetonitrilo MeOH Metanol mple Oromatografia (preparativa) em fase líquida sob média pressão Nal Naftil-alanina NMM N-me til-morfo lina Npg Neopentilglicina Oc Octilo OH Hidroxi isostere-CHOH-

ONSu Petróleo Pfp Phe-4I02 Phg Pic Pip Py R Sar TBAP TBMS Icboc Ice Tha ÍDHP ΪΜ Q?ic tlc wscd Z Nor

Hidroxi-succinimida

Éter de petróleo 60-80°C

Pentafluorfenilo 4-N1 tro fenil- alanina

Feni1-glicina

Acido pipecolínico

Piperidilo

Piridina

Isostere-CH2- reduzido Sareosina (N-metil-glicina)

Fluoreto de tetrabutilamónio

Tercio butildimetilsililo (l-3Dimetil-l-triclorometil)-etoxi-carbonilo 2,2,2-Iricloro etilo 3,5» 5-Trimetil-hexa-hidroazepilo letra-hidro furano

Tienil-alanina

Acido 1,2,3,4-tetra-hidro-iso quinolina-3-carbo-xílieo

Cromatografia em camada fina Garbodiimida solúvel em água Benziloxicarbonilo Norarginina

AGTIYIDABE BIOIÓGIOA; UTILIZAÇÃO MÉDICA

Ensaiaram-se in vitro compostos relativamente às seguintes actividades, empregando maneiras de proceder u-suais: a) Inibição de caliereína de tecidos humanos, calicreína de plasma e triptase de células mastro que hidroUsara os substratos eromogénicos S-2266, S-2302 e 3-2266 respeeti vamente (o método empregado é adaptado do processo descrito por H.T, Johansen e col., Int. J. Tiss. Reac·, 1986, 8, 185 - 192). Realizou-se uma série de determina - 70 -

çÕes utilizando um certo número de diferentes concentrações de inibidor e pelo menos duas concentrações diferen tes de substrato. A constante de inibição Ki foi determi nada graficamente, usando a representação gráfica de Bi-χο n (M. Bixon, Biochem. J., 1953» Jjj?» 170). b) Inibição da libertação de quinina a partir de quininogénios de baixo peso molecular e de elevado peso molecular por calicreína de tecidos e de plasma respectivamente. Realizou-se uma série de determinações usando duas concentrações de substrato. Calcula-se a actividade como a quantidade de quineno libertadas por minuto, que I deter minada por ensaio de rádio-imunidade usando anticorpos policlonais. A constante de inibição Ei foi determinada graficamente utilizando uma representação gráfica de M-xon.

Iodos os compostos indicados nas Tabelas 1 a 9 têm valore res de Ei compreendidos dentro do intervalo de 10 a IO”9 M contra uma ou contra todas as enzimas no ensaio cromogénico, A actividade in vivo foi ensaiada em modelos de ensaio farmacológicos bem estabelecidos relativamente a asma com base em cobaias sensibilizadas. A escolha dos inibidores que representam os diferentes tipos químicos mostrou que eles são muito efectivos em bloquear tanto a resposta à fase aguda como a reacção da última fase, sendo a sua eficácia comparável ou superior à dos esteróides tópicos e do beta^ agonista correntemeat· utilizados na terapia da asma.

Quando os compostos de acordo com a presente invenção são utilizados como medicamentos, não há limitações críticas relativamente aos métodos de administração. Os presentes inibidores de enzimas podem ser formulados por qualquer método convencional farmacêutico, for exemplo, os presen - 71 -

Claims (1)

1. tes inibidores de enzimas podem ser administrados por qualquer maneira convencional, incluindo injeeção intravenosa, in jecção intramuscular, instilação, administração oral, inalação respiratória, rinenquise e tratamento externo da pele. Em bora não haja limitações críticas quanto à dosagem de adminis tração, a dosagem apropriada está compreendida entre 1 e 1000 mg/dia/pessoa. REIVINDICAÇÕES - la - Processo para a preparação de composições farmacêuticas contendo inibidores de quininogenase que conveniente mente não exoedem o tamanho de um hexapáptido representado pe la fórmula R1

   na qual A e B significam aminoaoilo (incluindo um análogo de aminoaci-lo), igual ou diferente que formam um grupo de um dipeptido, possuindo o aminoácido de A um grupo terminal e sendo qualquer resíduo de aminoácido ou de iminoácido (mas preferivelmente com a configuração D) e sendo B um resíduo de um aminoácido li - 72 -

   pofílico de configaração B ou I mas não pro lina nem um aná logo de pro lina, ou um análogo eonformaeional do mencionado grupo de dipéptido em que a ligação de peptido e substi tuída por -CH2-HH- (Mreduzidatt), -CH(OH)-CH2- (Midroxitt)# -CO-CHg- (*ceto ”), -CH2-CH2 ("hidrocarboneto”) ou outra con formação mímica de ligação de peptido; e em t

   R a cadeia lateral Γ é a de um aminoácido básico ou análogo de aminoácido básico (preferivelmente com a configuração li) e R e H ou alquilo inferior em C^-C^ ou ou a ligação de peptido compreendendo -N(R)- e substituída originando uma mímica eonformaeional como se referiu acima; significa um grupo que intenaifica a ligação ou activa 0 carbonilo preferivelmente escolhido de H (quando A ou B tem de ser eiclo-hexilalanina, preferivelmente B se estiver em A ou 1 se estiver em B) ou alquilo em C^-C2q ou fluoral quilo em aZ-°12’ oxometileno substituido; tiometileno; sul foximetileno; sulfonilmetileno; aminometileno; hidrazinome tileno; -CHg-Het (em que Het significa um heterociclo subs tituido ou não substituido); amino substituído (mas quando 0 composto resultante e uma alquilamida secundária, B não deve ser fenilalanina); um grupo aminoácido ou 0 seu ester ou amida, uma amida secundária ou uma amida primária de um ácido carboxílico, quando B deve ser ciclo-hexilalanina ou adamantilalanina ou outro aminoácido não aromático lipofí- - 73 -

   lico volumoso (não Ala Leu Ile Vai Nva Met Nle Phe Tyr Trp Nal (1)); carboxamida terciária; grupo carboxialquilo ou o seu ester ou amida ou derivado de aminoacilo, caracterizado por se incorporar uma quantidade fisiologicamente activa de pelo menos um inibidor de quininogenase acima citado, como ingrediente activo, cerca de 1 mg a 1000 mg, numa mistura veicular farmacologicamente aeeitável. - 2* - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte rizado por, na formula referida, A ser escolhido de iminoáci-dos (por exemplo, D-prolina ou um análogo de prolina, por e-xemplo, ácido pipecolínico, ácido azetidinocarboxílieo); ami-noácidos lipofílicos (por exemplo, BPhe, DCha, DChg); aminoá-cidos fortemente básicos (por exemplo, B-Arg ou um homólogo ou análogo de Arg, por exemplo, amidino- ou guanidinofenilala nina; ou os seus derivados de N-alquilo ou C d-alquilo (incluindo benzilo)· - 3* - Processo de acordo com as reivindicações 1 ou 2, caracterizado por B ser escolhido de I*-Phe, L-Cha, L-<*Nal, L-Ial, L-(4F)Phe, L-(NMe)Phe ou outras fenilalaninas substituídas; ou os seus derivados de N-alquilo ou de CCX-alquilo (incluindo benzilo). - 4& - Processo de acordo com as reivindicações 1, 2 ou 3, caracterizado por R^ ser escolhido de 3-guanidinopropilo ou outro grupo guanidino alquilo (ou um grupo amidino-alquilo ou aminoalquilo) e também guanidino ou amidino-benzilo subati tuídos na posição para ou na posição meta ou formas protegidas * destes grupos, sendo os átomos de azoto básicos opcionalmente 74 alquilados (Me, Et ou outro) - 5* - Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado por, sujeita às restrições relativa mente à natureza de Y mencionadas na reivindicação 1, a escolha de Y e tal que Y* H ou alquilo incluindo fluoralquilo; Y» -CH2Q em que Q « -OR2 ou -SR2 ou -SOR2 ou -SOgR2 ou -ΝΗΕΓ ou -N ou \ -!) R" em que R2, e R^ são como se define abaixo, Y = -ch2 CHR CON ou \ R- -0H2 CHR6 00-Γ) em que R^, R·* e R6 são como se define abaixo, Y = aminoacilo ou um grupo que forma uma amida ou hidrazida substituída, ou Y = grupo que forma uma Of-cetoamida-COR^ ou -GO-d) ou -C01Í R' e em que, além disso, - 75 -

   R2 » alquilo ou alquilo substituído incluindo arilo ou arilal quilo ou -CHgR'* effl que B? « fluoralquilo; R^· e são iguais ou diferentes mas não são ambos hidrogénio * H ou alquilo em C^-CgQ (que pode ser ainda substituído), a-cilo ou alquil-sulfonilo; -5) e um anel heterocíclico (D = azoto ou carbono no Grupo IV e N nos Grupos VI e X), opcionalmente não saturado e opcional mente com outros heteroátomos e substituintes; = hidrogénio, alquilo, hidroxialquilo, aminoalquilo, alqui laminocarbonilo; e Q R * -RHg no estado livre ou alquilo ou aminoacilo. — 6- — Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4, earaeterizado por a escolha de Ϊ, sujeita às restrições referidas na reivindicação 1, se pode fazer entre Grupo I Y * H; alquilo em C-j- C20 incluindo alquilo ramifi eado; arilalquilo; ou cie lo alquilo (C^-C^); perf luoralquilo ou alquilo em C2-°12 parcialmente fluorado; /“por exemplo, Y* - Me; -CH(OH2CH2CH2CH3)2; -CH(aH2CH2CH2CH3)CH2-ciclo-hexilo; -CSHgCPgCPgCPj 5 -ePgOHgCHgOH^; Grupo II Y * -CHgQR em que Q = 0, S, SO, SOg, HH e em qae R2 = alquilo, alquilo ramificado ou acilo em C^-C^; ou ciclo alquilo em °3-°20! ou arilo ou arilalquilo; ou -CHg-R^ em que R^ * perfluoralquilo ou alquilo parcialmente fluorado em C^--012 ramificado ou não ramificado; Grupo III - 76 Υ

   R4

   -CH2N

   R 5 4 5 w em que R e R sao iguais ou diferentes e significam alquilo, alquilo ramificado, cicloalquilo, acilo, alquilsulfonilo, car boxialquilo (o grupo carboxi pode ser ainda derivatizado para formar um éster ou uma amida com um aminoácido ou um dipépti-do), carbamoílo, sulfamoílo, N-dialquilamino, arilalquilo, ha logenoalquilo incluindo fluoralquilo, cianoalquilo, alcoxial-quilo, hidroxialquilo, mercaptoalquilo, aminoalquilo e os seus derivados por exemplo, ésteres, amidas e tioésteres; ou um dos símbolos ou * hidrogénio; Grupo IV Y « -CH2 - D) em que D = azoto ou carbono e d) é um anel heterocíclico satu rado ou não, saturado ou um sistema de anel bicíclico, que é pentagonal, hexagonal, heptagonal ou octogonal, em que pode haver outros heteroátomos (N, S, 0) e os átomos de carbono ou de azoto podem ser opcionalmente substituídos por alquilo, al quilo ramificado, cicloalquilo, carboxialquilo, carboxi (ligado a carbono), amino, alcoxi, alcoximetilo ou (carbono) como carbonilo ou outros grupos benéficos para a interacção com a enzima: Grupo V Y = -CH2OH(R6)CONíAt5 em que R e R^ sao como se definiu no Grupo III e R » hidrogénio, alquilo inferior, alquilo ramificado, cicloalquilo, hi droxialquilo, aminoalquilo, alquilaminocarbonilo; - 77 -

   Grupo VI ϊ = -ch2ch(r6)cob) era que R^ é como se definiu no Grupo V e -3^ é como se definiu no Grupo IV (mas com B * R); Grupo VII Ϊ * um resíduo de aminoácido ou qualquer araida (secundária ou terciária) ou éster daquele resíduo, com a con figuração 1 ou D; os resíduos preferidos são de aminoácidos lipofílicos, por exemplo norleucina, eiclo-hexilalanina, homo ciclo-hexilalanina, cielo-hexilglicina, t-butilglicina; Grupo VIII

   I em que R7 = H (quando no entanto B não é fenilalanina a não ser que O R seja carboxialquilo ou earboxialquilo derivatizado ), ou al quilo, alquilo em C-j-C·^ ramiíica(io» eicloalquilo, carboxialquilo em C-j-C20 ou bis-(carboxil)-alquilo, que podem ser deri vatizados no grupo carboxilo para formar uma amida, por exemplo, com um aminoáeido (o preferido é arginina) ou uma amina substituída; iP-dialquilamino; R*-alquilamino; e 8 7 R * R sendo igual ou diferente mas excluindo H; Grupo IX Ϊ * -CO-R^ mas so se B for um aminoáeido lipofíli co não aromático volumoso ou o seu derivado de Ntf-alquilo em C^-0^ (por exemplo, oielo-hexilalanina mas excluindo Ala, Leu, - 78 -

   Ile, Vai, Nva, Met, Nle, Phe, Tyr, Irp, Nal(l) e os seus deri vados de N-metilo) em que B? a NH2, Ν’-alquilamino (em que os grupos alquilo podem ser ramificados e incluem cicloalquilo); um resíduo de aminoácido; Grupo X Y * -C0-£^ em que como se definiu no Grupo IV (mas D * N)í Gruno XI Y = -CO-HR4R5 em que 4 c M Έ7 e ír são como se definiu no Grupo III mas não representam H. - 7* - Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado por se incorporar um dos compostos de fórmula geral (I) com uma das seguintes fórmulas a) aldeídos £M+H_7* Classe 5 Me-DPhe Cha Arg-H 473 I b) análogos de tiometileno e de sulfonetileno Z"M+H_7+ Classe 17 F S O Phe Arg 0H2S(CH2)4Me 519 II 60 H-DPro Phe Arg CH2SnBu 505 II 61 H-DPro Phe BLArg CH2S02nBu 537 II - 79 - ο) éteres jTm+eJ* Classe 23 H-DPro Phe Arg CH2OCH2(OP2)5CHP2 647 II 62 H— Pro Phe Arg OH2OCH2GP5 515 II 63 Boc-DPro lhe DL irg CH2OCH2CP5 615 II 64 H-DPro Phe DLArg CH20GH2GP3 515 II 65 H-DPro Cha DLArg CH2OCH2CP3 521 II 66 H-DPro Phe Arg 0H20CH(Me)CF2GP20F3 629 II 67 H-DPro Phe Arg CH2OGH2CP3 515 II 68 H-DOha Phe Arg CH2OCH2CP3 571 II 69 H-DArg Phe Arg GH2OOH2CP3 574 II 70 H-DChg Phe Arg CH2OCH2CP3 557 II 54 H-DPro Phe Arg GH20(CH2)50H3 517 II 55 H-DPro Phe Arg CHgOPh 509 II d) aminometileno e análogos fmnj* Classe 31 H-DPro Phe Arg CH2N/"(CH2)5Me_72 600 III 71 H-DPro Phe DArg OH2(RS)Tha 556 IV 72 H-DPro Phe Arg GH2(RS)Tha 556 IV 73 H-DPro Phe Arg CH2 l-Pip-3-(HS)C02Bt 572 IV 74 H-DPro Phe DLArg CH2 l-Pip-3-(RS)CH2- 0(GH2)3Me 586 IV 75 H-Pro Phe DLArg GH2 l-Pip-3-(RS)CH2HSt2 585 IV 76 H-DPro Phe DLArg CH2 l-Pip-3-G0NBt2 599 IV 77 H-DPro Phe DLArg GH2 l-Pip-3-(RS)COMHnBu 599 IV 73 H-DPro Phe DLArg CH2 l-Pip-3-(!S)C0H(nBu)2 655 IV - 80

   79 H-DPro Phe DDArg CH2 l-Pip-4-C1*-Pip) 583 IY 80 H-DPro Phe Arg CH2(Me )AhaMnBu 615 IY 81 H-DPro Phe Arg CH2-Abn 540 IV 82 H-DPro Phe Arg CH2-Hyp(OnBu)NHEt 629 IV 83 H-DPro Phe Arg CH2-Sar Pro HHEt 628 III 84 H-DPro Phe Arg OH2-tHyp(OnBa )¾¾ 644 IV 85 H-DPro Phe DDArg CH2Pic HBt2 641 IV 86 H-DPro Phe DDArg CH2tDHyp (GnBu )¾)¾ 644 IV 87 H-DPro Phe DDArg CH2Pco-C0NEt2 599.9 IV 88 H-DPro Phe DDArg CH2l-Pip-3- (HS )e02H 544 IV 89 H-DPro Phe Arg CH21-Pip-3(HS )CH2CONEt2 613 IV 90 H-DPro Phe Arg CH2N(OH2Ch)(OH2)5Me 612 III 91 H-DPro Phe DDArg GH2F(Oo)2 657 III 92 H-DPro Phe Arg 0H2H(Bt)Gh 542 III 93 H-DPro Phe Arg CH2H(Me )(CH2 517 III 94 H-DPro Phe Arg OHgN (Me )nBu 502 III 95 H-DPro Phe DDArg CHgífBUg 544 III 96 H-DPro Phe DDArg CH2N/“nBu__7S02nBa 594 III 97 H-DPro Phe DDArg CH2N/"nBu_7 (CH2)5CONH2 573 III 93 H-DPro Phe DDArg CH2N/"nHex_7(CH2)?ΝΗ2 629.5 III 99 H-DPro Phe DDArg CH2N/”nHex_7 (CH2)5HH2 601 III ΐοο H-DPro Phe DDArg CH2H/”nHex_7 ( CH2 )3M2 573 III 101 H-DPro Phe DDArg GH2H/"nBu_7(GH2)4Ph 620 III 102 H-DPro Phe DDArg CH2H/”nHexJ7 ( CH2 )6CONH2 643 III 103 H-DPro Phe DDArg GR2NfnHexJr(GE2 )6HH2 615 III 104 H-DPro Phe DDArg CH2H'/-nHex_7 (OHg )γΟΗ 630 III 105 H-DPro Phe DDArg CH2N/"nHex_7 (0H2 ^NHAe 671 III - 81 -

   106 H-DPro Phe DLArg CH2N/"nHex-7(CH2)6OONHEt 671 III 107 H-DPro Phe DLArg CH2N/“%ex_7(CH2)6C02Me 658 III 108 H-DPro Phe DLArg CH2N/”nHex_7 (0¾ )6C02H 644 III 109 H-DPro Phe DLArg CH2N/“nBu_7(GH2^3C0]!ÍEt2 629 III 110 H-DPro Phe DLArg CH2l/“nBu7(CH2)jC0NHEt 601 III e) análogos contendo ceto-isoesteres /“m+h_7+ Classe 40 H-DPro Phe DLArgfey Pro-NHEt 599 VI 111 H-DPro Phe Arg-Gly Pro-HHEt 599 VI 112 H-DPro Phe Arg-Gly Arg-HH2 530 V 113 H-DPro Phe DLArg—Gly Ala-NH2 545 V 114 H-DPro Phe DLArgfey Aha-HH2 587 V 115 H-DPro Phe DLArg—Gly Aha-DHnBu 643 V f) análogos do substrato CM+Hj+ Classe 45 H-DPro Phe Arg Chg-NH2 557 VII 116 CPr-00 Phe Arg Chg-NH2 X VII 117 MeSOgDPro Phe Arg Chg-HHg 635 VII 118 MeOO DPro Phe Arg Chg-NHg 599 VII 119 H-DArg Phe Arg Ser-NH2 X VII 120 H-DOha Phe Arg Ser-NHg X VII 121 H-DPhe Phe Arg Ser-HH2 X VII 122 H-DPic Phe Arg Ser-NH2 X VII 123 H-DPic Phe Arg Chg-NH2 X VII 124 H-DPro Phe Arg Ser-NH2 X VII - 82 -

   125 H-DPro Cha Arg Ser-NHg VII 126 H-DPro Gha Arg G-ly-NH^ * VII 127 H-DPro Phe Arg Ser-Arg-NHg X VII 128 H-DPro Phe Arg Lys-NH^ X VII 129 H-DPro Phe Arg Aha-NHg X VII 130 H-DPro Phe Arg Phe-NH2 565 VII 131 H-DPro Phe Arg Leu-NHg 531 VII 132 H-DPro Phe Arg Ile-NHg 531 VII 133 H-DPro Nal Arg Ser-NH2 X VII 134 H-DPro Phe Arg DAha-NHg 531 VII 135 H-DPro Phe Arg Aha-NH(CH2)3Me 587 VII 136 H-DPro Phe Arg Nleucinol 518 VII 137 H-DPro Phe Arg SerOnBu. NH2 561 VII 138 H-DPro Phe Arg Cha-NH2 571 VII 139 H-DPro Phe Arg Ada-NHg 623 VII 140 H-DPro Phe Arg Hch-NH2 585 VII 141 H-DPro Nal Arg Cha-NH2 X VII 142 H-DPro Cha Arg Cha-NH2 X VII 143 H-DPro PhepNOgArg Ser-NH2 X VII 144 H-DPro Nal Arg Ile-NHg X VII 145 H-DPro Phe Arg Ile Pro-NH2 X VII 146 H-DPro Phe Arg AhaPro-NH2 X VII 147 H-DPro Nal Arg Aha^NHg X VII 148 H-DPro Cha Arg Npg-NH2 X VII 149 H-DPro Cha Arg Hch-NH2 X VII 150 H-DPro Nal Arg Hch-NH2 X VII 151 H-DPro Phe Arg Npg-NH2 545 VII - 83 -

   152 H-DPro Phe Arg Chg-l-Pip 625 VII 153 H-DPro Phe Arg Chg-SIH(OH2)5Me 641 VII 154 H-DPro 4-fph Arg Ghg-M2 575 VII * Análise de amino ácidos satisfatoriamente obtidos g) amidas Cm+h_7+ Classe 47 H-DPro Phe Arg N/"(CH2)5Me_7(0H2)3Ch 626 VIII 155 H-DPro Phe Arg N(Me)nBu 488 VIII 156 H-DPro Phe Arg I!H(CH2)3CO Arg-MÍ2 * VIII 157 H-DPro Phe Arg IH(CH2)3IH2 475 VIII 158 Ψ a 8 o Phe Arg HH(CH2)4CO Arg-NH2 * VIII 159 H-DPro Phe Arg HH(OH2)4NH2 VIII 160 H-Pro Phe Arg HH(GH2)5CO Arg-MHr, 687 VIII 161 H-DPro Phe Arg NH(OH2)5M2 503 VIII 162 H-DPro Phe Arg NH(GH2)6GO Arg-HH2 701 VIII 163 H-DPro Phe Arg HH(CH2)7CO Arg-NH2 715 VIII 164 H-DPro Phe Arg M(CH2)7CO!ffi(CH2)3Me 615 VIII 165 H-DPro Phe Arg NH(CH2)7NHAc 573 VIII 166 H-DPro Phe Arg HH(CH2)7NH2 531 VIII 167 H-DPro Phe Arg HH(CH2)7C01!TH2 559 VIII 168 H-DPro Phe Arg NH(GH2)7GO-Gly Gly Arg -nh2 829 VIII 169 H-DPro Phe Arg NH(CH2)7CO-Gly Arg-NH2 772 VIII 170 H-DPro· -Phe Arg UH(CH2)7CO-Gly Gly-Gly Arg-MHg 886 VIII 171 H-DPro Phe Arg H/~nHex_72 586 VIII - 84 -

   172 H-DPro Cha Arg NHCH2Ch 520 VIII 173 H-DPro UUai Arg HHCHgCh 564 VIII 174 H-DPro P»Nal Arg NHCH2Ch 564 VIII 175 H-DPro His Arg HHGHgCh 504 VIII 176 H-DPro(4Me)Phe Arg HHCHgCh 528 VIII 177 H-DPro Phe Nar mCH2Ch 500 VIII 178 H-DPic Phe Arg NHCHgCh 528 VIII 179 H-DTic Phe Arg HHCHgCh 576 VIII 180 H-DThi Phe Arg IHCHgCh 570 VIII 181 nBuDPro Phe Arg NHCH2Gh 570 VIII * Análise de amino ácidos satisfatoriamente obtidos h) cetonas fjMSj* Classe 49 H-DPro Phe Arg CH^ 417 I 48 H-DPro Phe Arg (CP2)2CP3 36* I 53 H-DPro Phe ArgCH2CH/”nHex-72 3636* I X* ião moleculado não detectado i) o<-cetoamidas £m+h_7+ Classe 11 H-DPro Phe DD Dys (m£nSa.J2 530 XI 50 H-DPro Cha Dl Arg CON/~nBu_72 *** XI *36* ΕΚ+Η_7+ Indisponível. A requerente reivindica a prioridade do pedido de - 85 - patente britânico apresentado em 7 de Setembro de 1990, sob 2P 9019558.7. lisboa, 6 de Setembro de 1991

   - 86 -