KR20190072530A - 리신 진지파인의 케톤 억제제 - Google Patents

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halogen
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안드레이 더블유. 콘라디
로버트 에이. 주니어 갈렘모
스티븐 에스. 도미니
케이시 씨. 린치
레슬리 제이. 홀싱어
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코텍자임, 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 본원에 기술된 바와 같은 화학식 (I)에 따른 화합물, 및 박테리아 포르피로모나스 진지발리스로부터의 리신 진지파인 프로테아제(Kgp)을 억제하는 이들의 용도에 관한 것이다. 또한, 진지파인 활성 프로브 화합물이 기술되며, 진지파인 활성을 검정하는 방법 또한 기재되어 있으며, 뿐만 아니라 알츠하이머병과 같은 뇌 장애를 포함하는 P. 진지발리스 감염과 관련된 장애의 치료를 위한 방법이 기술되어 있다.

Description

리신 진지파인의 케톤 억제제
관련 출원의 상호참조
본 출원은 2016년 9월 16일자 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/395,938 및 2017년 2월 15일자 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/459,456의 우선권을 주장하고, 상기 출원은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
박테리아 포르피로모나스 진지발리스( Porphyromonas gingivalis )로의 감염은 치주병, 알츠하이머 및 다른 뇌 장애, 심혈관 질환, 당뇨병, 암, 간 질환, 신장 질환, 조산, 관절염, 폐렴 및 기타 장애의 발병과 관련이 있다. P. 진지발리스는, 구강을 감염시키고, 관상 동맥, 대동맥, 태반 조직, 뇌, 신장, 및 간으로 전신 이동하는 것으로 알려진 혐기성 비당분해성 그람-음성 로드 박테리아(anaerobic asaccharolytic gram-negative rod bacterium)이다. 상기 박테리아는 또한 암 조직에서 확인되었고, 진지파인이 불멸화(immortalization) 및 전이를 촉발시킬 수 있는 메카니즘이 제시되었다(문헌 [Gandhimadhi, et al. Journal of Indian Society of Periodontology. 2010;14(2):114-120; Liao, et al., Med Hypotheses, 2009. 72(6): 732-5; Byrne, et al., Oral Microbiol Immunol, 2009. 24(6): 469-77; Mahendra, et al., J Maxillofac Oral Surg, 2009. 8(2): 108-13; Stelzel, et al., J Periodontol, 2002. 73(8): 868-70; Katz, et al., Journal of Dental Research, 2009. 88(6): 575-578; Poole, et al., J Alzheimers Dis, 2015, 43(1): 67-80; Ishikawa, et al., Biochim Biophys Acta, 2013. 1832(12): 2035-2043; Inaba, et al., Cellular Microbiology, 2014. 16(1): 131-145] 참조).
P. 진지발리스는 아르기닌 진지파인 A(RgpA), 아르기닌 진지파인 B(RgpB) 및 리신 진지파인(Kgp)을 포함하여 진지파인이라 불리는 프로테아제를 생성시킨다. 진지파인은 유기체의 생존 및 독성(virulence)을 포함하는 유기체의 많은 기능에 기여한다. 진지파인은 분비되거나, P. 진지발리스의 외막 표면으로 이동되거나, 박테리아에 의해 외막 소포에 방출될 수 있다. 진지파인은 많은 유형의 세포에서 세포골격 붕괴 및 아폽토시스를 초래할 수 있는 광범위한 단백질(예를 들어, 면역글로불린, 프로테이나제 억제제, 액틴, 및 콜라겐)을 분해하며, 진지파인의 억제는 P. 진지발리스-유도된 세포 사멸을 예방하는 것으로 밝혀졌다. (문헌 [Travis, et al., Adv Exp Med Biol, 2000. 477: 455-65; Sheets, et al., Infect Immun , 2005. 73(3): 1543-52; Sheets, et al., Infect Immun , 2006. 74(10): 5667-78; Stathopoulou, et al., BMC Microbiol , 2009. 9: 107] 참조). 진지파인 활성의 억제 및 진지파인 활성 및 P. 진지발리스 감염과 관련된 질환의 치료를 위한 신규한 화합물이 필요하다. 또한, 진지파인 활성의 검출 및 정량화를 위한 화합물이 P. 진지발리스로 감염된 대상체를 효과적으로 진단하고, 새로운 치료제를 확인하고, 진지파인-매개된 질환을 치료하기 위한 새로운 방법을 개발하기 위해 필요하다. 본 발명은 이러한 요구를 해결한다.
제1 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 I에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00001
상기 식에서,
A는 -CH2- 및 -O-로부터 선택되며;
R1a 및 R1b는 수소, C1-4　알킬, 및 아민 보호기로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R2a 및 R2b는 수소, 할로겐, C1-4　할로알킬, 및 C1-4　할로알콕시로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R3은 C3-8　사이클로알킬, C3-8　알킬, 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴, C6-10 아릴, 5 내지 12 원의 헤테로아릴 및 리포터 모이어티로부터 선택되며, 여기에서, R3은 하나 이상의 R3a 치환기로 임의적으로 치환되며;
각각의 R3a는 할로겐, -CN, -NO2, -N3, -OH, C1-4　알킬, C1-4　할로알킬, C1-4　알콕시, C1-4　할로알콕시, -N(Rc)2, -N+(Rb)3, -(CH2)kC(O)Rb, -NRc(CH2)uC(O)Rb, -O(CH2)uC(O)Rb, -(CH2)kCONRcRc, -(CH2)kNRcC(O)Rb, -NRc(CH2)uCONRcRc, -NRc(CH2)uNRcC-(O)Rb, -O(CH2)uCONRcRc 및 -O(CH2)uNRcC(O)Rb, 및 임의적으로 치환된 트리아졸릴로부터독립적으로 선택되며;
각각의 Rb는 C1-4　알킬, C1-4　할로알킬 및 C1-4　듀테로알킬로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 Rc는 수소 및 C1-8　알킬로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 아래첨자 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 아래첨자 u는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되며;
R4는 수소 및 C1-4　알킬로부터 선택되며;
R5는 -CH2R5a, -CHS(O)(R5b)2 및 C1-6　할로알킬로부터 선택되며;
R5a는 -O-R6, -S-R7, -SO-R7,-SO2-R7, -N(R8)2, 5 내지 12 원의 헤테로아릴 및 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴로부터 선택되며,
여기에서, 5 내지 12 원의 헤테로아릴은 할로겐, C1-3　알킬 및 C1-3　할로알킬로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 구성원으로 임의적으로 치환되며,
3 내지 12 원의 헤테로사이클릴은 옥소, 할로겐, C1-3　알킬, 및 C1-3　할로알킬로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 구성원으로 임의적으로 치환되며;
각각의 R5b는 독립적으로 선택된 C1-6　알킬이며;
R6 및 R7은 페닐, C1-6　알킬, C1-6　할로알킬 및 5 내지 12 원의 헤테로아릴로부터 선택되며,
여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환되며,
여기에서, 5 내지 12 원의 헤테로아릴은 하나 이상의 할로겐, C1-3　알킬 또는 C1-3　할로알킬로 임의적으로 치환되며;
각각의 R8은 독립적으로 선택된 C1-6　알킬이며;
R5는 켄칭 모이어티 R9를 임의적으로 포함하며;
단 R5는 2,3,5,6-테트라플루오로페녹시메틸이 아니다.
관련 구체예에서, 본 발명은 본 발명의 하나 이상의 화합물 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 P. 진지발리스 감염과 관련된 질병 또는 질환을 치료하기 위한 방법을 제공한다. 상기 방법은 본 발명의 유효량의 화합물 또는 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 뇌 장애(예를 들어, 알츠하이머병), 치주병, 당뇨병, 심혈관 질환, 관절염, 류마티스 관절염, 골관절염, 감염성 관절염, 건선 관절염, 조산 위험 증가, 폐렴, 암, 신장 질환, 간 질환, 망막 장애 및 녹내장.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 리포터 모이어티 및 진지파인-반응성 모이어티를 포함하는 화합물뿐만 아니라 생물학적 샘플 중 진지파인 활성을 검출하기 위한 방법을 제공한다. 방법은 진지파인이 화합물의 진지파인 반응성 모이어티와 반응하기에 충분한 조건하에서 상기 기술된 바와 같은 화합물 및 생물학적 샘플을 포함하는 혼합물을 형성시키는 단계; 혼합물 중 화합물의 리포터 모이어티를 검출하는 단계; 및 리포터 모이어티가 검출되는 경우 진지파인이 생물학적 샘플에 존재함을 결정하는 단계를 포함한다.
도 1은 본 발명의 Kgp 억제제가 P. 진지발리스-유도된 세포 사멸로부터 SH-SY5Y 신경모세포종 세포를 보호함을 보여준다.
도 2는 본 발명의 Kgp 억제제가 P. 진지발리스의 주요 생존-향상 메카니즘인 철 포착 및 헤모글로빈 분해를 예방함을 보여준다.
도 3은 본 발명의 화합물이 마우스에서 증가된 혈장 농도를 제공함을 보여준다.
도 4는 본 발명의 화합물이 마우스에서 증가된 자유 뇌 농도를 제공함을 보여준다.
도 5a는 본 발명의 할성 프로브가 박테리아 스미어(smear)의 특성규명에 유용함을 보여준다. 활성 프로브(15a 또는 38a)에 노출된 P. 진지발리스의 박테리아 스미어는 형광 현미경검사에 의해 검출될 수 있다. 신호는 Kgp의 존재에 의존적이며, Kgp 유전자 녹아웃된 P. 진지발리스 W83 균주의 박테리아 스미어에서는 검출되지 않는다.
도 5b는 본 발명의 활성 프로브가 조직 슬라이스의 특성규명에 유용함을 보여준다. 치주병을 앓는 환자로부터의 치은 조직 슬라이스는 면역형광 제제 CAB102, 즉, Kgp에 대한 폴리클로날 항체로 염색된다. 별도의 순차적 조직 절편은 활성 프로브(15a)와의 인큐베이션 후 형광 신호를 산출한다.
도 6a는 P. 진지발리스 W83에 의함 감염의 존재 또는 부재하에 인간 Jurkat 세포로부터의 샘플을 함유하는 SDS-PAGE 겔의 형광 이미지를 보여준다. 샘플을 SDS-PAGE 전에 형광 프로브 15a 또는 비형광 Kgp 억제제 화합물 73( N-[7-아미노-2-옥소-1-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)헵탄-3-일]사이클로펜탄카르복사미드)과 반응시켰다. 레인 1: 세포 단독. 레인 2: 세포 + 프로브 15a. 레인 3: 세포 + 프로브 15a, P. 진지발리스 감염 다중도(MOI):100. 레인 4: 세포 + 화합물 73 이어서 프로브 15a와의 사전-인큐베이션, MOI:100. 레인 5: 세포 + 프로브 15a, MOI: 10. 레인 6: 세포 + 화합물 73 이어서 프로브 15a와의 사전-인큐베이션, MOI:10. 레인 7: 정제된 Kgp + 프로브 15a. 레인 8: 정제된 Kgp + 프로브 15a 부재의 세포용해 완충액.
도 6b는 적정량의 P. 진지발리스 W83을 함유하는 SDS-PAGE 겔의 형광 이미지를 보여준다. 레인 A: 107 콜로니 형성 단위(CFU); 레인 B: 106 CFU; 레인 C: 105 CFU; 레인 D: 104 CFU; 레인 E: 103 CFU; 레인 F: 102 CFU: 10; 레인 G: 정제된 Kgp. 적정된 형광 데이터를 사용하여 생물학적 샘플 중 P. 진지발리스 감염을 정량화시킬 수 있다.
도 7은 인간 대상체의 구강으로부터 획득하고, 활성 프로브 15a와 인큐베이션하고, 활성 프로브 결합에 대해 분석한 협측 세포의 형광 현미경 이미지를 보여준다. 활성 프로브 15a로의 반점 염색은 일부 세포 중 Kgp의 존재를 나타낸다. 왼쪽 이미지는 이러한 반점 염색을 보여주는 반면, 오른쪽 패널의 세포는 프로브로 염색되지 않으며, P. 진지발리스로 감염되지 않은 것으로 추정된 세포를 보여준다. 청색 염료는 세포 핵을 위한 DAPI 염료이다.
도 8은 바이오틴 활성 프로브 51a가 표지된 Kgp의 스트렙타비딘 비드로의 후속 결합을 위한 P. 진지발리스 용해물 중 Kgp를 공유적으로 표지시키는데 사용될 수 있음을 보여준다. 비드로부터의 방출 후, 표지된 Kgp를 SDS-PAGE에 의해 분석하고, 폴리클로날 Kgp 항체 CAB102를 사용하여 웨스턴 블롯에서 검출하였다. Kgp를 이러한 방법을 통해 아래로 진행시키고, 적어도 106 CFU의 P. 진지발리스로부터 검출되었다. 레인 1: 정제된 Kgp. 레인 2: P. 진지발리스 W83, 102 CFU. 레인 3: W83, 104 CFU. 레인 4: W83, 106 CFU. 레인 5: Kgp 녹아웃 균주, 106 CFU. 레인 6: 프로브 51a 단독.
도 9a는 프로브 화합물 71과의 인큐베이션 후 SDS-PAGE에 의한 P. 진지발리스 W83 용해물 및 P. 진지발리스 Kgp 녹아웃 균주 용해물의 시각화를 보여준다.
도 9b는 CAB102 항체-컨쥬게이션된 비드와의 사전-인큐베이션된 또는 그렇지 않은 프로브 화합물 71과의 인큐베이션 후 SDS-PAGE에 의한 P. 진지발리스 용해물의 시각화를 보여준다.
도 9c는 SDS-PAGE 및 Cy5 신호 시각화에 의한 표지된 P. 진지발리스 W83 용해물의 분석(상단 패널) 또는 CAB102 일차 항체에 의한 검출 및 화학발광 검출을 이용한 웨스턴 블롯(하단 패널)을 보여준다.
도 10은 화합물 1로의 처리되거나 처리되지 않은, P. 진지발리스로 감염된 마우스에서 치조골 소실을 보여준다.
도 11은 화합물 1로의 처리시 감염된 마우스의 뇌 조직에서 P. 진지발리스 DNA의 감소를 보여준다.
도 12는 화합물 1로의 처리시 감염된 마우스의 뇌 조직에서 해마 뉴런 소실 감소를 보여준다.
I. 일반적 사항
본 발명은 P. 진지발리스 리신 진지파인(Kgp)을 억제하는 강력한 화합물을 제공한다. 본 발명은 특정 억제제가 카텝신과 같은 내인성 프로테아제 대비 Kgp에 대한 증가된 선택성을 나타내며, 또한, 이전에 공지된 화합물에 필적하는 활성을 나타내는 놀라운 발견에 어느 정도 기반을 두고 있다. 게다가, 본 발명의 화합물은 이전에 공지된 화합물과 비교할 경우 개선된 약물동태 특성을 제공한다. 화합물은 알츠하이머병과 같은 연령 관련 질환을 포함하는 P. 진지발리스 감염과 관련된 다양한 질환에서 세포 사멸, 염증 및 다른 병리학적 과정을 예방하는데 사용될 수 있다.
II. 정의
본원에서 사용된되는 용어 "포르피로모나스 진지발리스" 및 "P. 진지발리스"는 치주염 및 관련 질환의 발병기전에 주요 원인이 되는 미생물로서 인식되는 그람-네거티브 비당분해성 박테리아를 지칭한다. "P. 진지발리스 감염"은 잇몸 또는 뇌와 같은 신체 조직에서 P. 진지발리스의 침습 및 집락형성을 지칭한다. P. 진지발리스 감염은 종종 후속적인 조직 손상 및 질환을 특징으로 한다.
본원에서 사용되는 용어 "진지파인"은 트립신-유사 특이성(즉, Lys-Xaa 및 Arg-Xaa)을 지니는 P. 진지발리스에 의해 발현되는 시스테인 프로테아제를 지칭한다. 진지파인은 P. 진지발리스의 주요 발병 인자로서 인식되며, 박테리아 부착 및 집락형성, 영양분 획득, 숙주 방어의 도피, 및 조직 침습에 기여한다. 용어 "아르기닌 진지파인" 및 "Rap"는 상호교환적으로 사용되어 EC 번호 EC 3.4.22.37 하에 분류된 P. 진지발리스 아르기닌-특이적 진지파인 RgpA 및 RgpB를 나타낸다. rgpA 및 rgpB 유전자-번역 생성물 RgpA 및 RgpB는 카스파제-유사 프로테아제 도메인(Arg-Xaa 펩티드 결합에 대해 특이적임) 및 면역글로불린-유사 도메인을 공유한다. RgpA에서, 프로테아제 및 면역글로불린-유사 도메인 다음에 헤마글루티닌-애드헤신 도메인을 함유하는 큰 C-말단 확장부가 뒤따른다.
본원에서 사용되는 용어 "알킬"은 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서 명시된 수의 탄소 원자를 지니는 직쇄형 또는 분지형의 포화된 지방족 라디칼을 지칭한다. 알킬은 임의의 수의 탄소, 예컨대, C1-2, C1-3, C1-4, C1-5, C1-6, C1-7, C1-8, C1-9, C1-10, C2-3, C2-4, C2-5, C2-6, C3-4, C3-5, C3-6, C4-5, C4-6 및 C5-6을 포함할 수 있다. 예를 들어, C1-6 알킬은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 2차-부틸, 3차-부틸, 펜틸, 이소펜틸, 헥실 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 알킬은 또한 20개 이하의 탄소 원자를 지니는 알킬 기, 예컨대, 이로 제한되지는 않지만, 헵틸, 옥틸, 노닐, 데실 등을 지칭할 수 있다. 알킬 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, "치환된 알킬" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택되는 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "알콕시"는 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서 화학식 -OR(여기서, R은 알킬임)을 지니는 기를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "사이클로알킬"은 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서 3 내지 12개의 고리원자, 또는 명시된 수의 원자를 함유하는, 포화되거나 부분적으로 불포화된 모노사이클릭, 융합된 바이사이클릭 또는 브릿징된 폴리사이클릭 고리 어셈블리를 지칭한다. 사이클로알킬은 임의의 수의 탄소, 예컨대, C3-6, C4-6, C5-6, C3-8, C4-8, C5-8, C6-8, C3-9, C3-10, C3-11 및 C3-12를 포함할 수 있다. 포화된 모노사이클릭 사이클로알킬 고리는, 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로옥틸을 포함한다. 포화된 바이사이클릭 및 폴리사이클릭 사이클로알킬 고리는, 예를 들어, 노르보르난, [2.2.2] 바이사이클로옥탄, 데카하이드로나프탈렌 및 아다만탄을 포함한다. 사이클로알킬 기는 또한 부분적으로 불포화되어 고리 중에 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 지닐 수 있다. 부분적으로 불포화된 대표적인 사이클로알킬 기는 사이클로부텐, 사이클로펜텐, 사이클로헥센, 사이클로헥사디엔(1,3- 및 1,4-이성질체), 사이클로헵텐, 사이클로헵타디엔, 사이클로옥텐, 사이클로옥타디엔(1,3-, 1,4- 및 1,5-이성질체), 노르보르넨, 및 노르보르나디엔을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 사이클로알킬이 포화된 모노사이클릭 C3-8 사이클로알킬인 경우, 예시적인 기는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸 및 사이클로옥틸을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 사이클로알킬이 포화된 모노사이클릭 C3-6 사이클로알킬인 경우, 예시적인 기는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 및 사이클로헥실을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 사이클로알킬 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, "치환된 사이클로알킬" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택되는 하나 이상의 기로 치환될 수 있다. 용어 "저급 사이클로알킬"은 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로헵틸을 포함하여 3 내지 7개의 탄소를 지니는 사이클로알킬 라디칼을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "알킬렌"은 적어도 2개의 다른 기(즉, 이가 알킬 라디칼)을 연결하는 상기 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 알킬렌 기에 연결된 2개의 모이어티는 알킬렌 기의 동일한 탄소 원자 또는 상이한 탄소 원자에 연결될 수 있다. 용어 "사이클로알킬렌"은 적어도 2개의 다른 기(즉, 이가 사이클로알킬 라디칼)를 연결시키는 상기 정의된 바와 같은 사이클로알킬 기를 지칭한다. 사이클로알킬렌 기에 연결된 2개의 모이어티는 사이클로알킬렌 기의 동일한 탄소 원자 또는 상이한 탄소 원자에 연결될 수 있다.
본원에 사용되는 용어 "알킬티오"는 그 자체로서 또는 또 다른 치환기의 일부로서 화학식 -SR(여기에서, R은 알킬임)을 갖는 기를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로알킬"은 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서 임의의 적합한 길이 및 1 내지 3개의 N, O 및 S와 같은 헤테로원자를 지니는 알킬 기를 지칭한다. 예를 들어, 헤테로알킬은 에테르, 티오에테르 및 알킬 아민을 포함할 수 있다. B, Al, Si 및 P를 포함하지만, 이로 제한되지 않는 또 다른 헤테로 원자가 또한 유용할 수 있다. 헤테로원자는 산화되어, 이로 제한되지는 않지만, -S(O)- 및 -S(O)2-와 같은 모이어티를 형성시킬 수 있다. 헤테로알킬의 헤테로원자 부분은 알킬 기의 수소 원자를 대체하여 하이드록시, 티오 또는 아미노 기를 형성시킬 수 있다. 대안적으로, 헤테로원자 부분은 연결하는 원자일 수 있거나, 두 개의 탄소 원자 사이에 삽입될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로알킬렌"은 적어도 2 개의 다른 기(즉, 이가 헤테로알킬 라디칼)을 연결하는 상기 정의된 바와 같은 헤테로알킬 기를 지칭한다. 헤테로알킬렌 기에 연결된 두 개의 모이어티는 헤테로알킬렌 기의 동일한 원자 또는 상이한 원자에 연결될 수 있다. 용어 "헤테로사이클릴렌"은 적어도 2개의 다른 기(즉, 이가 헤테로사이클릴 라디칼)을 연결하는 상기 정의된 바와 같은 사이클로알킬 기를 지칭한다. 헤테로사이클릴렌 기에 연결된 2 개의 모이어티는 헤테로사이클릴렌 기의 동일한 원자 또는 상이한 원자에 연결될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "할로" 및 "할로겐"은 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "할로알킬"은 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서 수소 원자들 중 일부 또는 모두가 할로겐 원자로 대체된 알킬 기를 지칭한다. 알킬 기와 관련하여, 할로알킬 기는 C1-6과 같은 임의의 적합한 수의 탄소 원자를 지닐 수 있다. 예를 들어, 할로알킬은 트리플루오로메틸, 플루오로메틸 등을 포함한다. 일부 경우에, 용어 "퍼플루오로"는 모든 수소가 불소로 대체된 화합물 또는 라디칼을 정의하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 퍼플루오로메틸은 1,1,1-트리플루오로메틸을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "할로알콕시"는 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서 수소 원자들 중 일부 또는 모두가 할로겐 원자로 대체된 알콕시 기를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "할로사이클로알킬"은 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서 수소 원자들 중 일부 또는 모두가 할로겐 원자로 대체된 사이클로알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용되는 용어 "듀테로알킬"은 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서 수소 원자들 중 일부 또는 모두가 듀테리움 원자로 대체된 알킬 기를 지칭한다. 알킬 기에 있어서, 듀테로알킬은 임의의 적합한 수의 탄소 원자 예컨대, C1- 6를 가질 수 있다. 일부 경우에, 용어 "퍼듀테로"는 모든 수소가 듀테륨으로 대체된 화합물 또는 라디칼을 정의하는 것으로 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "아릴"은 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서 임의의 적합한 수의 탄소 고리원자 및 임의의 적합한 수의 고리를 지니는 방향족 고리 시스템을 지칭한다. 아릴 기는 임의의 적합한 수의 탄소 고리원자, 예컨대, C6, C7, C8, C9, C10, C11, C12, C13, C14, C15 또는 C16뿐만 아니라 C6-10, C6-12 또는 C6-14 를 포함할 수 있다. 아릴 기는 모노사이클릭이거나, 융합되어 바이사이클릭(예를 들어, 벤조사이클로헥실) 또는 트리사이클릭 기를 형성시키거나, 결합에 의해 연결되어 바이아릴 기를 형성시킬 수 있다. 대표적인 아릴 기는 페닐, 나프틸 및 바이페닐을 포함한다. 다른 아릴 기는 메틸렌 연결 기를 지니는 벤질을 포함한다. 일부 아릴 기는 페닐, 나프틸 또는 바이페닐과 같이 6 내지 12개의 고리원을 지닌다. 다른 아릴 기는 페닐 또는 나프틸과 같이 6 내지 10개의 고리원을 지닌다. 일부 다른 아릴 기는 페닐과 같이 6개의 고리원을 지닌다. 아릴 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, "치환된 아릴" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택되는 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
본원에 사용되는 용어 "아릴렌"은 적어도 2개의 다른 기(즉, 이가 아릴 라디칼)을 연결하는 상기 정의된 바와 같은 아릴 기를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로아릴"은 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서 1 내지 5개의 고리 원자가 헤테로원자, 예컨대 N, O 또는 S인 5 내지 16개의 고리 원자를 함유하는 모노사이클릭 또는 융합된 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 방향족 고리 어셈블리를 지칭한다. B, Al, Si 및 P를 포함하지만, 이로 제한되는 것은 아닌, 추가의 헤테로원자가 또한 유용할 수 있다. 헤테로원자는 산화되어, 이로 제한되지는 않지만, -S(O)- 및 -S(O)2-와 같은 모이어티를 형성시킬 수 있다. 헤테로아릴 기는 C5-6, C3-8, C4-8, C5-8, C6-8, C3-9, C3-10, C3-11 또는 C3-12와 같이 임의의 수의 고리 원자를 포함할 수 있으며, 여기에서 탄소 원자 중 적어도 하나는 헤테로원자에 의해 대체된다. 1, 2, 3, 4, 또는 5, 또는 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 2 내지 3, 2 내지 4, 2 내지 5, 3 내지 4, 또는 3 내지 5개와 같은 임의의 적합한 수의 헤테로원자가 헤테로아릴 기에 포함될 수 있다. 예를 들어, 헤테로아릴 기는 C5-8　헤테로아릴(여기에서, 1 내지 4개의 탄소 고리 원자는 헤테로원자로 대체됨); 또는 C5-8　헤테로아릴(여기에서, 1 내지 3개의 탄소 고리 원자는 헤테로원자로 대체됨); 또는 C5-6　헤테로아릴(여기에서, 1 내지 4개의 탄소 고리 원자는 헤테로원자로 대체됨); 또는 C5-6　헤테로아릴(여기에서, 1 내지 3개의 탄소 고리 원자는 헤테로원자로 대체됨)일 수 있다. 헤테로아릴 기는, 피롤, 피리딘, 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 테트라졸, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 트리아진(1,2,3-, 1,2,4- 및 1,3,5-이성질체), 티오펜, 푸란, 티아졸, 이소티아졸, 옥사졸 및 이속사졸과 같은 기를 포함할 수 있다. 헤테로아릴 기는 또한 방향족 고리 시스템, 예컨대, 페닐 고리로 융합되어 벤조피롤, 예컨대, 인돌 및 이소인돌, 벤조피리딘, 예컨대, 퀴놀린 및 이소퀴놀린, 벤조피라진(퀴녹살린), 벤조피리미딘(퀴나졸린), 벤조피리다진, 예컨대, 프탈라진 및 신놀린, 벤조티오펜, 및 벤조푸란을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 구성원을 형성시킬 수 있다. 그 밖의 헤테로아릴 기는 결합에 의해 연결된 헤테로아릴 고리, 예컨대, 바이피리딘을 포함한다. 헤테로아릴 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, "치환된 헤테로아릴"은 할로, 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택되는 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
헤테로아릴 기는 고리 상의 임의의 자리를 통해 연결될 수 있다. 예를 들어, 피롤은 1-, 2- 및 3-피롤을 포함하고, 피리딘은 2-, 3- 및 4-피리딘을 포함하고, 이미다졸은 1-, 2-, 4- 및 5-이미다졸을 포함하고, 피라졸은 1-, 3-, 4- 및 5-피라졸을 포함하고, 트리아졸은 1-, 4- 및 5-트리아졸을 포함하고, 테트라졸은 1- 및 5-테트라졸을 포함하고, 피리미딘은 2-, 4-, 5- 및 6- 피리미딘을 포함하고, 피리다진은 3- 및 4-피리다진을 포함하고, 1,2,3-트리아진은 4- 및 5-트리아진을 포함하고, 1,2,4-트리아진은 3-, 5- 및 6-트리아진을 포함하고, 1,3,5-트리아진은 2-트리아진을 포함하고, 티오펜은 2- 및 3-티오펜을 포함하고, 푸란은 2- 및 3-푸란을 포함하고, 티아졸은 2-, 4- 및 5-티아졸을 포함하고, 이소티아졸은 3-, 4- 및 5-이소티아졸을 포함하고, 옥사졸은 2-, 4- 및 5-옥사졸을 포함하고, 이속사졸은 3-, 4- 및 5-이속사졸을 포함하고, 인돌은 1-, 2- 및 3-인돌을 포함하고, 이소인돌은 1- 및 2-이소인돌을 포함하고, 퀴놀린은 2-, 3- 및 4-퀴놀린을 포함하고, 이소퀴놀린은 1-, 3- 및 4-이소퀴놀린을 포함하고, 퀴나졸린은 2- 및 4-퀴나졸린을 포함하고, 신놀린은 3- 및 4-신놀린을 포함하고, 벤조티오펜은 2- 및 3-벤조티오펜을 포함하고, 벤조푸란은 2- 및 3-벤조푸란을 포함한다.
일부 헤테로아릴 기는 5 내지 10개의 고리원 및 N, O 또는 S를 포함하는 1 내지 3개의 고리원자를 지닌 것들, 예컨대 피롤, 피리딘, 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 트리아진(1,2,3-, 1,2,4- 및 1,3,5-이성질체), 티오펜, 푸란, 티아졸, 이소티아졸, 옥사졸, 이속사졸, 인돌, 이소인돌, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 프탈라진, 신놀린, 벤조티오펜 및 벤조푸란을 포함한다. 그 밖의 헤테로아릴 기는 5 내지 8개의 고리원 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 지닌 것들, 예컨대, 피롤, 피리딘, 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 트리아진(1,2,3-, 1,2,4- 및 1,3,5-이성질체), 티오펜, 푸란, 티아졸, 이소티아졸, 옥사졸 및 이속사졸을 포함한다. 일부 그 밖의 헤테로아릴 기는 9 내지 12개의 고리원 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 지닌 것들, 예컨대, 인돌, 이소인돌, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 프탈라진, 신놀린, 벤조티오펜, 벤조푸란 및 바이피리딘을 포함한다. 그 밖의 헤테로아릴 기는 5 내지 6개의 고리원 및 N, O 또는 S를 포함하는 1 내지 2개의 고리 원자를 지닌 것들, 예컨대, 피롤, 피리딘, 이미다졸, 피라졸, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 티오펜, 푸란, 티아졸, 이소티아졸, 옥사졸, 및 이속사졸을 포함한다.
일부 헤테로아릴 기는 피롤, 피리딘, 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 트리아진(1,2,3-, 1,2,4- 및 1,3,5-이성질체), 인돌, 이소인돌, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 프탈라진 및 신놀린과 같이 5 내지 10개의 고리원 및 유일한 질소 헤테로원자를 포함한다. 그 밖의 헤테로아릴 기는 푸란 및 벤조푸란과 같이 5 내지 10개의 고리원 및 유일한 산소 헤테로원자를 포함한다. 그 밖의 다른 헤테로아릴 기는 티오펜 및 벤조티오펜과 같이 5 내지 10개의 고리원 및 유이한 황 헤테로원자를 포함한다. 그 밖의 헤테로아릴 기는 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 트리아진(1,2,3-, 1,2,4- 및 1,3,5-이성질체), 티아졸, 이소티아졸, 옥사졸, 이속사졸, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 프탈라진 및 신놀린과 같이 5 내지 10개의 고리원 및 적어도 두 개의 헤테로원자를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로아릴렌"은 적어도 2개의 다른 기(즉, 이가 헤테로아릴 라디칼)을 연결하는 상기 정의된 바와 같은 헤테로아릴 기를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로사이클릴"은 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서 3 내지 12개의 고리원 및 N, O 및 S의 1 내지 4개의 헤테로원자를 지니는 포화된 고리 시스템을 지칭한다. B, Al, Si 및 P를 포함하지만 이로 제한되지 않는 추가의 헤테로원자가 또한 유용할 수 있다. 헤테로원자는 산화되어, 이로 제한되지는 않지만, -S(O)- 및 -S(O)2-와 같은 모이어티를 형성시킬 수 있다. 헤테로사이클릴 기는 C3-6, C4-6, C5-6, C3-8, C4-8, C5-8, C6-8, C3-9, C3-10, C3-11 또는 C3-12(여기에서, 탄소 원자 중 적어도 하나는 헤테로원자에 의해 대체됨)와 같이 임의의 수의 고리원자를 포함할 수 있다. 1, 2, 3 또는 4, 또는 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 2 내지 3, 2 내지 4 또는 3 내지 4개와 같은 임의의 적합한 수의 탄소 고리 원자는 헤테로사이클릴 기의 헤테로원자로 대체될 수 있다. 헤테로사이클릭 기는 아지리딘, 아제티딘, 피롤리딘, 피페리딘, 아제판, 아조칸, 퀴누클리딘, 피라졸리딘, 이미다졸리딘, 피페라진(1,2-, 1,3- 및 1,4-이성질체), 옥시란, 옥세탄, 테트라하이드로푸란, 옥산(테트라하이드로피란), 옥세판, 티이란, 티에탄, 티올란(테트라하이드로티오펜), 티안(테트라하이드로티오피란), 옥사졸리딘, 이속살리딘, 티아졸리딘, 이소티아졸리딘, 디옥솔란, 디티올란, 모르폴린, 티오모르폴린, 디옥산 또는 디티안과 같은 기를 포함할 수 있다. 헤테로사이클릴 기는 또한 방향족 또는 비-방향족 고리 시스템에 융합되어 인돌린을 포함하지만 이로 제한되지 않는 구성원을 형성시킬 수 있다. 헤테로사이클릴 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, "치환된 헤테로사이클릴" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택되는 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
헤테로사이클릴 기는 임의의 위치를 통해 고리 상에 연결될 수 있다. 예를 들어, 아지리딘은 1- 또는 2-아지리딘일 수 있고, 아제티딘은 1- 또는 2- 아제티딘일 수 있고, 피롤리딘은 1-, 2- 또는 3-피롤리딘일 수 있고, 피페리딘은 1-, 2-, 3- 또는 4-피페리딘일 수 있고, 피라졸리딘은 1-, 2-, 3-, 또는 4-피라졸리딘일 수 있고, 이미다졸리딘은 1-, 2-, 3- 또는 4-이미다졸리딘일 수 있고, 피페라진은 1-, 2-, 3- 또는 4-피페라진일 수 있고, 테트라하이드로푸란은 1- 또는 2-테트라하이드로푸란일 수 있고, 옥사졸리딘은 2-, 3-, 4- 또는 5-옥사졸리딘일 수 있고, 이속사졸리딘은 2-, 3-, 4- 또는 5-이속사졸리딘일 수 있고, 티아졸리딘은 2-, 3-, 4- 또는 5-티아졸리딘일 수 있고, 이소티아졸리딘은 2-, 3-, 4- 또는 5- 이소티아졸리딘일 수 있고, 모르폴린은 2-, 3- 또는 4-모르폴린일 수 있다.
헤테로사이클릴이 3 내지 8개의 고리원 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하는 경우, 대표적인 구성원은 피롤리딘, 피페리딘, 테트라하이드로푸란, 옥산, 테트라하이드로티오펜, 티안, 피라졸리딘, 이미다졸리딘, 피페라진, 옥사졸리딘, 이속사졸리딘, 티아졸리딘, 이소티아졸리딘, 모르폴린, 티오모르폴린, 디옥산 및 디티안을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 또한, 헤테로사이클릴은 5 내지 6개의 고리치환되거나 비치환된 트리아졸릴로부터 원 및 1 내지 2개의 헤테로원자를 지닌 고리를 형성할 수 있으며, 대표적인 구성원은 피롤리딘, 피페리딘, 테트라하이드로푸란, 테트라하이드로티오펜, 피라졸리딘, 이미다졸리딘, 피페라진, 옥사졸리딘, 이속사졸리딘, 티아졸리딘, 이소티아졸리딘, 및 모르폴린을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "아민 보호 기"는 아미노 기를 복원시키기 위해 아미노 기를 비반응성이지만 또한 제거가능하게 만드는 화학적 모이어티를 지칭한다. 아민 보호 기의 예는 벤질옥시카르보닐; 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐(Fmoc); 3차-부틸옥시카르보닐(Boc); 알릴옥시카르보닐(Alloc); p-톨루엔 설포닐(Tos); 2,2,5,7,8-펜타메틸크로만-6-설포닐(Pmc); 2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디하이드로벤조푸란-5-설포닐(Pbf); 메시틸-2-설포닐(Mts); 4-메톡시-2,3,6-트리메틸페닐설포닐(Mtr); 아세트아미도; 및 프탈이미도 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 다른 아민 보호 기는 예를 들어, 그린(Green) 및 워츠(Wuts)[Protective Groups in Organic Synthesis, 4 th Ed. 2007, Wiley-Interscience, New York]에 의해 기재된 것들을 포함하여 당업자에게 공지되어 있다.
본원에서 사용되는 용어 "카르보닐"은 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서 -C(O)-, 즉, 카르보닐을 지니는 모이어티에서 산소에 이중 결합되고 두 개의 다른 기에 결합된 탄소 원자를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "아미노"는 모이어티 -NR2(여기서, 각각의 R 기는 H 또는 알킬임)을 지칭한다. 아미노 모이어티는 이온화되어 상응하는 암모늄 양이온을 형성할 수 있다. "디알킬아미노"는 각각의 R 기가 알킬인 아미노 모이어티를 지칭한다.
본원에 사용되는 용어 "설포닐"은 모이어티 -SO2R를 지칭하며, 여기에서, R 기는 알킬, 할로알킬 또는 아릴이다. 아미노 모이어티는 이온화되어 상응하는 암모늄 양이온을 형성할 수 있다. "알킬설포닐"은 아미노 모이어티를 지칭하며, 여기에서, R 기는 알킬이다.
본원에서 사용되는 용어 "하이드록시"는 모이어티 -OH를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "시아노"는 질소 원자에 삼중-결합된 탄소 원자를 지칭한다(즉, 모이어티 -C≡N).
본원에서 사용되는 용어 "카르복시"는 모이어티 -C(O)OH를 지칭한다. 카르복시 모이어티는 이온화되어 상응하는 카르복실레이트 음이온을 형성할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "아미도"는 모이어티 -NRC(O)R 또는 -C(O)NR2(여기서, 각각의 R 기는 H 또는 알킬임)를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "니트로"는 모이어티 -NO2를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "옥소"는 화합물에 이중-결합된 산소 원자를 지칭한다(즉, O=).
본원에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용되는 부형제"는 대상체에의 활성제의 투여를 돕는 물질을 지칭한다. "약학적으로 허용되는"은 부형제가 제형의 다른 성분과 상용가능하고 이의 수용자에게 해롭지 않다는 것을 의미한다. 본 발명에 유용한 약학적 부형제는 결합제, 충전제, 붕해제, 윤활제, 글리단트(glidant), 코팅, 감미제, 착향제 및 착색제를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "염"은 본 발명의 화합물의 산 또는 염기 염을 지칭한다. 약학적으로 허용되는 염의 예시적인 예는 무기산(염산, 하이드로브롬산, 및 인산 등) 염, 유기산(아세트산, 프로피온산, 글루탐산 및 시트르산 등) 염, 사차 암모늄(메틸 아이오다이드, 및 에틸 아이오다이드 등) 염이다. 약학적으로 허용되는 염은 비독성인 것으로 이해된다.
본 발명의 산성 화합물의 약학적으로 허용되는 염은 염기와 형성된 염, 즉, 양이온성 염, 예컨대, 알칼리 및 알칼리 토금속 염, 예컨대, 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘뿐만 아니라 암모늄 염, 예컨대, 암모늄, 트리메틸-암모늄, 디에틸암모늄, 및 트리스-(하이드록시메틸)-메틸-암모늄 염이다.
유사하게는, 산 부가 염, 예컨대, 무기산, 유기 카르복실산 및 유기 설폰산, 예를 들어, 염산, 메탄설폰산, 말레산의 염이 또한 가능하며, 단 염기성 기, 예컨대, 피리딜이 구조의 일부를 구성한다.
중성 형태의 화합물은 염을 염기 또는 산과 접촉시키고 통상적인 방법으로 모 화합물을 분리시킴으로써 생성될 수 있다. 모 형태의 화합물은 특정 물리적 성질, 예를 들어 극성 용매 중에서의 용해도에서 다양한 염 형태들과 차이가 나지만, 그 외에는, 염들은 본 발명의 목적을 위한 모 형태의 화합물과 동등하다.
염 형태 이외에, 본 발명은 프로드러그 형태로 존재하는 화합물을 제공한다. 본원에 기술된 화합물의 프로드러그는 생리학적 조건 하에서 용이하게 화학적 변화를 겪어 본 발명의 화합물을 제공하는 화합물이다. 추가로, 프로드러그는 생체외 환경에서 화학적 또는 생화학적 방법에 의해 본 발명의 화합물로 전환될 수 있다. 예를 들어, 적합한 효소 또는 화학 제제를 경피 패치 저장소에 위치시킬 경우 프로드러그는 본 발명의 화합물로 서서히 전환될 수 있다.
본원에 사용되는 용어 "진지파인 반응 모이어티"는 진지파인 활성 부위 티올과 반응하여 공유적으로 변형된 진지파인을 형성하는 화합물의 화학적 작용기, 또는 진지파인과 상호작용하여 비-공유 진지파인/화합물 복합물을 형성하는 화합물의 화학적 작용기를 지칭한다. 진지파인 반응성 모이어티의 예는 비제한적으로, 할로아세트아미드 기(클로로아세트아미드 및 요오도아세트아미드 포함), 말레이미드 기, 벤조티아졸릴-카르보닐 기 및 페녹시메틸 기(할로겐화된 페녹시메틸 기를 포함)를 포함한다.
본원에 사용되는 용어 "리포터 모이어티"는 비제한적으로, 광학적 방법(예를 들어, 형광 또는 UV-가시선 흡광도) 및 생화학적 방법(예를 들어, 면역화학적 시약 예컨대, 항체)을 포함하는 기법을 사용하여 검출될 수 있는 화합물의 화학적 작용기를 나타낸다.
본원에 사용되는 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"는 증상의 감퇴; 완화; 감소, 또는 환자의 증상, 상처, 병상 또는 병태에 대한 용인화 증가; 증상 진행의 속도 감속; 증상 또는 병태의 빈도 또는 기간의 감소; 또는 일부 상황에서, 증상의 발생의 예방과 같은 임의의 객관적 또는 주관적 파라미터를 포함하는, 상처, 병상, 병태 또는 증상(예를 들어, 인지기능 장애)의 치료 또는 개선에서 임의의 성공의 징후를 지칭한다. 증상의 치료 또는 개선은, 예를 들어, 물리적 시험의 결과를 포함하는 임의의 객관적 또는 주관적 파라미터를 기초로 할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "유효량" 및 "치료적 유효량"은 투여되어 치료 효과를 발생시키는 Kgp 억제제와 같은 화합물의 용량을 지칭한다. 정확한 용량은 치료의 목적에 좌우될 것이고, 공지된 기술을 이용하여 당업자에 의해 확인될 것이다[참조예: Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms(vols. 1 3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Coumpounding(1999); Pickar, Dosage Calculations(1999); Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th Edition, 2006, Brunton, Ed., McGraw-Hill; and Remington : The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, 2005, Hendrickson, Ed., Lippincott, Williams & Wilkins].
본원에서 사용되는 용어 "알츠하이머병"은 인간 및 다른 포유 동물의 중추 신경계의 진행성 질환을 지칭한다. 이는 치매(특히 노인에게서); 방향상실(disorientation); 기억 상실; 언어, 계산, 또는 시각-공간 능력의 손상; 및 정신병적 증상으로 나타난다. 알츠하이머병은 진행성 신경퇴화 및 특징적인 병상, 즉, 베타 아밀로이드 플라크 및 타우 엉킴과 관련이 있다.
본원에 사용되는 용어 "골관절염"은 관절 연골, 윤활 조직 및 하방 골의 파괴로부터 발생하는 만성 퇴행성 관절 질환을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "대상체"는 영장류(예를 들어, 인간), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 래트, 및 마우스 등을 포함하지만 이로 제한되지 않는 포유동물과 같은 동물을 지칭한다.
III. 리신 진지파인의 억제제
본 발명은 P. 진지발리스의 억제를 위한 화합물을 제공한다. 본 발명은 하기 화학식 I에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00002
상기 식에서,
A는 -CH2- 및 -O-로부터 선택되며;
R1a 및 R1b는 수소, C1-4　알킬 및 아민 보호기로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R2a 및 R2b는 각각 수소, 할로겐, C1-4　할로알킬 및 C1-4　할로알콕시로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R3은 C3-8　사이클로알킬, C3-8　알킬, 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴, C6-10 아릴, 5 내지 12 원의 헤테로아릴 및 리포터 모이어티로부터 선택되며, 여기에서, R3은 하나 이상의 R3a 치환기로 임의적으로 치환되며;
각각의 R3a는 할로겐, -CN, -NO2, -N3, -OH, C1-4　알킬, C1-4　할로알킬, C1-4　알콕시, C1-4　할로알콕시, -N(Rc)2, -N+(Rb)3, -(CH2)kC(O)Rb, -NRc(CH2)uC(O)Rb, -O(CH2)uC(O)Rb, -(CH2)kCONRcRc, -(CH2)kNRcC(O)Rb, -NRc(CH2)uCONRcRc, -NRc(CH2)uNRcC-(O)Rb, -O(CH2)uCONRcRc 및 -O(CH2)uNRcC(O)Rb, 및 임의적으로 치환된 트리아졸릴로부터독립적으로 선택되며;
각각의 Rb는 C1-4　알킬, C1-4　할로알킬 및 C1-4　듀테로알킬로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 Rc는 수소 및 C1-8　알킬로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 아래첨자 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 아래첨자 u는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되며;
R4는 수소 및 C1-4　알킬로부터 선택되며;
R5는 -CH2R5a, -CHS(O)(R5b)2 및 C1-6　할로알킬로부터 선택되며;
R5a는 -O-R6, -S-R7, -SO-R7, -SO2-R7, -N(R8)2, 5 내지 12 원의 헤테로아릴 및 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴로부터 선택되며,
여기에서, 5 내지 12 원의 헤테로아릴은 할로겐, C1-3　알킬 및 C1-3　할로알킬로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 구성원으로 임의적으로 치환되며,
3 내지 12 원의 헤테로사이클릴은 옥소, 할로겐, C1-3　알킬 및 C1-3　할로알킬로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 구성원으로 임의적으로 치환되며;
각각의 R5b는 독립적으로 선택된 C1-6　알킬이며;
R6 및 R7은 페닐, C1-6　알킬, C1-6　할로알킬 및 5 내지 12 원의 헤테로아릴로부터 선택되며,
여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환되며,
여기에서, 5 내지 12 원의 헤테로아릴은 하나 이상의 할로겐, C1-3　알킬 또는 C1-3　할로알킬로 임의적으로 치환되며;
각각의 R8은 독립적으로 선택된 C1-6　알킬이며;
R5는 켄칭 모이어티 R9를 임의적으로 포함하며;
단 R5는 2,3,5,6-테트라플루오로페녹시메틸이 아니다.
일부 구체예에서,
A는 -CH2- 및 -O-로부터 선택되며;
R1a 및 R1b는 수소, C1-4　알킬 및 아민 보호기로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R2a 및 R2b는 수소, 할로겐, C1-4　할로알킬 및 C1-4　할로알콕시로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R3은 C3-8　사이클로알킬, C3-8　알킬, C6-10　아릴, C5-12　헤테로아릴 및 C3-12　헤테로사이클릴로부터 선택되며, 여기에서, R3은 하나 이상의 R3a 치환기로 임의적으로 치환되며;
각각의 R3a는 할로겐, -CN, -NO2, -N3, -OH, C1-4　알킬, C1-4　할로알킬, C1-4　알콕시, C1-4　할로알콕시, -N(Rc)2,-(CH2)kC(O)Rb, -NRc(CH2)uC(O)Rb, -O(CH2)uC(O)Rb, -(CH2)kCONRcRc, -(CH2)kNRcC(O)Rb, -NRc(CH2)uCONRcRc, -NRc(CH2)uNRcC(O)Rb, -O(CH2)uCONRcRc 및 -O(CH2)uNRcC(O)Rb, 및 임의적으로 치환된 트리아졸릴로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 Rb는 C1-4　알킬, C1-4　할로알킬 및 C1-4　듀테로알킬로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 Rc는 수소 및 C1-8　알킬로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 아래첨자 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 아래첨자 u는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되며;
R4는 수소 및 C1-4　알킬로부터 선택되며;
R5는 C1-6　할로알킬 및 -CH2R5a로부터 선택되며;
R5a는 -O-R6, -S-R7, -SO-R7,-SO2-R7, -N(R8)2, 및 C5-12　헤테로아릴로부터 선택되며;
R6은 페닐, C1-6　알킬, C1-6　할로알킬 및 C5-12　헤테로아릴로부터 선택되며,
여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환되며,
C5-12　헤테로아릴은 할로겐 또는 C1-3　할로알킬로 임의적으로 치환되며;
R7은 페닐, C1-6　알킬, C1-6　할로알킬 및 C5-12　헤테로아릴로부터 선택되며,
여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 임의적으로 치환되며,
C5-12　헤테로아릴은 할로겐 또는 C1-3　할로알킬로 임의적으로 치환되며;
각각의 R8은 독립적으로 선택된 C1-6　알킬이며;
단 R5는 2,3,5,6-테트라플루오로페녹시메틸이 아니다.
본 발명의 화합물은 보호된 형태(즉, R1a 및 R1b 중 적어도 하나가 아민 보호기인 화합물)로 제조될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Green and Wuts(Protective Groups in Organic Synthesis, 4 th Ed. 2007, Wiley-Interscience, New York)]에 기술된 바와 같은- 많은 적합한 보호기가 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, R1a는 H이고, R1b는 벤질옥시카르보닐; 9-플루오레닐메틸-옥시카르보닐; 3차-부틸옥시카르보닐; 및 알릴옥시카르보닐로부터 선택된다. 일부 구체예에서, R1a는 H이며, R1b는 3차-부틸옥시카르보닐이다. 화합물은 또한 알킬화된 형태(즉, R1a 및 R1b 중 적어도 하나가 알킬 기인 화합물)로 제조될 수 있다. R1a 및 R1b 중 하나 또는 둘 모두는 예를 들어, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸 또는 t-부틸일 수 있다.
일부 구체예에서, R1a 및 R1b는 H이며; R2a 및 R2b는 수소 및 플루오로로부터 독립적으로 선택되며; A는 -CH2-이다.
일부 구체예에서, R1a 및 R1b는 H이며; R2a 및 R2b는 수소 및 플루오로로부터 독립적으로 선택되며; A는 -CH2-이며; R4는 수소 및 C1-4　알킬로부터 선택된다. 일부 이러한 구체예에서, R4는 수소 및 메틸로부터 선택된다. 일부 이러한 구체예에서, R4는 수소이다.
일부 구체예에서, A는 -CH2-이며; R2a는 수소이며; R2b는 수소 또는 플루오로이며; R1a 및 R1b는 H이다. 일부 구체예에서, A는 -CH2-이며; R2a는 수소이며; R2b는 플루오로이며; R1a 및 R1b는 H이다.
일부 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 Ia에 따른 구조를 갖는 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00003
일부 구체예에서, 본 발명은 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공하며, 여기에서, R3은 C3-8　사이클로알킬, C3-8　알킬, C6-10　아릴, C5-12　헤테로아릴 및 C3-12　헤테로사이클릴로부터 선택되며, 이들 각각은 하나 이상의 R3a 치환기로 임의적으로 치환된다. 예를 들어, R3은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸 또는 사이클로옥틸일 수 있다. R3은 n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 2차-부틸, 3차-부틸, n-펜틸, 분지된 펜틸, n-헥실, 분지된 헥실, n-헵틸, 분지된 헵틸, n-옥틸 또는 분지된 옥틸일 수 있다. 일부 구체예에서, R3은 비치환되거나 치환된 사이클로부틸, 비치환되거나 치환된 사이클로펜틸, 및 비치환되거나 치환된 사이클로헥실로부터 선택된다. 일부 구체예에서, R3은 비치환되거나 치환된 이소프로필이다.
일부 구체예에서, R3은 비치환되거나 치환된 페닐 및 비치환되거나 치환된 나프틸로부터 선택된다. 일부 구체예에서, R3은 비치환되거나 치환된 피롤릴, 비치환되거나 치환된 피리디닐, 비치환되거나 치환된 이미다졸릴, 비치환되거나 치환된 피라졸릴, 비치환되거나 치환된 트리아졸릴, 비치환되거나 치환된 피라지닐, 비치환되거나 치환된 트리아지닐, 비치환되거나 치환된 인돌릴, 비치환되거나 치환된 이소인돌릴 및 비치환되거나 치환된 퀴놀리닐로부터 선택된다.
일부 구체예에서, R3은 사이클로펜틸 및 페닐로부터 선택되며, 이들 각각은 하나 이상의 R3a 치환기로 임의적으로 치환된다. 일부 이러한 구체예에서, 각각의 R3a는 할로겐, -N3, C1-4　알킬, C1-4　할로알킬, C1-4　알콕시, C1-4　할로알콕시 및 -NRcC(O)Rb로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구체예에서, R3은 사이클로펜틸이다.
일부 구체예에서, 본 발명은 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공하며, 여기에서, R3은 C3-8　알킬, C3-8　사이클로알킬, C6-10　아릴, C5-12　헤테로아릴 및 C3-12　헤테로사이클릴로부터 선택되며, 이들 각각은 하나 이상의 R3a 치환기로 임의적으로 치환된다. 일부 이러한 구체예에서, R3은 이소프로필, 사이클로펜틸, 페닐, 피리딘-2-일, 피리딘-3-일 및 피리딘-4-일로부터 선택되며, 이들 각각은 하나 이상의 R3a 치환기로 임의적으로 치환된다. 일부 이러한 구체예에서, 각각의 R3a는 할로겐, -N3, C1-4　알킬, C1-4　할로알킬, C1-4　알콕시, C1-4　할로알콕시, C1-4　알콕시, C1-4　할로알콕시, -N(Rc)2, -N+(Rb)3 및 -NRcC(O)Rb로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구체예에서, R3은 사이클로펜틸이다. 일부 구체예에서, R3은 사이클로펜틸이고, R5는 하기 제시된 바와 같은 구체예 (A), 구체예 (B), 구체예 (C), 구체예 (D), 구체예 (E), 구체예 (F), 구체예 (G), 구체예 (H), 구체예 (J) 또는 구체예 (K)에서의 치환기로부터 선택된다.
일부 구체예에서, R3은 C1-4　알콕시(예를 들어, 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, 3차-부톡시, 기타 등등)로 치환된 C3-8　알킬(예를 들어, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, 3차-부틸, n-펜틸, 기타 등등)이다. 일부 구체예에서, R3은 메톡시프로필이다. 일부 구체예에서, R3은 (2-메톡시)-프로판-2-일이다. 일부 구체예에서, R3은 (2-메톡시)프로판-2-일이며, R5는 하기 제시된 바와 같은 구체예 (A), 구체예 (B), 구체예 (C), 구체예 (D), 구체예 (E), 구체예 (F), 구체예 (G), 구체예 (H), 구체예 (J) 또는 구체예 (K)에서의 치환기로부터 선택된다.
일부 구체예에서, R3은 비치환된 페닐이거나, R3은 하나 이상의 할로겐, -N3, C1-4　할로알콕시 및/또는 -NRcC(O)Rb로 치환된 페닐이다. 일부 이러한 구체예에서, R5는 하기 제시된 바와 같은 구체예 (A), 구체예 (B), 구체예 (C), 구체예 (D), 구체예 (E), 구체예 (F), 구체예 (G), 구체예 (H), 구체예 (J) 또는 구체예 (K)에서의 치환기로부터 선택된다.
일부 구체예에서, R3은 비치환된 피리디닐(즉, 피리딘-2-일, 피리딘-3-일 또는 피리딘-4-일) 또는 하나 이상의 할로겐, -N(Rc)2 및/또는 -N+(Rb)3로 치환된 피리디닐이다. 일부 이러한 구체예에서, R5는 하기 제시된 바와 같은 구체예 (A), 구체예 (B), 구체예 (C), 구체예 (D), 구체예 (E), 구체예 (F), 구체예 (G), 구체예 (H), 구체예 (J) 또는 구체예 (K)에서의 치환기로부터 선택된다.
아지드 기를 함유하는 화합물(예를 들어, R3a가 -N3인 화합물)은 상보적인 반응 파트너 예컨대, 알킨-함유 화합물 또는 포스핀-함유 화합물과의 반응을 통해 추가의 반응기로 개질될 수 있다. 보통 "클릭 화학"으로 불리는 [3+2] 첨가환화를 통한 아지드와 알킨의 반응은 본 발명의 화합물에서 다양한 치환된 트리아졸 기를 정착시키는데 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 일부 구체예는 하기 화학식에 따른 화합물(여기에서, 연결 모이어티 -L3-은 임의적으로 치환되는 트리아졸릴 모이어티임)을 제공한다:
Figure pct00004
상기 식에서, 물결선은 R3a로의 연결 지점이며, 점선은 R3c로의 연결지점이다.
일부 구체예에서, 연결 모이어티 L3a는 구조 -L3b-L3c-를 가지며, 여기에서, L3b 및 L3c는 결합, 이가 폴리머 모이어티 및 선형 또는 분지형의 포화되거나 불포화된 C1-30　알킬로부터 독립적으로 선택되며;
C1-30　알킬에서의 하나 이상의 탄소 원자는 O, S, NRa에 의해 임의적으로 그리고, 독립적으로 대체되며;
C1-30　알킬에서 인접한 탄소 원자 중 2개 이상의 그룹은 -NRa(CO)- 또는 -(CO)NRa-에 의해 임의적으로 그리고, 독립적으로 대체되며;
C1-30　알킬에서 인접한 탄소 원자 중 2개 이상의 그룹은 O, S 및 N으로부터 선택되는 1 내지 4개의 헤테로원자를 갖는 4 내지 8원의 이가 카르보사이클 또는 4 내지 8원의 이가 헤테로사이클에 의해 임의적으로 그리고, 독립적으로 대체되며;
각각의 Ra는 H 및 C1-6　알킬로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구체예에서, 작용기 R3c는 하기 더욱 상세히 기술된 바와 같이 발색단, 형광단 및 결합 모이어티(예를 들어, 바이오틴, 글루타티온, 기타 등등)로부터 선택된다.
특정 구체예, R3 및 여기에 결합하는 카르보닐은 자연-발생 아미노산 잔기(L 아미노산 잔기) 또는 자연-발생 아미노산 잔기의 이성질체(D 아미노산 잔기) 이외의 모이어티를 형성한다. 일부 구체예에서, R3 및 여기에 결합된 카르보닐은 아스파라기닐, 치환된 아스파라기닐, 글루타미닐(즉, 글루타민 잔기), 치환된 글루타미닐(즉, 치환된 글루타민 잔기), 글루타밀(즉, 글루탐산 잔기), 치환된 글루타밀(즉, 치환된 글루탐산 잔기), 이소류시닐, 치환된 이소류시닐, 류시닐, 치환된 류시닐, 리시닐, 치환된 리시닐, 메티오니닐, 치환된 메티오니닐, 프롤리닐, 치환된 프롤리닐, 트레오니닐, 치환된 트레오니닐, 발리닐 또는 치환된 발리닐 이외의 모이어티를 형성한다. 치환된 아미노산 잔기는 아민 결합을 통해 연결된 2개 이상의 아미노산 잔기를 갖는 더 큰 펩티드 기에 존재할 수 있다.
일부 구체예에서, 본 발명은 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공하며, 여기에서, R4는 수소 또는 메틸이다. 일부 이러한 구체예에서, R5은 -CH2R5a이며, R5a는 C5-12　헤테로아릴 및 -O-R6로부터 선택된다. 일부 이러한 구체예에서, R5a는 -O-페닐이며, 여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환된다. 일부 이러한 구체예에서, R4는 수소이다.
일부 구체예에서, 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물에서 R5a는 -S-R7, -SO-R7,-SO2-R7, C5-12　헤테로아릴 및 -N-R8로부터 선택된다 일부 구체예에서, R5a는 -O-R6, C5-12　헤테로아릴 및 -N-R8로부터 선택된다. 일부 구체예에서, R5a는 -O-R6, -S-R7, -SO-R7,-SO2-R7 및 -N-R8로부터 선택된다. 일부 구체예에서, R5a는 -O-R6, -S-R7, -SO-R7,-SO2-R7 및 C5-12　헤테로아릴로부터 선택된다.
일부 구체예 (A)에서, 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물에서 R5a는 C1-6　할로알콕시(즉, -O-R6, 여기에서, R6은 C1-6　할로알킬임), C1-6　알킬티오(즉, -S-R7, 여기에서, R7은 C1-6　알킬임), C1-6　할로알킬티오(즉, -S-R7, 여기에서, R7은 C1-6　할로알킬임), C1-6　알킬설포닐(즉, -SO2-R7, 여기에서, R7은 C1-6　알킬임), (C1-6　디알킬)아미노(즉, -NR8), C5-12　헤테로아릴, 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴, -O-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환됨) 및 -S-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 임의적으로 치환됨)로부터 선택된다. 구체예 (A)에서, R3은 상기 제시된 치환기 또는 치환기 군 중 임의의 치환기일 수 있다.
일부 구체예 (B)에서, 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물에서 R5a는 C1-6　알콕시, C1-6　알킬티오, C1-6　할로알킬티오, C1-6　알킬설포닐, (C1-6　디알킬)아미노, C5-12　헤테로아릴, 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴, -O-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환됨) 및 -S-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 임의적으로 치환됨)로부터 선택된다. 구체예 (B)에서, R3은 상기 제시된 치환기 또는 치환기 군 중 임의의 치환기일 수 있다.
일부 구체예 (C)에서, 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물에서 R5a는 C1-6　알콕시, C1-6　할로알콕시, C1-6　할로알킬티오, C1-6　알킬설포닐, (C1-6　디알킬)아미노, C5-12　헤테로아릴, 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴, -O-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환됨) 및 -S-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 임의적으로 치환됨)로부터 선택된다. 구체예 (C)에서, R3은 상기 제시된 치환기 또는 치환기 군 중 임의의 치환기일 수 있다.
일부 구체예 (D)에서, 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물에서 R5a는 C1-6　알콕시, C1-6　할로알콕시, C1-6　알킬티오, C1-6　알킬설포닐, (C1-6　디알킬)아미노, C5-12　헤테로아릴, 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴, -O-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환됨) 및 -S-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 임의적으로 치환됨)로부터 선택된다. 구체예 (D)에서, R3은 상기 제시된 치환기 또는 치환기 군 중 임의의 치환기일 수 있다.
일부 구체예 (E)에서, 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물에서 R5a는 C1-6　알콕시, C1-6　할로알콕시, C1-6　알킬티오, C1-6　할로알킬티오, (C1-6　디알킬)아미노, C5-12　헤테로아릴, 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴, -O-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환됨) 및 -S-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 임의적으로 치환됨)로부터 선택된다. 구체예 (E)에서, R3은 상기 제시된 치환기 또는 치환기 군 중 임의의 치환기일 수 있다.
일부 구체예 (F)에서, 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물에서 R5a는 C1-6　알콕시, C1-6　할로알콕시, C1-6　알킬티오, C1-6　할로알킬티오, C1-6　알킬설포닐, C5-12　헤테로아릴, 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴, -O-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환됨) 및 -S-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 임의적으로 치환됨)로부터 선택된다. 구체예 (F)에서, R3은 상기 제시된 치환기 또는 치환기 군 중 임의의 치환기일 수 있다.
일부 구체예 (G)에서, 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물에서 R5a는 C1-6　알콕시, C1-6　할로알콕시, C1-6　알킬티오, C1-6　할로알킬티오, C1-6　알킬설포닐, (C1-6　디알킬)아미노, 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴, -O-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환됨) 및 -S-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 임의적으로 치환됨)로부터 선택된다. 구체예 (G)에서, R3은 상기 제시된 치환기 또는 치환기 군 중 임의의 치환기일 수 있다.
일부 구체예 (H)에서, 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물에서 R5a는 C1-6　알콕시, C1-6　할로알콕시, C1-6　알킬티오, C1-6　할로알킬티오, C1-6　알킬설포닐, (C1-6　디알킬)아미노, C5-12　헤테로아릴, 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴 및 -S-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 임의적으로 치환됨)로부터 선택된다. 구체예 (H)에서, R3은 상기 제시된 치환기 또는 치환기 군 중 임의의 치환기일 수 있다.
일부 구체예 (J)에서, 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물에서 R5a는 C1-6　알콕시, C1-6　할로알콕시, C1-6　알킬티오, C1-6　할로알킬티오, C1-6　알킬설포닐, (C1-6　디알킬)아미노, C5-12　헤테로아릴, 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴 및 -O-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환됨)로부터 선택된다. 구체예 (J)에서, R3은 상기 제시된 치환기 또는 치환기 군 중 임의의 치환기일 수 있다.
일부 구체예 (K)에서, 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물에서 R5a는 C1-6　알콕시, C1-6　할로알콕시, C1-6　알킬티오, C1-6　할로알킬티오, C1-6　알킬설포닐, (C1-6　디알킬)아미노, C5-12　헤테로아릴, -O-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환됨) 및 -S-페닐(여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 임의적으로 치환됨)로부터 선택된다. 구체예 (K)에서, R3은 상기 제시된 치환기 또는 치환기 군 중 임의의 치환기일 수 있다.
일부 구체예에서, R5a에서 각 할로겐은 F 및 Cl로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구체예에서, R5a에서 각 할로겐은 F이다.
일부 구체예에서, R5a는 하기 구조를 갖는 모이어티이다:
Figure pct00005
상기 식에서, R5b, R5c, R5d, R5e 및 R5f는 수소 및 할로겐으로부터 독립적으로 선택되며, 물결선은 화합물로의 연결 지점을 나타낸다.
일부 구체예에서,
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이다.
일부 구체예에서,
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이다.
일부 구체예에서,
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 H이다.
특정 구체예에서, R5a는 2,3,5,6-테트라플루오로페녹시가 아니다.
일부 구체예에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공하며, 여기에서, R5a는 2-플루오로페녹시; 3-플루오로페녹시; 4-플루오로페녹시; 2,3-디플루오로페녹시; 2,4-디플루오로페녹시; 2,5-디플루오로페녹시; 2,6-디플루오로페녹시; 3,4-디플루오로페녹시; 3,5-디플루오로페녹시; 2,3,6-트리플루오로페녹시; 및 2,3,5-트리플루오로페녹시로부터 선택된다. 일부 이러한 구체예에서, R5a는 2-플루오로페녹시; 3 플루오로페녹시; 2,3-디플루오로페녹시; 2,5-디플루오로페녹시; 2,6-디플루오로페녹시; 3,5-디플루오로페녹시; 2,3,6-트리플루오로페녹시; 및 2,3,5-트리플루오로페녹시로부터 선택된다. 일부 이러한 구체예에서, R5a는 2,6-디플루오로페녹시 및 2,3,6-트리플루오로페녹시로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 본 발명은 화학식 Ia의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공하며, 여기에서, R5a는 2-플루오로페녹시; 3-플루오로페녹시; 4-플루오로페녹시; 2,3-디플루오로페녹시; 2,4-디플루오로페녹시; 2,5-디플루오로페녹시; 2,6-디플루오로페녹시; 3,4-디플루오로페녹시; 3,5-디플루오로페녹시; 2,3,6-트리플루오로페녹시; 및 2,3,5-트리플루오로페녹시로부터 선택된다. 일부 이러한 구체예에서, R5a는 2-플루오로페녹시; 3 플루오로페녹시; 2,3-디플루오로페녹시; 2,5-디플루오로페녹시; 2,6-디플루오로페녹시; 3,5-디플루오로페녹시; 2,3,6-트리플루오로페녹시; 및 2,3,5-트리플루오로페녹시로부터 선택된다. 일부 이러한 구체예에서, R5a는 2,6-디플루오로페녹시 및 2,3,6-트리플루오로페녹시로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 본 발명은 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공하며, 여기에서, R5a는 -N(R8)2, 5 내지 12 원의 헤테로아릴, 및 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴로부터 선택되며, 여기에서, 5 내지 12 원의 헤테로아릴은 할로겐, C1-3　알킬, 및 C1-3　할로알킬로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 구성원으로 임의적으로 치환되며, 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴은 옥소, 할로겐, C1-3　알킬, 및 C1-3　할로알킬로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 구성원으로 임의적으로 치환된다.
일부 구체예에서, R5a는 5 내지 12 원의 헤테로아릴 또는 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴이다. R5a는 예를 들어, 피롤릴, 피리디닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 피라지닐, 트리아지닐, 인돌릴, 이소인돌릴 또는 퀴놀리닐일 수 있다. 일부 구체예에서, R5a는 테트라졸릴(예를 들어, 1H-테트라졸-1-일 또는 2H-테트라졸-2-일)이다. 일부 구체예에서, R5a는 6-옥소피리미딘-1(6H)-일이다. 일부 구체예에서, R5a는 테트라졸릴 또는 6-옥소피리미딘-1(6H)-일이며, R3은 (2-메톡시)프로판-2-일, 비치환된 페닐, 하나 이상의 할로겐, -N3, C1-4　할로알콕시, 및/또는 -NRcC(O)Rb으로 치환되는 페닐, 비치환된 피리디닐, 및 하나 이상의 할로겐, -N(Rc)2 및/또는 -N+(Rb)3으로 치환되는 피리디닐로부터 선택된다.
일부 구체예에서, R5a는 -N(R8)2이며, 여기에서, 각 R8은 독립적으로 선택된 C1-6　알킬이다. 이러한 구체예에서, 각 R8은 독립적으로, 예를 들어, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 2차-부틸, 3차-부틸, n-펜틸, 이소펜틸 또는 n-헥실일 수 있다. 일부 구체예에서, R5a는 디메틸아미노일 수 있다. 일부 구체예에서, R5a는 디메틸아미노이며, R3은 (2-메톡시)프로판-2-일, 비치환된 페닐, 하나 이상의 할로겐, -N3, C1-4　할로알콕시 및/또는 -NRcC(O)Rb로 치환되는 페닐, 비치환된 피리디닐, 및 하나 이상의 할로겐, -N(Rc)2 및/또는 -N+(Rb)3으로 치환되는 피리디닐로부터 선택된다.
일부 구체예에서, R5a는 -O-R6이며, 여기에서, R6은 C1-6　할로알킬이다. 이러한 구체예에서, R6은 예를 들어, 클로로메틸, 디클로로메틸, 트리클로로메틸, 플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리클로로에틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 펜타클로로에틸, 펜타플루오로에틸, 1,1,1,3,3,3-헥사클로로프로필, 1,1,1,3,3,3-헥사플루오로프로필, 기타 등등일 수 있다. 일부 구체예에서, R5a는 2,2,2-트리플루오로에톡시 및 1,1,1,3,3,3-헥사플루오로이소프로폭시로부터 선택된다. 일부 이러한 구체예에서, R3은 (2-메톡시)프로판-2-일, 비치환된 페닐, 하나 이상의 할로겐, -N3, C1-4　할로알콕시 및/또는 -NRcC(O)Rb로 치환되는 페닐, 비치환된 피리디닐, 및 하나 이상의 할로겐, -N(Rc)2 및/또는 -N+(Rb)3으로 치환되는 피리디닐로부터 선택된다.
일부 구체예에서, R5a는 -O-R6이며, 여기에서, R6은 5 내지 12 원의 헤테로아릴이며, 이는 할로겐, C1-3　알킬, 및 C1-3　할로알킬로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 구성원으로 임의적으로 치환된다. R5a가 -O-R6인 경우, 예를 들어, R6은 이속사졸릴, 옥사졸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 피리디닐, 옥사지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐일 수 있다. 일부 구체예에서, R5a는 -O-R6이며, R6은 피리딘-2-일, 피리딘-3-일, 피리딘-4-일, 이속사졸-3-일, 이속사졸-4-일, 이속사졸-5-일, 피리미딘-2-일, 피리미딘-4-일, 피리미딘-5-일 및 피리미딘-6-일로부터 선택된다. 일부 구체예에서, R5a는 -O-R6이며, R6은 이속사졸-3-일, 피리딘-3-일, 피리딘-4-일, 2,6-디메틸피리딘-5-일, 및 2-메틸피리미딘-5-일로부터 선택된다. 일부 구체예에서, R5a는 -O-R6이며, R6은 이속사졸-3-일, 피리딘-3-일, 피리딘-4-일, 2,6-디메틸피리딘-5-일, 및 2-메틸피리미딘-5-일로부터 선택되며, R3은 (2-메톡시)프로판-2-일, 비치환된 페닐, 하나 이상의 할로겐, -N3, C1-4　할로알콕시 및/또는 -NRcC(O)Rb로 치환되는 페닐, 비치환된 피리디닐, 및 하나 이상의 할로겐, -N(Rc)2 및/또는 -N+(Rb)3으로 치환되는 피리디닐로부터 선택된다.
일부 구체예에서, R5는 -CH2R5a 및 -CHS(O)(R5b)2로부터 선택된다. 일부 구체예에서, R5는 -CHS(O)(R5b)2 (예를 들어, 디메틸(옥소)-λ6-설파닐리덴)이다. 일부 구체예에서, R5는 -CH2R5a이며, R5a는 -S-R7 및 -SO2-R7로부터 선택되며, R7은 C1-6　알킬이다. 이러한 구체예에서, R7은 예를 들어, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, 3차-부틸, n-펜틸, 이소펜틸 또는 n-헥실일 수 있다. 일부 구체예에서, R5a는 메틸티오이다. 일부 구체예에서, R5a는 메틸설포닐이다. 일부 구체예에서, R5a는 메틸티오 또는 메틸설포닐이며, R3은 (2-메톡시)프로판-2-일, 비치환된 페닐, 하나 이상의 할로겐, -N3, C1-4　할로알콕시 및/또는 -NRcC(O)Rb로 치환되는 페닐, 비치환된 피리디닐, 및 하나 이상의 할로겐, -N(Rc)2 및/또는 -N+(Rb)3으로 치환되는 피리디닐로부터 선택된다.
일부 구체예에서, R5a는 -S-R7이며, R7은 5 내지 12 원의 헤테로아릴이며, 이는 할로겐, C1-3　알킬 및 C1-3　할로알킬로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 구성원으로 임의적으로 치환된다. R5a가 -S-R7인 경우, 예를 들어, R7은 이속사졸릴, 옥사졸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 피리디닐, 옥사지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐일 수 있다. 일부 구체예에서, R5a는 -S-R7이며, R7은 피리딘-2-일, 피리딘-3-일, 피리딘-4-일, 이속사졸-3-일, 이속사졸-4-일, 이속사졸-5-일, 피리미딘-2-일, 피리미딘-4-일, 피리미딘-5-일 및 피리미딘-6-일로부터 선택된다. 일부 구체예에서, R5a는 -S-R7이며, R7는 이속사졸-3-일, 피리딘-3-일, 피리딘-4-일, 2,6-디메틸피리딘-5-일 및 2-메틸피리미딘-5-일로부터 선택된다. 일부 구체예에서, R5a는 -S-R7이며, R7은 피리딘-3-일, 피리딘-4-일, 2,6-디메틸피리딘-5-일 및 2-메틸피리미딘-5-일로부터 선택되며, R3은 (2-메톡시)프로판-2-일, 비치환된 페닐, 하나 이상의 할로겐, -N3, C1-4　할로알콕시 및/또는 -NRcC(O)Rb로 치환되는 페닐, 비치환된 피리디닐, 및 하나 이상의 할로겐, -N(Rc)2 및/또는 -N+(Rb)3으로 치환되는 피리디닐로부터 선택된다.
일부 구체예에서, R5는 C1-6　할로알킬이다. R5는 예를 들어, 클로로메틸, 디클로로메틸, 트리클로로메틸, 플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리클로로에틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 펜타클로로에틸, 펜타플루오로에틸, 1,1,1,3,3,3-헥사클로로프로필, 1,1,1,3,3,3-헥사플루오로프로필, 기타 등등일 수 있다. 일부 구체예에서, R5는 디플루오로메틸이다. 일부 구체예에서, R5는 디플루오로메틸이며, R3은 (2-메톡시)프로판-2-일, 비치환된 페닐, 하나 이상의 할로겐, -N3, C1-4　할로알콕시 및/또는 -NRcC(O)Rb로 치환되는 페닐, 비치환된 피리디닐, 및 하나 이상의 할로겐, -N(Rc)2 및/또는 -N+(Rb)3으로 치환되는 피리디닐로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 본 발명은 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공하며, 여기에서, R5는 할로알킬이다. 예를 들어, R5는 클로로메틸, 디클로로메틸, 트리클로로메틸, 디플루오로메틸 또는 트리플루오로메틸일 수 있다.
일부 구체예에서, 본 발명은 하기 표 1에 제시된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
표 1. 리신 진지파인 억제제.
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
일부 구체예에서, 화합물은
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
및 이의 약학적으로 허용되는 염으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 화합물은
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
및 이의 약학적으로 허용되는 염으로부터 선택된다.
본원에 기재된 화합물 및 이를 사용하는 방법은 기재된 화합물의 치료적 활성 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체의 제조 및 용도를 포함한다. 이러한 화합물의 모든 그러한 거울상이성질체 및 부분입체이성질체는 본 발명의 범위 내에 포함된다. 그러한 화합물은 혼합물(예를 들어, 라세미 혼합물)로서 또는 분리된 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체로서 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물은 양전자 방출 단층촬영(positron emission tomography: PET) 및 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영(single-photon emission computed tomography: SPECT)과 같은 진단 영상 적용에서 사용하기 위한 방사성핵종을 포함하도록 제조될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 Kgp 억제제는 산소-15(15O), 질소-13(13N), 탄소-11(11C), 요오드-131(131I), 및 불소-18(18F)로부터 선택되는 하나 이상의 방사성핵종을 포함하도록 제조될 수 있다. 그러한 방사성표지된 화합물은 PET 영상에 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 중수소화 형태(즉, 하나 이상의 수소 원자 대신에 하나 이상의 중수소 원자인 2H를 지님), 삼중수소화 형태(즉, 하나 이상의 수소 원자 대신에 하나 이상의 삼중수소 원자인 3H를 지님) 또는 14C-표지된 형태(즉, 하나 이상의 탄소 원자 대신에 하나 이상의 14C 원자를 지님)로 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물은 도식 1에 도시된 바와 같이 출발 물질 A1을 사용하여 제조될 수 있다. A1에서, 바람직한 R9 및 R1c 기는 서로 영향을 미치지 않는 화학적 조건을 이용하여 처리될 수 있다. 예를 들어, R1c = 벤질은 수소 및 팔라듐-탄소 촉매에 의해 제거될 수 있으나, R1c는 트리플루오로아세트산에 의해 영향을 받지 않는 반면, R9 = t-부틸은 트리플루오로아세트산에 의해 제거될 수 있으나, R9는 수소 및 팔라듐-탄소 촉매에 의해 영향을 받지 않는다. 다른 적절한 R9와 R1c의 유리한 조합 및 이들의 선택적 개질을 위한 방법은 당업계에 공개되어 있다.
도식 1
Figure pct00040
A1은 유기 용매(예를 들어, DMF) 중에서 카르복실산 R3CO2H, 및 라세미화 억제제(예를 들어, HOBt), 및 탈수제(예를 들어, EDAC)로 처리되어 A2를 생성시킬 수 있다. 대안적으로, A1은 유기 용매(예를 들어, CH2Cl2) 중에서 R3COX(여기서, X는 이탈 기(예를 들어, 클로라이드)임), 및 유기 염기(예를 들어, Et3N)로 처리되어 A2를 생성시킬 수 있다. 다양한 적용가능한 카르복실산(R3CO2H) 및 이의 유도체(R3COX)는 시중에서 입수가능하거나, 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. R9는 A3을 생성시키는 적절한 화학 조건에 의해 제거될 수 있다. A3은 클로로포르메이트(예를 들어, 이소부틸 클로로포르메이트, 에틸 클로로포르메이트, 기타 등등) 이어서, 디아조메탄과 반응하여 A4를 제공할 수 있다. A4는 하이드로할릭산(즉, HX, 여기에서, X는 할로겐, 예컨대, Cl, Br, 또는 I임)으로의 처리를 통해 A5로 전환될 수 있다. 염기의 존재하에 화합물 R5a-H(예를 들어, 할로겐화된 페놀 또는 헤테로방향족 화합물)을 사용한 A5로부터의 할라이드의 이동은 보호된 화합물 A6을 제공할 수 있으며, 이는 탈보호되어 화학식 I의 생성물을 제공할 수 있다. 대안적으로, 카르복실산 A3은 N-아실화되고 고리화되어 상응하는 5(4H)-옥사졸론을 제공할 수 있다. 옥사졸론은 α-플루오르화된 카르복실산(예를 들어, 트리플루오로아세트산 무수물)의 무수물과 추가로 반응하여 C-아실화된 5(4H)-옥사졸론을 제공할 수 있으며, 이는 옥살산을 사용하여 탈카르보닐화되어 화학식 I의 화합물(여기에서, R5는 할로알킬임)을 형성한다(참조 [Kolb, et al. Liebigs . Ann. Chem ., 1990, pp. 1-6; Kolb, et al. Tet. Lett . 1986, (27): pp. 1579-1582 and pp. 4437-4440]).
화학식 (I)의 특정 예의 제조는 단백질에서 발생하는 어떠한 아미노산에도 존재하지 않는 측쇄를 특징으로 하는 비자연적인 아미노산의 초기 제조를 필요로 할 것이다. 하기 요약된 바와 같은 가장 유용하고 중요한 방법 F1-4을 포함하여, 비자연적인 측쇄를 특징으로 하는 아미노산의 제조에 대하여 매우 다양한 방법들이 개시되어 있다.
F1-3에 예시되어 있지는 않지만, 아민 및 카르복실레이트 기는 전형적으로 이러한 방법의 적용 전에 보호되며, 이러한 보호는 비자연적인 측쇄의 구성 후에 제거된다. F1에서, 자연적인 측쇄 (R)는 변형되어 비자연적인 측쇄 (R')를 형성시킨다. 자연적인 아미노산 세린, 글루탐산 및 메티오닌은 특히 화학식 (I) 및 (II)의 특정 예의 제조를 위한 것이다. F2에서, 금속화된 글리신 유도체는 알킬화제 (R'X)로 처리되어 비자연적인 측쇄 (R')를 정착시킨다. 일부 경우에, 금속화된 글리신 유도체는 강한 염기성 금속화제(예를 들어, 리튬 디이소프로필아미드 또는 포타슘 t-부톡사이드)로 글리신 유도체를 처리함으로써 생성된다. 다른 경우에, 출발 글리신 유도체는 훨씬 덜 염기성인 금속화제(예를 들어, 포타슘 카르보네이트)가 만족스럽도록 충분히 산성이다. 후자의 경우에, 금속화된 글리신 유도체는 F2에 도시된 공유 결합된 화학종보다는 해리된 이온 쌍으로 존재할 수 있다. F3에서, 금속화된 알라닌 유도체는 알킬화제 (R'X)로 처리되어 비자연적인 측쇄 (R')를 정착시킨다. 대부분의 경우에, 금속화된 알라닌 유도체는 낮은 원자가 금속(예를 들어, 아연 가루(zinc dust))로 할로겐화된 알라닌 유도체를 처리함으로써 생성된다. 다수 경우에, 가용성 팔라듐 촉매가 F3를 가속화시키기 위해 사용된다. F4에서, 알데하이드 (R'CHO)는 암모니아의 공급원 및 시아니드의 공급원과 반응되어 아미노-니트릴을 생성시키고, 이는 후속적으로 가수분해되어 비자연적인 측쇄 (R')를 특징으로 하는 아미노-산을 생성시킨다.
Figure pct00041
F1-3에 예시되어 있지는 않지만, 아민 및 카르복실레이트 기는 전형적으로 이러한 방법의 적용 전에 보호되며, 이러한 보호는 비자연적인 측쇄의 구성 후에 제거된다. F1에서, 자연적인 측쇄 (R)는 변형되어 비자연적인 측쇄 (R')를 형성시킨다. 자연적인 아미노산 세린, 글루탐산 및 메티오닌은 특히 화학식 (I) 및 (II)의 특정 예의 제조를 위한 것이다. F2에서, 금속화된 글리신 유도체는 알킬화제 (R'X)로 처리되어 비자연적인 측쇄 (R')를 정착시킨다. 일부 경우에, 금속화된 글리신 유도체는 강한 염기성 금속화제(예를 들어, 리튬 디이소프로필아미드 또는 포타슘 t-부톡사이드)로 글리신 유도체를 처리함으로써 생성된다. 다른 경우에, 출발 글리신 유도체는 훨씬 덜 염기성인 금속화제(예를 들어, 포타슘 카르보네이트)가 만족스럽도록 충분히 산성이다. 후자의 경우에, 금속화된 글리신 유도체는 F2에 도시된 공유 결합된 화학종보다는 해리된 이온 쌍으로 존재할 수 있다. F3에서, 금속화된 알라닌 유도체는 알킬화제 (R'X)로 처리되어 비자연적인 측쇄 (R')를 정착시킨다. 대부분의 경우에, 금속화된 알라닌 유도체는 낮은 원자가 금속(예를 들어, 아연 가루(zinc dust))로 할로겐화된 알라닌 유도체를 처리함으로써 생성된다. 다수 경우에, 가용성 팔라듐 촉매가 F3를 가속화시키기 위해 사용된다. F4에서, 알데하이드 (R'CHO)는 암모니아의 공급원 및 시아니드의 공급원과 반응되어 아미노-니트릴을 생성시키고, 이는 후속적으로 가수분해되어 비자연적인 측쇄 (R')를 특징으로 하는 아미노-산을 생성시킨다.
비자연적인 측쇄를 특징으로 하는 아미노산을 제조하는 적절한 방법의 적용 후에, 이러한 아미노산은 상기 기술된 바와 같이 적절하게 보호될 수 있으며, 이후 적절한 방법이 적용되어 중간체 및 생성물을 생성시킬 수 있으며, 여기에서 리신 측쇄는 비자연적인 측쇄로 대체되었다. 따라서, 적합한 방법이 화학식 (I)에 대하여 명시된 CH2AC(R2a)(R2b)CH2N(R1a)(R1b)의 변형예를 제공하는데 이용가능하다.
IV. 리신 진지파인 억제제의 약학적 조성물 및 투여
관련 양태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
약학적 조성물은 약학 및 약물 전달 기술 분야에 널리 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 조성물을 제조하는 방법은 하나 이상의 부성분을 함유하는 담체와 관련된 활성 성분을 취하는 단계를 포함한다. 약학적 조성물은 전형적으로 액체 담체 또는 미분된 고체 담체, 또는 이 둘 모두와 관련된 활성 성분을 균일하게 그리고 친밀하게 취하고, 이후, 필요 시, 생성물을 요망되는 제형으로 형상화함으로써 제조된다. 조성물은 단위 투여형으로 알맞게 제조되고/거나 패키징(packaging)될 수 있다.
본 발명의 화합물을 함유하는 약학적 조성물은 경구 용도로 제형화될 수 있다. 경구 투여에 적합한 조성물은 정제, 트로키(troche), 로젠지(lozenge), 수성 또는 지성 현탁액, 분산가능한 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 또는 연질 캡슐, 시럽, 엘릭서(elixir), 용액, 구강 패치, 경구 겔, 츄잉 검(chewing gum), 츄러블 정제(chewable tablet), 발포 분말(effervescent powder), 및 발포 정제를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 경구 투여용 조성물은 당업자에게 공지된 임의의 방법에 따라 제형화될 수 있다. 그러한 조성물은 약학적 품질이 좋고 맛이 좋은 제조물을 제공하기 위해서 감미제, 향미제, 착색제, 항산화제, 및 보존제로부터 선택되는 하나 이상의 제제를 함유할 수 있다.
정제는 일반적으로 불활성 희석제, 예컨대, 셀룰로스, 실리콘 디옥사이드, 알루미늄 옥사이드, 칼슘 카르보네이트, 소듐 카르보네이트, 글루코스, 만니톨, 소르비톨, 락토스, 칼슘 포스페이트 및 소듐 포스페이트; 과립화제 및 붕해제, 예컨대, 옥수수 전분 및 알긴산; 결합제, 예컨대, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 전분, 젤라틴 및 아카시아; 및 윤활제, 예컨대, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 및 탈크를 포함하는 비-독성의 약학적으로 허용되는 부형제와 혼합된 활성 성분을 함유한다. 정제는 코팅되지 않거나, 위장관에서 분해 및 흡수를 지연시키고, 그에 의해서 보다 긴 기간에 걸쳐 지속된 작용을 제공하기 위해서 장용으로 또는 달리 공지된 기술에 의해 코팅될 수 있다. 예를 들어, 시간 지연 물질, 예컨대, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트가 사용될 수 있다. 정제는 또한 제어된 방출을 위한 삼투 펌프 조성물을 형성시키기 위해 공지된 기술에 따라 반-투과성 막 및 임의의 폴리머 삼투제로 코팅될 수 있다.
경구 투여용 조성물은 활성 성분이 불활성 고체 희석제(예컨대, 칼슘 카르보네이트, 칼슘 포스페이트, 또는 카올린)와 혼합되는 경질 젤라틴 캡슐로서, 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매질(예컨대, 피넛유, 액체 파라핀, 또는 올리브유)와 혼합되는 연질 젤라틴 캡슐로서 제형화될 수 있다.
Kgp 억제제는 또한 용액, 연고, 크림, 겔 또는 현탁액으로서 뿐만 아니라 구강 세척제(mouth wash) 및 점안액 등으로 국소적으로 투여될 수 있다. 또 다른 추가의 Kgp 억제제의 경피 전달은 이온영동 패치 등에 의해 달성될 수 있다.
Kgp 억제제를 함유하는 약학적 조성물은 또한 멸균 주사가능한 수성 또는 유성 용액 및 현탁액의 형태로 존재할 수 있다. 멸균 주사가능한 제조물은 물, 링거액, 및 등장성 염화나트륨 용액을 포함한 비-독성의 비경구-허용되는 비히클, 및 1,3-부탄 디올과 같은 허용되는 용매를 사용하여 제형화될 수 있다. 또한, 멸균된 고정유가 용매 또는 현탁 매질로서 사용될 수 있다. 이러한 목적 상, 합성 모노글리세라이드, 디글리세라이드 또는 트리글리세라이드를 포함한 임의의 완화성 고정유가 사용될 수 있다.
일부 구체예에서, Kgp 억제제는 폴리머 예컨대, 플루로닉(Pluronic) F127과 제형화될 수 있으며, 피하 전달될 수 있다. 플루로닉은 체온에서 고형화되는 하이드로겔이며, 수일 내지 수주일 지속되는 기간에 걸쳐 연장된 약물 전달을 제공할 수 있다.
수성 현탁액은 현탁제, 예컨대, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 유성-프로필메틸셀룰로스, 소듐 알지네이트, 폴리비닐-피롤리돈, 검 트래거캔스 및 검 아카시아; 분산제 또는 습윤제, 예컨대, 레시틴, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트 및 폴리에틸렌 소르비탄 모노올레이트; 및 보존제, 예컨대, 에틸, n-프로필 및 p-하이드록시벤조에이트를 포함하지만 이로 제한되지 않는 부형제와의 혼합된 하나 이상의 Kgp 억제제를 함유할 수 있다. 분산가능한 분말 및 과립(물의 첨가에 의한 수성 현탁액의 제조에 적합한)은 분산제, 습윤제, 현탁제 또는 이들의 조합물과 혼합된 하나 이상의 Kgp 억제제를 함유할 수 있다. 유성 현탁액은 식물성 오일(예를 들어, 땅콩 기름(arachis oil), 올리브유, 참기름 또는 코코넛유) 또는 미네랄 오일(예를 들어, 액체 파라핀) 중에 Kgp 억제제를 현탁시킴으로써 제형화될 수 있다. 유성 현탁액은 하나 이상의 증점제, 예를 들어, 밀납(beeswax), 경질 파라핀 또는 세틸 알콜을 함유할 수 있다. 이러한 조성물은 아스코르브산과 같은 항산화제의 첨가에 의해 보존될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 또한 수중유 에멀젼의 형태로 존재할 수 있다. 유성 상은 식물성 오일, 예를 들어, 올리브유 또는 땅콩 기름, 또는 미네랄 오일, 예를 들어, 액체 파라핀 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 적합한 에멀젼화제는 자연-발생 검, 예컨대, 검 아카시아 또는 검 트래거캔스; 자연-발생 인지질, 예컨대, 소이 레시틴; 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 에스테르 또는 부분 에스테르, 예컨대, 소르비탄 모노올레이트; 및 에틸렌 옥사이드와 상기 부분 에스테르의 축합 생성물, 예컨대, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트일 수 있다.
능동적 운반을 증진시키는 혼성 분자 또는 나노입자의 사용은 혈액 뇌 장벽(blood brain barrier) 운반을 증가시키기 위해 특정 구체예에서 사용될 수 있다. 예를 들어, LPR-1 수용체, 트랜스페린 수용체, EGF-유사 성장 인자 또는 글루타티온 운반체를 포함하여, 혈액 뇌 장벽을 가로질러 단백질을 운반하는 수용체에 결합되는 리포솜, 단백질, 엔지니어링된 펩티드 화합물 또는 항체는 뇌로의 침투를 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 삼투성 개구, 초음파, 레이저, 접형구개 결절종 자극(sphenopalantine ganglion stimulation), 펌프를 통한 직접적인 두개내, 경막내 또는 심실내 전달을 포함하는 물리적 기술이 이용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 또한 P. 진지발리스 감염과 관련된 질병의 치료에 유용한 하나 이상의 추가의 활성제를 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명은 알츠하이머병의 치료를 위한 하나 이상의 추가의 활성제와 조합되어 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 Kgp 억제제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 알츠하이머병의 치료를 위해 여러 치료법이 개발되고 임상적으로 이용되고 있다. 치료 전략은 β-아밀로이드 및 타우(하기에 더욱 상세하기 기재되는 바와 같은)의 순환 수준을 감소시키고, 미세소관을 안정화시키고, 죽상경화판을 제거하고, 자가포식현상을 조절하고, 신경전달물질 수준을 조절하고, GABA(A) α5 수용체를 억제함을 포함한다. 그러한 치료법은 알츠하이머병에 걸린 대상체에서 인지 기능을 유지시키고/거나 회복하고; 인지 기능의 감소를 늦추고; 신경가소성(neuroplasticity) 및 뇌의 회복을 증진시킬 수 있다.
약학적 조성물 중에 Kgp 억제제와 조합될 수 있는 활성제는 항생제(즉, 살균성 화합물 및 정균성 화합물), 콜린에스테라제 억제제, 알파-7 니코틴 수용체 조절제, 세로토닌 조절제, NMDA 조절제, Aβ-표적 치료제, ApoE-표적 치료제, 미세아교세포-표적 치료제, 혈액/뇌 관문-표적 치료제, 타우-표적 치료제, 보체(complement)-표적 치료제 및 항염증제를 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
임의의 적합한 항생제는 본 발명의 약학적 조성물 중에서 하나 이상의 Kgp 억제제와 조합될 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명은 하나 이상의 Kgp 억제제 및 25 μg/ml 미만의 P. 진지발리스 MIC50를 지니는 항생제를 함유하는 약학적 조성물을 제공한다. 예를 들어, 항생제의 P. 진지발리스 MIC50는 20 μg/ml 미만, 15 μg/ml 미만, 10 μg/ml 미만, 8 μg/ml 미만, 6 μg/ml 미만 또는 5 μg/ml 미만일 수 있다. 일부 구체예에서, 항생제의 P. 진지발리스 MIC50는 1 μg/ml 미만이다. 일부 구체예에서, 항생제의 P. 진지발리스 MIC50는 0.2 μg/ml 미만이다.
살균성 및 정균성 화합물의 예는 퀴놀론(예를 들어, 목시플록사신, 제미플록사신, 시프로플록사신, 오플락사신, 트로바플록사신, 및 시타플록사신 등), β-락탐(예를 들어, 페니실린, 예컨대, 아목시실린, 아목사실린-클라불라네이트, 피페라실린-타조박탐, 및 페니실린 G 등; 및 세팔로스포린, 예컨대, 세프트리악손 등), 마크로리드(예를 들어, 에리트로마이신, 아지트로마이신, 및 클라리트로마이신 등), 카르바페넴(예를 들어, 도리페넴, 이미페넴, 메로피넴, 및 에르타페넴 등), 티아졸리드(예를 들어, 티족사니딘, 니타족사니딘, RM 4807, 및 RM 4809 등), 테트라사이클린(예를 들어, 테트라사이클린, 미노사이클린, 독시사이클린, 및 에라바사이클린 등), 클린다마이신, 메트로니다졸, 및 사트라니다졸을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 살균성 및 정균성 화합물은 또한 혐기성의 그람-음성 박테리아에 의한 생물막의 형성을 억제하거나 달리 방해하는 제제를 포함하고; 그러한 제제는 옥산텔, 모란텔, 및 티아벤다졸 등을 포함한다. 본 발명의 조성물은 하나 이상의 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6개 이상의) 살균성/정균성 화합물과 하나 이상의 Kgp 억제제를 함유할 수 있다. 살균성/정균성 화합물을 함유하는 조성물은 추가로 클로르헥시딘(예를 들어, 클로르헥시딘 디글루코네이트)를 단독으로 또는 아연 화합물(예를 들어, 아연 아세테이트)와 함께 함유할 수 있으며, 또한 투여되는 항생제와 함께 사용될 수 있다.
일부 구체예에서, 페니실린(예를 들어, 아목시실린)과 메트로니다졸의 조합물 또는 페니실린(예를 들어, 아목시실린), 메트로니다졸 및 테트라사이클린의 조합물이 사용된다. 일부 구체예에서, 항생제는 미노사이클린, 독시사이클린, 메트로니다졸, 아목시실린, 클린다마이신, 오구멘틴, 사트라니다졸, 및 이들의 조합물로부터 선택된다.
적합한 콜린에스테라제 억제제의 예는 도네페질, 도네페질/메만틴, 갈란타민, 리바스티그민, 및 타크린 뿐만 아니라 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 적합한 세로토닌 조절제의 예는 이달로피르딘, RVT-101, 시탈로프람, 에스시탈로프램, 플루옥세틴, 플루복사민, 파록세틴 및 세르트라닌 뿐만 아니라 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 적합한 알파-7 니코틴 수용체 조절제의 예는 알파-7 효능제, 예컨대, 엔세니클린 및 APN1125를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 적합한 NMDA 조절제는 NMDA 수용체 길항제, 예컨대, 메만틴 및 이들의 유도체를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본 발명의 약학적 조성물은 또한 신경 질환과 관련된 생체분자 표적에 대한 활성제를 함유할 수 있다. 그러한 표적은 베타 아밀로이드 펩티드(베타 아밀로이드, 아베타 또는 Aβ로도 지칭됨), 아폴리포프로테인 E(ApoE로도 지칭됨) 및 미세소관-관련 타우(타우 단백질 또는 간단히 타우로도 지칭됨)을 포함한다.
Aβ-표적화된 치료제는 다른 것들 중에서 Aβ 생산의 억제제(예컨대, 베타-세크레타아제 억제제, 감마-세크레타아제 억제제, 알파-세크레타아제 활성제), Aβ 응집의 억제제, Aβ 올리고머화의 억제제 및 Aβ 제거의 상향조절제를 포함한다(예를 들어, 문헌[Jia, et al. BioMed Research International, 2014. Article ID 837157, 22pages] 참조). Aβ-표적화된 치료제의 예는 항체, 피오글리타존, 베가세스타트, 아토르바스타틴, 심바스타틴, 에타졸레이트 및 트라미프로세이트 뿐만 아니라 이이 약학적으로 허용되는 염을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
ApoE-표적화된 치료제의 예는 레티노이드 X 수용체 효능제(문헌 [Cramer, et al., Science 2012. 335(6075): 1503-1506] 참조) 및 리우(Liu) 등에 의해 개시된 그 밖의 치료제(문헌 [Nat Rev Neurol . 2013. 9(2): 106-118] 참조)를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 타우-표적화된 치료제는 메틸티오니늄, 류코-메틸티오니늄, 항체 및 리(Lee) 등에 의해 개시된 치료제(문헌 [Cold Spring Harb Perspect Med 2011; 1:a006437] 참조)를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본 발명의 약학적 조성물은 또한 보체-표적화된 치료제를 함유할 수 있다. 그러한 치료제는 선천성 면역 반응에 연루되는 보체 시스템의 성분을 표적으로 한다. 보체 표적화된 치료제는 리클린(Ricklin) 및 람브리스(Lambris)에 의해 기재된 치료제(문헌 [Nat. Biotechnology 2007. 25(11): 1265-1275] 참조)를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
적합한 항-염증제의 예는 NSAID, 예컨대, 아파존, 디클로페낙, 이부프로펜, 인도메타신, 케토프로펜, 나부메톤, 나프록센, 피록시캄 및 설린닥뿐만 아니라 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
V. 진지파인을 억제하고, P. 진지발리스 감염 관련 질환을 치료하는 방법
또 다른 구체예에서, 본 발명은 진지파인을 억제하는 방법을 제공한다. 방법은 진지파인을 유효량의 본원에 기술된 바와 같은 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 진지파인은 리신 진지파인(즉, Kgp 또는 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 및/또는 다른 펩티드 서열 변형을 함유하는 변이체)이다. 진지파인 억제는 일반적으로 화합물의 부재하의 진지파인 활성과 비교하여 진지파인의 활성을 감소시키기에 충분한 양의 화합물과 진지파인을 접촉시키는 것을 포함한다. 예를 들어, 진지파인과 진지파인 억제제의 접촉은 약 1% 내지 약 99% 진지파인 억제를 발생시킬 수 있다(즉, 억제된 진지파인의 활성은 화합물의 부재하의 진지파인 활성의 99% 내지 1% 범위이다). 진지파인 억제 수준은 약 1% 내지 약 10%, 또는 약 10% 내지 약 20%, 또는 약 20% 내지 약 30%, 또는 약 30% 내지 약 40%, 또는 약 40% 내지 약 50%, 또는 약 50% 내지 약 60%, 또는 약 60% 내지 약 70%, 또는 약 70% 내지 약 80%, 또는 약 80% 내지 약 90%, 또는 약 90% 내지 약 99%의 범위일 수 있다. 진지파인 억제 수준은 약 5% 내지 약 95%, 또는 약 10% 내지 약 90%, 또는 약 20% 내지 약 80%, 또는 약 30% 내지 약 70%, 또는 약 40% 내지 약 60%의 범위일 수 있다. 일부 구체예에서, 진지파인과 본원에 기술된 바와 같은 화합물의 접촉은 완전한(즉, 100%) 진지파인 억제를 발생시킬 것이다.
상술된 바와 같이, P. 진지발리스로의 감염 및 진지파인 활성은 치주병, 알츠하이머병 및 다른 뇌 장애, 심혈관 질환, 당뇨병, 암, 간 질환, 신장 질환, 조산, 관절염, 폐렴 및 다른 장애의 발병과 연관된다(문헌 [Bostanci, et al. FEMS Microbiol Lett, 2012. 333(1): 1-9; Ghizoni, et al. J Appl Oral Sci , 2012. 20(1): 104-12; Gatz, et al. Alzheimers Dement, 2006. 2(2): 110-7; Stein, et al. J Am Dent Assoc, 2007. 138(10): 1314-22; quiz 1381-2; Noble, et al. J Neurol Neurosurg Psychiatry, 2009. 80(11): 1206-11; Sparks Stein, et al. Alzheimers Dement , 2012. 8(3): 196-203; Velsko, et al. PLoS ONE, 2014. 9(5): e97811; Demmer, et al. J Dent Res, 2015. 94(9S): 201-S-11S; Atanasova and Yilmaz. Molecular Oral Microbiology, 2014. 29(2): 55-66; Yoneda , et al. BMC Gastroenterol, 2012. 12: 16] 참조).
아르기닌 진지파인 A(RgpA), 아르기닌 진지파인 B(RgpB) 및 리신 진지파인(Kgp)을 포함하는, P. 진지발리스에 의해 생성된 세포외 프로테아제는 또한 연결 조직 및 혈장에서 광범위한 단백질(예를 들어, 콜라겐, 면역글로불린 및 프로테이나제 억제제, 등)을 분해할 수 있다. 진지파인은 전신 순환 및/또는 활막세포 및 연골세포로 유입될 수 있으며, 이들은 또한 칼리크레인-키닌 캐스케이드, 혈액 응고 및 숙주 방어 시스템에 대한 파괴를 초래할 수 있다. 관절 및 순환계에 진지파인을 갖는 환자는 골관절염의 원인이 활막 세포 및/또는 연골세포의 진지파인-유도된 사멸 대상일 수 있다.
최근 RgpB 및 Kgp가 인간 및 개 관절을 침투여하여, 골관절염의 발병에 원인이 됨을 발견하였다. P. 진지발리스 및 진지파인은 많은 경로를 통해 관절 조직에 침투할 수 있는 것으로 여겨진다. 진지파인은 분비되거나, P. 진지발리스의 외막 표면으로 이동되거나, 박테리아에 의해 외막 수포에 방출될 수 있다. P. 진지발리스는 종래에 치주 조직, 관상동맥, 대동맥, 및 최근에는 간에서 확인되었으며 - P. 진지발리스 및/또는 진지파인의 이러한 임의의 기생위치로부터 전신 순환으로의 방출은 P. 진지발리스 및/또는 진지파인의 관절로의 이동을 초래할 수 있다. 문헌 [Travis, et al. Adv Exp Med Biol , 2000. 477: 455-65; Byrne, et al. Oral Microbiol Immunol , 2009. 24(6): 469-77; Mahendra, et al. J Maxillofac Oral Surg, 2009. 8(2): 108-13; Stelzel. Periodontol , 2002. 73(8): 868-70; Ishikawa, et al. Biochim Biophys Acta , 2013. 1832(12): 2035-2043] 참조.
P. 진지발리스 및/또는 진지파인은 또한, 혈액/관절 장벽을 보호하는 내피 세포를 분해함으로써 또는 관절에 대한 외상 사건, 예컨대, 반달연골 손상에 의해 관절로 유입될 수 있으며, 이는 관절 조직의 완전성을 영구적으로 또는 일시적으로 감소시킨다. 예를 들어, 외상성 관절 손상에서 이러한 파괴는 감염된 개체에서 P. 진지발리스 및/또는 진지파인의 침입 및 차후 만성 골관절염의 발병의 원인이 될 수 있다. 축구와 같이 접촉이 있는 스포츠의 선수를 포함하는 외상성 관절 손상의 위험이 높은 사람은 진지파인 억제제로 예방적으로 처리되어 외상성-관련 골관절염의 위험을 감소시킬 수 있다.
P. 진지발리스 및 진지파인은 또한, 능동 수송, 수동 수송 또는 대식세포 전달을 포함하는 다른 메카니즘을 통해 관절에 도달할 수 있다. 이러한 메카니즘 중 임의의 메카니즘으로부터 발생한 골관절염은 단일 관절에 제한될 수 있거나 다중 관절에 존재할 수 있다.
인간과 유사하게, P. 진지발리스 감염 및 치주병은 성견 및 성묘에서 발생하는 가장 일반적인 감염성 질환 중 하나이다. P. 진지발리스 감염 및 관절 및 순환계에 진지파인을 갖는 개 및 고양이는 진지파인-유도된 세포 사멸로 인해 치주병 및 골관절염을 앓을 수 있으며, 이는 본 발명의 방법에 따라 치료되거나 예방될 수 있다. 노화된 개는 전십자인대(ACL)의 퇴행과 관련된 일반적인 염증성 무릎 관절염을 포함하는 골관절염의 많은 특징을 자연스럽게 발생시킨다. 염증성 무릎 관절염 및 ACL 퇴행을 갖는 개에 대한 뮈어(Muir) 등의 연구는 앓고 있는 개의 무릎 관절 중 37%에서 다양한 박테리아 종으로부터의 DNA를 검출하였다. 뮈어 등은 박테리아가 개의 염증성 관절염의 발병기전에서 중요한 요인 인자일 수 있다는 가설을 세웠다. 뮈어 등의 연구에서, P. 진지발리스로부터의 DNA는 개 관절에서 검출되지 않았다. 문헌 [Muir, et al. Microb Pathog , 2007. 42(2-3): 47-55] 참조. 그러나, 인간과 유사하게, P. 진지발리스는 성견에게 영향을 미치는 일반적인 구강 병원체이며, 균혈증의 결과로서 구강으로부터 관절 조직으로 잠재적으로 전위될 수 있다. P. 진지발리스는 시험관내에서 연골세포를 감염시켜 연골세포 아폽토시스를 초래하는 것으로 입증되었으며, 이는 개 및 인간 둘 모두에서 골관절염의 연골 소실 경로를 나타낸다. 문헌 [Rohner, et al. Calcif Tissue Int , 2010. 87(4): p. 333-40; Houle, et al. FEMS Microbiol Lett , 2003. 221(2): p. 181-5; Kataoka, et al. FASEB J, 2014. 28: 3564-3578; Pischon, et al. Ann Rheum Dis , 2009. 68(12): p. 1902-7] 참조.
따라서, Kgp 억제제는 P. 진지발리스에 의해 초래되거나 이에 의해 다르게 영향을 받은 질환 및 질병, 예컨대, 뇌 장애를 치료하는데 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 또 다른 양태는 P. 진지발리스 감염과 관련된 질병 또는 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 상기 기술된 바와 같은 유효량의 본 발명의 화합물 또는 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 포유동물, 예를 들어, 인간 또는 동물(예를 들어, 개)의 뇌에서 활성 Kgp를 억제하고, 세포보호적이거나 신경보호적이다. "신경보호적"은 화합물이 뉴런의 비정상적인 변화 또는 뉴런의 사멸을 예방한다는 것을 의미한다. 따라서, 본 발명의 화합물은 예를 들어, 뇌 장애(예를 들어, 신경변성 질환(예를 들어, 알츠하이머병, 다운증후군, 간질, 자폐증, 파킨슨병, 본태성진전, 전측두엽 치매, 진행성 핵상 마비, 근위축성 측삭 경화증, 헌팅톤병, 다발성 경화증, 경증 인지 장애, 연령 관련 기억 상실, 만성 외상성 뇌병증, 뇌졸중, 뇌혈관 질환, 루이소체병, 다계통 위축증, 정신분열증 및 우울증 등), 당뇨병, 심혈관 질환, 관절염, 류마티스 관절염, 골관절염, 감염성 관절염, 건선 관절염, 망막 장애(예를 들어, 연령 관련 황반변성) 및 녹내장의 치료에 유용하다.
일부 구체예에서, 질병 또는 질환은 뇌 장애, 치주병, 당뇨병, 심혈관 질환, 관절염, 류마티스 관절염, 골관절염, 조산, 폐렴, 암, 신장 질환, 간 질환, 망막 장애, 및 녹내장으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 질환 또는 질병은 뇌 장애이다.
일부 구체예에서, 뇌 장애는 알츠하이머병, 다운증후군, 간질, 자폐증, 파킨슨병, 본태성진전, 전측두엽 치매, 진행성 핵상 마비, 근위축성 측삭 경화증, 헌팅톤병, 다발성 경화증, 경증 인지 장애, 연령 관련 기억 상실, 만성 외상성 뇌병증, 뇌졸중, 뇌혈관 질환, 루이소체병, 다계통 위축증, 정신분열증 및 우울증으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 뇌 장애는 알츠하이머병이다.
일부 구체예에서, 방법은 추가로 콜린에스테라제 억제제, 세로토닌 조절제, NMDA 조절제, Aβ 표적화된 치료제, ApoE 표적화된 치료제, 미세아교세포 표적화된 치료제, 혈액 뇌 장벽 표적화된 치료제, 타우 표적화된 치료제, 보체 표적화된 치료제 및 항염증제로부터 선택되는 하나 이상의 활성제를 대상체에 투여함을 포함한다.
일부 구체예에서, 질병 또는 질환은 치주병이다. 일부 구체예에서, 질병 또는 질환은 간 질환이다. 일부 구체예에서, 간 질환은 비-알콜성 지방간염이다. 일부 구체예에서, 질병 또는 질환는 망막 장애이다. 일부 구체예에서, 망막 장애는 연령-관련 황반변성이다.
일부 구체예에서, 질병 또는 질환은 암이다. 일부 구체예에서, 암은 유방암, 구강암, 췌장암 또는 다형성아교모세포종이다.
본원에 기재된 바와 같은 Kgp 억제제는 본 발명의 방법에서 임의의 적합한 용량으로 투여될 수 있다. 일반적으로, Kgp 억제제는 대상체 체중의 킬로그램 당 약 0.1 밀리그램 내지 약 1000 밀리그램 범위의 용량(즉, 약 0.1-1000 mg/kg)으로 투여된다. Kgp 억제제의 용량은 예를 들어, 약 0.1-1000 mg/kg, 또는 약 1-500 mg/kg, 또는 약 25-250 mg/kg, 또는 약 50-100 mg/kg일 수 있다. Kgp 억제제의 용량은 약 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 또는 1000 mg/kg일 수 있다. 투여량은 환자의 필요요건, 치료되는 장애의 중증도, 및 투여되는 특정 제형에 좌우하여 달라질 수 있다. 환자에게 투여되는 용량은 환자에서 이로운 치료 반응을 초래하기에 충분해야 한다. 용량의 크기는 또한 특정 환자에서의 약물의 투여에 수반하여 일어나는 임의의 해로운 부작용의 존재, 특성 및 정도에 의해 결정될 것이다. 특정 상황에 대한 적절한 투여량의 결정은 보통의 진료진의 기술 범위 내에 있다. 총 투여량은 발작 장애의 치료에 적합한 기간에 걸쳐 분획으로 나누어서 투여될 수 있다.
Kgp 억제제는 특정 장애의 성질, 이의 중증도 및 Kgp 억제제가 투여되는 대상체의 전반적인 상태에 좌우하여 달라지는 기간 동안 투여될 수 있다. 투여는, 예를 들어, 매시간, 2시간, 3시간, 4시간, 6시간, 8시간마다, 또는 일일 2회, 예컨대, 12시간마다, 또는 임의의 이들 사이의 간격으로 실시될 수 있다. 투여는 일일 1회, 또는 36시간 또는 48시간마다 한 번, 또는 매달 또는 수달 마다 한 번 실시될 수 있다. 치료 후, 대상체는 상태의 변화 및 장애의 증상의 완화에 대하여 모니터링될 수 있다. Kgp 억제제의 투여량은 대상체가 특정 투여량 수준에 유의하게 반응하지 않는 경우에 증가시킬 수 있거나, 용량은 장애의 증상의 완화가 관찰되는 경우나 장애가 개선되는 경우나 허용가능하지 않은 부작용이 특정 투여량으로 관찰되는 경우에 감소시킬 수 있다.
치료적 유효량의 Kgp 억제제는 투약 간에 적어도 1시간, 또는 6시간, 또는 12시간, 또는 24시간, 또는 36시간, 또는 48시간의 간격을 포함하는 치료 요법으로 대상체에 투여될 수 있다. 투여는 적어도 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216, 또는 240시간(즉, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10일)의 간격으로 실시될 수 있다. 특정 구체예에서, 하나 이상의 Kgp 억제제의 투여는 수달 내지 수년 범위의 기간에 걸쳐 만성적인 방식으로 실시될 수 있다. 이에 따라서, 본 발명의 일부 구체예는 상술된 바와 같은 P. 진지발리스 감염와 관련된 질환 또는 질병을 치료하는 방법으로서, 화합물이 적어도 1년 동안 대상체에 투여되는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 화합물은 적어도 10년 동안 대상체에 투여된다. 일부 구체예에서, 화합물은 적어도 60년 동안 대상체에 투여된다.
본 발명의 방법에 따른 Kgp 억제제의 투여는 전형적으로 대상체에서의 활성 Kgp의 순환 수준의 감소 및/또는 뇌에서의 활성 Kgp의 감소를 야기한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 방법에 따른 Kgp 억제제의 투여는 활성 Kgp의 순환 수준의 적어도 20% 감소 및/또는 뇌에서의 활성 Kgp의 적어도 20% 감소를 야기한다. 예를 들어, Kgp의 순환 수준 및/또는 뇌에서의 Kgp의 수준은 바람직하게는 Kgp 억제제의 첫 번째 투여의 24시간 전의 Kgp의 상응하는 수준에 비해 약 25% 내지 약 95%, 또는 약 35% 내지 약 95%, 또는 약 40% 내지 약 85%, 또는 약 40% 내지 약 80%까지 감소된다.
Kgp 억제제는 상술된 바와 같이, 단독으로 또는 하나 이상의 추가의 치료적 활성제와 함께 투여될 수 있다. 하나 이상의 추가의 치료적으로 효과적인 제제는 예를 들어, (i) RgpA, RgpB 및/또는 Kgp 생성, RgpA, RgpB 및/또는 Kgp의 전신 순환 또는 뇌로의 이동 및/또는 포유동물에서 RgpA, RgpB 및 또는 Kgp의 병상(예를 들어, 신경독성 영향)을 억제하는 약학적으로 허용되는 제제; (ii) P. 진지발리스에 대해 살균성 또는 정균성인 항균제; (iii) RgpA, RgpB 및/또는 Kgp에 결합하는 하나 이상의 항체(예를 들어, RgpB의 면역글로불린 도메인의 전반부에 결합하는 18E6; Kgp 촉매 도메인 내에서 에피토프를 인식하는 Kgp-특이적 단일클론 항체, 즉, 7B9; 임의의 상기 물질들의 인간화 버젼인 RgpA 항체 61Bg 1.3 등); (iv) RgpA, RgpB 및/또는 Kgp 또는 P. 진지발리스에 의해 발현되는 다른 단백질에 결합하는 항체의 에피토프; 및 (v) 임의의 상기 물질들의 조합물을 포함한다.
추가의 치료적 활성제는 또한 Aβ 펩티드 수준 감소제, 병원성 수준 타우 감소제, 미세소관 안정화제, 죽상경화판을 감소시킬 수 있는 제제, β-아밀로이드 및 타우의 순환 수준을 감소시키는 제제, 자가포식 조절제, 신경전달물질 수준 조절제, GABA(A) α5 수용체 억제제, 및 인지 기능 및 알츠하이머병의 기능 부전을 유지하고/거나 회복하는 것을 돕고/거나 인지 기능의 감소 및 알츠하이머병의 기능 부전을 지연시키는 추가의 제제를 포함한다.
본 발명의 약학적 조성물은 생체이용률을 증가시키고 혈액 뇌 장벽 침투를 증가시킬 수 있는 리토나비르 (RTV)와 함께 본원에 기재된 하나 이상의 Kgp 억제제를 함유할 수 있다. 예를 들어, 리토나비르는 흔히 P450 3A4 효소를 억제하고 그에 따라서 초회 통과 대사(first-pass metabolism)를 감소시킴으로써 혈장 수준을 증가시키기 위해 경구용 펩티드 HIV 프로테아제 억제제와 조합된다(문헌 [Walmsley, et al., N Engl J Med, 2002. 346(26): 2039-46] 참조). 또한, RTV는 혈액 뇌 장벽을 포함하는 다수의 조직에서 발견되는 막관통 유출 펌프인 P-당단백질에 결합하여 함께 투여되는 화합물의 뇌에 대한 접근을 더 우수하게 만든다[참조: Marzolini, et al., Mol Pharm, 2013. 10(6): 2340-9]. 따라서, RTV와 Kgp 억제제의 조합이 진지파인 억제제의 혈장 농도 및 뇌 수준을 증가시키는데 사용될 수 있다. 미국 특허 출원 번호 14/875,416에 기술된 바와 같이, Kgp 억제제인 Kyt-36의 15분 전에 RTV를 경구 투여하는 것은 반감기를 증가시키고, 그에 따라서, RTV는 또한 다른 Kgp 억제제의 반감기를 증가시킬 것으로 예상된다.
일부 구체예에서, 본 발명의 화합물은 넛메그(nutmeg)로부터 분리된 멜라바리콘 C를 포함하는 천연 진지파인 억제제와 함께 투여될 수 있거나, 식물, 예컨대, 크랜베리, 녹차, 사과, 및 홉(hop)으로부터 유래된 폴리페놀계 화합물이 뇌 장애의 치료 또는 예방을 위해서 함께 투여될 수 있다. κ-카제인 펩티드(109-137) 34, 히스타틴 5, 및 CL(14-25), CL(K25A) 및 CL(R24A, K25A)을 포함하는 자연 및 비자연 발생 항균성 펩티드가 또한 본 발명의 Kgp 억제제와 함께 투여될 수 있다(예를 들어, 문헌[Taniguchi et al., Biopolymers, 2014. 102(5): 379-89] 참조).
본원에 기재된 바와 같은 Kgp 억제제는 진지파인 또는 다른 P. 진지발리스 단백질을 표적으로 하는 항체와 함께 투여될 수 있다. 항체는 진지파인 및 P. 진지발리스 증식으로 인해 뇌에 대한 접근을 위한 혈액 뇌 장벽의 손상 또는 주변 방해에 의존적일 수 있다. 항체는 또한 박테리아를 세정하는데 있어서의 면역계의 효능을 자극하는 것을 도울 수 있다. 18E6 및 7B9를 포함하는 RgpA, RgpB 또는 Kgp에 대한 신규한 또는 기존의 항체가 사용될 수 있다. RgpA 항체 61BG 1.3은 치주 치료 후 P. 진지발리스에 의한 재집락형성의 예방에서 국소적으로 효능이 있는 것으로 종래에 입증되었다(문헌[Booth et al., Infect Immun, 1996. 64(2): 422-7] 참조). 항체는 바람직하게는 인간에게 사용하기 위해 인간화될 수 있다. 정맥내 전달, 피하 전달, 비강내 전달, 척수강내 전달, 관절내 전달, 벡터 운반 및 직접적인 뇌 전달을 포함하지만 이로 제한되지 않는, 반감기 및 뇌 침투를 개선시키기 위한 생물학적 제제의 전달을 위한 분야에 공지된 방법이 이용될 수 있다.
본 발명의 방법은 또한 다음 추가의 치료적 활성제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 중 하나 이상과 함께 본원에 기재된 바와 같은 Kgp 억제제의 투여를 포함한다: 아르기닌 유도체; 히스타틴 5; 바큘로바이러스 p35; 우두 바이러스성 사이토카인-반응 개질제의 단일점 변종(CrmA (Asp > Lys)); 페닐알라닐-우레이도-시트룰리닐-발릴-사이클로아르기날(FA-70C1); (아사이클록시)메틸 케톤(Cbz-Phe-Lys-CH2OCO-2,4,6-Me3Ph); 펩티딜 클로로-메틸 케톤(예를 들어, 아르기닌의 클로로메틸 케톤 유도체, 및 리신의 클로로메틸 케톤 유도체 등); 플루오로-메틸 케톤; 브로모-메틸 케톤; 케토펩티트; 1-(3-페닐프로피오닐)피페리딘-3(R,S)-카르복실산 [4-아미노-1(S)-(벤조티아졸-2-카르보닐)부틸]아미드(A71561); 아자펩티트 푸마르아미드; 아자-펩티드 마이클 억셉터; 벤즈아미딘 화합물; 아사이클로메틸케톤; 활성화 인자 X 억제제(예를 들어, DX-9065a); 크랜베리 투석불가능 분획; 크랜베리 폴리페놀 분획; 췌장 트립신 억제제; Cbz-Phe-Lys-CH2O-CO-2,4,6-Me3-Ph; E-64; 클로르헥시딘; 아연(예를 들어, 아연 아세테이트); 또는 임의의 상기 물질들의 2개, 3개 이상의 조합물. 일부 이러한 구체예에서, Zn은 본 발명의 방법에 사용되는 화합물(예를 들어, 클로르헥시딘, 벤즈아미딘 등)의 효능 및 선택성을 향상시킬 수 있다.
본 발명의 Kgp 억제제는 추가의 치료적 활성제와 동일한 조성물로 투여될 수 있다. 대안적으로, 추가의 치료적 활성제는 별도로 Kgp 억제제 투여 전에, 이와 동시에, 또는 투여 후에 투여될 수 있다.
VI. 진지파인 활성 프로브
관련 구체예에서, 본 발명은 리포터 모이어티 및 진지파인-반응성 모이어티를 포함하는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일부 구체예에서, 진지파인-반응성 모이어티는 Kgp-반응성 모이어티이다. 일부 구체예에서, 진지파인-반응성 모이어티는 Rgp-반응성 모이어티이다.
일부 구체예에서, 진지파인-반응성 모이어티는 표적 진지파인에 가역적으로 결합한다. 일부 구체예에서, 진지파인-반응성 모이어티는 표적 진지파인에 비가역적으로 결합한다.
일부 구체예에서, Kgp-반응성 모이어티는 켄칭 모이어티를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 리포터 모이어티는 형광단, 형광원 모이어티, 발색단, 발색원 모이어티, 바이오틴, 디곡시게닌, 펩티드 태그 예컨대, FLAG 펩티드, 올리고뉴클레오티드 및 폴리뉴클레오티드로부터 선택된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "FLAG 펩티드"는 아미노산 서열 Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys(즉, DYKDDDDK)을 함유하는 올리고펩티드 또는 폴리펩티드를 지칭한다. FLAG 펩티드 및 이의 변이체는 예를 들어, 홉(Hopp) 등의 미국 특허 번호 4,703,004에 기술되어 있으며, 이 특허는 참조로서 본원에 통합된다. FLAG 펩티드 대신에 사용될 수 있는 기타 펩티드는 비제한적으로, 서열 Tyr-Pro-Tyr-Asp-Val-Pro-Asp-Tyr-Ala(즉, YPYDVPDYA)를 함유하는 HA 펩티드 태그, 서열 His-His-His-His-His-His(즉, HHHHHH)을 함유하는 His6 펩티드 태그 및 서열 Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu(즉, EQKLISEEDL)를 함유하는 Myc 펩티드 태그를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 펩티드 태그는 편리한 동정 및/또는 정량화를 위한 비색계 시약, 화학발광 시약, 기타 등등과 사용하기 위한 항체 또는 다른 결합 모이어티에 의해 인식될 수 있다. 마찬가지로, 리포터 모이어티는 예를 들어, 본원에 참조로 통합된 공개 문헌인 WO 2016/019929(Navratil, et al.)에 기술된 바와 같은 PCR 기법(예를 들어, 정량적 PCR)에 의한 검출을 위해 상보성 일차 또는 기타 상보성 뉴클레오티드에 의해 인식될 수 있는 뉴클레오티드(예를 들어, RNA, 단일-가닥 DNA, 또는 이중-가닥 DNA)를 함유할 수 있다. 유용한 DNA는 비제한적으로, CCTGCCAGTTGAGCATTTTTATCTGCCACCTTCTCCACCAGACAAAAGCTGGAAA; CACTCTGTGCTCGTTGCTACAC; 및 CAGACAGCAAGCAGCACTACAC를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "디곡시게닌"은 3-[(3S,5R,8R,9S,10S,12R,13S,14S,17R)-3,12,14-트리하이드록시-10,13-디메틸-1,2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,15,16,17-테트라데카하이드로사이클로펜타[a]페난트렌-17-일]-2H-푸란-5-온(CAS 등록 번호 1672-46-4) 및 이의 치환된 유사체를 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "바이오틴"은 5-[(3aS,4S,6aR)-2-옥소헥사하이드로-1H-티에노[3,4-d]이미다졸-4-일]펜탄산(CAS 등록 번호 58-85-5) 및 이의 치환된 유사체를 지칭한다.
일부 구체예에서, 화합물은 상기 제시된 화학식 I에 따른 구조를 가지며, 여기에서, R3은 리포터 모이어티이다. 일부 구체예에서, 화합물은 하기 화학식 II에 따른 구조 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00042
상기 식에서,
RA는 하기 측쇄 IIa 또는 측쇄 IIb이며:
Figure pct00043
Figure pct00044
(상기 식에서, 물결선은 화학식 II로의 연결 지점을 나타내며;
A는 -CH2- 및 -O-로부터 선택되며;
R1a, R1b, R1c, R1d 및 R1e는 수소, C1-4　알킬, 및 아민 보호기로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R2a 및 R2b는 수소, 할로겐, C1-4　할로알킬, 및 C1-4　할로알콕시로부터 각각 독립적으로 선택됨)
R3은 리포터 모이어티이며;
R4는 수소 및 C1-4　알킬로부터 선택되며;
R5는 진지파인-반응성 모이어티이며, 여기에서, 진지파인-반응성 모이어티는 켄칭 모이어티 R9를 임의적으로 포함한다.
본 발명의 화합물은 보호된 형태(즉, R1a, R1b, R1c, R1d 및 R1e 중 적어도 하나가 아민 보호기인 화합물)로 제조될 수 있다. 예를 들어, 그린(Green) 및 워츠(Wuts)(Protective Groups in Organic Synthesis, 4 th Ed. 2007, Wiley-Interscience, New York)에 의해 기술된 바와 같은 많은 적합한 보호기가 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, R1a는 H이며, R1b는 벤질옥시카르보닐; 9-플루오레닐메틸-옥시카르보닐; 3차-부틸옥시카르보닐; 및 알릴옥시카르보닐로부터 선택된다. 일부 구체예에서, R1a는 H이며, R1b는 3차-부틸옥시카르보닐이다. 또한, 화합물은 알킬화된 형태(즉, R1a 및 R1b 중 적어도 하나가 알킬 기인 화합물)로 제조될 수 있다. R1a 및 R1b 중 하나 또는 둘 모두는 예를 들어, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸 또는 t-부틸일 수 있다.
일부 구체예에서, 화합물은 하기 화학식 (III)에 따른 구조 또는 이의 약학적으로 허용되 염을 갖는다:
Figure pct00045
일부 구체예에서,
R5는 C1-6　할로알킬, -CH2-O-R6, -CH2-S-R7, -CH2-SO-R7, -CH2-SO2-R7, -CH2-N(R8)2, 및 -CH2-C5-12　헤테로아릴로부터 선택되며;
R6 및 R6은 페닐, C1-6　알킬, C1-6　할로알킬, 및 C5-12　헤테로아릴로부터 선택되며,
여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환되며,
C5-12　헤테로아릴은 할로겐 또는 C1-3　할로알킬로 임의적으로 치환되며;
R8은 독립적으로 선택된 C1-6　알킬이다.
일부 구체예에서, 진지파인 반응성 모이어티 R5는 -CH2-O-페닐이며, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환된다. 일부 구체예에서, 페닐은 켄칭 모이어티 R9로 임의적으로 치환된다. 일부 구체예에서, 진지파인 반응성 모이어티는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00046
상기 식에서, 물결선은 화학식 II 또는 화학식 III으로의 연결 지점을 나타낸다.
일부 구체예에서,
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e 는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e 는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g 는 H이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 H이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 H이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 H이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 H이며, R5g는 할로겐이거나;
R5c는 할로겐이며, R5d는 할로겐이며, R5e는 할로겐이며, R5f는 할로겐이며, R5g는 H이며;
여기에서, R5c, R5d, R5e R5f 및 R5g 중 하나에서 H 또는 할로겐은 켄칭 모이어티 R9로 임의적으로 대체된다.
일부 구체예에서,
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g 는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 H이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 H이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 H이며, R5g는 F 또는 Cl이거나;
R5c는 F 또는 Cl이며, R5d는 F 또는 Cl이며, R5e는 F 또는 Cl이며, R5f는 F 또는 Cl이며, R5g는 H이며;
여기에서, R5c, R5d, R5e, R5f 및 R5g 중 하나에서 H, F 또는 Cl은 켄칭 모이어티 R9에 의해 임의적으로 대체된다.
일부 구체예에서,
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 H이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 H이며, R5f는 F이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 F이거나;
R5c는 H이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 H이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 H이며, R5g는 F이거나;
R5c는 F이며, R5d는 F이며, R5e는 F이며, R5f는 F이며, R5g는 H이며;
여기에서, R5c, R5d, R5e, R5f 및 R5g 중 하나에서 H, 또는 F, 또는 Cl은 켄칭 모이어티 R9로 임의적으로 대체된다.
특정 구체예에서, 진지파인 반응성 모이어티는 2,3,5,6-테트라플루오로페녹시메틸이 아니다.
일부 구체예에서, 화합물은 하기 화학식 IIIa에 따른 구조 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00047
상기 식에서,
R5c, R5d, R5e, R5f 및 R5g 중 하나는 수소, 할로겐 및 켄칭 모이어티로부터 선택되며;
R5c, R5d, R5e, R5f 및 R5g 중 4개는 수소 및 할로겐으로부터 독립적으로 선택되며;
단, R5c, R5d, R5e, R5f 및 R5g 중 적어도 하나는 할로겐이다.
일부 구체예에서, 본 발명은 R5에 포함된 켄칭 모이어티를 갖는 화합물을 제공한다. 이러한 화합물은 비제한적으로,
Figure pct00048
Figure pct00049
및 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.
일부 구체예에서, 화합물은 하기 화학식 IV에 따른 구조 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00050
상기 식에서,
R5e는 H 및 켄칭 모이어티 -L9-R9a로부터 선택되며;
L9는 연결 모이어티이며;
R9a는 아조벤젠, 잔틸리늄, 안트로퀴논 및 비올로겐으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 리포터 모이어티 R3은 -R3b-L3-R3c이며, 여기에서,
R3b는 C3-8　알킬렌, C3-8　사이클로알킬렌, C3-12　헤테로사이클릴렌, C6-10　아릴렌 및 C5-12　헤테로아릴렌으로부터 선택되며;
L3은 연결 모이어티이며;
R3c는 발색단 또는 형광단으로부터 선택된다.
발색단 또는 형광단을 함유하는 리포팅 모이어티는 하기 기술된 바와 같은 UV-가시선 흡광 분광법 또는 형광측정법을 이용하여 표지된 진지파인을 검출하는데 유용할 수 있다. 임의의 적합한 발색단 또는 형광단이 본 발명의 화합물에 사용될 수 있다. 일반적으로, 적합한 발색단 및 형광단은 직접적으로 또는 하나 이상의 연결 기를 통해 화학식 II의 화합물에 공유적으로 결합될 수 있는 반응성 기(예를 들어, 카르복실레이트 모이어티, 아미노 모이어티, 할로알킬 모이어티, 기타 등등)를 갖는다. 적합한 발색단 및 형광단의 예는 비제한적으로, 미국 특허 번호 7,687,282; 7,671,214; 7,446,202; 6,972,326; 6,716,979; 6,579,718; 6,562,632; 6,399,392; 6,316,267; 6,162,931; 6,130,101; 6,005,113; 6,004,536; 5,863,753; 5,846,737; 5,798,276; 5,723,218; 5,696,157; 5,658,751; 5,656,449; 5,582,977; 5,576,424; 5,573,909; 및 5,187,288에 기술된 것들을 포함하며, 상기 특허는 그 전체가 본원에 참조로 통합된다.
일부 구체예에서, R3c는 하기 구조를 갖는 보론-디피로메텐 모이어티이다:
Figure pct00051
상기 식에서,
R3d, R3e, R3f, R3g, R3h, R3i, 및 R3j 중 6개는 H, 할로겐, C1-6　알킬, C3-8　사이클로알킬, C6-10　아릴, C7-16　아릴알킬, C1-6　아실 및 -SO3H로부터 독립적으로 선택되며; 여기에서,
R3d, R3e, R3f, R3g, R3h, R3i 및 R3j 중 하나는 연결 모이어티 -L3-이다.
일부 구체예에서, R3d 및 R3f는 C1-6　알킬(예를 들어, 메틸 또는 에틸)로부터 독립적으로 선택되며, R3h, R3i 및 R3j 중 하나는 연결 모이어티 -L3-이다. 일부 구체예에서, R3d 및 R3f는 메틸이며, R3j는 연결 모이어티 -L3-이다.
일부 구체예에서, R3c은 하기 구조를 갖는 시아닌 모이어티이다:
Figure pct00052
상기 식에서,
R3k 및 R3l은 H, C1-6　알킬, (CH2)tCOOH, (CH2)tSO3H, 및 연결 모이어티 L3으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 아래첨자 t는 독립적으로 1 내지 10의 정수이며;
R3m 및 R3n은 H, 할로겐, C1-6　알킬, -SO3H, -PO3H2 , -OPO3H2, -COOH 및 연결 모이어티 L3으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 Y는 O, S, C(R3p)2, -CH=CH- 및 NR3p로부터 독립적으로 선택되며, 여기에서, 각각의 R3p는 독립적으로 H 또는 C1-6　알킬이며;
아래첨자 n은 1 내지 6의 정수이며, 단 R3k, R3l, R3m, 및 R3n 중 하나 및 단지 하나만이 연결 모이어티 -L3-이다.
일부 구체예에서, R3c는 하기 구조를 갖는 코우마린 모이어티이다:
Figure pct00053
상기 식에서,
W는 N 또는 CR3u이며;
Z는 O, S 또는 NR3v이며;
R3q, R3s, R3t, R3u 각각은 H, 할로겐, C1-6　알킬, -CN, -CF3, -COOR3v , -CON(R3v)2, -OR3v 및 연결 모이어티 -L3-로부터 독립적으로 선택되며;
R3r은 -OR3v 및 -N(R3v)2로부터 선택되며;
각각의 R3v는 H, C1-6　알킬 및 연결 모이어티 -L3-로부터 독립적으로 선택되며;
단, R3q, R3s, R3t, R3u 및 R3v 중 하나 및 단지 하나만이 연결 모이어티 -L3-이다.
일부 구체예에서, R3c는 하기 구조를 갖는 잔텐 모이어티이다:
Figure pct00054
상기 식에서,
T는 O, S, C(R3z)2, 및 NR3z로부터 선택되며;
U는 O 또는 N(R3z)2이며;
각각의 R3w는 H, 할로겐, C1-6　알킬, -SO3H 및 연결 모이어티 -L3-로부터 독립적으로 선택되며;
R3x는 H, -OH, -OR3z, -N(R3z)2 및 연결 모이어티 -L3-로부터 선택되며;
R3y는 H, C1-6　알킬, R3aa 및 연결 모이어티 -L3-로부터 선택되며;
각각의 R3z는 독립적으로 H 또는 C1-6　알킬이며;
R3aa는
Figure pct00055
및
Figure pct00056
로부터 선택되며
여기에서,
각각의 R3ab는 H 및 연결 모이어티 -L3-로부터 독립적으로 선택되며;
단, R3w, R3x, R3y 및 R3ab 중 하나 및 단지 하나만이 연결 모이어티 -L3-이다.
일부 구체예에서, R3c는 플루오레세인이며, 여기에서, T 및 U는 O이며; R3x는 OH이며, R3y는
Figure pct00057
이다.
일부 구체예에서, 잔텐 모이어티는 에오신이며, 여기에서, T 및 U는 O이며; R3x는 OH이며, 각각의 R3w는 할로겐(예를 들어, 브로모)이며, R3y는
Figure pct00058
이다.
일부 구체예에서, 잔텐 모이어티는 로다민이며, 여기에서, T는 O이며; U는 N(R3z)2(예를 들어, =NH2 +)이며; R3x는 -N(R3z)2(예를 들어, -NH2)이며, R3y는
Figure pct00059
또는
Figure pct00060
이다.
일부 구체예에서, 잔텐 모이어티는 하기 구조를 갖는 로다민이다:
Figure pct00061
상기 식에서, R3aa는
Figure pct00062
및
Figure pct00063
로부터 선택되며,
하나의 R3ab는 H이며, 나머지 다른 R3ab는 연결 모이어티 -L3-이다.
일부 구체예에서, 본 발명은 화학식 II에 따른 화합물을 제공하며, 여기에서, 리포터 모이어티 R3은 -R3b-L3-R3c이며, 여기에서,
R3b는 C3-8　알킬렌, C3-8　사이클로알킬렌, C3-12　헤테로사이클릴렌, C6-10　아릴렌 및 C5-12　헤테로아릴렌으로부터 선택되며;
L3은 연결 모이어티이며;
R3c는 바이오틴, 디곡시게닌 및 항체 에피토프로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 리포터 모이어티 R3은 -R3b-L3-R3c이며, 여기에서,
R3b는 C3-8　알킬렌, C3-8　사이클로알킬렌, C3-12　헤테로사이클릴렌, C6-10　아릴렌 및 C5-12　헤테로아릴렌으로부터 선택되며;
L3은 연결 모이어티이며;
R3c는 플루오레세인, 로다민, 에오신, 시아닌, 보론-디피로메텐, 코우마린, 바이오틴, 디곡시게닌, FLAG 펩티드(또는 다른 펩티드 태그), 올리고뉴클레오티드, 및 폴리뉴클레오티드로부터 선택된다.
당업자는 아지드 기를 함유하는 화합물(예를 들어, R3a가 -N3인 화합물)이 상보성 반응 파트너 예컨대, 알킨-함유 화합물 또는 포스핀-함유 화합물과의 반응을 통해 추가의 작용기로 개질될 수 있음을 이해할 것이다. 보통 "클릭 화학"으로 불리는 [3+2] 첨가환화를 통한 아지드와 알킨의 반응이 본 발명의 화합물에서 다양한 치환된 트리아졸 기를 정착시키는데 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 일부 구체예는 하기 화학식에 따른 화합물(여기에서, 연결 모이어티 -L3-은 임의적으로 치환되는 트리아졸릴 모이어티임)을 제공한다:
Figure pct00064
상기 식에서, 물결선은 R3a로의 연결 지점이며, 점선은 R3c로의 연결 지점이다.
일부 구체예에서, L3a는 구조 -L3b-L3c-를 가지며,
여기에서, L3b 및 L3c는 결합, 이가 폴리머 모이어티 및 선형 또는 분지형의 포화되거나 불포화된 C1-30　알킬로부터 독립적으로 선택되며;
C1-30　알킬에서의 하나 이상의 탄소 원자는 O, S, NRa에 의해 임의적으로 그리고, 독립적으로 대체되며;
C1-30　알킬에서 인접한 탄소 원자 중 2개 이상의 그룹은 -NRa(CO)- 또는 -(CO)NRa-에 의해 임의적으로 그리고, 독립적으로 대체되며;
C1-30　알킬에서 인접한 탄소 원자 중 2개 이상의 그룹은 O, S 및 N으로부터 선택되는 1 내지 4개의 헤테로원자를 갖는 4 내지 8원의 이가 카르보사이클 또는 4 내지 8원의 이가 헤테로사이클에 의해 임의적으로, 그리고, 독립적으로 대체되며;
각각의 Ra는 H 및 C1-6　알킬로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구체예에서, 화합물은 하기 화학식 V에 따른 구조 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00065
상기 식에서,
R5e는 H 및 -C(O)NH-(CH2)x-R9a로부터 선택되며;
아래첨자 x는 1 내지 4 범위의 정수이다.
일부 구체예에서, 화합물은
Figure pct00067
Figure pct00068
Figure pct00069
및 이의 약학적으로 허용되는 염으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 화합물은
Figure pct00070
Figure pct00071
Figure pct00072
Figure pct00073
및 이의 약학적으로 허용되는 염으로부터 선택된다.
VII. 진지파인 활성을 프로빙하는 방법
또 다른 구체예에서, 본 발명은 생물학적 샘플 중 진지파인 활성을 검출하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 진지파인이 상기 기술된 바와 같은 화합물의 진지파인 반응성 모이어티와 반응하기에 충분한 조건하에서 화합물 및 생물학적 샘플을 포함하는 혼합물을 형성시키는 단계; 혼합물 중 화합물의 리포터 모이어티를 검출하는 단계; 및 리포터 모이어티가 검출되는 경우 진지파인이 생물학적 샘플에 존재함을 결정하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 혼합물 중 화합물의 리포터 모이어티를 검출하기 전에 혼합물로부터 비반응된 화합물을 제거하는 것을 추가로 포함한다.
임의의 적합한 생물학적 샘플은 본 발명의 방법을 사용하여 검정될 수 있다. 적합한 생물학적 샘플의 예는 비제한적으로, 조직 샘플(예를 들어, 치은 조직 샘플 또는 뇌 조직 샘플), 세포 샘플(예를 들어, 환자 구강의 협측 면봉 채취법을 통해 수득된 포유동물 세포 또는 인간 샘플로부터 배양된 박테리아 세포), 혈액 또는 혈청 샘플, 및 타액 샘플을 포함한다.
생물학적 샘플과 진지파인 활성 프로브가 서로 접촉되는 방식은 검정할 샘플의 유형 및 활성 프로브 중 리포터 모이어티가 검출되는 방법과 같은 인자에 의해 부분적으로 좌우될 것이다. 진지파인 활성을 세포 샘플 중에서 검출하고자 하는 경우, 예를 들어, 세포를 수성 완충액(예를 들어, 포스페이트-완충된 염수, 시트레이트-포스페이트 완충액, 기타 등등)에 현탁하고, 활성 프로브가 세포 샘플 중에 존재하는 진지파인과 반응하도록 진지파인 활성 프로브 및 광학 공-용매(예를 들어, 디메틸설폭사이드, N,N-디메틸포름아미드, 기타 등등)를 함유하는 혼합물에서 조합시킬 수 있다. 활성 프로브는 약 1 μM 내지 약 5 mM 범위의 농도로 전형적으로 사용될 것이며, 세포는 약 4℃ 내지 약 40℃ 범위의 온도에서 수 분 내지 수 시간 이상의 범위 기간 동안 인큐베이션될 것이다. 세포는 인큐베이션 기간 후 원심분리를 통해 혼합물로부터 수집될 수 있으며, 비반응된 활성 프로브는 적합한 부피의 완충액 중에서 세포의 반복된 재현탁 및 원심분리에 의해 혼합물로부터 제거될 수 있다. 그 후, 세포는 광학 현미경 또는 형광 현미경으로 조사될 수 있으며, 비색 또는 형광 리포터 모이어티의 검출은 세포 중 진지파인의 존재 및/또는 위치 측정을 결정하는데 이용될 수 있다.
비색 또는 형광 리포터 모이어티가 검출되는 파장 또는 파장들은 비제한적으로, 활성 프로브의 구조 및 샘플이 분석되는 조건을 포함하는 인자에 의해 좌우될 것이다. 리포터 모이어티에 의한 UV-가시선 흡수는 예를 들어, 약 190 nm 내지 약 1100 nm(예를 들어, 190 내지 380 nm, 또는 380 내지 750 nm) 범위의 파장에서 측정될 수 있다. 형광 리포터 모이어티는 약 300 nm 내지 약 800 nm 범위의 파장에서 여기되며, 생성된 형광 발광은 약 350 nm 내지 약 800 nm 범위의 파장에서 검출될 수 있다. 기타 흡수 파장, 여기 파장 및 발광 파장은 표지된 진지파인의 검출에 사용될 수 있으며, 이는 사용된 특정 활성 프로브 또는 샘플에 좌우될 것이다. 리포터 모이어티는 가시적 검사, 사진 필름, 또는 형광측정기, 양자 계수기, 플레이트 판독기, 현미경 및 유동 세포계측기를 포함하는 기기의 사용을 포함하는 수단에 의해 검출될 수 있다. UV-가시선 흡수-기반 및 형광-기반 방법의 기기는 물론 비색 및 형광 모이어티의 광학 특성은 예를 들어, 문헌 [The Molecular Probes ™ Handbook, 11 th Edition (2010)]에 기술된 바와 같이 당업자에게 공지되어 있다.
특정 구체예에서, 진지파인 활성 프로브는 진지파인 결합 전에 프로브 상의 리포터 모이어티로부터의 흡광 신호 및/또는 형광 신호의 검출을 방지하는 켄칭 모이어티를 함유한다. 예를 들어, 플루오레세인, 로다민, 또는 시아닌 리포터 모이어티를 갖는 활성 프로브는 아미노벤젠 켄칭 모이어티 예컨대, 다브실을 포함하는 진지파인-반응성 모이어티를 함유할 수 있다. 표적 진지파인과의 반응 전에 리포터 모이어티와 켄칭 모이어티의 근접은 형광 검출을 방지할 것이며, 이는 유리하게는 배경 신호를 감소시킬 수 있다. 그 후, 진지파인-반응성 모이어티와 표적 진지파인의 반응 시 켄칭 모이어티의 방출은 형광 리포터 모이어티을 검출을 가능하게 한다.
대상체로부터 수득된 생물학적 샘플은 세포 용해물 또는 조직 용해물을 제조하는데 사용될 수 있으며, 용해물 중의 진지파인이 프로브와 반응하도록 용해물은 상기 기술된 바와 같은 활성 프로브와 조합될 수 있다. 비반응된 활성 프로브는 겔 여과를 통해 용해물 혼합물로부터 제거될 수 있으며, 진지파인은 UV-가시선 흡수 분광법 또는 형광계측을 통한 리포터 모이어티의 검출을 통해 혼합물에서 식별될 수 있다. 대안적으로, 표지된 진지파인은 전기영동(예를 들어, SDS-PAGE, 모세관 전기영동, 등전점 맞춤, 기타 등등)을 통해 비반응된 활성 프로브 및 다른 혼합물 구성요소로부터 분리될 수 있다. 표지된 진지파인은 비색 또는 형광 활성 프로브를 검출함으로써 폴리아크릴아미드 겔과 같은 분해된 샘플에서 검출될 수 있다. 바이오틴, FLAG 펩티드 또는 또 다른 친화성-기반 리포터 모이어티가 사용되는 경우, 겔은 표지된 결합 파트너 예컨대, 스트렙타비딘-플루오레세인 또는 표지된 항체(또는 일차/이차 항체 쌍)로 프로빙되어 분해된 샘플에서 표지된 진지파인을 검출할 수 있다. 필요에 따라, 표지된 진지파인은 검출 단계 전에 폴리아크릴아미드 겔 또는 기타 용해된 샘플로부터 적합한 지지 물질 예컨대, 니트로셀룰로스, 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF), 기타 등등으로의 전기블롯팅에 의해 전달될 수 있다.
조직 샘플은 진지파인 활성 프로브로의 처리를 위해 대상체로부터 획득되고, 절편화되고, 봉입될 수 있다. 샘플은 진지파인 활성 프로브로의 처리 전에 새롭게 냉동될 수 있으며, 임의적으로, 에탄올, 포르말린 또는 또 다른 적합한 정착액으로 고정될 수 있다. 비반응된 활성 프로브는 리포터 모이어티의 검출 전에 물 또는 완충액의 하나 이상의 부분에 탑재된 샘플을 담가 조직 샘플로부터 제거될 수 있다. 켄칭 모이어티를 갖는 프로브의 사용은 임의의 비반응된 활성 프로브를 제거할 필요 없이 조직 샘플 중 신호의 검출을 가능하게 할 수 있다. 표지된 진지파인은 필요에 따라 하나 이상의 표지된 결합 파트너와 함께 상기 기술된 바와 같은 광학 현미경 또는 형광 현미경을 사용하여 검출될 수 있다.
진지파인이 친화성-기반 리포터 모이어티(예를 들어, 바이오틴, 디곡시게닌, FLAG 펩티드 또는 기타 에피토프)를 갖는 활성 프로브로 표지되는 경우, 표지된 진지파인은 적합한 지지체 상에 고정된 결합 파트너를 이용하여 복합 혼합물(예를 들어, 세포 용해물 또는 조직 용해물)로부터 분리될 수 있다. 비제한적 예로서, 진지파인은 바이오틴 활성 프로브로 개질되고 스트렙타비딘 비드(예를 들어, 가교된 폴리사카라이드, 다공성 실리카 겔, 자석 입자, 또는 공유 또는 비-공유 결합된 스트렙타비딘을 함유하는 기타의 것)에 결합될 수 있다. 결합된 진지파인을 갖는 비드는 활성 프로브 중 리포터 모이어티의 검출 전에 원심분리 또는 여과와 같은 물리적 수단을 통해 혼합물로부터 분리될 수 있다. 리포터 모이어티 에피토프(예를 들어, FLAG 펩티드)에 특이적인 항체 함유 표면은 비제한적으로, ELISA(샌드위치 ELISA 및 경합 ELISA 포함) 및 표면 플라즈몬 공명 분석을 포함하는 기법을 통해 표지된 항체 결합 및 검출에 사용될 수 있다.
VIII. 실시예
실시예 1. (S)-N-(7-아미노-2-옥소-1-(2,3,6- 트리플루오로페녹시 )헵탄-3-일)사이클로펜탄카르복사미드 (1) 하이드로클로라이드의 제조
Figure pct00074
THF(200 mL)중의 화합물 1.4(23.0 g, 67.2 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 NMM(6.79 g, 67.2 mmol, 7.38 mL, 1.00 eq), 이소부틸 카르본클로리데이트(9.17 g, 67.2 mmol, 8.82 mL, 1.00 eq), 및 디아조메탄(5.65 g, 134 mmol, 2.00 eq)을 -40℃에서 N2(15 psi) 하에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 보여주었다. H2O(200 mL)을 반응물에 첨가하고, 2개의 300-mL 부분의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합친 유기 상을 2개의 200-mL 부분의 염수(200로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하여 미정제 화합물 1.3(30.0 g, 미정제)을 황색 오일로서 제공하였다.
Figure pct00075
EtOAc(300 mL) 중 화합물 1.3(20.0 g, 54.6 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 브롬화수소(29.8 g, 121.7 mmol, 20.0 mL, 33% 순도, 2.23 eq)를 -20℃에서 N2(15 psi) 하에 첨가하였다. 혼합물을 -20℃에서 10분 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 0:1)는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 혼합물의 pH가 8에 도달할 때까지 포화된 NaHCO3를 첨가하여 반응물을 염기성화시키고, 혼합물을 3개의 500-mL 부분의 EtOAc로 추출하였다. 합친 유기 상을 2개의 200-mL 부분의 염수로 세척하고, 무수성 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하여 미정제 화합물 1.2(15.0 g, 미정제)를 황색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00076
DMF(40.0 mL) 중의 화합물 1.2(4.00 g, 9.54 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 2,6-디플루오로페놀(1.49 g, 11.4 mmol, 1.20 eq) 및 KF(1.66 g, 28.6 mmol, 670 μL, 3.00 eq)를 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 3h 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1)는 반응이 완료되었음을 보여주었다. H2O(150 mL)을 혼합물에 첨가하고, 2개의 200-mL 부분의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합친 유기 상을 2개의 100-mL 부분의 염수로 세척하고, 무수성 Na2SO4으로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:1, 5:1)에 의해 정제하여 화합물 1.1(2.50 g, 5.35 mmol, 56.1% 수율)을 황색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00077
EtOAc(3.00 mL) 중의 화합물 1.1(4.00 g, 8.22 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 HCl/EtOAc(40.0 mL)를 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2h 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 2:1)는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 혼합물을 감압하에 농축하여(S)-N-(7-아미노-2-옥소-1-(2,3,6-트리플루오로페녹시)헵탄-3-일)사이클로펜탄카르복사미드 1 하이드로클로라이드 염(1.34 g, 3.16 mmol)을 연황색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C19H25N2F3O3에 대한 이론치: 387.2; 실측치 387.1; RT=2.508 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.21 - 1.83 (m, 15 H) 2.60 - 2.81 (m, 3 H) 4.30 (ddd, J=9.70, 7.17, 4.52 Hz, 1 H) 5.02 - 5.22 (m, 2 H) 7.12 - 7.24 (m, 2 H) 7.98 (br s, 3 H) 8.32 (d, J=7.28 Hz, 1 H).
실시예 2. ( S )- N -(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일) 사 이클로펜탄카르복사미드 (2) 하이드로클로라이드의 제조
Figure pct00078
화합물 1.2(4.00 g, 9.54 mmol, 1.00 eq)를 상기 기술된 바와 같이 제조하고, DMF(40.0 mL), 2,6-디플루오로페놀(1.49 g, 11.5 mmol, 1.20 eq), 및 KF(1.66 g, 28.6 mmol, 670 μL, 3.00 eq)와 25℃에서 조합하였다. 혼합물을 25℃에서 3h 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1)는 반응이 완료되었음을 보여주었다. H2O(150 mL)을 혼합물에 첨가하고, 에틸 아세테이트(100 mL*2)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(100 mL*2)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:1, 5:1)에 의해 정제하여 화합물 2.1(2.50 g, 5.35 mmol, 56.1% 수율)를 황색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00079
EtOAc(2.00 mL) 중의 화합물 2.1(3.50 g, 7.47 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 HCl/EtOAc(20.0 mL)를 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1h 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1)는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 잔류물을 분취용-HPLC(산)에 의해 사전-정제하여 (S)-N-(7-아미노-1-(2,6-디플루오로페녹시)-2-옥소헵탄-3-일)사이클로펜탄카르복사미드 2 하이드로클로라이드 염(1.13 g, 2.79 mmol)을 연황색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C19H26N2F2O3에 대한 이론치: 369.2; 실측치 369.1; RT=2.439 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.18 - 1.84 (m, 15 H) 2.56 - 2.82 (m, 3 H) 4.25 - 4.39 (m, 1 H) 4.92 - 5.13 (m, 2 H) 7.02 - 7.18 (m, 3 H) 7.91 (br s, 3 H) 8.27 (br d, J=7.28 Hz, 1 H).
실시예 3. 라세미 N -(7-아미노-2-옥소-1-(2,3,6- 트리플루오로페녹시 )-헵탄-3-일)사이클로펜탄카르복사미드의 제조
Figure pct00080
DCM(50.0 mL) 중의 사이클로펜탄카르복실산(4.40 g, 38.6 mmol, 4.19 mL, 0.95 eq)의 혼합물에(COCl)2(5.87 g, 46.3 mmol, 4.05 mL, 1.14 eq)를 15℃에서 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 후, 이를 진공하에 농축하여 잔류물을 형성시키고, 이를 EtOAc(40.0 mL)에 용해시켰다. 생성 용액을 H2O(80.0 mL) 중의 화합물 1b.5(10.0 g, 40.6 mmol, 1.00 eq), Na2CO3 (5.16 g, 48.7 mmol, 1.20 eq), 및 NaOH(1.64 g, 41.0 mmol, 1.01 eq)의 혼합물에 0℃에서 적가하였다. 그 후, 혼합물을 15℃에서 14시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 에틸 아세테이트를 제거하고, 잔류 용액을 0℃로 냉각시킨 후, 고체 KHSO4를 사용하여 pH를 6-7로 조절하였다. 혼합물을 여과하여 화합물 1b.4(12.0 g, 35.0 mmol, 86.3% 수율)를 백색 고형물로서 수집하였다.
Figure pct00081
THF(300 mL) 중의 화합물 1b.4(12.0 g, 35.0 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 NMM(3.54 g, 35.0 mmol, 3.85 mL, 1.00 eq) 이소부틸 카르본클로리데이트(4.79 g, 35.0 mmol, 4.61 mL, 1.00 eq) 및 디아조메탄(2.95 g, 70.1 mmol, 2.00 eq)을 -40℃에서 N2(15 psi) 하에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 0:1)는 반응이 완료되었음을 보여주었다. H2O(100 mL)을 반응물에 첨가하고, 2개의 200-mL 부분의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합친 유기 상을 2개의 100-mL 부분의 염수로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하여 화합물 1b.3(13.7 g, 미정제)을 황색 오일로서 제공하였다.
EtOAc(140 mL) 중의 화합물 1b.3(13.7 g, 37.4 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 브롬화수소(20.9 g, 85.3 mmol, 14.0 mL, 33% 순도, 2.28 eq)를 -20℃에서 N2(15 psi) 하에 첨가하였다. 혼합물을 -20℃에서 10분 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 2:1)는 반응이 완료되었음을 보여주었다. pH가 8에 도달할 때까지 포화된 NaHCO3로 반응물을 염기성화시키고, 혼합물을 3개 200-mL 부분의 EtOAc로 추출하였다. 합친 유기 상을 2개의 100-mL 부분의 염수로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하여 화합물 1b.2(8.80 g, 미정제)를 황색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00083
DMF(10.0 mL) 중의 화합물 1b.2(400 mg, 954 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 KF(166 mg, 2.86 mmol, 67.0 μL, 3.00 eq) 및 2,3,6-트리플루오로페놀(170 mg, 1.14 mmol, 1.20 eq)을 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 10h 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 2:1)는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 그 후, 혼합물을 H2O(10 mL)로 희석하고, 3개의 10-mL 부분의 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 합치고, 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 화합물 21.1(400 mg, 822 μmol, 86.2% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
Figure pct00084
EtOAc(5.00 mL) 중의 화합물 21.1(400 mg, 822 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 HCl/EtOAc(822 μmol, 15.0 mL, 1.00 eq)를 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 2:1)는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 반응물을 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하여 화합물 21 트리플루오로아세테이트 염(90.0 mg, 213 μmol, 25.9% 수율)을 연황색 고형물로서 제공하였다.
화합물 1(36 mg) 및 화합물 21(36 mg)을 물(2 mL) 및 MeOH(0.5 mL)와 혼합하였다. 그 후, 용매를 동결건조에 의해 제거하여 라세미 N-(7-아미노-2-옥소-1-(2,3,6-트리플루오로페녹시)헵탄-3-일)사이클로펜탄카르복사미드 트리플루오로아세테이트 염(72 mg)을 제공하였다.
실시예 4. 라세미 N -(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)사이클로펜탄카르복사미드의 제조
Figure pct00085
상기 기술된 바와 같이 제조된 화합물 1b.2(400 mg, 954 μmol, 1.00 eq)를 DMF(10.0 mL) KF(166 mg, 2.86 mmol, 67.0 μL, 3.00 eq) 및 2,6-디플루오로페놀(149 mg, 1.14 mmol, 1.20 eq)과 25℃에서 조합시켰다. 혼합물을 25℃에서 10h 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 2:1)는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 혼합물을 H2O(10 mL)로 희석하고, 3개의 10-mL 부분의 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 합치고, 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 미정제 2b.1(400 mg, 미정제)을 황색 오일로서 제공하였다.
Figure pct00086
EtOAc(5.00 mL)중의 2b.1(400 mg, 856 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 HCl/EtOAc(856 μmol, 15.0 mL, 1.00 eq)를 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 2:1)는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 혼합물을 감압하에 농축시키고, 생성 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하여 화합물 2b 트리플루오로아세테이트 염(70.0 mg, 173 μmol, 20.2% 수율)을 연황색 고형물로서 제공하였다.
N-(7-아미노-1-(2,6-디플루오로페녹시)-2-옥소헵탄-3-일)사이클로펜탄카르복사미드 트리플루오로아세테이트 염(55 mg)의 라세미 혼합물을 화합물 1 및 화합물 21에 대해 상기 기술된 바와 같이 화합물 2 및 화합물 2b를 조합시킴으로써 제조하였다.
실시예 5. ( S )- N -(7-아미노-1-(2- 플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일) 사이클로펜탄카르복사미드 ( 3)의 제조
Figure pct00087
EtOAc(20.00 mL) 중의 화합물 1.5(10.00 g, 40.60 mmol, 1.00 eq) 및 사이클로펜탄카르보닐 클로라이드(5.92 g, 44.66 mmol, 5.43 mL, 1.10 eq)의 혼합물에 H2O(80.00 mL) 중의 Na2CO3(5.16 g, 48.72 mmol, 1.20 eq) 및 NaOH(1.64 g, 41.01 mmol, 1.01 eq)를 0℃에서 N2 하에 첨가하였다. 혼합물을 10℃에서 3시간 동안 교반하였다. EtOAc를 제거하고, 그 후, 용액을 0℃로 냉각시키고, HCl(1N)을 사용하여 pH를 6-7로 조절하였다. 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 50 mL의 PE로 세척하고, 진공하에 건조시켜 화합물 1.4(10.60 g, 30.96 mmol, 76.26% 수율)를 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C17H30N2O5에 대한 이론치; 343.4; 실측치 343.2; RT=1.022 min.
Figure pct00088
THF(20.00 mL) 중의 화합물 1.4(2.00 g, 5.84 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 NMM(708.86 mg, 7.01 mmol, 770.50 μL, 1.20 eq) 및 이소부틸 카르본클로리데이트(797.61 mg, 5.84 mmol, 766.93 μL, 1.00 eq)를 -20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 -20℃에서 1시간 동안 교반하였다. Et2O(20ml) 중의 디아조메탄 용액을 0℃에서 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O(20 mL)로 희석하고, EtOAc(3 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합치고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하고, 실리카 겔 크로마토그래피(PE/EtOAc= 1/1)에 의해 정제하여 화합물 1.3(130.00 mg, 354.76 μmol)을 황색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C18H30N4O4에 대한 이론치: 367.4; 실측치 339.2; RT=0.772 min.
Figure pct00089
EtOAc(1.00 mL) 중의 화합물 1.3(130.00 mg, 354.75 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 HBr/AcOH(150.00 μL, 33% 순도)를 -20℃에서 N2 하에 한번에 첨가하였다. 혼합물을 -20℃에서 10분 동안 N2 하에 교반시키고, 포화된 NaHCO3로 pH = 8까지 염기성화시키고, EtOAc(3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합치고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 화합물 1.2(100.00 mg, 238.46 μmol, 67.22% 수율)를 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C18H31N2O4에 대한 이론치: 420.3; 실측치 316.2; RT=0.709 min.
Figure pct00090
DMF(1.00 mL) 중의 화합물 1.2(50.00 mg, 119.23 μmol, 1.00 eq) 및 2-플루오로페놀(13.37 mg, 119.23 μmol, 11.05 μL, 1.00 eq)의 혼합물에 KF(20.78 mg, 357.69 μmol, 8.38 μL, 3.00 eq)를 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 수성 상을 EtOAc(3 x 5 mL 3)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(3mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 그 후, 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 3.1(15.00 mg, 33.29 μmol, 27.92% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C24H36N2O5F에 대한 이론치: 451.5; 실측치 451.4; RT=0.929 min.
Figure pct00091
HCl/EtOAc(1.00 mL) 중의 화합물 3.1(15.00 mg, 33.29 μmol, 1.00 eq)의 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. 용액을 증발시켜 유기 용매를 제거하였다. 잔류 수용액을 동결건조시켜 화합물 3 하이드로클로라이드 염(2.00 mg, 5.71 μmol, 17.14% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C19H28N2O3F에 대한 이론치: 351.4; 실측치 351.3; RT=2.477 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.25 - 1.83 (m, 17 H) 2.61 - 2.87 (m, 4 H) 4.24 - 4.43 (m, 1 H) 4.95 - 5.13 (m, 2 H) 6.87 - 7.27 (m, 4 H) 7.83 (br s, 3 H) 8.31 (d, J=6.90 Hz, 1 H).
실시예 6. ( S )- N -(7-아미노-2-옥소-1-(2,3,5- 트리플루오로페녹시 )헵탄-3-일)사이클로펜탄카르복사미드 (4)의 제조
Figure pct00092
DMF(1.00 mL) 중의 화합물 1.2(100.00 mg, 238.46 μmol, 1.00 eq) 및 2,3,5-트리플루오로페놀(42.37 mg, 286.15 μmol, 1.20 eq)의 혼합물에 KF(41.56 mg, 715.38 μmol, 16.76 μL, 3.00 eq)를 25℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(50mL)에 붓고, 수성 상을 EtOAc(3 x 20mL)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(5 mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 그 후, 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 4.1(50.00 mg, 102.77 μmol, 43.10% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C24H33N2F3O5에 대한 계산치: 487.2; 실측치 487.3; RT=0.936 min.
Figure pct00093
HCl/EtOAc(2.00 mL) 중의 화합물 4.1(50.00 mg, 102.77 μmol, 1.00 eq)의 혼합물을 N2 하에 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 용액을 증발시켜 유기 용매를 제거하였다. 잔류 수용액을 동결건조시켜 화합물 4 하이드로클로라이드 염(30.00 mg, 77.64 μmol, 75.55% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C19H25N2F3O3에 대한 이론치: 387.2; 실측치 387.2; RT=2.321 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.24 - 1.85 (m, 15 H) 2.63 - 2.83 (m, 3 H) 4.20 - 4.35 (m, 1 H) 5.18 (d, J=1.32 Hz, 2 H) 6.83 - 7.14 (m, 2 H) 7.98 (br s, 3 H) 8.44 (d, J=6.62 Hz, 1 H).
실시예 7. ( S )- N -(7-아미노-1-(2,3- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일) 사 이클로펜탄카르복사미드 (5)의 제조
Figure pct00094
DMF(1.00 mL) 중의 화합물 1.2(100.00 mg, 238.46 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 KF(41.56 mg, 715.38 μmol, 16.76 μL, 3.00 eq) 및 2,3-디플루오로페놀(37.23 mg, 286.15 μmol, 1.20 eq)을 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(5mL)에 붓고, 수성 상을 EtOAc(3 x 5mL)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(3mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공하에 농축시켰다. 그 후, 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 5.1(50.00 mg, 106.72 μmol, 44.75% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00095
HCl/EtOAc(2.00 mL) 중의 화합물 5.1(50.00 mg, 106.72 μmol, 1.00 eq)의 혼합물을 N2 하에서 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 용액을 증발시켜 유기 용매를 제거하였다. 잔류 수용액을 동결건조시켜 화합물 5 하이드로클로라이드 염(15.00 mg, 40.71 μmol, 38.15% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C19H26N2F2O3에 대한 이론치: 369.2; 실측치 369.2; RT=2.246 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.23 - 1.83 (m, 15 H) 2.62 - 2.83 (m, 3 H) 4.32 (ddd, J=9.59, 6.73, 4.63 Hz, 1 H) 5.03 - 5.19 (m, 2 H) 6.77 - 7.14 (m, 3 H) 7.90 (br s, 3 H) 8.36 (d, J=6.83 Hz, 1 H).
실시예 8. ( S )- N -(7-아미노-1-(2,5- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일) 사이클로펜탄카르복사미드 (6)의 제조
Figure pct00096
DMF(1.00 mL) 중의 화합물 1.2(100.00 mg, 238.46 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 KF(41.56 mg, 715.38 μmol, 16.76 μL, 3.00 eq) 및 2,5-디플루오로페놀(37.23 mg, 286.15 μmol, 1.20 eq)을 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(5mL)에 붓고, 수성 상을 EtOAc(5mL*3)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(3mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 그 후, 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 6.1(41.00 mg, 87.51 μmol, 36.70% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00097
HCl/EtOAc(2.00 mL) 중의 화합물 6.1(41.00 mg, 87.51 μmol, 1.00 eq)의 혼합물을 N2 하에 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 용액을 증발시켜 유기 용매를 제거하였다. 잔류 수용액을 동결건조시켜 화합물 6 하이드로클로라이드 염(17.00 mg, 46.14 μmol, 52.73% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C19H26N2F2O3에 대한 이론치: 369.2; 실측치 369.2; RT=2.239 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.10 - 1.85 (m, 16 H) 2.62 - 2.84 (m, 3 H) 4.31 (br t, J=10.23 Hz, 1 H) 5.02 - 5.18 (m, 2 H) 6.69 - 7.33 (m, 3 H) 7.85 (br s, 3 H) 8.35 (br d, J=6.65 Hz, 1 H).
실시예 9. ( S )- N -(7-아미노-1-(3- 플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일) 사이클 로펜탄카르복사미드 (7)의 제조
Figure pct00098
DMF(1.00 mL) 중의 화합물 1.2(100.00 mg, 238.46 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 KF(41.56 mg, 715.38 μmol, 16.76 μL, 3.00 eq) 및 3-플루오로페놀(32.08 mg, 286.15 μmol, 26.30 μL, 1.20 eq)을 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(5mL)에 붓고, 수성 상을 EtOAc(3 x 5mL)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(3mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공하에 농축시켰다. 그 후, 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 7.1(47.00 mg, 104.32 μmol, 43.75% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00099
HCl/EtOAc(2.00 mL) 중의 화합물 7.1(47.00 mg, 104.32 μmol, 1.00 eq)의 혼합물을 N2 하에 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 용액을 증발시켜 유기 용매를 제거하였다. 잔류 수용액을 동결건조시켜 화합물 7 하이드로클로라이드 염(20.00 mg, 57.07 μmol, 54.71% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C19H27N2FO3에 대한 이론치: 351.2; 실측치 351.2; RT=2.205 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.19 - 1.85 (m, 15 H) 2.60 - 2.87 (m, 3 H) 4.33 (ddd, J=9.43, 6.67, 4.85 Hz, 1 H) 4.93 - 5.13 (m, 2 H) 6.61 - 6.88 (m, 3 H) 7.68 (br s, 3 H) 8.27 (d, J=6.84 Hz, 1 H).
실시예 10. ( S )- N -(7-아미노-1-(3,5- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일) 사 이클로펜탄카르복사미드 (8)의 제조
Figure pct00100
DMF(1.00 mL) 중의 화합물 1.2(100.00 mg, 238.46 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 KF(41.56 mg, 715.38 μmol, 16.76 μL, 3.00 eq) 및 3,5-디플루오로페놀(37.23 mg, 286.15 μmol, 1.20 eq)을 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(5mL)에 붓고, 수성 상을 EtOAc(3 x 5mL)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(3mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 그 후, 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 8.1(50.00 mg, 106.72 μmol, 44.75% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00101
HCl/EtOAc(2.00 mL) 중의 화합물 8.1(50.00 mg, 106.72 μmol, 1.00 eq)의 혼합물을 N2 하에 20℃에서 4시간 동안 교반하였다. 용액을 증발시켜 유기 용매를 제거하였다. 잔류 수용액을 동결건조시켜 화합물 8 하이드로클로라이드 염(20.00 mg, 54.29 μmol, 50.87% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C19H26N2F2O3에 대한 계산치: 369.2; 실측치 369.1; RT=2.750 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.24 - 1.82 (m, 15 H) 2.61 - 2.83 (m, 3 H) 4.32 (ddd, J=9.43, 6.67, 4.85 Hz, 1 H) 4.96 - 5.08 (m, 2 H) 6.67 (dd, J=9.48, 2.21 Hz, 2 H) 6.79 (tt, J=9.43, 2.26 Hz, 1 H) 7.67 (br s, 3 H) 8.26 (d, J=6.84 Hz, 1 H).
실시예 11. (R)-3-( 아세트아미도 -2,2,2-d3)-N-(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로 -페녹시)-2-옥소헵탄-3-일)벤즈아미드 (10)의 제조
Figure pct00102
MeOH(100.00 mL) 중의 화합물 10.7(10.00 g, 72.92 mmol, 1.00 eq)의 용액에 SOCl2(17.35 g, 145.84 mmol, 10.58 mL, 2.00 eq)를 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 65℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20mL)에 붓고, 수성 상을 EtOAc(3 x 10mL)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(5 mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하여 화합물 10.6(13.10 g, 미정제)을 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C8H9NO2에 대한 계산치: 152.1; 실측치 152.2; RT=1.191 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 3.35 (s, 3 H) 3.95 (s, 3 H) 7.65 - 7.72 (m, 2 H) 8.07 (s, 1 H) 8.10 - 8.16 (m, 1 H)
Figure pct00103
DMF(50.00 mL) 중의 화합물 10.6(3.77 g, 24.97 mmol, 1.00 eq), HOBt(3.71 g, 27.47 mmol, 1.10 eq), 및 EDCI(4.79 g, 24.97 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 DIEA(16.14 g, 124.85 mmol, 21.80 mL, 5.00 eq) 및 듀테리오 2,2,2-트리듀테리오아세테이트(1.60 g, 24.97 mmol, 1.00 eq)를 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20mL)에 붓고, 수성 상을 EtOAc(3 x 10mL)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(5 mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10:1 내지 2:1)에 의해 정제하여 화합물 10.5(2.90 g, 14.78 mmol, 59.19% 수율)를 무색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C10H8D3NO3에 대한 이론치: 197.1; 실측치 197.2; RT=0.634 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 3.91 (s, 3 H) 7.41 (t, J=7.94 Hz, 1 H) 7.51 (br s, 1 H) 7.78 (d, J=7.72 Hz, 1 H) 7.92 (br d, J=8.16 Hz, 1 H) 8.01 (s, 1 H).
Figure pct00104
MeOH(36.00 mL) 중의 화합물 10.5(2.90 g, 14.78 mmol, 1.00 eq)의 용액에 H2O(12.00 mL) 중의 NaOH(1.18 g, 29.56 mmol, 2.00 eq)를 15℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 15시간 동안 교반하였다. EtOAc를 제거하고, 그 후, 용액을 0℃로 냉각시키고, HCl(1N)을 사용하여 pH를 6-7로 조절하였다. 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 50 mL의 PE로 세척하고, 진공하에 건조시켜 화합물 10.4(2.10 g, 미정제)를 백색 고형물로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 7.41 (t, J=7.94 Hz, 1 H) 7.75 (dt, J=7.72, 1.32 Hz, 1 H) 7.82 (ddd, J=8.05, 2.21, 0.99 Hz, 1 H) 8.21 (t, J=1.87 Hz, 1 H).
Figure pct00105
DMF(2.00 mL) 중의 화합물 10.4(1.00 g, 5.49 mmol, 1.00 eq), HOBt(815.81 mg, 6.04 mmol, 1.10 eq), 및 EDCI(1.16 g, 6.04 mmol, 1.10 eq)의 혼합물에 DIEA(2.84 g, 21.96 mmol, 3.83 mL, 4.00 eq) 및 메틸 (2S)-2-아미노-6-(3차-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트(1.43 g, 5.49 mmol, 1.00 eq)를 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다 혼합물을 15℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(30mL)에 붓고, 수성 상을 EtOAc(3 x 30mL)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(5 mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=4:1 내지 0:1)에 의해 정제하여 화합물 10.3(1.90 g, 4.48 mmol, 81.53% 수율)을 연황색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C21H28D3N3O6에 대한 계산치: 425.2; 실측치 325.3; RT=0.757 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.31 - 1.54 (m, 14 H) 1.70 - 1.97 (m, 2 H) 2.11 - 2.19 (m, 1 H) 3.00 - 3.12 (m, 2 H) 3.71 (s, 3 H) 4.64 - 4.81 (m, 2 H) 7.11 (br d, J=7.50 Hz, 1 H) 7.28 - 7.36 (m, 1 H) 7.47 (br d, J=7.28 Hz, 1 H) 7.75 (br s, 1 H) 7.95 (br d, J=7.72 Hz, 1 H) 8.47 (br s, 1 H).
Figure pct00106
THF(15.00 mL) 중의 DIPA(760.95 mg, 7.52 mmol, 1.06 mL, 4.00 eq)의 용액에 n-BuLi(481.73 mg, 7.52 mmol, 4.00 eq)를 0℃에서 N2 하에 첨가하였다. 0.5h 후, 화합물 10.3(800.00 mg, 1.88 mmol, 1.00 eq) 및 클로로(아이오도)메탄(1.33 g, 7.52 mmol, 545.83 μL, 4.00 eq)을 혼합물에 -78℃에서 N2 하에 첨가하였다. 생성 혼합물을 -78℃에서 1.5hr 동안 교반하였다. 물(20 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc(3 x 20mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 화합물 10. 2(900.00 mg, 미정제)을 암갈색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C21H27D3ClN3O5에 대한 계산치: 442.2; 실측치 339.3; RT=0.748 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.35 - 1.59 (m, 17 H) 1.67 (br s, 3 H) 1.76 - 2.02 (m, 3 H) 3.11 (br d, J=6.17 Hz, 2 H) 3.77 (s, 3 H) 4.60 - 4.82 (m, 2 H) 6.87 (br s, 1 H) 7.40 (br t, J=7.61 Hz, 1 H) 7.52 (br s, 1 H) 7.66 - 7.82 (m, 2 H) 7.92 (br s, 1 H).
Figure pct00107
DMF(4.00 mL) 중의 화합물 10.2(200.00 mg, 451.52 μmol, 1.00 eq) 및 2,6-디플루오로페놀(58.74 mg, 451.52 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 DIEA(175.06 mg, 1.35 mmol, 236.57 μL, 3.00 eq)를 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 10.1(20.00 mg, 37.27 μmol, 8.26% 수율)을 암갈색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C27H30D3F2N3O6에 대한 계산치: 537.3; 실측치 481.3; RT=1.208 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.41 (br s, 18 H) 1.80 (br s, 2 H) 2.08 - 2.24 (m, 2 H) 3.13 (br s, 3 H) 4.91 (br s, 3 H) 5.24 (br s, 1 H) 6.88 - 7.05 (m, 5 H) 7.37 - 7.46 (m, 3 H) 7.56 (br s, 2 H) 7.78 (br s, 1 H) 7.93 (br s, 1 H)
Figure pct00108
DCM(10.00 mL) 중의 화합물 10.1(10.00 mg, 18.64 μmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA(3.08 g, 27.01 mmol, 2.00 mL, 1449.18 eq)를 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 4시간 동안 교반하고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 10 트리플루오로아세테이트 염(1.00 mg, 2.29 μmol, 12.29% 수율)을 암갈색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C22H22D3F2N3O4에 대한 계산치: 437.2; 실측치 437.3; RT=2.042 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.48 - 1.87 (m, 5 H) 2.13 (br s, 1 H) 2.91 - 2.99 (m, 2 H) 4.90 - 5.08 (m, 5 H) 6.94 - 7.12 (m, 3 H) 7.39 - 7.46 (m, 1 H) 7.54 - 7.65 (m, 2 H) 8.13 (s, 1 H).
실시예 12. 바이오티닐화된 진지파인 억제제 ( 11)의 제조
Figure pct00109
CH3CN(50.00 mL) 중의 화합물 10.7(5.00 g, 36.46 mmol, 1.00 eq)의 용액에 t-BuONO(5.64 g, 54.69 mmol, 6.48 mL, 1.50 eq) 및 TMSN3 (5.04 g, 43.75 mmol, 5.73 mL, 1.20 eq)를 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. H2O(20 mL)를 첨가하고, 수성 상을 EtOAc(3 x 10mL)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(5 mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하여 화합물 11.6(4.00 g, 미정제)을 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C7H5N3O2에 대한 계산치: 164.0; 실측치 164.1; RT=0.705 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 2.71 (d, J=9.48 Hz, 1 H) 6.93 - 6.98 (m, 1 H) 7.27 - 7.32 (m, 1 H) 7.44 - 7.57 (m, 1 H) 7.79 - 7.84 (m, 1 H) 7.90 - 7.95 (m, 1 H).
Figure pct00110
DMF(40.00 mL) 중의 화합물 11.6(2.00 g, 12.26 mmol, 1.00 eq), HOBt(1.82 g, 13.49 mmol, 1.10 eq), 및 EDCI(2.59 g, 13.49 mmol, 1.10 eq)의 혼합물에 메틸 (2S)-2-아미노-6-(3차-부톡시카르보닐아미노)헥사노에이트(3.19 g, 12.26 mmol, 1.00 eq) 및 DIEA(6.34 g, 49.04 mmol, 8.57 mL, 4.00 eq)를 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20mL)에 부었다. 수성 상을 EtOAc(3 x 50 mL)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(5 mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10:1 내지 2:1)에 의해 정제하여 화합물 11.5(3.50 g, 8.63 mmol, 70.39% 수율)를 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C19H27N5O5에 대한 이론치: 406.2; 실측치 350.2; RT=0.840 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.39 (s, 10 H) 1.46 - 1.56 (m, 3 H) 1.75 - 2.00 (m, 2 H) 3.05 - 3.14 (m, 2 H) 3.77 (s, 3 H) 4.64 (br s, 1 H) 4.72 - 4.80 (m, 1 H) 6.94 (br d, J=7.06 Hz, 1 H) 7.14 (ddd, J=8.05, 2.32, 0.88 Hz, 1 H) 7.40 (t, J=7.83 Hz, 1 H) 7.47 - 7.56 (m, 2 H)
Figure pct00111
THF(40.00 mL) 중의 DIPA(2.25 g, 22.20 mmol, 3.12 mL, 6.00 eq)의 용액에 n-BuLi(1.42 g, 22.20 mmol, 6.00 eq)를 0℃에서 N2 하에 첨가하였다. 0.5h 후, 화합물 11.5(1.50 g, 3.70 mmol, 1.00 eq) 및 클로로(아이오도)메탄(2.61 g, 14.80 mmol, 1.07 mL, 4.00 eq)을 혼합물에 -78℃에서 N2 하에 첨가하였다. 생성 혼합물을 -78℃에서 1.5hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 mL)에 붓고, 용액을 EtOAc(3 x 20 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하여 화합물 11.4(1.50 g, 미정제)를 암갈색 오일로서 제공하였다.
Figure pct00112
DMF(15.00 mL) 중의 화합물 11.4(1.50 g, 3.54 mmol, 1.00 eq) 및 2,6-디플루오로페놀(460.34 mg, 3.54 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 DIEA(1.37 g, 10.62 mmol, 1.85 mL, 3.00 eq)를 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 mL)에 첨가하고, 용액을 EtOAc(3 x 20 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10:1 내지 2:1)에 의해 정제하여 화합물 11.3(400.00 mg, 772.92 μmol, 21.83% 수율)을 연황색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C25H29F2N5O5에 대한 이론치: 518.2; 실측치 518.3; RT=0.912 min.
Figure pct00113
CH3CN(4.00 mL) 중의 화합물 11.3(270.00 mg, 521.72 μmol, 1.00 eq) 및 프로프-2-인-1-아민(28.74 mg, 521.72 μmol, 33.41 μL, 1.00 eq) 중의 혼합물에 CuSO4(4.16 mg, 26.09 μmol, 4.00 μL, 0.05 eq) 및 소듐 아스코르베이트(20.67 mg, 104.34 μmol, 0.20 eq)를 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 11.2(70.00 mg, 122.25 μmol, 23.43% 수율)를 암갈색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C28H34F2N6O5에 대한 이론치: 573.3; 실측치 573.5; RT=0.846 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.19 - 1.69 (m, 8 H) 2.04 (br s, 1 H) 2.67 - 3.25 (m, 3 H) 4.45 (br s, 1 H) 4.72 - 5.15 (m, 2 H) 6.78 - 7.09 (m, 2 H) 7.58 - 8.01 (m, 2 H) 8.16 - 8.49 (m, 1 H) 8.63 - 9.26 (m, 1 H).
Figure pct00114
DMF(1.00 mL) 중의 바이오틴-DPEG(4)-COOH(34.34 mg, 69.86 μmol, 1.00 eq), HOBt(9.44 mg, 69.86 μmol, 1.00 eq), 및 EDCI(13.39 mg, 69.86 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 화합물 11.2(40.00 mg, 69.86 μmol, 1.00 eq) 및 DIEA(36.11 mg, 279.44 μmol, 48.80 μL, 4.00 eq)를 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 11.1(20.00 mg, 19.12 μmol, 27.37% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C49H69F2N9O12S에 대한 이론치: 1046.5; 실측치 1046.3; RT=1.115 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.21 - 1.34 (m, 12 H) 1.35 - 1.75 (m, 9 H) 1.85 (br dd, J=9.59, 3.64 Hz, 1 H) 2.05 (t, J=7.39 Hz, 2 H) 2.35 - 2.42 (m, 1 H) 2.38 (t, J=6.50 Hz, 1 H) 2.53 - 2.60 (m, 2 H) 2.80 (dd, J=12.35, 5.07 Hz, 1 H) 2.89 (br d, J=5.95 Hz, 2 H) 3.08 (ddd, J=8.49, 6.06, 4.63 Hz, 1 H) 3.16 (q, J=5.88 Hz, 2 H) 3.44 - 3.50 (m, 15 H) 3.62 (t, J=6.50 Hz, 3 H) 4.11 (dd, J=7.72, 4.41 Hz, 1 H) 4.29 (dd, J=7.72, 4.41 Hz, 1 H) 4.40 (d, J=5.73 Hz, 2 H) 4.59 - 4.67 (m, 1 H) 5.06 - 5.20 (m, 2 H) 6.76 (br t, J=5.51 Hz, 1 H) 7.06 - 7.14 (m, 3 H) 7.71 (t, J=8.05 Hz, 1 H) 7.82 (t, J=5.62 Hz, 1 H) 7.95 - 8.00 (m, 1 H) 8.06 (ddd, J=8.16, 2.21, 0.88 Hz, 1 H) 8.36 (t, J=1.76 Hz, 1 H) 8.45 (t, J=5.51 Hz, 1 H) 8.64 (s, 1 H) 8.95 (d, J=7.28 Hz, 1 H).
Figure pct00115
TFA(1.03 g, 9.00 mmol, 666.11 μL, 470.61 eq) 중의 화합물 11.1(20.00 mg, 19.12 μmol, 1.00 eq)의 용액을 N2 하에 20℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 진공하에 농축하여 화합물 11 트리플루오로아세테이트 염(18.00 mg, 16.98 μmol, 88.81% 수율, TFA)을 백색 고형물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C44H61F2N9O10S에 대한 이론치: 946.4; 실측치 946.6; RT=2.076 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.10 - 1.77 (m, 14 H) 1.82 - 1.95 (m, 1 H) 2.05 (t, J=7.40 Hz, 2 H) 2.17 (t, J=8.03 Hz, 1 H) 2.30 - 2.42 (m, 2 H) 2.53 - 2.60 (m, 3 H) 2.64 - 2.71 (m, 2 H) 2.73 - 2.85 (m, 3 H) 3.04 - 3.12 (m, 2 H) 3.17 (q, J=5.86 Hz, 3 H) 3.44 - 3.52 (m, 14 H) 3.63 (br t, J=6.46 Hz, 2 H) 4.08 - 4.15 (m, 1 H) 4.26 - 4.33 (m, 1 H) 4.40 (d, J=5.52 Hz, 2 H) 4.63 - 4.72 (m, 1 H) 5.07 - 5.21 (m, 2 H) 6.31 - 6.42 (m, 2 H) 6.95 - 6.99 (m, 1 H) 6.97 (s, 1 H) 7.06 - 7.15 (m, 3 H) 7.23 (s, 1 H) 7.58 - 7.76 (m, 4 H) 7.81 (br t, J=5.46 Hz, 1 H) 7.95 - 8.01 (m, 1 H) 7.98 (d, J=7.91 Hz, 1 H) 8.07 (dd, J=8.03, 1.25 Hz, 1 H) 8.38 (s, 1 H) 8.45 (t, J=5.52 Hz, 1 H) 8.63 - 8.66 (m, 1 H) 8.64 (s, 1 H) 8.98 (d, J=7.53 Hz, 1 H).
실시예 13. ( S )- N -(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-3-아지도벤즈아미드 (12)의 제조
Figure pct00116
CH3CN(70.00 mL) 중의 화합물 12.7(5.00 g, 36.46 mmol, 1.00 eq) 및 t-BuONO(5.64 g, 54.69 mmol, 6.48 mL, 1.50 eq)의 혼합물에 TMSN3 (5.04 g, 43.75 mmol, 5.73 mL, 1.20 eq)를 18℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(100 mL)로 희석하고, EtOAc(3 x 50 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, DCM: MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 화합물 12.6(3.00 g, 18.39 mmol, 50.44% 수율)을 황색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00117
THF(160.00 mL) 및 MeOH(40.00 mL) 중의 화합물 12.5(20.00 g, 81.20 mmol, 1.00 eq)의 용액에 TMSCHN2 (27.82 g, 243.60 mmol, 3.00 eq)를 25℃에서 N2 하에 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 화합물 12.4(8.00 g, 30.73 mmol, 37.85% 수율)를 무색 오일로서 제공하였다.
Figure pct00118
DMF(20.00 mL) 중의 화합물 12.6(1.25 g, 7.68 mmol, 1.00 eq) 및 EDCI(1.62 g, 8.45 mmol, 1.10 eq)의 혼합물에 HOBt(1.14 g, 8.45 mmol, 1.10 eq)를 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 그 후, 혼합물에 DMF(5 mL) 중의 화합물 12.4(2.00 g, 7.68 mmol, 1.00 eq)의 용액을 적가하였다. DIPEA(2.98 g, 23.04 mmol, 4.03 mL, 3.00 eq)를 적가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)로 희석하고, EtOAc(3 x 15 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(40 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1:1)에 의해 정제하여 화합물 12.3(2.80 g, 6.91 mmol, 89.97% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD-d4) δ ppm 1.40 (s, 8 H) 1.44 - 1.58 (m, 4 H) 1.80 - 2.00 (m, 2 H) 3.00 - 3.10 (m, 2 H) 3.74 (s, 3 H) 4.58 (dd, J=9.26, 5.07 Hz, 1 H) 7.25 (ddd, J=8.05, 2.32, 1.10 Hz, 1 H) 7.49 (t, J=7.83 Hz, 1 H) 7.56 (t, J=1.76 Hz, 1 H) 7.63 - 7.69 (m, 1 H). LCMS (ESI): m/z: [M + H] C19H27O5N5에 대한 이론치: 405; 실측치 350, 306; RT=0.897min.
Figure pct00119
THF(15.00 mL) 중의 DIPA(1.50 g, 14.80 mmol, 2.08 mL, 6 eq)의 용액에 n-BuLi(2.5 M, 5.92 mL, 6.00 eq)를 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물에 THF(15.00 mL) 중의 화합물 12.3(1.00 g, 2.47 mmol, 1.00 eq) 및 클로로(아이오도)메탄(2.18 g, 12.35 mmol, 895.11 μL, 5.00 eq)의 용액을 -78℃에서 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 포화된 수성 NH4Cl(10 mL)을 첨가하고, 그 후, 혼합물을 EtOAc(3 x 15 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 수성의 포화된 Na2SO3(20) 및 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 미정제 화합물 12.2(2.00 g, 미정제)를 황색 오일로서 제공하고, 이를 다음 단계에 사용하였다.
Figure pct00120
DMF(5.00 mL) 중의 화합물 12.2(2.00 g, 4.72 mmol, 1.00 eq) 및 2,6-디플루오로페놀(613.79 mg, 4.72 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 DIPEA(2.44 g, 18.87 mmol, 3.30 mL, 4.00 eq)를 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 10시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 12.1(200.00 mg, 386.46 μmol, 8.19% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다.
Figure pct00121
DCM(5.00 mL) 중의 화합물 12.1(100.00 mg, 193.23 μmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA(1.54 g, 13.51 mmol, 1.00 mL, 69.90 eq)를 18℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 12 트리플루오로아세테이트 염(80.00 mg, 191.66 μmol, 99.19%)을 황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.49 - 1.67 (m, 2 H) 1.67 - 1.88 (m, 3 H) 2.11 (dddd, J=13.84, 9.48, 6.78, 4.30 Hz, 1 H) 2.89 - 2.99 (m, 2 H) 4.91 - 5.08 (m, 3 H) 6.95 - 7.05 (m, 2 H) 7.05 - 7.12 (m, 1 H) 7.26 - 7.31 (m, 1 H) 7.48 - 7.54 (m, 1 H) 7.56 (t, J=1.87 Hz, 1 H) 7.64 - 7.70 (m, 1 H). LCMS (ESI): m/z: [M + H] C20H21F2O3N5에 대한 이론치: 418; 실측치 418; RT=3.08min.
실시예 14. ( S )- N -(7-아미노-2-옥소-1-(1 H - 테트라졸 -1-일)헵탄-3-일) 사이클로펜탄카르복사미드 (13) 및 ( S )- N -(7-아미노-2-옥소-1-(2 H - 테트라졸 -2-일)헵탄-3-일)사이클로펜탄카르복사미드 (14)의 제조
Figure pct00122
DMF(3.00 mL) 중의 화합물 1.2(50.00 mg, 119.23 μmol, 1.00 eq)의 용액에 DIEA(46.23 mg, 357.70 μmol, 62.47 μL, 3.00 eq) 및 테트라졸(0.45 M, 264.96 μL, 1.00 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하였다. 화합물 13.1(5.00 mg, 12.24 μmol, 10.27% 수율)을 백색 고형물로서 수득하고, 5 mg의 화합물 14.1을 백색 고형물로서 수득하였다.
Figure pct00123
DCM(5.00 mL) 및 TFA(1.00 mL) 중의 화합물 13.1(5.00 mg, 12.24 μmol, 1.00 eq)의 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 13 트리플루오로아세테이트 염(5.00 mg, 11.84 μmol, 96.71% 수율, TFA)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.25 - 1.57 (m, 4 H) 1.58 - 1.81 (m, 12 H) 1.84 - 2.09 (m, 6 H) 2.68 - 2.84 (m, 1 H) 2.94 (br t, J=7.50 Hz, 3 H) 4.44 - 4.58 (m, 1 H) 5.51 - 5.79 (m, 2 H) 9.06 - 9.18 (m, 1 H). LCMS (ESI): m/z: [M + H] C14H24O2N6·C2HF3O2에 대한 이론치: 423; 실측치 309; RT=1.208 min.
Figure pct00124
DCM(5.00 mL) 및 TFA(1.00 mL) 중의 화합물 14.1(5.00 mg, 12.24 μmol, 1.00 eq)의 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 14 트리플루오로아세테이트 염(5.00 mg, 11.84 μmol, 96.71% 수율, TFA)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.20 - 1.53 (m, 5 H) 1.54 - 1.80 (m, 12 H) 1.82 - 2.08 (m, 5 H) 2.64 - 2.83 (m, 1 H) 2.93 (br t, J=7.28 Hz, 3 H) 4.55 (dd, J=9.37, 4.74 Hz, 1 H) 5.71 - 5.94 (m, 2 H) 8.76 (s, 1 H). LCMS (ESI): m/z: [M + H] C14H24N6O2·C2HF3O2에 대한 이론치: 423; 실측치 309; RT=1.606 min.
실시예 15. 형광 진지파인 활성 프로브의 제조: ( S )- N -(7-아미노-1-(2,6-디플루오로페녹시)-2-옥소헵탄-3-일)-3-(4-((3-(5,5-디플루오로-7,9-디메틸-5 H -5l4,6l4-디피롤로[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]디아자보리닌-3-일)프로판아미도)메틸)-1 H -1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (15)
Figure pct00125
THF(60.00 mL) 중의 화합물 15.7(5.00 g, 52.58 mmol, 1.00 eq) 및 메틸 2-디에톡시포스포릴아세테이트(11.05 g, 52.58 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 K2CO3(14.53 g, 105.16 mmol, 2.00 eq)를 50℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(50 mL)로 희석하고, EtOAc(3 x 50 mL)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5:1)에 의해 정제하여 15.6(8.60 g, 56.89 mmol, 108.20% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00126
MeOH(100.00 mL) 중의 화합물 15.6(8.60 g, 56.89 mmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd-C(10%, 0.9 g)를 N2 하에 첨가하였다. 현탁액을 진공하에 탈기시키고, H2로 여러 번 퍼징시켰다. 혼합물을 H2(50psi) 하에 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5:1)에 의해 정제하여 화합물 15.5(5.00 g, 32.64 mmol, 57.37% 수율)를 무색 오일로서 제공하였다.
Figure pct00127
DCM(60.00 mL) 중의 화합물 15.5(3.00 g, 19.58 mmol, 1.00 eq) 및 화합물 15.4(2.65 g, 21.54 mmol, 1.10 eq)의 혼합물에 POCl3(3.30 g, 21.54 mmol, 2.00 mL, 1.10 eq)를 18℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 18℃에서 10시간 동안 교반한 후, BF3·Et2O(11.12 g, 78.32 mmol, 9.67 mL, 4.00 eq) 및 DIEA(10.63 g, 82.24 mmol, 14.36 mL, 4.20 eq)를 18℃에서 적가하였다. 혼합물을 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, H2O(50 mL)로 희석하고, DCM(3 x 50 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세 테이트=1:4)에 의해 정제하여 화합물 15.3(3.00 g, 9.80 mmol, 50.05% 수율)을 적색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00128
THF(120.00 mL) 및 H2O(80.00 mL) 중의 화합물 15.3(1.00 g, 3.27 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 HCl(51.11 g, 519.15 mmol, 50.11 mL, 37% 순도, 158.76 eq)을 18℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(100 mL)의 첨가에 의해 켄칭시키고, 그 후, DCM(3 x 100 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(300 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, DCM:MeOH = 20:1)에 의해 정제하여 화합물 15.2(700.00 mg, 2.40 mmol, 73.29% 수율)을 적색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00129
DMF(3.00 mL) 중의 화합물 15.2(300.00 mg, 1.03 mmol, 1.00 eq) 및 HOBt(152.66 mg, 1.13 mmol, 1.10 eq)의 혼합물에 EDCI(216.58 mg, 1.13 mmol, 1.10 eq)를 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후, 프로파르길아민(56.57 mg, 1.03 mmol, 65.78 μL, 1.00 eq) 및 DIPEA(398.22 mg, 3.08 mmol, 538.13 μL, 3.00 eq)를 0℃에서 한 번에 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(4 mL)로 희석하고, EtOAc(3 x 3 mL)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(5 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을분취용-TLC(SiO2, DCM:MeOH = 20:1)에 의해 정제하여 화합물 15.1(150.00 mg, 455.72 μmol, 44.24% 수율)을 적색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00130
아세토니트릴(2.00 mL) 중의 화합물 15.1(100.00 mg, 303.81 μmol, 1.00 eq) 및 화합물 12(126.81 mg, 303.81 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 H2O(100.00 μL) 중의 CuSO4(2.42 mg, 15.19 μmol, 2.33 μL, 0.05 eq)의 용액을 한 번에 그리고, 소듐 아스코르베이트(120.38 mg, 607.62 μmol, 2.00 eq)를 18℃에서 N2 하에 첨가하였다. 혼합물을 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 15 트리플루오로아세테이트 염(5.00 mg, 6.70 μmol, 2.21% 수율)을 적색 고형물로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.46 - 1.68 (m, 1 H) 1.46 - 1.67 (m, 1 H) 1.69 - 1.90 (m, 1 H) 2.04 - 2.18 (m, 2 H) 2.19 - 2.31 (m, 3 H) 2.48 (s, 2 H) 2.69 (br t, J=7.45 Hz, 2 H) 2.95 (br s, 2 H) 3.19 - 3.28 (m, 2 H) 4.52 (s, 2 H) 5.04 (br s, 3 H) 6.19 (s, 1 H) 6.31 (br d, J=3.51 Hz, 1 H) 6.91 - 7.12 (m, 4 H) 7.31 - 7.32 (m, 1 H) 7.35 (s, 1 H) 7.68 (br t, J=8.11 Hz, 1 H) 7.65 - 7.71 (m, 1 H) 7.95 - 8.04 (m, 2 H) 8.25 - 8.36 (m, 2 H). LCMS (ESI): m/z: [M + H] C37H39F4O4N8B에 대한 이론치: 746; 실측치: 747; RT=2.117min
실시예 16. ( S )- N -(7-아미노-1-( 메틸티오 )-2- 옥소헵탄 -3-일)사이클로-펜탄-카르복사미드 (16)의 제조
Figure pct00131
DMF(2.00 mL) 중의 화합물 1.2(100.00 mg, 240 μmol, 1.00 eq)의 용액에 메틸설파닐소듐(16 mg, 240 μmol, 15 μL, 1.00 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하였다. 화합물 16.1(50.00 mg, 99.89 μmol, 55.16% 수율, TFA)을 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00132
DCM(5.00 mL) 중의 화합물 16.1(50.00 mg, 129.35 μmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA(1.00 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 16 트리플루오로아세테이트 염(5.00 mg, 17.46 μmol, 13.50% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.33 - 1.54 (m, 2 H) 1.55 - 1.79 (m, 11 H) 1.80 - 1.99 (m, 4 H) 2.06 (s, 3 H) 2.64 - 2.80 (m, 1 H) 2.86 - 2.99 (m, 2 H) 3.36 (d, J=1.54 Hz, 2 H) 4.67 (dd, J=9.48, 4.41 Hz, 1 H). LCMS (ESI): m/z: [M + H] C14H26SO2N2에 대한 이론치: 287; 실측치 287; RT=1.826 min.
실시예 17. ( S )- N -(7-아미노-2-옥소-1-(2,2,2- 트리플루오로에톡시 )헵탄-3-일)사이클로-펜탄카르복사미드 (17)의 제조
Figure pct00133
DMF(2.00 mL) 중의 화합물 1.2(50.00 mg, 119.23 μmol, 1.00 eq)의 용액에 K2CO3(49.44 mg, 357.69 μmol, 3.00 eq) 및 2,2,2-트리플루오로에탄-1-올(11.93 mg, 119.23 μmol, 8.58 μL, 1.00 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하였다. 화합물 17.1(10.00 mg, 22.81 μmol, 19.13% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00134
DCM(2.50 mL) 중의 3차-부틸 화합물 17.1(10.00 mg, 22.81 μmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA(500.00 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 17 트리플루오로아세테이트 염(5.00 mg, 14.78 μmol, 64.78% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.32 - 1.51 (m, 3 H) 1.53 - 1.78 (m, 10 H) 1.80 - 1.96 (m, 4 H) 2.72 (quin, J=7.88 Hz, 1 H) 2.86 - 2.99 (m, 2 H) 3.96 - 4.08 (m, 2 H) 4.36 - 4.55 (m, 3 H). LCMS (ESI): m/z: [M + H] C15H25O3N2F3에 대한 이론치: 339; 실측치 339; RT=2.060 min.
실시예 18. ( S )- N -(7-아미노-1-((1,1,1,3,3,3- 헥사플루오로프로판 -2-일) 옥 시)-2-옥소헵탄-3-일)사이클로펜탄카르복사미드 (18)의 제조
Figure pct00135
DMF(2.00 mL) 중의 화합물 1.2(50.00 mg, 119.23 μmol, 1.00 eq)의 용액에 K2CO3(49.44 mg, 357.69 μmol, 3.00 eq) 및 1,1,1,3,3,3-헥사플루오로프로판-2-올(20.04 mg, 119.23 μmol, 1.00 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하였다. 화합물 18.1(15.00 mg, 29.62 μmol, 24.84% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00136
DCM(5.00 mL) 중의 화합물 18.1(15.00 mg, 29.62 μmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA(1.00 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 18 트리플루오로아세테이트 염(5.00 mg, 12.30 μmol, 41.54% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.35 - 1.54 (m, 2 H) 1.55 - 1.78 (m, 10 H) 1.80 - 1.97 (m, 3 H) 2.65 - 2.79 (m, 1 H) 2.85 - 2.98 (m, 2 H) 4.45 - 4.54 (m, 1 H) 4.60 - 4.78 (m, 1 H) 4.98 - 5.08 (m, 1 H). LCMS (ESI): m/z: [M + H] C16H24O3N2F6에 대한 이론치: 407; 실측치 407; RT=2.356 min.
실시예 19. (S)-N-(7-아미노-1-( 디메틸아미노 )-2- 옥소헵탄 -3-일)사이클로-펜탄카르복사미드 (19)의 제조
Figure pct00137
DMF(1.00 mL) 중의 화합물 1.2(100.00 mg, 238.46 μmol, 1.00 eq) 및 N-메틸메탄아민(19.44 mg, 238.46 μmol, 21.85 μL, 1.00 eq, HCl)의 혼합물에 DIPEA(123.28 mg, 953.86 μmol, 166.59 μL, 4.00 eq)를 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 19.1(50.00 mg, 130.37 μmol, 54.67% 수율)을 무색 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C20H37O4N3에 대한 이론치: 383; 실측치 384; RT=0.672min
Figure pct00138
화합물 19.1(50.00 mg, 130.37 μmol, 1.00 eq)을 DMF(1.00 mL)에 용해시키고, 혼합물을 TFA(1.12 g, 9.85 mmol, 728.95 μL, 75.52 eq)에 첨가하고, 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물 감압하에 농축하여 화합물 19 트리플루오로아세테이트 염(50.00 mg, 미정제)을 무색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.39 - 1.58 (m, 3 H) 1.59 - 1.66 (m, 2 H) 1.66 - 1.78 (m, 7 H) 1.87 - 1.98 (m, 3 H) 2.68 - 2.81 (m, 1 H) 2.90 (s, 6 H) 2.92 - 2.97 (m, 2 H) 4.28 - 4.32 (m, 1 H) 4.32 - 4.42 (m, 2 H). LCMS (ESI): m/z: [M + H] C15H29O2N3에 대한 이론치: 283; 실측치 284; RT=2.365min
실시예 20. ( S )-3- 아세트아미도 - N -(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2-옥소헵탄-3-일)벤즈아미드 (9)의 제조
Figure pct00139
DMF(30.00 mL) 중의 화합물 3-아세트아미도벤조산(1.21 g, 6.74 mmol, 1.00 eq)의 용액에 HOBt(1.00 g, 7.41 mmol, 1.10 eq) 및 EDCI(1.42 g, 7.41 mmol, 1.10 eq)를 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 후, DIEA(3.48 g, 26.96 mmol, 4.71 mL, 4.00 eq) 및 화합물 9.4(2.00 g, 6.74 mmol, 1.00 eq)을 상기 혼합물에 0℃에서 N2 하에 첨가하였다. 생성 혼합물을 25℃에서 15.5hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 물(10 mL)을 첨가하고, EtOAc(30 mL * 3)로 추출하였다. 유기 상을 분리하고, NaCl(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 화합물 9.3(2.30 g, 5.46 mmol, 80.96% 수율)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C21H31N3O6에 대한 이론치: 421.22; 실측치 322.3; RT=0.748 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.30 - 1.56 (m, 14 H) 1.68 - 1.98 (m, 2 H) 2.16 (s, 3 H) 2.98 - 3.15 (m, 2 H) 3.71 (s, 3 H) 4.61 - 4.83 (m, 2 H) 7.14 (br d, J=7.50 Hz, 1 H) 7.28 - 7.37 (m, 1 H) 7.47 (br d, J=7.06 Hz, 1 H) 7.74 (br s, 1 H) 7.91 - 8.02 (m, 1 H) 8.52 (br s, 1 H).
Figure pct00140
THF(10.00 mL) 중의 DIPA(384.12 mg, 3.80 mmol, 533.50 μL, 4.00 eq)의 용액에 n-BuLi(243.17 mg, 3.80 mmol, 4.00 eq)를 0℃에서 N2 하에 첨가하였다. 0.5h 후, 화합물 9.3(400.00 mg, 949.01 μmol, 1.00 eq) 및 클로로아이오도메탄(669.55 mg, 3.80 mmol, 275.53 μL, 4.00 eq)을 상기 혼합물에 -78℃에서 N2 하에 첨가하였다. 생성 혼합물을 -78℃에서 1.5hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 물(20 mL)을 첨가하고, EtOAc(20mL * 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL*1)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 화합물 9.2(500.00 mg, 미정제)를 흑갈색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00141
DMF(4.00 mL) 중의 화합물 9.2(200.00 mg, 454.62 μmol, 1.00 eq) 및 DIEA(176.27 mg, 1.36 mmol, 238.20 μL, 3.00 eq)의 용액에 2,6-디플루오로페놀(118.28 mg, 909.24 μmol, 2.00 eq)을 25℃에서 N2 하에 첨가하였다. 생성 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 물(10 mL)을 첨가하고, EtOAc(10mL * 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(5 mL * 1)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 미정제 생성물(500.00 mg)을 황색 오일로서 수득하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(중성 조건)에 의해 정제하였다. 화합물 9.1(10.00 mg, 18.74 μmol, 2.00% 수율)을 백색 고형물로서 수득하였다.
Figure pct00142
DCM(2.00 mL) 중의 화합물 9.1(5.00 mg, 9.37 μmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA(2.14 mg, 18.74 μmol, 1.39 μL, 2.00 eq)를 N2 하에 첨가하였다. 혼합물을 -25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 농축하여 잔류물을 제공하였다. 화합물 9 트리플루오로아세테이트 염(5.00 mg, 9.13 μmol, 97.47% 수율, TFA)을 적색 오일로서 수득하였다. LCMS (ESI): m/z: [M + H] C22H25F2N3O4에 대한 이론치: 433.18; 실측치 434.2; RT=2.052 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.44 - 1.88 (m, 1 H) 1.44 - 1.51 (m, 1 H) 1.51 - 1.84 (m, 1 H) 1.52 - 1.82 (m, 1 H) 1.52 - 1.85 (m, 1 H) 1.83 - 1.85 (m, 1 H) 2.07 - 2.20 (m, 1 H) 2.94 (br t, J=6.50 Hz, 1 H) 4.90 - 5.10 (m, 1 H) 4.91 - 5.10 (m, 1 H) 6.91 - 7.13 (m, 1 H) 7.33 - 7.47 (m, 1 H) 7.49 - 7.68 (m, 1 H) 8.03 - 8.18 (m, 1 H)
추가적인 화합물을 상기 실시예의 절차에 따라 합성하였다.
실시예 21. (S)-N-(7-아미노-1-( 메틸설포닐 )-2- 옥소헵탄 -3-일)- 사이클로펜 탄카르복사미드 (20)의 제조
Figure pct00143
DMF(3.00 mL) 중의 화합물 1.2(200.00 mg, 476.93 μmol, 1.00 eq)의 용액에 메틸설파닐소듐(33.43 mg, 476.93 μmol, 30.39 uL, 1.00 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하고, 화합물 20.2(80.00 mg, 206.96 μmol, 43.39% 수율)를 황색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00144
THF(2.00 mL) 및 H2O(600.00 μL) 중의 화합물 20.2(60.00 mg, 155.22 μmol, 1.00 eq)의 용액에 옥손(190.85 mg, 310.44 μmol, 2.00 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하고, 화합물 20.1(20.00 mg, 47.78 μmol, 30.78% 수율)를 백색 고형물로서 수득하였다.
Figure pct00145
TFA(1.00 mL) 및 DCM(5.00 mL) 중의 화합물 20.1(20.00 mg, 47.78 μmol, 1.00 eq)을 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 20 트리플루오로아세테이트 염(10.00 mg, 31.40 μmol, 65.73% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.18 - 1.39 (m, 1 H) 1.18 - 1.39 (m, 1 H) 1.39 - 1.66 (m, 9 H) 1.67 - 1.88 (m, 3 H) 2.58 - 2.86 (m, 3 H) 3.08 (s, 3 H) 4.15 - 4.32 (m, 1 H) 4.39 - 4.61 (m, 2 H) 7.70 (br s, 3 H) 8.23 (d, J=7.06 Hz, 1 H). LCMS (ESI): m/z: [M + H] C14H26SO4N2에 대한 이론치: 319; 실측치 319; RT=1.916 min.
실시예 22. (S)-N-(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-3-플루오로벤즈아미드 (26)의 제조
Figure pct00146
DMF(10 mL) 중의 화합물 26.1(420.44 mg, 3.0 mmol, 1 당량) 및 EDCI(632.77 mg, 3.3 mmol, 1.1 당량), HOBt(446.01 mg, 3.3 mmol, 1.1 당량)의 혼합물에 화합물 26.2(1 g, 3 mmol, 1 당량) 및 DIEA(1.55 g, 12 mmol, 2.09 mL, 4 당량)를 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15시간 동안 교반하였다. 수성 상을 EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(5 mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1 내지 1:1)에 의해 정제하여 화합물 26.3(600 mg, 1.57 mmol, 52.3% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]+: 383; RT = 0.824min.
Figure pct00147
THF(6 mL) 중의 n-BuLi(301.51 mg, 4.71 mmol, 6 당량) 및 DIPA(476.28 mg, 4.71 mmol, 661.49 μL, 6 당량)의 혼합물을 0℃에서 N2 하에 교반하였다. 0.5h 후, 26.3(300 mg, 784.46 μmol, 1 당량) 및 아이오도클로로메탄(553.45 mg, 3.14 mmol, 227.76 μL, 4 당량)를 상기 혼합물에 -78℃에서 N2 하에 첨가하였다. 생성 혼합물을 -78℃에서 2hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 물(20 mL)을 첨가한 후, 이를 EtOAc(20 x mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 26.4(200 mg, 499 μmol, 63.6% 수율)를 갈색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00148
DMF(4 mL) 중의 화합물 26.4(200 mg, 499 μmol, 1 당량) 및 2,6-디플루오로페놀(64.9 mg, 499 μmol, 1 당량)의 혼합물에 DIEA(193.44 mg, 1.5 mmol, 261.41 μL, 3 당량)를 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하였다. 화합물 26. 5(18 mg, 36.4 μmol, 1 당량)을 백색 고형물로서 수득하였다. LCMS [M + H]+: 496; RT = 0.886 min.
Figure pct00149
HCl/EtOAc(10 mL) 중의 화합물 26.5(18 mg, 36.4 μmol, 1 당량)의 혼합물을 20℃에서 4시간 동안 교반하였다; 그 후, 여과하고 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 반-분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 26(12 mg)을 무색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]+: 395; RT = 1.53 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.48 - 1.63 (m, 2 H), 1.67 - 1.86 (m, 3 H), 2.07 - 2.18 (m, 1 H), 2.89 - 2.99 (m, 2 H), 4.92 - 4.96 (m, 1 H), 4.96 - 5.06 (m, 2 H), 6.95 - 7.03 (m, 2 H), 7.03 - 7.12 (m, 1 H), 7.29 - 7.35 (m, 1 H), 7.51 (td, J=7.99, 5.62 Hz, 1 H), 7.60 (dt, J=9.70, 2.09 Hz, 1 H), 7.67 - 7.71 (m, 1 H).
실시예 23. (S)-N-(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-3-(2-플루오로에톡시)벤즈아미드 (27)의 제조
Figure pct00150
DMF(10 mL) 중의 27.1(1 g, 6.57 mmol, 1 당량) 및 1-플루오로-2-브로모에탄(834.44 mg, 6.57 mmol, 1 당량)의 혼합물에 K2CO3(2.72 g, 19.71 mmol, 3 당량)를 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 15시간 동안 교반하였다. 수성 상을 EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(5 mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공하에 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 2/1)에 의해 정제하여 화합물 27.2(890 mg, 4.49 mmol, 68.35% 수율)를 무색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]+:199; RT = 0.77 min.
Figure pct00151
MeOH(27 mL) 및 NaOH(1 M, 8.98 mL, 2 당량) 중의 27.2(890 mg, 4.49 mmol, 1 당량)의 용액을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 합친 수성 층을 EtOAc(40 mL x 2)으로 추출하여 중성 불순물을 제거하였다. 수성 상을 수성 HCl을 사용하여 pH 5로 산성화시키고, EtOAc(40 mL)로 추출하였다. 화합물 27.3(600 mg, 3.26 mmol, 72.6% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00152
DMF(10 mL) 중의 화합물 27.3(600 mg, 3.26 mmol, 1 당량) 및 HOBt(484.54 mg, 3.59 mmol, 1.1 당량) EDCI(687.44 mg, 3.59 mmol, 1.1 당량)의 혼합물에 26.1(967.54 mg, 3.26 mmol, 1 당량, HCl) 및 DIEA(1.69 g, 13.04 mmol, 2.28 mL, 4 당량)를 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 mL)에 첨가한 후, EtOAc(20mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 27.4(1.17 g, 2.74 mmol, 84% 수율)을 무색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]+: 427; RT = 0.825 min.
Figure pct00153
n-BuLi(270.37 mg, 4.22 mmol, 6 당량)를 THF(6 mL) 중의 DIPA(427.08 mg, 4.22 mmol, 593.17 μL, 6 당량)에 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 0.5시간 후, 27.4(300 mg, 703.43 μmol, 1 당량) 및 아이오도클로로메탄(744.43 mg, 4.22 mmol, 306.35 μL, 6 당량)을 상기 혼합물에 -78℃에서 N2 하에 첨가하였다. 생성 혼합물을 -78℃에서 2hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 물(20 mL)을 첨가한 후, 이를 EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 화합물 27. 5(300 mg, 미정제)을 갈색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00154
DMF(4 mL) 중의 화합물 27.5(300 mg, 674.3 μmol, 1 당량) 및 2,6-디플루오로페놀(87.72 mg, 674.28 μmol, 1 당량)의 혼합물에 DIEA(261.43 mg, 2.02 mmol, 353.29 μL, 3 당량)를 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하였다. 화합물 27.6(72 mg, 133.7 μmol, 19.8% 수율)을 갈색 고형물로서 수득하였다; LCMS [M + H]+:539; RT = 2.85 min.
Figure pct00155
DCM(1 mL) 중의 27.6(72 mg, 133.7 μmol, 1 당량)의 용액에 TFA(304.87 mg, 2.67 mmol, 197.97 μL, 20 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이를 여과하고 진공하에 농축하여 화합물 27(50 mg, 75.02 μmol, 56% 수율, 2TFA)을 제공하였다; LCMS [M + H]+: 667; RT = 0.69 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ ppm 1.37 - 1.55 (m, 2 H), 1.57 - 1.59 (m, 2 H), 1.69 - 1.72 (m, 2 H), 1.73-1.85 (m, 2 H), 2.75 - 2.79 (t, J=8.0 Hz, 2 H), 4.26 - 4.27 (d, J=4.0 Hz, 1 H), 4.33 - 4.34 (d, J=3.6 Hz, 2 H), 4.34 - 4.35 (m, 1 H), 4.69 - 4.71(m, 1 H), 4.81 - 4.82(m, 1 H), 5.09 - 5.13(dd, J=1.6 Hz, 2 H), 7.09 - 7.12(m, 4 H), 7.39-7.48(m, 4 H), 7.73(s, 2 H), 8.77 - 8.78 (d, J=7.6 Hz, 2 H).
실시예 24. (S)-N-(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-6-플루오로피콜린아미드 (28)의 제조
Figure pct00156
DMF(15 mL) 중의 화합물 28.1(366.07 mg, 2.6 mmol, 1.1 당량)의 용액에 HOBt(350.77 mg, 2.6 mmol, 1.1 당량) 및 EDCI(497.65 mg, 2.60 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1hr 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물에 화합물 26.1(700 mg, 2.36 mmol, 1 당량, HCl) 및 DIEA(1.22 g, 9.44 mmol, 1.65 mL, 4 당량)을 첨가하였다; 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(30 mL)의 첨가에 의해 켄칭시키고, 에틸 아세테이트(30xmL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화된 염수(5 mL)로 세척하고, 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, DCM:MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 화합물 28.2(750 mg, 1.96 mmol, 83% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H - Boc]+: 384; RT = 0.817 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.42 (s, 11 H), 1.53 (br d, J=6.17 Hz, 2 H), 1.65 (s, 1 H), 1.75 - 2.05 (m, 2 H), 3.12 (br d, J=6.17 Hz, 2 H), 3.78 (d, J=0.66 Hz, 3 H), 4.57 (br s, 1 H), 4.67 - 4.89 (m, 1 H), 6.97 - 7.18 (m, 1 H), 7.87 - 8.03 (m, 1 H), 8.05 - 8.22 (m, 2 H).
Figure pct00157
THF(5 mL) 중의 DIPA(526.19 mg, 5.2 mmol, 730.82 μL, 5 당량)의 용액에 n-BuLi(2.5 M, 2.08 mL, 5 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5hr 동안 N2 하에 교반하였다; 그 후, 혼합물에 THF(10 mL) 중의 화합물 28.2(400 mg, 1.04 mmol, 1 당량) 및 클로로(아이오도)메탄(917.18 mg, 5.2 mmol, 377.44 μL, 5 당량)의 용액을 첨가하였다. 이를 -78℃에서 0.5hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 NH4Cl(20 ml)의 첨가에 의해 25℃에서 켄칭시키고, 에틸 아세테이트(15 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화된 Na2SO3(10 mL), 포화된 NaHCO3(10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척하였다; 그 후, 이를 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 28.3(500 mg, 미정제)를 황색 오일로서 제공하였다.
Figure pct00158
DMF(8 mL) 중의 28.3(500 mg, 1.24 mmol, 1 당량)의 용액에 DIEA(481 mg, 3.72 mmol, 649.69 μL, 3 당량) 및 2,6-디플루오로페놀(241.97 mg, 1.86 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 반-분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 28.4(50 mg, 101 μmol, 8% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]+: 496; RT = 2.84 min.
Figure pct00159
DCM(5 mL) 중의 28.4(50 mg, 101 μmol, 1 당량)의 용액에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다; 그 후, 감압하에 농축하여 화합물 28(20 mg, 50.6 μmol, 50% 수율)을 제공하였다; LCMS [M + H]+: 396; RT = 2.11 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.21 - 1.44 (m, 2 H), 1.45 - 1.65 (m, 2 H), 1.71 - 2.01 (m, 2 H), 2.69 - 2.85 (m, 2 H), 4.55 - 4.76 (m, 2 H), 4.97 - 5.34 (m, 2 H), 7.03 - 7.21 (m, 2 H), 7.48 (dd, J=8.27, 1.65 Hz, 1 H), 7.68 (br s, 3 H), 7.99 (dd, J=7.28, 1.76 Hz, 1 H), 8.22 (q, J=8.08 Hz, 1 H), 8.98 (d, J=8.38 Hz, 1 H).
실시예 25. (S)-N-(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-6-플루오로니코틴아미드 (29)의 제조
Figure pct00160
DMF(15 mL) 중의 6-플루오로니코틴산(366.3 mg, 2.6 mmol, 1.1 당량)의 용액에 HOBt(351 mg, 2.6 mmol, 1.1 당량) 및 EDCI(497.65 mg, 2.60 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1hr 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물에 화합물 26.1(700 mg, 2.36 mmol, 1 당량, HCl 염) 및 DIEA(1.22 g, 9.44 mmol, 1.65 mL, 4 당량)를 첨가하였다; 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(50 mL)의 첨가에 의해 켄칭시키고, 에틸 아세테이트(30 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화된 염수(5 mL)로 세척하고, 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2/1)에 의해 정제하여 29.1(300 mg, 782.45 μmol, 33.15% 수율)을 제공하였다; LCMS [M + H - Boc]+: 384; RT = 0.7 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.40 (s, 11 H), 1.48 - 1.59 (m, 3 H), 1.63 (s, 1 H), 1.76 - 2.04 (m, 2 H), 3.13 (br d, J=6.15 Hz, 2 H), 4.47 - 4.86 (m, 2 H), 6.93 (br s, 1 H), 7.01 (dd, J=8.53, 2.76 Hz, 1 H), 8.29 (td, J=7.97, 2.38 Hz, 1 H), 8.72 (s, 1 H).
Figure pct00161
THF(5 mL) 중의 DIPA(396 mg, 3.91 mmol, 549.82 μL, 5 당량)의 용액에 n-BuLi(2.5 M, 1.56 mL, 5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5hr 동안 N2 하에 교반하였다. 그 후, 혼합물을 THF(5 mL) 중의 29.1(300 mg, 782.43 μmol, 1 당량) 및 클로로아이오도메탄(690 mg, 3.91 mmol, 284 μL, 5 당량)의 용액에 첨가하였다; 이를 -78℃에서 0.5 hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 NH4Cl(20 ml)의 첨가에 의해 켄칭시킨 후, 에틸 아세테이트(15 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화된 Na2SO3(10 mL), 포화된 NaHCO3(10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척하였다. 이를 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 29.2(500 mg, 미정제)를 황색 오일로서 제공하였다.
Figure pct00162
DMF(6 mL) 중의 29.2(300.00 mg, 746.53 μmol, 1.00 당량) 및 2,6-디플루오로페놀(145.7 mg, 1.12 mmol, 1.5 당량)의 용액에 DIEA(289 mg, 2.24 mmol, 391 μL, 3 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반시킨 후, 이를 증발시키고, 반-분취용 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 29. 3(40 mg, 81 μmol, 11% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]+: 496; RT = 0.874 min.
Figure pct00163
DCM(5 mL) 중의 29.3(40 mg, 81 μmol, 1 당량)에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반시킨 후, 증발시켰다. 잔류물을 반-분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 29(10 mg, 25 μmol, 31% 수율)를 제공하였다; LCMS [M + H]+: 396; RT = 0.7 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.43 - 1.67 (m, 2 H), 1.67 - 1.89 (m, 3 H), 2.05 - 2.20 (m, 1 H), 2.86 - 3.01 (m, 2 H), 4.93 - 5.11 (m, 3 H), 6.92 - 7.16 (m, 2 H), 7.19 (dd, J=8.60, 2.65 Hz, 1 H), 8.38 (td, J=8.05, 2.65 Hz, 1 H), 8.71 (d, J=2.43 Hz, 1 H).
실시예 26. (S)-N-(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-3-(3-플루오로프로폭시)벤즈아미드 (30)의 제조
Figure pct00164
DMF(10 mL) 중의 30.1(540.13 mg, 3.55 mmol, 1 당량) 및 30.2(500 mg, 3.55 mmol, 1 당량)의 혼합물에 K2CO3(981.29 mg, 7.1 mmol, 2 당량)를 첨가하였다; 혼합물을 80℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 mL)로 희석하고, EtOAc(20xmL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 30.2(440 mg, 2.07 mmol, 58% 수율)을 무색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]+: 213; RT = 0.82 min.
Figure pct00165
MeOH(12 mL)와 NaOH(1 M, 4.14 mL, 2 당량) 중의 30.2(440 mg, 2.07 mmol, 1 당량)를 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(40 mL)로 희석시킨 후, EtOAc(40 mL x 2)로 추출하여 중성 불순물을 제거하였다. 수성 상을 수성 HCl를 사용하여 pH 5로 산성화시킨 후, 에틸 아세테이트(40 mL)로 추출하였다. 30.3(160 mg, 807 μmol, 39% 수율)을 백색 고형물로서 수득하였다; LCMS [M + H]+: 199; RT = 1.01 min.
Figure pct00166
DMF(2 mL) 중의 30.3(160 mg, 807.31 μmol, 1 당량) 및 EDCI(170.24 mg, 888.04 μmol, 1.1 당량), HOBt(120 mg, 888 μmol, 1.1 당량)에 화합물 26.1(210.17 mg, 807.31 μmol, 1 당량) 및 DIEA(417.34 mg, 3.23 mmol, 563.97 μL, 4 당량)를 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 mL)로 희석시키고, EtOAc(20mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 30.4(240 mg, 545 μmol, 67.5% 수율)를 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]+: 441; RT = 0.84 min.
Figure pct00167
n-BuLi(209.41 mg, 3.27 mmol, 6 당량)의 혼합물에 THF(6 mL) 중의 DIPA(330.8 mg, 3.3 mmol, 460 μL, 6 당량)를 한 번에 0℃에서 N2 하에 첨가하였다. 0.5h 후, 30.4(240 mg, 545 μmol, 1 당량) 및 클로로(아이오도)메탄(577 mg, 3.3 mmol, 237.3 μL, 6 당량)을 상기 혼합물에 -78℃에서 N2 하에 첨가하였다. 생성 혼합물을 -78℃에서 2hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 mL)로 희석시킨 후, EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하고, 30.5(200 mg, 미정제)를 갈색 오일로서 수득하였다.
Figure pct00168
DMF(4 mL) 중의 30.5(200 mg, 436 μmol, 1 당량) 및 2,5-디플루오로페놀(57 mg, 436 μmol, 1 당량)에 DIEA(168.96 mg, 1.31 mmol, 228.32 μL, 3 당량)를 첨가하였다; 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 반-분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 30.6(13 mg, 23.5 μmol, 5.4% 수율)을 제공하였다; LCMS [M + H]+: 553; RT = 0.91 min.
Figure pct00169
DCM(500 μL) 중의 30.6(13 mg, 23.53 μmol, 1 당량)에 TFA(160.97 mg, 1.41 mmol, 104.53 μL, 60 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. 잔류물을 반-분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 30(2 mg, 4.42 μmol, 19% 수율)을 무색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]+:453; RT = 0.7 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.47 - 1.63 (m, 2 H), 1.67 - 1.86 (m, 2 H), 2.10 - 2.23 (m, 2 H), 2.85 - 3.01 (m, 2 H), 4.10 - 4.20 (m, 1 H), 4.11 - 4.20 (m, 1 H), 4.57 (t, J=5.84 Hz, 1 H), 4.69 (t, J=5.84 Hz, 1 H), 4.90 - 5.07 (m, 4 H), 6.95 - 7.03 (m, 2 H), 7.03 - 7.11 (m, 1 H), 7.14 (ddd, J=7.94, 2.54, 1.21 Hz, 1 H), 7.35 - 7.46 (m, 3 H).
실시예 27. (S)-N-(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-2-플루오로이소니코틴아미드 ( 31)의 제조
Figure pct00170
DMF(15 mL) 중의 2-플루오로-4-카르복시피리딘(523 mg, 3.71 mmol, 1.1 당량)의 용액에 HOBt(501 mg, 3.71 mmol, 1.1 당량) 및 EDCI(710.5 mg, 3.71 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1hr 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물에 26.1(1 g, 3.37 mmol, 1 당량, HCl 염) 및 DIEA(1.74 g, 13.48 mmol, 2.35 mL, 4 당량)를 첨가하였다; 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O 5(0 mL)의 첨가에 의해 켄칭시키고, 에틸 아세테이트(30 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화된 염수(5 mL)로 세척하고, 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=2:1)에 의해 정제하여 화합물 31.1(800 mg, 2.1 mmol, 62% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H - Boc]: 384; RT = 0.8 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.27 - 1.62 (m, 14 H), 1.69 - 2.08 (m, 2 H), 3.05 (t, J=6.50 Hz, 2 H), 3.75 (s, 3 H), 4.59 (dd, J=9.37, 4.96 Hz, 1 H), 7.46 (s, 1 H), 7.69 (dt, J=5.29, 1.54 Hz, 1 H), 8.35 (d, J=5.29 Hz, 1 H)
Figure pct00171
THF(5 mL) 중의 DIPA(659.8 mg, 6.52 mmol, 916.4 μL, 5 당량)에 n-BuLi(2.5 M, 2.61 mL, 5 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5hr 동안 N2 하에 첨가한 후, 혼합물을 THF(10 mL) 중의 31.1(500 mg, 1.3 mmol, 1 당량) 및 클로로(아이오도)메탄(1.15 g, 6.52 mmol, 473.3 μL, 5 당량)의 용액에 첨가하였다; 이를 -78℃에서 0.5hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 NH4Cl(20 ml)의 첨가에 의해 켄칭시키고, 에틸 아세테이트(15 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화된 Na2SO3(10 mL), 포화된 NaHCO3(10 mL) 및 염수(10mL)로 세척하였다. 이를 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 31.2(620 mg)를 제공하였다.
Figure pct00172
DMF(5 mL) 중의 31.2(620 mg, 1.54 mmol, 1 당량)에 DIEA(598.2 mg, 4.63 mmol, 808.36 μL, 3 당량) 및 2,6-디플루오로페놀(301.1 mg, 2.31 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다; 이를 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 수성 작업 후, 잔류물을 반-분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 31.3(20 mg, 40.36 μmol, 3% 수율)을 제공하였다.
Figure pct00173
DCM(5 mL) 및 TFA(1 mL) 중의 31.3(50 mg, 101 μmol, 1 당량)을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 반-분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 31(10 mg, 25.3 μmol, 25% 수율)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 396; RT = 1.3 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.40 - 1.91 (m, 5 H), 2.03 - 2.22 (m, 1 H), 2.83 - 3.03 (m, 2 H), 4.87 - 5.15 (m, 3 H), 6.90 - 7.17 (m, 2 H), 7.38 - 7.53 (m, 1 H), 7.60 - 7.74 (m, 1 H), 8.24 - 8.39 (m, 1 H).
실시예 28. (S)-N-(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-2-플루오로니코틴아미드 (32)의 제조
Figure pct00174
DMF(15 mL) 중의 2-(플루오로)니코틴산(366.3 mg, 2.6 mmol, 1.1 당량)에 HOBt(350.8 mg, 2.6 mmol, 1.1 당량) 및 EDCI(497.65 mg, 2.6 mmol, 1.1 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1hr 동안 교반하였다; 그 후, 혼합물에 26.1 (700 mg, 2.36 mmol, 1 당량, HCl 염) 및 DIEA(1.22 g, 9.44 mmol, 1.65 mL, 4 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(50 mL)에 의해 켄칭시킨 후, 에틸 아세테이트(30mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(5mL)로 세척한 후, 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2/1)에 의해 정제하여 32.1(600 mg, 1.56 mmol, 66% 수율)을 갈색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 284; RT = 0.7 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.42 (s, 11 H), 1.54 (dt, J=13.68, 6.84 Hz, 3 H), 1.63 (s, 1 H), 1.76 - 2.10 (m, 2 H), 3.12 (br d, J=6.15 Hz, 2 H), 3.80 (s, 3 H), 4.57 (br s, 1 H), 4.76 - 4.90 (m, 1 H), 7.30 - 7.48 (m, 2 H), 8.36 (br d, J=4.52 Hz, 1 H), 8.55 (ddd, J=9.66, 7.72, 1.95 Hz, 1 H).
Figure pct00175
THF(5 mL) 중의 DIPA(527.8 mg, 5.2 mmol, 733 μL, 5 당량)에 n-BuLi(2.5 M, 2.1 mL, 5 당량)을 첨가하였다; 혼합물을 0℃에서 0.5hr 동안 N2 하에 교반하였다. 그 후, 혼합물을 THF(5 mL) 중의 32.2(400 mg, 1.04 mmol, 1 당량) 및 클로로(아이오도)메탄(920 mg, 5.22 mmol, 378.6 μL, 5 당량)에 첨가하였다; 이를 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 NH4Cl(20 ml)로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트(15xmL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화된 Na2SO3(10 mL), 포화된 NaHCO3(10 mL) 및 염수(10mL)로 세척하였다; 이를 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 32.2(620 mg)를 제공하였다.
Figure pct00176
DMF(6 mL) 중의 32.2(500 mg, 1.24 mmol, 1 당량) 및 2,6-디플루오로페놀(242.8 mg, 1.87 mmol, 1.5 당량)에 DIEA(482.41 mg, 3.73 mmol, 652 μL, 3 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 반-분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 32.2(20 mg, 40.4 μmol, 3% 수율)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 496; RT = 0.86 min.
Figure pct00177
DCM(5 mL) 및 TFA(1 mL) 중의 32.2(20 mg, 40.4 μmol, 1 당량)를 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 반-분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 32(5 mg, 12.65 μmol, 31% 수율)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 396; RT = 1.25 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.44 - 1.87 (m, 5 H), 2.06 - 2.22 (m, 1 H), 2.85 - 3.03 (m, 2 H), 4.89 - 5.12 (m, 3 H), 6.93 - 7.05 (m, 2 H), 7.06 - 7.15 (m, 1 H), 7.45 (ddd, J=7.22, 5.02, 1.87 Hz, 1 H), 8.26 (ddd, J=9.48, 7.50, 1.98 Hz, 1 H), 8.30 - 8.40 (m, 1 H).
실시예 29. (S)-N-(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-3-아지도벤즈아미드 (33)의 제조
Figure pct00178
AcN(70 mL) 중의 33.1(5 g, 36.5 mmol, 1 당량) 및 t-BuONO(5.64 g, 54.7 mmol, 6.5 mL, 1.5 당량)에 TMSN3(5.04 g, 43.75 mmol, 5.73 mL, 1.2 당량)를 18℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(100 mL)로 희석시키고, EtOAc(50 mL x 3)을 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 이 물질을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, DCM:MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 33.2(3 g, 18.4 mmol, 50% 수율)를 제공하였다.
Figure pct00179
DMF(20 mL) 중의 33.2(1.25 g, 7.68 mmol, 1 당량) 및 EDCI(1.62 g, 8.45 mmol, 1.1 당량)에 HOBt(1.14 g, 8.45 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다; 그 후, DMF(5 mL) 중의 26.1(2 g, 7.68 mmol, 1 당량)의 용액을 적가한 후, DIPEA(2.98 g, 23.04 mmol, 4.03 mL, 3 당량)를 첨가하였다. 이러한 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석시키고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(40 mL x 1)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 33.3(2.8 g, 6.91 mmol, 90% 수율)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.40 (s, 8 H), 1.44 - 1.58 (m, 4 H), 1.80 - 2.00 (m, 2 H), 3.00 - 3.10 (m, 2 H), 3.74 (s, 3 H), 4.58 (dd, J=9.26, 5.07 Hz, 1 H), 7.25 (ddd, J=8.05, 2.32, 1.10 Hz, 1 H), 7.49 (t, J=7.83 Hz, 1 H), 7.56 (t, J=1.76 Hz, 1 H), 7.63 - 7.69 (m, 1 H).
Figure pct00180
THF(15 mL) 중의 DIPA(1.5 g, 14.8 mmol, 2.08 mL, 6 당량)의 용액에 n-BuLi(2.5 M, 5.92 mL, 6 당량)를 0℃에서 첨가하였다; 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 이를 THF(15 mL)중의 33.3(1 g, 2.47 mmol, 1 당량) 및 클로로(아이오도)메탄(2.18 g, 12.35 mmol, 895.11 μL, 5 당량)에 -78℃에서 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NH4Cl(10 mL)의 첨가에 의해 켄칭시킨 후, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO3(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시킨 후, 여과하고 농축하여 33.4(2 g)를 제공하고, 이를 다음 단계에 사용하였다.
Figure pct00181
DMF(5 mL) 중의 33.4(2 g) 및 2,6-디플루오로페놀(614 mg, 4.72 mmol, 1 당량)에 DIPEA(2.44 g, 18.87 mmol, 3.3 mL, 4 당량)를 첨가하였다; 이러한 혼합물을 20℃에서 10시간 동안 교반하였다. 수성 작업 후, 잔류물을 반-분취용 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 33.5(200 mg, 386.46 μmol, 8% 수율)를 제공하였다.
Figure pct00182
DCM(5 mL) 및 TFA(1 mL) 중의 33.5 5(100 mg, 193.23 μmol, 1 당량)를 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축한 후, 반-분취용 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 33(80 mg, 192 μmol, 수율 99%)을 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 418; RT = 3.1 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.49 - 1.67 (m, 2 H) 1.67 - 1.88 (m, 3 H) 2.11 (dddd, J=13.84, 9.48, 6.78, 4.30 Hz, 1 H) 2.89 - 2.99 (m, 2 H) 4.91 - 5.08 (m, 3 H) 6.95 - 7.05 (m, 2 H) 7.05 - 7.12 (m, 1 H) 7.26 - 7.31 (m, 1 H) 7.48 - 7.54 (m, 1 H) 7.56 (t, J=1.87 Hz, 1 H) 7.64 - 7.70 (m, 1 H).
실시예 30. (S)-N-(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-2-브로모니코틴아미드 (34)의 제조
Figure pct00183
DMF(30 mL) 중의 2-(브로모)니코틴산(748.71 mg, 3.71 mmol, 1.1 당량)에 HOBt(501 mg, 3.71 mmol, 1.1 당량) 및 EDCI(710.5 mg, 3.71 mmol, 1.1 당량)를 첨가하고; 이를 0℃에서 1hr 동안 교반하였다. 이러한 혼합물에 화합물 26.1(1 g, 3.37 mmol, 1 당량, HCl 염) 및 DIEA(1.74 g, 13.48 mmol, 2.35 mL, 4 당량)를 첨가하였다; 이를 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(50 mL)의 첨가에 의해 켄칭시키고, 에틸 아세테이트(30 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(5 mL)로 세척하고, 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 2/1)에 의해 정제하여 34.1(950 mg, 2.14 mmol, 63.5% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 345; RT= 0.73 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.29 - 1.60 (m, 16 H), 1.76 - 2.04 (m, 2 H), 2.98 - 3.27 (m, 2 H), 3.80 (s, 3 H), 4.59 (br s, 1 H), 4.71 - 4.86 (m, 1 H), 6.95 (br d, J=6.61 Hz, 1 H), 7.36 (dd, J=7.61, 4.74 Hz, 1 H), 7.92 (dd, J=7.61, 1.87 Hz, 1 H), 8.45 (dd, J=4.85, 1.98 Hz, 1 H)
Figure pct00184
THF(5 mL) 중의 DIPA(1.08 g, 10.69 mmol, 1.50 mL, 5 당량)에 n-BuLi(2.5 M, 4.28 mL, 5 당량)를 첨가하였다; 이 혼합물을 0℃에서 0.5hr 동안 N2 하에 교반하였다. 이 혼합물을 THF(10 mL) 중의 34.1(950 mg, 2.14 mmol, 1 당량) 및 클로로(아이오도)메탄(1.89 g, 10.7 mmol, 776.65 μL, 5 당량)에 첨가하고, -78℃에서 0.5hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NH4Cl(20 ml)로 25℃에서 켄칭시키고, 에틸 아세테이트(15 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화된 Na2SO3(10 mL), NaHCO3(10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척하였다. 이를 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 34.2(1.1 g)를 제공하였다.
Figure pct00185
DMF(10 mL) 중의 34.2(1.1 g, 2.38 mmol, 1 당량)에 DIEA(921.63 mg, 7.13 mmol, 1.25 mL, 3 당량) 및 2,6-디플루오로페놀(463.84 mg, 3.57 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다; 수성 작업 후, 생성물을 반-분취용 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 34.3(150 mg, 269.6 μmol, 11% 수율)을 제공하였다.
Figure pct00186
DCM(10 mL) 및 TFA(2 mL) 중의 34.3(150 mg, 270 μmol, 1 당량)을 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 34(100 mg, 219.16 μmol, 81.3% 수율)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 456; RT = 2.28 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.51 - 1.88 (m, 6 H), 1.97 - 2.21 (m, 1 H), 2.95 (br t, J=7.50 Hz, 2 H), 4.96 (dd, J=9.70, 4.19 Hz, 1 H), 5.00 - 5.14 (m, 1 H), 6.93 - 7.15 (m, 2 H), 7.41 - 7.56 (m, 1 H), 7.73 - 7.89 (m, 1 H), 8.35 - 8.48 (m, 1 H).
실시예 31. (S)-N-(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-4-플루오로벤즈아미드 (35)의 제조
Figure pct00187
DMF(15 mL) 중의 4-(플루오로)벤조산(538.2 mg, 3.84 mmol, 1 당량)에 HOBt(570.75 mg, 4.22 mmol, 1.1 당량) 및 EDCI(809.74 mg, 4.22 mmol, 1.1 당량)을 첨가하였다; 혼합물을 25℃에서 0.5h 동안 교반하였다. 혼합물에 26.1(1 g, 3.84 mmol, 1 당량) 및 DIEA(1.99 g, 15.36 mmol, 2.68 mL, 4 당량)를 첨가하였다; 반응물을 14h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(50 mL)의 첨가에 의해 켄칭시키고, EtOAc(50 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화된 NaHCO3(25 mL)로 세척하고, 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 35.1(1.10 g)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 369; RT = 0.8 min.
Figure pct00188
THF(10 mL) 중의 DIPA(1.32 g, 13.05 mmol, 1.83 mL, 5 당량)에 n-BuLi(835.98 mg, 13.05 mmol, 5 당량)를 첨가하였다; 이를 25℃에서 0.5h 동안 N2 하에 교반하였다. 혼합물을 THF(10 mL) 중의 35.1(1 g, 2.61 mmol, 1 당량) 및 클로로(아이오도)메탄(5 당량)에 첨가하고, 이어서, -78℃에서 2h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화된 암모늄 클로라이드(30 mL)의 첨가에 의해 켄칭시키고, EtOAc(50 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화된 아황산수소나트륨(25 mL) 및 염수로 세척하였다. 이를 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 35.2(800 mg, 2 mmol, 77% 수율)를 제공하였다. 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다; LCMS [M + H]: 402; RT = 0.8 min.
Figure pct00189
DMF(10 mL) 중의 35.2(800 mg, 2 mmol, 1 당량)에 DIEA(773.76 mg, 5.99 mmol, 1.05 mL, 3 당량) 및 2,6-디플루오로페놀(389.42 mg, 2.99 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 수성 작업 후, 이를 반-분취용 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 35.3(80 mg, 161.78 μmol, 8 % 수율)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 495; RT = 0.94 min.
Figure pct00190
HCl/EtOAc(15 mL) 중의 35. 3(80 mg, 232.95 μmol)를 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 화합물 35(50 mg, 205.51 μmol, 88% 수율)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 244; RT = 0.104 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.51 - 1.65 (m, 2 H), 1.67 - 1.87 (m, 3 H), 2.05 - 2.18 (m, 1 H), 2.95 (br d, J=5.29 Hz, 2 H), 4.90 - 4.95 (m, 1 H), 4.95 - 5.07 (m, 2 H), 6.96 - 7.02 (m, 2 H), 7.03 - 7.12 (m, 1 H), 7.22 (t, J=8.82 Hz, 2 H), 7.92 (dd, J=8.82, 5.29 Hz, 2 H).
실시예 32. N-(7-아미노-1,1,1- 트리플루오로 -2- 옥소헵탄 -3-일)벤즈아미드 (36)의 제조
Figure pct00191
H2O(6 mL) 중의 ε-Cbz 리신(2.4 g, 8.56 mmol, 1 당량)에 NaOH(684.93 mg, 17.12 mmol, 2 당량)를 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물에 화합물 벤조일 클로라이드(1.20 g, 8.56 mmol, 994.64 μL, 1 당량)를 적가하고, 혼합물을 9시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 고형물을 EtOAc(10 ml)로 세척하여 36.1(4 g)을 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 385; RT = 0.77 min.
Figure pct00192
DCM(40 mL) 중의 36.1(4 g, 10.41 mmol, 1 당량)에 EDCI(2 g, 10.41 mmol, 1 당량)를 18℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 18℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(40 mL)의 첨가에 의해 켄칭시킨 후, DCM(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 NaHCO3(50mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 36. 2(5 g)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 367; RT = 0.87 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.33 - 2.02 (m, 7 H), 3.10 - 3.17 (m, 2 H), 4.35 - 4.54 (m, 1 H), 4.98 - 5.06 (m, 2 H), 7.28 - 7.38 (m, 5 H), 7.42 - 7.50 (m, 2 H), 7.52 - 7.58 (m, 1 H), 7.76 - 7.86 (m, 2 H).
Figure pct00193
36.2(3 g, 8.19 mmol, 1 당량)에 TFAA(2.06 g, 9.83 mmol, 1.37 mL, 1.2 당량)를 첨가하였다; 이를 40℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 36.3(3.5 g, 7.57 mmol, 92% 수율)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 463; RT = 0.96 min.
Figure pct00194
36.3(3 g, 6.49 mmol, 1 당량)에 옥살산(934.53 mg, 10.38 mmol, 916 μL, 1 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 5분 동안 교반하였다. 그 후, 이를 H2O(20 mL)의 첨가에 의해 켄칭시키고, EtOAc(20 mL x 2)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(40 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 반-분취용 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 36.4(200 mg, 458.27 μmol, 7% 수율)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 437; RT = 0.9 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.21 - 1.96 (m, 7 H), 3.04 - 3.16 (m, 2 H), 4.30 - 4.51 (m, 1 H), 4.99 (s, 1 H), 7.27 - 7.34 (m, 3 H), 7.40 - 7.47 (m, 1 H), 7.48 - 7.56 (m, 1 H), 7.74 - 7.83 (m, 1 H).
Figure pct00195
i-PrOH(10 mL) 및 HCl(1 M, 2 mL, 8.73 당량) 중의 36.4(100 mg, 229.14 μmol, 1.00 당량)에 Pd-C(10%,　0.02 g)를 N2 하에 첨가하였다. 현탁액을 진공하에 탈기시키고 H2로 여러 번 퍼징시켰다. 혼합물을 H2(50 psi) 하에 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 반-분취용 HPLC(중성 조건)에 의해 정제하여 화합물 36(20 mg, 66.16 μmol, 29% 수율)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 303; RT = 1.73 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.27 - 2.04 (m, 6 H), 2.88 (br s, 1 H), 4.50 (br t, J=12.04 Hz, 1 H), 7.44 - 7.52 (m, 2 H), 7.53 - 7.61 (m, 1 H), 7.73 - 7.90 (m, 2 H).
실시예 33. N-(7-아미노-1,1- 디플루오로 -2- 옥소헵탄 -3-일)벤즈아미드 ( 37) 의 제조
Figure pct00196
디플루오로아세트산 무수물(1.71 g, 9.83 mmol, 3 당량) 중의 36.2(1.2 g, 3.28 mmol, 1 당량)를 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 37.1(1.2 g, 미정제)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 445; RT = 0.91 min.
Figure pct00197
37.1(1.2 g, 2.70 mmol, 1 당량) 및 옥살산(486.18 mg, 5.40 mmol, 476.64 μL, 2 당량)을 120℃에서 10분 동안 N2 하에 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하고, 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 미정제 37.2를 제공하고, 이를 반-분취용 스케일 HPLC(중성 조건)에 의해 추가로 정제하여 순수한 37.2(120 mg, 286.79 μmol, 80% 수율)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 419; RT = 0.79 min.
Figure pct00198
HCl(1 mL) 및 디옥산(1 mL) 중의 37.2(10 mg, 23.9 μmol, 1 당량)를 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하고, 반-분취용 스케일 HPLC(중성 조건)에 의해 정제하여 화합물 37(120 mg, 287 μmol, 80% 수율)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 285; RT = 2.0 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.38 - 1.57 (m, 1 H), 1.72 - 1.97 (m, 5 H), 2.01 - 2.14 (m, 1 H), 3.70 - 3.85 (m, 1 H), 4.05 (br dd, J=12.35, 6.84 Hz, 1 H), 5.95 - 6.29 (m, 1 H), 7.44 - 7.60 (m, 4 H), 7.81 - 7.90 (m, 2 H).
실시예 34. 절단가능한 켄처를 갖는 형광 진지파인 활성 프로브의 제조: (S,E)-N-(7-아미노-1-(4-((4-((4-(디메틸아미노)페닐)디아제닐)벤즈아미도)-메틸)-2,6-디플루오로페녹시)-2-옥소헵탄-3-일)-3-(4-((3-(5,5-디플루오로-7,9-디메틸-5H-5l4,6l4-디피롤로[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]디아자보리닌-3-일)프로판아미도)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (38)
Figure pct00199
2,6-디플루오로-4-시아노페놀(2.5 g, 16.12 mmol, 1 당량)에 BH3-THF(1 M, 64.48 mL, 4 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응물을 HCl(6 M, 5 mL)의 첨가에 의해 25℃에서 켄칭시킨 후, 이를 감압하에 농축하여 38.1(7.1 g, 미정제)을 백색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00200
DMF(15 mL) 중의 38.2(6.09 g, 22.62 mmol, 1 당량)에 HOBt(3.36 g, 24.88 mmol, 1.1 당량) 및 EDCI(4.77 g, 24.88 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 그 후, 38.1(3.60 g, 22.62 mmol, 1 당량) 및 DIEA(11.70 g, 90.48 mmol, 15.81 mL, 4.00 당량)를 첨가하였다; 이 혼합물을 25℃에서 11시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O(20 mL)로 희석시키고, EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 이를 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 38.3(400 mg, 974.6 μmol)을 적색 고형물로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 3.11 (s, 6 H), 4.48 (s, 2 H), 6.84 (d, J=9.29 Hz, 2 H), 6.90 - 6.98 (m, 2 H), 7.78 - 7.90 (m, 4 H), 7.94 - 8.01 (m, 2 H).
Figure pct00201
DMF(10 mL) 중의 33.4(1 g, 2.36 mmol, 1 당량) 및 38.3(100 mg, 243.65 μmol, 0.1 당량)에 DIPEA(1.22 g, 9.44 mmol, 1.65 mL, 4 당량)를 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)로 희석하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 이를 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)에 의해 정제하여 38. 4(250 mg, 313.34 μmol)을 적색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00202
DMSO(2 mL) 중의 38.4(220 mg, 275.74 μmol, 1 당량) 및 프로프-2-인-1-아민(15.19 mg, 275.74 μmol, 17.66 μL, 1 당량)의 혼합물에 H2O(100 μL) 중의 CuSO4(8.8 mg, 55.15 μmol, 8.46 μL, 0.2 당량)의 용액 및 소듐 아스코르베이트(109.25 mg, 551.48 μmol, 2 당량)를 18℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 이러한 혼합물을 18℃에서 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(5 mL)로 희석시키고, EtOAc(5 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 38. 5(250 mg)을 갈색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 853; RT = 1.14 min.
Figure pct00203
THF(60 mL) 중의 2-포르밀피롤(5 g, 52.58 mmol, 1 당량) 및 메틸 2-디에톡시포스포릴아세테이트(11.05 g, 52.58 mmol, 1 당량)에 K2CO3(14.53 g, 105.16 mmol, 2 당량)를 50℃에서 N2 하에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O(50 mL)로 희석하고, EtOAc(50 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 이 물질을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)에 의해 정제하여 38.6(8.6 g, 57 mmol)을 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 152; RT = 0.68 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 3.69 - 3.76 (m, 3 H), 6.04 - 6.13 (m, 1 H), 6.15 - 6.21 (m, 1 H) ,6.31 (dt, J=3.91, 2.12 Hz, 1 H,) 6.45 - 6.57 (m, 1 H), 6.92 (br d, J=1.32 Hz, 1 H), 6.98 - 7.21 (m, 1 H), 7.44 - 7.59 (m, 1 H).
Figure pct00204
MeOH(100 mL) 중의 38.6(8.6 g, 56.89 mmol)에 Pd-C(10%,　0.9 g)를 N2 하에 첨가하였다. 현탁액을 진공하에 탈기시키고, H2로 여러 번 퍼징시켰다. 혼합물을 H2(50 psi) 하에 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 이 물질을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)에 의해 정제하여 38.6(5 g, 32.64 mmol)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 154; RT = 0.55 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 2.66 (t, J=6.78 Hz, 2 H), 2.93 (t, J=6.71 Hz, 2 H), 3.62 - 3.78 (m, 3 H), 5.80 - 5.99 (m, 1 H), 6.12 (q, J=2.76 Hz, 1 H) 6.60 - 6.76 (m, 1 H), 8.54 (br s, 1 H).
Figure pct00205
DCM(60 mL) 중의 38.6(3 g, 19.58 mmol, 1 당량) 및 화합물 2-포르밀-3,5-디메틸피롤(2.65 g, 21.54 mmol, 1.1 당량)에 POCl3(3.3 g, 21.54 mmol, 2 mL, 1.1 당량)를 18℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 18℃에서 10시간 동안 교반하고, 그 후, BF3.Et2O(11.12 g, 78.32 mmol, 9.67 mL, 4 당량) 및 DIEA(10.63 g, 82.24 mmol, 14.36 mL, 4.2 당량)를 18℃에서 적가하였다. 이러한 혼합물을 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 그 후, H2O(50 mL)로 희석하고 DCM(50 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 이를 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/4)에 의해 정제하여 38.7(3 g, 9.80 mmol)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 2.25 (s, 3 H), 2.57 (s, 3 H), 2.78 (t, J=7.59 Hz, 2 H), 3.30 (t, J=7.65 Hz, 2 H), 3.67 - 3.78 (m, 3 H), 6.11 (s, 1 H), 6.27 (d, J=3.89 Hz, 1 H), 6.88 (d, J=3.89 Hz, 1 H), 7.08 (s, 1 H).
Figure pct00206
THF(120 mL) 및 H2O(80 mL) 중의 38.7(1.2 g, 3.92 mmol, 1 당량) 및 HCl(50 mL, 37%)을 18℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(80 mL)으로 분할시키고, 수성 층을 DCM(100 mL x 2)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(300 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 이 물질을 분취용 스케일 TLC(SiO2, DCM: MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 38.8(700 mg, 2.4 mmol)을 적색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00207
DMF(2 mL) 중의 38.8(109.59 mg, 375.18 μmol, 2 당량) 및 HOBt(152.08 mg, 1.13 mmol, 6 당량)의 혼합물에 EDCI(215.76 mg, 1.13 mmol, 6 당량)를 0℃에서 N2 하에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. 이 혼합물에 38.5(160 mg, 187.59 μmol, 1 당량) 및 DIPEA(145.46 mg, 1.13 mmol, 196.57 μL, 6 당량)를 첨가하고, 이러한 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(5 mL)로 희석하고, EtOAc(5 mL x 3)으로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 분취용 스케일 TLC(SiO2, EtOAc)에 의해 정제하여 38.9(60 mg, 53.24 μmol)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 1128; RT = 1.45 min.
Figure pct00208
38.9(50 mg, 44.37 μmol, 1 당량)를 HCl/EtOAc(5 mL)에 첨가하고, 이러한 혼합물을 18℃에서 10분 동안 교반하였다. 반응물을 감압하에 농축하여, 그 후, 반-분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 38(10 mg, 9.74 μmol)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 1027; RT = 2.82 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.23 - 1.59 (m, 4 H), 1.67 (br d, J=9.48 Hz, 1 H), 1.85 (br d, J=6.62 Hz, 1 H), 2.21 (s, 2 H), 2.42 (s, 3 H), 2.53 (br d, J=7.94 Hz, 2 H), 2.74 (br d, J=6.39 Hz, 2 H), 3.04 (s, 5 H), 3.06 - 3.11 (m, 1 H), 4.39 (br d, J=5.51 Hz, 5 H), 4.64 (br s, 1 H), 4.99 - 5.20 (m, 2 H), 6.25 (s, 1 H), 6.32 (br d, J=3.97 Hz, 1 H), 6.81 (br d, J=9.04 Hz, 2 H), 6.96 - 7.10 (m, 2 H), 7.52 - 7.62 (m, 3 H), 7.68 (br t, J=8.05 Hz, 1 H), 7.79 (br dd, J=8.60, 4.41 Hz, 3 H), 7.90 - 8.01 (m, 2 H), 8.04 (d, J=7.72 Hz, 1 H), 8.36 (s, 1 H), 8.47 - 8.58 (m, 1 H), 8.64 (s, 1 H), 8.96 (br d, J=7.50 Hz, 1 H), 9.07 - 9.20 (m, 1 H).
실시예 35. (S)-N-(7-아미노-2-옥소-1-(6- 옥소피리미딘 -1(6H)-일)헵탄-3-일)사이클로펜탄카르복사미드 ( 39)의 제조
Figure pct00209
DMF(2 mL) 중의 1.2(150 mg, 357.7 μmol, 1 당량)에 K2CO3(148.31 mg, 1.07 mmol, 3 당량) 및 4-하이드록실피리미딘(34.37 mg, 357.7 μmol, 1 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 반-분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 39.1(40 mg, 92.05 μmol)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 435; RT = 0.76 min.
Figure pct00210
DCM(5 mL) 및 TFA(1 mL) 중의 39.1(40 mg, 92.05 μmol, 1 당량)을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 39(20 mg, 59.8 μmol, 65% 수율)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 335; RT = 0.25 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.37 - 1.57 (m, 2 H), 1.57 - 1.81 (m, 10 H), 1.83 - 2.06 (m, 3 H), 2.63 - 2.83 (m, 1 H), 2.94 (br t, J=7.50 Hz, 2 H), 4.52 (dd, J=8.49, 5.40 Hz, 1 H), 4.95 - 4.99 (m, 1 H), 4.97 (s, 1 H), 6.51 (d, J=6.61 Hz, 1 H), 8.00 (d, J=6.61 Hz, 1 H), 8.32 (s, 1 H).
실시예 36. (S)-N-(7-아미노-2-옥소-1-(4- 옥소피리미딘 -1(4H)-일)헵탄-3-일)사이클로펜탄카르복사미드 (40)의 제조
Figure pct00211
DMF(3 mL) 중의 1.2(100 mg, 238.46 μmol, 1 당량)에 Ag2CO3(197.27 mg, 715.38 μmol, 32.45 μL, 3.00 당량) 및 4-하이드록시피리미딘(22.91 mg, 238.46 μmol, 1 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 반-분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 40.1(30 mg, 69.04 μmol, 29% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 435; RT=0.74 min.
Figure pct00212
TFA(1 mL) 및 DCM(5 mL) 중의 40.1(30 mg, 69 μmol, 1 당량)을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 40(2 mg, 6 μmol)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 335; RT = 0.43 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.24 - 1.57 (m, 4 H), 1.58 - 1.81 (m, 10 H), 1.82 - 2.03 (m, 4 H), 2.66 - 2.84 (m, 1 H), 2.86 - 3.03 (m, 2 H), 4.31 - 4.48 (m, 1 H), 4.95 - 5.19 (m, 2 H), 6.30 (d, J=7.58 Hz, 1 H), 7.62 (br d, J=7.34 Hz, 1 H), 8.23 (br s, 1 H).
실시예 37. (S)-N-(7-아미노-1-(5- 플루오로 -6- 옥소피리미딘 -1(6H)-일)-2- 옥 소헵탄-3-일)사이클로펜탄카르복사미드 (41)의 제조
Figure pct00213
DMF(2 mL) 중의 1.2(150 mg, 357.7 μmol, 1 당량)에 K2CO3(148.31 mg, 1.07 mmol, 3 당량) 및 5-플루오로피리미딘-4-올(40.81 mg, 357.7 μmol, 1 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 반-분취용 스케일 HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 41.1(50.00 mg, 110.49 μmol, 30.89% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 453; RT = 0.8 min.
Figure pct00214
DCM(5 mL) 및 TFA(1 mL) 중의 41.1(50 mg, 110.49 μmol, 1. 당량)을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 41(30 mg, 85.13 μmol, 77% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 353; RT = 0.16 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.28 - 1.47 (m, 2 H), 1.48 - 1.73 (m, 9 H), 1.75 - 1.98 (m, 3 H), 2.56 - 2.73 (m, 1 H), 2.86 (br t, J=7.52 Hz, 2 H), 4.44 (dd, J=8.56, 5.50 Hz, 1 H), 4.90 - 5.04 (m, 2 H), 7.95 (d, J=2.45 Hz, 1 H), 8.05 (s, 1 H).
실시예 38. (S)-N-(7-아미노-2-옥소-1-(2,3,6- 트리플루오로페녹시 )헵탄-3-일)니코틴아미드 (42)의 제조
Figure pct00215
DMF(10 mL) 중의 니코틴산(497.86 mg, 4.04 mmol, 339 μL, 1.2 당량)에 HOBt(501 mg, 3.71 mmol, 1.1 당량) 및 EDCI(710.5 mg, 3.71 mmol, 1.1 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1hr 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물을 DIPEA(1.74 g, 13.48 mmol, 2.35 mL, 4 당량) 및 26.1(1 g, 3.37 mmol, 1.00 당량, HCl 염)에 첨가하고, 25℃에서 11시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)로 희석하고, EtOAc(20xmL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 0/1)에 의해 정제하여 42.1(800 mg, 2.19 mmol, 65% 수율)을 무색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.41 (br s, 10 H), 1.54 (br d, J=6.11 Hz, 3 H), 1.81 - 2.06 (m, 3 H), 3.14 (br s, 2 H), 3.80 (br d, J=2.69 Hz, 3 H), 4.06 - 4.20 (m, 1 H), 7.04 (br s, 1 H), 7.40 (br d, J=5.14 Hz, 1 H), 8.16 (br s, 1 H), 8.76 (br s, 1 H), 9.07 (br s, 1 H).
Figure pct00216
THF(5 mL) 중의 DIPA(648 mg, 6.4 mmol, 9 μL, 6 당량)의 용액에 n-BuLi(2.5 M, 2.56 mL, 6 당량)를 첨가하였다; 이를 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. THF(5 mL) 중의 42.1(390 mg, 1.07 mmol, 1 당량)에 클로로(아이오도)메탄(1.13 g, 6.4 mmol, 464.8 μL, 6 당량)을 첨가하였다; 이를 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 후, 두 혼합물을 합치고, -78℃에서 2hr 동안 교반하였다. 반응물을 NH4Cl 용액(15 mL)의 첨가에 의해 켄칭시키고, EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO3 용액(15 mL), NaHCO3 용액(15 mL) 및 염수(15 mL)로 세척하였다; 이를 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 42.2(410 mg)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 384; RT = 0.79 min.
Figure pct00217
DMF(5 mL) 중의 42.2(410 mg, 1.07 mmol, 1 당량)에 DIPEA(553.15 mg, 4.28 mmol, 747.5 μL, 4 당량) 및 2,3,6-트리플루오로페놀(158.45 mg, 1.07 mmol, 1 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 잔류물을 반-분취용 스케일 HPLC(칼럼: Waters Xbridge 150 x 25 x 5μ; 이동 상: [A: 물(0.1%TFA); B: AcN]; B의 구배: 12분에 걸쳐 24%-65%)에 의해 정제하여 42.3(40 mg, 90 μmol)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 496; RT = 0.80 min.
Figure pct00218
CH2Cl2(5 mL) 중의 42.3(40.00 mg, 80.73 μmol)에 TFA(1 mL)를 첨가하고, 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 용매를 제거하여 화합물 42(20 mg, 50.59 μmol, 63% 수율)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 396; RT = 0.76 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.48 - 1.67 (m, 2 H), 1.70 - 1.91 (m, 3 H), 2.08 - 2.19 (m, 1 H), 2.91 - 3.03 (m, 1 H), 2.97 (br t, J=7.03 Hz, 1 H), 4.95 - 5.01 (m, 1 H), 5.05 - 5.25 (m, 2 H), 6.94 - 7.09 (m, 2 H), 7.68 - 7.81 (m, 1 H), 8.39 - 8.51 (m, 1 H), 8.75 - 8.85 (m, 1 H), 9.01 - 9.14 (m, 1 H).
실시예 39. (S)-N-(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)니코틴아미드 (43)의 제조
Figure pct00219
DMF(10 mL) 중의 니코틴산(497.86 mg, 4.04 mmol, 338.68 μL, 1.2 당량)에 HOBt(500.8 mg, 3.71 mmol, 1.1 당량) 및 EDCI(710.5 mg, 3.71 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1hr 동안 교반하였다. 혼합물에 DIPEA(1.74 g, 13.48 mmol, 2.35 mL, 4 당량) 및 26.1(1 g, 3.37 mmol, 1 당량, HCl)을 첨가하였다; 이를 25℃에서 11시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)로 희석시키고, EtOAc(20mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20:1 내지 0:1)에 의해 정제하여 43.1(800 mg, 2.19 mmol)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 366; RT = 0.69 min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.39 (s, 9 H), 1.49 - 1.59 (m, 2 H), 1.78 - 2.05 (m, 5 H), 3.12 (br d, J=5.70 Hz, 2 H), 3.79 (s, 2 H), 3.78 - 3.81 (m, 1 H), 4.65 (br s, 1 H), 4.79 (br d, J=5.26 Hz, 1 H), 7.02 (br d, J=5.70 Hz, 1 H), 7.39 (dd, J=7.67, 5.04 Hz, 1 H), 8.15 (br d, J=7.89 Hz, 1 H), 8.74 (br d, J=4.38 Hz, 1 H), 9.06 (br s, 1 H).
Figure pct00220
THF(5 mL) 중의 DIPA(662 mg, 6.54 mmol, 919 μL, 6 당량)의 용액에 n-BuLi(2.5 M, 2.62 mL, 6 당량)를 첨가하였다; 이를 0℃에서 1hr 동안 교반하였다. THF(5 mL) 중의 43.1(400 mg, 1.09 mmol, 1 당량)에 클로로(아이오도)메탄(1.15 g, 6.54 mmol, 474.7 μL, 6 당량)을 첨가하고, -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물을 첨가한 후, 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NH4Cl 용액 15 mL의 첨가에 의해 25℃에서 켄칭시키고, EtOAc(15mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 Na2SO3 용액(15 mL), NaHCO3 용액(15 mL) 및 염수(15 mL)로 세척하였다; 그 후, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 43.2(500 mg)를 제공하였다.
Figure pct00221
DMF(5 mL) 중의 43.3(500 mg, 1.30 mmol, 1 당량)에 DIPEA(672.05 mg, 5.2 mmol, 908.18 μL, 4 당량) 및 2,6-디플루오로페놀(186.03 mg, 1.43 mmol, 1.1 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(칼럼: Waters Xbridge 150 x 25 x 5 μ; 이동 상: [A: 물(0.1%TFA), B: AcN]; B의 구배: 12 분에 걸쳐 23% 내지 63%)에 의해 정제하여 43. 4(40 mg, 86.30 μmol)을 제공하였다.
Figure pct00222
CH2Cl2 (5 mL) 및 TFA(1 mL) 중의 43. 4(40 mg, 83.77 μmol)을 25℃에서 7시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 43(15 mg)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 378; RT = 0.61 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.51 - 1.68 (m, 2 H), 1.72 - 1.90 (m, 3 H), 2.08 - 2.24 (m, 1 H), 2.97 (br t, J=6.60 Hz, 2 H), 4.97 - 5.12 (m, 3 H), 6.95 - 7.06 (m, 2 H), 7.06 - 7.15 (m, 1 H), 7.71 - 7.83 (m, 1 H), 8.50 (br d, J=7.95 Hz, 1 H), 8.82 (br d, J=3.67 Hz, 1 H), 9.03 - 9.17 (m, 1 H).
실시예 40. ( S,E )-N-(7-아미노-1-(4-((4-((4-(디메틸아미노)페닐)디-아제닐)벤즈아미도)메틸)-2,6-디플루오로페녹시)-2-옥소헵탄-3-일)-3-아지도벤즈아미드 (44)의 제조
Figure pct00223
CH2Cl2(5 mL) 중의 38.4(100 mg, 125.34 umol, 1 당량)의 용액에 TFA(1.54 g, 13.51 mmol, 1 mL, 107.76 당량)를 첨가하고, 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(Waters Xbridge 150 x 25x 5μ; 이동 상: [A: 물(0.1%TFA) & B: ACN]; B%: 31%-61%,12min)에 의해 정제하여 화합물 44(40 mg, 57.33 umol, 46% 수율)를 적색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 698; RT=2.764 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.29 - 1.46 (m, 2 H), 1.52 (dt, J=14.28, 7.30 Hz, 2 H), 1.63 - 1.74 (m, 1 H), 1.79 - 1.91 (m, 1 H), 2.71 - 2.81 (m, 2 H), 3.07 (s, 5 H), 4.42 (br d, J=5.73 Hz, 2 H), 4.54 - 4.67 (m, 1 H), 4.95 - 5.19 (m, 2 H), 6.84 (br d, J=9.04 Hz, 2 H), 7.01 - 7.11 (m, 2 H), 7.30 (br d, J=7.94 Hz, 1 H), 7.52 (br t, J=7.83 Hz, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 7.63 (br s, 2 H), 7.68 (br d, J=7.72 Hz, 1 H), 7.82 (dd, J=8.71, 4.74 Hz, 3 H), 7.94 - 8.10 (m, 1 H), 8.85 (br d, J=7.50 Hz, 1 H), 9.11 - 9.24 (m, 1 H).
실시예 41. (S,E)-N-(7-아미노-1-(4-(2-(4-((4-(디메틸아미노)페닐)디-아제닐)벤즈아미도)에틸)-2,6-디플루오로페녹시)-2-옥소헵탄-3-일)-3-(4-((3-(5,5-디플루오로-7,9-디메틸-5H-5l4,6l4-디피롤로[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]디아자보리닌-3-일)프로판아미도)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (45)의 제조
Figure pct00224
아세트산(50.00 mL) 중의 3,5-디플루오로-4-하이드록시벤즈알데하이드(5 g, 31.63 mmol, 1 당량)의 용액에 니트로메탄(11.58 g, 189.78 mmol, 10.25 mL, 6.00 당량) 및 CH3COONH4(9.75 g, 126.52 mmol, 4.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H20(20 mL)로 희석시키고, EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1 내지 1:1)에 의해 정제하여 45.1(4.60 g, 22.87 mmol, 72% 수율)을 황색 고형물로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 7.33 - 7.40 (m, 2 H), 7.77 - 7.89 (m, 1 H), 7.90 - 8.01 (m, 1 H).
Figure pct00225
EtOH(200.00 mL) 중의 45.1(2.10 g, 10.44 mmol, 1.00 당량)의 용액에 HCl(6 M, 12.60 mL, 7.24 당량) 및 Pd/C(10%, 1.5 g)를 Ar 대기하에 0℃에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기시키고, H2로 3회 퍼징시켰다. 혼합물을 H2(15 psi) 하에 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 EtOH를 제거하여 45. 2(2.00 g, 미정제)을 갈색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 174; RT= 0.102 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 2.88 (t, J=7.52 Hz, 2 H) 3.08 - 3.20 (m, 2 H), 6.85 - 6.93 (m, 2 H).
Figure pct00226
DMF(20.00 mL) 중의 디아조 화합물(3.11 g, 11.55 mmol, 1.00 당량)의 용액에 EDCI(2.44 g, 12.71 mmol, 1.10 당량) 및 HOBt(1.72 g, 12.71 mmol, 1.10 당량)를 첨가하고, 0℃에서 1hr 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물에 45.2(2.00 g, 11.55 mmol, 1.00 당량) 및 DIPEA(5.97 g, 46.20 mmol, 8.07 mL, 4.00 당량)를 첨가하고, 25℃에서 11hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)로 희석하고, EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1 내지 1:1)에 의해 정제하여 45.3(600 mg, 1.41 mmol)을 제공하였다. LCMS [M + H]: 425; RT=0.848 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.04 - 3.09 (m, 6 H), 3.43 - 3.51 (m, 1 H), 4.37 (br d, J=5.99 Hz, 1 H), 4.54 (br d, J=5.75 Hz, 1 H), 6.76 - 7.02 (m, 3 H), 6.79 (br s, 1 H), 7.71 - 7.85 (m, 4 H) 7.88 - 8.01 (m, 2 H).
Figure pct00227
DMF(10.00 mL) 중의 45.3(310.00 mg, 730.37 μmol, 0.18 당량)의 용액에 33.4(1.70 g, 4.01 mmol, 1.00 당량) 및 DIPEA(2.07 g, 16.04 mmol, 2.80 mL, 4.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)로 희석하고, EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1 내지 1:1)에 의해 정제하여 45.4(350 mg)를 제공하였다. LCMS [M + H]: 813; RT=1.393 min.
Figure pct00228
DMSO(2.00 mL) 중의 45.4(200.00 mg, 246.34 μmol, 1.00 당량)의 용액에 H2O(200.00 μL) 중의 화합물 14A(13.57 mg, 246.34 μmol, 15.78 μL, 1.00 당량) 및 CuSO4(1.97 mg, 12.32 μmol, 1.89 μL, 0.05 당량), 및 소듐 아스코르베이트(97.61 mg, 492.68 μmol, 2.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)로 희석하고, EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1 내지 1:1)에 의해 정제하여 45. 5(130 mg)을 제공하였다.
Figure pct00229
DMF(2.00 mL) 중의 디플루오로보레이트 염료(48.18 mg, 164.95 μmol, 1.10 당량)의 혼합물에 EDCI(31.62 mg, 164.95 μmol, 1.10 당량) 및 HOBt(22.29 mg, 164.95 μmol, 1.10 당량)를 0℃에서 첨가하고, 1hr 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물에 45.5(130.00 mg, 149.95 μmol, 1.00 당량) 및 DIPEA(77.52 mg, 599.80 μmol, 104.76 μL, 4.00 당량)를 첨가하고, 25℃에서 11hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)로 희석하고, EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 45.6(120.00 mg)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 1142; RT=1.461 min.
Figure pct00230
HCl/EtOAc(5.00 mL) 중의 화합물 15(120.00 mg, 105.17 μmol, 1.00 당량)의 용액을 25℃에서 0.1시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(칼럼: Luna C18 100 x 30 x 5u; 이동 상: A: 물(0.1%TFA), B:ACN; B%: 30%-60%,10min)에 의해 정제하여 화합물 45(20.00 mg, 19.21 μmol, 18.27% 수율)를 적색 고형물로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.33 - 1.51 (m, 2 H), 1.56 (dt, J=14.00, 7.06 Hz, 2 H), 1.73 (br dd, J=9.29, 4.40 Hz, 1 H), 1.90 (br d, J=6.24 Hz, 1 H), 2.25 (s, 3 H), 2.46 (s, 3 H), 2.74 - 2.87 (m, 5 H), 3.08 (s, 6 H), 3.46 - 3.55 (m, 2 H), 4.44 (br d, J=5.01 Hz, 2 H), 4.64 - 4.73 (m, 1 H), 5.01 - 5.18 (m, 2 H), 6.30 (s, 1 H), 6.36 (d, J=4.03 Hz, 1 H), 6.86 (d, J=9.17 Hz, 2 H), 7.01 - 7.11 (m, 3 H), 7.62 - 7.76 (m, 4 H), 7.78 - 7.87 (m, 4 H), 7.92 - 8.11 (m, 4 H), 8.40 (s, 1 H), 8.57 (br t, J=5.50 Hz, 1 H), 8.61 - 8.70 (m, 2 H), 8.99 (br d, J=7.34 Hz, 1 H).
실시예 42. 절단가능한 켄처를 갖는 형광 진지파인 활성 프로브의 제조 (S,E)-N-(7-아미노-1-(4-(2-(4-((4-(디메틸아미노)페닐)디아제닐)벤즈아미도)에틸)-2,6-디플루오로페녹시)-2-옥소헵탄-3-일)-3-아지도벤즈아미드 (46)
Figure pct00231
HCl/EtOAc(5.00 mL) 중의 45.5(150.00 mg, 188.01 μmol, 1.00 당량)의 용액을 25℃에서 0.2시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(칼럼: Waters Xbridge Prep OBD C18 150 x 30 x 5 u; 이동 상: A: 물(0.1%TFA), B: ACN; B%: 26%-66%, 12분)에 의해 정제하여 화합물 46(10.00 mg, 14.33 μmol, 7.62% 수율)을 적색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 712; RT = 2.76 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.52 - 1.60 (m, 2 H), 1.67 - 1.85 (m, 4 H), 2.09 (br s, 1 H), 2.85 - 3.00 (m, 4 H), 3.13 (s, 6 H), 3.61 (br t, J=7.24 Hz, 2 H), 4.52 (s, 1 H),4.92 - 5.04 (m, 2 H),6.87 (d, J=8.77 Hz, 2 H),6.95 (br d, J=9.21 Hz, 1 H),7.03 (br d, J=9.65 Hz, 1 H), 7.27 (br d, J=7.89 Hz, 1 H),7.47 - 7.53 (m, 1 H),7.55 (br s, 1 H),7.65 (br d, J=7.02 Hz, 1 H),7.80 - 7.91 (m, 5 H),7.98 (d, J=8.77 Hz, 1 H).
실시예 43. (S)-N-(7-아미노-2-옥소-1-(2,3,6- 트리플루오로페녹시 )헵탄-3-일)-2-메톡시-2-메틸프로판아미드 (47)의 제조
Figure pct00232
DMF(15.00 mL) 중의 2-메톡시-2-메틸-프로판산(398.03 mg, 3.37 mmol, 1.00 당량)의 용액에 HOBt(500.89 mg, 3.71 mmol, 1.10 당량) 및 EDCI(710.63 mg, 3.71 mmol, 1.10 당량)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1hr 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물에 DIPEA(1.74 g, 13.48 mmol, 2.35 mL, 4.00 당량) 및 26.4(1.00 g, 3.37 mmol, 1.00 당량, HCl)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)로 희석하고, EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=2:1)에 의해 정제하여 47.1(1.00 g, 2.77 mmol, 82.33% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 361; RT=0.780min. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.20 - 1.58 (m, 17 H), 1.60 - 1.75 (m, 1 H), 1.81 - 1.94 (m, 1 H), 3.09 (br d, J=6.17 Hz, 2 H), 3.29 (s, 3 H), 3.74 (s, 3 H), 4.45 - 4.73 (m, 2 H), 7.09 (br d, J=8.38 Hz, 1 H).
Figure pct00233
THF(10 mL) 중의 DIPA(1.54 g, 15.24 mmol, 2.14 mL, 5.50 당량)의 용액에 n-BuLi(2.5 M, 6.09 mL, 5.50 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5hr 동안 N2 하에 교반하였다. 그 후, 혼합물을 THF(10 mL) 중의 화합물 2(1.00 g, 2.77 mmol, 1.00 당량) 및 클로로(아이오도)메탄(2.69 g, 15.24 mmol, 1.11 mL, 5.50 당량)의 용액에 첨가하고, -78℃에서 0.5hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)로 희석하고, EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하여, 47.2(1.30 g, 미정제)를 갈색 오일로서 제공하였다.
Figure pct00234
DMF(10.00 mL) 중의 47.2(650.00 mg, 1.72 mmol, 1.00 당량)의 용액에 DIPEA(666.88 mg, 5.16 mmol, 901.19 μL, 3.00 당량) 및 2, 3, 6-트리플루오로페놀(280.17 mg, 1.89 mmol, 1.10 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 47.3(50.00 mg, 128.07 μmol, 7.45% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 391; RT=0.877min.
Figure pct00235
DCM(5.00 mL) 및 TFA(1.00 mL) 중의 47.3(50.00 mg, 101.93 μmol, 1.00 당량)의 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 47(30.00 mg, 76.84 μmol, 75.39% 수율)을 갈색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 391; RT=0.681min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.26 - 1.39 (m, 6 H), 1.39 - 1.56 (m, 2 H), 1.57 - 1.84 (m, 3 H), 1.96 - 2.12 (m, 1 H), 2.82 - 3.01 (m, 2 H), 3.27 - 3.31 (m, 3 H), 4.68 (dd, J=9.60, 4.34 Hz, 1 H), 4.95 - 5.15 (m, 1 H), 6.89 - 7.12 (m, 2 H).
실시예 44. (S)-N-(7-아미노-1-(2,6- 디플루오로페녹시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-2-메톡시-2-메틸프로판아미드 ( 48)의 제조
Figure pct00236
DMF(10.00 mL) 중의 47.2(650.00 mg, 1.72 mmol, 1.00 당량)의 용액에 DIPEA(666.88 mg, 5.16 mmol, 901.19 μL, 3.00 당량) 및 2, 6-디플루오로페놀(246.13 mg, 1.89 mmol, 1.10 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 48.1(50.00 mg, 134.26 μmol, 7.81% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 473; RT=0.864min.
Figure pct00237
DCM(5.00 mL) 및 TFA(1.00 mL) 중의 48.1(50.00 mg, 105.82 μmol, 1.00 당량)을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 48(30.00 mg, 80.56 μmol, 76.13% 수율)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 373; RT=0.67 1min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.18 - 1.39 (m, 6 H), 1.41 - 1.56 (m, 2 H), 1.57 - 1.82 (m, 3 H), 1.88 - 2.15 (m, 1 H), 2.78 - 3.03 (m, 2 H), 3.25 - 3.31 (m, 3 H), 4.74 (dd, J=9.54, 4.28 Hz, 1 H), 4.90 - 5.03 (m, 2 H), 6.89 - 7.20 (m, 3 H).
실시예 45. (S)-N-(7-아미노-1-( 이속사졸 -3- 일옥시 )-2- 옥소헵탄 -3-일) 사이클로펜탄카르복사미드 ( 49)의 제조
Figure pct00238
DMF(5 mL) 중의 1.2(0.3 g, 715.39 μmol, 1 당량)의 용액에 K2CO3(296.62 mg, 2.15 mmol, 3 당량) 및 이속사졸(66.94 mg, 786.92 μmol, 1.1 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)의 첨가에 의해 25℃에서 켄칭시키고, 에틸 아세테이트(15 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(10mL)로 세척하고, 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 미정제 생성물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=2:1)에 의해 정제하여 49.1(100 mg, 236.13 μmol, 33.01% 수율)을 황색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H +Na]: 446; RT=1.443min.
Figure pct00239
DCM(5 mL) 중의 49.1(0.1 g)의 용액에 TFA(1 mL)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 14hr 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 49(20 mg, 61.85 μmol, 26.19% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 324; RT=2.072min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.37 - 1.55 (m, 2 H) ,1.57 - 1.80 (m, 10 H) 1.89, (br dd, J=12.68, 5.62 Hz, 3 H), 2.73 (quin, J=7.77 Hz, 1 H), 2.93 (br t, J=6.84 Hz, 2 H), 4.52 (dd, J=9.04, 5.07 Hz, 1 H), 4.96 - 5.17 (m, 2 H), 6.17 (d, J=1.54 Hz, 1 H), 8.38 (d, J=1.54 Hz, 1 H).
실시예 46. (S)-N-(7-아미노-2-옥소-1-(2,3,6- 트리플루오로페녹시 )헵탄-3-일)피콜린아미드 (50)의 제조
Figure pct00240
50.1을 34.2과 동일한 방식으로 제조하였으며, 단 피리딘-2-카르복실산을 2-브로모니코틴산 대신 사용하였다.
DMF(5.00 mL) 중의 50.1(600.00 mg, 1.56 mmol, 1.00 당량)에 DIPEA(606.02 mg, 4.69 mmol, 818.94 μL, 3.00 당량) 및 2, 3, 6-트리플루오로페놀(231.45 mg, 1.56 mmol, 1.00 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 50.2(50.00 mg, 100.91 μmol, 6.47% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 496; RT=1.302 min.
Figure pct00241
이 반응을 화합물 34와 동일한 방식으로 진행시켰다. 수득된 생성물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 50(10 mg)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 396; RT=2.187 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.43 - 1.62 (m, 2 H), 1.62 - 1.93 (m, 3 H), 2.06 - 2.24 (m, 1 H), 2.93 (br t, J=7.28 Hz, 2 H), 4.97 (br dd, J=9.48, 4.19 Hz, 1 H), 5.03 - 5.21 (m, 2 H), 6.91 - 7.07 (m, 2 H), 7.60 (dd, J=6.95, 5.40 Hz, 1 H), 8.00 (td, J=7.66, 1.65 Hz, 1 H), 8.12 (d, J=7.72 Hz, 1 H), 8.60 - 8.74 (m, 1 H).
실시예 47. 바이오티닐화된 진지파인 활성 프로브의 제조: N-((S)-7-아미노-1-(2,6-디플루오로페녹시)-2-옥소헵탄-3-일)-3-(4-((5-((3aS,4S,6aR)-2-옥소헥사하이드로-1H-티에노[3,4-d]이미다졸-4-일)펜탄아미도)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (51)
Figure pct00242
DMF(10.00 mL) 중의 51.1(2.00 g, 4.72 mmol, 1.00 당량) 및 페놀(613.79 mg, 4.72 mmol, 1.00 당량)에 DIPEA(2.44 g, 18.87 mmol, 3.30 mL, 4.00 당량)를 20℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O 10 mL로 희석하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1:1)에 의해 정제하여 51.2(160.00 mg, 309.17 μmol, 6.55% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 518; RT=0.909 min.
Figure pct00243
DMSO(3.00 mL) 중의 51.2(140.00 mg, 270.52 μmol, 1.00 당량) 및 아미노프로핀(14.90 mg, 270.52 μmol, 17.33 μL, 1.00 당량)에 H2O(100.00 μL) 중의 CuSO4(8.64 mg, 54.10 μmol, 8.31 μL, 0.20 당량)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 18℃에서 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O 10 mL로 희석하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 51.3(150.00 mg, 미정제)을 적색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00244
DMF(2.00 mL) 중의 51.4(64.00 mg, 261.96 μmol, 1.00 당량) 및 HOBt(38.94 mg, 288.16 μmol, 1.10 당량)의 혼합물에 EDCI(55.24 mg, 288.16 μmol, 1.10 당량)를 0℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 그 후, 혼합물에 51.3(150.00 mg, 261.96 μmol, 1.00 당량) 및 DIPEA(101.57 mg, 785.88 μmol, 137.26 μL, 3.00 당량)를 0℃에서 한 번에 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O 10 mL로 희석하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 51.5(200.00 mg, 250.34 μmol, 95.57% 수율)를 황색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 799; RT=1.373 min.
Figure pct00245
51.5(200 mg)를 HCl/EtOAc(5 mL) 내에 용해시키고, 혼합물을 18℃에서 1분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 51(40 mg)을 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 699; RT= 2.391 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.34 - 1.46 (m, 2 H), 1.48 - 1.63 (m, 3 H), 1.64 - 1.77 (m, 4 H), 1.77 - 1.91 (m, 2 H), 2.08 - 2.20 (m, 1 H), 2.27 (t, J=7.17 Hz, 2 H), 2.62 (d, J=12.79 Hz, 1 H), 2.80 - 2.89 (m, 1 H), 2.95 (br t, J=6.50 Hz, 2 H), 3.11 - 3.19 (m, 1 H), 4.24 (dd, J=7.94, 4.41 Hz, 1 H), 4.43 (dd, J=7.50, 4.63 Hz, 1 H), 4.53 (s, 2 H), 4.98 (br d, J=3.75 Hz, 1 H), 5.00 - 5.10 (m, 2 H), 6.96 - 7.05 (m, 2 H), 7.06 - 7.13 (m, 1 H), 7.68 - 7.74 (m, 1 H), 7.95 - 8.00 (m, 1 H), 8.02 - 8.08 (m, 1 H), 8.35 (t, J=1.76 Hz, 1 H), 8.46 (s, 1 H).
실시예 48. (S)-N-(7-아미노-2-옥소-1-(2,3,6- 트리플루오로페녹시 )헵탄-3-일)이소니코틴아미드 (52)의 제조
Figure pct00246
52.1을 34.2와 동일한 방식으로 제조하였으며, 단 피리딘-4-카르복실산을 2-브로모니코틴산 대신 사용하였다.
DMF(10.00 mL) 중의 52.1(783.60 mg, 2.04 mmol, 1.00 당량)에 DIPEA(791.46 mg, 6.12 mmol, 1.07 mL, 3.00 당량) 및 트리플루오로페놀(302.28 mg, 2.04 mmol, 1.00 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)로 희석하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 52.2(50.00 mg)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 496; RT=0.777 min.
Figure pct00247
DCM(500.00 μL) 중의 52.2(10.00 mg, 20.18 μmol, 1.00 당량)에 TFA(154.00 mg, 1.35 mmol, 100.00 μL, 66.93 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 52(7.50 mg, 18.97 μmol)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 397; RT= 2.128 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.49 - 1.66 (m, 2 H), 1.67 - 1.92 (m, 3 H), 2.04 - 2.21 (m, 1 H), 2.94 (br t, J=7.61 Hz, 2 H), 4.95 (dd, J=9.70, 4.41 Hz, 1 H), 5.05 - 5.18 (m, 2 H), 6.88 - 7.13 (m, 2 H), 7.86 - 8.00 (m, 2 H), 8.79 (br d, J=4.19 Hz, 2 H).
실시예 49. (S)-N-(7-아미노-2-옥소-1-(2H- 테트라졸 -2-일)헵탄-3-일)-6- 플 루오로니코틴아미드 (53)의 제조
Figure pct00248
DMF(10.00 mL) 중의 29.2(1.70 g, 4.23 mmol, 1.00 당량)에 테트라졸(0.45 M, 10.34 mL, 1.10 당량) 및 DIPEA(2.19 g, 16.92 mmol, 2.96 mL, 4.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 10℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)로 희석하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(칼럼: Luna C18 100 x 30 x 5u; 이동 상: A: 물(0.1%TFA) 및 B:ACN; B%: 20%-60%, 10min)에 의해 정제하여 53.1(10.00 mg)을 제공하였다.
Figure pct00249
DCM(2.50 mL) 중의 53.1(10.00 mg)에 TFA(0.5 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 10℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물 감압하에 농축하여 화합물 53(2.00 mg, 5.96 μmol)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 336; RT=0.593 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.49 - 1.66 (m, 2 H), 1.67 - 1.80 (m, 2 H), 1.83 - 1.93 (m, 1 H), 2.06 - 2.16 (m, 1 H), 2.89 - 3.00 (m, 2 H), 4.79 (br s, 1 H), 5.87 - 6.01 (m, 2 H), 7.15 - 7.24 (m, 1 H), 8.35 - 8.46 (m, 1 H), 8.68 - 8.79 (m, 2 H).
실시예 50. (S)-N-(7-아미노-2-옥소-1-(2H- 테트라졸 -2-일)헵탄-3-일)-2- 플 루오로니코틴아미드 (54)의 제조
Figure pct00250
DMF(10.00 mL) 중의 32.2(1.70 g, 4.23 mmol, 1.00 당량)에 테트라졸(0.45 M, 10.34 mL, 1.10 당량) 및 DIPEA(2.19 g, 16.92 mmol, 2.96 mL, 4.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 10℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)로 희석하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(칼럼: Luna C18 100 x 30 x 5 u; 이동 상: A: 물(0.1%TFA), B: ACN; B%: 20%-60%,10 min)에 의해 정제하여 54.1(5.00 mg)을 제공하였다.
Figure pct00251
DCM(2.50 mL) 중의 54.1(5.00 mg)에 TFA(0.5 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 10℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물 감압하에 농축하여 화합물 54(2.00 mg)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 336; RT=3.720 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.51 - 1.66 (m, 2 H), 1.70 - 1.79 (m, 2 H), 1.81 - 1.91 (m, 1 H), 2.03 - 2.19 (m, 1 H), 2.96 (br t, J=7.61 Hz, 2 H), 3.77 (s, 1 H), 4.84 (br d, J=4.85 Hz, 1 H), 5.96 (d, J=2.65 Hz, 2 H), 7.46 (ddd, J=7.22, 5.13, 1.76 Hz, 1 H) ,8.25 - 8.41 (m, 2 H) ,8.68 - 8.80 (m, 1 H).
실시예 51. (S)-N-(7-아미노-1-( 이속사졸 -3- 일옥시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-6- 플 루오로니코틴아미드 (55)의 제조
Figure pct00252
H2O(150.00 mL) 및 MeOH(170.00 mL) 중의 55.1(10.00 g, 101.94 mmol, 10.00 mL, 1.00 당량), 하이드록실아민 하이드로클로라이드(9.21 g, 132.52 mmol, 1.30 당량), NaOH(15.25 g, 381.26 mmol, 3.74 당량)의 혼합물을 25℃에서 100시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진한 염산으로 pH 2로 산성화시키고, 그 후, 소듐 클로라이드로 포화시켰다. 용액을 DCM(8 x 150 ml)으로 추출하고, 추출물을 합치고, 건조시키고, 용매를 증발시켰다. 고체 잔류물을 고온 이소-헥산(3 x 100ml)으로 세척하고, 최종 현탁액을 냉각시키고, 생성된 고형물을 여과에 의해 수집하고, 진공하에 건조시켜 55.2(4.00 g, 47.03 mmol, 46.13% 수율)를 황색 고형물로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 6.04 (d, J=1.76 Hz, 1 H), 8.10 (d, J=1.76 Hz, 1 H), 11.11 (br s, 1 H).
Figure pct00253
DMF(3.00 mL) 중의 29.2(200.00 mg, 497.69 μmol, 1.00 당량)에 K2CO3(206.36 mg, 1.49 mmol, 3.00 당량) 및 55.2(55.03 mg, 647.00 μmol, 1.30 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)로 희석하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=2:1)에 의해 정제하여 55.3(0.1 g, 222.00 μmol, 44.61% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 451; RT=1.145 min.
Figure pct00254
DCM(5 mL) 중의 55.3(0.1 g)의 용액에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 55(20 mg)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 351; RT=0.850 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.44 - 1.66 (m, 2 H), 1.67 - 1.90 (m, 3 H), 2.00 - 2.18 (m, 1 H), 2.82 - 3.09 (m, 2 H), 4.79 (dd, J=9.26, 4.85 Hz, 1 H), 5.06 - 5.22 (m, 2 H), 6.18 (d, J=1.10 Hz, 1 H), 7.07 - 7.27 (m, 1 H), 8.30 - 8.47 (m, 2 H), 8.72 (d, J=1.98 Hz, 1 H).
실시예 52. (S)-N-(7-아미노-1-( 이속사졸 -3- 일옥시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-2- 플 루오로니코틴아미드 (56)의 제조
Figure pct00255
DMF(15.00 mL) 중의 32.2(1.40 g, 3.48 mmol, 1.00 당량)에 K2CO3(1.44 g, 10.44 mmol, 3.00 당량) 및 이속사졸-3-올(55.2, 296.01 mg, 3.48 mmol, 1.00 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)로 희석하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=2:1)에 의해 정제하여 56.1(300 mg)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 453; RT=1.379 min.
Figure pct00256
DCM(5 mL) 중의 56.1(0.3 g)에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 56(20 mg)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 351; RT=0.730 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.45 - 1.64 (m, 2 H), 1.65 - 1.89 (m, 3 H), 1.96 - 2.18 (m, 1 H), 2.95 (br t, J=7.50 Hz, 2 H), 4.81 (br dd, J=9.15, 4.74 Hz, 1 H), 5.16 (s, 2 H),6.19 (s, 1 H), 7.46 (br t, J=6.06 Hz, 1 H), 8.14 - 8.50 (m, 3 H).
실시예 53. (S)-N-(7-아미노-1-( 이속사졸 -3- 일옥시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-2- 메 톡시-2-메틸프로판아미드 (57)의 제조
Figure pct00257
DMF(8 mL) 중의 47.2(893 mg, 2.36 mmol, 1 당량) 및 이속사졸-3-올(200.48 mg, 2.36 mmol, 1 당량)의 용액에 DIPEA(913.83 mg, 7.07 mmol, 1.23 mL, 3 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 10hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)로 희석하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1 내지 1/1)에 의해 정제하여 57.1(130 mg)를 제공하였다; LCMS [M + H] : 428; RT=0.649 min.
Figure pct00258
DCM(5 mL) 중의 57.1(50 mg)에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 10시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 57(10 mg)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 328; RT=2.430 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.38 (s, 7 H), 1.45 (br d, J=6.84 Hz, 2 H), 1.58 - 1.80 (m, 4 H), 2.01 (br s, 1 H), 2.92 (br d, J=7.28 Hz, 2 H), 3.31 - 3.33 (m, 3 H), 4.53 - 4.62 (m, 1 H), 4.99 - 5.14 (m, 2 H), 6.17 (s, 1 H), 8.38 (s, 1 H).
실시예 54. (S)-N-(7-아미노-1-(디메틸(옥소)- λ6 - 설파닐리덴 )-2- 옥소헵탄 -3-일)사이클로펜탄카르복사미드 (58)의 제조
Figure pct00259
포타슘 2-메틸프로판-2-올레이트(1 M, 5.87 mL, 2.99 당량)를 BLAH메탄 클로라이드(896.67 mg, 6.97 mmol, 3.55 당량)의 톨루엔(17 mL) 현탁액에 25℃에서 적가하였다. 혼합물을 4시간 동안 70℃로 가열시키고, 그 후, 0℃로 냉각시켰다. 58.1(0.7 g, 1.96 mmol, 1 당량)의 THF(15 mL) 현탁액을 0℃에서 적가하고, 생성된 용액을 16시간 동안 0℃에서 교반하였다. 용액을 MTBE에 의해 3회 세척하였다. 필터 케이크를 감압하에 농축하여 58.2(630 mg, 1.51 mmol, 38.51% 수율)를 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 417; RT=0.910 min.
Figure pct00260
DCM(2 mL) 중의 용액 58.2(50 mg)에 TFA(0.4 mL)를 18℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 18℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 58(50 mg)을 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 317; RT=1.782 min. 1H NMR (400 MHz, 아세토니트릴-d 3) δ ppm 1.39 - 1.51 (m, 2 H), 1.56 (br d, J=6.60 Hz, 2 H), 1.67 (br d, J=4.77 Hz, 6 H), 1.75 - 1.89 (m, 4 H), 2.70 (dt, J=15.68, 7.75 Hz, 1 H), 2.94 (br s, 2 H), 3.63 (s, 8 H), 4.17 - 4.26 (m, 1 H).
실시예 55. N-((S)-7-아미노-1-(2,6-디플루오로페녹시)-2-옥소헵탄-3-일)-3-(4-(15-옥소-19-((3aS,4S,6aR)-2-옥소헥사하이드로-1H-티에노[3,4-d]이미다졸-4-일)-2,5,8,11-테트라옥사-14-아자노나데실)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (59)의 제조
Figure pct00261
DMF(2 mL) 중의 혼합물 바이오틴(159.29 mg, 982.36 μmol, 1.2 당량)을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 59.1(200 mg, 미정제)을 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 295; RT=0.298 min.
Figure pct00262
DMF(3 mL) 중의 59.1(127.28 mg, 432.36 μmol, 1 당량), 59.2(100 mg, 432.36 μmol, 1 당량), DIPEA(167.64 mg, 1.30 mmol, 225.93 μL, 3 당량)의 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 59.3(100 mg, 218.54 μmol, 50.55% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 458; RT=1.052 min.
Figure pct00263
DMSO(2 mL) 및 H2O(0.2 mL) 중의 59.3(80 mg, 174.83 μmol, 1 당량)의 용액에 33.5(90.48 mg, 174.83 μmol, 1 당량) 및 CuSO4(5.58 mg, 34.97 μmol, 5.37 μL, 0.2 당량) 및 소듐 아스코르베이트(69.27 mg, 349.66 μmol, 2 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O 10 mL의 첨가에 의해 25℃에서 켄칭시키고, 에틸 아세테이트(10mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화된 염수(5mL)로 세척하고, 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 미정제 생성물을 제공하였다. 잔류물을 분취용-TLC(SiO2, DCM: MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 59.4(90 mg, 92.30 μmol, 52.79% 수율)를 황색 오일로서 수득하였다; LCMS [M + H]: 951; RT=1.160 min.
Figure pct00264
DCM(5 mL)　및 TFA(1 mL) 중의　59.4(90 mg, 92.30 μmol)를 25℃에서　12시간 동안 N2 대기 하에 교반하였다. 반응 혼합물을　감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 59(20 mg, 22.86 μmol)를 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 875; RT=0.870 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.25 - 1.46 (m, 2 H), 1.47 - 1.95 (m, 9 H), 2.02 - 2.29 (m, 3 H), 2.68 (d, J=12.57 Hz, 1 H), 2.82 - 3.04 (m, 3 H), 3.07 - 3.22 (m, 1 H), 3.31 - 3.35 (m, 2 H), 3.43 - 3.54 (m, 2 H), 3.54 - 3.66 (m, 8 H), 3.67 - 3.78 (m, 4 H), 4.18 - 4.35 (m, 1 H), 4.47 (dd, J=7.72, 4.85 Hz, 1 H), 4.75 (s, 2 H), 4.92 - 5.17 (m, 3 H), 6.88 - 7.18 (m, 2 H), 7.72 (t, J=7.94 Hz, 1 H) ,7.89 - 8.13 (m, 2 H), 8.30 - 8.43 (m, 1 H), 8.62 (s, 1 H).
실시예 56. N-((S)-7-아미노-1-(2,6-디플루오로페녹시)-2-옥소헵탄-3-일)-3-(4-(3,43-디옥소-47-((3aS,4S,6aR)-2-옥소헥사하이드로-1H-티에노[3,4-d]이미다졸-4-일)-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39-도데카옥사-2,42-디아자헵타테트라콘틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)벤즈아미드 (60)의 제조
Figure pct00265
DMSO(2 mL) 중의 프로프-2-인-1-아민(21.29 mg, 386.46 μmol, 24.75 μL, 1 당량) 및 33.5(200 mg, 386.46 μmol, 1 당량)의 용액에 H2O(0.1 mL) 중의 CuSO4(362.30 ug, 2.27 μmol, 3.48 μL, 0.2 당량) 및 소듐 아스코르베이트(153.12 mg, 772.91 μmol, 2 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O 10 mL의 첨가에 의해 25℃에서 켄칭시키고, 에틸 아세테이트(10mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 포화된 염수(5mL)로 세척하고, 무수성 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 미정제 생성물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, DCM: MeOH = 0:1)에 의해 정제하여 60.1(140 mg, 244.50 μmol, 63.27% 수율)을 황색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 573; RT=0.991 min.
Figure pct00266
DMF(5 mL) 중의 60.2(200 mg, 236.96 μmol, 1 당량)의 용액에 HOBt(35.22 mg, 260.66 μmol, 1.1 당량) 및 EDCI(49.97 mg, 260.66 μmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1hr 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물에 60.1(135.69 mg, 236.96 μmol, 1 당량) 및 DIPEA(122.50 mg, 947.85 μmol, 165.10 μL, 4 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 11시간 동안 교반하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 60.3(55 mg, 39.32 μmol, 16.60% 수율)을 황색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 700; RT=1.225 min.
Figure pct00267
DCM(5 mL) 및 TFA(1 mL) 중의 60.3(50 mg, 35.75 μmol)의 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공하에 농축하여 미정제 생성물을 제공하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(TFA 조건)에 의해 정제하여 화합물 60(15 mg, 11.55 μmol)을 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 1299; RT=1.06 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.32 - 1.93 (m, 12 H), 2.06 - 2.27 (m, 3 H), 2.52 (t, J=5.95 Hz, 2 H), 2.70 (d, J=12.79 Hz, 1 H), 2.86 - 3.05 (m, 3 H), 3.14 - 3.24 (m, 1 H), 3.32 - 3.38 (m, 2 H), 3.45 - 3.68 (m, 49 H), 3.77 (t, J=5.84 Hz, 2 H), 4.30 (dd, J=7.83, 4.52 Hz, 1 H), 4.49 (dd, J=7.72, 4.63 Hz, 1 H), 4.56 (s, 2 H), 4.96 - 5.13 (m, 2 H), 6.94 - 7.14 (m, 3 H), 7.64 - 7.77 (m, 1 H), 7.91 - 8.10 (m, 2 H), 8.28 - 8.39 (m, 1 H), 8.44 - 8.52 (m, 1 H).
실시예 57. (S)-5-((7-아미노-1-( 이속사졸 -3- 일옥시 )-2- 옥소헵탄 -3-일) 카르 바모일)-N,N,N-트리메틸피리딘-2-아미늄 클로라이드 (61)의 제조
Figure pct00268
THF(0.5 mL) 중의 N,N-디메틸메탄아민(2 M, 4.44 mL, 20 당량)의 용액에 55.3(0.2 g, 443.99 μmol, 1 당량)을 18℃에서 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 분취용-HPLC(HCl 조건)에 의해 정제하여 61.1(20 mg, 40.77 μmol, 9.18% 수율) 및 62.1(20 mg, 42.06 μmol, 9.47% 수율)을 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H] for C24H37N5O6+; RT=1.136min.
Figure pct00269
61. 1(20 mg)를 HCl/MeOH(2 mL)에 용해시키고, 혼합물을 25℃에서 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 61(15 mg)을 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H] for C19H29N5O4+: 391; RT=0.149 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.47 - 1.66 (m, 2 H), 1.68 - 1.82 (m, 2 H), 1.84 - 1.97 (m, 1 H), 2.01 - 2.16 (m, 1 H), 2.97 (br t, J=7.45 Hz, 2 H), 3.67 - 3.74 (m, 9 H), 4.81 (dd, J=9.43, 4.60 Hz, 1 H), 5.15 - 5.21 (m, 2 H), 6.17 - 6.23 (m, 1 H), 8.10 - 8.19 (m, 1 H), 8.39 (d, J=1.75 Hz, 1 H), 8.64 (dd, J=8.77, 2.19 Hz, 1 H), 9.11 (d, J=1.75 Hz, 1 H).
실시예 58. (S)-N-(7-아미노-1-( 이속사졸 -3- 일옥시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-6-(디메틸아미노)니코틴아미드 (62)의 제조
Figure pct00270
62.1(20 mg)을 HCl/MeOH(2 mL)에 용해시키고, 혼합물을 25℃에서 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 62(15 mg)를 황색 오일로서 제공하였다; LCMS [M + H] C18H26N5O4: 376; RT=2.077min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.46 - 1.67 (m, 2 H), 1.75 (br d, J=7.02 Hz, 2 H), 1.87 (dtd, J=14.25, 9.65, 9.65, 4.60 Hz, 1 H), 2.00 - 2.11 (m, 1 H), 2.97 (br t, J=7.45 Hz, 2 H), 3.34 - 3.41 (m, 6 H), 4.74 (dd, J=9.21, 4.82 Hz, 1 H), 5.16 (d, J=1.75 Hz, 2 H), 6.19 (d, J=1.75 Hz, 1 H), 7.33 (d, J=9.65 Hz, 1 H), 8.39 (d, J=1.75 Hz, 1 H), 8.43 (dd, J=9.65, 1.75 Hz, 1 H), 8.52 (d, J=1.75 Hz, 1 H).
실시예 59. (S)-N-(7-아미노-1-((2,6-디메틸피리딘-4-일) 옥시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-2-메톡시-2-메틸프로판아미드 (63)의 제조
Figure pct00271
DMF(9 mL) 중의 47.2(423 mg, 1.12 mmol, 1 당량) 및 2,6-디메틸-4-하이드록시피리딘(137.49 mg, 1.12 mmol, 1 당량)에 K2CO3(462.89 mg, 3.35 mmol, 3 당량) 및 KI(185.33 mg, 1.12 mmol, 1 당량)를 25℃에서 N2 하에 한 번에 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)의 첨가에 의해 켄칭시킨 후, EtOAc(20mL)로 희석하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 H2O(10 mL x 3)로 세척하고, 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3:1)에 의해 정제하여 63.1(85 mg, 182.57 μmol)을 백색 고형물로서 제공하였다; LCMS [M + H]: 466; RT=1.155min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.38 (d, J=5.51 Hz, 8 H) ,1.43 (s, 11 H) ,1.50 (dt, J=13.67, 6.84 Hz, 3 H), 1.64 - 1.77 (m, 2 H) ,1.88 - 1.99 (m, 2 H), 2.41 - 2.46 (m, 6 H) ,2.99 - 3.09 (m, 3 H) ,3.31 - 3.32 (m, 3 H), 4.55 - 4.62 (m, 2 H) ,4.92 - 5.04 (m, 3 H) ,6.66 (s, 2 H).
Figure pct00272
DCM(5 mL) 및 TFA(1 mL) 중의 63.1(85 mg)을 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=2:1)에 의해 정제하여 화합물 63(50 mg)을 제공하였다; LCMS [M + H]: 366; RT=1.517min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.25 - 1.40 (m, 6 H), 1.46 - 1.59 (m, 2 H), 1.67 - 1.80 (m, 3 H), 1.94 - 2.05 (m, 1 H), 2.61 - 2.66 (m, 6 H), 2.93 (br t, J=7.58 Hz, 2 H), 3.30 - 3.32 (m, 3 H), 4.47 (dd, J=9.66, 4.40 Hz, 1 H), 5.22 - 5.40 (m, 2 H), 7.13 - 7.22 (m, 2 H).
실시예 60. (S)-N-(7-아미노-2-옥소-1-(피리딘-3- 일옥시 )헵탄-3-일)-2- 메톡시 -2-메틸프로판아미드 ( 64)의 제조
Figure pct00273
화합물 64를 화합물 63에 대해 사용된 동일한 방법에 의해 제조하였으며, 단 2,6-디메틸-4-하이드록시피리딘 대신 3-하이드록시피리딘을 사용하였다; LCMS [M + H]: 338; RT = 4.585 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.21 - 1.40 (m, 6 H), 1.42 - 1.58 (m, 2 H) ,1.64 - 1.80 (m, 3 H), 1.95 - 2.05 (m, 1 H) ,2.93 (br t, J=7.64 Hz, 2 H) ,3.30 - 3.32 (m, 3 H), 4.51 (dd, J=9.66, 4.40 Hz, 1 H), 5.14 - 5.29 (m, 2 H) ,7.86 (dd, J=8.80, 5.38 Hz, 1 H) ,7.98 - 8.03 (m, 1 H), 8.41 (br d, J=5.14 Hz, 1 H), 8.51 (br d, J=2.08 Hz, 1 H).
실시예 61. (S)-N-(7-아미노-1-((2- 메틸피리미딘 -5-일) 옥시 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-2-메톡시-2-메틸프로판아미드 (65)의 제조
Figure pct00274
화합물 65를 화합물 63에 대해 사용된 동일한 방법에 의해 제조하였으며, 단 2,6-디메틸-4-하이드록시피리딘 대신 5-하이드록시피리딘을 사용하였다; LCMS [M + H]: 353; RT = 1.98 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.24 (br s, 1 H), 1.31 (s, 7 H), 1.34 (br s, 1 H), 1.45 - 1.58 (m, 2 H), 1.65 (dtd, J=14.00, 9.48, 9.48, 4.71 Hz, 1 H), 1.78 - 1.89 (m, 1 H), 2.55 (s, 3 H), 2.72 - 2.85 (m, 2 H), 3.20 (s, 3 H), 4.19 - 4.61 (m, 1 H), 5.18 (br s, 2 H), 7.68 (br s, 2 H), 8.21 (d, J=7.70 Hz, 1 H), 8.36 (s, 2 H).
실시예 62. (S)-N-(7-아미노-2-옥소-1-(피리딘-3- 일티오 )헵탄-3-일)-2- 메톡 시-2-메틸프로판아미드 (66)의 제조
Figure pct00275
디옥산(20 mL) 중의 66.1(2 g, 12.66 mmol, 1.22 mL, 1 당량)에 66.2(2.90 g, 13.29 mmol, 1.05 당량), DIPEA(3.27 g, 25.32 mmol, 4.41 mL, 2 당량) 및 잔포스(Xantphos)(732.45 mg, 1.27 mmol, 0.1 당량), Pd2(dba)3(579.58 mg, 632.93 μmol, 0.05 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 2hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)의 첨가에 의해 켄칭시키고, EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 MPLC(SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1 내지 1:1)에 의해 정제하여 66.3(3.6 g, 12.19 mmol, 96.26% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다.
Figure pct00276
THF(10 mL) 중의 66.3(800 mg, 2.71 mmol, 1 당량)에 t-BuOK/THF(1 M, 4.06 mL, 1.5 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 1h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, EtOAc/MEOH=10/1 내지 1:1)에 의해 정제하여 66.4(80 mg)를 황색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.53 (d, J=1.75 Hz, 1 H), 8.31 (dd, J=4.82, 1.32 Hz, 1 H), 7.83 - 7.91 (m, 1 H), 7.30(dd, J=7.45, 4.82 Hz, 1 H),3.58 (br s, 8 H) 3.38 - 3.73 (m, 1 H).
Figure pct00277
DMF(5 mL) 중의 47.2(500 mg, 1.32 mmol, 1 당량)에 66.4(80 mg, 719.65 μmol, 5.45 당량), K2CO3(547.15 mg, 3.96 mmol, 3 당량) 및 KI(219.06 mg, 1.32 mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 5hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 요망되는 화합물은 여과물 중에 존재하였다. 여과물을 분취용-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna C18 200 x 40mm x 10 um;이동 상: A: 물(0.1%TFA)- B: ACN; B%: 15%-35%, 8 min)에 의해 정제하여 66.5(40 mg, 88.18 μmol)를 제공하였다.
Figure pct00278
DCM(5 mL) 중의 66.5에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하여 화합물 66(12 mg)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 354; RT= 1.83 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 8.62 (br s, 1 H) ,8.49 (br s, 1 H) ,8.14 (d, J=8.33 Hz, 1 H) ,7.62 (dd, J=8.33, 4.82 Hz, 1 H) ,4.60 (dd, J=9.43, 4.17 Hz, 1 H), 4.10 - 4.21 (m, 1 H), 3.29 (br s, 3 H), 2.90 (br t, J=7.45 Hz, 2 H), 1.97 (br d, J=10.09 Hz, 1 H), 1.62 - 1.74 (m, 3 H), 1.42 (br d, J=4.39 Hz, 1 H), 1.36 (d, J=4.38 Hz, 8 H), 1.27 - 1.33 (m, 1 H).
실시예 63. (S)-N-(7-아미노-1-((2,6-디메틸피리딘-4-일) 티오 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-2-메톡시-2-메틸프로판아미드 (67)의 제조
Figure pct00279
DMF(20 mL) 중의 2,6-디메틸-4-클로로피리딘(2 g, 14.12 mmol, 1 당량)에 NaSH(1.98 g, 35.31 mmol, 2.5 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 140℃에서 2h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 MPLC(디클로로메탄:메탄올 SiO2, =10/1 내지 1:1)에 의해 정제하여 67. 1(2.7 g)를 황색 고형물로서 제공하였다.
Figure pct00280
DMF(7 mL) 중의 67.1(367.44 mg, 2.64 mmol, 1 당량)에 47.2(1 g, 2.64 mmol, 1 당량), K2CO3(1.09 g, 7.92 mmol, 3 당량) 및 KI(438.12 mg, 2.64 mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 요망되는 화합물은 여과물에 존재하였다. 여과물을 분취용-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna (2) C18, 250 x 50 x 10 u; 이동 상 A: 물(0.1%TFA) 및 B: ACN; 구배 B%: 20분에 걸쳐 10%-40%)에 의해 정제하여 67.2(353 mg)를 제공하였다.
Figure pct00281
DCM(5 mL) 중의 67.2(353 mg)에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1hr 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 화합물 67(350 mg)를 제공하였다; LCMS [M + H]: 382; RT=1.799 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 7.40 - 7.52 (m, 2 H) ,4.32 - 4.57 (m, 3 H), 3.32 (br s, 3 H) ,2.94 (br t, J=7.64 Hz, 2 H), 2.63 (s, 6 H) ,1.95 - 2.08 (m, 1 H) ,1.65 - 1.83 (m, 3 H) ,1.43 - 1.57 (m, 2 H) ,1.39 (d, J=5.62 Hz, 6 H).
실시예 64. (S)-N-(7-아미노-1-((2- 메틸피리미딘 -5-일) 티오 )-2- 옥소헵탄 -3-일)-2-메톡시-2-메틸프로판아미드 (68)의 제조
Figure pct00282
화합물 68을 화합물 66에 대해 사용된 동일한 방법에 의해 제조하였으며, 단 3-브로모피리딘 대신에 2-메틸-5-브로모피리미딘을 사용하였다; LCMS [M + H]: 369; RT = 2.0 min. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ ppm 1.36 (s, 8 H), 1.38 - 1.48 (m, 2 H) ,1.60 - 1.74 (m, 3 H) ,1.90 - 2.01 (m, 1 H), 2.65 (s, 3 H) ,2.90 (br t, J=6.80 Hz, 2 H), 3.29 (s, 3 H) ,3.91 - 4.10 (m, 2 H), 4.62 (dd, J=9.43, 4.60 Hz, 1 H) ,8.68 (s, 2 H).
실시예 65. (S)-N-(7-아미노-1-((1,1,1,3,3,3- 헥사플루오로프로판 -2-일)옥시)-2-옥소헵탄-3-일)-2-메톡시-2-메틸프로판아미드 (69)의 제조
Figure pct00283
DMF(7 mL)　중의 화합물 1.2(1.0 g, 2.36 mmol, 1.0 당량), 1,1,13,3,3-헥사플루오로이소프로판올(595 mg, 3.54 mmol, 1.5 당량), KF(411 mg, 7.09 mmol, 3.0 당량)의 현탁액을 탈시키고, N2로 3회 퍼징시키고, 그 후, 현탁액을 25℃에서　2hr 동안 N2 대기 하에 교반하였다. LCMS는 화합물 1.2가 완전히 소모되었음을 나타내었다. 반응물을 물(21 mL)로 서서히 켄칭시킨 후, EtOAc(20 mL x 2)로 추출하였다. 합친 유기 상을 염수(10 mL)로 세척하고, 무수성 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공하에 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르: 에틸 아세테이트 = 15:1 내지 3:1)에 의해 정제하여 69.1(0.90 g, 1.67 mmol, 70% 수율)을 무색 검으로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.05 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.73(브로드 s, 1H), 5.42-5.50 (m, 1H), 4.65 (dd, J = 1.2 Hz, J = 1.2 Hz, 2H), 4.26-4.32 (m, 1H), 3.15 (s, 3H), 2.80-2.91 (m, 2H), 1.67-1.75 (m, 1H), 1.52-1.58 (m, 1H), 1.33 (s, 11H), 1.25 (s, 6H) ppm.
Figure pct00284
EtOAc(10 mL)　중의 화합물 3(0.90 g, 1.76 mmol, 1.0 당량)의 용액에　HCl/EtOAc(4 M, 10 mL, 22 당량)를 0℃에서 첨가하였다. 용액을 0℃에서 1hr 동안 교반하였다. LCMS는 화합물 69.1이 완전히 소모되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 잔류물을 제공하였다. 이를 냉동 건조기에 의해 건조시켜 화합물 69(0.78 g, 총 수율: 63.7%, HCl 염)를 황색 검으로써 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.91 (br.s, 3H), 5.47-5.54 (m, 1H), 4.61-4.79 (m, 2H), 3.15 (s, 3H), 2.64-2.72 (m, 2H), 1.58-1.74 (m, 1H), 1.52-1.58 (m, 3H), 1.33-1.34 (m, 2H), 1.33 (s, 6H) ppm.
실시예 66. 시아닌 진지파인 활성 프로브 70, 71 및 72의 제조
프로브 화합물 70을 하기 도식에 따라 제조하였다.
Figure pct00285
프로브 화합물 71을 하기 도식에 따라 제조하였다.
Figure pct00286
프로브 화합물 72를 하기 도식에 따라 제조하였다.
Figure pct00287
실시예 67. 리신 진지파인의 억제
본 발명의 화합물이 리신 진지파인의 활성을 억제하는 능력은 바렛(Barret)(Biochemical Journal. 1980, 187(3), 909)에 의해 기술된 것과 유사한 형광원 검정에서 측정하였다. 특정 검정 조건은 하기와 같다. 완충액: 모든 첨가 후 pH = 7.5, 100 mM Tris-HCl, 75 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2, 10 mM 시스테인, 1% DMSO. 단백질: 파이크(Pike) 등(J. Biol . Chem . 1994, 269(1), 406), 및 포텝파(Potempa) 및 누엔(Nguyen)(Current Protocols in Protein Science. 2007, 21.20.1-21.20.27)에 의해 기술된 바와 같은 포르피로모나스 진지발리스의 배양물로부터 분리된 0.1 nM Kgp. 형광원 기재: 10 μM Z-His-Glu-Lys-MCA. 시간 = 90분. 온도 = 37℃. 각 화합물: 100 μM 또는 100 nM에서 출발하여 더 낮은 농도가 3배 연속 희석에 의해 생성되는 10가지 농도. 각 화합물에 대한 다양한 농도를 평가함으로써, 리신 진지파인의 활성을 50%까지 억제하는데 필요한 농도("IC50")를 결정하였다. 기술된 검정 조건 하에서, 신호 대 잡음 비는 탁월하였으며, Z 인자는 0.6보다 컸다. 표 1의 화합물뿐만 아니라 하기 표 2에 제시된 화합물을 평가하였다.
카텝신 B, H, K, L 및 S의 활성을 억제하는 본 발명의 화합물의 능력을 유사한 검정으로 측정하였다. DTT(1 mM) 및 EDTA(2 mM)를 함유하는 소듐 아세테이트 완충액(50 mM, pH 5.5) 중 Boc-Leu-Arg-Arg-AMC(20 μM)를 카텝신 B 검정에 사용하였다. DTT(1 mM) 및 EDTA(2 mM)를 함유하는 소듐 아세테이트 완충액(50 mM, pH 5.5) 중 L-Arg-AMC(20 μM)를 카텝신 H 검정에 사용하였다. DTT(2.5 mM) 및 EDTA(1 mM)를 함유하는 HEPES 완충액(50 mM, pH 7.4) 중 Z-Phe-Arg-AMC(10 μM)를 카텝신 K 검정에 사용하였다. DTT(1 mM) 및 EDTA(2 mM)를 함유하는 소듐 아세테이트 완충액(50 mM, pH 5.5) 중 Z-Phe-Arg-AMC(20 μM)를 카텝신 L 검정에 사용하였다. DTT(2.5 mM) 및 NaCl(50 mM)를 함유하는 소듐 아세테이트 완충액(25 mM, pH 4.5) 중 Z-Leu-Arg-AMC(10 μM)를 카텝신 S 검정에 사용하였다. 카텝신 F, V 및 Z의 활성을 억제하는 화합물의 능력 또한 측정하였다. 표 1의 화합물뿐만 아니라 하기 표 2에 제시된 화합물을 평가하였다.
표 2. 비교 리신 진지파인 억제제.
Figure pct00288
본 발명의 화합물에 의한 Kgp 및 카텝신 억제의 IC50 값은 표 3에 제시되어 있다. 결과는 본 발명의 화합물 및 참조 화합물 73이 Kgp 억제 활성에 있어서 유사하며, 서브나노몰의 Kgp IC50 값을 가짐을 보여준다. 놀랍게도, 본 발명의 화합물은 Kgp에 대해 탁월한 선택성을 나타낸다. 예를 들어, 화합물 2에 대한 CatH 및 CatS IC50 값은 참조 화합물 73에 대한 IC50 값보다 10배 초과로 더 높으며, 이는 화합물 2가 참조 화합물 73보다 덜 효과적인 카텝신 억제제임을 나타낸다. 화합물 2의 CatB IC50 값은 참조 화합물 73에 대한 CatB IC50 값보다 20배 초과로 더 높다. 화합물 2의 CatK 및 CatL IC50 값은 참조 화합물 73에 대한 IC50 값보다 100배 초과로 더 높다.
카텝신은 MHC-II-매개된 항원 제시, 뼈 리모델링, 각질세포 분화 및 프로호르몬 활성화를 포함하는 많은 중요한 생리학적 과정에 연관된 리소좀 프로테아제이기 때문에 화합물의 감소된 카텝신 억제 활성은 유익하다. 따라서, 본 발명의 화합물은 대상체에서 내인성 카텝신 활성을 교란시키지 않으면서, 침습성 P. 진지발리스로부터 초래되는 Kgp를 대상체에서 선택적으로 억제시키는데 사용될 수 있다.
표 3. 본 발명의 화합물에 의한 리신 진지파인 및 카텝신의 억제.
Figure pct00289
Figure pct00290
실시예 68. 본 발명의 화합물의 신경보호 효과
13회 계대의 인간 신경모세포종 SH-SY5Y 세포를 5% CO2 인큐베이터(Thermal Fisher 371)에서 2 mM L-글루타민(Invitrogen 25030164), 10% 열-불활성화된 소 태아 혈청(Invitrogen-10099141), 및 1% 페니실린-스트렙토마이신(Pen/Strep; Invitrogen-15140122)이 보충된 완전 배지 DMEM/F12(Invitrogen 11330-032)에 접종하고 배양하였다. 세포를 콜라겐 타입 I이 수동으로 코팅된 96-웰 블랙/평편 바닥 플레이트(Greiner-655090)에서 2-4 x 104 세포/웰(200 μl의 1-2 x 105 세포/mL)의 밀도로 시딩하였다. 플레이트를 37℃에서 CO2 인큐베이터에서 인큐베이션하였다.
웰의 세포 배양물이 70-80% 컨플루언시(~ 6 x 104 세포/웰)에 도달할 때, 세포 배양물을 다양한 농도의 시험 화합물의 존재하에 또는 시험 화합물의 부재하에 P. 진지발리스로 자극하였다. 화합물 원액은 멸균 v-바닥 96-웰 플레이트에서 DMSO로의 연속 희석을 통해 제조하였다(2.8, 6.4, 3.2, 1.6, 0.8, 0.4, 0.2, 0.1, 0.05 및 0 mg/ml). 그 후, 원액(6 μL)을 594 μL 완전 배지-Pen/Strep로 충전시킨 96-딥 웰 플레이트에 옮겨 추가 평가를 위한 작업 용액(128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0.5 및 0 μg/mL)을 제공하였다.
균주 P. 진지발리스 ATCC BAA-308을 -80℃ 스톡으로부터 뇌 심장 침출 한천 배지(BHA)(BD-211065) 상으로 스트레이킹 처리하였다. 플레이트를 혐기성 작업대(Shanghaiyuejin, YQX-II)에서 37℃에서 72h 동안 인큐베이션하였다. 대기는 80% N2, 10% CO2 및 10% H2로 유지시켰다. 평가 시간에, 플레이트를 혐기성 작업대로부터 취해 주변 대기에서 처리하였다. 박테리아를 채취하고, 완전 배지-Pen/Strep(Pen/Strep 부재)에 현탁시켰다. 현탁액의 혼탁도는 Siemens MicroScan® 탁도계(Siemens)에 의해 0.5로 조절하였으며, 이는 ~6 x 108 cfu/mL에 해당한다. 박테리아 현탁액을 완전 배지-Pen/Strep에서 6 x 108 cfu/ml(MOI 1:1000)의 최종 박테리아 밀도로 희석하였으며, 음성 대조군으로서 박테리아를 함유하지 않는 하나의 웰을 포함시켰다.
평가 플레이트의 세포를 200 μL 완전 배지-Pen/Strep로 1회 세척하였다. 그 후, 100 μL의 작업액을 첨가하였다. 이 단계 직 후, 100 μL의 박테리아 현탁액을 첨가하였다. 평가 화합물의 최종 농도는 1% DMSO를 갖는 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0.5, 0.025 및 0 μg/mL이었다. 평가 플레이트를 37℃에서 24hr 동안 5% CO2 인큐베이터에서 인큐베이션하였다.
세포 생존능은 AlamarBlue(Invitrogen-527026)를 사용하여 결정하였다. 평가 플레이트의 세포를 완전 배지-Pen/Strep를 사용하여 2회 세척하여 현탁액으로부터 박테리아를 제거하였다. 이 직 후에, 220 μL AlamarBlue/배지 믹스(200 μL 완전 배지-Pen/Strep 및 20 μL AlamarBlue로 구성됨)를 평가 플레이트의 각 웰에 멀티-피펫을 사용하여 첨가하였다. 그 후, 평가 플레이트는 형광 감소된-AlamarBlue를 발광시키기 위해 37℃ CO2 인큐베이터에서 인큐베이션하였으며, 이는 포화 없이 SpectraMax M2e 플레이트 판독기(Molecular Devices)를 사용하여 발광 5-6시간 후 판독가능하였다. 여기 및 발광 파장은 공급업체 매뉴얼(Invitrogen)에 따라 각각 530 nm 및 590 nm로 설정하였다.
본 발명의 Kgp 억제제는 도 1에 도시된 바와 같이 P. 진지발리스-유도된 세포 사멸로부터 SH-SY5Y 신경모세포종 세포를 보호하였다.
실시예 69. P. 진지발리스에 의한 철 포착의 방지
시험일 3일 전에, 박테리아 균주를 -80℃ 글리세롤 스톡으로부터 뇌 심장 침출 한천 배지(BHA)(BD-211065) 플레이트 상으로 스트레이킹 처리하고, 37℃에서 72h 동안 YQX-II 혐기성 작업대에서 인큐베이션하였다. 접종 루프(Greiner-731175)를 사용하여 단일 콜로니를 찍어서 5 ml 멸균 염수 내로 현탁시켰다. 현탁액의 혼탁도를 0.2(Siemens MicroScan 탁도계)로 조절하였으며, 이는 ~2 x 108 cfu/mL에 해당한다. 그 후, 박테리아 현탁액을 시험 배지에서 100x 희석하였다. 이를 도터 플레이트(daughter plate) 접종에 사용하였다.
박테리아 현탁액의 100 μl 분취액을 도터 플레이트의 각 웰에 접종하였다. 각 웰은 200 μL 브루셀라 브로쓰(BRU) 중 ~1.0 x 106 cfu/mL 박테리아, 1% DMSO, 및 연속 희석된 화합물을 함유하였다. 플레이트를 37℃에서 6일 동안 YQX-II 혐기성 작업대에서 인큐베이션하였다. 철 포착의 결과는 검정색으로의 박테리아 색상 변환을 가시화시킴으로써 판독하였다.
도 2는 참조 화합물 73과 비교하여 본 발명의 화합물이 P. 진지발리스의 주요 생존 메카니즘인 헤모글로빈 분해 및 철 포착을 방지하는 효과가 대략 2배임을 보여준다.
실시예 70. Kgp 억제제의 향상된 약물동태 특성
성체 수컷 Balb/C 마우스(20-25 그램, Harlan Laboratories, USA)를 이소플루란(2%, 800 mL/min O2)을 사용하여 마취시켰다. 부피바카인/에피네프린을 국부 무통을 위해 사용하였으며, 카르프로펜을 수술-전/후 무통을 위해 사용하였다. 동물을 정위 프레임(stereotaxic frame)(Kopf instruments, USA)에 넣었다. MetaQuant(MQ) 미소투석 프로브(재생된 셀룰로스 막, 3 mm 노출 표면, BrainLink, the Netherlands)를 해마에 삽입하고, 캐뉼라를 목정맥에 삽입하였다. 해마 프로브의 팁의 좌표는 다음과 같다: 전방-후방 (AP) = 브레그마로부터 -3.1 mm, 측방 (L) = 정준선으로부터 -2.8 mm 및 복측 (V) = 경막으로부터 -4.1 mm, 투스바(toothbar)는 0 mm로 설정됨. 수술 후, 동물을 개별적으로 케이지에 넣고, 물과 음식을 자유롭게 공급하였다.
화합물 1 및 참조 화합물 73을 2% DMSO 및 98% 염수에 2 mg/mL로 새롭게 제조하였으며, 5 mL/kg로 경구 투여하였으며, 최종 투약 농도는 10 mg/kg이었다.
미소투석 샘플링을 수술 후 1일째에 시작하였다. 실험 당일에, 가요성 PEEK 튜브를 사용하여 프로브를 미량관류 펌프(Harvard PHD 2000 Syringe pump, Holliston, MA 또는 기타 등등)에 연결시켰다. 147 mM NaCl, 3.0 mM KCl, 1.2 mM CaCl2, 1.2 mM MgCl2 및 0.15% BSA를 함유하는 aCSF를 사용하여 미소투석 프로브를 0.15 μL/min의 슬로우 유량(slow flow rate) 및 0.8 μL/min의 캐리어 유량(UP 물, 0.04% 아스코르브산 및 0.15% BSA)으로 관류시켰다. 미소투석 샘플을 15- 또는 30-분의 기간 동안 자동 분획 수집기(820 Microsampler, Univentor, Malta)에 의해 300 μL로 수집하였다. 안정화 후, 하나의 기준선 샘플을 수집하고, 참조 화합물 73(10 mg/kg; PO)을 모든 동물에 투여하였다. 샘플을 추가 8시간 동안 수집하였다. 또한, 참조 화합물 73의 투여 후 15, 30, 60, 120, 240, 360, 480 및 720분에 혈장을 꼬리 정맥을 통해 수집하였다. 모든 샘플을 -80℃에서 저장하면서, Brains On-Line에 의한 분석에 대기시켰다. 실험 완료 후, 마우스를 희생시키고, 프로브 확인을 위해 뇌를 수집하였다.
투석물 및 혈장 중 약물 농도는 텐덤 질량(MS/MS) 검출을 이용하여 HPLC에 의해 결정하였다. 미소투석 샘플을 LC 시스템(LC20XR, Shimadzu, Japan)에 대한 어떠한 샘플의 사전처리 없이 자동화 샘플 주입기(Sil20ACHT, Shimadzu, Japan)에 의해 주입하였다. 혈장 샘플은 80% ACN을 함유하는 혼합물과 침전시켰다. 샘플을 0.1% 포름산을 함유하는 물로 추가로 희석하였다.
크로마토그래피 분리는 역상 칼럼(2.1 x 50 mm, 입자 크기: 2.5 μm, Xbridge C8, Waters, USA)에서 수행하였다. 0.1% 포름산을 함유하는 초정제된 H2O 중 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴의 선형 구배를 이용하여 성분을 분리하였다(유량 0.2 mL/min).
MS 분석은 API 4000 삼중-사중극자 검출기 및 Turbo Ion Spray 인터페이스(둘 모두 Applied Biosystems(USA) 제품)로 구성된 API 4000 삼중-사중극자 시스템을 사용하여 수행하였다. 분석물에 대해 최적화 세팅된 양성 이온화 모드에서 포착을 수행하였다. 기기는 405.2에서 221.3로의 질량 전이를 이용하는 다중-반응-모니터링(MRM) 모드에서 작동시켰다. 데이터를 계산하고, 분석물의 반응 대 농도를 이용하는 Analyst™ 데이터 시스템(Applied Biosystem)을 이용하여 정량화하였다.
본 발명의 화합물은 도 3 및 도 4에 각각 도시된 바와 같이 마우스에서 증가된 혈장 농도 및 자유 뇌 농도를 제공한다.
실시예 71. 리신 진지파인의 억제
Kgp 및 카텝신 B, H, K, L 및 S에 대한 본 발명의 화합물의 억제 활성을 측정하기 위한 추가의 검정을 실시예 66에 기술된 바와 같이 수행하였다. 카텝신 F, V 및 Z의 활성을 억제하는 화합물의 능력을 또한 측정하였다. 조합하면, 실시예 66 및 실시예 70의 결과는 본원에 기술된 화합물이 나노몰 및 피코몰 IC50 값을 나타내는 Kgp의 매우 효과적인 억제제임을 보여준다. 또한, 표 4에 제시된 바와 같이, 참조 화합물 73과 비교하여 화합물 1, 2, 7 및 50 포함하는 많은 화합물이 내인성 카텝신 대비 Kgp에 대해 증가된 선택성을 보여준다. 참조 화합물 73과 비교하여 특히, 화합물 18, 47, 55 및 69는 내인성 카텝신 대비 Kgp에 훨씬 더 선택적이다.
또한, 화합물은 다른 중요한 이점을 나타내었다. 예를 들어, 참조 화합물 73과 비교하여 화합물 1, 47, 48 및 69는 수컷 CD-1 마우스(10 mg/kg로 구강 투여됨)로의 투여시 향상된 경구 유용성 및 증가된 혈장 농도를 나타내었다. 참조 화합물 73과 비교하여 화합물 47 및 69는 뇌 및 뇌척수액(CSF) 중 증가된 농도를 발생시켰으며, 이는 알츠하이머병과 같은 뇌 질환을 치료하는데 특히 유용할 수 있다. 화합물 49를 포함하는 기타 화합물은 뇌 및/또는 뇌척수액에서 감소된 농도를 나타내었다. 이러한 화합물은 치주병 또는 관절염과 같이 뇌에 영향을 미치지 않는 지엽적 질환(peripheral condition)을 치료하는데 유용할 수 있다.
표 4. 본 발명의 화합물에 의한 리신 진지파인 및 카텝신의 억제.
Figure pct00291
Figure pct00292
실시예 72. 프로브 화합물에 의한 Kgp 억제 활성의 측정.
리신 진지파인(Kgp)의 활성을 억제하는 본 발명의 화합물의 능력은 바렛(Barret)(Biochemical Journal. 1980, 187(3), 909)에 의해 기술된 것과 유사한 형광원 검정으로 형광원 기재로서 10 μM Z-His-Glu-Lys-MCA를 사용하여 37℃에서 측정하였다. 각 화합물에 대해 다양한 농도를 평가함으로써, 표 5에 제시된 바와 같이 리신 진지파인의 활성을 50%까지 억제하는데 요구되는 농도("IC50")를 결정하였다.
표 5. 비교 리신 진지파인 억제제.
Figure pct00293
실시예 73. 진지파인 활성 프로브를 사용한 박테리아 스미어의 분석.
W83 박테리아 또는 박테리아의 W83 Kgp 녹아웃 균주를 1 μM 활성 프로브 15a 또는 활성 프로브 38a와 1hr 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 그 후, 박테리아를 펠렛팅하고, 20 μL의 PBS에 재현탁시키고, 폴리-L-리신 코팅된 슬라이드 상에 떨어뜨리고, 소적을 건조시키기 위해 약 2hr 동안 실온에서 암상자에 유지시켰다. 그 후, 슬라이드를 PBS로 3회 세척하였다. 슬라이드를 박테리아 DNA용 DAPI 착색제를 함유하는 봉입제로 봉입시키고, 형광 현미경 하에 가시화시켰다. W83 박테리아는 활성 Kgp의 발현을 기반으로 하여 활성 프로브 15a 또는 활성 프로브 38a에의 노출 후, 형광성이었다. 활성 프로브에 노출되지 않은 박테리아 및 Kgp 녹아웃 박테리아는 단지 청색 DAPI 형광을 나타내며, 이는 박테리아 핵의 존재를 확인시켜준다(도 5a). 본 실시예는 활성 프로브가 Kgp와의 특이적 공유 반응에 의해 박테리아를 염색하여 이들의 검출을 가능하게 함을 입증한다.
실시예 74. 진지파인 활성 프로브를 사용한 치은 조직 샘플의 분석
새로운 냉동 치은 조직(5 미크론 두께)의 슬라이드를 -80℃ 냉동기로부터 회수하고, RT에서 10분 동안 해동시켰다. 그 후, 조직을 활성 프로브 15a(PBS 중 1 μM)와 습화된 챔버에서 즉시 함침시키고, 챔버를 광으로부터 차단하고, 37℃에서 1hr 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 슬라이드를 PBS에서 각 5분간 3회 세척하고, 그 후, 15분 동안 RT에서 새로운 4% PFA에서 고정시킨 후, 다시 PBS에서 3회 세척하였다. 그 후, 슬라이드를 1X 작업 Trueblack 용액(Biotium)과 30분 동안 RT에서 인큐베이션하였다. 그 후, 슬라이드를 PBS에서 3회 세척하고, DAPI를 함유하는 안티-페이드 봉입제로 봉입하였다(도 5b). 생성된 현미경 사진은 활성 프로브가 인간 조직 샘플에서 활성 Kgp의 존재를 가시화시키는데 사용될 수 있음을 입증하였다.
실시예 75. 진지파인 활성 프로브를 사용한 감염 세포의 분석.
P. 진지발리스 W83 또는 W83 Kgp 녹아웃 균주에 의한 감염의 존재 및 부재의 인간 Jurkat 세포를 활성 프로브 15a에 노출시켰다. 일부 감염된 세포를 비-형광 활성 부위 Kgp 억제제 73 (N-[7-아미노-2-옥소-1-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)헵탄-3-일]사이클로펜탄카르복사미드)와 1시간 동안 사전-인큐베이션 한 후, 활성 프로브 15a에 노출시켰다. 도 6a에 도시된 바와 같이, 프로브 15a는 Kgp의 크기에 상응하는 감염된 세포에서의 단백질 및 정제된 Kgp에 비가역적으로 결합한다. P. 진지발리스-감염된 세포에서 이러한 표지된 단백질의 실체는 웨스턴 블롯에 의해 Kgp인 것으로 확인되었다. 또한, 활성 프로브 15a의 첨가 전 화합물 70 (N-[7-아미노-2-옥소-1-(2,3,5,6-테트라플루오로페녹시)헵탄-3-일]사이클로펜탄카르복사미드)와 감염된 세포의 사전인큐베이션은 프로브 15a가 Kgp에 결합하는 것을 차단하였으며, 이는 상기 프로브가 Kgp에 특이적임을 확인시켜준다.
Jurkat 세포 성장에서 박테리아의 적정은 감염된 세포에서 Kgp 수준의 정량적 결정을 가능하게 한다(도 6b). 본 실시예는 Kgp가 박테리아 및 박테리아 감염된 세포에서 정량적으로 검출될 수 있으며, 또한 억제제의 표적 결합을 측정하는데 사용될 수 있음을 입증한다.
실시예 76. 진지파인 활성 프로브를 사용한 협측 세포 샘플의 분석.
여러 인간 도너로부터 멸균 루프로 채취된 협측 세포를 활성 프로브 15a(PBS 중 1 μM)의 용액에 현탁시켰다. 세포를 1hr 동안 37℃에서 인큐베이션하고, 펠렛팅하였다. 세포를 20 μL의 PBS에 재현탁시키고, 폴리-L-리신 코팅된 슬라이드에 놓고, 세척하고, 건조시켰다. 슬라이드를 DAPI를 함유하는 안티페이드 봉입제로 봉입시키고, 형광 현미경 하에 가시화시켰다. 활성 프로브 15a와 인큐베이션된 일부 협측 세포는 확연한 반점 얼룩을 나타내는 반면, 다른 것은 그렇지 않았으며(도 7), 이는 일부 세포에서의 Kgp의 존재를 나타낸다. 본 실시예는 P. 진지발리스 및 Kgp의 존재가 인간 경구 협측 세포 샘플에서 검출될 수 있음을 입증한다.
실시예 77. 진지파인의 분리 및 분석을 위한 바이오티닐화된 활성 프로브의 용도.
P. 진지발리스 W83을 B-Per 완충액으로 15분 동안 4℃에서 용해시켰다. 생성된 상청액에 바이오틴 Kgp 활성 프로브 51a, 2 mM를 섞고, 실온에서 1hr 동안 인큐베이션하였다. 5 mg의 스트렙타비딘-비드를 모든 샘플과 1hr 동안 실온에서 인버팅 플랫폼(inverting platform)에서 인큐베이션하였다. 1h 후 비드를 수집하고, 100℃에서 5분 동안 0.1% SDS와 가열하여 바이오틴-스트렙타비딘 결합을 파괴하였다. 생성된 상청액을 CAB102를 사용한 Kgp의 특이적 검출을 위해 SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯팅에 의해 분석하였다(도 8). 본 실시예는 바이오틴 프로브가 활성 Kgp의 하향 이동 및 정량화에 사용될 수 있음을 입증한다.
실시예 78. Cy5 활성-기반 프로브를 사용한 Kgp의 검출.
본 실시예는 Kgp에 비가역적으로 결합하는 프로브 화합물 71, Cy5-컨쥬게이션된 활성 기반 프로브를 이용하여 활성 Kgp의 검출을 입증한다. 검출을 위한 Kgp 활성 부위, 펩티드-기반 코어, 및 Cy5 형광단에 결합하는 웨어헤드(warhead)를 갖는다. 표지된 표적 단백질은 2-D 겔 전기영동에 의한 분획화 및 적절한 여기 및 발광 파장에서 Cy5로부터의 형광 신호의 검출을 이용하여 샘플의 생화학적 분리에 의해 가시화될 수 있다. Kgp의 평가 화합물(예를 들어, 후보 Kgp 억제제)에의 결합 후 고정된 농도의 프로브의 인큐베이션은 평가 화합물에 의해 이미 결합되지 않은 Kgp 활성 부위에의 활성 프로브의 결합을 발생시킨다.
P. 진지발리스 용해물의 제조. 108 박테리아를 수집하고, 5000 g에서 10분 동안 4℃에서 원심분리하고, 상청액을 경사분리하였다. 박테리아 세포 펠렛을 1 mL의 B-Per 세포용해 완충액(Thermo Fischer)으로 얼음 상에서 10분 동안 용해시킨 후, 10분 동안 14000 g로 4℃에서 원심분리하였다. 상청액-함유 단백질 용해물을 수집하였다. 생물학적 샘플을 B-Per 세포용해 완충액으로 10분 동안 4℃에서 용해시켰다.
Kgp의 Cy5 직접 표지화. 생물학적 샘플인 P. 진지발리스 용해물 또는 정제된 Kgp를 켄칭가능한 Cy5 프로브 화합물 71(1 μM)과 1h 동안 37℃에서 진탕시키면서 인큐베이션하였다. 그 후, 샘플을 50 mM DTT를 함유하는 NUPAGE LDS 샘플 완충액(Thermo Fisher)으로 95℃에서 10분 동안 변성시키고, Criterion 4-15% 프리캐스트 겔(Bio-Rad) 및 트리스/글리신/SDS 진행 완충액(Bio-Rad)을 사용하는 SDS-PAGE 전기영동으로 처리하였다. 겔을 75V에서 10분 이어서, 125V에서 1.5h 동안 진행시켰다. 그 후, 겔을 플라스틱 카세트로부터 제거하고, ChemiDoc 영상 시스템(Bio-Rad)을 이용하여 Cy5 가시화 처리하였다.
Cy5 프로브로 표지된 Kgp의 면역침강 . 샘플을 진탕시키면서 켄칭가능한 Cy5 프로브 화합물 71(1 μM)로 1h 동안 37℃에서 표지하였다. 그 후, Cy5 표지된 Kgp의 면역침강에 있어서, 샘플을 10 μg의 래빗 폴리클로날 CAB102 항체와 밤새 4℃에서 회전시키면서 인큐베이션하였다. 그 후, 샘플을 20분 동안 실온에서 회전시키면서 사전세척된 Dynabead Protein G 비드와 인큐베이션하였다. 샘플을 자석 랙을 사용하여 200 μL의 세척 완충액으로 4회 세척하였다. 비드를 20 μL의 용리 완충액 및 10 μL NUPAGE LDS 샘플 완충액, 50 mM DTT에 현탁시키고, 70℃에서 10분 동안 가열하였다. 그 후, 면역침강된 단백질을 자석 랙을 사용하여 자석 비드로부터 용리시켰다. 그 후, 샘플을 SDS-PAGE 전기영동으로 처리하고, Cy5 신호를 ChemiDoc 영상 시스템(Bio-Rad)으로 가시화시켰다.
Cy5 표지된 샘플의 웨스턴 블롯 분석. Cy5 검출로의 영상화 후, 단백질을 PVDF 막으로 이동시키기 위해 트랜스-블롯 터보(Trans-blot Turbo) 전이 시스템(Bio-Rad)을 사용하여 SDS-PAGE 겔을 웨스턴 블롯 분석으로 처리하였다. 그 후, 막을 TBS로 5분 동안 세척하고 TBST 완충액 중 3% BSA로 1h 이상 동안 차단시켰다. 이어서, 블롯을 RT에서 2h 동안 또는 4℃에서 밤새 차단 완충액 중에서 1:1000 일차 항체 CAB102와 인큐베이션하였다. 그 후, 블롯을 TBST 완충액으로 3회 각 5분씩 세척하고, 이어서, TBST 중의 1:50,000 염소 항-래빗 IgG 흡착된 HRP 컨쥬게이션된 항체(Thermo Fisher, #31462)와 RT에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 블롯을 TBST로 4회 세척하고, SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate(Thermo Fisher) 및 ChemiDoc 영상 시스템을 사용하여 화학발광 영상 처리하였다.
결과. 프로브 화합물 71을 사용한 Kgp의 검출은 민감하였으며, 500 CFU의 뚜렷한 검출 한계를 갖는다. 검출은 3개의 실험에 의해 입증된 바와 같이 Kgp에 대해 특이적이었다. 먼저, 도 9a에 도시된 바와 같이, 야생형 W83 P. 진지발리스 박테리아 배양 샘플 중 Kgp 단백질(50 kDa 분자량)의 단일 밴드가 특정하게 검출되었으며, P. 진지발리스의 Kgp 녹아웃 균주로부터의 샘플에서는 검출되지 않았다.
두 번째, 프로브 화합물 71에 의한 Kgp의 표지화는 CAB102 즉, Kgp-특이적 폴리클로날 항체와의 사전인큐베이션 및 면역-결핍에 의해 특정하게 격감되었다. 도 9b의 레인 1은 프로브 화합물 71로의 야생형 P. 진지발리스의 표지화를 보여주는 반면, 도 9b의 레인 2는 래빗 폴리클로날 항체 CAB102-컨쥬게이션된 비드를 갖는 표지된 Kgp의 면역-결핍 후의 샘플 분석을 보여준다. 레인 1 및 2에는 전체 샘플 부피의 10분의 1로 동등하게 로딩시켰다. 도 9b의 레인 3은 CAB102-컨쥬게이션된 비드로부터의 표지된 Kgp의 용리를 보여준다. 총 용리 부피의 3분의 2를 레인 3에 로딩시켰다.
마지막으로, 검출은 Kgp에는 선택적이나, 상동성 아르기닌 진지파인 Rgp를 억제하지 않는 농도의 화합물 1(100 nM)과의 사전인큐베이션에 의해 완료된다. 도 9c는 표지화 검정 검출 한계를 결정하기 위해 다양한 농도의 야생형 P. 진지발리스의 표지화 및 검출을 보여준다. 또한, 가장 높은 CFU(콜로니 형성 단위) 샘플을 100 nM의 화합물 1과 인큐베이션하였다. 샘플을 CAB102 항체를 이용한 웨스턴 블롯팅은 물론 Cy5 신호 가시화에 의해 검출하였다. 이러한 마지막 연구는 화합물 1이 프로브 화합물 71과 활성 부위에 대해 경합함을 입증하며, 이는 화합물 1과 같은 Kgp 소분자 억제제에 의한 Kgp 표적 결합 수준의 검출을 가능하게 한다. 이러한 데이터는 프로브 화합물 71에 의한 정제된 단백질 및 무손상 박테리아 배양물 중의 Kgp 단백질의 표지화를 확립하며, 화합물-처리된 샘플에서 표적 결합을 평가하는 방법을 확립한다.
실시예 79. P. 진지발리스 감염의 다양한 양상은 Kgp를 억제함으로써 처리된다.
수주에 걸쳐 마우스의 치은에 직접적으로 적용된 P. 진지발리스는 치주염의 모델로서 사용되었다. 치주염 진행의 특징인 치조골 재흡수는 이러한 모델을 사용하는 경우 전형적으로 관찰된다. 더욱 최근에는, 이러한 모델의 사용은 또한, 뇌에서 상당한 양의 P. 진지발리스의 발견으로 이어졌으며, 이는 구강 집락형성과 동시에 축적되며, 후속하여 해마 뉴런의 염증 및 소실과 같은 해로운 결과로 이어진다. 하기 기술된 바와 같이, 본원에 기술된 화합물 1 및 기타 화합물은 P. 진지발리스로 감염된 대상체를 치료하는데 사용될 경우 이러한 효과를 예방할 수 있다.
연구 시작시에, 8주령 BALB/C 암컷 마우스에 10일 동안 식수 중 항생제(설파메톡사졸룸 0.87 mg/mL, 트리메토프리뮴 0.17 mg/mL)를 투여하여 실험 감염으로부터의 실험 감염으로부터의 마이크로비옴 보호를 저하시켰다. 실험 치주염은 결찰 처리(ligature placement)에 이어 P. 진지발리스에의 다수 노출에 의해 유도되었다. 결찰 수술 동안, 마우스는 케타민(200 mg/kg) 및 자일라진(10 mg/kg)의 복강내 주입으로 마취시키고, 눈에는 연고를 발랐다(Puralube Vet; Pharmaderm, Melville, NY). 그 후, 5-0 실크 리가춰(Roboz Surgical Instrument Co.,)를 상악 왼쪽 및 오른쪽 제2 대구치 주위로 묶었다. 봉합하고, 치주 조직에 대한 손상을 방지하도록 부드럽게 묶었다. 전체 실험 기간에 걸쳐 리가춰는 원위치에 남겨두어 그 내부에서 박테리아의 집락형성에 의한 염증이 지속적으로 유도될 수 있게 하였다.
마우스(n=8-10/암(arm))를 6주 동안 격일에 감염시켰다. 감염에 있어서, 100 μL의 박테리아 용액을 상악골의 협측 표면에 국소 적용하였다. 박테리아 제조에 있어서, P. 진지발리스 W83(ATCC, Rockville, MD)를 Tryptic Soy Broth(TSB) 한천 플레이트(0.5 mg/mL L-시스테인, 5 μg/mL 헤민 및 0.5 μg/mL 비타민 K가 보충된 5% 양 혈액) 상에 스트레이킹시키고, 혐기성 조건 하에 37℃에서 5-7일 동안 성장시켰다. 그 후, 샘플을 미드-로그 페이스(mid-log phase)(OD600 = 0.5-0.7) 까지 헤민, 비타민 K 및 L-시스테인을 함유하는 TBS(TSB-HKC)에서 접종시켰다. 박테리아를 PBS에서 세척하고, PBS + 2% 메틸셀룰로스(CMC) 중 1x1010 세포/mL의 최종 농도로 제조하였다.
마우스에 비히클 또는 화합물 1을 5주(36-70일) 동안 투여하였다. PBS 중의 화합물 1을 3, 10 또는 30 mg/kg으로 1일 2회 구강에 경구 투여하였다. 비히클-처리 동물에는 PBS만 투여하였다. 5주째에, 하위그룹의 동물(n=16)을 안락사시켜 처리 시작 전 기준선 측정치를 수집하였다. 10주 후, 마우스를 안락사키기고, 뇌, 혈청 및 상악 조직을 채취하고, 액체 질소에서 냉동시켰다.
상악에서의 골 소실을 OsiriX MD 소프트웨어(PixmeoSARL, Bernex, Switzerland)를 사용하여 생체외에서 블라인드 측정하였다. 측정 지점을 3D Multi Planar Reconstruction(MPR) 뷰를 사용하여 수득하였으며, 여기에서 상악을 제2 대구치의 표면 뿌리 및 제1 대구치의 후근을 따라 제1 대구치의 전방 뿌리의 직각으로 곧게 슬라이스하였다. 틈새 이음(CEJ)과 치조골 능선(ABC) 사이의 간격은 CEJ로부터 제2 대구치의 각 한 측면의 표면근에 수직으로 배치된 ABC 상의 기준선까지 측정하였다. 도 10은 비히클 또는 화합물 1(###p<0.0001) 처리된 마우스에서 10주 종료점에서 감염-유도된 치조골 소실을 보여준다. 골 소실은 5-10주 동안 화합물 1(30 mg/kg 또는 10 mg/kg)로의 처리에 의해 개선되었다. 3 mg/kg의 화합물 1로의 처리는 개선시키는 경향이 있으나, 비히클 처리된 마우스 대비 상당한 개선을 유도하지는 않았다.(ANOVA: F (5, 24) =15.71, p < 0.0001; 본페로니 교정된 t-테스트: **p< 0.005, ***p< 0.001).
DNA를 제조업체의 프로토콜에 따라 DNeasyBLOOD & TISSUE KIT(Qiagen, Germany)을 사용하여 뇌 조직으로부터 추출하였다. Taqman qPCR를 전방 및 역방 프라이머(각각 5'-AGCAACCAGCTACCGTTTAT-3' 및 5'-GTACCTGTCGGTTTACCATCTT-3') 및 검출 프로브(6-FAM-TACCATGTTTCGCAGAAGCCCTGA-TAMRA)를 사용하여 Bio-Rad CFX96 Real-Time System C1000 Touch ThermalCycle 상의 Kapa Probe fast qPCR Mix(Rox Low)로 수행하였다. 프라이머는 P. 진지발리스 아르기닌-특이적 시스테인-프로테이나제 유전자의 단일 복사체를 기반으로 하였다. 이중 샘플을 100 ng의 주형 뇌 게놈 DNA 용액, TaqMan Universal PCR Master Mix(2x)(Kapa Biosystems, USA) 및 프라이머(최종 농도 5 μM) 및 프로브(최종 농도 4 μM)의 특이적 세트(GenoMed, Poland)(상기 농도는 전방 및 역방 프라이머에 있어서 562.5 nM 및 프로브 프라이머에 있어서 100 nM에 상응함)를 함유하는 10 μL의 총 부피에서 검정하였다. 50℃에서 2분의 초기 인큐베이션 단계 및 95℃에서 20초의 변성 후, 40 PCR 사이클(95℃에서 20초, 60℃에서 30초)을 수행하였다. P. 진지발리스 게놈의 복사체의 수는 배양된 P. 진지발리스 W83(WT)의 연속 희석으로부터 제조된 표준 곡선과 Cq 값을 매칭시킴으로써 계산하였다. 도 11에 도시된 바와 같이, P. 진지발리스-특이적 RgpB 유전자의 복사체의 상당한 수가 감염 5주 및 10주 후 뇌 조직에서 발견되었다. 5주 내지 10주에서 30 mg/kg 화합물 1로의 처리는 DNA 복사체 수의 ~80% 감소(***p<0.001)를 유도하였다. 10 mg/kg 또는 3 mg/kg으로의 처리는 복사체 수의 ~50% 감소(**p<0.01, ***p<0.001)를 유도하였다. ANOVA: F (6, 59) = 23.31, p<0.0001; 본페로니 교정된 t-테스트.
GAD67 양성 인터뉴런의 정량화는 CellSens 1.5. 소프트웨어를 사용하여 수행하였다. 문(hilus) 영역은 개방면에서 직선으로 연결된 치아 이랑의 블레이드 사이의 영역으로서 정의되었다. 해마를 통과하는 매 40th 절편 상의 세포 수를 계수하였다. 도 12에 도시된 바와 같이, 치아 이랑에서 GAD67 양성 인터뉴런의 정량화는 모의-감염 대조군과 비교하여 10주째에 감염된 마우스에서 인터뉴런의 ~25% 소실을 나타냈다(*p< 0.05). 이에 반해, 화합물 1로 처리된 마우스의 GAD67+ 세포는 모의-감염 마우스의 GAD67+ 세포와 동일한 수준으로 존재하였다. 결과는 도 12에 있으며, 조직 부피 당 세포의 수로서 나타낸 것이다.
조합하면, 본 실시예에서의 결과는 화합물 1이 치조골 소실, 뇌 조직에서의 박테리아 수준 및 해마 뉴런 소실을 포함하는 P. 진지발리스 감염의 다수 양상을 치료함을 보여준다. 또한, 화합물 1은 관련 연구에서 뇌 abeta42 및 뉴런염증의 유도를 감소시키는 것으로 관찰되었다. Kgp를 억제시킴으로써, 본원에 기재된 화합물은 P. 진지발리스 감염 자체는 물론 신경 질환 및 기타 감염-관련 질환의 해로운 효과를 치료할 수 있다.
상기 내용은 명확성과 이해의 목적으로 일부 세부 사항에서 예시 및 실시예에 의해 기술되었지만, 특정 변화 및 변형이 첨부된 특허청구범위 내에서 실행될 수 있음을 당업자는 인지할 것이다. 또한, 본원에 제공된 각 참조문헌은 전문이 각 참고문헌이 개별적으로 참고로 포함되는 것과 동일한 범위로 참고로 포함된다.

Claims (60)

  1. 하기 화학식 I에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00294

    상기 식에서,
    A는 -CH2- 및 -O-로 구성된 군으로부터 선택되며;
    R1a 및 R1b는 수소, C1-4　알킬 및 아민 보호기로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;
    R2a 및 R2b는 수소, 할로겐, C1-4　할로알킬 및 C1-4　할로알콕시로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;
    R3은 C3-8　사이클로알킬, C3-8　알킬, 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴, C6-10　아릴, 5 내지 12 원의 헤테로아릴 및 리포터 모이어티로 구성된 군으로부터 선택되며, 여기에서, R3은 하나 이상의 R3a 치환기로 임의적으로 치환되며;
    각각의 R3a는 할로겐, -CN, -NO2, -N3, -OH, C1-4　알킬, C1-4　할로알킬, C1-4　알콕시, C1-4　할로알콕시, -N(Rc)2, -N+(Rb)3, -(CH2)kC(O)Rb, -NRc(CH2)uC(O)Rb, -O(CH2)uC(O)Rb, -(CH2)kCONRcRc, -(CH2)kNRcC(O)Rb, -NRc(CH2)uCONRcRc, -NRc(CH2)uNRcC-(O)Rb, -O(CH2)uCONRcRc 및 -O(CH2)uNRcC(O)Rb, 및 임의적으로 치환된 트리아졸릴로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 Rb는 C1-4　알킬, C1-4　할로알킬 및 C1-4　듀테로알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 Rc는 수소 및 C1-8　알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 아래첨자 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 아래첨자 u는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되며;
    R4는 수소 및 C1-4　알킬로 구성된 군으로부터 선택되며;
    R5는 -CH2R5a, -CHS(O)(R5b)2 및 C1-6　할로알킬로 구성된 군으로부터 선택되며;
    R5a는 -O-R6, -S-R7, -SO-R7, -SO2-R7, -N(R8)2, 5 내지 12 원의 헤테로아릴 및 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴로 구성된 군으로부터 선택되며,
    여기에서, 5 내지 12 원의 헤테로아릴은 할로겐, C1-3　알킬 및 C1-3　할로알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 구성원으로 임의적으로 치환되며,
    3 내지 12 원의 헤테로사이클릴은 옥소, 할로겐, C1-3　알킬 및 C1-3　할로알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 구성원으로 임의적으로 치환되며;
    각각의 R5b는 독립적으로 선택된 C1-6　알킬이며;
    R6 및 R7은 페닐, C1-6　알킬, C1-6　할로알킬 및 5 내지 12 원의 헤테로아릴로 구성된 군으로부터 선택되며,
    여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환되며,
    5 내지 12 원의 헤테로아릴은 하나 이상의 할로겐, C1-3　알킬 또는 C1-3　할로알킬로 임의적으로 치환되며;
    각각의 R8은 독립적으로 선택된 C1-6　알킬이며;
    R5는 켄칭 모이어티 R9를 임의적으로 포함하며;
    단, R5는 2,3,5,6-테트라플루오로페녹시메틸이 아니다.
  2. 제1항에 있어서, R3이 C3-8　사이클로알킬, C3-8　알킬, C6-10　아릴, 5 내지 12 원의 헤테로아릴 및 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴로 구성된 군으로부터 선택되며, 이들 각각은 하나 이상의 R3a 치환기로 임의적으로 치환되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R3이 사이클로펜틸 및 페닐로 구성된 군으로부터 선택되며, 이들 각각은 하나 이상의 R3a 치환기로 임의적으로 치환되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 각각의 R3a가 할로겐, -N3, C1-4　알킬, C1-4　할로알킬, C1-4　알콕시, C1-4　할로알콕시, -N(Rc)2, -N+(Rb)3 및 -NRcC(O)Rb로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  5. 제1항에 있어서, R3이 사이클로펜틸인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, R3이 C1-4　알콕시로 치환된 C3-8　알킬인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  7. 제6항에 있어서, R3이 메톡시프로필인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  8. 제5항에 있어서, 하기 화학식 Ia에 따른 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00295
  9. 제8항에 있어서, R4가 수소인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  10. 제9항에 있어서, R5a가 -O-페닐이며, 여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  11. 제10항에 있어서, R5a에서 각각의 할로겐이 F 및 Cl로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  12. 제11항에 있어서, R5a가 2,3,6-트리플루오로페녹시; 2,3,5-트리플루오로페녹시; 2,3-디플루오로페녹시; 2,5-디플루오로페녹시; 2,6-디플루오로페녹시; 3,5-디플루오로페녹시; 2-플루오로페녹시; 및 3-플루오로페녹시로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  13. 제1항 내지 제4항, 제6항 및 제7항 중의 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 Ia에 따른 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00296
  14. 제1항 내지 제4항, 제6항, 제7항 및 제13항 중의 어느 한 항에 있어서, R4가 수소인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, R5a가 -O-페닐이며, 여기에서, 페닐은 1-5개의 할로겐으로 치환되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  16. 제15항에 있어서, R5a에서 각각의 할로겐이 F 및 Cl로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  17. 제16항에 있어서, R5a에서 각각의 할로겐이 F인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  18. 제1항 내지 제4항, 제6항, 제7항 및 제13항 내지 제17항 중의 어느 한 항에 있어서, R5a가 2,3,6-트리플루오로페녹시; 2,3,5-트리플루오로페녹시; 2,3,4-트리플루오로페녹시; 3,4,5-트리플루오로페녹시; 2,3-디플루오로페녹시; 2,4-디플루오로페녹시; 2,5-디플루오로페녹시; 2,6-디플루오로페녹시; 3,4-디플루오로페녹시; 3,5-디플루오로페녹시; 2-플루오로페녹시; 3-플루오로페녹시; 및 4-플루오로페녹시로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  19. 제18항에 있어서, R5a가 2,3,6-트리플루오로페녹시; 2,3,5-트리플루오로페녹시; 2,3-디플루오로페녹시; 2,5-디플루오로페녹시; 2,6-디플루오로페녹시; 3,5-디플루오로페녹시; 2-플루오로페녹시; 및 3-플루오로페녹시로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  20. 제18항에 있어서, R5a가 2,3,6-트리플루오로페녹시 및 2,6-디플루오로페녹시로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  21. 제13항 또는 제14항에 있어서, R5가 -CH2R5a이며, R5a가 -O-R6이고, R6이 C1-6　할로알킬인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  22. 제21항에 있어서, R6이 트리플루오로에틸 및 헥사플루오로프로필로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  23. 제13항 또는 제14항에 있어서, R5가 -CH2R5a이며, R5a가 -O-R6이고, R6은 할로겐 및 C1-3　알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 구성원으로 임의적으로 치환되는 5 내지 12 원의 헤테로아릴인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  24. 제23항에 있어서, R6이 이속사졸릴 및 피리디닐로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물.
  25. 제13항 또는 제14항에 있어서, R5a가 -N(R8)2, 5 내지　12 원의 헤테로아릴 및 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴로 구성된 군으로부터 선택되며, 여기에서,
    5 내지 12 원의 헤테로아릴은 할로겐, C1-3　알킬 및 C1-3　할로알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 구성원으로 임의적으로 치환되며,
    3 내지 12 원의 헤테로사이클릴은 옥소, 할로겐, C1-3　알킬 및 C1-3　할로알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 구성원으로 임의적으로 치환되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  26. 제25항에 있어서, R5a가 테트라졸릴 및 옥소피리미디닐로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  27. 제13항 또는 제14항에 있어서,
    R5가 -CH2R5a 및 -CHS(O)(R5b)2로 구성된 군으로부터 선택되며,
    R5a는 -S-R7 및 -S-(O)2R7로 구성된 군으로부터 선택되며,
    R7은 C1-6　알킬, C1-6　할로알킬, 5 내지 12 원의 헤테로아릴 및 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  28. 제27항에 있어서, R5가 -CH2R5a이며; R5a는 -S-R7 및 -S-(O)2R7로 구성된 군으로부터 선택되며; R7은 C1-6　알킬인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  29. 제27항에 있어서, R5가 -CH2R5a이며; R5a는 -S-R7이며; R7은 5 내지 12 원의 헤테로아릴 및 3 내지 12 원의 헤테로사이클릴로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  30. 제29항에 있어서, R7이 이속사졸릴, 피리디닐 및 피리미디닐로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  31. 제27항에 있어서, R5가 -CHS(O)(R5b)2인 화합물.
  32. 제13항 또는 제14항에 있어서, R5가 C1-6　할로알킬인 화합물.
  33. 제32항에 있어서, R5가 디플루오로메틸인 화합물.
  34. 제1항에 있어서,
    Figure pct00297

    Figure pct00298

    Figure pct00299

    Figure pct00300

    Figure pct00301
    로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  35. 제1항에 있어서,
    Figure pct00302

    Figure pct00303

    Figure pct00304

    Figure pct00305

    Figure pct00306
    로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  36. 제1항 내지 제35항 중의 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
  37. P. 진지발리스(P. gingivalis) 감염과 관련된 질병 또는 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 P. 진지발리스 감염과 관련된 질병 또는 질환의 치료가 필요한 대상체에 유효량의 제1항 내지 제35항 중의 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 유효량의 제36항에 따른 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  38. 제37항에 있어서, 질병 또는 질환이 뇌 장애, 치주병, 당뇨병, 심혈관 질환, 관절염, 류마티스 관절염, 골관절염, 감염성 관절염, 건선 관절염, 조산 위험 증가, 폐렴, 암, 신장 질환, 간 질환, 망막 장애 및 녹내장으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  39. 제38항에 있어서, 질병 또는 질환이 뇌 장애인 방법.
  40. 제39항에 있어서, 뇌 장애가 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 다운증후군(Down's syndrome), 간질(epilepsy), 자폐증(autism), 파킨슨병(Parkinson's disease), 본태성진전(essential tremor), 전측두엽 치매(fronto-temporal dementia), 진행성 핵상 마비(progressive supranuclear palsy), 근위축성 측삭 경화증(amyotrophic lateral sclerosis), 헌팅톤병(Huntington's disease), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 경증 인지 장애(mild cognitive impairment), 연령 관련 기억 장애(age associated memory impairment), 만성 외상성 뇌병증(chronic traumatic encephalopathy), 뇌졸중(stroke), 뇌혈관 질환(cerebrovascular disease), 루이소체병(Lewy Body disease), 다계통 위축증(multiple system atrophy), 정신분열증(schizophrenia), 및 우울증(depression)으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  41. 제40항에 있어서, 뇌 장애가 알츠하이머병인 방법.
  42. 제41항에 있어서, 콜린에스테라제 억제제, 세로토닌 조절제, NMDA 조절제, Aβ 표적 치료제, ApoE 표적 치료제, 미세아교세포 표적 치료제, 혈액 뇌 장벽(blood brain barrier) 표적 치료제, 타우(tau) 표적 치료제, 보체(complement)표적 치료제 및 항염증제로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 활성제를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  43. 제38항에 있어서, 질병 또는 질환이 치주병인 방법.
  44. 제38항에 있어서, 질병 또는 질환이 간 질환인 방법.
  45. 제44항에 있어서, 간 질환이 비-알콜성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis)인 방법.
  46. 제38항에 있어서, 질병 또는 질환이 망막 장애인 방법.
  47. 제46항에 있어서, 망막 장애가 연령-관련 황반변성인 방법.
  48. 제38항에 있어서, 질병 또는 질환이 암인 방법.
  49. 제48항에 있어서, 암이 구강암, 유방암, 췌장암 및 다형성아교모세포종으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  50. 제38항에 있어서, 질병 또는 질환이 조산 위험 증가인 방법.
  51. 제38항에 있어서, 질병 또는 질환이 관절염인 방법.
  52. 제51항에 있어서, 관절염이 류마티스 관절염 또는 골관절염인 방법.
  53. 제38항에 있어서, 질병 또는 질환이 심혈관 질환인 방법.
  54. 제38항에 있어서, 질병 또는 질환이 당뇨병인 방법.
  55. 제37항 내지 제54항 중의 어느 한 항에 있어서, 화합물이 대상체에 적어도 1개월 동안 투여되는 방법.
  56. 제55항에 있어서, 화합물이 대상체에 적어도 1년 동안 투여되는 방법.
  57. 제55항에 있어서, 화합물이 대상체에 적어도 10년 동안 투여되는 방법.
  58. 제55항에 있어서, 화합물이 대상체에 적어도 60년 동안 투여되는 방법.
  59. 제37항 내지 58항 중의 어느 한 항에 있어서, 대상체가 인간, 개 또는 고양이인 방법.
  60. 제59항에 있어서, 대상체가 인간인 방법.
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