PT98703A - Processo para a preparacao de novas cefalosporinas - Google Patents

Description

"PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVAS CEFALOSPORINAS11

Campo da invengão A presente invenção refere-se a novas cefalosporinas, aos seus sais não tóxicos aceitáveis sob o ponto de vista farmaceuti. co e aos seus produtos de solvatação, hidratos de ésteres hidro-lizãveis fisiológicamente, que possuam potentes actividades de largo espectro anti-bacteriano. A presente invenção também se re fere a um processo para a preparação destes compostos e a composições farmacêuticas que os contêm como componentes activos.

Descrição da técnica anterior

Os antibióticos da série da cefalosparina são muito utilizados na terapêutica para o tratamento de doenças causadas por bactérias patogénicas gerais nos seres humanos e nos animais. Sa be-se que estes antibióticos são úteis para o tratamento de doen ças provocadas por bactérias que exibem resistência a outros antibióticos, como por exemplo, bactérias resistentes à penicilina e para o tratamento de doentes sensíveis ã penicilina.

Na maioria das circunstâncias, é desejável utilizar anti bióticos que possuam um largo espectro de acções anti-bacterianas, por exemplo contra bactéria Gram-positivas e Gram-negativas. Nej3 te sentido, fizeram-se muitos estudos para o desenvolvimento de uma diversidade de antibióticos de cefalosporina com este largo espectro de acção antibiótica.

Por exemplo, a patente de invenção britânica nQ 1 399 086

descreve os ácidos 7p-acilamido-cef-3-em-4-carboxílicos de fõrmu la geral 0

II H

(A) na qual, R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo orgânico; representa um grupo orgânico monovalente eterificante ligado ao átomo de oxigénio através de um átomo de car bono; B representa um átomo de enxofre ou um grupo S—*0; e P representa um grupo orgânico.

Estimuladas pelas descobertas destes compostos fizeram-se muitas tentativas para desenvolver antibióticos apresentando melhores propriedades relativamente a certos micro-organismos, relativos especialmente a bactérias Gram-negativas. Estes esforços resultaram num desenvolvimento de, por exemplo, os compostos que estão descritos na patente de invenção britânica ηθ 1 522 140, de fórmula geral (B) seguinte e que existem sob a forma de isómeros syn ou sob a mistura de isómeros syn e anti em que os isómeros syn estão presentes numa quantidade de pelo menos 90%. -3

Ο II Ν

(Β) na qual, R' representa um grupo furilo ou tienilo; R1' representa um grupo alquilo C.^, cicloalquilo C3_7, furilmetilo ou tienilmetilo; R''1 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo carba moílo, carboxi, carboximetilo, sulfonilo ou metilo.

Recentemente, fizeram-se outras tentativas para a preparação de novos e melhores antibióticos, normalmente através da in trodução de um grupo acilamido na posição 7 e de certos outros gru pos na posição 3 do núcleo cefem como se apresenta na fórmula ge ral (B) citada anteriormente (consultar, por exemplo, a patente de invenção belga nQ 852 427 requerida por Fujisawa; as patentes de invenção britânicas nQs 1 603 212 e 1 604 971, ambas requeridas por Hoescht A.G.; o pedido de patente de invenção europeia nQ 47 977 requerida por Ciba-Geigy; o pedido de patente de invenção europeia nQ 74 563 requerido pela Bayer; e a patente de invenção norte-americana nQ 4 390 534 e o pedido de patente de invenção eu ropeia nQ 62 321, ambas requeridas por Fujisawa). Entre estas re ferências anteriores à técnica anterior, têm interesse particular as patentes de invenção norte-americanas nQ 4 258 041 e nQ 4 329 453, ambas requeridas pela Glaxo.

Em particular, as cefalosporinas reivindicadas separadamente na última patente de invenção, isto é, na patente de inven ção norte-americana nQ 4 329 453, correntemente conhecida como "Ceftazidima", é um dos derivados de cefem potentes e de sucesso comercial apresentando um largo espectro de actividade antibióti ca contra vários organismos normalmente difíceis de combater com antibióticos de j|-lactama. A referida Ceftazidima pode ser repre sentada pela fórmula

Como descrito no pedido de patente de invenção europeu nQ 397 511, a presente invenção também contém a descoberta de novos antibióticos de cafalosporina apresentando a fórmula de estrutura geral (D) seguinte, assim como os seus sais não tóxicos aceitáveis do ponto de vista farmacêutico e ésteres e produtos de soí. vatação hidrolizãveis fisiolõgicamente, que apresentam actividade antibiótica surpreendentemente maior para um largo espectro de organismos:

2 CO 2 R' (D) na qual,

Rx representa um grupo alquilo alcenilo C3_4, alei nilo C^_4 ou um grupo de fórmula geral -C(Ra> (R^CC^H, na qual Ra e R^, iguais ou diferentes, representam, ca da um^um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C^_4 ou Ra e R^ formam um grupo cicloalquilo C3_7 conjunta mente com o átomo de carbono a que se ligam; R1 representa um grupo alquilo 01-4, alcenilo C3_4, ciclo alquilo C3_7, amino eventualmente contendo como subs-tituintes um grupo alquilo C1_4, fenilo ou 2-, 4- ou 6-fenilo substituídos com dois ou menos substituintes escolhidos entre um átomo de halogénio ou um grupo al. quilo C^_4, alcoxi C^_3 ou hidroxi; R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo

Q representa um átomo de azoto ou um grupo CH.

As cefalosporinas de fórmula geral (D) são isõmeros sin ou misturas de isõmeros sin e anti que contêm pelo menos 90% do isõ mero sin. Além disso, quando na fórmula geral (D) o símbolo R re presenta um grupo de fórmula geral -C(R )(R, )-C0oH, na qual R= e R^ são iguais ou diferentes, de modo que se ligam a um átomo de carbono que se transforma num centro quirálico e os compostos re

feridos tornam-se diastereoisómeros.

Resumo da invenção

Inesperadamente, os requerentes descobriram que os dias-tereoisõmeros R e S, de fórmula geral (D), na qual R representa um grupo de fórmula geral -C(Ra)(Rb)-C02H e R& e Rb são diferentes de forma a que o átomo de carbono a que se ligam se transfor me num centro quirálico, quando são isolados, particularmente os isómeros í3, exibem actividades antibacterianas superiores.

Deste modo, o objectivo principal da presente invenção é proporcionar novas cefalosporinas de fórmulas gerais (I-S)e (I-R) e os seus sais não tóxicos aceitáveis sob o ponto de vista farma cêutico e os seus ésteres hidratos e produtos de solvatação fisio logicamente hidrolizãveis.

Especificamente, os isómeros S da presente invenção apre sentam a fórmula geral

(I-S) e o isómero R representa a fórmula geral

(I-R) em que, representa um grupo alquilo alcenilo C3_4, ciclo alquilo C3_4, amino, comportando, eventualmente, como substituinte, um grupo alquilo C^_4 ou fenilo comportando, eventualmente, dois ou mais substituintes esco lhidos entre átomos de halogéneo ou grupos alquilo ^1-4' alcoxi ^i_3 ou hidroxi nas posições 2-, 4-, ou 6“ ; R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo c · ^1-4' R& e R^, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C^_4; e Q representa um átomo de azoto ou um grupo CH.

As cefalosporinas mais preferidas da presente invenção são os isõmeros S de fórmula geral (I-S), na qual R^ representa um grupo alquilo C^_4, alcenilo C3_4 ou amino; R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C^_2; R& e R^, são diferentes entre si e representam um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C1_2; e Q representa um grupo CH.

As cefalosporinas mais preferidas da presente invenção são os isõmeros £ de fórmula geral (I-S), na qual representa um grupo metilo, etilo ou amino; R2 representa um átomo de hidro ¢- % génio ou um grupo metilo; e são diferentes entre si e repre sentam um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo; e Q representa um grupo CH.

Um outro aspecto da presente invenção envolve os processos para a preparação dos respectivos isômeros de fórmulas gerais (I-S) e (I-R), que podem referir-se no seu conjunto posteriormen te como fórmula geral (I).

Um outro aspecto da presente invenção refere-se aos sais não tóxicos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, ésteres fisiologicamente hidrolizáveis, hidratos e produtos de solvatação dos diastereoisómeros de fórmula geral (I) e aos processos para a sua preparação.

Ainda uma outra nova contribuição da presente invenção con siste na preparação de composições farmacêuticas contendo uma ou mais cefalosporinas de fórmula geral (I) ou um seu derivado acei^ tável em farmácia.

Descrição detalhada da presente invenção

As novas cefalosporinas de fórmula geral (I) são isômeros sin ou misturas de isômeros sin e anti, no que se refere ao radi_ cal -0-C(R&) (R^-CC^H, que contêm pelo menos 90% de isômeros sin e não mais de 10% do isómero anti.

Além disso, os compostos de fórmula geral (I), de acordo com a presente invenção, podem apresentar formas tautoméricas e estes tautómeros também são abrangidos pelo âmbito desta invenção. Designadamente, quando o símbolo Q na fórmula geral (I) represen ta um grupo metilo, o grupo aminotiazolilo sofre tautomerismo pa ra formar um grupo iminotiazolinilo, o seu tautómero, deste modo:

Quando o símbolo Q, na fórmula geral (I), representa um átomo de azoto, o grupo aminotiadiazolilo forma o grupo iminotiadia_ zolinilo e os seus tautómeros, como se segue:

H

Os compostos de fórmula geral (I) também incluem os isó-meros de ressonância. Portanto, por exemplo, se os compostos representados pela fórmula geral (I-S), os compostos de acordo com a presente invenção incluem as estruturas seguintes de fórmulas gerais (I-S)' e (I-S)''; -1

11- %

Identicamente, os compostos de fórmula geral (I-R) devem ser considerados como incluindo aqueles isómeros de ressonância.

Além disso, a presente invenção abrange, no seu âmbito, os sais não tóxicos, aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, ésteres hidrolizáveis fisiologicamente, produtos de solvata-ção e hidratos dos diastereoisómeros colectivamente representados pela fórmula geral (I). Sais aceitáveis sob o ponto de vista far macêutico da cefalosporina de fórmula geral (I) são os sais convencionais não tóxicos e podem incluir os sais inorgânicos, por exemplo, sais de metais como os metais alcalinos, por exemplo sal de sódio, sal de potássio, etc. e sais de metais alcalino-terrosos, por exemplo, sais de cálcio, sais de magnésio; sais de amónio; sais orgânicos, por exemplo, um sal de uma amina orgânica, por exemplo, sal de trietilamina, sal de N-metilglucamina, sal de dietanolamina, sal de trietanolamina; sal de trietilamina, sal de piridina, sal de procaína, sal de picolina, sal de diciclo-hexil_ amina, sal de N,N'-dibenziletilenodiamina, sal de tris(hidroxime tilamino)-metano, sal de feniletilbenzilamina, sal de dibenziletilenodiamina; etc., sais de ácidos orgânicos carboxllicos ou sais de ácidos sulfónicos, por exemplo, formato, acetato, maleato, tar trato, metanossulfonato, benzenosulfonato, toluenossulfonato, etc.; sais de ácidos inorgânicos, por exemplo, cloridrato, bromidrato, sulfato, fosfato, etc.; sais com aminoãcidos básicos ou ácidos, por exemplo, arginina, ácido aspártico, ácido glutâmico, lisina, etc.; mais preferencialmente, os sais de metais alcalinos, sais de metais alcalino-terrosos, sais de ácidos inorgânicos, sais de ácidos orgânicos carboxílicos e sais com aminoãcidos básicos ou ácidos; e ainda mais preferencialmente, sais de sódio, sais de po tãssio, cloridratos e sulfatos.

Os sais não tóxicos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico citados anteriormente podem preparar-se mediante a reac ção dos compostos de fórmula geral (I) com um a quatro equivalen tes dos ácidos ou bases correspondentes aos sais referidos antes, na presença de um dissolvente que pode ser água ou uma mistura de água e um dissolvente miscível com água, por exemplo, metanol, eta nol, acetonitrilo, acetona, etc.

Os ésteres fisiologicamente hidrolizáveis dos compostos de fórmula geral (I) podem incluir, por exemplo, o éster metoxi-carboniloximetílico, éster 1-metoxicarboniloxi-l-etílico, éster indanílico, éster ftalidil-metoximetílico, éster pivaloiloximetí. lico, éster glixiloximetílico, éster fenilgliciloximetílico ou és^ ter 5-metil-2-oxo-l,3-dioxolan-4-ílico, e outros ésteres hidroli. záveis fisiologicamente que têm sido largamente utilizados no cam po técnico dos antibióticos de penicilina e de cefalosporina; mais preferencialmente, éster metoxicarboniloximetílico, éster 1-meto xicarboniloxi-l-etílico, éster metoximetílico ou éster pivaloilo ximetilico; e ainda com maior preferência, o éster metoxicarboni loximetílico ou o éster metoximetílico.

Estes ésteres podem preparar-se de acordo com métodos co nhecidos, por exemplo, por reacção dos compostos de fórmula geral (I) com os halogenetos de alquilo correspondentes, por exemplo, cloreto de metoximetilo, ou cloreto de metoxicarboniloximetilo,na presença de uma base, como, por exemplo, trietilamina, piridina ou carbonato de hidrogénio e sódio...

Como exemplos de produtos de cefalosporina, de fórmula ge ral (I), pode referir-se os dissolventes miscíveis em água como, por exemplo, metanol, etanol, acetona ou acetonitrilo; e, ccmmaior preferência, etanol. -1 % A presente invenção também abrange no seu âmbito as composições farmacêuticas que contêm um ou mais dos compostos de fór mula geral (I) como componentes activos, em associação com veícu los aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico e excipientes ou outros aditivos.

Os antibióticos de fórmula geral (I) da presente invenção podem ser preparados para administração sob a forma de doses uni tãrias ou de contentores multi-dose. As composições podem apresen tar várias formas tais como solução, suspensão ou emulsão em um veiculo oleoso ou aquoso, que pode conter aditivos convencionais como agentes dispersantes, agentes de suspensão, agentes estabi-lizantes, e outros. Alternativamente, o componente activo pode ser formulado em um pó seco que pode ser normalmente dissolvido numa solução aquosa de água isenta de pirogénios e esterilizada, antes da sua utilização. Os compostos de fórmula geral (I) podem também ser preparados sob a forma de supositórios contendo bases convencionais para supositórios como a manteiga de cacau ou outros glicéridos.

As composições farmacêuticas sob a forma de doses unitárias podem, de preferência, conter entre 50 a 1500 mg de ccmponen te activo, dependendo da idade e da massa corporal do doente, da natureza e gravidade da doença, etc. Em geral, tem-se mostrado vantajoso administrar o composto activo numa quantidade compreen dida entre 500 a 5000 mg por dia a fim de alcançar os resultados pretendidos, dependendo das vias e frequência de administração. No caso das vias intramuscular ou endovenosa de administração pa ra o tratamento de um humano adulto, a dose compreendida entre 150 e 3000 mg por dia considera-se suficiente, embora possa variar no caso do tratamento de infecções específicas provocadas por cer tas estirpes. -1

Se pretendido, os compostos de fórmula geral (I) podem administrar-se em associação com outros antibióticos, como por exemplo, penicilinas ou outras cefalosporinas.

Os compostos da presente invenção, como referido anterior mente, exibem potente e larga acção antibacteriana contra bactérias Gram-positivas e uma variedade de bactérias Gram-negativas, particularmente contra Pseudomonas. Também, os presentes compostos têm grande estabilidade para jj-lactamases produzidas por numerosas bactérias Gram-negativas.

Os diastereoisómeros de fórmula geral (I) podem ser produzidos por diversos métodos diferentes. Um deles consiste simplesmente em isolar os isómeros S e R por cromatografia, com um eluente, a partir de uma mistura dos isómeros.

Exemplos de eluentes que se podem utilizar na separação do processo incluem: uma mistura de tampão e um dissolvente mis-cível em água (por exemplo, metanol, acetonitrilo, álcool isopro pílico); e com maior preferência, uma mistura de tampão e acetonitrilo. 0 referido processo de isolamento pode conduzir-se nas con dições seguintes:

Eluente: Tampão/CH2CN=85/15 - 95/5(v/v) (Tampão: fosfato, pH 7,0, 0,01M)

Coluna: Coluna ODS

Detector: UV 254 nm O método preferido para a preparação dos compostos de fór mula geral (I) consiste em fazer reagir um composto de fórmula geral (II-S) ou (II-R), que podem ser colectivamente referidos co mo de fórmula geral (II), na presença de um dissolvente, com um composto de fórmula geral(III), como se segue: -1

(II-S)

NH2

(III) em que,

Ra' Rb' Rl' R2 e Q têm os significados definidos antes; n representa zero ou 1;

Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector amino; representa um átomo de hidrogénio ou um grupo de pro-tecção carboxilo;

Rç. representa um átomo de hidrogénio ou um grupo de pro-tecção carboxilo; e L representa um grupo eliminável. 0 grupo de protecção amino representado pelo símbolo citado antes, pode incluir um grupo acilo eventualmente substituí, do, aril-alquilo inferior, por exemplo, benzilo, difenilmetilo, trifenilmetilo e 4-metoxibenzilo; halogeno-alquilo inferior, por exemplo, triclorometilo ou tricloroetilo; tetra-hidropiranilo, féniJL tio. substituído, alquilideno substituído, aralquilideno substituído ou cicloalquilideno substituído. 0 grupo acilo, como grupo protector amino, pode incluir, por exemplo, um grupo alcanoílo inferior Por exemplo, formilo ou acetilo, alcoxicarbonilo C2-6' Por exemPl°' metoxicarbonilo ou etoxicarbonilo, alcano(inferior) sulfonilo, por exemplo, metanossulfonilo ou etanossulfoni lo, ou aril-alcoxi(inferior)carbonilo, por exemplo, benziloxicar bonilo, em que o grupo acilo pode conter eventualmente um ou três substituintes tais como átomos de halogéneo ou um grupo hidroxi, ciano ou nitro. Além disso, o grupo protector amino pode incluir produtos de reacção obtidos de grupos amino e silano, compostos de borano ou fosforosos. 0 grupo de protecção carboxilo representado pelos símbolos ou Rj., pode incluir, por exemplo, ésteres de alquilo infe rior (por exemplo, éster metílico e éster t-butílico), ésteres de alcenilo inferior (por exemplo, éster vinílico e éster alílico), ésteres de alcoxi(inferior)-alquilo(inferior) (por exemplo, éster metoximetílico), ésteres de alquilo inferior tioalquilo inferior (por exemplo, éster metiltiometílico, éster de halogenoalquilo in ferior (por exemplo, éster 2,2,2-tricloroetílico), ésteres aral-quílicos eventualmente substituídos (por exemplo, éster benzili- -17- -17-

co ou éster p-nitrobenzílico) ou ésteres sililicos que podem ser escolhidos após consideração das propriedades químicas dos compostos pretendidos de fórmula geral (I). 0 grupo eliminável representado pelo símbolo L na fórmula geral (III) podem incluir, por exemplo, um átomo de halogêneo tal como cloro ou bromo, um grupo alcanoiloxi inferior, como por exemplo acetoxi, um grupo alcano(inferior)sulfoniloxi, como por exemplo metanossulfoniloxi ou um grupo arenossulfoniloxi, ccmo por exemplo p-toluenossulfoniloxi, um grupo alcoxicarboniloxi e ou tros similares. A designação "Inferior" tal. como é utilizada nesta memória descritiva, por exemplo em referência a "alquilo inferior", abrange grupos com um a 6 átomos de carbono, de preferência com 1 a 4 átomos de carbono.

Na preparação dos presentes compostos de fórmula geral (I), são utilizados compostos de fórmula geral (II), de preferên cia numa quantidade entre 1 a 2 equivalentes molares com base nos compostos de fórmula geral (III).

Os grupos de protecção amino ou ácido podem ser facilmen te eliminados por qualquer um dos métodos de desprotecção convencio nais, que são conhecidos na química da cefalosporina. Por exemplo, é geralmente aplicável a hidrólise ácida ou básica ou a redução. Como outro exemplo, quando o grupo de protecção i um grupo amino, i viável submeter os compostos a uma imino-halogenação ou a uma imino-eterificação seguidas de hidrólise. Prefere-se a hidrólise ácida para eliminação de grupos tais como o grupo tri-(di)-fenil^ metilo ou o grupo alcoxicarbonilo; isto realiza-se na presença de um ácido orgânico, como por exemplo, ácido fórmico, ácido trifluo roacético ou ácido p-toluenoacético ou de um ácido inorgânico co

mo, por exemplo, o ácido clorídrico ou outros similares. A redução do Erôxido pode realizar-se de forma convencional, por exemplo, mediante a adição de iodeto de potássio ou cio reto de acetilo aos restantes, seguida da paragem da reacção com m-bissulfito de sódio. A reacção para a introdução de compostos de fórmula geral (III) na posição 3 dos compostos de fórmula geral (II) para a pre paração de compostos de fórmula geral (I), realiza-se na presença de um dissolvente como, por exemplo, a água ou de uma mistura de água e de um dissolvente miscível com a água, em que o pH da solução reaccional pode variar entre 5 e 8, mais preferencialmen te entre 6 e 7,5; e a temperatura pode variar entre 20° e 100°C, mais preferencialmente entre 60° e 80°C.

Os materiais iniciais dos compostos de fórmula geral II são interne diários conhecidos , convencionalmente utilizados para a preparação de cefalosporinas. A linha a tracejado na fórmula geral (II) representa uma ligação simples ou uma ligação dupla; e, portanto, os compostos de fórmula geral (II) podenser compostos de fórmula geral (ΙΙ-a) ou os compostos de fórmula geral (ΙΙ-b) ou as suas misturas: T?

(Il-a)

N C-C-N. S

L 9-Vr Λ2" C02R4 (Il-b) ,0 R ^ 4

N II a (0) r3nh

H n

em que, n, R&, R^, R3, r4# R^, Q e L têm os significados definidos antes.

Para estabilizar os produtos da reacção e os seus intermédios, podem-se utilizar como agentes estabilizantes um ou mais sais escolhidos no grupo constituído por iodeto de sódio, iodeto de potássio, brometo de sódio, brometo de potássio ou tiocianato de potássio. A separação e purificação dos compostos de fórmula geral (I) pode realizar-se mediante a aplicação de métodos convencionais como a recristalização, a cromatografia em coluna de gel de síli^ ca ou a cromatografia de permuta iónica.

Os exemplos seguintes ilustram a forma como os compostos de fórmula geral (I) se podem preparar.

Exemplo 1: Síntese de compostos de fórmula geral (I-S-l)

Este exemplo demonstra como um dos compostos preferidos, 7-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-ilo)-2-((S)-1-carboxiet-l-oxi-imino)--acetamido)-3-[(1,4,6-triaminopirimidin-2-ilo)-tiometil]-3-cefem -4-carboxilato, com a fórmula geral seguinte, foi sintetizado: -2

A uma solução contendo 500 mg de cloridrato de 3-acetoxi metil-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-ilo)-2-[(S)-1-carboxiet-1 -oxi-imi no) -acetamido] -3-cefem-4-carboxílico suspenso em 5 ml de água dess tilada, adicionaram-se 200 mg de 1,4,6-triamino-2-(1H)-pirimidi-notiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu-se a solução reac cional à temperatura de 70°C, enquanto se mantinha o pH entre 7/1 e 7,2, mediante a adição de uma solução aquosa de carbonato de hi drogénio e sódio. Agitou-se a solução resultante durante 4 horas, arrefeceu-se para a temperatura ambiente e ajustou-se o pH para um valor entre 3 e 3,5, com uma solução aquosa de ácido clorídri co 2N, obtendo-se um precipitado que se lavou com 5 ml de água de_s tilada após filtração. Aplicou-se o bolo que ficou no filtro a uma coluna de cromatografia rápida (coluna em aço ODS, 19 mm x x 300 mm) utilizando misturas de uma solução tampão de fosfato de amónio a pH 7 e acetonitrilo a 95:5 como eluente, para se obter 190 mg do composto em título sob a forma de um sólido branco (p. f. superior a 195°C, com decomposição). RMN: 6 (D20, NaHC03, 270MHz) 1,46 (d, 3H), 3,58 (ABq, 2H), 4,22 (ABq, 2H), 4,65 (q, 1H), 5,17 (d, 1H), 5,56 (s, 1H), 5,79 (d, 1H), 7,00 (s, 1H) . -2 ΕΝ: 611 (FAB, Μ + 1) IV(kBr, cm"1): 1771(p-lactama), 1650, 1535 UVlmaxH0(nm, £) : (220, 33957), (232, 34794), (275, 23323) , (274, 23915) 25 ο : -105,5 (c 1,0, solução aquosa de carbonato de hi^ drogénio e sódio, 0,05N)

Condições de análise de HPLC Coluna:yl(-Bondapak C-18 Detector: UV 254nm Débito: 2 ml/min Tempo de retenção: 7,2 min.

Exemplo 2: Síntese de compostos de fórmula geral (I-S-2)

Este exemplo demonstra como se sintetizou um dos compostos preferidos, 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-ilo)-2-[(S)-1-carboxiet--1-oxi-imino] -acetamido) -3- [ (4,6-diamino-l-metilpirimidin-2-ilo) --tiometil]-3-cefem-4-carboxilato, de fórmula geral

A uma solução contendo 500 mg de cloridrato do ácido de 3-acetoximetil-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-ilo)2-[(S)-1-carboxiet--1-oxi-imino]-acetamido)-3-cefem-4-carboxílico em suspensão em 5

ml de água destilada, adicionaram-se 200 mg de 4,6-diamino-l-me-til-2(1H)-pirimidinotiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu -se a solução reaccional até à temperatura de 70°C, enquanto se ajustou o pH para 7,1-7,2, mediante a adição de uma solução aquo sa de carbonato de sódio. Agitou-se a solução resultante durante 4 horas, arrefeceu-se para a temperatura ambiente e ajustou-se o pH para um valor entre 3 e 3,5, com uma solução aquosa de ácido clorídrico 2N para se obter um precipitado que se lavou com 5 ml de água destilada após filtração. 0 conteúdo do filtro foi aplicado a uma coluna de cromatografia (coluna em aço ODS, 19 nrn x 300 iffti) utilizando como eluente misturas de solução tampão de fosfato de amónio a pH 7 e acetonitrilo a 92:8, para se obterem 195 mg do com posto em título sob a forma de um sólido branco (p.f. superior a 180°C, com decomposição). RMN: & (D20, NaHC03, 270 (MHz) 1,49 (d, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,59 (ABq, 2H), 4,36 (ABq, 2H), 4,67 (q, 1H), 5,17 (d, 1H), 5,61 (s, 1H), 5,79 (d, 1H), 7,01 (s, 1H) . EN: 610 (FAB, M + 1) IV(KBr, cm-1): 1775 (^-lactama), 1635, 1535 UVÍ»maxH °(nm,£): (217, 34252), (232, 32672), (275, 23323) 25 o [OÍ]O : -124,1 (c, 1,0, solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio, 0,05N)

Exemplo 3: Síntese do composto de fórmula geral (I-S-3)

Este exemplo mostra como se sintetizou um dos compostos preferidos, 7-[(z)—2—(2-aminotiazol-4-ilo)-2[(S)-1-carboxiet-l--oxi-imino]-acetamido)-3-((4,6-diamino-l-etilpirimidin-2-ilo)-tiq metil]-3-cefem-4-carboxilato, de fórmula geral

A uma solução contendo 500 mg de cloridrato do ácido 3--acetoximetil-7- [ (7,)-2- (2-aminotiazol-4-ilo) -2- [ (S) -1-carboxiet--1-oxi-imino]-acetamido)-3-cefem-4-carboxílico suspenso em 5 ml de água destilada, adicionou-se 200 mg de 4,6-diamino-l-etil-2(lH)--pirimidinotiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu-se a mis^ tura reaccional até à temperatura de 70°C, enquanto se ajustou o pH para um valor compreendido entre 7,1 e 7,2, mediante a adição de uma solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio. A solu ção resultante agitou-se durante quatro horas, arrefeceu-se para a temperatura ambiente e ajustou-se o pH para um valor entre 3 e 3,5 com uma solução aquosa de ácido clorídrico 2N, para se obter um precipitado que se lavou com 5 ml de água destilada após filtração. 0 conteúdo do filtro foi aplicado a uma coluna de croma-tografia (coluna em aço ODS, 19 mm x 300 mm) utilizando-se como eluentes misturas de solução tampão de fosfato de amónio a pH 7 e acetonitrilo a 92:8, para se obterem 180 mg do composto em titulo sob a forma de um sólido branco (ponto de fusão superior a 193°C, com decomposição). RMN: í (D20, NaHC03, 270MHz) 1,34 (t, 3H), 1,48 (d, 3H), 3,59 (ABq, 2H), 4,04 (q, 2H), 4,34 (ABq, 2H), 4,67 (d, 1H), 5,15 (d, 1H), -24- -24- / ι vr 5,58 (s, 1H), 5,79 (d, 1H), 7,01 (s, 1H) . EN: 624 (FAB, M + 1) IV(KBr, cm ^) : 1775 (j^-iactama) , 1640, 1530. UV;iniaxH °(nm,£) : (220, 34648), (234, 32700), (276, 22620) [CQ β25: -110,3° (c, 1,0, solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio, 0,05N)

Exemplo 4; Síntese de um composto de fórmula geral (I-S-4)

Este exemplo demonstra como se sintetizou um dos compostos preferidos, 7[(Zj-2-(2-aminotiazol-4-ilo)-2-[(S)-1-carboxiet -1-oxi-imino] -acetamido) -3- [ (4,6-diamino-l-propilpirimidin-2-ilo)--tiometil]-3-cefem-4-carboxilato, de fórmula geral

(I-S-4) A uma solução contendo 500 mg de cloridrato do ácido 3--acetoximetil-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-ilo)-2-[(S)-1-carboxiet--1-etoxi-imino]-acetamido)-3-cefem-4-carboxilico suspensa em 5 ml de água destilada, adicionaram-se 200 mg de 4,6-diamino-l-propil. -2(1H)-pirimidinotiona e 800 mg de iodeto de potássio.

Aqueceu-se a solução reaccional à temperatura de 70°C, ajustando-se o pH para um valor entre 7,1 e 7,2, mediante a adição de uma solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio. A

A λ. % solução resultante foi agitada durante 4 horas, arrefecida para a temperatura ambiente e ajustou-se o pH para um valor entre 3 e 3,5, com uma solução aquosa de ácido clorídrico 2N, para se obter um precipitado que se lavou com 5 ml de água destilada após filtração. 0 conteúdo do filtro foi aplicado a uma coluna de croma-tografia (coluna em aço ODS, 19 mm x 300 mm) utilizando-se como eluentes misturas de solução tampão de fosfato de amónio de pH 7 e acetonitrilo a 90:10, para se obterem 150 mg de composto em tí tulo sob a forma de um sólido branco (ponto de fusão superior a 197°C, com decomposição). RMN: 6 (D20, NaHC03, 270 MHz) 0,98 (t, 3H), 1,48 (d, 3H), 1,77 (m, 2H), 3,61 (ABq, 2H), 3,97 (t, 2H), 4,38 (ABq, 2H), 4,68 (q, 1H), 5,19 (d, 1H), 5,60 (d, 1H), 5,81 (d, 1H), 7,01 (s, 1H) . EN: 638 (FAB, M + 1) IV(KBr, cm *) : 1778 (^-lactama) , 1645, 1525 UV^maxH °(nm,£) : (222, 37377), (232, 35410), (276, 23831).

[#1^25: -105,4° (c, 1,0, solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio, 0,05N)

Exemplo 5: Síntese do composto de fórmula geral (I-S-5)

Este exemplo mostra como se sintetizou um dos compostos preferidos, 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-ilo)-2-[(S)-1-carboxiet-l--oxi-imino]-acetamido)-3-((4,6-diamino-l-fenilpirimidin-2-ilo)--tiometil]-3-cefem-4-carboxilato, de fórmula geral

A uma solução contendo 500 mg do cloridrato do ácido 3--acetoximetil-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-ilo)-2-[(S)-1-carboxiet--1-oxi-imino]-acetamido)-3-cefem-4-carboxílico, suspenso em 5 ml de água destilada, adicionaram-se 200 mg de 4,6-diamino-l-fenil--2(1H)-pirimidinotiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu-se a solução reaccional até à temperatura de 70°C, ajustando-se opH para um valor entre 7,1 e 7,2 mediante a adição de uma solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sédio. Agitou-se a solução re sultante durante 4 horas, arrefeceu-se para a temperatura ambien te e corrigiu-se o pH para um valor entre 3 e 3,5 com uma solução aquosa de ácido clorídrico 2N, para se obter um precipitado que se lavou com 5 ml de água destilada, após filtração. Aplicou-se o conteúdo do filtro a uma coluna cromatográfica em aço ODS 19 mm x x 300 mm, utilizando-se como eluentes misturas de solução tampão de fosfato de amónio de pH 7 e acetonitrilo a 87:13 para se obte rem 120 mg do composto em título sob a forma de um sólido branco (ponto de fusão superior a 190 C, com decomposição). RMN: $ (D20, NaHC03, 270 MHz) 1,48 (d, 3H), 3,48 (ABq, 2H), 4,25 (ABq, 2H), 4,67 (q, 1H), 5,14 (d, 1H), 5,69 (s, 1H), 5,79 (d, 1H), 27- 7,00 (s, 1H), 7,43-7,81 (m, 5H). EN: 672 (FAB, M + 1) IV(KBr, cm-1): 1777 (^-lactama), 1650, 1515 UVjlmax11 °(nm,£) : (221, 31548), (235, 29524),(273, 18827). [o(Jd25: -8,1° (c, 1,0 solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio, 0,05N)

Exemplo 6: Síntese do composto de fórmula geral (I-S-6)

Este exemplo demonstra como se sintetizou um dos compostos preferidos, 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(S)-1-carboxiet -1-oxi-imino]-acetamido]-3-[(4,6-diamino-l,5-dimetilpirimidin-2--ilo)tiometil]-3-cefem~4-carboxilato, de fórmula geral

(I-S-6) A uma solução contendo 500 mg de cloridrato do ácido 3--acetoximetil-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(S)-1-carboxiet--1-oxi-imino]-acetamido]-3-cefem-4-carboxllico suspenso em 5 ml de água destilada, adicionaram-se 200 mg de 4,6-diamino-l,5-dime til-2(1H)-pirimidinotiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu -se a solução reaccional para a temperatura de 70°C, mantendo-se o pH entre 7,1 e 7,2 mediante a adição de uma solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio. Agitou-se a solução resultante /-28- durante 4 horas, arrefeceu-se para a temperatura ambiente e ajus^ tou-se o pH para um valor entre 3 e 3,5 com uma solução aquosa de ácido clorídrico 2N para se obter um precipitado que se lavou com 5 ml de água destilada após filtração. 0 conteúdo do filtro apli cou-se a uma coluna cromatogrãfica (coluna de aço ODS, 19 um x x300 mm) utilizando-se como eluentes misturas de solução tampão de potássio de amónio a pH 7 e acetonitrilo a 91:9, para se obte rem 210 mg do composto em título sob a forma de um sólido branco (ponto de fusão superior a 183°C, com decomposição). RMN: & (D20, NaHC03, 270 MHz) 1,48 (d, 3H), 1,92 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,60 (ABq, 2H), 4,38 (ABq, 2H), 4,69 (q, 1H), 5,17 (d, 1H), 5,81 (s, 1H), 7,03 (s, 1H). EN: 672 (FAB, M + 1) IV(KBr, cm-1): 1765 (p-lactama), 1645, 1560 UV^rnax0 °(nm,gj: (203, 34313), (232, 32588), (281, 24089). [ef]^25: -121,4° (c 1,0, solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio, 0,05N).

Exemplo 7: Síntese do composto de fórmula geral (I-S-7)

Este exemplo demonstra' como se sintetizou um dos compostos preferidos, 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(S)-1-carboxiet -1-oxi-imino]-acetamido]-3-[(5-metil-l,4,6-triaminopirimidin-2--ilo)-tiometil]-3-cefem-4-carboxilato, de fórmula geral -2

(I-S-7) A uma solução contendo 500 mg de cloridrato do ácido 3--acetoximetil-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(S)-l-carboxiet--1-oxi-imino]-acetamido]-3-cefem-4-carboxílico, suspenso em 5 ml de água destilada, adicionaram-se 200 mg de 5-metil-l,4,6-triami no-2(1H)-pirimidinotiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu -se a solução reaccional até à temperatura de 70°C, ajustando-se o pH para 7,1 a 7,2 mediante a adição de uma solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio. Agitou-se a solução resultante durante 4 horas, arrefeceu-se para a temperatura ambiente e ajus^ tou-se o pH para um valor entre 3 e 3,5 com uma solução aquosa de ácido clorídrico 2N para se obter um precipitado que se lavou com 5 ml de água destilada após filtração. 0 conteúdo do filtro foi aplicado a uma coluna de cromatografia (coluna em aço QDS, 19 mm x x 300 mm) utilizando-se misturas de solução tampão de fosfato de amónia a pH 7 e acetonitrilo a 93:7 como eluente, para se obterem 220 mg do composto em título sob a forma de um sólido branco (pon to de fusão superior a 181°C, com decomposição). RMN: b (D20, NaHC03, 270 MHz) 1,48 (d, 3H), 1, ,85 (s, 3H), 3, 58 (ABq, 2H), 4,32 (ABq, 2H) , 4,67 (q. 1H), 5,18 (d, 1H) , 5,77 (d, 1H) , 6,94 (s, 1H) . 0- ΕΝ: 625 (FAB, Μ + 1) IV(KBr, cm-1): 1770 (^-lactama) , 1635, 1565 UV,2maxH °(nm,£.): (204, 35861), (232, 35288), (281, 24807). [d]^25i -118,0°C (c 1,0, solução de carbonato de hidrogé nio e sódio, 0,05N)

Exemplo 8: Síntese do composto de fórmula geral (I-R-l)

Este exemplo demonstra como se sintetizou um dos compostos isoméricos, 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(R)-1-carboxiet -1-oxi-imino]-acetamido]-3-[(l,4,6-triaminopirimidin-2-ilo)-tio-metil]-3-cefem-4-carboxilato, de fórmula geral

(I-R-l) A uma solução contendo 500 mg de cloridrato do ácido 3--acetoximetil-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-ilo)-2-[(R)-1-carboxiet--1-oxi-imino]-acetamido]-3-cefem-4-carboxílico, suspenso em 5 ml de água destilada, adicionaram-se 200 mg de l,4,6-triamino-2(lH)--pirimidinotiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu-se a so luçao reaccional até à temperatura de 70°C, enquanto o pH foi ajus^ tado para um valor entre 7,1 e 7,2 mediante a adição de uma solu ção aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio. Agitou-se a solução resultante durante 4 horas, arrefeceu-se até à temperatura am biente e ajustou-se o pH para um valor entre 3 e 3,5 com uma solu -31 ção aquosa de ácido clorídrico 2N, para se obter um precipitado que se lavou com 5 ml de água destilada após filtração. 0 conteú do do filtro aplicou-se a uma coluna cromatográfica (coluna em aço ODS 19 mm x 300 mm) utilizando-se misturas de uma solução tampão de fosfato de amónia a pH 7 e acetonitrilo a 95:5, como eluente, para se obterem 180 mg do composto em título sob a forma de um só lido branco (ponto de fusão superior a 190 C, com decomposição). RMN: è (D2°, NaHC03, 270 MHz) 1,46 (d, 3H), 3,58 (ABq, 2H), 4,22 (ABq, 2H), 4,65 (q, 1H) , 5,17 (d, 1H) , 5,56 (s, 1H) , 5,71 (d, 1H) , 7,00 (s, 1H). EN: 611 (FAB, M + 1) IV(KBr, cm ^): 1772 (p-lactama), 1650, 1530 UV^max11 °(nm,£) : (218, 32713), (232, 31842),(275, 21786). [e(]D25: -48,7° (c 1,0, solução aquosa de carbonato de hl drogénio e sódio 0,05N)

Condições de análise de HPLC

detector: UV 254 nm débito: 2 ml/min tempo de retenção: 11,5 min

Exemplo 9: Síntese do composto de fórmula geral (I-R-2)

Este exemplo demonstra como se sintetizou um dos compostos isoméricos, 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(R)-1-carboxiet -1-oxi-imino]-acetamido]-3-[(4,6-diamino-l-metilpirimidin-2-ilo)--tiometil]-3-cefem-4-carboxilato, de fórmula geral

A uma solução contendo 500 mg de cloridrato do ácido 3--acetoximetil-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-ilo)-2-[(R)-1-carboxiet--1-oxi-imino]-acetamido]-3-cefem-4-carboxílico, suspenso em 5 ml de água destilada, adicionaram-se 200 mg de 4,6-diamino-l-metil--2(1H)-pirimidiniotiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu--se a solução reaccional até à temperatura de 70°C, mantendo-se o pH entre 7,1 e 7,2 mediante a adição de uma solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio. Agitou-se a solução resultante durante 4 horas, arrefeceu-se para a temperatura ambiente e aju£3 tou-se o pH para um valor entre 3 e 3,5 com uma solução aquosa de ácido clorídrico 2N para se obter um precipitado que se lavou com 5 ml de água destilada após filtração. Aplicou-se o conteúdo do filtro a uma coluna cromatogrãfica (coluna em aço ODS, 19 mm x x 300 mm) utilizando-se misturas de solução tampão de fosfato de amó nia de pH 7 e acetonitrilo a 92:8, como eluente, para se obterem 195 mg do composto em título sob a forma de um sólido branco (pon to de fusão superior a 182°C, com decomposição). RMN: S (D20, NaHC03, 270 MHz) 1,48 (d, 3H), 3,53 (s, 3H), 3,59 (ABq, 2H), 4,36 (ABq, 2H), 4,67 (q, 1H), 5,17 (d, 1H), 5,61 (s,lH), 5,73 (d, 1H), 7,01 (s, 1H). -33

ΕΝ: 610 (FAB, Μ + 1) IV (KBr, cm"1): 1775 (j*-lactama) , 1635, 1535.

Exemplo 10: Sintese do composto de fórmula geral (I-R-3)

Este exemplo demonstra como se sintetizou um dos compostos isoméricos, 7- [ (Z)-2- (2-aminotiazol~4-ilo) -2- [ (R)-l-carboxiet--1-oxi-imino]-acetamido]-3-[(4,6-diamino-l-etilpirimidin-2-ilo)--tiometil]-3-cefem-4-carboxilato, de fórmula geral

A uma solução contendo 500 mg de cloridrato do ácido 3--acetoximetil-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-ilo)-2-[(R)-1-carboxiet--l-oxi-imino]-acetamido]-3-cefem-4-carboxílico, suspenso em 5 ml de água destilada, foram adicionados 200 mg de 4,6-diamono-l-eti]. -2(1H)-pirimidinotiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu-se a solução reaccional até à temperatura de 70°C enquanto o pH foi ajustado para um valor entre 7,1 e 7,2 com a adição de uma solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio. Agitou-se a solução resultante durante 4 horas, arrefeceu-se para a temperatura ambiente e corrigiu-se o pH para um valor entre 3 e 3,5 com uma solução aquosa de ácido clorídrico 2N, para se obter um precipitado que se lavou com 5 ml de água destilada após filtração. ApljL

cou-se o conteúdo do filtro a uma coluna cromatográfica (coluna em aço ODS, 19 mm x 300 mm) utilizando-se misturas de solução tam pão de fosfato de amónia a pH 7 e acetonitrilo a 92:8, como elu-ente, para se obterem 180 mg do composto em título sob a forma de um sólido branco (ponto de fusão superior a 191°C, com decomposição) . RMN: & (D20, NaHC03, 270 MHz) 1,34 (t, 3H), 1,48 (d, 3H), 3,59 (ABq, 2H), 4,04 (q, 2H), 4,34 (ABq, 2H), 4,67 (q, 1H), 5,15 (d, 1H), 5,58 (s, 1H), 5,71 (d, 1H), 7,02 (s, 1H). EN: 624 (FAB, M + 1) IV(KBr, cm”^): 1775 (â-lactama), 1640, 1530.

Exemplo 11: Síntese do composto de fórmula geral (I-R-4)

Este exemplo demonstra como se sintetizou um dos compostos isoméricos, 7- [ (z) -2- (2-aminotiazol-4-ilo) -2- [ (R)-1-carboxiet--1-oxi-imino] -acetamido] -3- [ (4,6-diamino-l-propilpirimidin-2-ilo)--tiometil]-3-cefem-4-carboxilato, de fórmula geral

(I-R-4) A uma solução contendo 500 mg de cloridrato do ácido 3--acetoximetil-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-ilo)-2-[(R)-1-carboxiet- -3

-1-oxi-imino]-acetamido]-3-cefem-4-carboxílico, suspenso em 5 ml de água destilada, adicionou-se 200 mg de 4,6-diamino-l-propil--2(1H)-pirimidinotiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu-se a solução reaccional até à temperatura de 70°C, enquanto o pH foi ajustado para um valor entre 7,1 e 7,2 mediante a adição de uma solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio. Agitou-se a so lução resultante durante 4 horas, arrefeceu-se para a temperatura ambiente e ajustou-se o pH para um valor entre 3 e 3,5 com uma solução aquosa de ácido clorídrico 2N, para se obter um precipitado que se lavou com 5 ml de água destilada após filtração. O con teúdo do filtro aplicou-se a uma coluna cromatogrãfica (coluna em aço ODS, 19 mm x 300 mm) utilizando misturas de solução tampão de fosfato de amónia a pH 7 e acetonitrilo a 90:10 como eluente, pa ra se obterem 150 mg do composto em título sob a forma de um sólido branco (ponto de fusão superior a 193°C, com decomposição). RMN: $ (D20, NaHC03, 270 MHz) 0,98 (t, 3H), 1,48 (q, 3H), 1,77 (m, 2H), 3,61 (ABq, 2H), 3,97 (t, 2H), 4,38 (ABq, 2H), 4,68 (q, 1H), 5,19 (d, 1H), 5,60 (s, 1H), 5,73 (s, 1H), 7,01 (s, 1H) . EN: 638 (FAB, M + 1) IV(KBr, cm-1): 1778 (ô-lactama), 1645, 1525.

Exemplo 12: Síntese do composto de fórmula geral (I-R-5)

Este exemplo demonstra como se sintetizou um dos compostos isoméricos, 7- [ (Z) -2- (2-aminotiazol-4-ilo) -2- [ (R)-l-carboxiet--1-oxi-imino]-acetamido]-3-[(4,6-diamino-l-fenilpirimidin-2-ilo)--tiometil]-3-cefem-4-carboxilato, de fórmula geral -3

A uma solução contendo 500 mg do cloridrato do ácido 3--acetoximetil-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(R)-1-carboxiet--1-oxi-imino]-acetamido]-3-cefem-4-carboxílico, suspenso em 5 ml de água destilada, adicionam-se 200 mg de 4,6-diamino-l-fenil--2(1H)-pirimidinotiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu--se a solução reaccional até à temperatura de 70°C, enquanto opH foi ajustado para um valor entre 7,1 e 7,2 mediante a adição de uma solução aquosa de carbonato de iodeto e sódio. Agitou-se aso lução resultante durante 4 horas, arrefeceu-se para a temperatura ambiente e ajustou-se o pH para um valor compreendido entre 3 e 3,5 com uma solução aquosa de ácido clorídrico 2N para produzir um precipitado que se lavou com 5 ml de água destilada após filtração. O conteúdo do filtro foi aplicado a uma coluna de croma-tografia preparativa (coluna em aço ODS, 19 mm x 300 mm) utilizan do-se misturas de solução tampão de fosfato de amónia de pH 7 e acetonitrilo a 87:13, como eluente, para se obterem 120 mg do com posto em título sob a forma de um sólido branco (ponto de fusão superior a 187°C, com decomposição).

RMN: & (D20, NaHCO^, 270 MHz) 1,48 (d, 3H), 3,48 (ABq, 3H), 4,25 (ABq, 2H), 4,67 (q, 1H), 5,14 (d, 1H), 5,69 (s, 1H), 5,71 (d, 1H), 7,00 (d, 1H), 7,43-7,81 (m, 5H). EN: 672 (FAB, M + 1) IV(KBr, cm"1): 1777 (ft-lactama), 1650, 1515.

Exemplo 13: Síntese do composto de fórmula geral (I-R-6)

Este exemplo demonstra como se sintetizou um dos compostos isoméricos, 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(R)-1-carboxiet -1-oxi-imino]-acetamido]-3-[(4,6-diamino-l,5-dimetilpirimidin-2--ilo)-tiometil)-3-cefem-4-carboxilato, de fórmula geral

A uma solução contendo 500 mg do cloridrato do ácido 3--acetoximetil-7-[(Z)—2—(2-aminotiazol-4-il)-2-[(R)-1-carboxiet--1-oxi-imino]-acetamido]-3-cefem-4-carboxílico, suspenso em 5 ml de água destilada, adicionaranHSe 200 mg de 4,6-diamino-l,5-dime-til-2(1H)-pirimidinotiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu -se a solução reaccional até à temperatura de 70°C, enquanto opH foi ajustado para um valor entre 7,1 e 7,2 mediante a adição de uma solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio. Agitou-se a solução resultante durante 4 horas, arrefeceu-se até à tempera

tura ambiente e ajustou-se o pH para um valor entre 3 e 3,5 com uma solução aquosa de ácido clorídrico 2N para se obterem precipitados que se lavaram com 5 ml de água destilada, após filtração. Aplicou-se o conteúdo do filtro a uma coluna de cromatogra-fia (coluna em aço ODS, 19 mm x 300 mm) utilizando-se misturas de solução tampão de fosfato de amónia de pH 7 e acetonitrilo a 91:9, como eluente, para se obterem 210 mg do composto em título sob a forma de um sólido branco (ponto de fusão superior a 179°C, com decomposição) . RMN: S (D20, NaHC03, 270 MHz) 1,48 (d, 3H), 1,92 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,60 (ABq 2H), 4,38 (ABq, 2H), 4,69 (q, 1H), 5,17 (d, 1H), 5,77 (d, 1H), 7,03 (s, 1H) . EN: 624 (FAB, M + 1) t IV(KBr, cm-1): 1765 (fi-lactama), 1645, 1560.

Exemplo 14: Síntese do composto de fórmula geral (I-R-7)

Este exemplo demonstra como se sintetizou um dos compostos isomêricos, 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(R)-1-carboxiet -1-oxi-imino]-acetamido]-3-((5-metil-l,4,6-triaminopirimidin-2--il)-tiometil)-3-cefem-4-carboxílico, de fórmula geral

NH 2 II H

CO 2 NH 2 (I-R-7) A uma solução contendo 500 mg do cloridrato do ácido 3--acetoximetil-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(R)-1-carboxiet--1-oxi-imino]-acetamido]-3-cefem-4-carboxílico, suspenso em 5 ml de água destilada, adicionaram-se 200 mg de 5-metil-l,4,6-triami no-2(1H)-pirimidinotiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu -se a solução reaccional até ã temperatura de 70°C, enquanto opH foi ajustado para um valor entre 7,1 e 7,2 mediante a adição de uma solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio. A solução resultante foi agitada durante 4 horas, arrefecida para a temperatura ambiente e o pH foi ajustado para um valor entre 3 e 3,5 com uma solução aquosa de ácido clorídrico 2N, para se obter um precipitado que se lavou com 5 ml de água destilada, após filtra ção. Aplicou-se o conteúdo do filtro a uma coluna de cromatogra-fia (coluna de aço ODS, 19 mm x 300 mm) utilizando-se como eluen tes misturas de solução tampão de fosfato de amónia de pH 7 e ace tonitrilo a 93:7, para se obterem 220 mg do composto em título sob a forma de um sólido branco (ponto de fusão superior a 175°C, com decomposição). RMN: $ (D20, NaHC03, 270 MHz) 1,48 (d, 3H) , 1,85 (s, 3H), 3,58 (ABq, 2H), 4,32 (ABq, 2H) , 4,67 (q, 1H) , 5,18 (d, 1H) , 5,71 (d, 1H) , 6,94 (s, 1H). EN: 625 (FAB, M + 1) IV(KBr, cm-1): 1770 (^-lactama), 1635, 1565.

Exemplo 15: Síntese e isolamento de compostos de fórmula geral (I-S-l) e (I-R-l) a partir de uma sua mistura

Como referido anteriormente, os diastereoisómeros S e R podem obter-se a partir de uma sua mistura. Deste modo, este exernpb -40

tenta demonstrar como uma mistura foi primeiramente sintetizada e, em seguida, separada nos seus isómeros com as fórmulas de estrutura (l-s-1) e (i-R-1), respectivamente, como descrito nos exemplos de 1 a 8, citados antes. A uma solução contendo 500 mg do cloridrato do ácido 3--acetoximetil-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(R,S)-1-carboxiet -1-oxi-imino]-acetamido]-3-cefem-4-carboxílico, suspenso em 5 ml de água destilada, adicionaram-se 200 mg de 1,4,6-triamino-2 (1H)--pirimidinotiona e 800 mg de iodeto de potássio. Aqueceu-se a mis tura reaccional até à temperatura de 70°C, enquanto se ajustou o pH para um valor entre 7,1 e 7,2 mediante a adição de uma solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio. Agitou-se a solução resultante durante 4 horas, arrefeu-se para a temperatura am biente e ajustou-se o pH para um valor entre 3 e 3,5 com uma solução aquosa de ácido clorídrico 2N, para produzir um precipitado que se lavou com 5 ml de água destilada, após filtração.Q con teúdo do filtro foi aplicado a uma coluna de cromatografia (colu na em aço ODS, 19 mm x 300 mm) utilizando-se misturas de solução tampão de fosfato de amónia de pH 7 e acetonitrilo a 95:5, como eluente, para se obter 90 mg e 80 mg dos compostos em título de fórmula geral (I-S-l) e (I-R-l), respectivamente, sob a forma de sólidos brancos.

Os compostos sintetizados nos exemplos de 1 a 14 citados anteriormente, estão listados no Quadro 1 sob a forma de resumo. R1 e R2, representados no Quadro 1, têm os mesmos significados da dos para a fórmula geral (I). -f41-

Quadro 1. Resumo dos Compostos sintetizados nos exemplos de 1 a 14 composto R1 r2 I-S-l nh2 H I-S-2 CH3 H I-S-3 CH2CH3 H I-S-4 CH2eH2eH3 H I-S-5 fenil H I-S-6 CH3 ch3 r-~ 1 co 1 H nh2 CH3 I-R-l NH2 H H 1 fd 1 to ch3 H I-R-3 CH2CH3 H I-R-4 ch2ch2ch3 H I-R-5 fenil H I-R-6 CH3 CH3 I-R-7 NH2 CH3

As cefalosporinas de fórmula geral (I) da presente invenção os seus sais não tóxicos, ésteres, produtos de solvataçao e hi-dratos, tal como mencionado anteriormente, apresentam acção antjL bacteriana potente sobre uma grande variedade de organismos micro bianos patogénicos gerais, incluindo as bactérias Gram-negativas e Gram-positivas; e, portanto, sã especialmente úteis na terapêu tica para o tratamento de infecções bacterianas em seres humanos e animais. A fim de ilustrar a sua eficácia surpreendentemente supe rior, determinaram-se as concentrações inibidoras mínimas (CIM) 42-> dos 14 compostos sintetizados nos exemplos de 1 a 14 sobre estir pes padrão e comparou-se com certos enzimas de fórmula (C), que se utilizou como composto de controlo. Estes valores das concentrações inibidoras mínimas foram obtidos utilizando um método de diluição dupla: isto é, duas séries de diluição de cada composto ensaiado, preparadas e dispersas em meio de agar Muller-Hinton; 7 inocularam-se 2 jjlI da estirpe padrao do ensaio com 10 UCF (Unidades Formadoras de Colónias) por ml; e estas foram incubadas à temperatura de 37°C durante 20 horas.Os resultados do ensaio de determinação das concentrações inibidoras mínimas estão apresentados no Quadro 2.

Além disso, realizaram-se ensaios de toxicidade aguda pa ra os 14 compostos com DL^-q por administração endovenosa de cada um dos compostos ensaiados em quantidades variáveis de uma forma gradual em cinco murganhos ICR (com 5 semanas), que foram observados durante 14 dias. Os resultados apresentam-se na última coluna do Quadro 2.

Como se pode observar no Quadro 2, os diastereoisómeros da presente invenção, particularmente os isõmeros S, exibiram e& cácia antibacteriana inesperada sobre um largo espectro de estir pes.

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Quadro 2. - Actividade Antibacteriana e de Toxicidade (cont.

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Quadro 2.(Continuação)

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Além dos ensaios in vitro descritos anteriormente, realj. zaram-se ensaios de absorção in vivo para dois compostos seleccio nados de fórmulas gerais (I-S-l) e (I-R-l), conjuntamente com Cefia dizima, mediante a administração endovenosa, de uma dose de 20 mg/Kg, de cada um destes dois compostos, em ratos machos SD com peso entre 220 e 340 g; retiraram-se amostras da veia femural dos ratos de hora a hora após a administração, que se analisaram atra vés de um bioensaio ou do método de cavidades de agar. Utilizaram -se cerca de 10 a 15 ratos para cada um dos compostos.

Quadro 3. Teste de absorção in vivo resultados (Concentração Plas-mática; parâmetros farmacocinéticos)

Tempo de Amostragem (min) Composto I-S-l I-R-l CTZ Plasma Cone. 1 147,3 170,4 135 (pg/ml) 2,5 101,6 101,6 94 5 72,5 76,9 71 10 57,3 57,0 50 20 37,0 39,1 26 40 19,6 17,7 10 60 11,2 10,1 4,7 120 3,1 2,5 1,6 180 1,5 0,7 - 4

Quadro 3 (Continuação)

Exemplo de C Composto Amostragem (min) I-S-l I-R-l CTZ T 1/2 (p() (min) 7/6 4,7 5 T 1/1 (p) (min) 37", 5 30 20 Parâmetro ACU (^ig. min/ml) Recuperação uri- 2861 2750 1683 nária (%) 93 91 -

Notas: (1) Modelo de dois compartimentos; (2) Dose: 20mg/kg (3) Animal testado: murganhos macro (220-340 G) A partir dos resultados apresentados nos Quadros 2 e 3, pode facilmente afirmar-se que os novos compostos da presente in venção, especialmente os isomeros £5, possuem potência antibacte-riana de largo espectro surpreendentemente superior e excelentes características de absorção/farmacocinéticas.

Claims (12)

1. -49- REIVINDICAgÕES 1.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral

   na qual R^ representa um grupo alquilo C^_^, alcenilo C^_^, ciclo-alquilo C^_^, amino comportando, eventualmente, -50- / como substituinte, um grupo alquilo ou fenilo comportando, eventualmente, dois ou mais substituin-tes escolhidos entre átomos de halogéneo ou grupos alquilo C.^, alcoxi ou hidroxi nas posições 2-, 4- ou 6-; K.2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C.^; Ra e R^, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C^_^; ® Q representa um átomo de azoto ou um grupo CH, e dos seus sais não tóxicos, ésteres fisiologicamente hidrolisáveis e hidratos e produtos de solvatação aceitáveis em farmácia, caracte rizado pelo facto de se fazer reagir um composto de fórmula geral

   (Π-S) na qual Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector do radical amino; R^ e R_ representam, cada um, um átomo de hidrogénio

   ou um grupo protector do radical carboxilo; L representa um grupo eliminável; e n representa zero ou o número inteiro 1, na presença de um dissolvente, com um composto de fórmula geral

   (III) na qual R^ e Rj têm os significados definidos an£es.
2. 2. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a prepa ração de compostos de fórmula geral I-S na qual representa um grupo alquilo alcenilo ou amino; R£ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo Ra e Sb’ ^uô ^evem ser diferentes um do outro, representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C^_^j e Q representa um grupo CH, caracteri-zado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
3. 3. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I-S na qual R1 representa -52-.

   um grupo metilo, etilo ou amino; R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo; Ra e iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo; e Q representa um grupo CH, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
4. 4. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(S)-l-carboxiet-l--oxiimino] acetamido-3-[(l,4>6-triaminopirimidínio-2-il) tiometil ]--3-cefem-4-carboxilato, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
5. 5. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(S)-l-carboxiet-l--oxiimino]acetamido-3- [ (4,6-diamino-l-metilpir imidinio-2-il) tiometil] --3-cefem-4-carboxilato, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
6. 6. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(S)-l-carboxiet-l--oxiimino]acetamido-3-[(4,6-diamino-l-etilpirimidínio-2-il)tiometil]· -3-cefem-4-carboxilato, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
7. 7. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(S)-l-carboxiet-l-

   -oxiimino]acetamido-3- [(4,6-diamino-l- propilpirimidínio-2-il)tiometi -3-cefem-4-carboxilato, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
8. 8. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(S)-l-carboxiet-l--oxiimino]acetamido-3-[(4,6-diamino-l-fenilpirimidínio-2-il)tiometd -3-cefem-4-carboxilato, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
9. 9. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(S)-l-carboxiet-l--oxiimino]acetamido-3- [ (4 ·, 6-d*iamino-l ,5-dimetilpirimidínio-2-il) tiometil]-3-cefem-4-carboxilato, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
10. 10. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-[(S)-l-carboxiet-l--oxiimino]acetamido-3-[(5-metil-l,4-6- triaminopirimidínio-2--iDtiometil]- 3-cefem-4-carboxilato, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
11. 11.- Processo para a separação de compostos de fórmulas gerais

    Η

    R2 ‘NHt α-s). e H h-T-H HaH—^S,Q 0 ¥ /^C02«

    C0£

    «2 HH, (I-R) em que R^> ^2’ ^a’ e Q tem os significados definidos na reivindicação 1, sob a forma de uma mistura, caracterizado pelo facto de se proceder a uma cromatografia utilizando um agente de eluição apropriado.
12. 12.- Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo facto de se utilizar como agente de eluição uma mistura de um tampão de fosfato de amónio e de acetonitrilo, 'Isente Oficial da Propriedade If.desrr.oi