PT98371B - Processo para a preparacao de derivados 6-alcoxi de arabinofuranosil-guanina e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

DA

PATENTE DE INVENÇÃO

N.° 98 371

REQUERENTE: THE WELLCOME FOUNDATION LIMITED, britânica, com sede em Unicom House, 160 Euston Road, London NW1 2BP, Inglaterra.

EPÍGRAFE:PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS 6-ALCOXI DE ARABINOFURANOSIL GUANINA E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM

INVENTORES: THOMAS ANTHONY KRENITSKY, DEVRON RANDOLPH AVERETT, JEFFREY DOUGLAS WILSON, ALLAN RAY MOORMAN, GEORGE WALTER KOSZALKA, STANLEY DAWES CHAMBERLAIN, DAVID PORTER e GERALD WOLBERG.

Reivindicação do direito de prioridade ao abrigo do artigo 4.° da Convenção de Paris de 20 de Março de 1883.

Grã-Bretanha em 19 de Julho de 1990, sob ο N2. 9015914.6.

INPI. MOD. 113 RF 16732

Descrição referente à patente de invenção de THE WELLCOME FOUNDATION LIMITED, britânica, industrial e comercial, com sede em Unicom House, 160 Euston Road, London NW1 2BP, Inglaterra, (inventores: THOMAS ANTHONY KRENITSKY, DEVRON RANDOLPH AVERETT, JEFFREY DOUGLAS WILSON, ALLAN RAY MOORMAN, GEORGE WALTER KOSZALKA, STANLEY DAWES CHAMBERLAIN DAVID PORTER E GERALD WOLBERG, residentes nos Estados Unidos da América), para PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS 6-ALCQXI

DE ARABINOFURANOSIL-GUANINA E DE

COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS

CONTÊM.

Descrição

A presente invenção refere-se a actividades antitumor e imunomoldurador de certos derivados de arabinofuranosilo purina.

Foi referido na literatura (Blood, 61, (1983), 660;

J. Clin. Invest., 74 (1984), 951 e Câncer Research, 45, (1985), 1008) que a arabinofuranosilo guanina (ara G) inibe selectivamente o crescimento de células T comparadas com células B e possui uma actividade citotóxica selectiva de células leucémicas T. A ara G não é significativamente degradada pela purina nucleósido fosforilase (PNP) humana e foi proposta como agente quimioterapêutico ou imunosupreeeivo putativo.

Pedido da Patente Europeia No. 294114 refere entre

E.I. _

outros compostos com a fórmula (I)

's«4 na qual R é um grupo alcoxi (1-5C) (por exemplo metoxi) ou um grupo amino que é mono- ou di-substituído com alquilo(1-5C) (por exemplo metilo) e os seus derivados fisiologicamente aceitáveis para o tratamento ou profilaxia de infecções virais humanas causadas por alguns vírus herpes. Os ésteres farmaceutieamente aceitáveis dos compostos com a fórmula (I) são preferidos dado que proporcionam altos níveis do composto com a fórmula (I) após a administração oral.

Foi agora verificado que os compostos com a fórmula (I) em que R é um grupo alcoxi(1-5C) e os seus ésteres farmaceutieamente aceitáveis são agentes anti-tumor úteis, e, em particular, são úteis no tratamento dos problemas linfoproliferativos de células T. Eles são assim úteis no tratamento de leucemia linfócita, linfoma maligno, doenças autoimunes (por exemplo artrite reumatóide, esclerose múltipla lupus eritematoso sistémico e do tipo 1, ou diabetes mellitus dependente da insulina) e como imunomoduladores.

Desta forma, a presente invenção proporciona a utilização de um composto com a fórmula (I) em que R é um grupo alcoxi (1-5C), ou um éster farmaceuticamente aceitável, para a preparação de um medicamento para a terapia anti-tumor.

Num outro aspecto, a presente invenção refere um processo para o controlo de tumores em mamíferos que compreende a administração ao mamífero de uma quantidade eficaz de um composto com a fórmula (I) em que R é um grupo alcoxi (1-5C) ou o

seu éster farmaceuticamente aceitável.

Z Λ

R é adequadamente metoxi ou etoxi e de preferência um grupo metoxi.

Num outro aspecto, a presente invenção proporciona novos ésteres farmaceuticamente aceitáveis de compostos com a fórmula (I) em que R é um grupo alcoxi (1-5C).

Os ésteres farmaceuticamente aceitáveis dos compostos acima referidos com a fórmula (I) são particularmente preferidos dado que eles são susceptíveis de proporcionar altos níveis de ara G no plasma de um paciente após a administração oral.

Foi descoberto que os compostos da invenção são enzimaticamente convertidos em ara G no hospedeiro. Dado que a ara G tem uma solubilidade limitada em água tornando impraticável a administração parentérica, bem como dando origem a uma baixa disponibilidade após dosagem oral em primatas, a utilização de um composto da invenção tem vantagens no tratamento dos problemas e doenças acima mencionados.

Os derivados preferidos dos compostos da invenção incluem mono- di- ou tri-ésteres do resíduo de arabino-açúcar substituído nas posições 2’, 3’ e 5’ do referido resíduo.

Esses ésteres preferidos incluem ésteres de ácidos . carboxílicos em que o radical não carbonilo do agrupamento éster é escolhido de entre alquilo de cadeia linear ou ramificada (por exemplo n-propilo, t-butilo, n-butilo), alcoxialquilo (por exemplo metoximetilo), aralquilo (por exemplo benzilo), ariloxialquilo (por exemplo fenoximetilo), arilo (por exemplo fenilo) opcionalmente substituído por halogéneo, alquilo(1-4C) ou alcoxi (1-4C), nitro ou amina; ésteres de sulfonato tais como alquisulfonilo; ou alquilarilsulfonilo (por exemplo metanossulfonilo ou tosilssulfonilo); ésteres de ácidos dicarboxílicos (por exemplo succinilo) ou os seus ésteres de alquilo (1-4C); ésteres de aminoácidos (por exemplo L-valil); e os ésteres de mono- di- ou tri- fosfato. Os sais farmaceuticamente aceitáveis destes ésteres incluem sódio, potássio, NR^ em que R=H ou alquilo (1-6C) , halogenetos e sais de adição de ácido. Nos éste- 3 res acima referidos, os grupos alquilo (incluindo aqueles contidos nos agrupamentos alcoxi) contêm 1 a 12 átomos de carbono e os grupos arilo são de preferência fenilo.

Os ésteres preferidos da presente invenção incluem:

1) 2-Amino-6-metoxi-9-(5-0-propionil-p-D-arabinofuranosil)-9H-purina.

2) 2-Amino-9-(5-0-butiril-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina.

3) 2-Amino-6-metoxi-9-(3-0-pivaloil-p-D-arabinofuranosil)-9H-purina.

4) 2-Amino-6-metoxi-9-(2-0-valeril-p-D-arabinofuranosil)-9H-purina.

5) 2-Amino-9-(3-0-benzoil-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina.

6) 2-amino-6-metoxi-9-(2-0-pivaloil-p-D-arabinofuranosil)-9H-purina.

7) 2-Amino-9-(2-0-benzoil-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina.

8) 2-Amino-6-metoxi-9-(5-0-valeril-p-D-arabinofuranosil)-9H-purina.

9) (5-0-Acetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9-9H-purina.

10) 2-Amino-6-metoxi-9-(5-0-(4-metoxi-4-oxobutiril)-p-D-arabinofuranosil)-9H-purina.

1) 9-(3,5-di-0-Acetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina.

12) 9-(2,5-di-0-Acetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina.

13) 9-(2-0-Acetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina.

14) 9-(2,3,5-tri-0-Acetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-meto xi-9H-purina.

15) 2-Amino-9-(5-0-isobutiril-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina.

16) 9-(2,3-di-0-Acetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina.

éster de 3,5-di-0-acetil (composto 11), o éster de 5-0-(4-metoxi-4-oxobutirilo) (composto 10) e o éster de 5-0-ace tilo, (composto 9), são os ésteres especialmente preferidos.

Os compostos da presente invenção são pró-medicamentos eficientes de ara G, um inibidor selectivo do crescimento das células Τ. A presente invenção proporciona assim um processo para inibir a replicação e/ou as funções das células-T por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção.

tratamento do crescimento neoplástico com um composto da presente invenção pode envolver a administração do composto isolado ou em combinação com outros medicamentos como regime preparatório para a ablação da medula óssea antes de uma transplantação autóloga ou alogeneica da medula óssea para o tratamento da leucemia, linfoma, mieloma ou outras doenças malignas, por exemplo de maneira análoga à administração de elevadas doses de bussulfano e ciclofosfamida antes da transplantação da medula óssea para o tratamento da leucemia aguda (Santos, G.W., Bone Marrow Transplant, 1989 Jan; 4 suppl. 1, 236-9).

Pode também ser utilizado um composto da presente invenção para tratar doenças do sangue e da medula óssea ex vivo para remover células mastro malignas numa forma analoga à descrita para a 4-hidroperoxiciclofosfamida por Yeager A. M. e colaboradores, N. Engl. J. Med., Julho 17 1986, 315 (3), 141-7.

As células T são encontradas em articulações reumatóides e podem contribuir para o processo inflamatório. Cerca de 1$ de todas as populações (mulheres 2 a 3 vezes mais comuns do que os homens) são afectadas pela artrite reumatóide, e 5 a 10$ dos pacientes com artrite reumatóide são eventualmente deficientes por possuirem articulações dolorosas, inchadas apesar de um tratamento completo. Pode ser utilizado um composto da presente invenção para tratar a artrite reumatóide.

Foi também postulado que as células-T jogam um papel importante na distrofia muscular; a presente invenção proporcio na assim a utilização de um composto da presente invenção no

tratamento da distrofia muscular.

, 1 >

Os compostos com a formula (I) em que R e um grupo alcoxi (1-5C) e os seus ésteres farmaceuticamente aceitáveis (e agora colectivamente referidos como o ingrediente activo) podem ser administrados por qualquer via adequada à condição que se pretende tratar, incluindo as vias adequadas a via oral, rectal, nasal, tópica (incluindo bucal e sublingual), vaginal e parentérica (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, intratecal e epidural). Deverá notar-se que a via preferida pode variar com, por exemplo, a condição do paciente.

Para cada um dos problemas, doenças e indicações acima referidas, a quantidade requerida de um ingrediente activo (tal como acima definido) dependerá de vários factores, incluindo a severidade da condição que se pretende tratar e a identidade do paciente e será finalmente ditada pelo médico assistente. Em geral, contudo, para cada uma destas aplicações e indicações, uma dose adequada eficaz estará na gama de 0,1 a 250 mg por quilograma de peso corporal do paciente por dia, de preferência na gama de 0,1 a 100 mg por quilograma de peso corporal por dia e mais preferivelmente na gama de 1 a 20 mg por quilograma de peso corporal por dia; uma dose óptima é de 5 a 15 mg por quilograma de peso corporal por dia (a menos que se indique o contrário todos os pesos do ingrediente activo são calculados com base no composto mãe de fórmula (I); para os v seus sais e ésteres os números devem aumentar proporcionalmente). A dose desejada é de preferência apresentada sob a forma de 1, 2, 3, 4, ou mais sub-doses administradas em intervalos adequados ao longo do dia ou da semana. Estas sub-doses podem ser administradas em formas de unidade de dosagem, por exemplo, contendo 5 a 1000 mg, de preferência 20 a 500 mg e mais preferivelmente de 100 a 400 mg de ingrediente activo por forma de unidade de dosagem.

Deve ser notado que os processos afectam a função das células T, como por exemplo os necessários para o tratamento de doenças autoimunes (por exemplo artrite reumatóide), estarão geralmente na extremidade inferior das gamas de dosagem acima

referidas.

Embora seja possível administrar os ingredientes activos isoladamente é preferivel apresentá-los sob a forma de composições farmacêuticas. As composições da presente invenção compreendem pelo menos um ingrediente activo, tal como acima definido, em associação com um ou mais veículos, e opcionalmente outros ingredientes terapêuticos. Os veículos devem ser aceitáveis no sentido de serem compatíveis com outros ingredientes da composição e não serem prejudiciais aos seus recipientes .

As composições incluem as adequadas para a administração oral, rectal, nasal, tópica (incluindo bucal e sublingual), vaginal ou parentêrica (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa, interdérmica, intratecal e epidural). As composições podem ser eonvenientemente apresentadas em formas de unidade de dosagem e podem ser preparadas por quaisquer dos processos bem conhecidos da técnica farmacêutica. Esses processos incluem a fase de se associar o ingrediente activo com o veíoulo que constitui um ou mais ingredientes acessórios. Em geral as composições são preparadas associando uniformemente e intimamente o ingrediente activo com veículos líquidos ou veículos sólidos finamente divididos ou com ambos e em seguida, se necessário, conformar-se o produto.

As composições da presente invenção adequadas para administração oral podem ser apresentadas sob a forma de unidades discretas tais como cápsulas, hóstias ou comprimidos tendo cada um uma quantidade predeterminada do ingrediente activo; sob a forma de pó ou grânulos; como solução ou suspensão num líquido aquoso ou num líquido não aquoso; ou com uma emulsão líquida de óleo em água ou uma emulsão líquida de água em óleo. 0 ingrediente activo pode também ser apresentado sob a forma de bólus, electuário ou pasta.

Pode ser preparado um comprimido por compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Os comprimidos podem ser preparados comprimidos numa máquina adequada o ingrediente activo numa forma fluida como por exem- 7 -

pio pós ou grânulos, opoionalmente misturado com um ligante (por exemplo povidona, gelatina, hidroxipropilmetil celulose), lubrificante, diluente inerte, conservante, desintegrante (por exemplo amido glicolato de sódio, povidona recticulada, carboxilmetil celulose de sódio recticulada), um agente tensioactivo ou um dispersante. Os comprimidos moldados podem ser obtidos por moldagem numa máquina adequada, de uma mistura do composto em pó humedecido com um diluente líquido inerte. Os comprimidos podem opoionalmente ser revestidos ou cortados e podem ser formulados de forma a proporcionar uma libertação lenta ou controlada do ingrediente activo utilizando, por exemplo, hidroxipropilmetil celulose em várias proporções para proporcionar o perfil de libertação pretendido.

Para o tratamento de tecidos externos, por exemplo, boca e pele, as composições são de preferência aplicadas sob a forma de um creme tópico contendo o ingrediente activo numa quantidade de, por exemplo, 0,075 a 20$ em peso, de preferência 0,2 a 15$ em peso e mais preferivelmente de 0,5 a 10$ em peso. Quando formulada sob a forma de uma pomada os ingredientes activos podem ser utilizados com ou sem uma base parafinica, ou uma base de pomada miscivel com a água. Alternativamente, os ingredientes activos podem ser formulados sob a forma de um ereme eom uma base de creme de óleo em água.

Se desejado, a fase aquosa do creme pode incluir, por exemplo pelo menos 30$ em peso de um álcool polihídrico, isto é um álcool que possui 2 ou mais grupos hidroxilos como por exemplo o propileno glicol, butano-1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol e polietileno gliool e suas misturas. As formulações tópicas podem desejavelmente incluir um composto que aumente a absorção ou penetração do ingrediente activo através da pele ou de outras áreas afectadas. Exemplos desses potenciadores da penetração dérmica incluem o sulfóxido de dimetilo e compostos análogos.

A fase oleosa das emulsões desta invenção pode ser constituída por ingredientes conhecidos e de forma conhecida. Embora a fase possa compreender apenas um emulsionante (também

conhecido como emulgente), ela compreende desejavelmente uma mistura de pelo menos um émulsionanté com uma gordura ou com um óleo ou com uma gordura e um óleo. É incluído de preferência um émulsionanté hidrofílico em associação com um émulsionanté lipofílico que aotua como estabilizante. É também preferível incluir um óleo e uma gordura. Em conjunto, os emulsionantes com ou sem estabilizantes perfazem a assim chamada cera emulsionante, e a cera juntamente com o óleo e/ou gordura perfazem a chamada base de unguente émulsionanté que forma a fase oleosa dispersa das formulações de creme.

Os emulgentes e estabilizantes de emulsão adequados para a utilização na formulação na presente invenção incluem o Tween 60, Span 80, álcool cetoestearílico, álcool miristílico, monoestearato de glicerilo e lauril sulfato de sódio.

A escolha dos óleos ou gorduras adequados para a formulação é feita com base na obtenção das propriedades cosméticas desejadas, dado que a solubilidade do composto activo na maior parte dos óleos que se podem utilizar em composições farmacêuticas de tipo emulsão é muito pequena. Assim o creme deve de preferência ser um produto não gorduroso, que não manche e que seja lavável com uma consistência adequada para evitar fugas de tubos ou de outros recipientes. Podem ser utilizados ésteres de alquilo lineares ou ramificados, mono- ou dibásicos tais como o di-isoadipato, estearato de isocetilo, diéster de propileno glicol de ácidos gordos de coco, miristato de isopropilo, oleato de decilo, palmitato de isopropilo, estearato de butilo, palmitato de 2-etilhexilo, ou uma mistura de ésteres de cadeia ramificada conhecidos como o Crodamol CAP, sendo os últimos 3 os ésteres preferidos. Estes podem ser utilizados isoladamente ou em combinação dependendo das propriedades pretendidas. Alternativamente, podem ser utilizados lípidos de alto ponto de fusão como por exemplo a parafina branca macia e/ou parafina líquida ou outros óleos minerais.

As composições adequadas para a administração tópica à boca incluem losangos compreendendo o ingrediente activo numa base aromatizada, geralmente sacarose e aoácia ou tragacanto;

_ pastilhas comp_reendendo o ingrediente activo numa base inerte como por exemplo a gelatina e glicerina, ou sacarose e acácia; e lavagens de boca compreendendo o ingrediente activo num veículo líquido adequado.

As composições para a administração rectal podem ser apresentadas sob a forma de um supositório com uma base adequada compreendendo por exemplo manteiga de cacau ou um salicilato.

As formulações adequadas para a administração nasal em que o veículo é um sólido incluem um pó grosseiro que possui um tamanho de partícula por exemplo na gama de 20 a 500 micrometros que é administrado de forma a haver uma inspiração isto é por inalação rápida através da passagem nasal a partir de um recipiente do pó mantido perto do nariz. As formulações adequadas em que o veículo é líquido, para administração por exemplo como aerossol nasal ou gotas nasais, incluem soluções aquosas ou oleosas dos ingredientes activos.

As composições adequadas para administração vaginal podem ser apresentadas como pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou composições de pulverização, contendo para além do ingrediente activo veículos que são conhecidos como adequados.

As formulações adequadas para a administração parentérica incluem soluções para injecção esterilizadas aquosas e não aquosas que podem conter anti-oxidantes, tampões, bacterio^ tatos e solutos que tornam a solução isotónica com o sangue do recipiente pretendido; e suspensões esterilizadas aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes. As composições podem apresentar-se em recipientes de dose unitária ou de multi-doses, por exemplo, ampolas e frascos selados e podem ser armazenadas numa condição liofilizada requerendo apenas a adição de um veículo líquido esterilizado, por exemplo água para injecções, imediatamente antes da utilização. As soluções e suspensões para injecção extemporânea podem ser preparadas a partir de pós, grânulos e comprimidos es• terilizados do tipo anteriormente descrito.

As composições de dosagem unitárias preferidas são aquelas que contêm uma dose semanal, uma dose diária, ou uma sub-dose diária, tal como aqui referido, ou uma sub fracção ad£ quada de um ingrediente activo.

Deve entender-se que para além dos ingredientes particulares acima mencionados as composições desta invenção podem incluir outros agentes convencionais na técnica em relação ao tipo de formulação em questão, por exemplo as adequadas para a administração oral podem incluir agentes aromatizantes.

A presente invenção também proporciona um processo para a preparação de um éster farmaceuticamente aoeitável de um composto oom a fórmula (I) na qual R é um grupo alcoxi(1-5C), que compreende a esterificação de um composto com a fórmula (I). Essa esterificação pode ter lugar por meio da reacção de um composto com a fórmula (I), em que os grupos hidroxi são esterif içados com um agente acilante, convenientemente um halogeneto de acilo ou anidrido, a uma temperatura não elevada, -30 a 100°C e adequadamente -5 a 30°C, num solvente polar, convenientemente o acetonitrilo, na presença de uma base, por exemplo a trletllamina, e em seguida removerem-se os grupos protectores por processos convencionais.

Alternativamente, os ésteres podem ser preparados esterificação enzimática utilizando por exemplo o éster de trioloroetilo adequado e a subtilisina como iniciador de reacção.

A reaoção é adequadamente efectuada num solvente básico, tal como a piridina a uma temperatura não extrema, convenientemente entre 0°C e 50°C. A reacção é parada por separação por filtração da enzima e remoção do solvente.

Os compostos com a fórmula (I) podem ser preparados pelo processo descrito no Pedido de Patente Europeia No. 294114 (quando R é alcoxi (1-5C).

Os seguintes exemplos servem para ilustrar a preparação dos ésteres dos compostos com a fórmula (I) e de composições que os contêm.

Exemplo 1 Preparação Enzimátioa dos Ésteres da Presente Invengâo

-purina

Foi preparada uma suspensão de 2-amino-6-metoxi-9-(5-0-propionil-p-D-arabinofuranosil)-9H-purina (1,0 g, 3,3 mmol) (preparado da forma desorita no Pedido de Patente Europeia No. 294 114) em 40 ml de piridina que continha 300 |il de água e 2 ml de propionato de tricloroetilo (o propionato de tricloroetilo foi sintetizado por adição de 19 ml de cloreto de propionilo (Aldrich) durante 30 minutos a 19,1 ml de tricloroetanol (Aldrich) em 40 ml de piridina a 0°C). 0 produto foi purificado por lavagens sucessivas com aliquotas de 2 x 100 ml de H₂0, 5% NaHC0₃, e H₂0. ¹H RMN (200 MHz, CDC1₃, 4.74 (s, 2H, . C1₃CH₂_), 2.49 (q, 2H, J=7.6 Hz, CH₃CH₂C0₂_), 1.21 (t, 3H,

J-7.6 Hz, CH₃CH₂C0₂_). A reacção foi iniciada com 0,100 g de subtilisina (Sigma Chemical Co., St. Louis, M0, P-5380, lote No. 38F-0356), que tinha sido activada por dissolução de 1 g da enzima em 20 ml de fosfato de potássio 0,1 M a pH 7,8 e liofilizada até à secura. Após agitação durante 23 horas a 40°C, a reacção foi parada separando por filtração da enzima e o solvente foi removido em vazio. 0 produto bruto foi purificado por cromatografia numa coluna de gel de sílica de 4,5 x 25 cm com CH₂C1₂:CH₃OH (9:1) como eluente. Foram combinadas as fracções do produto e liofilizadas de água para se obterem 0,76 g do produto pretendido como pó branco p.f. 124°C; TLC R_f = 0.43 (gel de sílica; CH₂C1₂:CH₃OH (9:1)); UV /çnáx (¢, mM”'' cm') a pH 7.0, 278 nm (9.5).

¹H RMN (200 MHz, DMSO-dg), & 7.83(s, 1H, Ηθ, 6.44 (s, 2H,

2-NH₂), 6.14 (s, 1H, Hp), 5.75 (d, 1H, J = 4.3 Hz, 2’-0H),

5.65 (d, 1H, J = 3.5 Hz, 3’-0H), 4.28 (m, 2H, H₂, e H^), 4.08 (m, 2H, H₅,), 3.95 (s, 3H, -0CH₃), 3-91 (m, 1H, H^,), 2.32 (q, 2H, J = 7-6 Hz, CH₃CH₂CO₂_), 1.01 (t, 3H, J = 7.5 Hz, CH₃CH₂C0₂_); MS (ci) 354 (M+1), 280 (M-C^COg).

Anál. Cale, para C^H^ ^N^O^. 0.46 H₂0:

Cale: C, 46.49; H, 5.55; N, 19.36 Determ: C, 46.46; H, 5.52; N, 19-45.

b) g-CS-O-Aoetil-p-D-arabinofuranosiD^-amino-ô-metoxi-gH-purlna

Foi preparada uma suspensão de 2-amino-6-metoxi-9-j3-D-arabinofuranosil-9H-purina (1,0 g, 3,3 mmol) em 40 ml de piridina que continha 300 |il de água e 1 ml de acetato de tricloroetilo (o acetato de tricloroetilo foi sintetizado da forma seguinte: foram colocados o 2,2,2-tricloroetanol (19,1 ml,

197,1 mmol) e piridina seca (40 ml) num frasco de fundo redondo de 3 bocas equipado com uma válvula de admissão de árgon, termómetro, funil de adição, agitador magnético, e um banho de gelo/água. Foi colocado o cloreto de acetilo (14,5 ml) no funil de adição e este produto foi adicionado num período de 10 minutos, mantendo a temperatura inferior a 25°C com agitação em árgon. 0 produto resultante foi lavado com água (2 x 100 ml), 5% de NaHCO^ (2 x 100 ml), água (2 x 100 ml). Foi seca a fase orgânica com sulfato de magnésio e em seguida filtrada através de um papel de filtro Whatman No. 1 e destilada em vazio. Cortou-se um pedaço médio de 5,18 g que era o material pretendido, contaminado oom uma pequena quantidade de ácido acético.

¹H-RMN (CDC13): £ 4.73 (s, 2H, CH20), 2.20 (s, 3H, CH C0); MS Cl, CH^): m/z 197 (M+H, C^H 02 ³⁷C13), 195 (M+H, C^H^³⁷^³⁵Cl), 193 (M+H, 04Η5020³⁵σΐ2 Cl), 191 (M+H, C₄H₅O₂ ³⁵C13), 159 (195-HC1, C4H40237ci2) , 157 (193-HCl, C^O^TciSSci) , 155 (191-HC1, Ο4Η4Ο2³⁵Ο12); (EI): m/z 195 (M+H), 193 (M+H), 191 (M+H), 157 (193-HCl), 155 (191-HC1). Análise para C^Cl 0₂ +

0.054 mol C^COOH: C, 25-35: H, 2.70; Cl, 54.62. Delerm. C, 25.57: H, 2.72; Cl, 54.66).

A reacção foi iniciada com 0,050 g de subtilisina (Sigma Chemical Co., St. Louis, M0, P-5380, Lote No. 38F-0356), que tinha sido activada por dissolução de 1 g da enzima em 20 • ml de fosfato de potássio 0,1 M a pH 7,8 e liofilizando à secu13 -

mg de subtilisina e 2 ml de aeetato de tricloroetilo à mistu ra reaccional. Após agitação a 40°C durante mais 24 horas a reacção foi parada separando por filtração a enzima e o solvente foi removido em vazio. 0 material bruto foi purificado por cromatografia numa coluna de gel de sílica de 4,5 x 25 cm com CK^Cl^CH^OH (9:1) como eluente. As fracções do produto foram combinadas e liofilizadas de água para se obterem 0,28 g do produto pretendido sob a forma de um pó branco. TLC R^ = 0.35 (gel de sílica; CH_OC1_O: CH-OH (9:1)); UV (fc, mM^-1 cm¹)

c. c. Ο UlâX a pH 7.0, 279 nm (8.8).

¹H-RMN (200 MHz, DMSO-dg): £7.83 (s, 1H, Ηθ), 6.45 (s, 2H, 2-NH₂), 6.14 (d, 1H, J = 3.7 Hz, H_q,), 5.75 (d, 1H, J = 4.5 Hz, 2’-0H), 5.65 (d, 1H, J = 3-7 Hz, 3’-OH), 4.26 (m, 2H, H₂, e H₃,), 4.07 (m, 2H, H₅,), 3.94 (s, 3H, -OCH ), 3-92 (m, 1H, Η_μf), 2.01 (s, 3H, CH₃CO₂_); MS (CI) 340 (M+1 ) , 280 (M-CH^O^.

Anál. Calo, para C^H^ . 0.52 H₂0:

Cale.: C, 44.77; H, 5.22; N, 20.12.

Determ.: C, 44.79; H, 5.21; N, 20.09.

Foram preparados os seguintes compostos de forma análo ga partindo do éster do tricloroetilo adequado.

c) 2-Amino-9-(5-0-but ir i1-p-D-ar ab ino f ur anos il)-6-me to xi-9 H-purina ¹H-RMN (200 MHz, SODM-dg): é? 7.83 (s, 1H, Ηθ), 6.46 (s, 2H, 2-NH₂), 6.14 (d, 1H, J = 3.9 Hz, Hl’), 5.76 (d, 1H, J = 4.3 Hz, 2’-0H), 5.66 (D, 1H, J = 3-7 Hz, 3'-0H), 4.28 (m, 2H, H₂, e H₃,), 4.07 (m, 2H, H₅,), 3.94 (s, 3H, -OCH₃), 3-91 (m, 1H, H^,), 2.28 (t, 2H, J = 7.2 Hz, CH₃CH₂CH₂C0₂_), 1.52 (sexteto, 2H, J = 7.4 Hz, CH₃CH₂CH₂CO₂_), 0.85 (t, 3H, J = 7.3 Hz), CH₃CH₂CH₂CO₂_) EM (ci) 368 (M+1).

d) 2-Amino-6-metoxi-9-(5-0-valeril-p-D-arabinofuranosil)-9H -purina

' ¹H-RMN (200 MHz, SODM-dg): S 7.83 (s, 1H, Ηθ), 6.45 (s, 2H, 2-NH₂), 6.15 (d, 1H, J = 3.7 Hz, H_p), 5.76 (d, 1H, J = 4.2 Hz, 2’-0H), 5.65 (d, 1H, J = 3.5 Hz, 3’OH), 4.28 (m, 2H, H_2T e Ηθ,), 4.08 (m, 2H H₅,), 3-94 (s, 3H, -ΟΟΗθ) 3-92 (m, 1H, ,),

2.29 (t, 2H, J = 7.1 Hz, 0Ηθ0Η₂0Η₂0Η₂00₂_), 1.49 (m, 2H,

I CH₃CH₂CH₂CH₂CO₂_) 1.28 (m, 2H CH₃CH₂CH₂CH₂CO₂_) , 0.83 (t, 3H,

J = 7.2 Hz, CH₃CH₂CH₂CH₂C0₂_).

e) 2-Amino- 6 -me t o_xi_~.9~á.5_-0(4-met o xl-4-o xobut ir i 1) -p-D-ar ab ino furanosil)-9H-purina (material de partida suceinato de tricloroetil metilo) ¹H-RMN (200 MHz, SODM-dg): £7.83 (s, 1H, Ηθ), 6.45 (s, 2H, 2-NH₂), 6.15 (d, 1H, J = 3-7 Hz, H^ ,), 5-75 (d, 1H, J = 4.3 Hz, 2’-0H), 5.65 (d, 1H, J = 3.7 Hz, 3’-0H), 4.28 (m, 2H, H₂, e Ηθ,), 4.08 (m, 2H, H₅,), 3.95 (s, 3H, -ΟΟΗθ) 3.91 (m, 1H, H^,) , 3.51 (s, 3H, CH₃OC(O)-), 2.56 (s, 4H, -0C(0)CH₂CH₂C(0)0-); EM (Cl) 412 (M+1 ), 280 (Μ-ΟθΗ^).

Anál. Cale, para θΗ,^Ν^Οθ .0.40 H₂0:

Cale.: C, 45.64; H, 5.28; N, 16.63.

Determ.: C, 45.62; H, 5.21; N, 16.67.

Exemplo 2 Síntese Química dos Ésteres da_ presente_inv_enção a(i) 2-Amino-9-(2,5-di-0-tero-butil_dimetilsilil-p-D-arabinofuranosil)-6-me to xl-9H_-purina

Adicionou-se 2-amino-9-(p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (10 g, 34 mmol) a um frasco de fundo redondo de 500 ml e secou-se por co-evaporação com piridina (2 x 50 ml). Foi adicionado imidazole (11 g, 160 mmol), seguido de cloreto de terc-butildimetilsililo (11 g, 74 mmol). 0 frasco foi purgado com árgon e equipado com um septo. Adicionou-se dimetilformamida seca (DMF, 40 ml) e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. 0 ensaio de TLC em gel de sílica com acetona: CHCI3 (1:10) revelou que 20$ do material inicial per• manecia (R_f = 0,05) e que as três manchas de R_f mais alto se

formaram a 0,18, 0,41 e 0,75. Foi adicionado mais cloreto de terc-butildimetilsililo (1,0 g, 6,6 mmol) e continuou-se a agitação durante mais 24 horas. 0 ensaio de TLC no mesmo solvente revelou posteriormente que todo o material inicial tinha sido consumido.

A DMF foi posteriormente removida a pressão reduzida e o resíduo foi dividido em acetato de etilo (350 ml) e água (100 ml e 3 x 50 ml). As fases aquosas foram outra vez extraídas com acetato de etilo (100 ml) e as fases orgânicas combinada foram secas (MgSO^), filtradas e concentradas. 0 produto bruto foi purificado em coluna rápida de gel de sílica (5 x 25 cm) eluindo com um gradiente de acetona por passos em CHCl^ (1:20 a 1:2). Foram obtidas três fracções do produto correspondendo às três manchas observadas pelo ensaio de TLC. A fracção R = 0,18 originou 4,0 g (23$) de um sólido branco identificado como sendo o produto 2,5-dissililado: p.f. = 18O-182°C (não corrigido); UV )\máx (95$ EtOH): 248,8 nm e 280,8 nm; EM (EI): m/z 468 (C_1gH₃₄N₅O₅Si₂), 450 (C₁ gH^N^S^), 336 (^^gN^Si) 322 (C₁₄H₂₄N₅O₂S1) , 264 (C₁₀H_q4N₅O₂Si) , 222 (CgHgN^), 208 (CgH₁₀N₅0₂), 194 (C₇HgN₅0₂), 166 (CgHg^O), 133 (CgH^OSi),

115 (C₆H₁₅Si), 57 (C4Hg).

¹H-RMN (CDClg): δ 7.87 (s, 1H, H-8), 6.29 (d, 1H, H-1’, J = 4.6 Hz), 4.82 (br s, 2H NH₂), 4.39-4.34 (m, 2H, H-2’ e 3’), 4.07 (s, 3H, -OCHg), 3.94-3.82 (m, 3H, H-4’ e 5’), 2.40 (br s, 1H, 0,71 (s, 9H, (CH₃)₃CSi), 0.09 (CH₃)Si), -0.24 (s, 3H,

3’-0H), 0.91 (s, 9H, (CH^CSi), (s, 6H, (CH₃)₂Si), -0.02 (s, 3H, (CH₃)Si).

Anál. Cale, para C₂₃H₄₃N₃O,-Si₂:

Cale.: C, 52.54; H, 8.24; N,

Determ.: C, 52,28; H, 8.20; N,

13.32.

13.17.

a (i i) 2-Amino -9-(2,5 -di - 0-_t. e_r_c_-_but_i_l_d imet ils il i 1 - 3 - 0-pivalo

Foi pesada num frasco seco à chama de fundo redondo de 250 ml a 2-amino-9-E(2,5-di-0-terc-butildimetilsilil)-B-D16 -

- -arabinofuranosil]-6-metoxi-9H-purina (2,0 g, 3,8 mmol). Adicionou-se 4-N, N-dimetilaminopiridina (0,05 g, 0,4 mmol) e o frasco foi purgado com árgon e selado com um septo. Adicionou-se à mistura reaccional acetonitrilo seco (50 ml), trietilamina (8,0 ml), e anidrido piválico (3 ml, 14,8 mmol). Após 158 horas, a mistura reaccional foi concentrada e o resíduo foi retomado em acetato de etilo (250 ml) e extraído com 11^0(3 x 50 ml). 0 acetato de etilo foi seco (MgSO^), filtrado, e concentra do para se obterem 3>8 g de um óleo amarelo. Uma porção de 300 g deste material foi purificada num aparelho Chromatotron (Harrison Scientific) equipado com um rótor de gel de sílica de 4 mm, eluindo com acetona: CHCl^ (1:10). 0 produto foi isolado como goma transparente (0.176 g); EM (EI): m/z 609 (C ₈H ,N 0,Si ), 594 (C H₄₈N 0₆Si ), 552 (C A N 0,Si ), 450 (C₁₉H₃₂N₅O₄Si₂), 322 (C_l4H_2i|N₅O₂Si), ₃14 (C^H^Si) , 194 (C_?H₈N₅0₂), 166 (C₆HgN₅O), 57 (C^). ¹H-RMN (CDClg): 8 7.93 (s, 1H, H-8), 6.25 (d, 1H, H-1’, J = 3.8 Hz), 5.28 (d, 1H, H-3’, J = 2.2 Hz), 5.05 (br 3, 2H, NH₂), 4.30 (dd, 1H, H-2', J₂, ₃, = 1.8 Hz), 4.10 (s, 3H, -OCH ), 4.04 (dt, 1H, H-4', J = 2.5 Hz,

J = 5.9 Hz), 3.19 (d, 2H, H-5’, J = 5.5 Hz, 1.27 (s, 9H, -OCOC(CH₃)₃) , 0.90 (s, 9H, -SiC(CH₃)₃), 0.75 (s, 9H, -SiCCCH^) 0.09 (s, 6H -Sí(CH₃)₂), 0.02 (s, 3H, -SiíCHg)), -0.33 (s, 3H, -sí(ch₃)).

Anál. Cale, para 0₂θΗ^ N^O^S^. 0.75 CgHgO.0.05 CHClg:

Cale.: C, 55.19; H, 8.49; N, 10.62

Determ.: C, 55.32; H, 8.61; N, 10.53

b) 2-Amino-6-meto xi-9-(3-0-piva1o i1-p-D-ara b i no f ur ano s i1)-9 H-purina

Foi retomada em THF (40 ml) a 2-amino-6-metoxi-9-[(3-0-pivaloil-2,5-di-0-terc-butildimetil-silil)-{3-D-arabinofuranosil]-9H-purina (2,1 g, 3,4 mmol) e arrefeceu-se num banho de gelo a 5°^c· Adicionou-se H₂0 (2 ml) seguida de fluoreto de tetrabutilamónio (TBAF) como uma solução de solução 1 M em THF , (10 ml, 10 mmol). Após 2 horas a 5°C, adicionou-se mais 10 ml • de TBAF. Após 2 horas, a mistura reaccional foi tratada ainda

com mais 5 ml de TBAF e agitou-se durante mais 18 horas. A mistura reaccional foi depois diluída com CHCl^ (40 ml) e passada por um leito em gel de sílica (230-400 malhas, 5x5 om) com 1:1 de acetona: CHCl^ (500 ml). 0 filtrado foi concentrado e adicionado a uma coluna de gel de sílica (230-400 malhas, 5 x 18 cm). A coluna foi eluída com um gradiente de acetona em CHCl^ (1:10 a 1:1 acetona: CHCl^). Foram obtidas duas fracções principais a partir da coluna correspondendo ao material com um valor de R_f = 0,74 e 0,50 em acetona: CHCl^ (1:1). 0 material de R^ inferior foi isolado como pó branco, 0,77 g (53$) e revelou ser o derivado desejado de 3’-0-pivaloilo: p.f. 241-243°C (não corrigido); UV \max (£): pH = 7.00: 278.9 nm (8,700) e 247-7 nm (8,900); 0.1 N HC1: 287.0 (8,600) e 243.7 (6,800); 0.1 N NaOH: 279-2 (8,900) e 247.7 (8,200); EM(EI): m/z 381 (M, C₁₆H₂₃N_5q6), 366 (0_ή^θΝ^), 296 (C₁ ^^N^^ , ²⁸⁰ «nWf’ ²⁵⁰ ^1()52^3^ ^{232 (C}10^H10^N5°2⁾ ’ ²⁰⁸ (CgH₁₀N₅O₂), 194 (0_γΗ_θΝ₅0₂), 165 (C₆H_?N₅O), 136 (C₅H4N40), 85 (Cj-HgO); IR (KBr): 1733-6, 1594.7 cm-1 .

¹H-RMN (Me₂S0-d₆): 8 7.95 (s, 1H, H-2), 6.45 (br s, 2H, NH₂), 6.10 (d, 1H, H-1’, J = 4.3 Hz), 6.10 (d, 1H, 2»-0H, J = 5.5 Hz) 5.16-510 (m, 2H, H-3’ e 5’-0H), 4.23-4.20 (m, 1H, H-2’), 3.94 (s, 3H, Pur-OCH^), 3.90-3-86 (m, 1H, H-4’), 3.67-3-60 (m, 2H, 5’), 1.18 (s, 9H, C(CH₃)₃).

Anál. Cale, para g^H23^N5°6.0.40 CHC1₃ :

Cale.: C, 45.90; H, 5.50; N, 16.32.

Determ.: C, 45.72; H, 5.43; N, 16.04.

c(i) 2-Amino-9-(3,5-di-O-terc-butildimetilsilil-p-D-arabinofur an o s i1)-6-met o xi-9 H-pur ina

Foi adicionada a um frasco de fundo redondo de 500 ml de capacidade a 2-amino-9-(p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (10 g, 34 mmol) e foi seca por co-evaporação com piridina (2 x 50 ml). Adioionou-se imidazole (11 g, 160 mmol) seguido de cloreto de terc-butildimetilsililo (11 g, 74 mmol). Encheu-se o frasco oorn árgon e equipou-se com um septo. Foi

adicionada dimetilformamida seca (DMF, 40 ml) e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. 0 ensaio de TLC em gel de sílica com acetona: CHCl^ (1:10) revelou que 20$ do material inicial permanecia R^, = 0,05) e que as três manchas R^ mais altas se formaram a 0,18, 0,41 e 0,75. Adicionou-se mais cloreto de terc-butil-dimetilsililo (1,0 g, 6,6 mmol) e continuou-se a agitação durante mais 24 horas. 0 ensaio de TLC no mesmo solvente revelou posteriormente que todo o material inicial tinha sido consumido.

A DMF foi posteriormente removida sob pressão reduzida e o resíduo repartido entre acetato de etilo (350 ml) e H₂0 (100 ml e 3 x 50 ml). As fases aquosas foram outra vez extraídas oom acetato de etilo (100 ml) e a fase orgânica combinada foi seca (MgSO^), filtrada e concentrada. 0 produto bruto foi purificado em coluna rápida de gel de sílica (5 x 25 cm) eluído em gradientes de acetona em CHClg (1:20 a 1:2). Foram obtidas três fracções do produto correspondendo às três manchas observadas pelo ensaio de TLC. A fracção R^. = 0,41 originou 8,0 g (45$) de um sólido branco identificado como sendo o produto

3,5-dissililado: p.f. = 88-90°C (não corrigido); UV k ' (95$ * max

EtOH): 247.1 nm e 280.1 nm; EM (EI): m/z 526 (Μ + H, ⁵¹⁰ ^40¾³½ ^{468 (C}19^H34^N5°5^SÍ2⁾ ’ ³³⁶ (C₁₃H_1gN₅O₄Si) , 301 (C₁₃H₂₅0₄Si₂) , 261 (C^H^O ), 231 (C_1QH_gN₅O₂), 208 (0_θΗ_1θΝ₅0₂), 194 (C^gN^), 165 (CgH^O),

133 (C₆H_1?OSi), 115 (C₆H₁₅Si), 57 (C₄H_g).

¹H-RMN (CDClg): £ 8.01 (s, 1H, H-8), 6.16 (d, 1H, H-1’ , J = 3.1 Hz), 5.08 (br s, 1H, 2’-0H), 4.84 (br, s, 2H, NH₂), 4.31(t, 1H, H-3', J = 1.8 Hz), 4.16-4.13 (m, 1H, H-2’), 4.05 (s, 3H, -OCHg), 4.02-3.99 (m, 1H, H-4’), 3.94 (dd, 1H, H-5’, ₅, = 3.7 Hz, = 11.0 Hz), 3.79 (dd, 1H, H-5, J₄,= 2.7 Hz, J₅,_>5„= 11.6 Hz), 0.94 (s, 9H, (CHg^CSi), 0.93 (s’ 9H, (CH^ CSi),’

0.17 (s, 3H, CHgSi), 0.14 (s, 3H, CH^i), 0.12 (s, 6H, (CH^Si)

Anál. Cale, para Ο,^Η^Ν^Ο^δ^:

Cale.: C, 52.54; H, 8.24; N, 13.32

Determ.: C, 52.32; H, 8.24; N, 13.25

ο(ii) 2-Amino-9-(_3._>..5-di-0-terc-butildimetilsilil-2-0-valeril-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-gH-purina

Foi pesada num frasco seco à chama de fundo redondo de 250 ml a 2-amino-9-[(2,5-di-0-terc-butildimetilsilil)-p-D-arabinofuranosil]-6-metoxi-9H-purina (1,3 g, 2,5 mmol). Adicionou-se 4-N,N-dimetilaminopiridina (0,05 g, 0,4 mmol) e o frasco foi purgado com árgon e selado com um septo. Adicionou-se à mistura reaccional acetonitrilo seco (30 ml), trietilamina (5,0 ml) e a solução foi arrefecida num banho de gelo. Adicionou-se à mistura reaccional anidrido valérico (0,6 ml, 3,0 mmol). Após 18 horas a 0,5°C a mistura reaccional foi concentra da e o resíduo foi retomado em hexano:aeetato de etilo (1:1) (200 ml) e extraído com (3 x 50 ml). A fase orgânica foi seca (MgSOjj), filtrada, e concentrada para se obterem 1,7 g de um óleo amarelo. Uma porção de 270 mg deste material foi purificada num aparelho Chromatotron (Harrison Scientific) equipado com um rótor de 2 mm de gel de sílica. 0 rótor foi eluído com acetona: CHClg (1:10). 0 produto obtido do Chromatotron era um sólido branco (0,21 g, 0,34 mmol): p.f. = 105-107°C (não corrigido); EM (EI): m/z 609 (C^H^NgOgSi^ , 594 (C^H^NgOgSia) ,

552 (C₂₄H₄₂N₅O₆Si₂) , 420 (C^H^N^Si) , 292 (^ gH,, gNgOg ) , 261 (C₁₂H₁₅N₅O₂) , 231 (C₁₀H_gN₅O₂), 194 (C^gN^), 166 (CgHgNgO), 159 (C_?H₂₅O₂Si), 57 (C^H ).

¹H-RMN (CDClg): <?7·92 (s, 1H, H-8), 6.39 (d, 1H, H-1’, J = 5.7 Hz), 5.33 (t, 1H, H-2», J = 5.7 Hz), 4.84 (br s, 2H, NH₂), 4.60 (t, 1H, H-3’, J = 5.7 Hz), 4,05 (s, 3H, OCHg), 3.93-3-80(m, 1H, H-4’ e H-5’), 2.09 (dt, 1H, C(0)CH₂, J = 7.5 Hz) 1.94 (dt, 1Ή, C(0)CH₂, J = 7-5 Hz, J = 15 Hz), 1.32-1.00 (m, 4H, -CH₂CH₂_), 0.93 (s, 9H, -SiC(CHg)g), 0.89 (s, 9H, -SiC(C ) ), 0.76 (t, 3H, -CHg, J = 7.0 Hz); 0.11 (s, 3H, Si(CHg)), 0.09 (s, 3H, -Si(CHg)) 0.09 (s, 3H, -Si(CHg)), 0.08 (s, 3H, -Si(CHg)).

Anál. Calo, para ^C28^H51^N5°6^Si2^:

Cale.: C, 55.14; H, 8.43; N, 11.48.

Determ.: C, 55.09; H, 8.45; N, 11.46.

c (iii) 2_-Amino-6-metoxi-9-(2-0-valer il-jp-D-arabinof uranosil )-9H-purina

Foi retomada em tetrahidrofurano (THF 40 ml) e arrefecida num banho de gelo a 5°C a a 2-amino-9-(3,5-di-0-terc-butildimetilsilil-2-0-valeril-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (1,4 g, 2,3 mmol). Adicionou-se ácido acético (0,06 ml, 10 mmol), seguido de fluoreto de tetrabutilamónio (TBAF) como uma solução 1 M em THF (10 ml, 10 mmol). Após 18 horas a 5°C, a mistura reaccional foi diluída oom CHCl^ (40 ml) e passa da por um leito de gel de sílica (230-400 malhas, 5x5 cm) com

1:1 de acetona: CHC1_O (500 ml). 0 filtrado foi concentrado e 3 purificado num aparelho Chromatotron equipado com um rotor de 4 mm de gel de sílica e eluído com acetato de etilo puro. Foi obtido um produto puro da coluna como espuma branca 0,72 g (78%) após secagem e revelou ser o derivado desejado de 2’-0-valerilo: p.f.: 83-86°C (não corrigido); UV (£): pH =

7.00: 280.0 nm (7,800), 247-8 nm (8,400); 0.1 N HC1: 278.6 (8,000), 247.7 (7,400); 0.1 N NaOH: 286.2 (7,600), 244.9 (7,200); EM (EI): m/z 381 (C^H^N^) , 351 (C^H^N^), 292 (C_nH_l8N₅0₃), 279 (C_nH₁₃N₅O₄), 217 (C^H^Oç), 194 (0_?Η₈Ν₅0₂), 165 (Ο₆Η_γΝ₅Ο), 135 (CçH^), 85 (C₅H_g0). IR (KBr)

1745.2, 1613.3 e 1588.7 cm^-1.

¹H-RMN (Me₂S0-d₆): S 7-93 (s, 1H, H-2), 6.46 (br s, 2H, NHH2),

6.26 (d, 1H, H-1’, J = 5.9 Hz), 5.79 (d, 1H, 3’-0H, J = 5.1 Hz),

5.23 (t, 1H, H-2’, J = 5.8 Hz), 5.02 (t, 1H, 5’-0H, J = 5.6 Hz),

4.36 (ddd, 1H, H-3’ , J₃»_j3,__OH = 5-1 Hz, ^₂, , ₃, = 5.7 Hz, = 5.8 Hz), 3.93 (s, 3H, Pur-0CH₃), 3.83-3.78’(m, 1H, H-4’), 3.68-3.61 (m, 2H, H-5’), 2.09 (dt, 1H, C(0)CH₂, J = 7.5 Hz, J = 15 Hz), 1.93 (dt, 1H, C(0)CH₂, J = 7-5 Hz, J = 15 Hz), 1.30-0.90 (m, 4H, -CH₂CH₂_), 0.65 (t, 3H, -CH_3> J = 7 Hz).

Anál. Calo, para C,z-H„_oN^0z-. 0.15 C_nH,„O_n:

lo 235o 5103

Cale.: C, 50.41; H, 6.22; N, 17.29.

Determ.: C, 50.41; H, 6.59; N, 17-40.

d(i) 2-Amino-9-(3-0~benzoil-2,5-di-0-terc-butildimetilsilil-p-D-ar ab ino f ur ano s i 1) - 6 -me t o xi- 9H-p,ur ina

Foi pesada num frasco de fundo redondo de 250 ml seco à chama a 2-amino-9-[(2,5-di-0-terc-butildimetilsilil)-J3-D-arabinofuranosil]-6-metoxi-9H-purina (1,5 g, 2,9 mmol). Adicionou-se 4-N,N-dimetilaminopiridina (0,05 g, 0,4 mmol) e o frasco foi purgado com árgon e selado com um septo. Adicionou-se à mistura reaccional acetonitrilo seco (50 ml), trietilamina (5,0 ml), e anidrido benzóico (0,77 g, 3,4 mmol). Após 5 horas à temperatura ambiente, a mistura reaccional foi concentrada e o resíduo foi retomado em acetato de etilo (250 ml) e extraído com H₂0 (2 x 50 ml). 0 acetato de etilo foi seco (MgSO^), filtrado, e concentrado para se obterem 3,8 g de um óleo amarelo. Uma porção de 270 mg deste material foi purificada num Chromatotron (Harrison Scientific) equipado com um rotor de gel de sílica de 4 mm. 0 rotor foi eluído com acetona: CHCl^ (1:10). 0 produto do Chromatotron era um sólido branco (0,18 g, 0,29 mmol): p.f. = 73-75°C (não corrigido); EM (EI): m/z 630 (^c30^H48^N5°6^Si2⁾’ ⁶¹⁴ (^C29^H44^N5°6^Si2^’ ^{572 (C}26^H44^N5°6^Si2^}’

451 (C₁₉H₃₃N₅O₄SI₂) , 194 ((^ΗθΝ^), 179 (CgH^Cb,), 166 (CgHgN^O), 166 (CgHgNj-O), 105 (C^O).

¹H-RMN (CDC1₃). í 8.12-8.07 (m, 2H, Ar-H), 7.92 (s, 1H, H-8), 7.63-7.45 (m, 3H, Ar-H), 6.33 (d, 1H, H-1», J = 3-7 Hz), 5.46 (t, 1H, H-3’, J = 1.8 Hz), 4.79 (br s, 2H, NH_£), 4.42 (dd, 1H, H-2’, J_p2, = 3-7 Hz e J , = 1.7 Hz), 4.30-4.20 (m, 1H, H-4’) 4.07 (s, 3H, -OCH₃), 3.99-3.95 (m, 2H, H-5’), 0.89 (s, 9H, -SiC(CH₃)₃), 0.76 (s, 9H, -Si(CH₃) ), 0.09 (s, 6H, -SiíCH^), 0.03 (s, 3H, -Si(CH₃)), 0.34 (s, 3H, -Si(CH )):

Anál. Cale, para C₃₀H₄yN₃0gSi₂:

Cale.: C, 57.20; H, 7.52; N, 11.12.

Determ.: C, 57.08; H, 7.59; N, 11.05.

d(ii) 2-Amino-9-(3-0-benzoil-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina

Foi retomada em tetrahidrofurano (THF 40 ml) e arre22

fecida num banho de gelo a 5°C a 2-amino-9-(3-0-benzoil-2,5-di- 0-1 er c-but ildimetilsilil)-j3-D-ar abinof ur anos il)-6-met oxi-9H-purina (1,97 g, 2,6 mmol). Adicionou-se ácido acético (0,06 ml, 10 mmol), seguido de fluoreto de tetrabutilamónio (TBAF) como uma solução 1 M em THF (10 ml, 10 mmol). Após 18 horas a 5°C, a mistura reaccional foi diluída com CHCl^ (40 ml) e passa da por um leito de gel de sílica (230-400 malhas, 5x5 cm) com 1:1 de acetona; CHCl^ (500 ml). 0 filtrado foi concentrado num sólido branco que foi absorvido em 10 g de gel de sílica e adicionado a uma coluna de gel de sílica (230-400 malhas, 5 x 18 cm). A coluna foi eiuída com acetona: CHCl^ (1:2). Foi obtido um produto puro da coluna correspondendo ao material com um R_f = 0,56 em acetona: CHCl^ (1:1). Este material era um pó branco 0,77 g (11, 9 mmol) e após secagem revelou ser o derivado desejado de 3’-0-benzoilo: p.f.: 155-157°C (não corrigido); UV

Xmí P^H = 7.00: 278.3 nm (10,100), 235.2 nm ( 18,800);

0.1 N HC1: 278.1 (9,100), 245 (sh) (9,600); 0.1 N NaOH: 284.8 (9,600), 233.9 (18,400); EM (EI): m/z 401 (M, C^H^NçOg), 296 (C^H^N^), 250 (C_1qH₁₂N₅O₃), 232 (C₁ ) , 20 (CgH^N^)

194 (Ο_γΗ₈Ν₅Ο₂), 179 (Ο_γΗ₇Ν₄Ο₂), 165 (ΟθΗ^Ο), 136 (C^N^,

122 (C„H_c0_o), 105 (C H O); IR (KBr): 1714.6, 1611.8 e

I 5 2 I 5

1591.7 cm ¹H-RMN (Me₂S0-d₆): $ 8.06 (s, 1H, H-2), 8.02-8.00 (m, 2H, Ar-H) 7.71 (t, 1H, Ar-H, J = 7-3 Hz), 7-57 (t, 2H, Ar-H, J = 7.4 Hz),

6.45 (br s, 2H, NH₂), 6.20 (d, 1H, H-1’, J = 4.3 Hz), 6.12 (d, 1H, 2’-0H, J = 5.5 Hz), 5.41 (t, 1H, H-3’, J = 2.9 Hz), 5.20 (t 1H, 5’-0H), J = 5.5 Hz), 4.43-4.37 (m, 1H, H-2’), 4.17-4.11 (m, 1H, H-4»), 3.95 (s, 3H, Pur-OCHg), 3.79-3972 (m, 2H, 5’).

Anál. Cale, para θΗ^qN^Og.0.60 CgHgO.0.05 CHClg:

Cale.: C, 53.92; H, 5.16; N, 15.84.

Determ.: C, 53.81; H, 5.10; N, 15.76.

e(i) 2-Amino-9-(3, 5 - d i - 0 -ter o-but11dime ti1si111-2-0-plvaloll- jp-D-ar abinof ur anos il) - 6 -metoxi - 9 H- pur ina

Foi pesada num frasco de fundo redondo de 250 ml seco à chama a 2-amino-9-[(3,5-di-0-terc-butildimetilsilil)-B-D-ara- 23

- binofuranosil]-6-metoxi-9H-purina (1,3 g, 2,5 mmol). adicionou-se 4-N,N-dimetilaminopiridina (0,05 g, 0,4 mmol) e o frasco foi purgado com árgon e selado com septo. Adicionou-se à mistura reaccional acetronitrilo seco (30 ml), trietilamina (5,0 ml) e anidrido piválico (0,6 ml, 3,0 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente. Após 160 horas, à mistura reaccional foi concentrada e o resíduo foi retomado em acetato de etilo (250 ml) e extraído com HgO (3 x 50 ml). 0 acetato de etilo foi recolhido, seco (MgSOjj) , filtrado, e concentrado para se obterem 2,0 g de óleo amarelo. Uma porção de 250 mg deste material foi purificado num Chromatotron (Harrison Scientific) equipado com um rótor de gel de sílica de 2 mm, eluido com acetona: CHClg (1:10). 0 produto do Chromatotron era uma goma transparente (0,176 g);

EM (EI): m/z 609 (C^H^N^Sip , 594 (C H^OgS^) , 552 (^C24^H42N5^o6SÍ2), 420 (C,, gH^N^Si) , 292 (gH^ gNgOg) , 261 (C₁₂H₁₅N₅O₂), 231 (C_wH_gN₅0₂), 194 (C^gN^), 166 (CgHgNgO),

159 (C_?H₁₅0₂Si), 57 (C_4g).

¹H-RMN (CDClg): S 7.88 (s, 1H, H-8), 6.40 (d, 1H, H-1’, J = 5.9 Hz), 5.30 (t, 1H, H-2’, J = 6.0 Hz), 4.85 (br s, 2H, NHH2Y), 4.65 (t, 1H, H-3’, J = 6.0 Hz), 4.04 (s, 3H, OCHg), 3-95-3.85 (m, 1H, H-4' e H-5'), 0.92 (s, 9H, OCOC(CHg)g), 0.89 (s, 9H, SiC(CHg)g, 0.88 (s, 9H, SiC(CHg)g), 0.13 (s, 3H, SiCHg), 0.11 (s, 3H, SiCHg), 0.08 (s, 3H, SiCHg), 0.07 (s, 3H, SiCHg).

Anál. Cale, para ^C28^H51^N5°6^Si2^:

Cale.: C, 55.14; H, 8.43; N, 11.48.

Determ.: C, 54.97; H, 8.42; N, 11.10.

e (ii) 2-Amino-6-metoxi-9-(2-0-pivaloil-p-D-arabinofur_an_osi_l_)_-9H-purina

Foi retomada em tetrahidrofurano (THF, 40 ml) e arrefecida num banho de gelo a 5°C a 2-amino-6-metoxi-9-(3,5-di-0-terc-butildimetilsilil)-2-0-pivaloil-p-D-arabinofuranosil)-9H-purina (1,3 g, 2,0 mmol). Adicionou-se ácido acético (0,06 ml, 10 ml), seguido de fluoreto de tetrabutilamónio como uma solu• ção 1 M em THF (10 ml, 10 mmol). Após 24 horas a 5°C, a mistura . reaccional foi diluída com CHClg (40 ml) e passada num leito de

gel de sílica (230-400 malhas, 5x5 cm) com 1:1 de acetona: CHClg (500 ml). 0 filtrado foi concentrado e aplicado a uma coluna de gel de sílica (230-400 malhas, 5 x 18 cm) eluída com acetonazCHclg (1:2, 1,5 1) seguido de acetonasCHCl^ (1:1, 1,5 1). Foi obtido um produto puro da coluna como pó branco, 0,76 g (100%) após secagem e ele revelou ser o derivado de 2’-0-pivaloilo pretendido: p.f.: 83-85°C (não corrigido); UV ^'χ (t): pH = 7.00: 279-7 nm (8,100), 247-9 nm (8,800); 0.1 N HCl:

286.6 (7,300), 244.7 (6,200); 0.1 N NaOH: 279.7 (8,000), 248.8 (7,900); EM (EI): m/z 250 (_QH₁^N^O^), 232 (θΗ^), 217 (C_WH₁₇N₅), 208 (C₈H_1qN₅O₂), 194 (C^gN^) , 165 (CgH^O),

135 (WA), 101 (C H O ), 85 (C H O); IR (KBr): 1734.2, 1616.3 e 2589.4 cm^-1;

^H-RMN (Me₂S0-d₆): δ 7.97 (s, 1H, H-2), 6.47 (br s, 2Η, NH₂),

6.26 (d, 1Η, Η-1», J = 5.9 Hz), 5.79 (d, 1Η, 3’-0H, J = 5.3 Hz) 5.23 (dd, 1H, H-2», J_{p 2}, = 5.9 Hz, J₂, = 5.2 Hz), 5.06 (5,

1H, 5’-0H, J = 5.5 Hz),’4.37 (ddd, 1H, H-3', Jg, ₃i__0H= 5.3 Hz, J₂, ₃, = 5.2 Hz, J₃, 4,= 6.9 Hz), 3.92 (s, 3H, Pur-OCHg), 3.84-3.79 (m, 1Η, H-4’), 3-68-3.62 (m, 2Η, H-5’).

Anál. Cale, para C/gH^NgOg .0.40 CHCl^

Cale.: C, 45.90; H, 5.50; N, 16.32

Determ.: C, 46.03; H, 5.69; N, 16.03.

f(1) 2-Amino-9-(2-0-benzoil-3,5-di-0-terc-butildimetilsilil-p-D-arablnofuranosil)-6-metoxi-9H-purina

Foi pesada num frasco de fundo redondo de 250 ml seco à chama a 2-amlno-9-E(3,5-di-0-terc-butildimetilsilil)-p-D-arabinofurano-sil]-6-metoxi-9H-purina (1,3 g, 2,5 mmol). Adicionou-se 4-N,N-dimetilaminopiridina (0,05 g, 0,4 mmol) e anidrido benzóico (0,67 g, 3,0 mmol) e o frasco foi purgado com árgon e selado com um septo. Adlcionou-se depois acetronltrilo seco (30 ml), trietilamina (5,0 ml), e agitou-se à temperatura ambiente. Após 18 horas a mistura reaccional foi concentrada e o resíduo foi retomado em acetato de etilo (250 ml) e extraído com H20 (3 x 50 ml). 0 acetato de etilo foi seco (MgS04b ^fil_

trado, e concentrado para se obterem 1,76 g de um óleo amarelo. Uma porção de 250 mg deste material foi purificada num Chromatotron (Harrison Scientific) equipado com um rotor de gel de sílica de 2 mm. 0 rótor foi eluido com acetona: CHCl^ (1:10).

produto do Chromatotron era um sólido branco (0,21 g): p.f.: 129-131°C (não corrigido); EM (EI): m/z 629 () , 572 (C₂₆H₄₇N₅O₆Si₂), 440 (C^H^N^Si) , 312 () ,

261 (C^H^O^ip , 231 (C₉H_lgO₃Si₂) , 194 ((^ΗθΝ^), 166 (CgHgNj-O), 105 (C_?H₅0).

¹H-RMN (CDClg): £ 8.07 (s, 1H, H-8), 7.67 (dd, 2H, Ar-H, J =1.0

Hz, t	I =	8.2	Hz), 7.50 (tt,	1H, Ar-H,	J = 2.0	Hz, J =	8.0 Hz) ,
7.30	(t,	2H	, Ar-H, J = 7.5	Hz) , 6.48	(d, 1H,	H-1 ’ , J	= 5.5 Hz),
5.63	(t,	1H	, H-2’, J = 5.5	Hz), 4.74	(t, 1H,	H-3’, J	= 5.6 Hz),
4.68	(br	s,	2H, NH2), 3.98	(s, 3H, -	OCH3), 4	.00-3.80	(m, 3H,
H-4’	e H	-5'	), 0.92 (s, 9H,	-síc(ch3)	), 0.88	(s, 9H,	-síc(ch3)3)
0.12	(s,	3H	, -sí(ch3)), 0.	09 (s, 3H,	-sí(ch3	)) , 0.08	(s, 3H,

-SKCHg)), 0.06 (s, 3H, -SKCHg)).

Anál. Cale, para (^θΗ^γΝ^Οθδ^:

Cale.: C, 57.20; H, 7.52; N, 11.12.

Determ.: C, 57.42; H, 7.57; N, 11.12.

f (ii) 2-Amino-9-(2-0-benzoil-p-D_-ar_a_bi_nofuranosil)-6-metoxi-9H-purina

Foi retomada em tetrahidrofurano (THF, 40 ml) e arrefecida num banho de gelo a 5°C, a 2-amino-9-(2-0-benzoil-3,5-di-0-terc-butildimetilsilil)-j3-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (1,26 g, 2,0 mmol). Adicionou-se ácido acético (0,06 ml, 10 mmol), seguido de fluoreto de tetrabutilamónio (TBAF) como solução 1 M THF (10 ml, 10 mmol). Após 18 horas a 5°C, a mistura reaccional foi diluída com CHCl^ (40 ml) e passada por um leito de gel de sílica (230-400 malhas, 5x5 cm) com 1:1 de acetona: CHClg (500 ml). 0 filtrado foi concentrado e aplicado a uma coluna de gel de sílica (230-400 malhas, 5 x 18 cm). A coluna foi eluída com acetona: CHCl^ (1:2) seguido de acetona: CHClg (1:1, 1,5 1). Foi obtido um produto puro da coluna correspondendo ao material com um R_f =0,33 em acetona:

CHClg (1:1). Este material era um pó branco 0,74 g (90%) após secagem e revelou para ser o derivado desejado de 2’-0-benzoilo : p.f.: 82-84°C (não corrigido); UV (£): pH = 7.00: 279.1 nm (8,600), 237.5 nm (17,800); 0.1 N HC1: 277.8 (10,000), 245 (sh) (10,800); 0.1 N NaOH: 286.1 (7,600), 236.4 (17,000). EM (EI): m/z 401 (M, C^H^N^), 371 (H., N^) , 3.12 (C₁₅H₁₄N₅O₃), 279 (Ο_1ΊΗ₁₃Ν₅Ο₄), 237 (C^H^O^, 220 (C^H^), ^{208 (C}8^H10^N5°2⁾’ ^{194 (C}7^H8^N5°2⁾’ ^{165 (C}6^H7^N5^O)’

135 (Cr-Hr-Nr-), 105 (C_H_O); IR (KBr): 1725.3, 1613.6 e 5 5 5 f 5

1588.9 cm1;

^jH-RMN (Me₂SO-d₆); £ 8.04 (s, 1H, H-2), 7-70-7-57 (m, 3H, Ar-H), 7.47-7.39 (m, 2H, Ar-H), 6.44 (br s, 2H, NH₂), 6.39 (d, 1H,

H-1’, J = 5.6 Hz), 5.90 (d, 1H, 3’-0H, J = 4.9 Hz), 5.48 (t,1H,

H-2’, J = 5.3 Hz), 5.07 (t, 1H, 5’-0H, J = 5.6 Hz), 4.51 quarteto aparente, 1H, H-3’, J₃, ₃,-0H “ ^·9 Hz, , ₃, = 5.6

Hz, J ₄, = 5.1 Hz), 3.87 (s, 3H. Pur-OCH ), 3.94-3·’δ3 (m, 1H, H-4’), 3.77-3.66 (m, 2H, H-5’).

Anál. Cale, para C^ θΗ^.0.20 C^gO.O.óO CHC1₃:

Cale.: C, 48.53; H, 4.41; N, 14.82

Determ.: C, 48.68; H, 4.54; N, 14.96 g( 1) S-Àmi-hP·-?-_(5-0-te_rç_-bu_tildimet_ilsiXil·-^^^^ sll)-6-metoxi-9H-purlna

Adicionou-se a 9-(p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purlna (2,0 g, 6,7 mmol) a um frasco de fundo redondo de 500 ml e secou-se por co-evaporação com piridina (2 x 50 ml). Foi adicionado cloreto de terc-butildimetilsililo (1,2 g, mmol), e o frasco foi purgado com árgon e equipado com um septo. Adicionou-se acetronltrilo seco (20 ml) e piridina seca (20 ml) por meio de uma seringa e agulha. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. 0 ensaio de TLC em gel de sílica com metanol: CHC1₃ (1:10) revelou que todo o material inicial (R^ = 0,05) foi consumido e que uma mancha R_f mais alta se formou (Rf = 0,31). A mistura reaccional foi tratada com etanol (2 ml) e concentrada a baixa pressão. 0 resíduo amarelo

foi purificado numa coluna de gel de sílica (230-400 malhas, x 188 cm) com metanol: CHClg (1:20) como solvente eluidor. A ooluna deu 1,6 g (3,9 mmol) de um sólido branco após secagem: p.f. = 101-103°C (não corrigido): EM (El): m/z 412 (Μ + H, C₁₇H_3QN₅O₅Si), 396 (C₁₆H₂₆N₅O₅SÍ), 354 (C^H^N^Si) , 208 (C_gH₁₀N₅0₂), 194 (0_?Η₈Ν₅0₂), 178 (C^Hgl^O), 166 (CgHgNgO),

165 (Ο₆Η_γΝ₅Ο), 135 (Ο^Η,-Ν^), 57 (C^Hg); ¹H-RMN (Me^O-dg, 300MHz) 7-88 (s, 1H,H-8), 6.49 (br.s, 2H,NH₂), 6.14 (d,1H,H-1», J = 4.7 Hz), 5.67 (d, 1H,2’- ou 3'0H, J = 5.0Hz), 5.57 (d,1H, 2’- ou 3ΌΗ, J= 4.4Hz), 4.15-4.09 (m, 2H, H-2 ’ e 3’), 3.98 (s, 3H, -OCHg), 3.87-3.76 (m, 3H, H-4’ e 5’), 0.90 (s, 9H, (CHg)g CSi), 0.07 (s, 6H,(CHg)₂Si);

Anál. Calc. para C^H^N^O^Si:

Calc.: C, 49-62; H, 7.10; N, 17.02

Determ.: C, 49.36; H, 7-06; N, 16.88 g(ii) 9.-.(2,3-di-0~.A.cetll-5-0-terc-butildlmetilsilil-p-D-arabino fur anos11)-2-amino-6-meto xl-9H-purina

Foi pesada num frasco de fundo redondo de 100 ml seco à chama equipado com barra de agitar a 2-amino-9-[(5-0-terc-butildimetilsilil-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (1,5 g, 3j5 mmol). Foi adicionado acetronitrilo anidro (25 ml) seguido de trietilamina (5 ml). Adicionou-se 4-N,N-dimetilaminopirina (0,05 g, 0,4 mmol) e o frasco foi purgado com árgon e selado com um septo. Foi adicionado anidrido acético (0,8 ml,

8,5 mmol), destilado puro) à mistura por meio de uma agulha e seringa. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente (20°C) e monitorada pelo ensaio de TLC em gel de sílica com 1:20 de metanol: CHClg. Após 18 horas todo o material inicial (R_f = 0,34) foi consumido e formou-se um produto de grande mancha (R_f = 0,77).

A mistura reaccional foi concentrada e o resíduo foi retomado com acetato de etilo (250 ml) e extraído com H₂° (3 x 50 ml). A fase orgânica foi seca com MgSO^ (anidrido), filtrado, e concentrado para se obterem 1,7 g de um óleo amarelo. Uma porção de 210 mg deste material foi purificado num Chromatotron (harrison Scientific) equipado com um rotor de gel de sílica de 2 mm, eluído com acetona: CHClg (1:10). 0 rótor foi eluido com acetona: CHC1_O (1:10). Obteve-se um produto puro que era um sólido branco (0,16 g, 0,33 mmol) após secagem: p.f. = 58-60 C (não corrigido); EM (El): m/z 497 (C^H^Nj-O^Si), 438 (^C17^H24^N5°7^Sl)’ ³⁹⁶ (^C15^H22^N5°6^Si)’ ³⁷⁸ (C>|₅H₂₀N₅O₅Si), 336 (C₁₃H_1gN₅O₄SÍ), 318 (C₁₃H₁₆N₅O₃Si), 273 (C_1]H₁gOgSi), 250 (C₁₀H₁₂N₅0₃), 208 (C₈H_1qN₅0₂), 194 (C^HgN^), 165 (CgH^O),

135 (C₅H₅N₅).

¹H-RMN (CDClg, 200 MHz) 5* 7-89 (s, 1H, H-8), 6.38 (d, 1H, H-1', J = 4.6 Hz), 5.53-4.49 (m, 2H, H-2’ e 3’), 4.85 (br. s, 2H, NH₂), 4.05 (s, 3H, -OCHg), 4.04-4.00 (m, 1H, H-4’), 3.94-3.91 (m, 2H, H-5’)j 2.12 (s, 3H, CíOCHg), 1.85 (s, 3H, C(O)CH₃), 0.92 (s, 9H, 31C(CH₃)₃), 0.10 (s, 6H, SitCH^).

Anál. Cale, para C„.H„,.N_r_O_r7Si 2Ί 33 5 f

Cale.: C, 50.89; H, 6.71; N, 14.13

Determ.: C, 50.70; H, 6.75; N, 13.91.

g(iii) 9-(2,3-di-0-Acetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina

Foi retomada em tetrahidrofurano THF (40 ml) e arrefecida num banho de gelo a 5°C o intermediário sililado 9-(2,3-di-O-Acetil-5-0-terc-butildimetilsilil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina (1,4 g, 2,9 mmol). Adicionou-se ácido acético (0,25 ml, 16 mmol), seguido de fluoreto de tetrabutilamónio (TBAF) como uma solução 1 M em THF (10 ml, 10 mmol) Após 28 horas a 5°C, o ensaio de TLC em acetona: CHClg (1:1) revelou que o material inicial foi consumido (R_f = 0,77) e formou-se um produto principal de manchas com R^ inferior (R^ = 0,32). Ensaio de TLC em metanol: CHClg (1:10) mostrou uma mancha a Rf = 0,41.

A mistura reaccional foi feita passar por um leito de gel de sílica (230-400 malhas, 3x5 cm) com 1:1 de acetona: CHClg (500 ml). 0 filtrado foi concentrado e purificado num

Chromatotron equipado com um rotor de 4 mm e eluído com acetona: CHClg (1:1). 0 produto obtido (0,95 g) foi contaminado com hidróxido de tetrabutilamónio. 0 produto foi purificado num rotor Chromatotron de 4 mm com o mesmo solvente que originou um produto puro 0,877 g (2,3 mmol):

p.f.: 100-102°C (não corrigido):

^UV\náx ^{pH = 7}·^θ0: 279-0 nm (8,200), 247-3 nm (9,800); 0.1

N HC1: 286.7 (8,500), 242.5 (6,100); 0.1 N NaOH: 279-3 (8,200), 248.9 (7,700);

EM (El): m/z 381 (^0 ) , 322 (C₁ ^N^ ) , 292 (0ι₂ ^η12^Ν5°4), 194 (Ο_?Η₈Ν₅Ο₂), 165 (CgH^O), 135 (C^N^, (C₂H₃O);

¹H-RMN (Me₂SO-d₆, 200 MHz): S 8.00 (s, 1H, H-8), 6.52 (br, s, 2H, NH₂), 6.30 (d, 1H, H-1’, J = 4.6 Hz), 5.43-5.35 (m, 2H,

H-2’ e 3’), 5.11 (t, 1H, 5’-0H, J = 5.8 Hz), 4.04 (dd, 1H,

H-4’, J = 4.5 Hz, J = 8.6 Hz), 3.94 (s, 3H. Pur-0CH₃), 3.71-3.62 (m, 2H, H-5’), 2.09 (s, 3H, C(O)CH₃), 1.80 (s, 3H, C(0)CH₃);

IV (KBr) 1748.4, 1613-1 e 1588.5 cm¹;

Análise calculada para C,_CH,„N_c0„.0.40 CHC1_: C, 43.11; H,

I b I y b I 3

4.56; N, 16.32.

Determ.: C, 43.16: H, 4.69; N, 16.21.

h(i) 2-Amino-9-(2,3,5-tri-O-terc-butildimetilsilil-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina

Adicionou-se a 2-amino-9-(^-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (10 g, 34 mmol) a um frasco de fundo redondo de 500 ml e secou-se por co-evaporação com piridina (2 x 50 ml). Foi adicionado imidazole (11 g, 160 mmol) seguido de cloreto de terc-butildimetilsililo (11 g, 74 mmol). 0 frasco foi purgado com árgon e equipado com um septo. Adicionou-se dimetilformamida seca (DMF) (40 ml) por meio de uma seringa e agulha. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. 0 ensaio de TLC em gel de sílica com acetona: CHC1₃ (1:10) revelou que cerca de 20$ do material inicial permanecia

(ϊί^ = 0,05) e formaram-se três manchas com R mais alto a 0,18, 0,41 e 0,75. Deste modo, foi adicionado mais cloreto de terc-butil-dimetilsililo (1,0 g, 6,6 mmol) e continuou-se a agitação durante mais 24 horas. 0 ensaio de TLC no mesmo solvente mostrou depois que todo o material inicial foi consumido. A DMF foi depois removida sob pressão reduzida e o resíduo foi repartido entre acetato de etilo (350 ml) e Η,,Ο (100 ml e 3 x 50ml). As fases aquosas foram de novo extraídas com acetato de etilo (100 ml) e a fase orgânica combinada foi seca (MgSO^), filtrada e concentrada. 0 produto bruto foi purificado em coluna rápida de gel de sílica (5 x 25 cm) eluindo com um gradiente de acetona em CHClg de 1:20 a 1:2. Foram obtidas três fracções do produto correspondendo às três manchas observadas pelo ensaio de TLC. A fracção R_f = 0,75 originou 4,0 g (6,2 mmol, 19$) de um sólido branco identificado como sendo um produto trisililado:

p.f. = 63-65°C (não corrigido), UV \ - (95$ etanol) : 249.2 nm ’ >'max e 281.3 nm: EM (El) : m/z 640 (M, ^Η,-,-Ν,-Ο,-βΙ^), 582 (C^H^gNgOgSig) , 450 (C,,gH^O^) , 322 (C,,^N^Si) , 222 (C₈H_gN₅O₃), 194 (C_?H₈N₅O₂), 166 (CgHgl^O), 133 (CgH^OSi),

115 (C₆H₁₅Sí), 57 (C^Hg);

¹H-RMN (CDClg, 200 MHz) 7-82 (s, 1H, H-8), 6.30 (d, 1H, H-1’,

J = 3.5 Hz), 4.82 (br. s, 2H, NH₂), 4.31 (m, 1H, H-3’), 4.10 (dd, 1H, H-2’, J₁, ₂, = 3.5 Hz e J₂, g, = 1.7 Hz), 4.06 (s, 3H, -OCHg), 4.00-3.90 (m, 1H, H-4’), 3.84-3.80 (m, 2H, H-5’), 0.93 (s, 9H, (CHg)gCSi), 0.90 (s, 9H, (CHg)gCSi), 0.75 (s, 9H, (CHg)gCSi), 0.14 (s, 6H, (CH )₂Si), 0.07 (s, 3H, (CHg)Si), 0.06 (s, 3H, (CH )Si), -0.09 (s, 3H, (CHg)Si), -0.38 (s, 3H,(CHg)Si);

Anál.	Cale.	para C2gH	57N5°5	Sig!
Cale.:	c,	54.42; H,	8.98;	N,	10.94
Determ	C,	54.36; H,	8.86;	N,	10.87

h(ii) 2-Amino-9-(2,3-di-O-tero-butildimetilsilil-p-D-arabinofuranosil )-6-metox:i-9H-purina

Foi adicionada a um frasco de fundo redondo de 250 ml e tratada com 80$ de ácido acético aquoso a 2-amino-9-(2,3,5- 31 -

- tri-O-ter e-but ildimetilsilil-j3-D-arabinof uranosil)-6-metoxi-9H-purina (2,0 g, 3,1 mmol). A solução foi aquecida a 50°C durante 20 horas. 0 ensaio de TLC em acetona: CHCl^ (1:10) mostrou que todo o material foi consumido (R_f = 0,59) e só ficou o produto (R_f = 0,19). A mistura reaccional foi concentrada no rotoevaporador com várias adições de F^O (5 ml) para remover os últimos vestígios de ácido acético, e colocado numa bomba de vazio durante duas horas. 0 resíduo foi purificado em coluna de gel de sílica (5 x 18 om, 230-400 malhas) com metanol: CHCl^ (1:30) oomo solvente de eluição. As fracções contendo o produto originaram 1,2 g (2,3 mmol) de um sólido branco identificado como sendo o derivado de 2,3 dissililado: p.f. - 93-95°C (não corrigido); EM (Ei) : m/z 526 (C₂₃H^^N₃O₃Si₂), 510 (^C22^H40N5^o5SÍ2), 468 (C^H^N^Sip , 322 (C^^N^Si), 306 (C₁₃H₂₀N₅0₂Si), 264 (C_wH_i4N₅O₂Sí), 208 (CgH^N^), 194 (C_?H₈N₅O₂), 166 (C₆H_gN₅O), 115 (CgH^Si), 57 (C^Hg);

¹H-RMN (CDC1 , 200 MHz) 7.82 (s, 1H, H-8), 6.45 (br.s, 2H, NH^, 6.14 (d, 1H, H-1», J = 4.1 Hz), 4.99 (t, 1H, 5’-0H, J = 4.0Hz), 4.29 (t, 1H, H-3’, J = 2.9 Hz), 4.22 (t, 1H, H-2’, J = 4.5 Hz), 3.93 (s, 3H, -OCHg), 3-82-3.76 (m, 1H, H-4’), 3-62-3.58 (m, 2H, H-5’), 0.89 (s, 9H, (CH₃)₃CSi), 0.64 (s, 9H, (CH^CSi), 0.13 (s, 6H, (CH₃)₂Si), -0.06 (s, 3H, (CH^Si), -0.39 (s, 3H, (CH₃)Si);

Anál. Calo, para ^C23^H43^N5°5^SÍ2^:

Calo.: C, 52.54; H, 8.24; N, 13-32

Determ.: C, 52.37; H, 8.29; N, 13-22 h(i i i) 2-Amino-9-(2,3-di-0-1 erc-b u t i1d ime tils il i1-5-0-i s o but ir i1-p-D-ar ab ino fur ano s i1)-6-me to xi-9H-pur ina

Foi pesada num frasco de fundo redondo de 250 ml seco à chama a 2-amino-9-(2,3-di-0-terc-butildimetilsilil-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (1,3 g, 2,5 mmol). Adicionou-se 4-N,N-dimetilaminopirina (0,05 g, 0,4 mmol) e o frasco foi purgado com árgon e selado com um septo. Foi adicionado acetronitrilo seco (25 ml) e trietilamina (5 ml). 0 frasco foi arrefecido num banho de gelo e adicionou-se à mistura reaccio- 32 -

nal anidrido isobutírico (0,5 ml, 3,0 mmol). A mistura reaccional foi sujeita a um aquecimento lento até se atingir a temperatura ambiente (20°C). Após 22 horas a reacção foi monitorada pelo ensaio de TLC em gel de sílica com metanol: CHCl^ (1:20). Não ficou material inicial (R_f = 0,27) e formou-se uma grande mancha de produto (R_f = 0,63).

A mistura reaccional foi concentrada e o resíduo foi retomado em acetato de etilo (250 ml) e extraído com H₂0 (3 x 50 ml). A fase de acetato de etilo seca com MgSO^ (anidro), filtrada e concentrada para se obterem 1,5 g de um óleo amarelo. Uma porção de 200 mg deste material foi purificado num Chromatotron (Harrison Scientific) equipado com rótor oom 2 mm de gel de sílica. 0 resíduo foi eluido com acetona CHClg (1:10) produzindo 0,16 g (0,27 mmol) de um sólido branco após secagem p.f. = 56-58°C (não corrigido); EM (El): m/z 596 (C₂₇H_4gN₅O₆Si₂), 538 (C₂₃H₄₀N₅O₆Si₂), 322 (^ ^N^Si) , 318 (C₁₃H₂₄O₅Si^, 264 (C_1QH₁₆N₅O₂SÍ), 194 (C^gN^), 166 (C₆H_gN₅O), 115 (C₆H₁₅Si).

¹H-RMN (CDC1₃. 200 MHz) £'7.84 (s, 1H, H-8), 6.34 (d, 1H, H-1 ’ , J = 3.3 Hz), 4.87 (br, s, 2H, NH₂), 4.39-4.27 (m, 2H, H-2’ e 3’), 4.20-4.10 (m, 3H, H-4» e 5’), 4.06 (s, 3H, -OCH₃), 2.58 (septet. 1H, -0C(0)CH(CH₃)₂, J = 7.0 Hz), 1.17 (dd, 6H, -OC(O)CH(CH₃)₂, J= 7-0 Hz, J = 1.9 Hz), 0.94 (s, 9H, -SiCÍCH^ 0.77 (s, 9H, -SiC(CH₃)₃), 0.15 (s, 3H, -Si(CH₃)), 0.13 (s, 3H, -Si(CH₃)), 019 (s, 3H, -Si(CH₃)), 0.39 (s, 3H, -SiíCHg)).

Anál. Cale, para C^H^NgOgS^ . 0.05 C^gO. 0. lOCHClg :

Cale.: C, 53-59; H, 8.15; N, 11.47

Determ.: C, 53-58; H, 8.23; N, 11.40 h(iv) 2-Amino-9-(5-0-i_s_obutiril-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi_-9H-purina

Foi retomado em THF (40 ml) o intermediário sililado de 2-amino-9-(2,3-di-0-tercbutildimetilsilil-5-0-isobutiril-j3-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (1,2 g, 2,1 mmol) e arrefecido num banho de gelo a 5°C. Adicionou-se ácido acético

- 33 ₇ (0,25 ml, 16 mrnol), seguido de fluoreto de tetrabutilamónio como solução 1 M em THF (6 mrnol). após 70 horas a 0-5°C, o ensaio de TLC em acetona: CHC1_O (1:1) revelou que não ficou material o inicial (Rf = 0,91 ) e formou-se uma nova mancha do produto (Rf = 0,17) com Rf mais baixo.

Fez-se passar à mistura reaciional através de um leito de gel de sílica (230-400 malhas 2x8 cm) com 1:1 de acetona: CH₂C1₂ (1,1 D· 0 filtrado foi concentrado para um resíduo de cor dourada clara. Este resíduo foi purificado no Chromatotron equipado com um rótor de 4 mm com acetona: CH2CI2 (1:1) como solvente de eluição. Obteve-se um sólido branco (0,67 g) que foi contaminado com hidróxido de tetrabutilamónio por 1

H-RMN. A repurificação com o mesmo sistema de solventes produziu um produto (0,57 g) que ainda continha uma pequena quantidade de hidróxido de tetrabutilamónio. A purificação final num rótor Chromatotron de 4 mm com acetato de etilo produziu 0,44 g (1,2 mrnol) de produto puro após secagem:

p.f.: 113-115°C (não corrigido);

^UVNmáx ^(Ê;)^! PH=7.OO: 278.9 nm (7,800) e 247.6 nm (8,300); 0.1 N HC1: 287.5 (7,000) e 242.8 (5,700); 0.1 N NaOH: 279.0 (7,600) e 248.5 (7,100);

EM (El): m/z 208 (CgH^N^), 194 (C^HgN^), 178 (Ο,-,ΗθΝθΟ),

165 (0₆Η_?Ν₅0), 135 (C₅H₅N⁵), 71 (C^O);

¹H-RMN (300 MHz, Me₂S0-dg): S 7.84 (s, 1H, H-8), 6.48 (br, s, 2H, NH₂), 6.16 (d, 1H, H-1’, J = 4.0 Hz), 5.77 (d, 1H, 2’ ou 3’ OH, J = 4.6 Hz), 5.68 (d, 1H, 2’ ou 3’- OH, J = 3.9 Hz), 4.35-4.23 (m, 2H, H-2’ e 3’), 4.11-4.09 (m, 2H, H-5’), 3.96 (s, 3H, Pur-OCH^), 3.95-3.92 (m, 1H, H-4’), 2.55 septet, 1H,

-C(0)CH(CH₃)₂, J = 7.0 Hz). 0.08 (dd, 6H, -C(O)CH(CH₃)₂, J =

7.0 Hz, J = 1.8 Hz);

IV (KBr) 1734.3, 1616.0, 1592.5 cm¹;

Análise calculada para C^H^N^Og.OGO C^HgO₂: C, 49.29; H, 5.92; N, 18.19

Determ.: C, 49.09; H, 5.97; N, 18.16

i) 9-(,2,3,5-tri-0-Acetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina

Foi adicionada a um frasco de fundo redondo de 250 ml a 2-amino-9-(p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (2,5 g,

8,4 mmol) e secou-se por co-evaporação com piridina (2 x 25ml).

resíduo foi seco numa bomba de vazio durante duas hoeas. Adicionou-se 4-N,N-dimetilaminopiridina (0,05 g, 0,4 mmol) e o frasco foi purgado com árgon e selado com um septo. Foi adicionado acetronitrilo seco (50 ml) e trietilamina (8,5 ml) e anidrido acético (2,6 ml, 27,7 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. 0 ensaio de ensaio de TLC em gel de sílica com acetona: CHCl^ (1:10) revelou que todo o material inicial reagiu (R^ = 0,05)e que uma mancha de R^ mais alta se formou a R^ = 0,18.

A mistura reaccional foi arrefecida com etanol (2 ml) e concentrada à secura. 0 resíduo foi repartido entre acetato de etilo (300 ml) e 5$ de NaCO^ (50 ml). A fase orgânica foi lavada com H₂0 (2 x 50 ml) e as fases aquosas combinadas foram outra vez extraídas com acetato de etilo (100 ml). Finalmente, os extractos orgânicos combinados foram seoos (MgSO^), filtrados e concentrados. 0 produto bruto foi purificado numa coluna de gel de sílica (5 x 18 cm) eluído com acetona: CHCl^ de 1:1. 0bteve-se um produto que era um sólido branco, 3,38 g (7,98 mmol) após secagem. Este material foi recristalizado a partir de acetato de etilo e heptano para se obterem 2,97 g (7,0 mmol) após secagem:

p.f. = 178-180°C (não corrigido):

UVX (C: pH=7.00: 279.5 nm (8,500), 247.6 nm (9,100); 0.1 N ma x

HCl: 287.2 (7,600), 244.4 (6,700); 0.1 N NaOH: 278.9 (8,900), 249.0 (8,300);

EM (El): m/z 424 (M+H, C^H^^Og), 380 (C,, gN^), 364 ^{259 194 166 (C}6^H8^N5^O)’ 165 (C₆H_?N₅O), 149 (C₅H₃N₅O), 139 (0_γΗ_γ0₃) , 42 (C^O);

¹H-RMN (Me₂S0-d₆, 200 MHz): £ 7-92 (s, 1H, H-8), 6.54 (br, s,

2H, NH₂), 6.35 (d, 1H, H-1’, J = 4.6 Hz), 5.46-5.40 (m, 2H,

H-2’ e 3’), 4.41-4.20 (m, 3H, H-4’ e 5’), 3-94 (s, 3H, Pur-OOHg)

2.10 (s, 3H, C(O)CH₃), 2.03 (s, 3H, C(O)CH₃), 1.80 (s, 3H, C(0)CH₃);

Análise calculada para C^H^Nj-Og: C, 48.23; H, 5.00; N, 16.54 Determ.: C, 48.32; H, 4.93; N, 16.24.

j) 9-(,3 >5-di-0-Aeetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina

Foi adicionada a um frasco de fundo redondo de 250 ml a 2-amino-9-(2,3,5-tri-0-acetil)-jp-D-arabinofuranosil)-6-metoxl-9H-purina (2,0 g, 4,72 mmol) juntamente com acetato de sódio (1,2 g, 14,2 mmol) e cloridrato de hídroxilamina (0,98 g, 14,2 mmol). 0 frasco foi purgado com árgon e equipado com vareta de agitar e septo. Adicionou-se piridina seca (25 ml) e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 7 horas. 0 ensaio de TLC em gel de sílica com acetona: CHC1₃ (1:10) revelou que o material inicial reagiu (R^, -0,68) e que uma mancha inferior se tinha formado a R^ - 0,47. A mistura reaccional foi tratada com acetona (20 ml), concentrada à secura, retomada outra vez em acetona (100 ml) e concentrada. 0 resíduo foi retomado em acetona (100 ml) e filtrado. 0 precipitado foi lavado com acetona e o filtrado foi concentrado para se obter um óleo amarelo. 0 produto bruto foi purificado numa coluna de gel de sílica (5 x 18 cm) eluido com acetona: CH₂C1₂ (1:1). 0 produto foi obtido oomo um sólido branco, 1,46 g (3,83 mmol) após secagem. 0 ensaio H RMN revelou que este material era uma mistura de 3_}5-dicetato e de 2,5-dicetato. Estes dois produtos foram separados por recristalização a partir de diclorometano e heptano com o 2,5-dicetato precipitando primeiro. 0 3,5-dicetato foi obtido como cristais brancos, 0,796 g (2,08 mmol) após duas recristalizações: p.f. = 109-110°C (não correcto): UVk < (£): pH = 7.00: 278.9 nm (8,400), 247.9 nm (9,000); 0.1 N HC1: 286.9 (8,300), 244.5 (7,300); 0.1 N NaOH: 279.0 (8,500), 247.6(8,000) EM (El): m/z 381 (M+H, C^H^N^), 338 (gNgOg), 194 (C₇H₈N_gO₂), 166 (CgHgNgO), 165 (CgH^O), 135 (C^Ng), 43 (C₂H₃O);

¹H-RMN (Me₂S0-d₆, 200 MHz); $ 7.89 (s, 1H, H-8), 6.50 (br. s,

2Η, ΝΗ₂), 6.18 (d, 1Η, H-1’, J= 4.9 Hz), 6.14 (d, 1H, 2’-0H, J= 4.1 Hz), 5.10 (t, 1H,H-3', J = 2.7 Hz), 4.42-4.23 (m, 3H, H-2’ e 5’), 4.16-4.08 (m, 1H, H-4’), 3.95 (s, 3H, Pur-OCHg), 2.10 (s, 3H, C(O)CHg), 2.01 (s, 3H, C(O)CHg);

Anál. Cale, para C,-Η,_ηΝ_κ0„.0.10CH_oCl_o:

19 5 7 2 2

Cale.: C, 46.52; H, 4.96; N, 17-96 Determ.: C, 46.31: H, 5.13; N, 17.70.

k) 9__(_2_, 5 - di- 0 - Ac e t i1-p-D-arabino furano s il) -2-amino-6-meto xi-9H-purina

Foi adicionada a um frasco de fundo redondo de 250 ml a 2-amino-9-(2,3,5-tri-0-acetil)-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (2,0 g, 4,72 mmol) juntamente com acetato de sódio (1,2 g, 14,2 mmol) e cloridrato de hidroxilamina (0,98 g, 14,2 mmol). 0 frasco foi purgado com árgon e equipado com vareta de agitar e septo. Adicionou-se piridina seca (25 ml) e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 7 horas. 0 ensaio de TLC em gel de sílica eom aeetona: CHClg (1:1) revelou que o material inicial reagiu (R^, - 0,68) e que uma mancha inferior se tinha formado a R^ - 0,47· A mistura reaccional foi tratada com aeetona (20 ml) concentrada à secura, retomada outra vez em acetona (100 ml) e concentrada. 0 resíduo foi retomado em acetona (100 ml) e filtrado. 0 precipitado foi lavado com acetona e o filtrado foi concentrado para se obter um óleo amarelo. 0 produto bruto foi purificado numa coluna de gel de sílica (5 x 18 cm) eluído com acetona: CH₂C1₂ (1:1). 0 produto obtido era um sólido branco, 1,46 g (3,83 mmol) após secagem. 0 ensaio 1

H RMN revelou que este material era uma mistura de 3,5-dicetato e de 2,5-dieetato. Estes dois produtos foram separados por recristalização a partir de diclorometano e heptano com o 2,5-dicetato precipitando primeiro. 0 2,5-dicetato foi obtido como cristais brancos, 0,256 g (0,67 mmol) após duas recristalizações: p.f. = 210-212°C (não corrigido): UV\ ' (£): pH - 7.00:

279.2 nm (8,200), 248.3 nm (8,700); 0.1 N HCI: 287.1 (7,800),

244.3 (6,200); 0.1 N NaOH: 278.7 (8,600), 248.7 (7,900); EM (El): m/z 381 (M+H, C^H^N^), 338 (C^H^^Og) , 250

(C_1QH₁₂N₅O₃), 217 (C_gH₁₃O₆), 194 (^ΗθΝ^), 166 (CgHgl^O),

165 (Ο₆Η_γΝ₅Ο), 157 (C^O^), 139 (Ο^Οθ), 135 (^ΗθΝθ), 43 (C₂H₃0);

¹H-RMN (Me₂S0-dg, 200 MHz): S 7.89 (s, 1H, H-8), 6.51 (br. s, 2H, NH₂), 6.32 (d, 1H, H-1’, J = 5.7 Hz), 5.98 (d, 1H,3’-0H,

J = 3.9 Hz), 5.18 (t, 1H, H-2’, J = 2.7 Hz), 4.44-4.22 (m, 3H, H-3’ e 5’), 4.07-3-97 (m, 1H, H-4’), 3-94 (s, 3H, Pur-OCHg,

2.02 (s, 3H,	,C(O)CHg),	1.78	(s,	3H,C(O)CH3);
Anál. Cale.	para C^H	19N5°7	. 0	.40 CH2C12.O.O5C7H16:
Cale.: C,	45.01; H,	4.94;	N,	16.66
Determ.: C,	44.92; H,	4.92;	N,	16.51

l(i) 9-(2-0-Acetil-3,5-di-O-tero-butildimetilsilil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina

Foi pesada num frasco de fundo redondo de 100 ml seco à chama a 2-amino-9-(3,5-di-0-tercbutildimetilsilil-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (0,5 g, 0,95 mmol). Adicionou-se 4-N,N-dimetilaminopiridina (0,01 g, 0,09 mmol) e o frasco foi purgado com árgon e selado com um septo. Foi adicionado acetronitrilo seco (25 ml) e trietilamina (5 ml) e a solução foi arrefecida num banho de gelo. Adicionou-se anidrido acético (0,11 ml, 1,1 mmol) por meio de uma seringa e agulha. A reacção foi monitorada pelo ensaio de TLC em gel de sílica com 1:10 de acetona: CHClg. Após 18 horas à temperatura ambiente todo o material inicial foi consumido e formou-se uma grande mancha do produto (Rf, - 0,51). A mistura reaccional foi concentrada e. o resíduo foi retomado em acetato de etilo (75 ml) e extraído com NaHCOg (25 ml) e depois com H₂0 (2 x 25 ml). A fase orgânica foi seea com MgSO^ (anidro), filtrado e concentrado para se obter um óleo de cor amarela clara. 0 resíduo foi purificado numa coluna de gel de sílica (12,5 x 14 cm, 230-400 malhas) eluído com acetona: CHClg (1:4). 0 produto puro foi isolado como um sólido branco (0,58 g, 1,0 mmol): p.f. = 74-76°C (não corrigido); EM (El): m/z 568 (C^H^N^S^) , 552 (C^H^^OgS^) ,

510 (C₂₁H₃₆N₅0₆Si₂) , 378 (C₁ ^θΝ^δΐ), 261 (C₁ ,,Η^Οθδί^ ,

250 (C_1oH₁₂N₅O₃) , 194 (C^HgN^), 166 (CgHgN O);

¹H-RMN (CDClg, 200 MHz) £ 7.95 (s, 1H, H-8), 6.38 (d, 1H, H-1’, J = 5.6Hz), 5.33 (t, 1H,H-2’, J-5.7 Hz), 4.85 (br, s, 2H, NH₂), 4.58 (t,1H,H-3’, J = 5.8 Hz), 4.05 (s, 3H, -OCH^, 3-94-3.80 (m, 3H, H-4’ e H-5'), 1.78 (s, 1H,C(0)CH₃), 0.93 (s, 9H, -SIC(CH₃)₃), 0.89 (s, 9H, -SiCÍCH^), 0.11-0.08 (m, 12H,

-Si(CH ));

Anál. Cale, para C^Hj^Nj-OgS^:

Cale.: C, 52.88; H, 7.99; N, 12.33

Determ.: C, 52.67; H, 7-90; N, 12.23

1(ii) 9-(2-0-Aoetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina

Foi pesada um RBF equipado oom uma vareta de agitar e septo de borracha o intermediário sililado de 2-amino-9-[(2-0-acetil-3,5-di-0-tercbutildimetilsilil-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (0,46 g, 0,8 mmol). Adicionou-se fluoreto de tetraetilamónio (0,48 g, 3,24 mmol) seguido de uma solução de THF (40 ml) e ácido acético (0,18 ml, 3,2 mmol). A solução foi arrefecida num banho de gelo a 0-5°C. Após 48 horas a 0-5°C, o ensaio de TLC em acetona: CHClg (1:10) revelou que o material inicial foi consumido (R_f - 0,37) e uma mancha principal inferior de Rf se tinha formado (R^ - 0,07). Fez-se passar à mistura reaccional directamente pela coluna de gel de sílica (230-400 malhas, 5 x 12 cm) e eluído com 1:1 de acetona: CHC1₃ (300 ml) e depois com 5:4 de acetona: CHClg (900 ml). Obteve-se um produto puro a partir da coluna como um sólido branco (0,21 g, 0,63 mmol) após secagem que revelou ser o derivado desejado de 2’-0-acetilo: p.f. = 66-68°C (não corrigido); UV^^Í^): pH 7.00: 279.0 nm (8,100), 247-9 nm (8,400); 0.1 N HC1: 286.4 (8,500), 243.4 (7,000); 0.1 N NaOH: 278.8 (8,700), 246.7 (8,600); EM (El): m/z 339 (M, ), 296 (₁ H>, ^N^) ,

250 (C_WH₁₂N₅O₃), 194 (C₇HgN₅O₂), 175 (C^O^, 165 (C₆H₇N₅O);

¹H-RMN (Me₂SO-dg, 200 MHz); S 7-94 (s, 1H, H-2), 6.49 (br. s,

2Η, ΝΗ₂), 6.27 (d, 1Η, H-1’, J = 5.5Hz), 5.82 (d, 1Η, 3’-0Η,

J= 5.1 Hz), 5.18 (t, 1H, H-2’, J = 5.3 Hz), 5.02 (t, 1H, 5'-0H, J = 5.6 Hz), 4.33 (ddd, 1H, H-3’, Jg, ₃,__0H= 5.1 Hz, J₂, g, =

5.3 Hz, Jg, ₄,= 5.8 Hz), 3.94 (s, 3H,’pur-0CHg), 3.85-3.79 (m, 1H, H-4’), 3.68-3.60 (m, 2H, H-5’), 1.76 (s, 3H, C(O)CHg);

Anál. Cale, para gH^N^Og .0.40 CHClg.0.25CgHgO:

Cale.: C, 44.36; H, 4.99; N, 18.54 Determ.: C, 44.38; H, 5.27; N, 18.28 m(i) 2-Amino-9-(2,3,5-tri-O-ace til-p-D-arabinofuranos il)-6-metoxi-9H-purina

Foi agitada durante 3 horas à temperatura ambiente a 2-amino-9-(p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (1,5 g,

5,05 mmoles), trietilamina (3,06 g, 30,3 mmoles) e anidrido acético ((2,06 g, 20,2 mmoles) em 15 ml de DMF seoa sob atmosfera de nitrogénio. A solução foi depois diluída com acetato de etilo (100 ml) e a fase orgânica foi lavada com um volume de 2 x 100 ml de 10% NaHCOg. 0 solvente foi removido por evaporação rotativa produzindo 2,05 g (96%) de um óleo que tinha sido cristalizado em repouso durante a noite:

Ensaio de TLC (gel de sílica) clorofórmio: metanol (90:10) R_f = 0,63;

¹H RMN (S0DM) $ 1.86 (s, 3H, OAc), 2.06 (s, 3H, OAC) , 2.12 (s, 3H, OAc), 3,97 (s, 3H, OCHg), 4.2-4.5 (m, 3H, C-4’ e C-5’H), 5.4-5.5 (m, 2H, C-2’ e C-3’H), 6.38 (d, J = 4.8 Hz, 1H, C-1Ή), 6.55 (largo s, 2H, NH₂) e 7.95 (s, 1H, C-8H).

m (i i) 2-Amino-9-(5-p-_açe_til_-^-D-Ara-.^bi.nofni(^,s-i(¹Psíl)-6-metoxi-9H-purina

Uma mistura de 2-amino-9-(2,3,5-tri-O-acetil-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina (10,0 g, 23,6 mmoles), acetato de sódio anidro (19,4 g, 236 mmoles) e cloridrato de hidroxilamina (16,4 g, 236 mmoles) foi agitada durante 17 ho ras em 200 ml de piridina à temperatura ambiente. A solução foi

depois diluída com 50 ml de acetona e a maior parte do solvente foi removido por evaporação rotativa. 0 óleo residual restante foi purificado por cromatografia de coluna rápida (10 x 75 cm, 230-400 malhas) utilizando CHCl^: acetona (1:1) como eluente. Foram concentradas as fracções apropriadas por evaporação rotativa deixando uma goma semi sólida. 0 semi sólido foi liofilizado a partir de 100 ml de água produzindo um pó branco: p.f. = 138-140°C (não corrigido):

Ensaio de TLC (gel de sílica) clorofórmio: metanol (90:10) R_f = 0,27;

¹H RMN (S0DM) S 2.03 (s, 3H, OAc), 3-97 (s, 3H, OCH^, 4.1-4.4

(m, 5H, C-2’, C-3’, C-4’ e C-5’H), 5.69 (d, J 5.78 (d, J = 4.2 Hz, 1H,0H), 6.17 (d, J = 3.6 6.48 (largo s, 2H, NH^) e 7.86 (s, 1H, C-8H);	= 3.4 Hz, 1H,OH), Hz, 1H, C-1 Ή),
Anál. Cale, para C^H^N^Og .H20: Cale.: C, 43.70, H, 5.36; N, 19.60 Determ.: C, 43.70; H, 5.34; N, 19.52

Formulações para Comprimidos

As formulações seguintes A e B são preparadas por granulação húmida dos ingredientes com uma solução de povidona, seguida de adição de estearato de magnésio e compressão.

Formulação A	mg/comprimido	mg/comprimido
(a) Ingrediente activo	250	250
(b) Lactose B.P.	210	26
(c) Povidona B.P.	15	9
(d) Amido glicolato de sódio	20	12
(e) Estearato de magnésio	5	. 3
	500	300

Formulação B

	mg/comprimido	mg/comprimido
(a) Ingrediente activo	250	250
(b) Lactose B.P.	150	-
(c) Avicel PH 101	60	26
(d) Povidona B.P.	15	9
(e) Amido glicolato de sódio	20	12
(f) Estearato de magnésio	5	3
	500	300
FormulaSão C	mg/comprimido
Ingrediente activo	100
Lactose B.P.	200
Povidona B.P.	50
Amido glicolato de sódio	5
Estearato de magnésio	4
	359

Os comprimidos são preparados a partir dos ingredien tes anteriores (C) por granulação húmida seguido de compressão Numa preparação alternativa a povidona B.P. pode ser substituí da por Polivinilpirrolidona.

As formulações seguintes, D e E, são preparadas por compressão directa dos ingredientes da mistura. A lactose na formulação E é de tipo de compressão directa (Dairy Crest Zeparox).

Formulação D mg/cápsula

Ingrediente activo 250

Amido Prégelatinizado NF25 250

500

Formulação Ε

Ingrediente activo

Lactose

Avicel

250

150

100

500

Formulação F (Formulação de Libertação Controlada)

A formulação é preparada por granulação húmida dos ingredientes (a seguir indicados) com uma solução de povidona seguida pela adição de estearato de magnésio e compressão.

mg/oomprimido

(a)	Ingrediente activo	500
(b)	Hidroxipropilmetilcelulose (Methocel K4M Premium)	112
(o)	Lactose B.P.	53
(d)	Povidona B.P.	28
(e)	Estearato de magnésio	7. 700

A libertação do medicamento dá-se num período de cer ca de 6 a 8 horas e está completo após 12 horas.

Formulação de cápsulas

Formulação A

A formulação da cápsula é preparada misturando os ingredientes da Formulação D no Exemplo 12 acima descrito e en chendo numa cápsula de duas partes de gelatina dura. A Formula ção B (a seguir referida) é preparada de forma idêntica.

Formulação Β mg/cápsula

(a) Ingrediente activo (b) Lactose B.P. (c) Amido glicolato de sódio (d) Estearato de magnésio	250 143 25 _2 420
Formulação C	mg/cápsula
(a) Ingrediente activo	250
(b) Macrogol 4000 B.P.	350

600

As cápsulas são preparadas fundido o Macrogol 4000 BP dispersando o ingrediente activo no dundido e enchendo-o numa cápsula de duas partes de gelatina dura.

Formulação D mg/cápsula

Ingrediente activo 250

Lecitina 100

Óleo de amendoim 100

450

As cápsulas são preparadas dispersando o ingrediente activo nos óleos de lecitina e amendoim e enchendo a dispersão numa cápsula de gelatina macia e elástica.

Formulação E (Capsula de Libertação Controlada)

A formulação da cápsula de libertação controlada seguinte é preparada por extrusão dos ingredientes (a), (b) e (e) usando uma extrusora, seguido de esferonização do extrudido e secagem. Os agregados secos são a seguir revestidos com uma membrana de libertação controlada (d) e enchidos numa cápsula de gelatina dura de duas partes.

- 44 mg/cápsula

(a)	Ingrediente activo	250
(b)	Celulose Microcristalina	125
(c)	Lactose B.P.	125
(d)	Etil Celulose	13
		513

Solução Oftalmioa

Ingrediente activo 0.5

Cloreto de sódio, qualidade analítica 0.9 g

Tiomersal

Água purificada pH ajustado

Formulação Injectável

0.001 g para 100 ml para 7.5

Ingrediente activo 0.200 g

Tampão de fosfato, esterilizado, isento de pirogénios (pH 7.2) para 10 ml ingrediente activo é dissolvido na maior parte de tampão de fosfato (35-40°C), depois é perfeito ao volume que é filtrado num filtro estéril de microporos para um frasco de vidro esterilizado de 10 ml (tipo 1) e selado com tampas e fechos esterilizados.

Injecção Intramuscular

Ingrediente activo		0.20 g
Álcool Benzílico		0.10 g
Glicofurol 75		1.45 g
Água para injecção	q.b. para	3.00 ml

ingrediente activo é dissolvido em glicofurol. 0 álcool benzílico é depois adicionado e dissolvido, e adicionam-se 3 ml de água. A mistura é depois filtrada através de um filtro de microporos esterilizado e selada em frascos de vidro de âmbar esterilizados de 3 ml de (tipo 1).

Suspensão de Xarope

Ingrediente activo Solução de Sorbitol Glicerol

Celulose Dispersável Benzoato de sódio Aroma, Pessego 17.42.3169 Água Purificada

0.25 g 1.50 g 2.00 g 0.075 g 0.005 g 0.0125 ml

q.b. para 5.00 ml benzoato de sódio é dissolvido numa porção de água purificada e é adicionada uma solução de sorbitol. 0 ingrediente activo é adicionado e dispersado. No glicerol é dispersado o espessante (celulose dispersável). As duas dispersões são misturadas e perfeitas ao volume pretendido com água purificada.

E conseguido um espessamento como pretendido por agitação extra da suspensão.

Supositórios i5S^/su£O£Ítório

Ingrediente activo (63 pm)* 250

Gordura dura, BP (Witepsol H15 Dynamit Nobel) 1700

1950

Um quinto do Witepsol H15 ó fundido numa panela com camisa de vapor a uma temperatura máxima de 45°C. 0 ingrediente activo é peneirado através de um peneiro com malha de 250 |im e é adicionado à base fundida com agitação, utilizando um agitador de silverson equipado com uma cabeça de corte, até se obter uma dispersão fluida. 0 Witepsol H25 restante é adicionado, mantendo a temperatura a 45°C, à suspensão e agita-se para se obter uma mistura homogénea. Toda a suspensão é feita passar através de um peneiro de aço inoxidável com 250 |im de malha e,

continuando a agitação, deixa-se arrefecer para 45°C. Introduzem-se, a uma temperatura de 38°C a 40°C, 2,02 g da mistura em moldes adequados de plástico. Os supositórios são deixados arre fecer para a temperatura ambiente.

* 0 ingrediente activo é utilizado como pó em que pelo menos 90% das partículas têm um diâmetro de 63 |im ou inferior.

Pessários mg/pessário

Ingrediente activo (63 pm)*	250
Dextrose Anidra	380
Amido de Batata	363
Estearato de magnésio	_7
	1000

Os ingredientes aeima referidos são misturados directamente e os pessários são preparados por compressão directa da mistura resultante.

Inibição Selectiya do Crescimento das Células T

Os compostos da invenção foram ensaiados para determinar a inibição do crescimento das células T (Molt 4) comparado com o das células Β (IM9) pelo processo de Averett, Journal of Virological Methods, 23, (1989), 263-276.

A 2-amino-6-metoxi-9(B-D-arabinofuranosil)-purina (composto 1) inibe selectivamente o crescimento de uma linha de células T humanas (Molt 4) em contraste com uma linha de células B humanas (IM9). Estes dados são comparados com a inibição selectiva de ara G.

Z.50 UM ^{do Gres(:íj}-^inenfcQ do controlo)

Composto araG

Células Molt 4

Células IM9

0.8 1 0.1 1.4 ± 0.08 >10 (85%) ^10 (84%)

Biodisponibilidade de ara G composto ara G e os compostos da invenção foram administrados oralmente a macacos Cynomolgus que tinham sido feitos jejuar durante oito horas. Cada composto foi administrado a dois macacos. A dosagem foi de 94 jimol/kg que é equivalente a 27 mg/kg de ara G. Foram tomadas amostras de ensaio durante as 24 horas seguintes, e foi recolhida a urina durante o mesmo período de 24 horas. As concentrações de ara G em extractos de plasma foram determinadas por CLAR (Cromatografia Líquida de Alto Rendimento) de fase inversa.

Solubilidades_ _e_ Biodisponibilidade de araG

Solubilidade (mM) Composto em PBS* a 25°C araG 4

Exemplo 1b 92

Exemplo 2j 38

Plasma	Urina
Pico de araG	AUC**	$ Recuperado
valor (pM)	0.7hrs	como araG
6	20.8	3.9
4.6	21.1	4.2
19.8	78	26.3
21.6	83	33.6
18.7	86.9	25.8
15.7	83.5	13.5

* Solução salina tamponada com fosfato

Claims (2)

1. REIVINDICAÇÕES

   - 1* Processo para a preparação de um éster farmaceuticamente aceitável de um composto com a fórmula na qual R é um grupo alcoxi(1-5C), caracterizado por se esterif iearem os grupos hidroxi de um composto eom a fórmula (I) com um agente acilante, convenientemente um halogeneto de acilo ou anidrido, a uma temperatura não elevada, -30 a 100°C e adequadamente -5 a 30°C, num solvente polar, convenientemente acetonitrilo, na presença de uma base, por exemplo trletilamina, e em seguida se removerem os grupos protectores por processos convencionais.

   - 2ã Processo de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por compreender a esterificação enzimática de um composto com a fórmula (I).

   - 3ã Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 2 caracterizado por se obter um éster de ácido carboxílico em que o radical não carbonilo do grupo éster é esco- 49 - lhido de entre alquilo, alcoxialquilo, aralquilo, ariloxialquilo, arilo, de cadela linear ou ramificada opoionalmente substituídos com halogéneo, alquilo(1-4C) ou alcoxi(1-4C), nitro ou amino, um éster de sulfonato, ésteres de ácidos dicarboxílicos ou os seus ésteres de alquilo(1-4C), um éster de aminoácido ou ésteres de mono- di- ou trifosfato e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

   _ 4ã _

   Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 3 caracterizado por se obter um éster farmaceuticamente aceitável escolhido de entre
2. 2-amino-6-metoxi-9-(5-0-propionil-p-D-arabinofuranosil)-9H-purina.

   2-amino-9-(5-0-butiril-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina 2-amlno-6-metoxi-9-(3-0-pivaloil-p-D-arablnofuranosll)-9H-purina.

   2-amino-6-metoxi-9-(2-0-valeril-p-D-arabinofuranosil)-9H-purina 2-amino-9-(3-0-benzoil-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina 2-amino-6-metoxi-9-(2-0-pivaloil-j3-D-arabinofuranosil)-9H-purina.

   2-amino-9- (2-0-benzoil-p-D-arabinofuranosil )-6-metoxi-9H-purina 2-amino-6-metoxi-9-(5-0-valeril-p-D-arabinofuranosil)-9H-purina (5-0-acetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9-9H-purina. 2-amino-6-metoxi-9-(5-0-(4-metoxi-4-oxobutiril)-p-D-arabinofuranosil)-9H-purina.

   9-(3,5-di-0-acetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina.

   9(2,5-di-O-acetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina.

   9-(2-0-acetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina. 9-(2,3,5-tri-0-acetil-J3-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina.

   2-amino-9-(5-0-isobutiril-p-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina.

   9-(2,3-di-O-acetil-p-D-arabinofuranosil)-2-amino-6-metoxi-9H-purina.

   -5^Processo para a preparação de uma composição farmacêutica por exemplo sob uma forma adequada para administração oral caracterizado por se incorporar como ingrediente activo um éster farmaceuticamente aceitável de um composto com a fórmula (I) quando preparado de acordo com a reivindicação 1 em associação com um veículo farmaceuticamente aceitável.

   A requerente reivindica a prioridade do pedido de patente britânico apresentado em 19 de Julho de 1990, sob