PT97035B

PT97035B - Processo para a preparacao de derivados de 2,4-pirimidinodiona

Info

Publication number: PT97035B
Application number: PT97035A
Authority: PT
Inventors: Laurent Fraisse; Gerard Le Fur; Jean-Baptiste Verlhac
Original assignee: Elf Aquitaine; Sanofi Sa
Priority date: 1990-03-15
Filing date: 1991-03-14
Publication date: 1998-07-31
Also published as: GR3019123T3; EP0447324A1; FR2659656A1; ATE131817T1; EP0447324B1; DE69115526D1; ES2081446T3; CA2038198A1; PT97035A; DK0447324T3; IE910853A1; JPH04217672A; DE69115526T2; JP2983669B2; FR2659656B1; IE71192B1

Description

O presente invento diz respeito a um processo para a preparação de derivados correspondendo à fórmula Cl):

em que um dos símbolos R_p ou R₄ representa um grupo

Rq. R, •»U ·—* alquilo C-^-C.-,^ e os outros representam cada um H ou um grupo alquilo C.-C.-, e 2. e 2,_, representam cada um H ou representam em

X Ο X xt conjunto o grupo carbonilo ou tiocarboni.lo e os seus sais de adição.

referido processo consiste, por exemplo, em se introduzir um grupo amino NR^Z^ ^na Posição S de um composto de fórmula:

ο

presente invento diz respeito a derivados de pirimidinodiona-2,4 e aos medicamentos que os contêm.

Estes compostos apresentam nomeadamente uma actividade anti-radicais e são inibidores da peroxidacão dos lípidos das membr anas b i o i óg i c as.

é sabido que o ácido órico e alguns dos seus derivados N-meti lados retêm os radicais livres in vitro s pôs-ss a hipótese, no Pro. NatI . Acad Sei., E.U.A. 78 SSS8 íÍSSÍ>, do ácido úrico poder desempenhar, no homem, um papel proteetor contra a toxicidade dos radicais oxigenados. Mas demonstrou-se que o ácido úrico não era setivo senão sobre algumas destas espécies reactivas, uma vez que e3e não inibe a peroxidação dos lípides membrsnãrios, contrarlamente aos compostos cío presente invento.

Estes compostos correspondem è fórmula

em que um dos s alquilo e alquilo Ce 2 conjunto o grupo dos s í mbo 1 os R.. n-dodec i1o, assim tos com os ácidos ímbolos R,, R..,,· R._. ou R, representa um grupo .1. 2 o 4 os outros representam cada um H ou um grupo * e Ξ.-, representam cada um H ou representam em carbonilo ou tiocarbonilo, entendendo-ss que um ou R é diferente de H quando R, representa A* 1 como os sais de adição de ácidos destes compos.....

minerais e orgânicos farmaceuticamente aceitãve i s.

Os compostos ds fórmula I podem ser preparados da maneira que sb segueg ' ·^: 15 Introdus-se um grupo amino NR|2^ na posição 5 de um

composto de fórmula	0
-		^S'N^Z 1 *3
^nhr₂·	V
- quer	por redução de	USí	grupo HO ou	MíX-, introduzido na z.
posição 5_?	respectivamen te	por	nitrosação	ou nitração deste

composto (V) para se obter os compostos e® que 2., = R., = H ~ quer por seção de HNR.gZ.2 sobre o derivado bromado na posição 5, obtido por bromação deste composto Cv) para se obter os compostos em que = H = e Rj representa alquilo e eventualmente= para ss obter os compostos em que e 2„ representam sb conjunto o grupo carbonilo ou tiocarboniio^

2/ faz-se reagir respectivamente a ureia ou a tioureia sobre o composto de fórmula

eventualmsnte por intermédio do carbamato ns posição 5 quando R. representa alquilo s R.., representa H.

Este processo é explicado % seguir ds maneira mais detalhada.

II em que R. representa H e R...,, R._. © R., são tal como na formula I e

r.'L ·.«· podem ser preparados s partir dos derivados; de fórmula 111, quer por intermédio da formamida (IVl segundo o esquema de reacção (s)

III quer directamente por hidrogenacão catalítica ou por acção de uma ditionite alcalina em meio aquoso ou na formamida.

A formamida (IV) é obtida, por exemplo, por accão do zinco ou de ditionite alcalina © de ácido fôrmico.

Certos derivados de fórmula .UI são conhecidos) os outros poderão ser preparados, de maneira conhecida em si, por accão de um nitri to de alquilo, tal coro o nitrito de isoamilo, ou de u» nitrito alcalino sobre as pirimxdinodionas de fórmula V

em que R..,, R.., R, são tal como na fórmula I. •Λ -r.·

também acordo os compostos de fórmula 11 em que R ser preparados a partir de cloro-S pir com o esquema ds rsecção (b) representa H i m i d i nodi ona-2 podem 4 de

ap1ic ando métodos c1âss i c os, corno Cbem. 577 pg. 113 <1354).

s descrito em

Lisbigs Ann os compostos de fórmula 11 em que R* é um grupo alquilo são preparados por acção ds amina RJMH..., sobre o derivado bromado de fórmula VI

VI

em que R...,, R.., R, são tal como na fórmula I. 0 derivado (VI) é .·£ #· obtido por acção do bromo r;o ácido acético ou ds bromo-succinimí.....

da numa mistura ds ácido e ds anidrido acético sobre o composto (Vi, tal como foi descrito em Liebigs Ann. Chem. pg 1347-54 (1973); quando R.., representa H é preferível; antes de se efectuar a bromação, proteger o azoto, por exemplo por meio de um grupo benzi lo, que será eliminado por hidrogenacão catalítica após reacção com RNH.

Os compostos de fórmula VI1

em·que R„ a Rsão tal. como na fórmula I e Z

1. preparados por seção da ureia ou da tioureia rimidinodionas de fórmula II. aplicando o

Liebigs Ann Chem. pg. 2030 (19741 para os

R.»·.; Rh.., R, - H ou CH._.. z 4 é 0 OU podem ser sobre as diaminopí·método descrito em produtos em que R,,

Guando R^ representa um grupo alquilo, prspsrs-ss de preferência o composto de fórmula VII, aplicando-se um processo descrito em Liebigs Ann. Chem. pg. 1347-54 ¢:1373) para um composto Π 6ϋί que R< = CH_. Para o composto em qu© R‘ = R,._: = &, = H é necessário bloquear o azoto contendo R._,, sendo o esquema da ·«?

reacçSo o seguinte:

carbamato é preparado de maneira clássica por accáo d© um cloroformiato de alquilo sobre o composto <11) em que R.„, = H, R.... - CH^C^l-L. e R - K, na presença de uma base, enquanto que a ciclização é efsctuada por aquecimento prolongado em meio básico num solvente polar, por exemplo um álcool, ou sem solvente num tubo selado em presença de alcoolato de sódio, tal como se descreve em Liebigs Ann. Cbsm., pg. 1847 ¢1373).

As amino-8 pirimidinodionas de partida (V), podem ser preparadas por processos cujos princípios são conhecidos e que foram descritos nomeadamente para compostos em que R.__t, ou R_1;idênticos ou diferentes, representam H ou CH..,. Assim os compostos de fórmula V

em que R_. é diferente de H e R.~, ™ R, = processo descrito em J. Am. Chem. Soc . álcool segundo o esquema de rsacção ícn

H, são preparados peio 63 2567 C1941), num

em que R, F?' representam um grupo alquilo Cd ·- C^.

rara se obter os compostos diferentes de H, trata-se o composto básico, com um composto R „X em que •w.

halogéneo ou, quando R, representa 4 (v) em que R_o e R„ de fórmula V bis, em X representa um átomo

CH_O, de preferêr?cia

São me i o de com <ch,_;>₂so₄

Os compostos de fórmula V em que R.... e Fr representam H são preparados por acção sobre a cloro-S pirimidinodiona, composto conhecido, de R,/4H^ em meio ácido segundo o esquema de rsacçSo <d>:

.... 1 tal como foi descrito, por exe?mp3o, em J. Med. Chem. 20 pg. 1189 (1977), ou por fusão do composto (V) em gue R.„., ~~ R.., - R,₍ = H com ·.«♦ &:·

R.U..NH.-, em presença de 8..,111-1.-,, HCi .

Os compostos de fórmula V em gue R... s R... representam H •A- <,'· são preparados pelo processo descrito em Liebigs Aon. Chem. 531 pg. 168 (1360) de acordo com o esquema de reaccão (e)

em gue R e R'representam cada um um grupo alquilo sm C, - C.,

M· aplicando o método descrito em Liebigs Ann. Chem. 612 pg. 168 (1968).

Os sais dos compostos de fórmula 1 que contêm funções amin® são preparados por acção de pelo menos um equivalente do ácido sobre a amina em solução; são isolados por precipitação ou por evaporação do solvente e purificados por recristalização se for caso disso.

As composições farmacêuticas e os medicamentos tendo por principio activo pelo menos um dos compostos de fórmula J , ou um dos seus sais com um ácido farmacsuticamente aceitável, constituem um outro objecto do invento; preferem-se

-11“ particu3armente os compostos em que um dos símbolos R.,, R.-,, R_o cu R₄ represente um grupo alquilo - C^_n.

A presença de radicais livres em quantidade excessiva foi posta em evidência em numerosos estados patológicos e ficou agora praticamente demonstrado que as destruições dos tecidos observadas na artrite reumatôide, nas doenças auto-imunes, nas sobrecargas de ferro, nas conssquências das isquémias cerebrais e cardíacas e em certas patologias oculares dependem largamente da formação de radicais livres. Pode também encarar-se a possibilidade ds administrar ao ser humano compostos que inibem a formação destas espécies muito reactivas, a título preventivo ou curativo, no tratamento das doenças atrás citadas, como provavelmente também nas doenças da idade avançada em que os radicais livres têm vindo a ser associados aos fenômenos degenerativos observados .

Sabe-se que entre os radicais livres, os que são derivados do oxigénio s, particularmente o radicai hidroxiio OH', desempenham um papel importante; se actualmente ainda é impossível medir directamente in vivo a concentração destes radicais, sabe-se como calculá-los, estudando a neutralização de diversos radicais livres, s sobretudo a peroxidação dos lípidos membranares, cuja consequência é, in vivo, a formação de aldeídos citotôxicos e a destruição das membranas celulares provocando um aumento da sua permeabilidade.

A acçao anti-radicais de um produto XH é correntemente determinada, in vitro, pela medida da neutralização do radical diíenil-1,1, picril-2 hidrazilo CDPPH'), estável a 20°C, pelo produto XH na reaccão ΟΡΡΗ’ + XH .---------DPPH.., + X'

Q desaparecimento do radical DPPH' foi estudado por espectrofotometria a 517 nm, comprimento de onda em que o radical absorve for temente s radiação contrar i srsents à molécula de foidrazina DFPH._. Este método é descrito, nomeadarnente em Free Radical in Siology ã Medicine” 3 pg. 251-257 <13731 para o ácido úrico e para os seus derivados N-metilados.

Os compostos do invento são, neste ensaio, activos em doses comparáveis ás do ácido úrico.

A inibição da peroxidaçâo lipídicei devida aos radicais livres oxigenados, peroxidaçao particularmente importante na presença do ferro, foi determinada in vitro pela ?íiedida da quantidade de aldeído malónico formado nas suspensões de mitocôn™ drias colocadas em presença de um gerador da ides súper.....óxidos tais como o ácido di-hidroxiíumárico.

ácido úrico é inactivo neste ensaio, enquanto que os compostos de acordo com o invento têm uma actividade próxima da dos amino-2 esteróides descritos em Drugs of tbs future, volume 14 (2), 143-152, <1933) e nomeadamente da 21-c4™<'3-, S-bis(dieti 1smimo)-2-pi r idini 1 )~1 pipsrszini 1 j-lSí^-meti lpregna-1,4,3( 11-tr ieno-3,20™d i ons (c ompos to A Ί .

As composições farmacsuticas de acordo com o invento compreendendo como principio activo peio menos um dos compostos de fórmula I ou um dos seus sais com um ácido íarmaceuticamente aceitável serão administradas no tratamento preventivo ou curativo dos fenômenos degenerativos ligados á presença de radicais livres, por via orai, parentérica ou transmucosa. As doses unitárias e diárias dependerão do composto, d® natureza e da gravidade da doença, do peso e do estado do paciente, bem como da via de administração; de um modo geral, por via oral, a dose

.... Ί Ο..-. J.

unitária será no adulto de 1 mg s 500 mg, enquanto que por vis intravenosa, ela será de 0,1 a 25 mg.

Descrevem-se s seguir exemplos de compostos do invento, seu processo de preparação e os resultados obtidos aquando do estudo das suas actividades anti-radicais e anti.-l ipoperoxidsnt©, assim como as do composto de referência A anteriormente citado.

Os resultados das análises ceniesimsis dos compostos isolados são compatíveis com as suas fórmulas brutas; os pontos de fusão indicados são instantâneos. Os espectros PmN'^!H foram traçados em solução no dimetiIsulfóxido deutersdo, tendo como padrão interno o tetrs.metilsila.no.

Descrevem-se primeiro exemplos de preparação amino-6 pirimidinas diona-2,4 de fórmula V.

A) AIquilamino.....S pirimidinodiona-2,4 i ) (Fórmula v; R..

^C12^H25^;

Ft

H, R

H)

mantém-se a 160^sC durante 3 horas uma mistura de 7,5 g de smino & pirimidinodiona-2,4, de 12 g de dodecilamina e de 12 g de cloridrato de dodeci1amina. 0 meio a reacção é então levado até á temperatura ambiente antes da introdução de 100 mi de starnol.

sólido é Isolado por filtração e depois colocado em suspensão durante alguns minutos em 100 ml de uma solução aquosa de NaOH

2N. 0 sólido restante á isolado em ácido acético. Obtém—se assim 7 g do produto pretendido que funde a mais de 250°C.

RNNC300 ní-h

2,88^,28): 4,37(s,1H); 5,88(t,lH); 8,78(s,18); 10,07ís,18).

i i. 1 Prepara-se da mesma maneira a partir de hexadecilamina o derivado de fórmula V em que R._, = C_{CH„, R._Zí = H, R_? = H, que funde a mais de 2S0°C.

BI Alquil-1 amino-6 pirimidinodiona-2,4 (Fórmula V: R._. = R.„_t = H, R. = Hl

O J. ·Ζ· A·

Introduz-se numa solução de etilato de sódio preparada com 4 g de sódio em 100 ml de etanol, .17,6 g de c ianoacetato de etilo e 35 g de dodeci1 ureia. 0 meio é mantido a sua temperatura de refluxo durante 7 horas, em seguida introduz-se, após retorno à temperatura ambiente, uma solução aquosa concentrada de KOI até um pH ácido e depois 200 mi de água. 0 precipitado formado é isolado por filtração e rec r istai izado em etanol. Isolam-se assim 23 g do produto pretendido o qual funde a mais de 250°C.

RKNC30Í1 MHzl 8 í 0,37 <t,3H),’ l,2SCm,18Hi: 1,52<m,2H>

3, 73 ít,2H1 4,58(s,iK): S,33Cm,2H1.

Cl Alquil-1 ai.quil-3 amino-8 pirimidinodiona-2,4 (Fórmula V; R.-, R.»_s = H, R, = CH_O)

Coioca-se em suspensão em 10 mi de uma solução aquosa de ÍMaOH e 10 ml de etanol, 2,35 g da amino-S dodecil-1 pirimidinodiona-2,4 preparada em B e, a SO^OC, introduz-se 1,3 g de (CH.., 1..,30. nantém-se o aquecimento até o pB do meio ser pratica·mente neutro; introduz-se então uma solução aquosa de BaOB N até se obter um pH básico e, após arrefecimento, extrai-se a solução com clorofórmio. A fase orgânica- lavada com água e seca é levada até à secura. Obtém-se, assim, 2,3S g do produto desejado que funde a 74°C.

D> Alqui 1-3 amino-5 pi. rimidinodi ona.™2,4 (Fórmula V; R_

H, R

H, R ^Ci2^H2S'

a) Introduz-se em 150 ml de uma solução de ©ti lato de sódio preparada com 3,5 g de sódio, 35 g de dodecilurei a e 24,3 g de malonato de ©tilo· a mistura é mantida 8 horas á sua temperatura de refluxo, antes da adição, à temperatura ambiente, de uma solução aquosa de ácido clorídrico concentrada até a um pH ácido. 0 precipitado é então isolado por filtração, lavado com áfgua e depois resristalxzado em etanol. Obtém-se assim 30 g de dodecil-1 pirimidinotriona-2,4,5. p.F. = 129 - 130 ³C

b) Coloca-se em suspensão 30 g do produto obtido em a) em 13,5 ml de água e adiciona-se gota a gota 102 ml de POCI...,. A mistura é em seguida mantida a sua temperatura de refluxo durante uma hora, e depois o excesso de ROCl.., é destilado sob pressão reduzida. 0 resíduo ê vertido sobre gelo moído e o precipitado fon^do é isolado. Depois de lavagem com água s recristalização numa mistura de água-etanol, obtém-se 20,5 g de cloro-5 dodecíl-3 pirimidinodiona-2,4 que funde a 15S-Í57⁰C.

cí Mantém-se a 170®C durante 1 hora uma mistura de 30 g do derivado clorado obtido de acordo com b) e 150 g de benzi lamina. Depois de se ter levado outra vez o meio para a temperatura ambiente, introduz-se 100 mi de água e isoia-se o surgido. Depois de se ter lavado este com metanol etílico, recupera-se 25,13 g de benzi Iamino-S dodeci1-3 pirimidi nodiona-2,4 que funde a 191^CC.

prec ipifado e c om éter

d) Coloca-se em suspensão em 400 ml 25 g do composto obtido de acordo com c> e 4 carvão a 10%, num aparelho de hidrogenação de etanol absoluto g de pai adio sobre em que se mantém durante S horas uma pressão de hidrogénio de 3 nr‘a e uma temperatura de 80°C. 0 catalisador é eliminado por filtração da solução ainda quente antes de se evaporar o solvente sob pressão reduzida e o sólido residual é lavado com éter etílico. Jsoiam-se assim 17,02 g de amino-6 dodecil-3 pirimi.dinodiona~2,4 que funde a 242°C.

Oescreve-ss a seguir s preparação de compostos de fórmula JJ1.

Ξ) Amino-ô dodecil-! nitroso.....S pirimidinodiona-2,4 (Fórmula III

R...

H, E, ^C12^H2S'

H)

Introduzem-se gota a gota 5 ml de nitrito de isoamilo em 120 mi de etanol no qual se encontram em suspensão 5 g de ahiino-S dodecil! pi.rimi.dinodiona-2,4 e, em seguida, 2 gotas de uma solução aquosa concentrada de .HC1. Depois de 3 horas de agitação à temperatura ambiente, os cristais violeta que se formam são isolados e recristalizados em etanol. Obtém-se assim 4,35 g do produto desejado que funde a 206^β0.

Este pode também ser representado peia forma tautoméri™

^C12%

Aplicsndo o procedimento descrito em E, prepararam-se compostos cujas características são apresentadas no Quadro 1 que se segue·

i---------------------- j i..............................	i ! i R₂ \| ..!...................................... í	^R4 1 !	^R4 ? 1	—....................1 F°C \| . í
1 ! ^R	i ......... í 1 ^H í	^C!2^H2S ¹	.................s ^CHP !	........................... ! 153 i
! 8	1 ^cis^h3₃ !	H \|	^H	158 \|
j H	1 ^L'l2^h25 i	Η I	H j	173 \|
! I	1 ^H ! ! !	H \| ______________________	C.24_,_ i	230 § ...»í
! L .	12 25 í

SXBWLl

Di«roino~5,6 dodecil-i meti 1-3 pir.imidinodiona~2,4

CFôrmula I : 2, = 2_? = H; R, = *₂ = Η; R, =

CH..,1

a) Numa solução levada até à sua temperatura de refluxo, de 4,35 g do composto do Exemplo C em 100 ml de ácido fórmico adiceiona-se em pequenas porções 4 g de zinco em pó; depois de 1 hora de refluxo, fiI ira-se a quente e evaporam-se os solventes do filtrado a pressão reduzida. Verte-se sobre o resíduo 30 ml de CH_o0H e isola-se o precipitado.

Obtém-se assim 3,35 g de amino-S dodecil.....1 formilaroi™· no-5 meti 1-3 pirimidinodions-2,4 que funde s 2i5°C.

b) Disso1vem-se 3,53 g do composto obtido aro al em 100 ml de CH.-.OH: em que se introduziu ácido clorídrico gasoso • 3 mediante um ligeiro borbulhar mantido durante 1.5 minutos. A solução é em seguida mantida durante 3 horas â temperatura de refluxo, depois arrefecida para 0°C. Filtra-se então o precipitado para isolar 3,21 g de monocloridrato do produto final que f unde a 195 ⁰ C.

Pode se preparar a diamina tratando uma suspensão do seu cloridrato em CH.-.OH com uma solução aquosa concentrada de

•.7'

MH,OH.

X5.

EXIna:fíS...2.....js_8

Os compostos de formula X em que Z, = Z... -- H, cuias

Λ.

características figuram no Quadro 2 que se segue, são preparados aplicando o processo do Exemplo 1.

! --------------- - ί Exemplo .............................................	i----------------------- ^R1 .......................	-~~t---------------------- ! ^R2 i......	T .........- ----------- i ^R3 i	i ^fi4 !	Ϊ——— - ·— 1 F^eC(sal)
í ......... t ²	.................. H	í.......... ! ^H	i ^v:12*25	! í ^H	1 ! 237
l ³	H		\| H	! ^CÍ2^H26	\| >250 (HCI)
! ⁴	^H	> ^16^33	1 ^H	1 H	\| 242 (HCI)
1 5	H	1 ^Ci2^H2S	l ^H	ί H	\| >200 (HCI)
I 5	H	\| H	1 ^CS>3	í ^H	\| >200 (HCI)
. _?	H	í ^H	1 ^CM^H2i.	? ^H	í >250 (HCI)
í ³ !.......................................	H	j H	! ^C8^H,7 !............	1 H <	í >280 (HCI) !.................... .........................
PHN EX 7	(SOO	MHz) iS ;	0,84(t,3H):	X,25<m,14K); l,SX(m,2H
3,81(t,2H):	7,72(s	2H>; 9,75(s,3H); 11,	10(s,ÍH).

EX 8 : (250 MHz) 5 : 0,85(t,3H) í,25<ro,10H); 3,80(t,2H); 7,81(s,2K): 3,45Cs,3H); 11,13(s,1H?.

1,43(m,2H):

i O...

EXEh£LOS...9.„.e..„.ÍO

Dodecil-3 meti 1-1 CtH,3H,9M3 pur inotr ions-'2,5,3 (Fórmula I CHg)

Ί. & 22 = CO R,

RH; R,.

^C12^H2S^; '

Mantém-se a 180*0 durante 1 hora uma mistura de 300 mg do composto obtido no Exemplo 1 com 1 g de ureia. Verte-se â temperatura ambiente 20 ml de água no meio da reacção; o sólido é isolado, lavado com etanol e recrIstalizado no ácido acético. Isola-ss assim 380 mg do produto pretendido que funde a 233*0.

RMN (250 MHz’) S : 0,86< t, 3H>: 1,24(^,1310: í,56(m,2H>:

3, 13( s, 31·;) J 3,77ít,2H): 10,73(s,lH); 11,89(s,1H).

Aplicando o mesmo procedimento com a tioureia obtém-se a oct.il-3nH,3H.8H3purinodiona-2,6-tiona~8 ‘ F > 250*0.

RMN (30 MHz) 8 ί 0,85(t,3H); 1,24Cm,12H>j 3,S7(t,2H>J ll,24(s,lH); 12,33(s,ÍH),· 13,47<s,1H>.

ÊXS2ÊL0S^l_a^S.

Os compostos de fórmula 1 em que 2^,2.-, representam 0-0, cujas carac: ter isticas figuram no Quadro 3, foram preparados aplicando o processo posto em prática no Exemplo 3.

r.................... ί Exsmp1o L	t---------------------------------- 1 ^Rí 1.............................................	---------- ------------~_T· ^R2 ί ............................................I...	^R3	Ϊ------------------------------------ í ^R4 !....................................	I F*C a
j í 11	f.................... ...... 1 H	! H \|	H	1 ^C12^H25	f................... ! ^>2S0
1 ¹²	j H	^CÁ2^H2S !	H	ΐ ^H	\| >250
j 13	í ^H	^C16^H33 1	H	i H	i >250
! 14	I H	H i	C„ _H__	i H	í >250
) 15	í ! ^H	í Η	12 25 C3H₁₇	t I H	! { ^>2S0
! 16	1 H	H f	C,.H„_s	! H !	Í >250 ϊ
í í	!	1 ..........í	10 21
cujos RMN figuram	no Quadro	4.

QUADRO 4

Exemplo frequência

S

11	i i 300 í í 5	----------------------_r MHz ! í í ! i	0,88(t,3H); 3,70<t;2H)) 11,83(3, ÍH)	l,25(o,13H); l,52Cm,2H); 10,77(3,ÍH); ll_;03(s,ÍH);
4 .*^Mj	1 i 300 ! i 5	I MHz ) i !	0,3S(t,3H); 3,53(i,2H)) 12,00(3,ÍH)	1,25(m,18H); 1,51(0,28); 10,82(5,1H); 10,85(s,1H);
13	! ! 250 i 1 í	1 MHz ϊ j i !	0,34(t,3H); 3,52(t.,2H) : 11,38(5,ÍH)	1,22(0,258); 1,51(0,28); 10,78(5,ÍH); 10,81(5,1H);
i	{ í 250 i í	i MH:z ! 1 1 i	0,85(t,3H); 3,73 ( t-, 2H); 12,03(5,ÍH)	l,22(m,138); 1,48(0,28); 10,54(5,1H); 11,35(5,1H);
15	i 250 i 1	· MHz 1 ί í í	0,35(t,3H); 3,71(t,2H),· 11,35 ( 5, 1H )	1,26 í o, 1 08 : í . 53 (ο, 28 ) ; 10,75(3, ÍH),* 11,01(5, ÍH);
15	i ϊ 500 ! í {	í MHz j ! í	0,84(t,3H); 3,31((:-,2H); 11,32(5,1H)	l,25(m,148); l,51(o,28); 10,71(s,18); 10,38(s,1H);

exemplQ-IZ

Dodecil-? purinotriona-2.· 6,8 (Fórmula I =' Z.. e Z„... = COJ R, = C,_,K...._r j R.., = R.._t = R, = H) a‘s Mantém-ss 3 horas à sua temperatura de refluxo uma suspensão de 5,12 g de amino-S benzi 1.-1 bromo-5 pirimidínodiona-2,4, 1.1,1 g de dodecilamina e 100 ml. de n-butanol. 0 solvente é em seguida eliminado sob pressão reduzida, vertendo-se em seguida 50 ml de etanol sobre o resíduo e ?sol ando-se o produto formado. Obtém-se assim 4,2 g d© amino-õ benzi 1-1 tiodsci.lamino-5 pirimidinodiona-2,4 gue funde a 151°C.

b) Nsntém-ss durante 2 horas sob agitação, á temperatura ambiente, 2 g do produto obtido de acordo com sb 1 g de K...,GO.., .4- ♦· seco s 1 g de c1oroformiato de etilo em 20 ml de dimeti1formamida, antes de introduzir 200 ml de clorofórmio. 0 fase orgânica é lavada com agua de pH 5-6, e depois seca e concentrada. 0 resíduo é cromatografado sobre uma coluna de gel de silício eluindo com uma mistura de CK.-.0H/Ch01.~, (5% - v/v). Jsolam-se assim 1=54 g de amino-5 benzi 1-1 CN-dodeci1-N-etoxicarboni1)smino-S pirimidinodioria-2,4 que funde a 195^Í5C.

c) Introduz-se num aparelho de hidrogenar 100 ml de etanol, 5 g do produto obtido de acordo com b), 10 ml ds uma solução aquosa concentrada de ΝΗ,,ΟΗ e 0,3 g de paládio sobre carbono a 10%. A hidrogenação é efectuada â pressão ordinária e a SO“C. Quando a quantidade teórica de hidrogénio foi consumida adicionam-se 400 mi d© etanol è temperatura de cerca de SO°C e filtra-se o catalisador a cerca de essa temperatura. 0 solvente é eliminado até deixar um volume residual de 20 mi. 0 precipitado qus aparece aquando do arrefecimsnto é isolado. Obtém.....se ass i m 3,84 3 de am i no-S < N-dodec i 1 N-e toe i c a rbon i 1) -aa x no-S PÍrimidinodiona-2,4 que fundo a mais de 250°C.

d) Introduz-se 3,5 3 do produto obtido de acordo com cl em 100 ml de uma solução de etilato de sódio, preparada com 2,3 3 de sódio e mantém-se a solução durante 4 dias á sua temperatura de refluxo. 0 solvente é então destilado e o resíduo colocado em suspensão em 20 ml de água. A fase aquosa é acidificada por adição de uma solução aquosa concentrada de ácido clorídrico antes da filtração do precipitado formado.

Este é recristalizado em ácido acético. Obtém-se assim 1,55 3 de purinotriona pretenida que funde a mais de 280°C.

RMW (300 MHz) 3 : 0,35<t,3H); 1,27<m,13H),· 1,53<m,2K>,’

3,78<t,2H>; 10,43<s,lH>; H,28<s,2H>.

EXEMPLO 13

AmirfO-3 dodec i 1 amino-5 pi r imidi nodi ona-2,4 (Fórmula l

2,., - Hj R_t C.j.-.H.., i:

E,·..

R.

H)

Coloca-se 1 s do solução em 50 ml de etanol .

composto obtido no Exemplo 17 a) em Adicionam-se 100 mg de Pd/C a 10% e efectua-se uma hidrogenaçSo com a 50°C sob pressão atmosférica, átê ter sido consumida s quantidade teórica de hidrogénio. 0 catalisador é separado por filtração a quente e o solvente é eliminado sob pressão reduzida até a um voluma de cerca de 15 ml. 0 pv&cipii-sdc: formado é rec ristal izado em etanol. Isolam-se assim 510 mg do produto pretendido que funde a mais de 250°C

RMN (SOO rlHz) 8 : 0,8S(t,3H>,· 1 _;27(m, 1SH): 1 , 48(m, 2H>;

2,£-2(t,2H), 3,32(m, 1H) : 5,S7(s,2B): 3,SCXs, 1H) : 10.-03(3,14).

mn?

Amino.....5 oc tadeci lamino-S meti 1--3 pirimidinodions-2,4 (Fórmula 1 Z, s 2..... = H,‘ R, =^: Hj R^, = : R,.„ = 4.: R...

CM..,) ·,?

a) Introduz-se por íracçQes 2,05 g de cloro-S metil-3 nitro.....5 pirimidinodiona-2,4 resultante da nitração da doro-6 metil-3 pirimidinodiona-2,4 de acordo com um processo descrito em Liebigs Ann. Chem. S77 (Í3S4), numa solução de 3 g de octadeciIamina e de 1 g de trietilamina em 20 ml de etanol. A solução é mantida 20 minutos á sua temperatura de refluxo e depois neutralizada através da adição de ácido acético. 0 precipitado formado é lavado com água e rscristalizado em etanol.

Isolam-se assim 2,11 g de octadecilamino-S meti 1-3 rsitro-5 pirimidinodions-2,4 que funde a 130°C.

produto assim obtido é dissolvido em 50 ml de ácido fórmico e introduz-se o meio em pequenas porções de 2 g de zinco em pój depois de 1 hora de refluxo filtra-se a quente e evaporam-se os solventes do filtrado sob pressão reduzida. 0 resíduo e cristalizado com 15 ml de metanol. Obtém-se assim 1,3 g de formamido-S octadeciIamino-6 metil-3 pirimidinodiona-2,4 que funde a 19β°0.

c) A formamida atrás obida é tratada com HC1 em metanol como no Exemplo 1-b).

-.= c._.

Obtém~se deste modo o cloridrato do produto que funde a I37^ÚC.

pretendido

RMN <250 MHz) S 3, Í5<s,3H> ,‘ 3,32<m,2H):

: 0,83<t,3H>,‘ í,27(m,30H):

7,8e<s,lH)j 10,40(3,314).

(!

A actividade anti-radicais destes compostos foi determinada do modo que se segue: introduz-se em 370 .ul. de uma misture de metanol e de uma solução aquosa tamponada com TRIS (trometamina), HC1 <10 mM-pH 7,4) â razão de 1 volume de metanol por Ξ de tampão, 20 .ul de uma solução de DPPH' 1 mM e 10 .ul de uma solução do produto a testar em dimetiIsulfóxido. A mistura é mantida 20 minutos a 20°C antes de se determinar a densidade óptics a 517 am relativamente a uma mistura testemunha para a qual o produto a tes ta r não foi i ntroduz i do em d i me ti1su 1 f óx i do.

A percentagem P de retenção do radicai livre é como uma relação das densidades ópticas D definida

D<produto) - D<testemunha)

P = ----------------------------------------------------------------------------------------- X 100

D< testemunha)

A concentração eficaz 50 (CE,..,,) concentrações diferentes numa gama de 10 aquela para a qual medidas efectuadas em redor da CE_Cf...

p = com hío Quadro 5 figuram as CEj..^ para compostos de acordo com o invento, bem como para o ácido urico e seus derivados N-metilados e para o produto A.

qUAORO s

1 1 PRODUTO 1	i ^CES0 \| (.um) 4..............................................................	I------------------------------------------------------ j PPODUTD ...............L...........................................................................	Ϊ---------------- i ^CES0 ί i 1 ! ...................................... J
t ΐ ácido úrico		s ............... í	! ................................. \| exemplo 1.1.	!.......................I \ 1
i ácido úrico		j 4,5	j 1.2	j 6,2 \|
	CH..-3 O	ί 3,2	1 13	1 ⁴'⁵ !
i	CH.u-7	\| 20	ί 14	ί ³- !
1	CH.,-3	j 5,2	ί	í 1
1 A		! ⁴	í 1δ	í ⁴ ΐ
exemp1 o	1	1 5	1 í*	1 ³^⁴ 1
i	•-Í .Λ.	j 7	\| 17	\| 27 \|
S	3	\| 5,5	1 18	1 4,5 \|
í	4	6,4	! 19	1 1
	5	í 6,4	i	i í
j	6	í 6,5	i
	7	\| 5,6		! í
í	3	I 6,5	í	i i
5	9	\| 2,7	!	í 1
ΐ L............................	10	1 6,5 !	i !	! 1 S í
A actividade	inibidora	da peroxidacão	dos lipidos

msmbranârios dos compostos foi determinado do modo que se segue;

a) Preparação das mi tocondr :i as

Extrai-se um coração de boi imediataments após o abate do animai e arrefece-se o mesmo a 4°C, temperatura á qual, serão efectuadas todas as operações seguintes. 0 coração é lavado com ums solução aquosa tampão de pH 7,4 (TRIS, HC1 IO mil, EDTA 2 mH, KC1 20 mM) e e® seguida os tecidos conjuntivos e as gorduras são eliminados. 0 músculo é então picado e esse material picado é suspenso numa solução aquosa tampão de pH 7,4 (TRIS, HCI 10 mH, sacarose 250 mM, EDTA j. mH) â razão de 700 g de músculo por 3 litros. 0 pH da suspensão ê reajustado para 7,4, regularmente, antes de se isolar para filtração sobre uma gaze o material picado. Esse material é seguidamente colocado de novo em suspensão em 3 litros do segundo tampão e a suspensão é moída antes de ser centrifugada durante 2ú minutos a 1000 g, sendo depois o sobrenadante centrifugado 15 minutos a 17000 g. O resíduo da centrifugaçã© é lavado várias vezes com uma solução tampão de pH 7,4 (TRIS, HC1 15 mH, sacarose 250 mH) com separação por centrifugação da solução de lavagem, preparando-se finalmento uma solução homogénea de mitocôndrias nesse mesmo tampão de 50 mg de proteínas/mi que será conservada congelada em gotícuias, em azoto líquido. Após a descongelação os controlos respirstórios realizados através da medida das velocidades de consumo de oxigénio sm presença ou não de ADP para os substratos succinsto e gluismsio/mslsto, são 30% dos obtidos antes da congelação, vários meses após a preparação das mi toeOndri as.

b) L. i pope r oxidação

Dispersa-se a 4°C uma fraeção de mitocôndrias dasconge.....

ladas numa solução aquosa tamponada de pH 7,4 (TRIS, HCI 30mM contendo KCI 140 mH), para se obter uma concentração de proteínas de 0,37 mg/ml; introduz-se em 950 j.íI dessa suspensão 10 .ui duma solução de ácido di-hidroxifumárico 100 mm cujo »H foi ajustado para um pH de 7,4, 2 .ui duma solução do produto a testar em solução em di.metiIsulfóxido CDMSO) e 30 ijl ds uma solução de

FeSO ..·< NH , )....30 , 1 mH, conservada ao abrigo do oxigénio e da luz. 4 · 4 z 4

A amostra testemunha contém o DMSO sem o produto a testar enquanto que o placebo não contém nem ácido difumárico, nem ferro.

Após uma primeira· retirada de uma porção de 100 ,ul , ss amostras são mantidas a 37°C sob ligeira agitação e as retiradas de 100 jul. são efectuadas passados 20 e 40 minutos.

Cada retirada de produto é introduzida imediatamente em 1,5 ml de uma solução de ácido tricloroacético a 13,5% Cp/v> e de ácido tiobarbitúrico a 0.33% (p/v) numa solução aquosa de ácido clorídrico 0,35 M e os recipinetes são fechados s depois levados até 100-C durante 15 minutos, antes de serem arrefecidos até á temperatura ambiente no espaço de 5 minutos. Adiciona-se então 1. mi de uma solução aquosa de ácido tricloroacético a 70% íp/v) antes de se efectusr a medição espsctrométrica, com um comprimento de onda de excitação de SIS nm e de emissão de 553 nm.

Uma gama pad r So de ma 1. ona I. de í do b i s™ C d i s t i 1 a c © ta 1. > diluído numa solução aquosa de HCl 0,1 N permite calcular a que concentração de aldeído corresponde cada intensidade da fluorescência i.

Nas condiçfíes experimentais determinou-se i - 1,33

C (nmole) = ---------------------------------------------35,5 e, por consequência, a percentagem de inibição da peroxidação I pode ser calculada pela fórmula í i -· 1 , 891 testemunha ..... ί i -· ί 89)ensaio ΐ β ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- X 100 <:1 - 1,89)testemunhe ~ <i ~ 1,89) placebo

A concentração inibindo 50% do sinal Cíj-..., isto é, aquela para a qual I = 50, é calculada depois das medidas efec·tusdas com 4 concentrações diferentes do produto a testar numa gama de 10 em redor da

Os resultados obtidos são indicados no Quadro 6. 0 ácido úrico não inibe a formação de malonaldeido a uma concentra.....

ção inferior a 100 juM; os seus derivados u-mstilados são pouco sctivos; para o mais sctivo I = 35 á concentração de 100 aúI .

QUADRO 6

ί - --------τ j sxemp1ο ΐ !.........................................................L	^CIso i ( ·.!ϋ ) 1 .............. !	exemp1ο	ϊ------------------------------------------ί 1 -I_so I OjM> ί............... „
J .................... ! ΐ ^Α 1	Ί 0,7 \|	11	ϊ I 1,25
j ί ί	0,24 \|	12	ΐ 0,3
I ² ί	0,27 ί	13	! 0,3
1 ³ 1	0,26 ί	14	1 1,6
( 4 Ι	0,3 {
! 5 \|	0,3 ί	15
ί ⁶ 1	8,5 ί	16	ί 3,7
! ⁷ }	0,23 ;	17	1 1,6
1 3 \|	0,62 \|	18	ί 0,57
j 3 !	0,35 !	13	ΐ 20
1 10 1 1 L	25 ί ί		.ί...	...........1

Reivindicações

Claims

í = fórmula;

Processo para a preparação de um composto de em que um dos símbolos R.,, alquilo C..,—fi Z 4Ú V alquilo C\-C_o e os outros

R.._;i, R.__: ou R^ representa um grupo representam cada um H ou um grupo representam cada um H ou representam em conjunto o grupo carbonilo ou tiocarbonilo, entendendo-se que quando R^ represe é diferente de H, quando R^ representa o grupo n-dodec i lo, um dos símbolos R._, ou R, e os seus sais de adição, com um ácido farmaceuticamente aceitável , caractsrizado por:

1) se introduzir um grupo amino NR\2, na posição 5 de um composto de fórmula:

- quer por redução de ua grupo NO ou M0_o introduzido na posição 5 respectivamente por nitrosação ou nitraçSo do referido composto CV) para se obter os compostos em que ~ R, H

- quer por acção de ΗΝβ,,Ζ., sobre o derivado bromado na posição õ₅ obtido por bromação do referido composto ív) para se obter os compostos em que Z₁ ~ H g R₄ representa alquilo e eventualmente₅ para se obter os compostos ssi que <2^ s representam em conjunto o grupo carbonilo ou tiocarbonilo_s
2) se fazer reagir respectivamente a ureia ou a tioureia sabre o composto de fórmulas eventualmente por intermédio do carbamato na posição b quando R₇representa alquilo s R<-> representa H«

2â - Processo de acordo com a rizado por, além disso, se saiificar os que 2., e 2.-, representam H, por acçSo de te aceitável.

reivindicação i, caractecompostos de fórmula 1 em um ácido farmaceuticamen3® - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte·rizsdo por um dos símbolos R., , R.„.., R... ou R„ representar um grupo _sl,_u„o C₁₂-C₂₀. ^Z '= ‘

4® - Processo de acordo com uma das reivindicações 1 3 3, para se preparar um composto de fórmula X em que 2.,, 2.-, e Ρ\ representam H, caracter.iza.do por se fazer reagir um reagente de nitrosação sobre o composto de fórmula V e por se reduzir por hidrogenaçáo catalítica o composto obtido.

5â ·· Processo de acordo com uma das reivindicações i a 3, para se preparar um composto de fórmula J em que 2., , 2.-, e P,

Λ -Cl· representam H, caracterizado por se fazer reagir um reagente de nitrosação sobre o composto de fórmula V e por se reduzir o derivado nitroso obtido por intermédio de uma formamida.

Se Processo de acordo com uma das reivindicações 1 a

3, para se preparar um composto de fórmula X em que 2, , 2._ e representam H, caracterizado por se efectuar uma nitraçâo composto de fórmula V seguida de uma redução do composto obtido '1 do

7s’_: -· Processo de acordo com uma das reivindicações 1 a

8, para se preparar um composto de fórmula 1 em que representam H e R^ um grupo alquilo, carac ter izado por se efec···· tuar uma bromação do composto de fórmula V e por se fazer reagir uma amina de fórmula Η..,ΝΡ., sobre o composto obtido.