PT95662A - Processo de inibicao da enzima topoisomerase i com camptotecina e de preparacao de composicoes farmaceuticas - Google Patents

Description

•Sb * 71 752 A. -2- &

MEMÓRIA DESCRITIVA PEDIDOS AFINS

Este pedido i uma continuação-em-parte do pedido de pa tente dos E.U.A. nQ. de série 07/424 910 apresentado a 23 de Ou tubro de 1989, o qual é uma continuação-em-parte do pedido de pa tente dos E.U.A. nQ. de série 07/032 449 apresentado em 31 de Mar ço de 1987, agora patente dos E.U.A. 4 894 456 e é uma continua ção~em~parte do pedido de patente dos E.U.A. nQ. de série 07/511 953 apresentada a 17 de Abril de 1990, o qual é uma continuação em parte do pedido de patente dos E.U.A. nQ. de série 07/038 157 a presentado a 14 de Abril de 1987, sendo todos aqui incorporados na sua globalidade por referência.

ANTECEDENTES DO INVENTO CAMPO DO INVENTO 0 invento refere-se a camptotecinas e seus análogos, que apresentam efeitos de prolongamento da vida em vários sistemas de leucemia tais como P-388 e L-1210; inibição de tumores em a nimais tais como o melanoma B-16 e são potentes inibidores da t£ poisomerase I, e a um processo para os sintetizar por meio de um novo intermediário tricíclico contendo hidroxilo. O invento re fere ainda um processo para inibir a topoisomerase I e tratar o cancro colo-rectal.

DISCUSSÃO DOS ANTECEDENTES A camptotecina é um alcaloide pentacíclico inicialmente isolado a partir de madeira e cortiça de Camptotheca acuminata por Wall et al (M.E. Wall, M.C. Wani, C.E. Cook, K.H. Palmer, A. T. McPhail e G.A. Sim, J.Am. Chem. Soc, 94, 388 (1966). A camptotecina é muitíssimo activa biologicamente e apre senta uma forte actividade inibitória em relação â biosíntese de

-3- , >/- t b V 71 752 c' ácidos nucleicos. Adicionalmente, a camptotecina exibe activida de anti-tumor potente contra carcinoma transplantado experimentalmente tal como a leucemia L-1210 em ratinhos ou tumor Walker 256 em ratazanas.

Sao conhecidos vários processos para a síntese de camp totecina e de análogos de camptotecina. Estes processos sintéti cos incluem (i) processos nos quais a camptotecina de origem na tural é modificada sinteticamente para produzir vários análogos e (ii) processos totalmente sintéticos.

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As Patentes dos E.U.A. 4 604 463; 4 545 880; e 4 473 692 bem como o Pedido de Patente Europeia 0074256 são exemplos do ti po de estratégia sintética anterior. Exemplos adicionais desta estratégia podem ser encontrados nas Patentes Japonesas 84/46 284; 84/51 287; e 82/116 015. Estes processos necessitam de camptot^ cina de origem natural que é difícil de isolar e, assim, estes pr£ cessos não são adequados para a produção, em grandes quantidades, de camptotecina ou análogos.

Exemplos de várias vias totalmente sintéticas para obter camptotecinas e análogos de camptotecinas podem ser encontrados nas seguintes referências: Sei. Sin. (Engl. Ed), 21(1), 87-98 (1978), Fitoterpapia, 45(3), 87-101 (1974); Yakugaku Zashi, 92(6), 743-6 (1972); J. Org. Chem., 40(14), 2140-1 (1975)Hua Hsueh

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Hsueh Pao, 39(2), 171-8 (1981); J. Chem. Soc., Perkin Trans 1, (5), 1563-8 (1981); Heterocycles, 14(7), 951-3 (1980); J. Amer. Chem. Soc., 94(10), 3631-2 (1972); J. Chem. Soc. D, (7), 404 (1970) e Patente dos E.U.A. 4 031 098.

Wani et al, J. Med. Chem., 23. 554 (1980) revelam uma sín tese de camptotecina e análogos de camptotecina que envolve a re acção de um composto tricíclico com um ortoaminoaldeído adequada mente substituído para dar desoxicamptotecina, como se apresenta na Equação 1 abaixo, 71 752

A desoxicamptotecina é então tratada com oxigénio para dar análogos de camptotecina. A principal desvantagem deste pro cedimento é a insolubilidade da desoxicamptotecina e dos seus análogos, exigindo grandes volumes de solvente no passo final. Sob estas condições, obtém-se um rendimento fraco do produto de oxigenação.

Persiste assim a necessidade de uma síntese de campto tecina e análogos de camptotecina eficiente e com rendimento e levado, que não requeira o isolamento prévio da camptotecina de origem natural.

Persiste também a necessidade de um processo de sínte se de camptotecina e análogos de camptotecina que não apresen te problemas de insolubilidade dos compostos intermediários e os rendimentos baixos resultantes.

Persiste, além disso, a necessidade de novos análogos de camptotecina que possam ser sintetizados de uma maneira efi ciente e com rendimento elevado e que apresentem uma boa acti vidade biológica.

SUMÁRIO DO INVENTO

Consequentemente, um objectivo do presente invento é o -5- í“ 71 752 ν __ ΊΡ"'~ de proporcionar um processo de síntese de camptotecina e análo gos de camptotecina, com elevado rendimento, num processo total mente sintético.

Outro objectivo do presente invento e o de proporcionar um processo para a síntese de camptotecina e análogos de cam£ totecina que não apresente problemas associados à insolubilida de dos compostos intermediários.

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Um outro objectivo do invento é proporcionar um proces^ so para a preparação de camptotecina e análogos de camptoteci na que possa ser facilmente modificado de modo a produzir uma variedade de estruturas análogas.

Ainda um outro objectivo do presente invento á propor cionar análogos da camptotecina que apresentem boa actividade anti-tumoral e outras actividades biológicas desejáveis.

Um outro objectivo do presente invento é proporcionar um método para tratar cancro colo-rectal por administração de uma quantidade anti-tumoral ou anti-cancro de um composto de cam£ totecina.

Estes objectivos e outros objectivos do presente inven to que se tornarão evidentes da descrição que se segue têm si do conseguidos pelo presente processo para a siitese de campto tecina e análogos de camptotecina, que inclui os passos de:

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Ciclizar um composto com a fórmula apresentada abaixo, onde X é um grupo orgânico que é convertido num grupo carboni lo quando tratado com um ácido,

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0.-. ‘ ‘X -6- para formar uma lactona possuindo a fórmula

J desproteger a referida lactona, para formar um composto tricl clico contendo hidroxilo, possuindo a fórmula apresentada abai xo, e

J fazer reagir o referido composto tricíclico contendo hidroxilo com um composto orto-amino substituído de fórmula

COOH na qual n=l-2 e na qual cada R é seleccionado do grupo consi£ tindo em grupos ciano, metilenodioxi, formilo, hidroxi, alcoxi, Ci_8, nitro, amino, cloro, bromo, iodo, fluoro, alquilo Ci_8> trifluorometilo, aminometilo, azido, amido e hidrazino; é ou alquilo C]_; e ê a cadeia lateral de qualquer dos vin te aminoácidos de origem natural. 71 752

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BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

As figuras la e lb ilustram a síntese do composto tri cíclico contendo hidroxilo 11, de acordo com o invento.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS CONCRETIZAÇÕES PREFERIDAS

Os análogos da camptotecina do presente invento têm a estrutura básica da camptotecina apresentada abaixo, na qual o anel A está substituído.

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Os substituintes no âmbito do presente invento incluem grupos hidroxi, nitro, amino, cloro, bromo, iodo, fluoro, alquiÍ 1° C]__g, alcoxi Ci»8> trifluorometilo, aminometilo, amido, hi drazino, azido, formilo e ciano bem como grupos compreendendo aminoácidos ligados ao anel aromático por meio do átomo de azo to do amino. Os grupos alquilo preferidos incluem grupos meti lo, etilo, propilo, butilo, isopropilo, isobutilo e sec-butiló. Os grupos alcoxi preferidos incluem grupos metoxi, etoxi, pro poxi e isopropoxi.

Os grupos aminoácidos preferidos são os 20 aminoácidos de origem natural possuindo uma configuração (L). Estes aminoá eidos são conhecidos dos peritos na arte.

Adicionalmente, os dois substituintes do anel A podem ser ligados entre si para formar um substituinte bifuncional tal como o grupo metilenodioxi. Os substituintes metilenodioxi po dem estar ligados a quaisquer duas posições consecutivas do a nel A,por exemplo, as posições 9, 10; 10, 11 ou 11, 12. -8- ^ ú <r'

Os substituintes preferidos incluem os substituintes hi droxi, amino, ciano e metilenodioxi. Um substituinte particular mente preferido Ó o grupo metilenodioxi.

Compostos particularmente preferidos, no âmbito do in vento, incluem ll-metoxi-20(RS)-camptotecina, ll-metoxi-20(S)--camptotecina, ll-hidroxi-20(RS)-camptotecina, ll-hidroxi-20(S)--camptotecina, 10-hidroxi-20(RS)-camptotecina, 10-hidroxi-20(S)--camptotecina, 9-metoxi-20(RS)-camptotecina, 9-metoxi-20(S)--camptotecina, 9-hidroxi-20(RS)-camptotecina, 9-hidroxi-20(S)--camptotecina, 10-nitro-20(RS)-camptotecina, 10-nitro-20(S)--camptotecina, 10-amino-20(RS)-camptotecina, 10-amino-20(S)--camptotecina, 9-nitro-20(RS)-camptotecina, 9-nitro-20(S)-cam£ totecina, 9-amino-20(RS)-camptotecina, 9-amino-20(S)-camptote cina, ll-nitro-20(RS)-camptotecina, ll-nitro-20 (S) -camptoteci. na, ll-amino-20(RS)-camptotecina, ll-amino-20(S)-camptotecina, 10, ll-di-hidroxi-20(RS)-camptotecina, 10,ll-di-hidroxi-20(S)--camptotecina, 10-cloro-20(RS)-camptotecina, 10-cloro-20(S)--camptotecina, 10-metil-20(RS)-camptotecina, 10-metil-20(S)--camptotecina, ll-formil-20(RS)-camptotecina, ll-formil-20(S)--camptotecina, ll-ciano-20(RS)-camptotecina, ll-ciano-20(S)--camptotecina e 10,ll-metilenodioxi-20(RS)-camptotecina e 10,11--metilenodioxi-20(S)-camptotecina.

Neste pedido todas as estruturas representam todos os isómeros possíveis possuindo a estrutura química indicada. A estrutura da camptotecina apresentada acima representa, portan to, compostos possuindo as configurações 20(S), 20(R) e 20(RS) da posição 20 do anel da lactona . Consideram-se no âmbito do presente invento todos estes isómeros e os isómeros que surgem das configurações estereoquímicas no grupo R substituinte.

Os compostos 20(RS)-camptotecina do presente invento po dem ser resolvidos em enantiómeros separados 20(R) e 20(S) usan do processos de resolução conhecidos. Por exemplo, os derivados de 20(RS)-camptotecina podem ser resolvidos por reacção com uma amina quiral adequada, tal como R-(+)-d-metilbenzilamina ou (S)-- (-) - d,- metilbenzilamina, para formar as correspondentes amidas ν 71 752

'"tf -9- j# 1Í& diastereomérícas pelo método revelado no pedido dos E.U.A. nQ. de série 07/511 953, incorporado aqui para referência. Após se paração das amidas diastereoméricos, as amidas são tratadas com ácido para se reformar a estrutura em anéis completa da campto tecina.

Estão também incluídos no âmbito do presente invento com postos nos quais o anel A da estrutura de camptotecina é modifi cado de modo a conter um heteroãtomo. As estruturas modificadas podem ter um anel A que contém 5 ou 6 átomos e o heteroãtomo po de ser um átomo de azoto, enxofre ou oxigénio. Estes compostos podem ser representados pela estrutura geral apresentada abai xo, na qual o anel A é um anel aromático de 5 ou 6 membros con tendo o heteroãtomo X

Os compostos preferidos possuindo uma estrutura com o anel A modificado incluem compostos nos quais o anel A é um a nel aromático de 6 membros contendo azoto, e compostos nos quais o anel A é um anel aromático de 5 membros contendo enxofre. Com postos particularmente preferidos são 10-aza-20(RS)- e 10-aza--20(S)-camptotecinas e A-nor-9-tia-20(RS)- e A-nor-9-tia-20(S)--camptotecinas.

Os análogos de camptotecina salientados acima podem ser sintetizados de acordo com o processo do presente invento por reacção de um composto tricíclico contendo um grupo 20-hidroxí lo com um aldeído ou cetona orto-amino aromáticos, apropriadamente substituídos. Os análogos de camptotecina possuindo um subjs tituinte alquilo em C7 são produzidos quando se usa a orto-ami no cetona apropriada. 71 752 f-.ι -P- -10-

Um passo importante no processo do presente invento é a síntese do composto tricíclico contendo hidroxilo, possuindo a fórmula apresentada abaixo e no qual RÍ é um grupo hidroxilo.

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Um processo sintético anteriormente desenvolvido pelos presentes inventores (J. Med. Chem., 23, 554 (1980)) utilizava um composto tricíclico afim mas estruturalmente diferente (fór mula I, RÍ=H). Nesse processo, o composto tricíclico reagiu com um ortoaminoaldeído adequado sob condições alcalinas ou ácidas para se obter uma desoxicamptotecina. A desoxicamptotecina rea giu então com oxigénio para se obterem os análogos de camptote cina nos quais R é OH. Uma desvantagem importante deste procedi mento é a insolubilidade da desoxicamptotecina e seus análogos, exigindo grandes volumes de solvente no passo final e dando ori gem a fracos rendimentos do produto de oxigenação.

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Em contraste, o processo do presente invento sintetiza o intermediário tricíclico chave (11) de acordo com a Figura (1). A síntese dos compostos 1-9 foi revelada em Wani et al, J. Med. Chem., 23, 554 (1980). Ainda em contraste com a síntese anterior, o presente processo introduz o grupo 20-hidroxilo mais cedo, na sequência sintética e forma depois o anel lactona para dar o composto 10. Depois da desprotecção do grupo carbonilo, obtém--se o composto tricíclico contendo hidroxilo 11, chave. A protecção do grupo carbonilo do composto 3 pode ser e fectuada usando qualquer grupo protector orgânico, apropriado, que possa ser removido ou convertido num grupo carbonilo por tra tamento com ácido. 0 grupo carbonilo é assim "desprotegido". Ejs tes grupos protectores são bastante conhecidos dos familiarizados com a química sintética e incluem acetais, cetais, tioacetais, -11- - m, tiocetais, etc. Os grupos protectores preferidos têm 2-6 átomos de carbono. Um grupo protector especialmente preferido é -OCH2CH2O-

Como consequência da introdução prévia do grupo hidro xilo no composto tricíclico 11, os análogos pentacíclicos dese jados são reduzidos num passo por reacção com os compostos or to-amino carbonilo apropriados. Tanto o composto 11 como os cor respondentes sintões£etónicos são muito solúveis em solventes orgânicos enquanto que o produto pentacíclico é insolúvel. Assim, 0 passo de oxigenação, i.e., a introdução do grupo hidroxilo, ê realizada, convenientemente, na etapa tricíclica em vez de o ser nos análogos desoxi pentacíclicos insolúveis. 0 composto tricíclico 11 é então reagido com um orto-a mino aldeído ou cetona adequadamente substituído para dar um a nálogo de camptotecina. Os orto-amino aldeídos e cetonas substi tuídos, que estão no âmbito do presente invento, incluem orto--amino aldeídos e cetonas possuindo pelo menos um substituinte adicional no anel aromático. Este substituinte pode estar em uma ou mais das posições equivalentes ãs posições 9, 10, 11, ou 12 do anel A da estrutura final da camptotecina, como se mostra a baixo.

Os orto-amino aldeídos e cetonas substituídos preferi dos têm substituintes numa ou mais das posições equivalentes 9, 10 ou 11.

Os substituintes do orto-aminoaldeído ou cetona substituído incluem grupos hidroxi, nitro, amino, alquilo Cq_g, cloro, bromo, iodo, fluoro, metilenòdioxi (-O-CH2-O-), alcoxi Cq.g, trifluorometilo, aminometilo, amido, hidrazino, azido, formilo e ciano bem como grupos compreendendo aminoácidos ligados ao a nel aromático através do átomo de azoto do amino. Exemplos pre feridos incluem os substituintes hidroxi, amino, ciano e meti-lenodioxi. Um substituinte particularmente preferido é o grupo metilenodioxi.

Quando se faz reagir uma orto-aminocetona com o compos^ to tricíclico 11, produz-se um análogo de camptotecina possuin do um substituinte alquilo em C7. As orto-amino cetonas preferidas são aquelas nas quais R3 é um grupo alquilo possuindo 1-8 átomos de carbono. Orto-amino cetonas especialmente preferidas são orto-aminoacetofenona e orto-aminopropiofenona.

Os orto-amino aldeídos e cetonas podem ser substituídos por um grupo possuindo a fórmula

-NH-CHR3-COOH na qual R3 é uma cadeia lateral de um dos vinte aminoácidos de origem natural. 0 substituinte aminoácido é ligado ao anel aro mático por meio do átomo de azoto e pode ser ligado a qualquer posição do anel aromático equivalente ãs posições 9, 10, 11 ou 12 do anel A da estrutura de camptotecina final.

Os orto-amino aldeídos e cetonas podem estar na forma com carbonilo livre ou numa forma em que o carbonilo do aldeí. do ou cetona esteja protegido por um grupo protector Standard. Estes grupos protectores são muito conhecidos dos peritos na arte. Os orto-amino aldeídos e cetonas na forma com carbonilo livre e na forma com o carbonilo protegido são considerados no âmbito do presente invento e são adequados para uso no presen te processo À reacção na qual o grupo hidroxilo é introduzido no composto tricíclico intermediário, i.e., o passo de ciclização, pode ser efectuada por qualquer reacção adequada que introduza o grupo hidroxilo na posição apropriada do composto 9 sem dar origem a reacções laterais significativas tais como degradação do próprio composto 9. A reacção é preferivelmente, conduzida na presença de -13- 71 752 y*“'* --jw f Λ-/ " „rr-^*í ú'·-'·' ' um catalisador básico. Catalisadores básicos adequados incluem bases inorgânicas e orgânicas. As bases inorgânicas preferidas incluem, por exemplo, carbonato de sódio e de potássio e bicar bonato de sódio e de potássio. As bases orgânicas preferidas in cluem bases impedidas tais como trietilamina e diisopropilami-na. Um catalisador básico particularmente preferido ê carbonato de potássio.

J A reacção na qual o grupo hidroxilo é introduzido pode ser realizada na presença de qualquer solvente polar ou não po lar no qual os reagentes sejam adequadamente solúveis, para re agir.

Preferem-se os solventes orgânicos polares tais como me tanol, etanol, propanol, butanol e dimetilformamida. Podem tam bem usar-se solventes éter, incluindo éteres coroa. 0 oxigénio do grupo hidroxilo geralmente deriva do oxi génio molecular que é borbulhado na solução reaccional. Embora se prefira o uso de oxigénio, podem também usar-se outras fontes de oxigénio tal como o ar. Podem também ser empregues outros agentes de oxidação tal como peróxido de hidrogénio, tetraace-tato de chumbo e dióxido de selênio.

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Aquela reacção é preferivelmente conduzida â temperatu ra ambiente embora a temperatura reaccional especifica dependa das condições reaccionais e reagentes específicos usados. A desprotecção do grupo carbonilo do composto 10 é rea lizada por tratamento com ácido. Ácidos adequados incluem ácidos minerais tais como HC1, H2SO4, HNO3 e H3PO4, bem como ácidos orgânicos tais como ácidos alcanóicos possuindo 1-10 átomos de carbono, preferivelmente ácido acético e ácidos arilsulfóni cos Cq_X2> especialmente ácido p-tolmeno-sulfónico. A despro-tecçao de um grupo carbonilo, desta maneira, é conhecida dos pe ritos na arte. 0 composto tricíclico 11 é então feito reagir com um or to-amino aldeído ou cetona substituído, na presença de um cata lisador ácido ou básico. 0 catalisador básico é preferivelmente -14- '/// 71 752 // /? t//, é' qualquer dos catalisadores básicos assinalados anteriormente na ciclizaçao do composto 9 para a formação do composto 10, i.e. para a introdução do grupo hidroxilo no composto tricíclico 11. 0 catalisador ácido é preferivelmente um ácido mineral tal co mo por exemplo HC1, H2SO4, HNO3 e H3PO4 ou ácidos orgânicos tais como ácidos alcanóicos 0χ_8 e ácidos arilsulfónicos Ci_i2> es pecialmente ácido p-tolueno-sulfónico.

J Á reacção do composto 11 com um composto orto-amino a propriado pode ser realizada sem ou na presença de um solvente polar ou não polar. Os solventes polares preferidos são os ál còois Ci_6, éteres e dimetilformamida. Os solventes não pola res são alquil hidrocarbonetos de cadeia linear ou ramificada possuindo 4-10 átomos de carbono e hidrocarbonetos aromáticos possuindo 6-20 átomos de carbono. Um solvente especialmente pre ferido é o tolueno. A reacção do composto tricíclico contendo hidroxilo com 0 composto orto-amino opcionalmente substituído é geralmente con duzida com aquecimento a refluxo. Os tempos reaccionais varia rarão com os reagentes particulares mas estão geralmente na ga ma de cerca de 10 minutos a 24 horas. Os tempos reaccionais pre feridos estão na gama de 2 -10 horas.

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Estão também no âmbito do presente invento análogos da camptotecina preparados por hidrólise do anel lactona dos aná logos de camptotecina preparados como se descreveu acima, usan do uma solução aquosa de álcali para preparar os sais de metal alcalino dos análogos de camptotecina nos quais o anel lactona foi aberto para formar os grupos funcionais hidroxilo e carboxi lato correspondentes. A hidrólise é tipicamente realizada em so lução aquosa usando um equivalente de um hidróxido de metal alcalino. Os hidróxidos de metais alcalinos preferidos são o hi dróxido de potássio e o hidróxido de sódio, sendo o hidróxido de sódio particularmente preferido. A reacção de hidrólise pode ser conduzida a qualquer tem peratura que permita a reacção adequada do análogo de camptoteçi na com o hidróxido de metal alcalino aquoso, desde que a tempera 71 752

e*rS|35* ' ik *κ -15- tura seja suficientemente baixa para evitar a decomposição dos materiais de partida. As temperaturas adequadas situam-se entre 5 e 502 C, sendo as temperaturas preferidas próximas da tem peratura ambiente. Depois da hidrólise, o sal de metal do anã logo da camptotecina pode ser isolado e purificado por procej; sos de recristalização ou cromatográficos Standard. Os sais par ticularmente preferidos são os sais de sódio de 10,11-metileno dioxi-20(RS)-camptotecina e 10,ll-metilenodioxi-20(S)-camptote cina. j

Os análogos de camptotecina do presente invento têm u ma actividade biológica excelente. Quando aqui usado "activida de biológica" refere-se ã capacidade dos análogos da camptote cina inibirem as enzimas topoisomerase, em particular topoiso merase I, e a sua capacidade de exercer actividade anti-leucé mica. A actividade anti-leucémica pode ser determinada pela ca pacidade dos respectivos compostos inibirem células de leucemi a de ratinho L-1210. A actividade anti-leucémica é demonstrada nas tabelas I-III pela actividade dos compostos particulares contra células de leucemia de ratinho 1210. Podem também usar -se outros modelos anti-leucémicos e anti-tumor, vitro e in vivo, conhecidos, tal como o ensaio do complexo clivável apre sentado na tabela IV, para determinar a adtividade anti-leucé mica. j

Os análogos da camptotecina, em particular 9-amino-, 10-amino-, 10,11-metilenodioxi- e sal de sódio de 10,11-meti lenodioxi-camptotecina em ambas as configurações 20(RS) e 20(S) são muitissimo activos, como inibidores da topoisomerase I co mo foi demonstrado em ensaios in vitro e também em modelos de tumor in vivo tal como linhas de tumor de xeno-enxerto colo-rec tal humano. Estes análogos da camptotecina mostraram causar re missão de tumores em linhas de xeno-enxerto colo-rectal humanas tal como cancro do cólon humano HT-29, cancro do cólon CASE e tumores SW 48. Ver B.C. Giovanella, J. S. Stehlin, M.E. Wall, M.C. Wani, A.W. Nicholas, L.F. Liu, R. Silber e M. Potmesil, Highly Effective DNA Topoisomerase-I Targeted Chemotherapy of Human Colon Câncer in Xenografts, Science, vol 246, páginas 71 752 / ..-vrr-ff

c

t/ 1046-1048 (1989). Em adição, alguns xeno-enxertos do fígado e pulmão humanos são fõrtemente inibidos por estes análogos.

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Os análogos da camptotecina do presente invento, e em particular 9-amino-20(S)-, 10-amino-20(S)-, 10,11-metilenodio xi-20(S)- e o sal de sódio de 10,ll-metilenodioxi-20(S)-campto tecina proporcionam, portanto, um método para inibir a topoiso merase I e tratar cancro colo-rectal por administração a um ma mífero, e em particular a um paciente humano, de uma quantida de anti-tumor eficaz do análogo de camptotecina. A elevada ac tividade anti-topoisomerase I destes análogos da camptotecina permitirá o tratamento de adenocarcinomas do cólon e rectal,em mamíferos. Similarmente, estes compostos podem ser úteis para tratar neoplasmas do fígado e pulmão.

J A actividade anti-leucémica em ratinhos de vários aná logos da camptotecina com o anel A oxigenado é apresentada na Tabela I. Nas Tabelas II eIII mostram-se dados semelhantes pa ra análogos com azoto e para análogos com o anel A modificado, respectivamente. Na maioria dos casos ensaiou-se também a camp totecina ou um análogo com actividade bem definida ao mesmo tem po que um controlo positivo, e apresentam-se os resultados nas notas de pé de página das tabelas. Deste modo pode compara-se a actividade anti-leucémica relativa dos vários compostos. A ac tividade biológica dos análogos de camptotecina adicionais é descrita em J. Med. Chem. 23, páginas 554-560 (1980).

Foi demonstrada a capacidade da camptotecina Inibir to poisomerase I. Ver J. Biol. Chem., 260, 14873-73 (1985). 71 752/7) /;//c.1 · -:· *" 'λ-17- IA Ojo

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A Tabela IV apresentada abaixo mostra a actividade ini bitôria, surpreendente, da topoisomerase I, dos análogos de camp totecina do presente invento. 0 ensaio do complexo clivável foi realizado de acordo com o método descrito em Hsiang, Y-H et al, J. Biol. Chem., 260: 14873-14878 (1985), TABELA IV Ensaio do Complexo Clivável , de Camptotecina e Análogos

Composto Nome ECr^1 2

^g/mL

1 10,ll-MDO-20(S)-CPT "0,01 /ig/mL 2 10,ll-MDO-20(RS)-CPT ~0, 02 ^ug/mL 3 10,ll-MDO-20(S)-CPT, SAL DE Na+ ~0,1 jUg/mL 4 9-AMINO-20(RS)-CPT -0,2 jag/mL 5 10,11-MDO-20(RS)-CPT, SAL DE Na+ “0,2 yUg/mL 6 20(S)-CPT “0,2 jug/mL 7 20(RS)-CPT ~0,8 ^ig/mL 8 20(RS)-CPT, SAL DE Na+ “0,9 μg/mL 9 9,10-MDO-20(RS)-CPT ~2 jug/mL 10 9-AMINO-20(RS)-CPT, SAL DE Na+ ~10 fig/mL 11 20(R)-CPT 10 ^ug/mL 1

Abreviaturas CPT = Camptotecina MDO = Metilenodioxi 2 EC5Q é a concentração de um composto que origina uma inibi ção de 50% da topoisomerase I, revelada pela formação do complexo clivável. Todos os valores de EC^q representam a média de vários ensaios independentes; todos os valores estão norma lizados em relação a # 6, 20(S)-CPT, que foi sempre ensaiada como controlo. 71 752 -21- c // h , / cr' · .·</ ~

:ζι£φ 0 ensaio do complexo clivável correlaciona-se bem com a actividade anti-tumor in vivo em modelos animais de análogos de camptotecina. Ver Hsiang et al, Câncer Research,49:4385 (1989) e Jaxel et al Câncer Research, 49:1469(1989).

Na Tabela V abaixo apresentam-se resultados de estudos de histiocultura de tumor usando cancros humanos obtidos por ci rurgia ou biópsia. A inibição da proliferação celular do tumor foi feita in vitro em tumores humanos colo-rectais obtidos por cirurgia ou biópsia como descrito por Vescio et al, Proc. Nat'l Acad. Sei. U.S.A., 84:5029-5033 (1987), com as seguintes modifi cações: cultivaram-se os tumores 1 dia antes da adição da droga; os tumores foram expostos aos compostos durante 24 horas, lavados e em seguida expostos a ^[H]-timidina durante 3 dias. TABELA V Histiocultura de Tumor_do Colon Humano

Inibição da Proliferação Celular

Nome1 2 <u1S? 20(S)-CPT -0,02 10,11-MDO-20(S)-CPT -0,003 10,11-MDO-20(S)-CPT, SAL DE Na+ -0,005 10,ll-MDO-20(RS)-CPT -0,005 10,ll-MDO-20(RS)-CPT, SAL DE Na+ -0,01 1

Abreviaturas CPT = Camptotecina MDO = Metilenodioxi 2

IC^q: concentração de composto necessária para inibir em 50% a incorporação de ^[H]-timidina no ADN -22- 71 752

Nos estudos de histiocultura de tumor, cujos resultados se apresentam na Tabela V, os compostos do presente invento de monstram uma actividade significativa, medida como inibição da proliferação celular do tumor durante o tratamento com os compo£3 tos do presente invento. Como usado aqui, o termo "cancro" é si nónimo dos termos "tumor maligno" e, mais geralmente, de "tumor".

Os dados apresentados na Tabela V demonstram a actividade dos pre sentes compostos contra o cancro do cólon humano, que se sabe ser um cancro muito resistente â quimioterapia. Ver H. L. Davis, Che motherapy of Large Bowel Câncer, Câncer (Phila.) 50:2638-2646 (1982); J. R. Neefe e P.S. Schein, Chapter 43: The Management of Disse minated Large-Bowel Câncer in Principais of Câncer Treatment, pa ge 402, ed. S.K. Cárter, E. Glatstein e R. B. Livingston, McGraw--Hill Co., 1982; K. Mekhail-Ishak, Câncer Research, 49:4866-4869 (1989) e P. J. Fergunson e Y. C. Cheng, Câncer Research, 49:1148--1153 (1989).

Os compostos do presente invento exibem actividade anti--tumor contra o cancro do cólon humano, o qual se sabe exibir re sistencia a drogas de novo e è assim difícil de tratar quimiote rapeuticamente. Consequentemente, cre-se que os presentes compojs tos serão activos contra um largo espectro de cancros de mamíferos (incluindo o humano) tais como da cavidade oral e faringe (la bio, língua, boca, faringe), esófago, estômago, intestino delgado, intestino grosso, recto, fígado e vias biliares, pâncreas, larin ge, pulmão, ossos, tecido conectivo, pele, peito, cervix, uteri, corpus endometrium, ovário, próstata, testículos, bexiga, rim e outros tecidos urinários, olho, cérebro e sistema nervoso central, tiróide e outras glândulas endócrinas, leucemias (linfocíticas, granulocíticas, monociticas), doença de Hodgkin, linfornas não Hodg kin, mieloma múltiplo, etc. Obviamente, os presentes compostos po dem ser usados para tratar outros cancros não nomeados especifica mente desde que se manifeste a actividade antitumoral dos presen tes compostos no cancro particular.

As composições farmacêuticas contendo os novos análogos de camptotecina estão também no âmbito do presente invento.. Estas com posições farmacêuticas podem conter qualquer quantidade de um anã 71 752 -23-logo de camptotecina que seja eficaz para inibir a topoisomera se I in vitro ou in vivo ou que exiba actividade anti-leucémica in vivo. Mamíferos, tanto animais como humanos, são tratáveis com as composições do invento. Doses in vivo típicas no âmbito do in vento sao de cerca de 0,1-100 mg de camptotecina por paciente, por dia. Uma gama particularmente preferida e de 1-40 mg/kg.

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Podem também ser incluídos, como parte da composição, a gentes de ligação farmaceuticamente compatíveis, e/ou materiais adjuvantes. Os materiais activos também podem ser misturados com outros materiais activos que não prejudiquem a acção desejada e/ou que suplementem a acção desejada. Os materiais activos de acordo com o presente invento podem ser administrados por qual quer via, por exemplo, oralmente, parentericamente, : intraveno samente, intradermicamente, subcutaneamente ou topicamente, na forma líquida ou sólida.

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Um modo de administração dos compostos deste invento é a oral. As composições orais incluirão, geralmente, um diluente i nerte ou um portador edível. Elas podem ser encerradas em cápsu las de gelatina ou podem ser comprimidas para formar comprimidos. Para a administração terapêutica oral, os compostos anteriores podem ser incorporados com excipientes e usados na forma de com primidos, pastilhas, cápsulas, elixires, suspensões,xaropes, bo lachas, pastilhas elásticas e semelhantes. Estas preparações de vem conter, pelo menos, 0,1% do composto activo, mas a sua quan tidade pode variar com a forma particular.

Os comprimidos, pílulas, cápsulas, pastilhas e semelhan tes podem conter os seguintes ingredientes: um ligante tal como celulose microcristalina, tragacanto ou gelatina; um excipiente tal como amido ou lactose, um agente desintegrante tal como áci do algínico, Primogel, amido de milho e semelhantes; um lubrifi cante tal como estearato de magnésio ou "Sterotes"; um desagre gante ("glidant") tal como diõxido de silício coloidal; e podem ser adicionados um agente adoçante tal como sacarose ou sacarina ou um agente aromatizante tal como hortelã-pimenta; salicilato de metilo ou um aromatizante de laranja. Quando a forma de uni -24- 71 752 " ,;:;ι ο'

J dade de dosagem e uma cápsula, ela pode conter, alem do materi al do tipo anterior, um portador líquido tal como um óleo gordo. Outras formas de unidade de dosagem podem conter vários outros materiais que modifiquem a forma física da unidade de dosagem, por exemplo, revestimentos. Assim, os comprimidos ou pílulas po dem ser revestidos com açúcar, "shellac" ou outros agentes de revestimento entérico. Um xarope pode conter, além dos compo^ tos activos, sacarose, como agente adoçante, e certos conservan tes, corantes e colorantes e aromas. Os materiais usados na pre paração destas várias composições devem ser farmaceuticamente puros e não tõxicos nas quantidades usadas.

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Para administração terapêutica parentérica, o ingredi ente activo pode ser incorporado numa solução ou suspensão. As soluções ou suspensões podem também incluir os seguintes compo nentes: um diluente estéril tal como água para injecção, solu ção salina, óleos fixos, polietileno-glicõis, glicerina, propi leno-glicol ou outros solventes sintéticos; agentes antibacte rianos tal como álcool benzilico ou metilparabenos, antioxidan tes tal como ácido ascorbico ou bissulfito de sõdio; agentes quelantes tal como ácido etilenodiaminatetraacético; tampões tal como acetatos, citratos ou fosfatos e agentes para o ajuste da tonicidadefcal.como cloreto de sódio ou dextrose. A preparação parentérica pode. ser encerrada em ampolas, seringas descartá-. veis ou frascos de dose múltipla feitos de vidro ou plástico.

Como é conhecido na arte, os valores da dosagem varia rão com o cancro específico a ser tratado, o estádio de desen volvimento do tumor, a localização do tumor, o peso e a condi, ção física do paciente a ser tratado, etc. Conseguir-se-ão bons resultados quando os compostos descritos aqui forem administra dos a um sujeito que necessite desse tratamento como dose efi caz oral, parentérica ou intravenosa. Deve entender-se que pa ra qualquer sujeito particular, os regimes de dosagem específi cos devem ser ajustados à necessidade individual e ao julgamen to profissional da pessoa que administra ou supervisiona a administração dos referidos compostos. Deve ainda entender-se que 71 752

-25- as dosagens aqui estabelecidas são apenas exemplificatívas e nao se destinam a limitar o âmbito ou prática do invento. Do sagens acima ou abaixo da gama citada anteriormente estão no âmbito do presente invento e podem ser administradas ao paci ente individual, se desejado e necessário. As dosagens podem ser administradas de uma só vez ou podem ser divididas em vá rias doses mais pequenas a ser administradas a intervalos de tempo variáveis. 0 presente invento também inclui sais de adição de á eidos e bases, farmaceuticamente aceitáveis, padrão, dos com postos de camptotecina do presente invento. Os sais de adição de ácidos adequados são obtidos pela adição de HC1, H3PO4, H2SO4, etc. ou ácidos orgânicos como ácidos málico, maleico ou tartárico. Os sais de adição básicos adequados podem ser obti dos pela adição de aminas, i.e. sais de amónio e sais de amõni. o quaternário, formados com aminas primárias, secundárias ou terciárias, nas quais o átomo de azoto da amina contém 1,,2 ou 4 grupos alquilo inferior ou alquilo inferior substituído. Pre ferem-se os grupos alquilo inferior substituídos contendo um ou mais grupos hidroxi. Obviamente, o presente invento não es_ tá limitado a estes exemplos de sais de adição de ácidos e ba ses e inclui todos os sais de adição de ácidos e bases que pos sam ser preparados usando os compostos de camptotecina do pre sente invento e que são farmaceuticamente aceitáveis.

Outras caracteristicas do invento tornar-se-ão eviden tes no decurso das descrições das concretizações exemplificati vas que se seguem e que são apresentadas para ilustração do in vento e não se destinam a limitá-lo.

EXEMPLOS SÍNTESE DO COMPOSTO TRICÍCLICO 11: ó-Ciano^-metil-l,5-dioxo-A^^^-tetra-hidro-indolizina (Composto 3)

Preparou-se acetopiruvato de etilo a partir de acetona e oxalato de dietilo como descrito em Org. Synthesis, Coll.Vol. 1, 238 (1958). A reacção posterior com ortoformato de trietilo e cloreto de amónio em etanol originou o enol éter 1 conhecido.

Ver L. Claisen, Chem. Ber., 40, 3903 (1907).

Adicionou-se, gradualmente, etil(2-etoxi-4-oxo)-pent-2--enoato(l) (100,01 g, 0,538 mol) a uma mistura agitada mecanica mente, pré-aquecida (45), de K2CO3 (79,04 g 0,573 mol) e ciano-acetamida (48,46 g, 0,577 mol) em DMF (960 ml). A mistura foi mantida a 452 durante 18 h, sendo a lama vermelha, espessa, de pois tratada, gota a gota com acrilato de metilo recim-destilado (360 ml, 343 g, 3,99 mol). Após 72 h. a 45°, a suspensão ver melha foi filtrada, dissolvida em 5 litros de água e acidifica da até pH 1,5 com HC1 concentrado. Recolheu-se o éster bicícli^ co 2 em bruto (127,98 g) por filtração sob a forma de um sólido cor-de-rosa. Sem mais tratamento, refluxou-se 2 numa solução con centrada de HC1(800 ml) e HOAc glacial (800 ml) durante 2 h.A remoção dos solventes in vacuo proporcionou a piridona bicíclica 3^ (39,66 g, 39¾ com base em 1). 6-Ciano-l, 1- (etilenodioxi)-7-metil-5-oxo-^^^-tetra-hidro-in dolizina(Composto 4)

Tratou-se o composto 3 (10,54 g 0,056 mol), como solu ção agitada em CH2CI2 (500 ml) à temperatura ambiente sob N2, com etileno-glicol (6,85 ml, 7,63 g, 0,123 mol) e l^SiCl (31,3Qml, 26,89 g, 0,247 mol) e deixou-se à temperatura ambiente (20°) durante 65 h. A solução foi filtrada para remover algum material negro suspenso, antes de se lavar com solução aq. de NaOH 1M. A fase orgânica foi lavada com salmoura, filtrada através de ce lite e evaporada para fornecer etileno cetal (10,26 g, 79%) sob a forma de um sólido cor-de-rosa. 6-(^ηο-1,1-(6ίϋ6ηοάιοχι)-7[ (etoxicarbonil)metil[-5-oxo-A^^^ ~ -tetra-hidro-indolizina (Composto 5) 71 752

0 cetal 4· (5,0 g, 0,022 mol) foi refluxado numa suspen são de KH (11,9 g, 0,068 mol) em tolueno (40 ml) durante 10 min. Adicionou-se carbonato de dietilo (6,79 g, 0,058 mol) e uma quan tidade catalítica (0,31 g, 6,7 mmol) de etanol absoluto e conti nuou-se o refluxo durante 3 h. O solido escuro foi moído e o sal de 5, suspenso, resultante foi recolhido por filtração. 0 sal foi neutralizado por adição cuidadosa de HOAc aquoso frio. Adi cionou-se água e o produto foi extractado em CH2CI2. A seguir a uma lavagem com salmoura e secagem (Na2S0^), a evaporação do CH2CI2 forneceu 5 em bruto. A purificação por cromatografia em sílica-gel (MeOH a 2% em CHCI3) e recristalizaçao (MeOH) propor cionou puro (4,97 g, 76%). 6-Ciano-l,1-(etilenodioxi)-7[1'(etoxicarbonil)propil·]-5-oxo--A^(8)-tetra-hidro-indolizina (Composto 6)

Tratou-se uma solução agitada do éster _5 (4,01 g, 0,0132 mol) em DME anidro (70 ml) a-78°C com terc-butóxido de potássio (1,7 g, 15 mmol). Após 5 min., adicionou-se EtI (8,24 g, 0,053 mol) ao longo de um período de 5 min. Após agitação durante 1,5 h a -78°C, a mistura foi deixada aquecer até ã temperatu ra ambiente, durante a noite. Adicionou-se água e o produto foi extractado em CH2CI2. Após lavagem com salmoura e secagem(Na2S0^), evaporou-se CH2CI2 para proporcionar o éster 6 (4,3 g, 98%). 6-(Acetamidometil)-1,1-(etilenodioxi)-7-[11 -(etoxicarbonil)pro pil]-5-oxo-A^^^-tetra-hidro-indolizina (Composto 7)

Uma solução do éster cetal 6^ (2,0 g, 6,0 mmol) em ani drido acético (30 ml) e HOAc (10 ml) foi hidrogenada durante 6 h a 45°C sob 50 psi na presença de níquel Raney (3 g; lava do com HOAc). 0 catalisador foi removido por filtração e o sol. vente foi removido íri vacuo para proporcionar ]_ (2,3 g, 100%) sob a forma de um óleo. A purificação por cromatografia em co luna de sílica-gel (MeOH a 2% em CHCI3) proporcionou 7. puro sob a forma de um Óleo. 71 752 -28- (Γ“ “asSE» v-íses9 6-(Acetoxlmetil)-1,1-(etilenodioxi)-7-[11 -(etoxicarbonil)pro-pil]-5-oxo-a°^^-tetra-hidro-indolizina (Composto 9)

Tratou-se uma solução arrefecida da amida 1_ (2,3 g, 6,0 nnnol) em AC2O (30 ml) e HOAc (10 ml) com NaN02 (1,8 g, 26 mmol) e a mistura reaccional foi agitada durante 2 h a 0°C. Removeram-se os sais inorgânicos por filtração e o solvente foi removido in vacuo à temperatura ambiente para fornecer o intermediário N-nitroso sob a forma de um óleo, 0 composto ^ foi convertido directamente no composto acetoxi do título por re fluxo durante a noite em CCl^. A solução foi lavada com água, se ) ca (Na2S0^) e o solvente foi removido in vacuo para proporcionar 9_ (2,3 g, 100%) sob a forma de um óleo. 1,1'-Etilenodioxi-5-oxo-(5'-etil-5'-hidroxi-2 Ή,5 Ή,6'Η-6-οχο-pirano)-[3' ,4'-f]-A^^^ -tetra-hidro-indolizina (Composto 10)

Fez-se borbulhar oxigénio através de uma mistura de 6--(acetoximetil)-1,1-(etilenodioxi)-7-[1'-etoxicarbonil)propil]--δ-οχο-,Δ^ (8) tetra-hidro-indolizina (Composto 9, 405 mg, 1,07 mmol), K2CO3 anidro (148 mg, 1,07 mmol) e metanol (7,5 ml) durante 24 h. . A solução foi arrefecida num banho de gelo e tornada ácida (pH 2-4) por adição de H2SO4 IN. A maior parte do metanol foi removida in vacuo à temperatura ambiente e adicionou-se água (20 ml). A * solução aquosa foi extractada com CH2CI2 (3x20 ml), seca (Na2SO^) e evaporada para proporcionar um sólido que foi cristalizado em CH2Cl2-hexano para proporcionar 280 mg (85%) de 1£: p.f. 179--181°C; >2^ (CHC12) 1740, 1660 cm'1; ^H-RMN (CDCI3) S 0,91 (t, 3, J=7 Hz, CH2CH3), 1,75 (q, 2, J=7 Hz, CH2CH3), 2,35 (t, 2, J= =6,5 Hz, CH2 capara o cetal, 4,1 (m, 6, OCH2CH2O e CH2N), 5,30 (m, 2, ArC^O), 6,87 (s, 1, piridona). Anal. Cale para C^^H-^yNOg: C, 58,63; H, 5,54; N, 4,56. Encontrado: C, 58,72, H, 5,68; N, 4,57. 51 -RS-1,5-Dioxo-(51 -etil-5 1 -hidroxi-2 Ή, 5 Ή, 6 'Η-6-oxopirano) --[31, 4', f3-Δ ^^^tetra-hidro-indolizina (Composto 11). 71 752 λ· / -29- & tr"'

Aqueceu-se uma solução de 10 (3,88 g, 12,6 mmol) em H2SO4 2N (50 ml) e DME (50 ml), durante 24 h. sob N2. A mistu ra reaccional foi concentrada in vacuo, até metade do seu volume, diluída com H2O (100 ml) e extractada com CH2CI2 (5x50 ml). A camada orgânica foi seca (Na2S0^) e evaporada para originar um sólido que foi cristalizado em C^C^-hexano/loFiginar 2,68 g (80%) de sob a forma de um sólido castanho claro: p.f. 185-187°C; \?max (CHCI3) 1750 (ombro, cetona), 1745 (lactona), 1660 cm"·*· (piridona); 1H-RMN (CDCI3) <5 0,91 (t, 3, J=7 Hz, CH2CH3), 1,80 (q, 2, J=7 Hz, CH2CH3), 2,93 (t, 2, J=6,5 Hz, CH2C=0), 4,30 (t, 2, J=6,5 Hz, GH2N), 5,35 (m, 2, ArC^O), 7,17 (s, 1, H aromáti co). Anal. CalcT para C13H13N05: C, 59,32; H, 4,94; N, 5,32. Encontrado: C, 59,12, H, 4,91; N, 5,16. SÍNTESE DE ANÁLOGOS DE CAMPTOTECINA: Síntese de ll-hidroxi-20(RS)-camptotecina e ll-hidroxi-20(S)--camptotecina A ll-hidroxi-20(RS)-camptotecina e a ll-hidroxi-20(S)--camptotecina são preparados a partir de ll-metoxi-20(RS)-e 11--metoxi-20(S)-camptotecina por desmetilação com ácido bromí-drico como se segue:

J ll-Metoxi-20(RS)-camptotecina e ll-metoxi-20(S)-camptotecina

Uma mistura de 4-metoxi-2-aminobenzaldeído (180 mg, 1,19 mmol) e a cetona tricíclica Γ1 (300 mg, 1,14 mmol) em to lueno (18 ml) foi aquecida sob N2 num balão equipado com uma ra toeira de Dean-Stark. Ao refluxo, adicionou-se ácido p-tolueno--sulfónico (5 mg) e aqueceu-se a solução castanha avermelhada du rante mais 2 h. Removeu-se o tolueno sob pressão reduzida para proporcionar um sólido castanho que foi filtrado com água (10 ml) e clorofórmio (20 ml). A fase aquosa foi extractada com cloro fórmio adicional (3x20 ml) e os extractos combinados foram se cos (Na2S0^). A evaporação proporcionou um sólido castanho que foi recristalizado em metanol-clorofórmio para proporcionar 216 mg -30- ! 71 752 ,-·λ (50 %) de um composto sob a forma de um sólido de cor bronze: 275-279°C; Espectro de massa (impacto de electrões), m/z 378,1219 M+ ^21^18^2^5 necessita de 378,1224; Ό rnay (KBr) 3480 (OH), 1745 (lactona), 1660 (piridona), 1662, 1236 e 1152 cm”·*·; ^H-RMN (DMSO--d6) £ 0,87 (t, 3, J=7 Hz, H-18), 1,85 (m, 2, H-19), 3,95 (s, 3, 11-0CH3), 5,24 (s, 2, H-5), 5,42 (s, 2, H-17), 7,32 (s, Ί, H-14), 7,37 (dd, 1, J=9, 2,5 Hz, H-10), 7,56 (d, 1, J=2,5 Hz, H-12), 8,02 (d, 1, J=9 Hz, H-9), 8,60 (s, 1, H-7). ll-Hidroxi-20(RS)-e ll-hidroxi-20(S)camptotecina

Combinou-se ll-metoxi-20(RS)- ou ll-metoxi-20(S)-cam£ totecina (75 mg) com HBr aquoso a 48% (2,5 ml) e aqueceu-se ao refluxo durante 6 h. A mistura castanha avermelhada foi liber tada 1'stripped") de solvente sob o vácuo elevado. A cromatogra fia do resíduo através de sílica-gel (15 g) (MeOH 7%-CHCl3) pro porcionou o composto 11-hidroxi (33 mg, 45%) que foi ainda pu rifiçado por recristalização em MeOH a 13% em CHCI3: p.f. 323--326°C; espectro de massa (impacto de electrões), m/z 364,1054 M+, ^20^16^2^5 necessita de 364,1059; \? max (KBr) 3450, 1742, 1654, 1613, 1592, 1570, 1245 cm-1; max (EtOH), 224 (log e 4,58), 259, (4,39), 353 (4,16), 371 (4,19), 387 (4,20); 1H-RMN (DMSO--d6): S 0,88 (t, 3, J=7 Hz, H-18), 1,85 (m, 2, H-19), 5,20 (s, 2, H-5), 5,41 (s, 2, H-17), 6,51 (s largo , 1, OH-20), 7,26 (dd, 1, J=9, 2,5 Hz, H-10), 7,28 (s, 1, H-14). lO-Hidroxi-20(RS)- e 10-hidroxi-20(S)-camptotecina

Estes compostos são preparados de uma maneira análoga à descrita para as 11-hidroxicamptotecinas usando 5-metoxi-2-aminobenzaldeído que é reagido com a cetona tricíclica 11 na presença de ácido p-tolueno-sulfónico. 0 produto ê 10-metoxí--20(RS)- ou 10-metoxi-20(S)-camptotecina que por tratamento com ácido bromídrico refluxante, como descrito para as 11-hidroxicamptotecinas, proporciona as 10-hidroxi-20(RS)- e 10-hidroxi-20(S)-camptotecinas. 9- Metoxi-20(RS)- e 9 metoxi-20(S)-camptotecina 9-Hidroxi-20(RS)- e 9-hidroxi-20(S)-camptotecinas

De uma maneira análoga à descrita para ll-metoxi-20(RS)-e ll-metoxi-20(S)-camptotecina trata-se 6-metoxi-2-aminibenzal d^ído can. a cetona tricíclica 11 na presença de ácido p-tolueno--sulfónico originando 9-metoxi-20(RS)- e 9-metoxi-20(S)-campto tecina. A desmetilação com ácido bromídrico proporciona 9-hidro xi-20(RS)- e 9-bidroxi-20(S)-camptotecina. 10- Nitro-2Q(RS)- e 10-nitro-20(S)-camptotecina .

Aqueceu-se, a 120°C durante 10 min, uma mistura de 2-a-mino-5-nitrobenzaldeldo (95 mg, 0,57 mmol) e da cetona tricícli ca lj. (150 mg, 0,57 mmol). A temperatura foi elevada até 160°C e a massa escura fundida foi mantida a esta temperatura durante 1,5 h com agitação ocasional. A cromatografia do resíduo através de sílica-gel (20 g) usando, MeOH a 0,5% em CHCI3 forneceu os compostos do título (108 mg) sob a forma de sólidos amarelos: p. f. 297-300°C (decomp.); espectro de massa (impacto de elec trio) , m/z 393,0965 M+, c20^15^3^6 necessita 393,0960; \? max (KBr) 3450 (OH), 1745 (lactona), 1660 (piridona) 1620, 1350 e 1160 cm"1 ; 1H-RMN (TFA-d)£ 1,14 (t, 3, J=7 Hz, H-18), 2,15 (m, 2, H-19), 5,88 (s, 2, H-5), 5,68 (Abq, 2, J=17 Ηζ,Δ^ =85 Hz, H-17), 8,43 (s, 1, H-14), 8,70 (d, 2, J=8 Hz, H-12), 9,05 (d, 2, J=8 Hz, H-ll), 9,35 (s, 1, H-9), 9,60 (s,l, H-7). lO-Amino-20(RS)- e 10-amino-20(S)-camptotecina.

Uma suspensão de 10-nitro-20(RS)- ou 10-nitro-20(S)-camp totecina (100 mg) e 10% de Pd/C (40 mg) em EtOH absoluto (40 ml) foi agitada numa atmosfera de H2 à temperatura ambiente durante 30 min. A filtração através de celite e a remoção do solvente sob pressão reduzida proporcionou sólidos amarelo-bronze (86 mg; em bruto). A recristalização em MeOH 13%/0Η01β proporcionou o pro duto puro (30 mg) sob a forma de um sólido amarelo-oliva: p. f., amolecimento a 135°C, enegrecimento gradual após aquecimento a dicional; espectro de massa (impacto de electrão), m/z 363,116 M+ 71 752

C20h17N3°4 necessita 363,1218; $ max (KBr) 3440 (OH, NH 1750 (lactona), 1660 (piridona) cm"·*·. ^H-EMN (TFA-d)ç-T 1,06 (t, 3, J=7Hz, H-18), 2,08 (d, J=7Hz, H-17), 5,89 (s, 2, H-5), 5,70 (Abq, 2, J=17Hz,A^ =85Hz, H-17), 8,34 (d, J=9Hz, H-12), 8,64 (d, J=9Hz, H-ll), 9,26 (s, 1, H-( ) , 9,43 (s, 1, H-7). 9-Nitro-20(RS)- e 9-nitro-20(S)-camptotecina; 9-amino-20(RS)-e 9-amino-20(S)-camptotecina

Uma mistura de 2-amino-6-nitrobenzaldeído é tratada com a cetona tricíclica 11 da maneira descrita para a série 10-nitro anterior originando 9-nitro-20(RS)- e 9-nitro-20(S)-camptotecina. Este composto, após redução com paládio/carbono, origina 9-amino--20(RS)- e 9-amino-20(S)-camptotecina. Alternativamente, o compojs to 9-amino é obtido num passo por reacção de 2,6-diaminobenzal-deído coma cetona 11. ll-Nitro-20(RS)- e ll-nitro-20(S)-camptotecina; ll-amino-20(RS)-e ll-amino-20(S)-camptotecina

De uma maneira semelhante â descrita para 10-nitro-20(RS)-e 10-nitro-20(S)-camptotecina, uma mistura de 2-amino-4-nitro-benzaldeído i tratada com a cetona tricíclica _11 originando 11--nitro-20(RS)- ou ll-nitro-20(S)-camptotecina, a qual por sua vez é reduzida no composto 11-amino camptotecina por paládio/car bono. Alternativamente, a ll-amino-20(RS)- ou ll-amino-20(S)--camptotecina é obtida por reacção de 2,4-diaminobenzaldeído com a cetona 11. 10,ll-Di-hidroxi-20(RS)- e 10,ll-di-hidroxi-20(S)-camptotecina

Refluxou-se, durante 8 h, uma solução do dibenziloxi a minoacetal em bruto (400 mg) e da cetona tricíclica JL1 (132 mg, 0,5 mmol) em tolueno (60 ml). Filtrou-se a quente e o éter di-benzilico puro foi recolhido após arrefecimento (22 mg, 81 %); p. f. 276°C«^max (KBr) 3440, 1740, 1650, 1590, 1490, 1440, 1380, -33- 71 752 fp & 1250, 1140, 1100, cm"1; 250 MHz 1H-RMN (DMSO-d6) <S 0,88 (t, 3, J=7 Hz, H-18), 1,86 (m, 2, H-19), 5,22 (s, 2, H-17), 5,34 (s, 2, 10-OCH2-C6H5), 5,39 (s, 2, H-OCH2-CfiHg), 5,41 (s, 2, H-5), 6,5 (s, 1, OH), 7,25 (s, 1, H-14) 7,35-7,65 (m, 12, H-9, 12, -OCHo-C^Hp), 8,44 (s, 1, H-7). Anal. Cale. para C, 72,84; H, 5,03; N, 5,00. Encontrado C, 72,91; H, 5,09; N, 4,96. 0 éter dibenzílico (130 mg, 0,23 mmol) foi moderadamen te refluxado durante 2 h. em HBr a 24% (50 ml). O ácido foi remo vido e o resíduo foi dissolvido em metanol quente (50 ml). Adi cionou-se éter (50 ml) à temperatura ambiente e recolheu-se o hidrobrometo de di-hidroxi camptotecina sob a forma de pò ama relo (122 mg, 77%) p. f. > 300OC, \?max (KBr) 3400 (b), 1740, 1655, 1585, 1545, 1510, 1395,1300, 1270, 1200, 1160 cm-1; XH RMN (DMSO, d6):S 0,88 (t, 3, J=7 Hz, H-18), 1,85 (m, 2, H-19), 5,20 (s, 2, H-17), 5,42 (s, 2, H-5), 7,31 (s, 2, H-9, H-14), 7,40 (s, 1, H-12), 8,45 (s, 1, H-7). Anal. calc para c20H17BrN2°6· 0,5 H20: C, 51,08; H, 3,86; N, 5,95; Br, 16,99. Encontrado C, 51,09; H, 4,04; N, 5,78; Br, 16,83.

Suspendeu-se sal hidrobrometo de di-hidroxi (110 mg, 0,23 mmol) em água (10 ml). Adicionou-se hidróxido de sódio (0,1N, 7,2 ml) e a mistura foi agitada. A solução límpida resultante foi acidificada usando HC1 5N; e após uma hora, a amostra foi centrifugada, o líquido sobrenadante foi decantado e o processo foi repetido com água adicional (20 ml). 0 resíduo foi seco (78 mg, 74 %); p. f. > 300°C. ^max (KBr): 3490, 3000 (b), 1740, 1645, 1590, 1460, 1385, 1265, 1190, 1150 cm-1. XH RMN (DMSO, d6): <S 0,88 (t, 3, J=7 Hz, H-18), 1,87 (q, 2, H-19), 5,20(s, 2, H-17), 5,42 (s, 2, H-5), 7,35 (s, 1, H-14), 7,44 (s, 1, H-9), 7,52 (s, 1, H-12), 8,51 (s, 1, H-7). Anal. calc para ¢20^5^05. 0,75 H20: C, 61,06; H, 4,44; N, 7,12. Encontrado C, 61,12; H, 4,44; N, 7,09. 10-Cloro-20(RS)- e 10-cloro-20(S)-camptotecina

Estes compostos foram preparados por tratamento de 5--cloro-2-aminobenzaldeído com a cetona tricíclica 11. -34- 71 752

Refluxou-se durante 15 min uma solução do 5-cloro-2--aminobenzaldeído(80 mg, 0,51 mmol) e da cetona tricíclica 11 (100 mg, 0,38 mmol) em tolueno (60 ml). Adicionou-se então ã eido p-tolueno-sulfõnico (10 mg) e continuou-se o refluxo du rante mais 5 h. 0 solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi cromatografado (sílica-gel 60, MeOH 2%-CHCl3). O produto obtido foi recristalizado em CHClg-MeOH-EtOAc; p. f. 270°C, 60 mg (41%). \P max (KBr), 3430, 1745, 1655,1600, 1495, 1230, 1160 cm-1. 250 MHz 1H-RMN (TFA-dx) é> 1,15 (t, 3, J=7 Hz, H-18), 2,16 (m, 2, H-19), 5,73 (ABq, 2, J=17 Hz,A^ =85 Hz, H-17)., 5,84 (s, 2, H-5), 8,29 (d, 1, J=9 Hz, H-ll), 8,35 (s, 1, H-14), 8,40 (s, 1, H-9), 8,45 (d, 1, J=9KzH-12), 9,31 (s, 1, H-7). Anal. calc. para C20H15ClN2O4. 0,5 H20: C, 61,47; H, 4,12; N, 7,17; Cl, 9,07. Encontrado C, 61,41; H, 4,12; N, 7,12; Cl, 9,11. 10-Metil-20(RS)- e 10-metil-20(S)-camptotecina 0 5-Metil-2-aminobenzaldeído foi tratado com a cetona tri cíclica _11_ para proporcionar os compostos do título. A cetona tricíclica _11 (130 mg, 0,5 mmol) e o 5-metil-2--aminobenzaldeído (560 mg) em tolueno (60 ml) foram refluxados durante 0,5 h. Adicionaram-se ácido acético (1 ml) e ácido p-to lueno-sulfónico (35 mg) e continuou-se o refluxo durante mais 5 h. 0 solvente foi removido m vacuo e o resíduo foi triturado com éter quente (30 ml). 0 produto foi recristalizado em clorofórmio-metanol-éter, originando o composto puro (102 mg, 57 %), p.f. 278-280°C. Λ max (KBr) 3460, 2980, 1740, 1655, 1590, 1550,

1470, 1450, 1370, 1260, 1240,1160, 1050 cm-1. 250 MHz 1H-RMN (DMS0-d6) 6 0,89 (t, 3, J=7 Hz, H-18), 1,87 (q, 2, H-19), 2,54 (s, 3, 10-CH3), 5,24 (s, 2, H-17), 5,42 (s, 1, H-5), 7,31 (s, 1, H-14), 7,69 (d, 1, J=8,6 Hz, H-ll), 7,86 (s, 1, H-9), 8,05 (d, 1, J=8,6 Hz; H-12), 8,55 (s, 1, H-7). Anal calc para C2^H^gN204- ,0,25 H20: C, 68,75; H, 5,08; N, 7,64. Encontrado C, 68,74; H, 5,08; N, 7,64. ll-Formil-20(RS)- e ll-formil-20(S)camptotecina.

Converteu-se 2-nitrotereftaldicarboxaldeído no etileno diacetal por métodos convencionais e reduziu-se usando Na2S. Re fluxou-se, durante 1 h, uma solução do nitro diacetal (4,1 g, 17,5 mmol), Na2S Í14 g) em etanol a 80% (15 ml). Removeu-se, in vacuo, etanol, diluiu-se a mistura reaccional com água (10 ml) e extractou-se a fase aquosa com CH2CI2 (4x50 ml). A fase orgâ nica foi lavada com água, seca (MgSO^) e evaporada para propor cionar o aminodiacetal que foi recristalizado em acetato de eti. 10- hexano (2,8 g, 78%); p.f. 76°C. \) (KBr) 3480, 3395, 3000, 2960, 2900, 1625, 1445, 1395, 1085, 950 cm"1. 6.0 MHz 1H RMN (CDC13-D20) ό 4,0 (m, 8, -0CH2CH20-), 5,6 (s, 1, -0-CH2-0-, C-4), 5,7 (s, 1, -0-CH2-0-, C-l), 6,6 (s, 1, H-3), 6,65 (d, 1, J=8 Hz, C-5), 7,2 (d, 1, J=8 Hz, H-6). Anal. calc para C^H^NO^s 60,66; H, 6,36,; N, 5,90. Encontrado C, 60,79; H, 6,41; N, 5,84.

Uma solução da cetona tricíclica ΙΛ (265 mg, 1,0 mmol), aminodiacetal (500 mg, 2,1 mmol , 300 mg inicialmente, porções de 100 mg a intervalos de 5 e 10 h) em tolueno (70 ml), foi re fluxada durante 0,5 h. Adicionou-se ácido acético (2 ml) e o re fluxo continuou durante 18 h. 0 solvente foi evaporado m vacuo e o resíduo foi tomado em metanol a 75% (250 ml). Adicionou-se HC1 conc. (3 ml) e a mistura reaccional foi aquecida a 50-60°C durante 24 h. A mistura foi filtrada e o resíduo foi lavado com água e recristalizado em CHCl^-MeOH-EtOAc. p.f.: 276-279°C (175 mg, 45%). N?max (KBr) 3460, 1745, 1690, 1655, 1600, 1200, 1150, 1135 cm"1. 250 MHz lE RMN (TFA-d1), 6 1,16 (t, 3, J=7 Hz, H-18) 2,16 (q, 2, J=7 Hz, H-19), 5,78 (ABq, 2, J=18 Ηζ,Δ^ =85 Hz, H-17), 5,89 (s, 2, H-5), 8,43 (s, 1, H-14), 8,66 (d, 1, J=8,5 Hz, H-10), 8,60 (d, 1, J=8,5 Hz, H-9), 9,12 (s, 1, H-12), 9,49 (s, 1, H-7), 10,42 (s, 1, CHO). Anal. calc. para C21H-L6N2O5 · H2O: C, 64,01; H, 4,56; N, 7,11. Encontrado C, 64,08, H, 4,21; N, 6, 84. 11- Ciano-20(RS)- e ll-ciano-20(S)-camptotecina.

Refluxou-se, durante 1,5 h, uma mistura de 11-formil--20(RS)- ou ll-formil-20(S)-camptotecina (225 mg, 0,6 mmol), hi drocloreto de hidroxilamina (50 mg, 0,72 mmol), formato de sõ * 71 752 * -36- íía «Τ' dio (90 mg, 1,3 mmol) e ácido fórmico (6 ml). A mistura foi e vaporada até ã secura jm vacuo e o resíduo foi lavado com água, seco e cromatografado (sílica-gel 60, MeOH 0,5%-CHCl3) e recrijs talizado em CHC^-EtOAc, originando o composto ll-ciano(65 mg, 29%): p.f. 288°C. 'O max (KBr) 3400, 2235, 1735, 1655, 1590, 1450, 1400, 1230, 1150, 1110, 1045 cm-1. 250 MHz ΧΗ RMN (DMSO-d6): 6 0,88 (t, 3, J=7 Hz, H-18), 1,88 (m, 2, H-19), 5,32 (s, 2, H-17), 5,44 (s, 2, H-5), 7,37 (s, 1, H-14), 7,98 (d, 1, J=8,5 Hz, H-10), 8,32 (d, 1, J=8,5 Hz, H-9), 8,74 (s, 1, H-12), 8,80 (s, 1, H-7). Anal. calc. para 021^15^3^4 * ^»5 Η20: 0, 62,99; H, 4,52; N, 10,49. Encontrado C, 62,99; H, 3,95; N, 10,20.

Alternativamente, os compostos 11-ciano podem ser prepa rados pela reacçao de 5-ciano-2-aminobenzaldeído com a cetona tricíclica 11.

PREPARAÇÃO DE ANÁLOGOS DE CAMPTOTECINA COM UMA ESTRUTURA DE ANEL A MODIFICADA A reacção da cetona tricíclica 11_ com precursores adequa dos diferentes dos orto-aminobenzaldeídos substituídos pode ser usada para proporcionar novos análogos de camptotecina activos exemplificados pelos seguintes exemplos não limitativos: 10-Aza-20(RS)- e 10-aza-20(S)-camptotecina

Uma solução de 4-aminonicotinaldeído (24,2 mg, 0,198 mmol) da cetona tricíclica 11 (53,5 mg, 0,203 mmol) e p-TsOH. H20 (2 mg) em tolueno (25 ml) foi refluxada durante 4 dias usando uma rato eira Dean-Stark. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi cromatografado através de sílica-gel (20 g) usando CHCI3-acetona-MeOH (5:1:1). 0 produto foi cristalizado em MeOH a 13% em CHCI3 e EtOAc: p.f. 289-292°C; espectro de massa (impacto de electrao), m/z 349,1061 M+; C19H15N3O4 necessita 349,1066; ^max (KBr) 3320> (OH), 1730 (lactona), 1650 (piridona), 1600 (aromático) cm-·1-; RMN (CDCI3) 6 1,05 (t, 3, J=7,3 Hz, H-18), 1,92 (m, 2, H-19), 5,35 (s, 2, H-5), 5,52 (ABq, 2, J=18 Hz, 71 752

-37 =85 Hz, H-17), 7,74 (s, 1, H-14), 8,04 (d, 1, J=5,5 Hz, H-12), 8,53 (s, 1, H-7), 8,84 (d, J=5,5 Hz, H-ll), 9,4 (s, 1, H-9). A-Nor-9-tia-20(RS)- e A-nor-9-tia-20(S)-camptotecina

Estes análogos da camptotecina contendo enxofre são pre parados pela reacção de 3-amino-2-formiltiofeno com a cetona tri cíclica 11.

Levou-se ao refluxo uma solução de 3-amino-2-formiltio feno (79 mg, 0,62 mmol) e da cetona tricíclica Γ1 (96 mg, 0,37 mmol) em tolueno (1,5 ml) e em seguida arrefeceu-se antes da adição de um cristal de ácido p-tolueno-sulfónico. A mistura foi reflu xada durante 2,5 h sob N2, arrefecida e o precipitado foi filtrado. 0 material em bruto foi cromatografado em sílica-gel (20 g) por eluição com MeOH a 21 em CHCI3. A cristalização do produto em MeOH 13% - CHCI3 e EtOAc originou os compostos do título sob a forma de sólidos amarelos (19 mg, 15%): p.f. 297-298°C; D 1740 (lactona), 1655 cm"·^· (piridona); ^H RMN (TFA-d^) δ 1,05 (t, 3, J=7 Hz, H-18), 2,07 (q, 2, J=7 Hz, H-19), 5,60 (m, 2, H-17), 5,65 (s, 2, H-5), 7,89 (d, J=6 Hz, H-ll), 8,05 (s, 1, H-14), 8,57 (d, J=6 Hz, H-10), 9,23 (s, 1, H-7). Anal (C18H14N204S); calc. C, 61,02; H, 3,95; N, 7,91. Encontrado C, 60,65; H, 4,01; N, 7,78. 10,ll-Metilenodioxi-20(RS)- e 10,ll-metilenodioxi-20(S)-camp-totecina 0 orto-aminoaldeído necessário foi preparado por redu ção de 2-nitropiperonal. Este composto (60 mg, 0,36 mmol) e a cetona tricíclica 11 (53 mg, 0,20 mmol) foram refluxados duran te 8 h em tolueno (30 ml) contendo p-TsOH . H20 (8 mg). 0 so_l vente foi removido in vacuo, o resíduo vermelho foi absorvido em celite (1 g) e cromatografado através de sílica-gel (10 g) usando MeOH a 3% em CHCI3. A concentração das fracçÕes aproprjL adas proporcionou 0 composto 10,11-metilenodioxi (36 mg, 45 %) sob a forma de um composto bronze claro. A cristalização deste -38- 71 752 w material em CHCI3 proporcionou a amostra analítica sob a forma de um sólido de cor creme: p.f. 250°C (decomp); Dmax (KBr) 1750 (lactona), 1655 (piridona), 1585 cm-1· (aromático); RMN (TFA--d^ £ 1,15 (t, 3, J=7 Hz, H-18), 2,16 (q, 2, J=7 Hz, H-19); 5,76 (ABq, 2, J=17 Hz, =85 Hz, H-17), 5,73 (s, 2, H-5), 6,44 (s, 2, 0CH20), 7,55 (s, 1, H-14), 7,69 (s, 1, H-9), 8,16 (s, 1, H-12), 9,05 (s, 1, H-7). Anal. calc. para 392,1008.

Encontrado 392,1009 . 1,0 H20).

Sal de sódio de 10,ll-metilenodioxi-20(RS)- e 1Q,11-metilenodio-xi-20(S)-camptotecina

Os compostos do título foram preparados a partir de 10,11--metilenodioxi-20(RS)-camptotecina (Wani et.al·., J. Med. Chem. 29, 2358 (1986))por acção hidrolítica de hidróxido de sódio.

Assim, a 10,ll-metilenodioxi-20(RS)- ou 10,11-metilenodioxi--20(S)-camptotecina (77 mg, 0,194 mmol) foi suspensa em metanol aquoso a 90¾ (30 ml) e tratada com hidróxido de sódio aquo so 0,1 N (1,94 ml, 0,194 mmol). Do aquecimento a 50-60°C duran te 1 h sob azoto resultou uma solução límpida que foi arrefeci da até ã temperatura ambiente e evaporada até à secura. O resí duo foi dissolvido em água destilada (2 ml) e filtrada (membra na de 0,45 micron) e a solução resultante foi evaporada. O resí duo foi recristalizado em etanol/éter para proporcionar um sõli do amarelo claro (53 mg, 65%), p.f. > 300°C; IV 0 maY (KBr) 3400 (largo), 2970, 2920, 1640, 1610, 1560-1580, 1497, 1466, 1370, 1246, 1225, 1183, 1030, 1000, 947, 855, 810, 761, 708 e 560-580; λΗ RMN (DMS0-d6) 6 0,85 (t, 3, J=7 Hz, H-18), 2,09 (m, 2, H-19), 4,74 (ABq, 2, A)f =68 Hz, J=12, 4 Hz, H-17), 5,12 (s, 2, H-5), 5,64 (dd, 1, J=4, 7 Hz, 17-OH), 6,17 (s, 1, 20-OH), 7,47 (s, 1, H-14), 7,54 (s, 1, H-9), 7,62 (s, 1, H-12),8,41 (s, 1, H-7). É obvio que à luz dos ensinamentos anteriores, são poj» síveis numerosas modificações e variações do presente invento.

Deve assim entender-se que, no âmbito das reivindicações anexas, o invento pode ser posto em prática de modo diverso do aqui e£ pecificamente descrito.

Claims (6)

1. 71 752

   -39- REIVINDICAÇÕES 1- Processo para a inibição da enzima topoisomerase I, ca racterizado por compreender o contacto da referida enzima com uma quantidade inibitória de uma camptotecina seleccionada do grupo que consiste em 9-amino-20(RS)-camptotecina, 9-amino-20(S)-cam£ totecina, 10-amino-20(RS)-camptotecina, 10-amino-20(S)-camptote cina, 10,ll-metilenodioxi-20(RS)-camptotecina, 10,11-metilenodi oxi-20(S)-camptotecina, sal de sódio de 10,ll-metilenodioxi-20(RS)--camptotecina, sal de sódio de 10,ll-metilenodioxi-20(S)-campt£ tecina e suas misturas.
2. 2- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteriza do por a referida camptotecina ser 9-amino-20(S)-camptotecina.
3. 3- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteriza do por a referida camptotecina ser 10-amino-20(S)-camptotecina.
4. 4- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteriza do por a referida camptotecina ser 10,ll-metilenodioxi-20(S)-cam£ totecina.
5. 5- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracteriza do por a referida camptotecina ser sal de sódio de 10,11-metile nodioxi-20(S)-camptotecina.
6. 6- Processo para a inibição da enzima tpopisomerase I, ca racterizado por compreender o contacto da referida enzima com u ma quantidade inibitória de uma camptotecina de fórmula

   -40- ) 71 752

   Lisboa, - - λ ’ Lo. 1^.. i ϋ Por RESEARCH TRIANGLE INSTITUTE -O AGENTE OFICIAL-