PT93099B

PT93099B - Processo de congelacao de globulos vermelhos

Info

Publication number: PT93099B
Application number: PT93099A
Authority: PT
Inventors: Susan Helen Bell; Stuart Graham Nash; Ernest Sidney Parry; Michael John Glynn Thomas
Original assignee: Secretary St Defence B M Gov U
Priority date: 1989-02-08
Filing date: 1990-02-08
Publication date: 1995-12-29
Also published as: ES2062509T3; EP0564880A1; GB2245144B; AU4950490A; HUT59609A; US5309723A; GR900100082A; FI913735A0; IE900437L; EP0457782A1; KR0148223B1; NZ232347A; KR920700662A; CA2046627A1; JPH04503666A; AU638229B2; HU211079B; NO913070D0; JP2747114B2; NO179435C

Description

NEMÓRIA DESCRITIVA presente invento refere-se ao congelamento de glóbulos vermelhos (eritrócitos) para armazenamento de longa duração, de tal modo que permaneçam adequados para transfusões de sangue.

A armazenagem de sangue, para utilização em serviço;

de transfusão, é Ler. conhecida.

sangue ê normalmente armazenado em condiçoes refrigeradas a 42C, temperatura ã qual possui a sua

A manutenção dos vida útil máxima, de cerca de t> semanas.

fornecimentos adequados exige, portanto, a cooperação continua dos dadores. Infelizmente, há períodos, tais como os próximos do período do Natal, em que o abastecimento pode ser escasso. Há também ocasiões em que desastres graves deixam uma área particular com escassez de suprimentos. Existe também um número crescente de pessoas que desejam armazenar o seu próprio sangue, por exemplo, antes de um cirurgia electiva. Existe, portanto, uma necessidade de um processo de armazenagem de longo termo de suprimentos de sangue.

A armazenagem de longo termo é tornada possível congelando o sangue a temperaturas muito baixas, ãs quais é em seguida armazenado. Infelizmente, o congelamento do sangue tal como é fornecido, mostrou ser impossível. É habitual armazenar o sangue em unidades padrão de cerca de 450 ml, sendo este o volume doado pelo dador numa única doação. Habitualmente é dada aos pacientes que recebem transfusões um número inteiro de tais unidades. 0 congelamento de uma tal quantidade de sangue resulta na hemólise dos glóbulos vermelhos, a qual torna o sangue, inutilizável para utilização futura em transfusões. A hemólise tem como resultado a libertação de potássio, que é cardiotóxico, e de éstroma (detritos celulares) que podem provocar a falência do rim. Geralmente considera-se, que para ser aceitável para transfusões de sangue, os glóbulos vermelhos não devem apresentar substancialmente mais do que 1¾ de hemólise. Num processo pelo qual o sangue pode ser armazenado por congelamento, o sangue é centrifugado para separar o plasma e as plaquetas dos glóbulos vermelhos, os glóbulos vermelhos são misturados com um agente crioprotector, e a mistura é congelada a uma temperatura muito

BAD ORIGINal

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baixa, usualmente usando azoto liquido. O agente crioprotector coífiummer.te usado é o glicerol. Tnf eli zmente o glicerol é tóxico e a preparação dos glóbulos vermelhos para utilização em transfusões requer várias lavagens para remover o glicerol. Este é um processo que envolve equipamento caro, requer um elevado nível de conhecimentos, experiência e prática constante por parte do pessoal responsável e exige também uma área de elevada esteri1ização. O processo de lavagem demora cerca de vinte minutos por unidade e resulta numa perda de entre quinze e vinte por cento de glóbulos. Um agente crioprotector mais atraente é amido hidroxietilado (HES) ou levosan.

A Patente dos E.U. n2. 3 758 382 descreve o modo como amostras de 35 ml de sangue completo contendo um anti-coagulante (citrato de dextrose acidificado) são misturadas com 40¾ p/v de HES de peso molecular médio de 40 000 a 70 000, de tal modo que a concentração final seja de 12 a 14¾ p/v de HES. A mistura foi imersa em azoto liquido a -1902C e agitada a 200 rotações/minuto até congeladas. Após armazenagem a -1402C durante uma semana, a mistura foi descongelada por imersão durante 60 segundos, com agitação a 160 rotações/minuto, num banho de água a 472C. Conseguiram-se factores de recuperação de até 99¾ (média 97,4¾) de glóbulos vermelhos. Os volumes usados para congelação, nomeadamente 55 ml, são apenas fracções das unidades padrão e causariam complicações indesejáveis se utilizadas em procedimentos de transfusão convencionais.

Num desenvolvimento deste processo, permitindo o congelamento de unidades padrão de sangue, a Patente dos E.U. n2. 4018911 descreve um processo de congelação de sangue usando HES com um peso molecular médio de 150 000. 0 sangue, é centrifugado para separar o plasma ε as plaquetas dos glóbulos vermelhos e mistura-se algum plasma com HES. A razão para a adição de plasma é que se pensava isto ser necessário para a protecção dos glóbulos vermelhos. A mistura de plasma e HES é em seguida misturada com um volume aproximadamente igual de glóbulos, dando uma proporção de HES na mistura final resultante da ordem de 14¾. A doação de uma unidade padrão de 450 ml está nesta altura

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-4reduzida a cerca de 405 ml.

A mistura de plasma e HES é adicionada aos glóbulos vermelhos num saco de congelação e o saco é colocado num suporte, ligado a um agitador de pêndulo, após mistura adicional. 0 suporte é constituído por duas placas laterais, metálicas, perfuradas, articuladas e aparafusadas em conjunto, entre as quais se mantém o saco de sangue com uma rigidez conferida pelo facto de as placas laterais serem de aço inoxidável, de modo a manter uma secção transversal substancialmente uniforme durante o congelamento. A secção transversal uniforme permite a congelação mais rápida, as placas de aço mantendo o saco essencialmente rigido durante a agitação. 0 saco e o suporte são imersos verticalmente em azoto liquido e agitados enquanto os conteúdos congelam. 0 processo de agitação é necessário quando se congela uma unidade de 405 ml, devido ao volume da unidade e à necessidade de manter uma rápida velocidade de congelação de modo a minimizar a hemólise dos glóbulos vermelhos. O sangue é descongelado para fins de transfusão por imersão num banho de água substancialmente a 54QC, com agitação mecânica durante um periodo de substancialmente 1 minuto. Com este tratamento o sangue pode ser usado imediatamente para transfusão (com a condição de a hemólise ter um nivel aceitável) o que constitui a sua vantagem principal em relação às unidades de sangue congeladas com glicerol. Isto deve-se ao facto do crioprotector extracelular HES ser não tóxico e não imunogénico, parecendo-se com o glicogénio corporal, de modo que não há necessidade de ser removido.

A E.U. 4018911 descreve um processo de teste de congelar amostras com apenas 25 ml usando este processo no qual se recuperam uma média de 99,2¾ de glóbulos vermelhos no estado pós descongelado, sendo 87,3¾ estável em solução salina isotónica meia hora depois. Contudo, os resultados com unidades padrão completas foram muito fracos, com uma taxa de recuperação de glóbulos inferior a 97,2¾ e uma estabilidade em solução salina inferior a 75,7¾.

No pedido do R.U. n2. GB 2046772A descreve-se a utilização 'AD ORIGINAL

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-5de HES como crioprotector para conservar por congelação erotrócitos, trombõcitos, leucócito?, células da medula óssea e células de outros órgãos. As células são separadas por, por exemplo, centrifugação, separação, filtração e adsorção das células. Uma breve descrição de um processo de congelação de eritrócitos refere a separação das células por separação celular (distinguida da centrifugação, presumivelmente por deixar algum plasma com as células) e a r;dição de uma solução de HES a 10¾ numa razão de 2/3 Concentração HES/eritrócito ) . Reivindicam-se taxas de recuperação entre 95 e 98¾. Estes documentos da arte anterior indicam que pode ser possível armazenar e recuperar glóbulos vermelhos, usando HES como crioprotector, com níveis de hemólise aceitáveis, em lotes muito pequenos (25 ml na Patente dos E.U. 4018911). Contudo, até agora não tem sido possível armazenar e recuperar glóbulos vermelhos em quantidades compatíveis com as técnicas de transfusão. Além disto, a variação dos factores de recuperação para amostras nominalmente idênticas é inaceitavelmente elevada. Assim, ainda que o valor potencial de um serviço de transfusão envolvendo glóbulos vermelhos congelados crioprotegidos com HES seja conhecido há muito tempo, têm-se provado impossível, até agora, vislumbrar um processo fornecendo níveis de hemólise aceitáveis na recuperação, com uma variação nos niveis aceitavelmente baixa.

De acordo com o presente invento, um processo de congelação de glóbulos vermelhos usando HES como crioprotector, inclui os passos de centrifugação de uma unidade de sangue para separar o plasma e as plaquetas dos glóbulos vermelhos, mistura dos glóbulos vermelhos com HES e congelação da mistura, e é caracterizado por os glóbulos vermelhos, antes da mistura, terem um volume de células compactadas não inferior a 90¾. e por o HES estar presente na mistura em não mais do que 7¾ p/v de HES/glóbulos vermelhos.

volume de células compactadas, ou hematócrito, é uma função bem conhecida na arte e está definido por exemplo, na página 32 de Practical Haemotology de Sir John V Dacie e S M Lewis, 6ê Edição, Churchill Livingstone 1984, ISBN 044391981-9. Deve-se

ORIGINAL

ffi

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-6notar que com o processo do presente invento, em contraste com arte anterior, não existe substancialmente plasma na mistura. Apesar da perda de algum efeito protector que pode ser proporcionado pelo plasma, o processo do presente invento usa percentagens significantemente baixas em p/v de HES/glóbulos vermelhos.

Além de se conseguirem niveis de hemolise aceitáveis, uma outra vantagem do processo resulta da ausência de plasma e da redução de HES. 0 plasma contém muitas proteínas diferentes, incluindo factores responsáveis pela coagulação do sangue, um dos quais è o factor VIII. Verificou-se agora, que quando se mistura HES com plasma há uma tendência progressiva para que algumas proteínas, especialmente factores de coagulação, componentes do complemento, imunoglobulinas e fibronectina, se tornem insolúveis à medida que a quantidade de HES aumenta. (S Bell, tese MSc, biblioteca da Brunel University).

Estas proteínas formam agregados que levam a que o plasma desenvolva uma cor leitosa. Quando isto se verifica com plasma não tratado, quer i n vivo quer i n vitro. estes agregados podem servir como focos para agregação de proteínas adicional, enquanto que ao mesmo tempo o HES pode interagir com mais proteínas no plasma fresco. Os detritos resultantes são removidos pelos macrófagos e podem reduzir temporariamente a imunocompetência do paciente. Em consequência dos factores de coagulação e da fibronectina serem afectados, o tempo de hemorragia pode ser prolongado proporcionalmente à dose de HES. 0 HES está, preferivelmente, na forma de uma solução de HES a 40¾ p/v, e pode ter um peso molecular na gama de 150 000 a 200 000.

Uma unidade preferida baseia-se na unidade de doação padrão, de 450 ml, e tem cerca de 200 ml de glóbulos vermelhos misturados com 35 ml de solução HES a 40?í, de modo a dar uma unidade total para congelação de cerca de 235 ml.

Vantajosamente, os glóbulos vermelhos podem ser tratados com um anti-coagulante e um conservante (tal como, p.e., CPDA, CPD ou heparina) antes de serem misturados com HES.

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-70 processa de congelação realiza-se, preferivelmente, em azoto liquido, com. a mistura dentro de um saco de congelação, preso numa estrutura que possui duas placas paralelas perfuradas, entre as quais o saco de congelação é mantido, estando as placas adaptadas para se moverem ligeiramente de modo perpendicular uma em relação à outra, mantendo-se contudo paralelas.

Uma estrutura preferida possui placas de alumínio de forma curva, possuindo a curva uma secção de forma cilíndrica ou, preferivelmente, esférica.

Verificou-se que, durante a congelação, a mistura dentro do saco de congelação é muito sensível a espessamentos localizados do saco. Existe uma tendência para que a mistura se expanda durante a congelação, e as estruturas de congelação da arte anterior, para comportar esta expansão, ou se distorciam ou produziam saliências localizadas, ou então impediam uma expansão apropriada, provocando deste modo destruição por esmagamento. Ao permitir o movimento perpendicular das placas paralelas, evita-se o espessamento localizado da mistura de congelação.

Com o processo de acordo com o presente invento, o volume de uma unidade padrão, quando preparado para ccngelação (235 ml), é tal que se verificou ser possível congelar a mistura a uma velocidade adequada sem agitar os sacos de congelação, como era necessário com os procesos anteriores. Isto resulta numa diminuição significativa nas necessidades de equipamento e em complicações operacionais e também evita uma causa potencial de hemólise (danos físicos nas células provocados pela agitação).

Os glóbulos vermelhos, depois da centrifugação, são preferivelmente passados directamente para o saco de congelação, no qual se encontra armazenado o HES.

sangue congelado pelo processo acima c, preferivelmente, preparado para transfusão por imersão em água quente, a cerca de 43,52C, sem agitação (de modo a evitar outra possível causa de hemólise), durante aproximadamente dez minutos, até atingir aproximadamente a temperatura do corpo humano.

Verificou-se que, usando o processo acima para congelação e 'bad original

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descongelação de uma unidade de sangue, baseada na unidade de doação padrão, se pode conseguir um rendimento de glóbulos estáveis em solução salina, em meia hora, de 91% oom um desvio padrão de ± 0,75% ε uma média de recuperação, na descongelação, de 99,1% ± 0,12%. O sangue pode estar pronto para transfusão a um paciente em onze minutos, após a remoção de armazenamento em azoto liquido.

Um processo de realização do invento, e um aparelho para uso no invento, serão agora descritos, apenas a titulo de exemplo, com referência aos desenhos diagramáticos anexos, dos quais:

a Figura 1 é uma vista esquemática do procedimento desde a recepção de uma unidade de sangue, padrão, de um dador, até à mistura de HES com glóbulos vermelhos num saco de congelação;

a Figura 2 ê uma vista plana de uma placa como a utilizada numa estrutura de congelação para uso no invento;

a Figura 3 é uma vista plana, correspondente à Figura 1, e mostrando um saco de congelação posicionado na placa; e a Figura 4 é um alçado em secção de uma estrutura de congelação com o saco de congelação nela colocado.

O sangue de um dador é doado (não representado) através de um tubo 10 (Fig. 1) para um saco de armazenamento 11, contendo um anti-coagulante e conservante (CPDA), sendo selado e colocado numa centrífuga (não representada). A centrifugação do saco 11 resulta na separação do plasma e das plaquetas, que são enviados Os glóbulos vermelhos, compactados num PCV não passam para um saco de congelação 13, contendo 35 ml de amido hidroxietilado (HES), preferivelmente 40% p/v e com peso molecular de 150 000 a 200 000. Isto dá cerca de 25,5% de HES no fluido que banha e é exterior aos glóbulos vermelhos, de modo que a percentagem global de HES não seja superior a 7% p/v (preferivelmente 6% p/v).

para um saco 12 inferior a 90%, aproximadamente saco de congelação 13 possui uma forma quadrada, é liso e fino. 0 saco 13 é então retirado e selado após expulsão de todo o ar, e o HES e os glóbulos vermelhos são misturados, por

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-9separação e vedação processo geral de tamanho da estrutura padrão de sangue).

exemplo, por inversão manual e rotação durante vários minutos.

processo, desde a doação de sangue z.tté à selagem do saco 13, deve-se realizar em condiçoes estéreis, e preferivelmente o procedimento é realizado de modo que as ligações entre o tubo 10 e o saco de congelação 13 sejam continuas, e não quebradas, e que quaisquer separações possam ser feitas com simultâneas de todas as ligações. 0 centrifugação e mistura dos glóbulos vermelhos com o solvente (HES) são bem conhecidos da arte - por exemplo na Patente E.U. 4018911 - e não necessitam portanto de ser mais completamente descritos aqui.

Uma estrura de congelação (Figuras 2, 3 e 4) tem 2 placas

20, 21, sendo cada uma substancialmente quadrada e curvada para formar parte da superfície de uma esfera, sendo as esferas concêntricas, e possuindo a exterior um raio cerca de 3 mm maior do que a interior. A esfericidade é, por exemplo, de tal ordem que se verifica um deslocamento de 2 cm no centro de uma corda da estrutura com cerca de 33 cm (tendo-se verificado que este era o adequado para congelar uma unidade Os bordos de cada placa, 20, 21, possuem flanges 22 que permitem que as placas se posicionem uma em relação à outra.

Cada placa é formada num material, preferivelmente alumínio, possuindo boas propriedades de condução do calor e tendo uma pluralidade de perfurações 23 (Fig. 2) que ocupam substancialmente 50¾ da área superficial. 0 saco de congelação 13 é colocado na placa 21 de tal modo que fica completamente circundado palas partes perfuradas das placas (ver Fig. 3). A segunda placa 20 é então colocada sobre a primeira placa 21 e sobre o saco 13 e mantida em posição por vários grampos tais como os representados com 24 na figura 4. Os braços de fixação 25 de cada grampo 24 possuem um ligeiro grau de flexibilidade e estão posicionados de modo que agarram os bordos das estruturas 20, 21, nas partes que não se apoiam sobre o saco de congelação 13.

A estrutura 20,

Ί o saco de congelação 13 são, então,

X

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-10imersos verticalmente numa tina ds azoto liquido (não representada), sendo a mistura dc HES/glõbulos vermelhos rapidamente congelada em aproximadamente 30 segundos. Existe urna tendência para a mistura se expandir ao congelar, ε a. flexibilidade dos braços de fixação 25 dos grampos 24 permite que as placas 20, 21, se afastem ligeiramente para compensar esta expansão. Contudo, a curvatura das placas 20, 21, evita a sua distorção, tendo como resultado que elas permaneçam paralelas uma à outra em todos os pontos e mantenham a espessura do saco de congelação constante em toda a sua área. Verificou-se que isto é importante, uma vez que se verificou que a expansão localizada do saco de congelação resulta numa hemólise localizada aumentada.

sangue congelado como descrito pode ser armazenado à temperatura do azoto liquido durante períodos consideráveis. Quando removido de um congelador é, preferivelmente, preparado para transfusão por submersão em água morna a cerca de 43,520, sem agitação, durante um periodo de cerca de 10 minutos, durante o qual se permite que a sua temperatura se eleve, preferivelmente, até à temperatura do sangue humano, antes de ser usado para transfusão.

Verificou-se que usando este processo, se atingem níveis de hemólise não piores do que 1%, o que é um rendimento em glóbulos vermelhos apreciavelmente melhor do que o conseguido com os processos de preparação e congelação anteriores.

Quadro 1 , seguinte, fornece pormenores de 10 amostras congeladas e recuperadas pele processo descrito anteriormente. A estrutura de congelção usada tem uma espessura da placa perfurada de 0,9 mm e uma espessura do bordo de 1,2 mm.

Segue Quadro 1

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-11QiJADRO 1

Resultados de controlo da qualidade	pós-descongelação	de 10
embaiaaens de 235	ml de HES (1 evosan ) ,/sanaus
% Estabilidade em	solução salina	% de recuperação
V. hora	2 horas
91,5	88,5	99,3	embalagem	um
90,1	87,5	99,1	embalagem	dois
92	89	99,0	embalagem	três
92,5	90	99,2	embalagem	quatro
90,3	87,8	99,1	embalagem	cinco
90,4	87,8	99,1	embalagem	seis
91,3	88,9	99,1	embalagem	sete
91,1	88,8	99,1		oito
90,6	88,2	98,9	embalagem	nove
90,5	88,2	98,9	embalagem	dez
estabilidade média	em X hora,	recuperação média =
em solução salina	= 91,0%,	= 99	,1%
	DP 0,75%	DP 0	,12%

A estabilidade média do plasma é 4% superior ã estabilidade em solução salina.

Quadro 2, apresenta parâmetros importantes que mostram que a eficácia de fornecimento de oxigénio e a sobrevivência de glóbulos vermelhos estão inalterados e não estão significativamente alterados pelo processo acima descrito.

Segue Quadro 2

Jí *

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-12QUftPRO 2: Resultados P50 e PPG

Embalagem	Sangue	completo	Mi stura	antes	Mistura de	glóbu-
N2.	fresco	em CPPA,	da congelação;	los vermelhos após
	< 24 horas de i dade	glóbulos melhos	ver -	descongelaç	ão
PPG	P50	PPG	P50	PPG	P50	PPG
910	28,5	3,43	27,5	3,86	24	3,82
911	27	4,38	26	4,88	25	3,85
912	26	4,01	23,5	4,4	23	3,86
913	25	3,82	25	4,33	24	3,76
914	26,5	3,56	25	3,δ6	23	3,86
915	27	4,78	27,5	4,66	26	3,84
001	28	6,27	27,5	4,72	25,5	5,79
002	27	3,43	26	4,5	25,5	5,56
003	29	5,19	28	5,22	25,5	5,41
004	28	5,2	28,5	5,28	28	4,88
005	27	3,01	27	3,63	26,5	3,31
006	25,5	5,08	26,5	4,58	28	4,57
048	27,5	4,21	28,5	3,51	27	4,39
049	26	4,19	26	4,22	26	3,72
050	25,5	4,3	23	4,2	23	4,05
051	27	4,66	27	4,56	26	5,41
052	25,5	4,39	26	4,81	25,5	4,73
053	23,5	3,75	24	3,74	23,5	3,22
625	25,5	2,91	25,5	2,9	22	3,01
449	27,5	3,48	26,5	3,32	22,5	3,79
071	26	3,48	27	4,19	20,5	' 3,4
unidades	26,6	4,15	26,4	4,27	24,7	4,19
de PP méd jos	1,27 P50 mmHg	0.81 , PPG mM/1	1,6	0,61	3,83	0,64

Ver-se-ã, portanto, que o invento proporciona um processo para conservação e recuperação de unidades padrão de glóbulos vermelhos com um nivel de hemólise repetivel, aceitável para fins

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-13de transfusão. 0 facto de o volume da unidade padrão estar reduzido a, aproximadamente, 235 ml, ê uma vantagem adicional, uma vez que permite que sejam transfundidas para um paciente, de uma vez, mais unidades (i.e. mais glóbulos vermelhos).

A mistura de transi usão está substancialmente isenta de impurezas que poderiam prejudicar o paciente, e a quantidade de HCS está reduzida z; cerca de 25-«> da usada nos processos de congelação da arte anterior. Além disso, o processo global é consideravelmente mais simples do que os processos de congelação descritos na arte anterior. Além disso o processo global é consideravelmente mais simples do que o processo descrito na arte anterior, uma vez que não requer maquinaria tal como a requerida para fazer vibrar a estrutura de congelação e o saco de congelação, durante o processo de congelação. De facto, o operador pode congelar sangue não usando mais equipamento do que luvas protectoras e um par de pinças. 0 processo de descongelação, também pode ser realizado por voluntários sem treino, sem nada mais complicado do que um balde com aquilo que julgam ser água quente ao toque, cálculo de dez minutos, e mesmo assim conseguir excelentes resultados.

Compreender-se-à que se podem usar várias modificações do processo e equipamento acima descrito sem sair do âmbito do invento. Por exemplo, ainda que as placas 20, 21 tenham sido descritas como tendo forma esférica, e esta é, claro, a ideal, é possível que apenas uma curvatura cilíndrica ou qualquer forma angular possa ser suficiente para manter a natureza paralela das placas, continuando a permitir o movimento relativo, normal, durante o processo de congelação. Também podem ser usados.outros materiais em lugar do alumínio.

Também se compreenderá que, embora o invento esteja concebido para uso com unidades padrão de sangue, de modo a ser compatível com as práticas de doação e transfusão convencionais, também pode ser usado com unidades mais pequenas. Pode ser usado, por exemplo, na preparação de saquetas - isto é saco de 2 tamanho mini de, por exemplo 5 cm , - para armazenagem, para uso experimental ou para amostras de sangue de tipos raros.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1 - Processo para a congelação de glóbulos vermelhos usando HES (amido hidroxietilado ) incluído os passos ds centrifugar uma unidade de sangue para separar o plasma e as plaquetas dos glóbulos vermelhos, misturar os glóbulos vermelhos com HES e congelar a mistura, caracterizado por os glóbulos vermelhos terem, antes da mistura, um volume de células compactadas não inferior a 90¾ e por o HES estar presente na mistura numa quantidade não superior a 7¾ p/v HES/glóbulos vermelhos.
2 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o HES estar presente numa razão de 6¾ p/v HES/glóbulos vermelhos.
3 - Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado por o HES estar sob a forma de uma solução a 40¾ p/v de HES.
4 - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, caracterizado por o HES ter um peso molecular médio dentro da gama de 150 000 a 200 000.
5 - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por a unidade de sangue estar baseada na unidade de sangue de dador de 450 ml.
6 - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações. 1 a 5, caracterizado por os glóbulos vermelhos serem tratados com um anti-coagulante antes de serem misturados com o HES.
7 - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado por a congelação se efectuar em azoto liquido.
8 - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado por a mistura estar num saco de congelação.
9 - Processo de acordo com a reivindicação 8, caracterizado por o saco de congelação estar preso numa estrutura possuindo duas placas perfuradas, paralelas, durante a congelação.
10 - Processo de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por as placas estarem adaptadas de forma a moverem-se •Je*

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-15perpendicularmente uma em relação à outra, mantendo-se paralelas.
11 - Processo de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por as placas serem curvas.
12 - Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por as placas serem curvadas esfericamente.
13 - Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por as placas serem curvadas cilindricamente.
14 - Processo de acordo corn qualquer uma das reivindicações 9 a 13, caracterizado por a estrutura ser feita de alumínio.
15 - Processo de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por as áreas perfuradas das placas terem uma espessura de 0,9 mm.
16 - Processo de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizado por os bordos não perfurados das placas terem uma espessura de 1,2 mm.
17 - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 16, caracterizado por a estrutura não ser agitada durante a congelação.
18 - Processo de congelação de glóbulos vermelhos, caracterizado por incluir os passos de centrifugação de uma unidade de sangue padrão de 450 ml , para remover o plasma e as plaquetas e para conseguir um volume de células compactadas dos glóbulos vermelhos não inferior a 90%, ocupando um volume de substancialmente 200 ml, de introdução dos glóbulos vermelhos num saco de congelação .entendo substancialmente 35 ml de uma solução a 40% ρ/v de HES, possuindo o HES um peso molecular médio dentro da gama de 150 000 a 200 000, de posicionamento do saco de congelação numa estrutura de congelação possuindo duas placas curvas, paralelas, adaptadas de modo a moverem-se ligeiramente de modo perpendicular, mantendo-se paralelas, e de colocação da estrutura de congelação em azoto liquido, deixando ai, sem agitar, até que a mistura de HES e de glóbulos vermelhos esteja congelada.

70 603

D/PD Pats P0649PTD

-1619 - Processo de preparação de glóbulos vermelhos, congelados de acordo com o processo de qualquer uma das reivindicações 1 a 17 e reivindicação 18, para transfusão, caracterizado por a mistura de HES e de glóbulos vermelhos ser imersa em água morna a cerca de 43,5PC, sem agitação, por um período de cerca de 10 minutos.