BR112015012308B1

BR112015012308B1 - método de preservação de eritrócitos

Info

Publication number: BR112015012308B1
Application number: BR112015012308A
Authority: BR
Inventors: Ilyin Ilya; J Dumont Larry
Original assignee: Advanced Preservations Tech Llc; Rich Tech Holding Company Llc; Dartmouth College
Priority date: 2012-11-30
Filing date: 2013-11-19
Publication date: 2019-12-17
Also published as: US10123528B2; WO2014085136A1; CN110583627A; JP6226438B2; BR112015012308A2; ES2926664T3; CA2892006C; EP2925123B1; TWI654303B; KR20150095636A; CA2892006A1; MX366283B; AR093615A1; CN104869819A; RU2632979C2; EP2925123A4; US20140154666A1; EP2925123A1; KR102101684B1; RU2015125697A

Abstract

resumo patente de invenção: "método de preservação de eritrócito". a presente invenção refere-se a um método para a preservação de eritrócitos incluindo as etapas de obtenção de um concentrado de eritrócito, sujeição do concentrado de eritrócito a um sistema de gás que inclui 65% a 100% em volume e opcionalmente um ou mais gases de lastro de 0% a 35% em volume; e manutenção do concentrado de eritrócito que tenha sido sujeito ao sistema gasoso a uma temperatura que está acima do ponto de congelamento do concentrado de eritrócito e até uma temperatura de cerca de 30 ºc.

Description

MÉTODO DE PRESERVAÇÃO DE ERITRÓCITOS.

[0001] A presente invenção reivindica prioridade na Aplicação de Patente Provisória dos Estados Unidos de No. de Série 61/731,944 arquivada em 30 de novembro de 2012, que é incorporada aqui por referência.

[0002] A presente invenção refere-se a um método de preservação de sangue, particularmente à preservação de um sangue de doador, a saber, células vermelhas do sangue embaladas (concentrado de eritrócito).

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [0003] Os métodos de preservação de eritrócito amplamente usados envolvem a obtenção de eritrócitos de doadores (por exemplo, usando o método de aferese, ou por separação do sangue integral doado) na forma de células vermelhas do sangue embaladas (concentrado de eritrócito) com conteúdo reduzido de células brancas do sangue e subsequente armazenamento do concentrado de eritrócito obtido em bolsas plásticas em uma temperatura dentro da faixa de 1 °C a 6 °C por um período de 42 dias. Por exemplo, este método é atualmente implementado através do uso de aparelhos de aferese produzidos pela Haemonetics Corp (Baintree, MA, EUA) e Terumo BCT, Inc. (Lakewood, CO, EUA) e de conjuntos de bolsas para componentes sanguíneos (também fornecidos junto com os aparelhos de aferese) manufaturados de polivinilcloreto com o plastificante bis (2-etil-hexil) ftalato (DEHP, CAS No.117-81-7). Apenas cerca de 20 por cento das RBCs são coletadas usando este método, a maioria sendo separada de sangue integral doado. Para plaquetas, ocorre o oposto.

[0004] As células vermelhas do sangue (RBCs) para transfusão são coletadas de doadores em CPD ou CP2D, uma solução preservadora anticoagulante. As RBCs são separadas pelo método de centrifu

Petição 870160028164, de 14/06/2016, pág. 5/12

2/24 gação, e uma solução para a armazenagem a longo prazo é adicionada (por exemplo, AS-3). Células brancas do sangue são removidas por filtração, e as RBCs/AS-3 são armazenadas em bolsas de PVC plastificadas com DEHP a 1-6 °C por até 42 dias antes da transfusão. É bem-conhecido que o plastificante de DEHP tem um efeito protetor importante nas RBCs, reduzindo a quantidade de hemólise ao longo do armazenamento. É desejável minimizar a hemólise de armazenamento e outros danos de armazenamento para fornecer o máximo benefício terapêutico para o recipiente de transfusão, bem como minimizar as sequelas adversas em potencial associadas com a transfusão de RBCs. O plastificante de DEHP (usado para a manufatura de tais bolsas) dissolve parcialmente no concentrado de eritrócito ao longo do armazenamento das RBCs, se difundindo, logo, do material da bolsa e exercendo ação preservadora adicional sob os eritrócitos. Foi mostrado (Dumont Larry J. et al. Exploratory in vitro study of red blood cell storage containers formulated with an alternative plasticizer. Transfusion, 2012 July 52(7):1439-1445) que a presença de plastificante de DEHP reduz o número de eritrócitos que foram lisados durante o armazenamento do concentrado de eritrócito.

[0005] O plastificante de DEHP no concentrado de eritrócito se decompõe em componentes tóxicos, um dos quais, a saber, é monoetilhexil ftalato (MEHP). Logo, uma desvantagem de preservação de eritrócitos em bolsas manufaturadas de material contendo plastificante de DEHP é o perigo de intoxicação de pacientes após a transfusão de uma unidade de concentrado de eritrócito. A consequência negativa indicada pode aumentar bem significantemente no caso de múltiplas transfusões. Levando esta circunstância em consideração, é preferível armazenar concentrados de eritrócito em bolsas feitas de materiais que não contenham plastificante de DEHP. Por causa de efeitos adversos teóricos em certas populações de pacientes de alto risco, é de

3/24 sejável encontrar uma alternativa a DEHP como um componente em bolsas de armazenamento de RBCs. Entretanto, neste caso, o efeito preservador (causado pela presença do plastificante de DEHP) está ausente e, logo, o número de eritrócitos que se lisam durante o armazenamento aumenta.

[0006] Um método para a preservação de plaquetas descrito em US 2010/0009334, publicado em 14 de janeiro de 2010, é conhecido. Este método envolve a obtenção de concentrado de plaquetas de sangue obtido de um indivíduo, mantendo o plasma de plaqueta em um meio gasoso contendo de 65% a 100% de xenônio sob pressão de 3,5 a 5 atm, resfriamento subsequente do concentrado de plaquetas na temperatura indicada acima e pressão do meio gasoso. As plaquetas foram obtidas por aferese. Este método resulta em um aumento no período de armazenamento para plaquetas.

[0007] Entretanto, como mostrado por experiência prática, a aplicação deste método para a preservação de outras células sanguíneas (por exemplo, eritrócitos) é caracterizada por numerosas desvantagens. Primeiro, este método presume o uso de uma mistura gasosa, que inclui oxigênio ou ar atmosférico em adição a xenônio. Entretanto, a presença de oxigênio durante o armazenamento de eritrócitos estimula a eritrocitólise (hemólise). A hemólise dos eritrócitos durante o armazenamento leva à qualidade insatisfatória do produto final, a saber, número baixo de células intactas no concentrado de eritrócito, que prejudica a eficiência do último após a transfusão a pacientes. Ainda mais importantes são os efeitos adversos da transfusão devido à alta hemólise no RBC transfundido. Nos EUA, se mais de 1% do concentrado de eritrócito sofrer hemólise, o concentrado de eritrócito é considerado inaceitável para transfusão de sangue. Em outros países, a quantidade de hemólise deve ser tão baixa quanto 0,8% para o concentrado de eritrócito ser aceitável para a transfusão de sangue.

4/24 [0008] Em vista do estado da técnica atual, há a necessidade de se desenvolver um método para preservação de concentrado de eritrócito que garanta o armazenamento do último por um período de não menos que 42 dias sem degradação considerável da qualidade de eritrócitos e que permita o uso de bolsas plásticas manufaturadas sem um plastificante de DEHP.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0009] A presente invenção é direcionada a um método aprimorado para a preservação de concentrado de eritrócito que garanta o armazenamento do último por um período de não menos que 42 dias sem degradação considerável da qualidade de eritrócito e que permita o uso de bolsas plásticas manufaturadas sem o uso de plastificante de DEHP.

[0010] A presente invenção é direcionada a um fármaco de preservação de sangue, e particularmente, à preservação de células vermelhas do sangue embaladas (concentrado de eritrócito). Em uma modalidade não limitante da invenção, é fornecido um método de preservação de eritrócito com o qual o concentrado de eritrócito (obtido em avanço do sangue integral e colocado em uma bolsa) é mantido em um sistema gasoso que não inclui gás oxigênio. Em um aspecto não limitante desta modalidade, o sistema gasoso inclui um conteúdo de xenônio que existe naturalmente na atmosfera terrestre no nível do mar. Em outro aspecto não limitante desta modalidade, o sistema gasoso inclui o conteúdo de xenônio que é maior que cerca de 10% em volume. Em ainda outro aspecto não limitante desta modalidade, o sistema gasoso inclui um conteúdo de xenônio que é maior que cerca de 50% em volume. Em ainda outro aspecto limitante desta modalidade, o sistema gasoso inclui um conteúdo de xenônio de cerca de 65% a cerca de 100% em volume. Xenônio (Xe) é um gás elementar inerte e nobre que é um componente comum do ar no nível do mar em propor

5/24 ções muito pequenas (menor que cerca de 1/1.000%). Ele não é reagente ou é “inerte” sob condições biológicas normais. Xenônio é um gás prontamente difusível que não é nem utilizado nem produzido pelo corpo. O xenônio pode ser opcionalmente combinado com um ou mais gases de lastro (por exemplo, nitrogênio, gases nobres, dióxido de carbono) em um conteúdo de cerca de 0% a cerca de 35% em volume. A quantidade de oxigênio que é incluída com o gás xenônio ou mistura de gás xenônio e gás de lastro é geralmente menor que 5% em volume, tipicamente menor que 2% em volume, mais tipicamente menor que 1% em volume, ainda mais tipicamente menor que 0,5% em volume, ainda mais tipicamente menor que 0,1% em volume, e ainda mais tipicamente cerca de 0% em volume. A quantidade de xenônio no sistema gasoso pode ser qualquer quantidade de 65% a 100% em volume (por exemplo, 65%, 65,1%, 65,2% .... 99,8%, 99,9%, 100%) e pode incluir qualquer faixa dentro de tais valores. De maneira análoga, quando um ou mais gases de lastro são incluídos no sistema gasoso, a quantidade de gás de lastro no sistema gasoso pode ser qualquer quantidade de 0% a 35% em volume (por exemplo, 0%, 0,1%, 0,2% .... 34,8%, 34,9%, 35%) e pode incluir qualquer faixa dentro de tais valores. O gás de lastro, quando usado, é geralmente nitrogênio e/ou argônio; entretanto, outros gases inertes ao concentrado de eritrócito podem ser usados. O sistema gasoso é introduzido no concentrado de eritrócito no recipiente para saturar parcial ou totalmente o concentrado de eritrócito no sistema gasoso. Geralmente, o concentrado de eritrócito está pelo menos 75% saturado com o sistema gasoso, tipicamente cerca de 80% saturado, mais tipicamente pelo menos 85% saturado com o sistema gasoso, ainda mais tipicamente pelo menos cerca de 90% saturado com o sistema gasoso, ainda mais tipicamente pelo menos cerca de 95% saturado com o sistema gasoso, e ainda mais tipicamente pelo menos cerca de 98% saturado com o sistema

6/24 gasoso. Em um arranjo não limitante, pelo menos uma porção do recipiente é permeável à mistura de gás tal que a mistura gasosa possa ser introduzida em e/ou removida do recipiente pela difusão através do recipiente; entretanto, isto não é necessário. Em uma configuração não limitante, o recipiente está na forma de uma bolsa feita de polivinilcloreto que pode ou não incluir um plastificante de DEHP. O tamanho do recipiente não é limitante. Um tamanho não limitante é um recipiente que possa conter pelo menos 200 mL de concentrado de eritrócito. Em outra configuração não limitante, o recipiente é posicionado em um recipiente hermeticamente selado equipado com uma tampa que seja permeável à mistura gasosa. O recipiente pode ou não ser permeável à mistura gasosa. O concentrado de eritrócito no recipiente pode opcionalmente ser mantido na presença da mistura gasosa e sob uma pressão de 1 atm sem bombeamento adicional da mistura gasosa enquanto o recipiente estiver posicionado na câmara hermeticamente selada. O resfriamento opcional do concentrado de eritrócito na câmara hermeticamente selada pode ser iniciado de um momento de estabilização de pressão de mistura gasosa na câmara hermeticamente selada, com a estabilização resultante da saturação do concentrado de eritrócito e da mistura de gás.

[0011] Em um aspecto não limitante da invenção, quando o sistema gasoso é introduzido no concentrado de eritrócito, a pressão do sistema gasoso geralmente não é maior que cerca de 4 atm. Geralmente, a pressão do sistema gasoso é de pelo menos cerca de 1 atm. Para propósitos desta invenção, a pressão atmosférica é de 1 atm (760 torr). Geralmente, a pressão do sistema gasoso é menor que cerca de 10 atm. Em uma modalidade não limitante da invenção, a pressão do sistema gasoso sendo introduzido no concentrado de eritrócito é de cerca de 1 a 4 atm (por exemplo, 1 atm, 1,1, atm, 1,2 atm .... 3,8 atm, 3,9 atm, 4 atm) e pode incluir qualquer faixa dentro de tais valo

7/24 res. Em um aspecto não limitante da invenção, a pressão do sistema gasoso quando sendo introduzido ao concentrado de eritrócito é maior que a pressão atmosférica (por exemplo, 1 atm).

[0012] Em outro e/ou alternativo aspecto não limitante da invenção, o sistema gasoso pode ser introduzido ao concentrado de eritrócito quando o concentrado de eritrócito estiver em uma temperatura que está acima do ponto de congelamento do concentrado de eritrócito até uma temperatura de cerca de 30 °C (por exemplo, 0,01 °C, 0.02 °C .... 29,98 °C, 29,99 °C, 30 °C). A temperatura do concentrado de eritrócito em um recipiente pode ser mantida em uma temperatura constante ou pode ser variada (por exemplo, diminuída, aumentada, etc.) enquanto o sistema de gás é introduzido ao concentrado de eritrócito quando o concentrado de eritrócito estiver a uma temperatura que é de até cerca de 25 °C. Em outra modalidade não limitante, o sistema gasoso é introduzido ao concentrado de eritrócito quando o concentrado de eritrócito estiver a uma temperatura de até cerca de 23 °C. Em outra modalidade não limitante, o sistema gasoso é introduzido ao concentrado de eritrócito quando o concentrado de eritrócito estiver a uma temperatura que seja de cerca de 6 °C a 23 °C.

[0013] Em ainda outro e/ou alternativo aspecto não limitante da invenção, o sistema gasoso é geralmente introduzido no concentrado de eritrócito dentro de cerca de 8 horas (por exemplo, 0,01 horas, 0,02 horas .... 97,98 horas, 97,99 horas, 98 horas) após o sangue ter sido removido de um humano ou outro tipo de mamífero. Em uma modalidade não limitante, o sistema gasoso é introduzido ao concentrado de eritrócito dentro de cerca de 72 horas após o sangue ter sido removido de um humano ou outro tipo de animal. Em uma modalidade não limitante, o sistema gasoso é introduzido ao concentrado de eritrócito dentro de cerca de 48 horas após o sangue ter sido removido de um humano ou outro tipo de animal. Em uma modalidade não limitante, o

8/24 sistema gasoso é introduzido ao concentrado de eritrócito dentro de cerca de 24 horas após o sangue ter sido removido de um humano ou outro tipo de animal.

[0014] Em ainda outro aspecto não limitante da invenção, oxigênio é removido ou purgado do recipiente que inclua o concentrado de eritrócito antes do sistema gasoso (ou seja, xenônio, xenônio mais gás de lastro) sendo introduzido ao concentrado de eritrócito; entretanto, isto não é necessário. Geralmente, o concentrado de eritrócito é exposto a um ambiente com vácuo (por exemplo, 0 atm, 0,01 atm, 0,02 atm ... 0,97 atm, 0,98 atm, 0,99 atm) por um período de tempo suficiente (por exemplo, 0,1 segundos, 0,2 segundos, 0,3 segundos ...

599,8 segundos, 599,9 segundos, 600 segundos) para remover pelo menos cerca de 75% do oxigênio do recipiente que inclua o concentrado de eritrócito, tipicamente pelo menos cerca de 85% do oxigênio do recipiente que inclua o concentrado de eritrócito, ainda mais tipicamente pelo menos cerca de 90% do oxigênio do recipiente que inclua o concentrado de eritrócito, pelo menos cerca de 95% do oxigênio do recipiente que inclua o concentrado de eritrócito. Como tal, qualquer valor de 75% a 100% (ou seja, 75%, 75,1%, 75,2% .... 99,8%, 99,9%, 100%) do oxigênio é removido do recipiente que inclua o concentrado de eritrócito antes do sistema gasoso ser introduzido ao concentrado de eritrócito. O grau de vácuo e o período de tempo que o concentrado de eritrócito é sujeito ao vácuo não é limitante. O método de remoção ou purga do oxigênio do recipiente que inclui o concentrado de eritrócito também resulta na remoção de oxigênio que é dissolvido no concentrado de eritrócito.

[0015] Em ainda outro e/ou alternativo aspecto não limitante da invenção, uma vez que o sistema gasoso é introduzido ao concentrado de eritrócito, o concentrado de eritrócito é mantido em uma temperatura refrigerada (ou seja, menor que a temperatura ambiente) que está

9/24 acima do ponto de congelamento do concentrado de eritrócito. Geralmente, a temperatura de refrigeração não é maior que cerca de 25 °C, tipicamente não é maior que cerca de 20 °C, mais tipicamente não é maior que cerca de 15 °C, ainda mais tipicamente não é maior que cerca de 10 °C, e ainda mais tipicamente não é maior que cerca de 6 °C. Em uma modalidade não limitante, o concentrado de eritrócito pode ser mantido a tal temperatura refrigerada por pelo menos 42 dias e resulta na hemólise do concentrado de eritrócito não maior que cerca de 0,8%, tipicamente resulta na hemólise do concentrado de eritrócito não maior que cerca de 0,7%, e mais tipicamente resulta na hemólise do concentrado de eritrócito não maior que cerca de 0,6%.

[0016] Em outro e/ou alternativo aspecto não limitante da invenção, o sistema gasoso pode ser opcionalmente introduzido no concentrado de eritrócito mais de uma vez antes da refrigeração do concentrado de eritrócito. Quando o sistema gasoso é introduzido no concentrado de eritrócito mais de uma vez antes da refrigeração do concentrado de eritrócito, o concentrado de eritrócito é pressurizado com o sistema gasoso, e então é purgado do sistema gasoso, e então novamente pressurizado com o sistema gasoso. O número de etapas de pressurização e purga não é limitante. Geralmente, o concentrado de eritrócito não é pressurizado, purgado e repressurizado por mais de 5 vezes, e tipicamente não mais de 4 vezes, mais tipicamente não mais de 3 vezes, e ainda mais tipicamente não mais de 2 vezes. A purga do sistema gasoso do concentrado de eritrócito pode ser conduzida sob um vácuo; entretanto, isto não é necessário. A pressurização do concentrado de eritrócito com o sistema gasoso, e então a purga do sistema gasoso, e então novamente a pressurização com o sistema gasoso são usadas para remover adicionalmente qualquer oxigênio remanescente no concentrado de eritrócito após o concentrado de eritrócito ser inicialmente purgado de ar antes da primeira introdução do

10/24 sistema de gás no concentrado de eritrócito. A purga do sistema gasoso do eritrócito pode ocorrer sob parâmetros similares que a remoção de oxigênio do concentrado de eritrócito; entretanto, isto não é necessário. O concentrado de eritrócito pode ser opcionalmente agitado ou, de outra maneira, misturado para facilitar na remoção de oxigênio do concentrado de eritrócito.

[0017] Em ainda outro e/ou alternativo aspecto não limitante da invenção, o concentrado de eritrócito, após ser pressurizado com o sistema de gás, e antes e/ou durante a refrigeração do concentrado de eritrócito, pode opcionalmente ser agitado ou, de outra maneira, misturado para facilitar a mistura do sistema gasoso com o concentrado de eritrócito. O tempo de agitação pode ser de cerca de 0,002 hora a 24 horas (por exemplo, 0,0021 hora, 0,0022 hora ... 23,99 horas, 24 horas). Em uma modalidade não limitante, o tempo de agitação não é maior que cerca de 10 horas, tipicamente não é maior que cerca de 5 horas, e mais tipicamente não é maior que cerca de 3,5 horas.

[0018] Em ainda outro e/ou alternativo aspecto não limitante da invenção, após o período de refrigeração do concentrado de eritrócito estiver completo, e antes de ou após o concentrado de eritrócito tiver sido despressurizado do sistema gasoso, o concentrado de eritrócito pode opcionalmente ser agitado. Em uma modalidade não limitante, o concentrado de eritrócito é agitado antes da despressurização do concentrado de eritrócito do sistema gasoso. O tempo de agitação pode ser de cerca de 0,002 hora a 10 horas (por exemplo, 0,0021 hora, 0,0022 hora ... 9,99 horas, 9 horas). Em uma modalidade não limitante, o tempo de agitação não é maior que cerca de 2 horas, tipicamente não é maior que cerca de 1 hora, mais tipicamente não é maior que cerca de 0,5 hora, e ainda mais tipicamente não é maior que cerca de 0,2 hora.

[0019] Em ainda outro e/ou alternativo aspecto não limitante da in

11/24 venção, após o concentrado de eritrócito ter sido despressurizado do sistema gasoso e opcionalmente agitado, o concentrado de eritrócito é opcionalmente permitido se aquecer da temperatura refrigerada para a temperatura ambiente (por exemplo, 25 °C - 27 °C). Em uma modalidade não limitante, o período de tempo que o concentrado de eritrócito é permitido se aquecer pode ser de cerca de 0,002 hora a 10 horas (por exemplo, 0,0021 hora, 0,0022 hora ... 9,99 horas, 9 horas). Como pode ser apreciado, tempos de aquecimento maiores podem ser usados.

[0020] Em outro e/ou alternativo aspecto não limitante da invenção, após o concentrado de eritrócito ter sido despressurizado do sistema gasoso, e opcionalmente agitado, o concentrado de eritrócito é usado em uma transfusão sanguínea dentro de cerca de 72 horas, tipicamente dentro de cerca de 36 horas, mais tipicamente dentro de cerca de 24 horas, e ainda mais tipicamente dentro de cerca de 12 horas.

[0021] Em ainda outro aspecto não limitante da invenção, o recipiente usado para o concentrado de eritrócito não inclui um plastificante de DEHP. O método da presente invenção é capaz de preservar o concentrado de eritrócito por pelo menos cerca de 42 dias com a hemólise do concentrado de eritrócito não sendo maior que 1% em um recipiente que não inclui um plastificante de DEHP. Tal método é um avanço significante sobre os métodos de preservação anteriores que requerem os efeitos preservadores do plastificante de DEHP para se obter tempos de preservação de 42 dias para o concentrado de eritrócito. O método da presente invenção supera esta primeira limitação na técnica de preservação do concentrado de eritrócito.

[0022] Um objetivo não limitante da presente invenção é o fornecimento de um método para a preservação de um concentrado de eritrócito.

12/24 [0023] Outro e/ou alternativo objetivo não limitante da presente invenção é o fornecimento de um método para a preservação de um concentrado de eritrócito sem o uso de um recipiente manufaturado que inclua um plastificante de DEHP.

[0024] Ainda outro e/ou alternativo objetivo não limitante da presente invenção é o fornecimento de um método para a preservação de um concentrado de eritrócito pelo uso de um sistema gasoso que inclui gás xenônio.

[0025] Ainda outro e/ou alternativo objetivo não limitante da presente invenção é o fornecimento de um método para a preservação de um concentrado de eritrócito pelo uso de um sistema gasoso que inclui gás xenônio e que o concentrado de eritrócito tenha sido parcial ou totalmente purgado de oxigênio.

[0026] Ainda outro e/ou alternativo objetivo não limitante da presente invenção é o fornecimento de um método para a preservação de um concentrado de eritrócito que garanta o armazenamento do último por um período de não menos de 42 dias sem a degradação considerável da qualidade de eritrócitos e que permita o uso de bolsas plásticas manufaturadas sem o uso de um plastificante de DEHP.

[0027] Ainda outro e/ou alternativo objetivo não limitante da presente invenção é o fornecimento de um método para a preservação de um concentrado de eritrócito que reduza a hemólise do concentrado de eritrócito.

[0028] Ainda outro e/ou alternativo objetivo não limitante da presente invenção é o fornecimento de um método para a preservação de um concentrado de eritrócito que aprimore o conteúdo de adenosina trifosfato (ATP) do concentrado de eritrócito.

[0029] Ainda outro e/ou alternativo objetivo não limitante da presente invenção é o fornecimento de um sistema de recipiente projetado para preservar eritrócitos que inclui um recipiente possuindo um

13/24 concentrado de eritrócito, e o concentrado de eritrócito no recipiente está a uma temperatura menor que a temperatura ambiente, e o concentrado de eritrócito é pelo menos parcialmente saturado com um sistema gasoso que inclui gás xenônio.

[0030] Estes e outros objetivos, características e vantagens da presente invenção se tornarão aparentes em luz da seguinte descrição detalhada das modalidades preferidas destas, como ilustrado nas figuras acompanhantes.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [0031] A FIG. 1 é um gráfico que ilustra o grau de hemólise de uma bolsa de concentrado de eritrócito após 42 dias quando expostos e não expostos ao sistema gasoso da presente invenção; e, [0032] A FIG. 2 é um gráfico que ilustra o conteúdo de ATP de uma bolsa de concentrado de eritrócito após 42 dias quando expostos e não expostos ao sistema gasoso da presente invenção.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [0033] Com referência agora às figuras cujas apresentações são para o propósito de ilustração das modalidades da invenção apenas e não para o propósito de limitação da mesma, a presente invenção é direcionada a um método aprimorado para a preservação do concentrado de eritrócito. O método aprimorado para a preservação do concentrado de eritrócito pode ser alcançado com ou sem o uso de um recipiente manufaturado sem o uso de um plastificante de DEHP. O método inclui o uso de um sistema gasoso que é introduzido no concentrado de eritrócito durante o armazenamento do concentrado de eritrócito. A presente invenção também é direcionada a um sistema de recipiente de eritrócito projetado para preservar eritrócitos incluindo um recipiente que inclui um concentrado de eritrócito e que o concentrado de eritrócito está pelo menos parcialmente saturado com um sistema gasoso, e o sistema gasoso incluindo gás xenônio a uma concentra

14/24 ção que é maior que aquela que o gás xenônio ocorre naturalmente na atmosfera.

[0034] Vários métodos não limitantes de acordo com a presente invenção são apresentados a seguir:

Método A

1. Obtenção de um concentrado de eritrócito em um recipiente;

2. Sujeição do concentrado de eritrócito em um recipiente a um sistema gasoso que inclui gás xenônio a uma concentração que é maior que a do gás xenônio que ocorre naturalmente na atmosfera; e,

3. Manutenção do concentrado de eritrócito que foi sujeitado a um sistema gasoso a uma temperatura que está acima do ponto de congelamento do concentrado de eritrócito até uma temperatura de cerca de 30 °C.

[0035] Como pode ser apreciado, as RBCs podem ser expostas ao gás xenônio durante e/ou após as RBCs serem inseridas no recipiente.

Método B

1. Obtenção de um concentrado de eritrócito em um recipiente;

2. Sujeição do concentrado de eritrócito em um recipiente a um sistema gasoso que inclui gás xenônio a uma concentração de 65% a 100% em volume e opcionalmente inclui um ou mais gases de lastro de 0% a 35% em volume; e,

Método C

1. Obtenção de um concentrado de eritrócito em um recipiente;

2. Remoção de 70-100% de oxigênio do concentrado de eritrócito no recipiente que inclui o concentrado de eritrócito.

3. Sujeição do concentrado de eritrócito em um recipiente a um

15/24 sistema gasoso que inclui gás xenônio a uma concentração que é maior que a do gás xenônio que ocorre naturalmente na atmosfera após a etapa de remoção de oxigênio; e,

4. Manutenção do concentrado de eritrócito que foi sujeitado a um sistema gasoso a uma temperatura que está acima do ponto de congelamento do concentrado de eritrócito até uma temperatura de cerca de 30 °C.

Método D

1. Obtenção de um concentrado de eritrócito em um recipiente;

3. Sujeição do concentrado de eritrócito em um recipiente a um sistema gasoso que inclui gás xenônio a uma concentração de 65% a 100% em volume e opcionalmente inclui um ou mais gases de lastro de 0% a 35% em volume; e,

[0036] Nos Métodos A-D, a pressão do sistema gasoso ao ser introduzido ao concentrado de eritrócito em um recipiente é geralmente menor que 6 atm, tipicamente 1-4 atm, mais tipicamente 1-3 atm, e ainda mais tipicamente 1-2 atm. Nos Métodos A-D, a temperatura do concentrado de eritrócito em um recipiente onde o sistema gasoso está sendo introduzido no concentrado de eritrócito geralmente não é maior que cerca de 25 °C, e tipicamente não é maior que cerca de 23 °C. Nos Métodos A-D, a temperatura do concentrado de eritrócito em um recipiente pode ser mantida em uma temperatura constante ou pode ser variada (por exemplo, diminuída, etc.) enquanto o sistema gasoso estiver sendo introduzido no concentrado de eritrócito em um re

16/24 cipiente. Nos Métodos A-D, o recipiente que inclui o concentrado de eritrócito pode opcionalmente ser agitado ou misturado antes de, durante ou após o sistema de gás ser introduzido no concentrado de eritrócito no recipiente. Nos Métodos A-D, o recipiente que inclui o concentrado de eritrócito pode ser resfriado a uma temperatura não maior que cerca de 6 °C e maior que o ponto de congelamento do concentrado de eritrócito após o sistema gasoso ser introduzido ao concentrado de eritrócito no recipiente. Nos Métodos A-D, o recipiente pode opcionalmente estar ausente no plastificante de DEHP.

[0037] Mais métodos não limitantes específicos da invenção são como a seguir:

Método E

1. Obtenção de um concentrado de eritrócito em um recipiente;

3. Sujeição do concentrado de eritrócito em um recipiente a um sistema gasoso que inclui 65% a 100% em volume de xenônio e opcionalmente inclui um ou mais gases de lastro de 0% a 35% em volume após a etapa de remoção de oxigênio em uma temperatura não maior que cerca de 23 °C e a uma pressão maior que 1 atm a até cerca de 4 atm; e,

4. Manutenção do concentrado de eritrócito que foi sujeitado a um sistema gasoso a uma temperatura que está acima do ponto de congelamento do concentrado de eritrócito até uma temperatura de cerca de 6 °C.

Método F

1. Obtenção de um concentrado de eritrócito em um recipiente;

3. Sujeição do concentrado de eritrócito em um recipiente a um

17/24 sistema gasoso que inclui 65% a 100% em volume de xenônio e opcionalmente inclui um ou mais gases de lastro de 0% a 35% em volume após a etapa de remoção de oxigênio em uma temperatura de cerca de 18 °C a 23 °C e a uma pressão de cerca de 1,01-2 atm;

4. Resfriamento do concentrado de eritrócito em um recipiente em uma temperatura acima do ponto de congelamento do concentrado de eritrócito e até cerca de 6 °C; e

5. Manutenção do concentrado de eritrócito que foi sujeitado a um sistema gasoso a uma temperatura que está acima do ponto de congelamento do concentrado de eritrócito até uma temperatura de cerca de 6 °C por até 42 dias.

Método G

1. Obtenção de um concentrado de eritrócito em um recipiente, onde o recipiente seja ausente de um plastificante de DEHP;

3. Sujeição do concentrado de eritrócito em um recipiente a um sistema gasoso que inclui 65% a 100% em volume de xenônio e opcionalmente inclui um ou mais gases de lastro de 0% a 35% em volume após a etapa de remoção de oxigênio em uma temperatura de cerca de 18 °C a 23 °C e a uma pressão de cerca de 1,01-2 atm;

4. Agitação ou mistura do concentrado de eritrócito em um recipiente antes de, durante e/ou após o sistema gasoso ser introduzido ao concentrado de eritrócito em um recipiente;

5. Resfriamento do concentrado de eritrócito em um recipiente em uma temperatura acima do ponto de congelamento do concentrado de eritrócito e até cerca de 6 °C; e

6. Manutenção do concentrado de eritrócito que foi sujeitado a um sistema gasoso a uma temperatura que está acima do ponto de congelamento do concentrado de eritrócito até uma temperatura de

18/24 cerca de 6 °C por até 42 dias.

[0038] Nos Métodos E-G, a pressão do sistema gasoso ao ser introduzido ao concentrado de eritrócito em um recipiente é geralmente menor que 6 atm, tipicamente 1-4 atm, mais tipicamente 1-3 atm, e ainda mais tipicamente 1-2 atm. Nos Métodos E-G, a temperatura do concentrado de eritrócito em um recipiente onde o sistema gasoso está sendo introduzido no concentrado de eritrócito geralmente não é maior que cerca de 25 °C, e tipicamente não é maior que cerca de 23 °C. Nos Métodos E-G, a temperatura do concentrado de eritrócito em um recipiente pode ser mantida em uma temperatura constante ou pode ser variada (por exemplo, diminuída, etc.) enquanto o sistema gasoso estiver sendo introduzido no concentrado de eritrócito em um recipiente. Nos Métodos E-G, o recipiente que inclui o concentrado de eritrócito pode opcionalmente ser agitado ou misturado antes de, durante ou após o sistema de gás ser introduzido no concentrado de eritrócito no recipiente. Nos Métodos E-G, o recipiente que inclui o concentrado de eritrócito pode ser resfriado a uma temperatura não maior que cerca de 6 °C e maior que o ponto de congelamento do concentrado de eritrócito após o sistema gasoso ser introduzido ao concentrado de eritrócito no recipiente. Nos Métodos E-G, o recipiente pode opcionalmente estar ausente no plastificante de DEHP.

[0039] Enquanto não se mantendo a qualquer teoria do método da presente invenção, acredita-se que a difusão de gases no concentrado de eritrócito (incluindo os próprios eritrócitos) ocorre quando o concentrado de eritrócito é mantido em uma mistura gasosa da composição indicada acima sob pressão (por exemplo, 2 atm). A saturação do concentrado de eritrócito com xenônio sob as condições da pressão indicada acima garante o armazenamento subsequente do primeiro a uma temperatura que está acima do ponto de congelamento e até cerca de 6 °C com a preservação da viabilidade e da funcionalidade dos eritróci

19/24 tos. A ação de preservação do xenônio nos eritrócitos garante o armazenamento do concentrado de eritrócitos por um período de até 42 dias, o que permite a desistência da ideia do uso de bolsas plásticas manufaturadas com o uso de um plastificante de DEHP.

[0040] Além disso, em contraste com os métodos conhecidos, o método proposto elimina a difusão de oxigênio do ambiente através do material da bolsa para o concentrado de eritrócito, o que reduz a hemólise dos eritrócitos.

[0041] Uma câmara de resfriamento pode opcionalmente ser usada para o resfriamento do concentrado de eritrócito e para subsequente armazenamento do concentrado de eritrócito resfriado.

[0042] Ao implementar o método proposto, o concentrado de eritrócito pode ser colocado em um recipiente permeável para a mistura gasosa, e a manutenção do concentrado de eritrócito na mistura gasosa é realizada em uma câmara hermeticamente selada, dentro da qual o recipiente com o concentrado de eritrócito é colocada. Em particular, antes da alimentação da mistura gasosa na câmara hermeticamente selada (em que um recipiente com concentrado de eritrócito foi colocado), é aplicado vácuo na câmara com o propósito de remover oxigênio dela.

[0043] Um vaso hermeticamente selado equipado com uma tampa permeável para a mistura gasosa ou bolsa feita de material permeável para a mistura gasosa (por exemplo, bolsas que são manufaturadas de polivinilcloreto sem DEHP e que são geralmente usadas para armazenamento de componentes de sangue) pode opcionalmente ser usado como um recipiente para o concentrado de eritrócito.

[0044] O período de tempo durante o qual o concentrado de eritrócito é mantido em uma mistura gasosa sob pressão (por exemplo, 1,01-4 atm) é determinado pelo nível desejado de saturação de concentrado de eritrócito com xenônio (como indicado acima). Por exem

20/24 plo, ao usar uma bolsa feita de material permeável para a mistura gasosa, dentro da qual pelo menos 200 mL de concentrado de eritrócito são colocados e então sujeitos sob pressão acima de 1 atm, este tempo será de pelo menos cerca de 1 minuto, tipicamente menor que cerca de 30 horas, mais tipicamente pelo menos cerca de 15 minutos, mais tipicamente pelo menos cerca de 30 minutos, ainda mais tipicamente pelo menos cerca de 1 hora, e ainda mais tipicamente pelo menos cerca de 3 horas.

[0045] No caso geral, a duração de manutenção do concentrado de eritrócito em uma mistura gasosa sob pressão (por exemplo, 1,01 atm, 1,5 atm, 2 atm, etc.) pode ser determinada baseada no cessar da diminuição da pressão de mistura gasosa na câmara hermeticamente selada (sem bombeamento adicional da mistura gasosa), que indica a cessação de saturação de concentrado de eritrócito com os componentes da mistura gasosa. O resfriamento do concentrado de eritrócito pode ser opcionalmente iniciado no momento da estabilização da pressão da mistura gasosa na câmara hermeticamente selada.

[0046] Imediatamente antes do uso do concentrado de eritrócito após o armazenamento, o concentrado de eritrócito pode opcionalmente ser mantido sob pressão não excedendo a pressão atmosférica (1 atmosfera) e a uma temperatura de cerca de 18 °C a 28 °C (por exemplo, temperatura ambiente a morna, etc.) por pelo menos um período de tempo que seja suficiente para o aquecimento natural de concentrado de eritrócito até a temperatura indicada acima; entretanto, isso não é necessário. Em particular, a câmara hermeticamente selada pode ser retirada da câmara de resfriamento, o selo hermético é removido, e então a bolsa com o concentrado de eritrócito é extraída e mantida na temperatura ambiente e pressão atmosférica por um período de tempo suficiente para o aquecimento natural do concentrado de eritrócito para a temperatura ambiente e para vazamento do siste21/24 ma gasoso do concentrado de eritrócito enquanto o concentrado de eritrócito se aquece para a temperatura ambiente em um ambiente. Para reduzir o período de tempo durante o qual os componentes da mistura gasosa são liberados ou escapam do concentrado de eritrócito após o período de armazenamento do recipiente, o recipiente que inclui o concentrado de eritrócito pode opcionalmente ser agitado ou misturado e/ou ser colocado sob condições de pressão diminuída ou de um vácuo (quando comparado com a pressão atmosférica).

[0047] A presente invenção poderia ser usada na prática para o propósito de preservar eritrócitos (na forma de concentrado de eritrócito) com o uso de bolsas convencionais intencionadas para o armazenamento de produtos de sangue e feitas de um material que é permeável a gás para xenônio e cuja bolsa não contenha um plastificante de DEHP. Um equipamento padrão capaz de fornecer o sistema gasoso em uma câmara hermeticamente selada que possa aguentar a pressão do sistema gasoso de até 2-4 atm pode ser usado na presente invenção. Um equipamento de refrigeração padrão (refrigeradores convencionais) em que os produtos de sangue preservados são armazenados podem também ser usados na presente invenção.

[0048] A possibilidade da implementação prática da presente invenção e a obtenção dos resultados indicados acima (em termos de preservar 200 mL de concentrado de eritrócito durante um período de até 42 dias enquanto mantendo o baixo nível de hemólise de eritrócitos) tem sido verificada experimentalmente.

[0049] Com referência agora às Figs. 1-2, os resultados de teste de dois concentrados de eritrócito diferentes são ilustrados. O primeiro concentrado de eritrócito é identificado pelo número 2032 e o segundo concentrado de eritrócito é identificado pelo número 2086. Cada uma das amostras foi dividida em quatro recipientes diferentes. Dois dos recipientes para cada uma das amostras incluíram o plastificante de

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DEHP e dois dos recipientes para cada uma das amostras não incluiu plastificantes de DEHP. Além disso, para cada amostra, dois dos recipientes incluíram um sistema gasoso de 99,9% em volume de gás xenônio. Os gráficos indicam qual recipiente incluiu ou era ausente de gás xenônio e/ou plastificante de DEHP. O protocolo de teste para os recipientes foi o seguinte:

[0050] Para os Recipientes que eram ausentes de gás Xe:

a. Coloque as unidades sem Xe planas em um rotor por 3,5 horas.

b. Coloque as unidades sem Xe no refrigerador do banco de sangue ao mesmo tempo que as unidades com Xe.

[0051] Para os Recipientes que incluíam gás Xe:

a. Coloque as unidades de Xe planas em uma câmara hiperatmosférica pré-testada.

b. Evacue a câmara com vácuo para remover oxigênio das unidades com Xe.

c. Pressurize a câmara com gás Xe a 4 atm.

d. Remova o gás Xe da câmara.

e. Pressurize a câmara com gás Xe a 4 atm.

f. Remova o gás Xe da câmara.

g. Pressurize a câmara com gás Xe a 4 atm.

h. Remova o gás Xe da câmara.

i. Pressurize a câmara com gás Xe a 4 atm.

j. Coloque a unidade de Xe pressurizada em um agitador por

3,5 h.

k. Coloque as unidades com Xe no refrigerador do banco de sangue ao mesmo tempo que as unidades sem Xe.

[0052] Enquanto as unidades com Xe e sem Xe estão no refrigerador do banco de sangue, as unidades com Xe foram periodicamente checadas por um período de 42 dias para garantir que a pressão nas

23/24 unidades de Xe excederam 1 atm. Após 42 dias, todas as unidades foram removidas do refrigerador do banco de sangue. Após as unidades terem sido removidas do refrigerador do banco de sangue, os seguintes procedimentos foram conduzidos nas unidades:

1. Colocação imediata das unidades com Xe pressurizadas e das unidades sem Xe em uma plaqueta e em um agitador horizontal rotativo por 10 minutos.

2. Despressurização de todas as unidades pela abertura de uma válvula em um recipiente.

3. Colocação de todas as unidades em cima de uma bancada e manutenção por 3 horas.

4. Após o período de manutenção de 3 horas, teste das amostras para percentual de hemólise e conteúdo de ATP.

[0053] Como ilustrado na Fig. 1, o percentual de hemólise das amostras de concentrado de eritrócito que foram tratadas com gás xenônio é menor que nas amostras que não foram tratadas com o gás xenônio. Em ambas as amostras, o percentual de hemólise das amostras de concentrado de eritrócito que foram tratadas com gás xenônio é significantemente menor que a das amostras não tratadas. As quantidades reduzidas de hemólise também estão presentes no recipiente que incluem plastificante de DEHP. Além disso, quantidades menores de hemólise foram alcançadas pelo uso de gás xenônio sem o plastificante de DEHP quando comparado com um recipiente que incluiu plastificante de DEHP sem gás xenônio. A adição de plastificante de DEHP a um recipiente que incluía gás xenônio resultou em uma redução adicional de hemólise.

[0054] Com referência agora à Fig. 2, ambas as amostras indicaram um maior conteúdo de ATP no concentrado de eritrócito quando tratadas com gás xenônio.

[0055] Será visto, logo, que os objetivos apresentados acima, den

24/24 tre aqueles feitos aparentes da descrição precedente, foram eficientemente alcançados, e já que certas mudanças podem ser feitas nas construções apresentadas sem partir do espírito e escopo da invenção, é intencionado que todos os assuntos contidos na descrição acima e mostrados nas figuras acompanhantes devem ser interpretados como ilustrativos e sem sentido limitante. A invenção foi descrita com referência a modalidades preferidas e alternativas. Modificações e alterações se tornarão aparentes àqueles versados na técnica sob leitura e entendimento da discussão detalhada da invenção fornecida aqui. Esta invenção tem a intenção de incluir todas tais modificações e alterações até agora no momento que elas adentrem no escopo da presente invenção. Também deve ser entendido que as seguintes reivindicações têm a intenção de cobrir todas as características genéricas e específicas da invenção descritas aqui e todas as declarações do escopo da invenção, que, por questões linguísticas, podem ser ditas como abrangidas nesta. A invenção foi descrita com referência às modalidades preferidas. Estas e outras modificações das modalidades preferidas, bem como de outras modalidades da invenção serão óbvias da divulgação desta, onde o assunto descritivo anterior deve ser interpretado meramente como ilustrativo da invenção e não como uma limitação. É intencionado incluir todas as modificações e alterações até agora dentro do escopo das reivindicações anexadas.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método de preservação de eritrócitos, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:

a. obter um concentrado de eritrócito;

b. submeter o referido concentrado de eritrócito a um recipiente, em que o referido recipiente é permeável a gás;

c. remover o oxigênio do concentrado de eritrócitos enquanto o referido concentrado de eritrócitos está no referido recipiente, em que o referido oxigênio é removido do referido concentrado de eritrócitos e do referido recipiente por difusão do referido oxigênio através do referido recipiente;

d. submeter o concentrado de eritrócitos enquanto no referido recipiente a um sistema de gás, fazendo com que o referido sistema de gás se difunda através do referido recipiente para o referido concentrado de eritrócitos no referido recipiente, em que o referido sistema de gás inclui xenônio a uma concentração superior a 50% em volume e inclui oxigênio a uma concentração inferior a 5% em volume; e

e. manter o concentrado de eritrócito submetido ao sistema gasoso a uma temperatura que está acima do ponto de congelamento do concentrado de eritrócito e até uma temperatura de cerca de 30°C.
2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o sistema gasoso inclui de 65% a 100% em volume de xenônio e de 0 a 35% em volume de pelo menos um gás de lastro, em que o referido gás de lastro inclui um ou mais gases selecionados dentre o grupo que consiste em nitrogênio, gás nobre diferente do xenônio, e dióxido de carbono.
3. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que inclui ainda a etapa de remoção de 70 a 100% do oxigênio do concentrado de eritrócitos antes da adição do referido

Petição 870190065283, de 11/07/2019, pág. 8/13

2/3 sistema gasoso ao referido concentrado de eritrócitos.
4. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a referida etapa de remoção de oxigênio ocorre em um ambiente a vácuo.
5. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o referido sistema gasoso é adicionado ao referido concentrado de eritrócitos a uma pressão de cerca de 101 a 1013 KPa (1 a 10 atm).
6. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o referido sistema gasoso é adicionado ao referido concentrado de eritrócitos a uma pressão maior do que 101 KPa (1 atm).
7. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a referida etapa de manutenção é de até 42 dias.
8. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o referido recipiente está isento de plastificante de DEHP.
9. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que inclui ainda a etapa de agitação do referido concentrado de eritrócitos em um recipiente a) antes da adição do referido sistema gasoso ao referido concentrado de eritrócitos, b) durante a referida adição do referido sistema gasoso ao referido concentrado de eritrócitos, c) após a referida adição do referido sistema gasoso ao referido concentrado de eritrócitos, e combinações dos mesmos.
10. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a temperatura do referido concentrado de eritrócitos, quando o referido sistema gasoso é introduzido no referido concentrado de eritrócitos, está acima do ponto de

Petição 870190065283, de 11/07/2019, pág. 9/13

3/3 congelamento do concentrado de eritrócitos e não é maior do que cerca de 23°C.
11. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que inclui ainda a etapa de resfriamento do referido concentrado de eritrócitos após a adição do referido sistema gasoso a uma temperatura acima do ponto de congelamento do concentrado de eritrócito e não maior do que cerca de 6°C.
12. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o referido recipiente é posicionado em um vaso hermeticamente selado equipado com uma tampa que seja permeável à referida mistura gasosa, em que o referido vaso não é permeável à referida mistura gasosa.
13. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o referido concentrado de eritrócitos no referido recipiente é mantido na referida mistura gasosa e sob uma pressão acima de 101 KPa (1 atm) sem o bombeamento adicional da referida mistura gasosa enquanto o referido recipiente é posicionado na referida câmara hermeticamente selada, e o resfriamento do concentrado de eritrócitos é iniciado a partir do momento da estabilização da pressão da mistura gasosa na referida câmara hermeticamente selada, com a referida estabilização resultando da saturação do concentrado de eritrócitos da referida mistura gasosa.