KR102101684B1 - 적혈구 보존 방법 - Google Patents

Abstract

적혈구 농축액을 얻는 단계를 포함하는 적혈구의 보존 방법으로서, 상기 적혈구 농축액에 65~100체적%, 및 선택적으로 하나 이상의 밸러스트 가스 0~35체적%를 포함하는 가스계에 적용하는 단계, 및 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 최대 약 30℃인 온도에서 상기 가스계가 적용된 상기 적혈구 농축액을 유지하는 단계를 포함하는 적혈구의 보존 방법.

Description

적혈구 보존 방법{ERYTHROCYTE PRESERVATION METHOD}

본 발명은 2012년 11월 30일자로 제출된 미국 가출원 제61/731,944호에 대한 우선권을 주장하며, 본 명세서는 그 전체를 참고자료로서 포함한다.

본 발명은 혈액 보존 방법에 관한 것이고, 구체적으로는 공혈자의 혈액, 즉 농축 적혈구(적혈구 농축액)의 보존에 관한 것이다.

널리 이용되는 적혈구 보존 방법은 백혈구의 함유량을 감소시킨 농축 적혈구(적혈구 농축액)의 형태로 공혈자로부터 적혈구를 얻는 방법(예를 들면, 성분채집 방법을 이용하거나 기증된 전혈로부터의 분리에 의해), 이어서 얻어진 적혈구 농축액을 42일 동안 1~6℃의 범위 내의 온도에서 플라스틱 백에 저장하는 방법을 포함한다. 예를 들면, 현재 이 방법은 Haemonetics Corp(Baintree, MA, USA) 및 Terumo BCT, Inc.(Lakewood, CO, USA)제의 성분채집 장치 및 가소제 비스(2-에틸헥실)프탈레이트(DEHP, CAS No.117-81-7)를 갖는 폴리비닐클로라이드로 제조되는 혈액 성분용 백의 어셈블리를 이용하여 실시된다. 단지 RBC의 약 30%만이 이 방법을 이용하여 채취되고, 대부분은 기증된 전혈로부터 분리된다. 혈소판의 경우에는 반대이다.

수혈용 적혈구(RBC)는 공혈자로부터 CPD 또는 CP2D 항응고 보존 용액으로 채취된다. 상기 RBC는 원심분리 방법에 의해 분리되고, 장기간 저장용 용액이 첨가된다(예를 들면, AS-3). 백혈구는 여과에 의해 제거되고, 상기 RBC/AS-3은 수혈 전에 최대 42일 동안 1~6℃에서 DEHP 가소화 PVC 백에 저장된다. 상기 DEHP 가소제는 RBC에 대하여 저장 과정 동안에 용혈의 양을 감소시키는 중요한 보호 효과를 갖는 것이 알려져 있다. 상기 RBC 수혈과 관련된 잠재적인 부작용을 최소화할 뿐만 아니라 수혈자에게 유리한 최고의 치료법을 제공하기 위해, 이 저장 용혈 및 기타 저장 손상을 최소화하는 것이 바람직하다. 상기 DEHP 가소제(이러한 백을 제조하기 위해 사용됨)는 상기 RBC의 저장 과정에서 적혈구 농축액에 부분적으로 용해되고, 이것에 의해 백 물질로부터 확산되며, 적혈구에 대해 추가적인 보존 작용을 발휘한다. 상기 DEHP 가소제의 존재는 상기 적혈구 농축액의 저장시에 용해되는 적혈구의 수를 감소시키는 것으로 나타났다(Dumont Larry J. 등. Exploratory in vitro study of red blood cell storage containers formulated with an alternative plasticizer. Transfusion, 2012 July 52(7):1439-1445).

상기 적혈구 농축액 중의 DEHP 가소제는 독성 성분으로 분해되고, 그 중 하나는-즉, 모노-에틸헥실 프탈레이트(MEHP)이다. 따라서, DEHP 가소제를 함유하는 물질로 제조되는 백에 있어서의 적혈구의 보존의 단점은 적혈구 농축액 유닛의 수혈 후에 환자에 대한 중독의 위험이다. 상술의 부정적 결과는 다중 수혈의 경우, 매우 유의적으로 증가될 수 있다. 이러한 실정을 고려하면, DEHP 가소제를 함유하지 않는 물질로 이루어지는 백에 적혈구 농축액을 저장하는 것이 바람직하다. 이론 상 역효과는 특정 고위험군 환자 집단에 영향을 미치기 때문에 RBC 저장 백의 성분으로서 DEHP의 대체제를 찾는 것이 바람직하다. 그러나, 이 경우에는 보존 효과(DEHP 가소제의 존재에 의해 야기됨)가 없으며, 따라서 저장시에 용해되는 적혈구의 수가 증가된다.

2010년 1월 14일자로 공개된 US 2010/0009334에 기재된 혈소판 보존 방법이 공지되어 있다. 이 방법은 개체로부터 얻어진 혈액에서 혈소판 농축액을 얻는 방법, 상기 혈소판 혈장을 3.5~5atm의 압력하에서 크세논 65~100%를 함유하는 가스 매체 중에 유지하는 방법, 이어서 대략 1~6℃의 범위 내의 온도까지 혈소판 농축액을 냉각시키는 방법, 및 상술의 온도 및 가스 매체의 압력의 조건하에서 저장하는 방법을 포함한다. 혈소판은 성분채집 방법에 의해 얻어졌다. 이 방법은 저장 기간에 혈소판의 증가를 야기한다.

그러나, 실제 시험에서 나타내는 바와 같이, 다른 혈구(예를 들면, 적혈구)를 보존하기 위해 이 방법을 적용하는 것은 다수의 단점을 특징으로 한다. 우선, 이 방법은 크세논 이외에 산소 또는 대기 중의 공기를 포함하는 가스 혼합물의 사용을 가정한다. 그러나, 적혈구의 저장시에 산소의 존재는 적혈구 용혈(용혈)을 자극한다. 저장시의 적혈구의 용혈은 최종 생성물에 대한 불만족스러운 품질-즉, 적혈구 농축액 의 완전한 세포수의 감소로 이어지고, 이것은 환자에게 수혈된 후의 적혈구 농축액의 효율성을 약화시킨다. 상기 수혈된 RBC에서의 높은 용혈로 인해 수혈의 역효과는 보다 중요하다. 미합중국에서는 적혈구 농축액에 대하여 1% 초과의 용혈을 경험하는 경우, 상기 적혈구 농축액은 수혈용으로 부적합한 것으로 간주된다. 다른 국가에서는 적혈구 농축액에 대하여 수혈에 적합한 용혈의 양은 상기 적혈구 농축액에 대해 0.8%정도로 낮아야 한다.

현재의 기술 실정의 관점에서, 적혈구 품질의 저하를 고려하지 않고 42일 이상의 기간 동안 적혈구 농축액 저장을 보장하고, DEHP 가소제를 사용하지 않고 제조되는 플라스틱 백의 사용이 가능한 적혈구 농축액의 보존 방법을 개발할 필요가 있다.

본 발명은 적혈구 품질의 저하를 고려하지 않고 42일 이상의 기간 동안 적혈구 농축액의 저장을 보장하고, DEHP 가소제를 사용하지 않고 제조되는 플라스틱 백의 사용이 가능한 개선된 적혈구 농축액의 보존 방법에 관한 것이다.

본 발명은 혈액 보존 방법에 관한 것이고, 구체적으로는 농축 적혈구(적혈구 농축액)의 보존에 관한 것이다. 본 발명의 하나의 비제한적 실시형태에 있어서, 적혈구 농축액(미리 전혈로부터 얻어져 백에 넣어짐)이 산소 가스를 포함하지 않는 가스계에 유지되는 적혈구 보존 방법이 제공된다. 이 실시형태의 하나의 비제한적 측면에 있어서, 상기 가스계는 대기 중에 자연적으로 존재하는 크세논 함유량을 포함한다. 이 실시형태의 다른 비제한적 측면에 있어서, 상기 가스계는 약 10체적% 초과의 크세논 함유량을 포함한다. 이 실시형태의 또 다른 비제한적 측면에 있어서, 상기 가스계는 약 50체적% 초과의 크세논 함유량을 포함한다. 이 실시형태의 또 다른 비제한적 측면에 있어서, 상기 가스계는 약 65~약 100체적%의 크세논 함유량을 포함한다. 크세논(Xe)은 대기 중의 매우 적은 비율(1/1,000% 미만)의 통상의 성분인 비활성, 불활성 원소 가스이다. 그것은 정상적인 생물학적 조건하에서 비반응성 또는 "불활성"이다. 크세논은 체내에서 이용 또는 생성되지 않는 쉽게 확산될 수 있는 가스이다. 상기 크세논은 선택적으로 하나 이상의 밸러스트 가스(예를 들면, 질소, 비활성 가스, 이산화탄소)와 0~35체적%의 함유량으로 조합될 수 있다. 상기 크세논 가스, 또는 크세논 가스와 밸러스트 가스 혼합물과 함께 포함되어 있는 산소의 양은 일반적으로 5체적% 미만이고, 통상적으로는 2체적% 미만이고, 보다 통상적으로는 1체적% 미만이고, 더욱 통상적으로는 0.5체적% 미만이고, 특히 통상적으로는 0.1체적% 미만이고, 가장 통상적으로는 약 0체적%이다. 상기 가스계의 크세논의 양은 65~100체적%(예를 들면, 65%, 65.1%, 65.2%....99.8%, 99.9%, 100%)의 임의의 양일 수 있고, 이러한 값 내에 임의의 범위를 포함할 수 있다. 마찬가지로, 상기 가스계에 하나 이상의 밸러스트 가스가 포함되어 있는 경우, 상기 가스계의 밸러스트 가스의 양은 0~35체적%(예를 들면, 0%, 0.1%, 0.2%....34.8%, 34.9%, 35%)의 임의의 양일 수 있고, 이러한 값 내에서 임의의 범위를 포함할 수 있다. 밸러스트 가스가 사용되는 경우, 상기 밸러스트 가스는 일반적으로 질소 및/또는 아르곤이지만, 상기 적혈구 농축액에는 다른 불활성 가스가 사용될 수 있다. 상기 가스계는 용기 중의 적혈구 농축액에 도입되고, 상기 가스계로 상기 적혈구 농축액을 부분적으로 또는 전체적으로 포화시킨다. 일반적으로, 상기 적혈구 농축액은 적어도 약 75%가 상기 가스계로 포화되고, 통상적으로는 적어도 약 80%가 상기 가스계로 포화되고, 보다 통상적으로는 적어도 약 85%가 상기 가스계로 포화되고, 더욱 통상적으로는 적어도 약 90%가 상기 가스계로 포화되고, 특히 통상적으로는 적어도 약 95%가 상기 가스계로 포화되고, 가장 통상적으로는 적어도 약 98%가 상기 가스계로 포화된다. 하나의 비제한적 배열에 있어서, 상기 용기의 적어도 일부는 가스 혼합물이 투과할 수 있어 상기 가스 혼합물이 용기를 통하여 확산에 의해 용기로 도입 및/또는 용기로부터 제거될 수 있지만, 이것이 필요한 것은 아니다. 하나의 비제한적 배열에 있어서, 상기 용기는 DEHP 가소제를 포함하여도 좋고 포함하지 않아도 좋은 폴리비닐클로라이드로 이루어지는 백의 형태이다. 상기 용기의 크기는 비제한적이다. 하나의 비제한적 크기는 적어도 적혈구 농축액 200ml을 함유할 수 있는 용기이다. 또 다른 비제한적 구성에 있어서, 상기 용기는 가스 혼합물이 투과할 수 있는 커버가 구비된 밀폐용기에 위치된다. 상기 밀폐용기는 상기 가스 혼합물에 대해 투과성이어도 좋고 불투과성이어도 좋다. 상기 용기 중의 적혈구 농축액은 상기 용기가 밀폐용기에 위치되는 동안에 가스 혼합물의 추가적인 펌핑없이 선택적으로 가스 혼합물의 존재하 및 약 1atm 이상의 압력하에서 유지될 수 있다. 상기 밀폐용기에서의 적혈구 농축액의 선택적 냉각 단계는 밀폐용기에서 가스 혼합물이 안정화된 시점으로부터 개시될 수 있고, 상기 안정화는 상기 적혈구 농축액과 가스 혼합물의 포화로부터 야기된다.

본 발명의 하나의 비제한적 측면에 있어서, 상기 가스계가 상기 적혈구 농축액에 도입될 때의 상기 가스계의 압력은 일반적으로 약 4atm 이하이다. 일반적으로, 상기 가스계의 압력은 적어도 약 1atm이다. 이 발명의 목적을 위해 대기 압력은 1atm(760torr)이다. 일반적으로, 상기 가스계의 압력은 약 10atm 미만이다. 본 발명의 하나의 비제한적 실시형태에 있어서, 상기 적혈구 농축액에 도입될 때의 상기 가스계의 압력은 약 1~4atm(예를 들면, 1atm, 1.1atm, 1.2atm....3.8atm, 3.9atm, 4atm)이고, 이러한 값 내의 임의의 범위를 포함할 수 있다. 본 발명의 하나의 비제한적 측면에 있어서, 상기 적혈구 농축액에 도입될 때의 상기 가스계의 압력은 대기 압력(예를 들면, 1atm)보다 높다.

본 발명의 또 다른 및/또는 대안적인 비제한적 측면에 있어서, 상기 가스계는 상기 적혈구 농축액이 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 최대 약 30℃의 온도(예를 들면, 0.01℃, 0.02℃....29.98℃, 29.99℃, 30℃)일 때에 적혈구 농축액에 도입될 수 있다. 상기 용기 중의 적혈구 농축액의 온도는 상기 가스계가 상기 적혈구 농축액에 도입되는 동안에 일정한 온도로 유지되거나 가변적(예를 들면, 감소, 증가 등)일 수 있다. 하나의 비제한적 실시형태에 있어서, 상기 가스계는 상기 적혈구 농축액이 최대 약 25℃의 온도일 때에 적혈구 농축액에 도입된다. 다른 비제한적 실시형태에 있어서, 상기 가스계는 상기 적혈구 농축액이 최대 약 23℃의 온도일 때에 상기 적혈구 농축액에 도입될 수 있다. 다른 비제한적 실시형태에 있어서, 상기 가스계는 상기 적혈구 농축액이 약 6~23℃의 온도일 때에 상기 적혈구 농축액에 도입된다.

본 발명의 또 다른 및/또는 대안적인 비제한적 측면에 있어서, 상기 가스계는 일반적으로 혈액이 인간 또는 다른 포유류로부터 제거된 후에 약 98시간 내(예를 들면, 0.01시간, 0.02시간....97.98시간, 97.99시간, 98시간)에 적혈구 농축액에 도입된다. 하나의 비제한적 실시형태에 있어서, 상기 가스계는 혈액이 인간 또는 다른 포유류로부터 제거된 후에 약 72시간 내에 적혈구 농축액에 도입된다. 다른 비제한적 실시형태에 있어서, 가스계는 혈액이 인간 또는 다른 포유류로부터 제거된 후에 약 48시간 내에 적혈구 농축액에 도입된다. 다른 비제한적 실시형태에 있어서, 가스계는 혈액이 인간 또는 기타 포유류로부터 제거된 후에 약 24시간 내에 적혈구 농축액에 도입된다.

본 발명의 또 다른 비제한적 측면에 있어서, 상기 산소는 상기 가스계가 상기 적혈구 농축액에 도입되기 전에 상기 적혈구 농축액을 포함하는 용기로부터 제거 또는 퍼징되지만, 이것이 필요한 것은 아니다. 일반적으로, 상기 적혈구 농축액은 충분한 시간의 기간(예를 들면, 0.1초, 0.2초, 0.3초...599.8초, 599.9초, 600초) 동안 진공 상태(예를 들면, 0atm, 0.01atm, 0.02atm...0.97atm, 0.98atm, 0.99atm)에 노출되어 상기 산소가 상기 적혈구 농축액을 포함하는 용기로부터 적어도 약 75% 제거되고, 통상적으로는 상기 산소가 상기 적혈구 농축액을 포함하는 용기로부터 적어도 약 80% 제거되고, 보다 통상적으로는 상기 산소가 상기 적혈구 농축액을 포함하는 용기로부터 적어도 약 85% 제거되고, 더욱 통상적으로는 상기 산소가 상기 적혈구 농축액을 포함하는 용기로부터 적어도 약 90% 제거되고, 특히 통상적으로는 상기 산소가 상기 적혈구 농축액을 포함하는 용기로부터 적어도 약 95% 제거된다. 이와 같이, 상기 가스계가 적혈구 농축액에 도입되기 전에 상기 산소의 75~100%(예를 들면, 75%, 75.1%, 75.2%....99.8%, 99.9%, 100%)의 어느 것이나 적혈구 농축액을 포함하는 용기로부터 제거된다. 상기 적혈구 농축액에 진공을 적용하는 시간 기간 및 진공의 정도는 비제한적이다. 또한, 적혈구 농축액을 포함하는 용기로부터 산소를 제거 또는 퍼징하는 방법은 적혈구 농축액에 용해되는 산소의 제거를 야기한다.

본 발명의 또 다른 및/또는 대안적인 비제한적 측면에 있어서, 상기 가스계가 상기 적혈구 농축액에 도입되면, 상기 적혈구 농축액은 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상인 냉장 온도(즉, 대기 온도 미만)로 유지된다. 일반적으로, 상기 냉장 온도는 약 25℃ 이하이고, 통상적으로는 약 20℃ 이하이고, 보다 통상적으로는 약 15℃ 이하이고, 더욱 통상적으로는 약 10℃ 이하이고, 특히 통상적으로는 약 6℃ 이하이다. 하나의 비제한적 실시형태에 있어서, 상기 적혈구 농축액은 적어도 약 42일 동안 이러한 냉장 온도에서 유지될 수 있고, 그 결과 약 1% 이하의 적혈구 농축액의 용혈을 야기하고, 일반적으로는 약 0.8% 이하의 적혈구 농축액의 용혈을 야기하고, 통상적으로는 약 0.7% 이하의 적혈구 농축액의 용혈을 야기하고, 보다 통상적으로는 약 0.6% 이하의 적혈구 농축액의 용혈을 야기한다.

본 발명의 다른 및/또는 대안적인 비제한적 측면에 있어서, 상기 가스계는 상기 적혈구 농축액을 냉장시키기 전에 1회 초과하여 적혈구 농축액에 선택적으로 도입될 수 있다. 상기 가스계가 상기 적혈구 농축액을 냉장시키기 전에 1회 초과하여 적혈구 농축액에 도입되는 경우, 상기 적혈구 농축액은 상기 가스계로 가압되고, 상기 가스계의 퍼징 후, 이어서 가스계로 재가압된다. 상기 가압 및 퍼징 단계의 수는 비제한적이다. 일반적으로, 상기 적혈구 농축액은 5회 초과, 통상적으로는 4회 이하, 보다 통상적으로는 3회 이하, 더욱 통상적으로는 2회 이하 가압, 퍼징 및 이어서 재가압되지 않는다. 상기 적혈구 농축액으로부터 가스계의 퍼징은 진공 하에서 적용될 수 있지만, 이것이 필요한 것은 아니다. 상기 가스계로 상기 적혈구 농축액을 가압하고, 상기 가스계의 퍼징 후, 이어서 상기 가스계로 재가압하는 것은, 먼저 상기 가스계를 상기 적혈구 농축액에 도입하기 전에 최초로 적혈구 농축액을 공기 퍼징시킨 후에 상기 적혈구 농축액에 잔존하는 임의의 산소를 더 제거하기 위해 이용된다. 상기 적혈구로부터의 가스계의 퍼징은 상기 적혈구 농축액으로부터의 산소의 제거와 마찬가지의 파라미터하에서 발생될 수 있지만, 이것이 필요한 것은 아니다. 상기 적혈구 농축액은 상기 적혈구 농축액으로부터 산소의 제거를 용이하게 하도록 선택적으로 교반되거나, 아니면 진탕될 수 있다.

본 발명의 또 다른 및/또는 대안적인 비제한적 측면에 있어서, 상기 가스계로 가압된 후 및 상기 적혈구 농축액의 냉장 전 및/또는 냉장시에, 상기 적혈구 농축액은 상기 적혈구 농축액과 가스계의 혼합을 용이하게 하기 위해 선택적으로 교반되거나 아니면 진탕될 수 있다. 상기 교반 시간은 약 0.002~24시간(예를 들면, 0.0021시간, 0.0022시간...23.99시간, 24시간)일 수 있다. 하나의 비제한적 실시형태에 있어서, 상기 교반 시간은 약 10시간 이하이고, 통상적으로는 약 5시간 이하이고, 보다 통상적으로는 약 3.5시간 이하이다.

본 발명의 또 다른 및/또는 대안적인 비제한적 측면에 있어서, 상기 적혈구 농축액의 냉장 기간이 종료된 후 및 상기 적혈구 농축액이 상기 가스계로 감압되기 전 또는 후에, 상기 적혈구 농축액은 선택적으로 교반될 수 있다. 하나의 비제한적 실시형태에 있어서, 상기 가스계의 적혈구 농축액을 감압하기 전에 상기 적혈구 농축액은 교반된다. 상기 교반 시간은 약 0.002~10시간(예를 들면, 0.0021시간, 0.0022시간...9.99시간, 9시간)일 수 있다. 하나의 비제한적 실시형태에 있어서, 교반 시간은 약 2시간 이하이고, 통상적으로는 약 1시간 이하이고, 보다 통상적으로는 약 0.5시간 이하이고, 더욱 통상적으로는 약 0.2시간 이하이다.

본 발명의 또 다른 및/또는 대안적인 비제한적 측면에 있어서, 상기 적혈구 농축액이 상기 가스계로 감압된 후, 선택적으로 교반하고, 상기 적혈구 농축액은 냉장 온도로부터 대기 온도(예를 들면, 25~27℃)까지 선택적으로 가온되도록 허용된다. 하나의 비제한적 실시형태에 있어서, 상기 적혈구 농축액이 가온되도록 허용되는 시간 기간은 약 0.002~10시간(예를 들면, 0.0021시간, 0.0022시간...9.99시간, 9시간)일 수 있다. 이해될 수 있는 바와 같이, 더욱 긴 가온 시간이 이용될 수 있다.

본 발명의 다른 및/또는 대안적인 비제한적 측면에 있어서, 상기 적혈구 농축액이 가스계로 감압된 후, 선택적으로 교반되고, 상기 적혈구 농축액은 약 72시간 내에, 통상적으로는 약 36시간 내에, 보다 통상적으로는 약 24시간 내에, 더욱 통상적으로는 약 12시간 내에 수혈에 이용된다.

본 발명의 또 다른 비제한적 측면에 있어서, 상기 적혈구 농축액용으로 사용되는 용기는 DEHP 가소제를 포함하지 않는다. 본 발명의 방법은 DEHP 가소제를 포함하지 않는 용기 중에서 적어도 약 42일 동안 약 1% 이하의 적혈구 농축액의 용혈로 적혈구 농축액을 보존할 수 있다. 이러한 방법은 상기 적혈구 농축액에 대해 42시간의 보존 시간을 얻기 위해 DEHP 가소제의 보존 효과를 필요로 하는 이전의 보존 방법보다 상당히 발전적이다. 본 발명의 방법은 적혈구 농축액을 보존하는 기술 분야에서 이전의 한계를 극복한다.

본 발명의 하나의 비제한적 목적은 적혈구 농축액을 보존하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 및/또는 대안적인 비제한적 목적은 DEHP 가소제를 포함하여 제조된 용기를 사용하지 않고 적혈구 농축액을 보존하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 및/또는 대안적인 비제한적 목적은 크세논 가스를 포함하는 가스계를 사용하여 적혈구 농축액을 보존하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 및/또는 대안적인 비제한적 목적은 크세논 가스를 포함하는 가스계를 사용하여 적혈구 농축액을 보존하고, 상기 적혈구 농축액은 부분적으로 또는 전체적으로 산소로 퍼징되는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 및/또는 대안적인 비제한적 목적은 적혈구 품질의 상당한 저하없이 42일 이하의 기간 동안 적혈구 농축액의 저장을 보장하고, DEHP 가소제를 이용하지 않고 제조되는 플라스틱 백의 사용을 가능하게 하는 적혈구 농축액의 보존 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 및/또는 대체의 비제한적 목적은 상기 적혈구 농축액의 용혈을 감소시키는 적혈구 농축액의 보존 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 및/또는 대체의 비제한적 목적은 상기 적혈구 농축액의 아데노신 삼인산염(ATP) 함유량을 개선시킨 적혈구 농축액의 보존 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 및/또는 대체의 비제한적 목적은 적혈구 농축액을 갖는 용기를 포함하는 적혈구를 보존하도록 설계되고, 상기 용기의 적혈구 농축액은 대기 온도 미만의 온도이고, 상기 적혈구 농축액은 크세논 가스를 포함하는 가스계로 적어도 부분적으로 포화되는 적혈구 용기 시스템을 제공하는 것이다.

본 발명의 이들 및 다른 목적, 특징 및 장점은 첨부된 도면에 도시된 바와 같이, 그것의 바람직한 실시형태의 이하의 상세한 설명에 비추어 명백해질 것이다.

도 1은 본 발명의 가스계에 노출 및 미노출된 경우, 42일 후의 적혈구 농축액의 백의 용혈도를 도시한 그래프이다.
도 2는 본 발명의 가스계에 노출 및 미노출된 경우, 42일 후의 적혈구 농축액의 백의 ATP 함유량을 도시한 그래프이다.

본 발명의 설명은 도면을 참조하여 실시형태를 도시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명을 제한하기 위한 것은 아니고, 본 발명은 개선된 적혈구 농축액의 보존 방법에 관한 것이다. 상기 개선된 적혈구 농축액의 보존 방법은 DEHP 가소제를 사용하지 않고 제조되는 용기의 사용을 동반 또는 동반하지 않을 수 있다. 상기 방법은 적혈구 농축액의 저장시에 적혈구 농축액에 도입되는 가스계의 사용을 포함한다. 또한, 본 발명은 적혈구 농축액을 포함하는 용기를 포함하는 적혈구를 보존하도록 설계된 적혈구 용기 시스템에 관한 것이고, 상기 적혈구 농축액은 적어도 부분적으로 가스계로 포화되고, 상기 가스계는 대기 중에서 자연적으로 발생되는 크세논 가스보다 많은 농도로 크세논 가스를 포함한다.

본 발명에 따른 몇몇 비제한적 방법을 다음과 같이 명시한다.

방법 A

1. 용기에 적혈구 농축액을 얻는 방법,

2. 상기 용기 중의 적혈구 농축액을 대기 중에서 자연적으로 발생되는 크세논 가스보다 많은 농도로 크세논 가스를 포함하는 가스계에 적용하는 방법, 및

3. 상기 가스계가 적용된 적혈구 농축액을 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 최대 약 30℃인 온도에서 유지하는 방법.

이해될 수 있는 바와 같이, 상기 RBC는 상기 RBC가 용기로 삽입시 및/또는 삽입된 후에 크세논 가스에 노출될 수 있다.

방법 B

1. 용기에 적혈구 농축액을 얻는 방법,

2. 상기 용기 중의 적혈구 농축액을 크세논 가스의 농도 65~100체적%, 선택적으로 하나 이상의 밸러스트 가스 0~35체적%를 포함하는 가스계에 적용하는 방법, 및

3. 상기 가스계가 적용된 적혈구 농축액을 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 최대 약 30℃인 온도에서 유지하는 방법.

방법 C

1. 용기에 적혈구 농축액을 얻는 방법,

2. 상기 적혈구 농축액을 포함하는 용기 중의 적혈구 농축액으로부터 산소 70~100%를 제거하는 방법,

3. 상기 산소를 제거하는 단계 후, 상기 용기 중의 적혈구 농축액을 대기 중에서 자연적으로 발생되는 크세논 가스보다 많은 농도로 크세논 가스를 포함하는 가스계에 적용하는 방법, 및

4. 상기 가스계가 적용된 적혈구 농축액을 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 최대 약 30℃인 온도에서 유지하는 방법.

방법 D

1. 용기에 적혈구 농축액을 얻는 방법,

2. 상기 적혈구 농축액을 포함하는 용기 중의 적혈구 농축액으로부터 산소 70~100%를 제거하는 방법,

3. 상기 용기 중의 적혈구 농축액을 크세논 가스의 농도 65~100체적%, 선택적으로 하나 이상의 밸러스트 가스 0~35체적%를 포함하는 가스계에 적용하는 방법, 및

4. 상기 가스계가 적용된 적혈구 농축액을 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 최대 약 30℃인 온도에서 유지하는 방법.

방법 A~방법 D에 있어서, 용기 중의 적혈구 농축액에 도입될 때의 가스계의 압력은 일반적으로 6atm 미만이고, 통상적으로는 1~4atm이고, 보다 통상적으로는 1~3atm이고, 더욱 통상적으로는 1~2atm이다. 방법 A~방법 D에 있어서, 상기 가스계가 적혈구 농축액에 도입될 때의 용기 중의 적혈구 농축액의 온도는 일반적으로 약 25℃ 이하이고, 통상적으로는 약 23℃ 이하이다. 방법 A~방법 D에 있어서, 용기 중의 적혈구 농축액의 온도는 상기 가스계가 용기 중의 적혈구 농축액에 도입되는 동안에 일정한 온도로 유지되거나 또는 변경(예를 들면, 감소 등)될 수 있다. 방법 A~방법 D에 있어서, 상기 적혈구 농축액을 포함하는 용기는 상기 가스계가 용기 중의 적혈구 농축액에 도입되기 전, 도입시 및/또는 도입 후에 선택적으로 교반되거나 진탕될 수 있다. 방법 A~방법 D에 있어서, 상기 적혈구 농축액을 포함하는 용기는 상기 가스계가 용기 중의 적혈구 농축액에 도입된 후에 6℃ 이하이고 적혈구 농축액의 빙점 초과의 온도까지 냉각될 수 있다. 방법 A~방법 D에 있어서, 상기 용기는 선택적으로 DEHP 가소제가 없을 수 있다.

본 발명의 보다 구체적인 비제한적 방법은 다음과 같다.

방법 E

1. 용기에 적혈구 농축액을 얻는 방법,

2. 진공 상태의 용기 중의 적혈구 농축액으로부터 산소 70~100%를 제거하는 방법,

3. 약 23℃ 이하의 온도 및 1atm 초과 약 4atm의 압력에서의 산소 제거 후, 상기 용기 중의 적혈구 농축액을 크세논 65~100체적%, 선택적으로 하나 이상의 밸러스트 가스 0~35체적%를 포함하는 가스계에 적용하는 방법, 및

4. 상기 가스계가 적용된 적혈구 농축액을 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 최대 약 6℃인 온도에서 유지하는 방법.

방법 F

1. 용기에 적혈구 농축액을 얻는 방법,

2. 진공 상태의 용기 중의 적혈구 농축액으로부터 산소 70~100%를 제거하는 방법,

3. 약 18~23℃의 온도 및 1.01~2atm의 압력에서의 산소 제거 단계 후, 상기 용기 중의 적혈구 농축액을 크세논 65~100체적%, 선택적으로 하나 이상의 밸러스트 가스 0~35체적%를 포함하는 가스계에 적용하는 방법,

4. 상기 용기 중의 적혈구 농축액을 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 최대 약 6℃인 온도까지 냉각하는 방법, 및

5. 상기 가스계가 적용된 적혈구 농축액을 최대 42일 동안 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 최대 약 6℃의 온도에서 유지하는 방법.

방법 G

1. DEHP 가소제를 포함하지 않는 용기에 적혈구 농축액을 얻는 방법,

2. 진공 상태의 용기 중의 적혈구 농축액으로부터 산소 70~100%를 제거하는 방법,

3. 약 18~23℃의 온도 및 1.01atm~2atm의 압력에서의 산소 제거 후, 상기 용기 중의 적혈구 농축액에 크세논 65~100체적%, 선택적으로 하나 이상의 밸러스트 가스 0~35체적%를 포함하는 가스계에 적용하는 방법,

4. 상기 가스계가 용기 중의 적혈구 농축액에 도입되기 전, 도입시, 및/또는 도입 후에 상기 용기 중의 적혈구 농축액을 교반 또는 진탕하는 방법,

5. 상기 용기 중의 적혈구 농축액을 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 최대 약 6℃인 온도까지 냉각하는 방법, 및

6. 상기 가스계가 적용된 적혈구 농축액을 최대 42일 동안 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 최대 약 6℃인 온도에서 유지하는 방법.

방법 E~방법 G에 있어서, 용기 중의 적혈구 농축액에 도입될 때의 가스계의 압력은 일반적으로 6atm 미만이고, 통상적으로는 1~4atm이고, 보다 통상적으로는 1~3atm이고, 더욱 통상적으로는 1~2atm이다. 방법 E~방법 G에 있어서, 상기 가스계가 적혈구 농축액에 도입될 때의 용기 중의 적혈구 농축액의 온도는 일반적으로 약 25℃ 이하이고, 통상적으로는 약 23℃ 이하이다. 방법 E~방법 G에 있어서, 상기 가스계가 용기 중의 적혈구 농축액에 도입되는 동안에 용기 중의 적혈구 농축액의 온도는 일정한 온도로 유지되거나 변경(예를 들면, 감소 등)될 수 있다. 방법 E~방법 G에 있어서, 상기 가스계가 용기 중의 적혈구 농축액에 도입되기 전, 도입시 및/또는 도입 후에, 상기 적혈구 농축액을 포함하는 용기는 선택적으로 교반되거나 진탕될 수 있다. 방법 E~방법 G에 있어서, 상기 가스계가 용기 중의 적혈구 농축액에 도입된 후에 상기 적혈구 농축액을 포함하는 용기는 약 6℃ 이하이고 적혈구 농축액의 빙점을 초과하는 온도까지 냉각될 수 있다. 방법 E~방법 G에 있어서, 상기 용기는 DEHP 가소제가 선택적으로 없을 수 있다.

본 발명의 방법의 임의의 하나의 이론에 제한되는 것은 아니지만, 적혈구 농축액이 압력(예를 들면, 2 atm) 하에 상술의 조성물의 가스 혼합물에 유지될 때에 적혈구 농축액(적혈구를 적절히 포함함)으로의 가스의 확산이 일어나는 것으로 생각된다. 상술의 압력의 조건하에서의 크세논에 의한 적혈구 농축액의 포화는 적혈구의 생존성 및 기능성의 보존과 함께 빙점 이상이고 최대 약 6℃인 온도에서의 적혈구 농축액의 후속 저장을 보장한다. 상기 적혈구에 대한 크세논의 작용을 보존하는 것은 최대 42일의 기간 동안 적혈구 농축액의 저장을 보장하며, DEHP 가소제를 사용하여 제조되는 플라스틱 백을 이용하는 고안을 포기하게 한다.

또한, 공지된 방법과 대조적으로 상기 제안된 방법은 주위 상태로부터 백 물질을 통과하여 적혈구 농축액로의 산소의 확산을 제거하며, 적혈구의 용혈을 감소시킨다.

냉각 챔버는 적혈구 농축액의 냉각 및 냉각된 적혈구 농축액의 후속 저장에 선택적으로 이용될 수 있다.

상기 제안된 방법을 적용하는 경우, 상기 적혈구 농축액은 가스 혼합물이 투과될 수 있는 용기로 위치되고, 상기 가스 혼합물 중에 적혈구 농축액을 유지하는 것은 밀폐용기에서 적용되고, 거기에 적혈구 농축액을 갖는 용기가 위치된다. 특히, 밀폐용기로 가스 혼합물을 피딩하기 전에(적혈구 농축액을 갖는 용기가 위치되었음), 챔버는 그것으로부터 산소를 제거하기 위하여 진공 상태로 된다.

가스 혼합물이 투과할 수 있는 커버를 장착한 밀폐용기 또는 가스 혼합물이 투과될 수 있는 물질로 이루어지는 백(예를 들면, DEHP없이 폴리비닐클로라이드로 제조되고, 또한 일반적으로 혈액 성분의 저장에 사용되는 백)은 적혈구 농축액용 용기로서 선택적으로 사용될 수 있다.

상기 적혈구 농축액을 압력(예를 들면, 1.01-4atm) 하에서 가스 혼합물 중에 유지하는 동안의 시간 기간은 크세논에 의한 적혈구 농축액 포화의 소망하는 레벨에 의해 결정된다(상기 나타낸 바와 같이). 예를 들면, 상기 가스 혼합물이 투과될 수 있는 물질로 이루어지는 백을 사용하고, 거기에 적어도 200ml의 적혈구 농축액을 위치시키고, 이어서 1atm 이상의 압력을 적용하는 경우, 이 시간은 적어도 약 1분이고, 통상적으로는 약 30시간 미만이고, 보다 통상적으로는 적어도 약 15분이고, 보다 통상적으로는 적어도 약 30분이고, 더욱 통상적으로는 적어도 약 1시간이고, 특히 통상적으로는 적어도 약 3시간일 수 있다.

상기 일반적인 경우에 있어서, 적혈구 농축액을 상기 압력(예를 들면, 1.01atm, 1.5atm, 2atm 등) 하에서 가스 혼합물에 유지하는 기간은 밀폐용기에서의 가스 혼합물 압력 감소의 중단(가스 혼합물의 추가적인 펌핑없이)을 기초로 하여 결정되며, 이것은 가스 혼합물 성분에 의한 적혈구 농축액 포화의 중단을 나타낸다. 상기 적혈구 농축액을 냉각시키는 것은 밀폐용기에서 가스 혼합물 압력이 안정화된 시점으로부터 선택적으로 개시될 수 있다.

저장 후 적혈구 농축액을 사용하기에 직전에, 상기 적혈구 농축액은 대기 압력(1대기압)을 초과하지 않는 압력하 및 18~28℃(예를 들면, 대기 온도까지 가온 등)의 온도에서 적어도 상술의 온도까지 적혈구 농축액을 자연 가열하기에 충분한 기간 동안 선택적으로 유지할 수 있지만, 이것이 필요한 것은 아니다. 특히, 상기 밀폐용기는 냉각 챔버로부터 꺼낼 수 있고, 밀폐된 밀봉이 개봉되고, 이어서 적혈구 농축액을 갖는 백이 분리되며, 상기 적혈구 농축액은 실온까지 자연 가열하기에 충분한 시간 기간 동안 및 적혈구 농축액을 대기 온도까지 가온한 상태로 적혈구 농축액으로부터 가스계를 내보내는 동안에 대기 압력 및 실온에서 유지된다. 상기 용기의 저장 기간 후에 상기 가스 혼합물의 성분을 적혈구 농축액으로부터 방출 또는 이탈시키는 동안의 시간 기간을 감소시키기 위해, 상기 적혈구 농축액을 포함하는 용기는 선택적으로 교반 또는 진탕 및/또는 감압 또는 진공(대기 압력과 비교해서)의 조건하에서 위치된다.

본 발명은 혈액 제제를 저장하고, 크세논에 대해 가스 투과성인 물질로 이루어지며, DEHP 가소제를 함유하지 않는 종래의 백을 사용하여 적혈구(적혈구 농축액의 형태로)를 보존할 목적으로 적용에 사용될 수 있다. 본 발명에서는 상기 가스계를 상기 가스계의 압력을 최대 2~4atm까지 견뎌낼 수 있는 밀폐용기로 공급할 수 있는 표준 장비가 사용될 수 있다. 또한, 혈액 제제를 보존하는 표준 냉장 장비(종래의 냉장고)가 본 발명에 사용될 수 있다.

본 발명의 실제 구현의 가능성 및 상술한 결과의 획득(낮은 레벨의 적혈구 용혈을 유지하면서 최대 42일의 기간 동안 적혈구 농축액 200ml을 보존하는 점에서)은 실험적으로 검증되었다.

도 1~도 2를 참조하면, 2개의 다른 적혈구 농축액의 시험 결과가 도시되어 있다. 제 1 적혈구 농축액은 번호 2032로 표시되고, 제 2 적혈구 농축액은 번호 2086으로 표시된다. 각각의 샘플은 4개의 다른 용기에 분배되었다. 각각의 샘플에 대해 2개의 용기는 DEHP 가소제가 포함되고, 각각의 샘플에 대해 2개의 용기는 DEHP 가소제가 포함되지 않았다. 또한, 각 샘플에 대해, 2개의 용기는 크세논 가스 99.9체적%의 가스계가 포함된다. 그래프는 용기가 크세논 가스 및/또는 DEHP 가소제가 포함되거나 없는 것을 나타낸다. 상기 용기에 대한 시험 프로토콜은 다음과 같았다.

Xe 가스가 없는 용기:

a. 비Xe 유닛을 3.5시간 동안 로테이터 상에 평평하게 위치시킴.

b. 비Xe 유닛을 상기 Xe 유닛과 동일한 시간에 혈액 은행 냉장고에 위치시킴.

Xe 가스를 포함하는 용기:

a. Xe 유닛을 사전 테스트된 고압 챔버에 위치시킴.

b. 상기 Xe 유닛으로부터 산소를 제거하기 위해 상기 챔버를 진공으로 비워냄.

c. 상기 챔버를 4atm에서 Xe 가스로 가압함.

d. 상기 챔버의 Xe 가스를 배기시킴.

e. 상기 챔버를 4atm에서 Xe 가스로 가압함.

f. 상기 챔버의 Xe 가스를 배기시킴.

g. 상기 챔버를 4atm에서 Xe 가스로 가압함.

h. 상기 챔버의 Xe 가스를 배기시킴.

i. 상기 챔버를 4atm에서 Xe 가스로 가압함.

j. 상기 가압된 Xe 유닛을 3.5시간 동안 로테이터 상에 위치시킴.

k. 상기 가압된 Xe 유닛을 비Xe 유닛과 동일한 시간에 혈액 은행 냉장고에 위치시킴.

상기 Xe 유닛 및 비Xe 유닛이 혈액 은행 냉장고에 있는 동안에 상기 Xe 유닛은 X 유닛에서의 압력이 1atm 초과되는 것을 보장하기 위해 42일 기간에 걸쳐 주기적으로 체크되었다. 42일 후에, 전체 유닛이 혈액 은행 냉장고로부터 제거되었다. 상기 유닛이 혈액 은행 냉장고로부터 제거된 후, 상기 유닛에 대하여 이하의 공정이 행해졌다.

1. 곧바로 상기 혈소판 상에 가압된 Xe 유닛 및 비Xe 유닛을 위치시켜 10분 동안 수평 교반기에서 교반시킴.

2. 상기 전체 유닛을 상기 용기 상의 밸브를 개방하여 감압시킴.

3. 전체 유닛을 벤치 톱 상에 위치시켜 3시간 동안 유지함.

4. 3시간의 유지 기간 후에, 용혈의 백분율 및 ATP 함유량용 샘플을 시험함.

도 1에 도시된 바와 같이, 크세논 가스가 처리된 적혈구 농축액 샘플의 용혈의 백분율은 크세논 가스가 처리되지 않은 샘플의 것 미만이다. 양쪽의 샘플에 있어서, 상기 크세논 가스가 처리된 적혈구 농축액 샘플의 용혈의 백분율은 유의적으로 상기 비처리 샘플의 것 미만이다. 또한, 용혈량의 감소는 DEHP 가소제를 포함하는 용기에서 나타났다. 또한, 용혈량의 더한 감소는 DEHP 가소제가 포함되고 크세논 가스는 없는 용기와 비교해서 DEHP 가소제를 포함하지 않는 크세논 가스를 이용하여 달성되었다. 크세논이 포함된 용기에 상기 DEHP 가소제를 가하는 것은 용혈의 더한 감소를 야기한다.

도 2를 참고하면, 양쪽 샘플은 크세논 가스가 처리된 경우의 적혈구 농축액에서 더욱 높은 ATP 함유량을 나타냈다.

따라서, 상술한 설명으로부터 명백해지는 것들 중에서 상기 명시된 목적이 효율적으로 달성되고, 또한 본 발명의 정신 및 범위를 일탈하는 일 없이 명시된 구성에서 특정 변화가 이루어질 수 있기 때문에 상술한 설명에 포함되고 첨부된 도면에 나타내어지는 모든 사항은 예시적인 것으로 해석되어야 하고, 제한적인 의미로 해석되는 것이 아닌 것을 의도한다. 본 발명은 바람직하고 대안적인 실시형태를 참조로 하여 설명되었다. 본원에 제공되는 발명의 상세한 설명을 판독 및 이해하기 위한 변경 및 수정은 당업자에게 명백해질 것이다. 본 발명은 이것들이 본 발명의 범위 내에서 일어나는 한 이러한 모든 변형 및 변경을 포함하도록 의도된다. 또한, 이하의 청구범위는 본원에 기재된 본 발명의 일반적이고 구체적인 특징, 및 표현의 문제로서 그 사이에 포함되도록 기재되는 본 발명의 범위의 모든 언급을 모두 포함하도록 의도되는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명은 바람직한 실시형태를 참조로 하여 설명되었다. 본 발명의 바람직한 실시형태 및 기타 실시형태의 이들 및 기타 변경은 본원 명세서로부터 명백해질 것이며, 이것에 의해 상술한 설명은 단지 본 발명의 예시적인 것으로만 포함되고, 제한적인 것이 아닌 것으로 해석되어야 한다. 본 발명은 이것들이 첨부된 청구범위의 범위 내에서 이루어지는 한 이러한 모든 변형 및 변경을 포함하도록 의도된다.

Claims (46)

1. a. 적혈구 농축액을 얻는 단계;
   b. 상기 적혈구 농축액을 용기에 넣는 단계로서, 상기 용기는 가스가 투과될 수 있고, 적혈구 농축액을 필수적으로 수용하는 단계;
   c. 상기 적혈구 농축액이 상기 용기 내에 존재하는 동안에 상기 적혈구 농축액으로부터 산소를 제거하는 단계로서, 상기 산소는 상기 용기를 통과한 상기 산소의 확산에 의해 상기 적혈구 농축액 및 상기 용기로부터 제거되는 단계;
   d. 가스계를 상기 용기를 통과하여 확산시키고, 상기 용기 내에서 상기 적혈구 농축액과 상호작용시킴으로써 상기 용기 내의 상기 적혈구 농축액에 상기 가스계를 적용시키는 단계로서, 상기 가스계는 크세논을 포함하고, 상기 적혈구 농축액에 상기 가스계를 적용시키는 단계는 상기 적혈구 농축액으로부터 산소를 제거하는 단계 후에 행해지고, 상기 가스계 내의 상기 크세논은 지구의 대기 중에서 자연적으로 발생되는 크세논보다 큰 농도인 단계; 및
   e. 상기 가스계가 적용된 상기 적혈구 농축액을 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 최대 30℃인 온도에서 유지하는 단계를 포함하는 추후 수혈을 위해 적혈구를 보존하는 방법으로서:
   상기 적혈구 농축액은, 적어도 42일의 기간 동안, 적혈구 농축액의 용혈이 0.8% 미만으로, 상기 용기 내에서 유지될 수 있어, 상기 용기 내의 상기 적혈구 농축액은 상기 추후 수혈에 사용될 수 있는 것이고,
   상기 용기는 비스(2-에틸헥실)프탈레이트(DEHP) 가소제를 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 가스계는 65체적%~100체적%의 크세논 및 적어도 하나의 밸러스트 가스를 포함하고, 상기 밸러스트 가스는 질소, 크세논 이외의 희가스, 및 이산화탄소로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 가스를 포함하고, 상기 가스계 중의 상기 밸러스트 가스는 상기 가스계의 35체적%를 초과하지 않는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
3. 제 2 항에 있어서,
   상기 밸러스트 가스는 질소, 아르곤, 또는 그들의 조합인 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
4. 제 1 항에 있어서,
   상기 가스계는 산소 5체적% 미만을 포함하는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
5. 제 2 항에 있어서,
   상기 가스계는 산소 5체적% 미만을 포함하는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
6. 제 1 항에 있어서,
   상기 적혈구 농축액에 상기 가스계를 가하기 전에 상기 적혈구 농축액으로부터 산소 70체적%~100체적%를 제거하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
7. 제 5 항에 있어서,
   상기 적혈구 농축액에 상기 가스계를 가하기 전에 상기 적혈구 농축액으로부터 산소 70체적%~100체적%를 제거하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
8. 제 6 항에 있어서,
   상기 산소를 제거하는 단계는 진공 환경하에서 행해지는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
9. 제 7 항에 있어서,
   상기 산소를 제거하는 단계는 진공 환경하에서 행해지는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
10. 제 1 항에 있어서,
    상기 가스계는 1~10atm의 압력에서 상기 적혈구 농축액에 가해지는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
11. 제 9 항에 있어서,
    상기 가스계는 1~10atm의 압력에서 상기 적혈구 농축액에 가해지는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
12. 제 10 항에 있어서,
    상기 가스계는 1atm보다 크고 최대 10atm인 압력에서 상기 적혈구 농축액에 가해지는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
13. 제 11 항에 있어서,
    상기 가스계는 1atm보다 크고 최대 10atm인 압력에서 상기 적혈구 농축액에 가해지는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
14. 제 1 항에 있어서,
    a) 상기 적혈구 농축액으로의 상기 가스계의 첨가 전, b) 상기 적혈구 농축액으로의 상기 가스계의 첨가시, c) 상기 적혈구 농축액으로의 상기 가스계의 첨가 후, 및 그들의 조합시에, 상기 용기 중의 적혈구 농축액을 교반하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
15. 제 13 항에 있어서,
    a) 상기 적혈구 농축액으로의 상기 가스계의 첨가 전, b) 상기 적혈구 농축액으로의 상기 가스계의 첨가시, c) 상기 적혈구 농축액으로의 상기 가스계의 첨가 후, 및 그들의 조합시에, 상기 용기 중의 적혈구 농축액을 교반하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
16. 제 1 항에 있어서,
    상기 적혈구 농축액에 도입될 때의 가스계의 압력은 1~4atm인 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
17. 제 15 항에 있어서,
    상기 적혈구 농축액에 도입될 때의 가스계의 압력은 1~4atm인 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
18. 제 1 항에 있어서,
    상기 가스계가 상기 적혈구 농축액에 도입될 때의 상기 적혈구 농축액의 온도는 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 23℃ 이하인 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
19. 제 17 항에 있어서,
    상기 가스계가 상기 적혈구 농축액에 도입될 때의 상기 적혈구 농축액의 온도는 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 23℃ 이하인 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
20. 제 1 항에 있어서,
    상기 가스계가 가해진 후의 상기 적혈구 농축액을 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 6℃ 이하인 온도까지 냉각시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
21. 제 19 항에 있어서,
    상기 가스계가 가해진 후의 상기 적혈구 농축액을 상기 적혈구 농축액의 빙점 이상이고 6℃ 이하인 온도까지 냉각시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
22. 제 20 항에 있어서,
    상기 가스계가 가해진 후의 상기 적혈구 농축액을 냉각시키는 단계는 냉각 챔버에서 행해지고, 상기 냉각 챔버는 최대 42일 동안 상기 냉각된 적혈구 농축액을 저장하도록 설계되는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
23. 제 21 항에 있어서,
    상기 가스계가 가해진 후의 상기 적혈구 농축액을 냉각시키는 단계는 냉각 챔버에서 행해지고, 상기 냉각 챔버는 최대 42일 동안 상기 냉각된 적혈구 농축액을 저장하도록 설계되는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
24. 제 1 항에 있어서,
    상기 용기는 상기 가스계가 투과될 수 있는 커버가 구비된 밀폐용기에 위치되고, 상기 밀폐용기는 상기 가스계가 투과될 수 없는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
25. 제 23 항에 있어서,
    상기 용기는 상기 가스계가 투과될 수 있는 커버가 구비된 밀폐용기에 위치되고, 상기 밀폐용기는 상기 가스계가 투과될 수 없는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
26. 제 1 항에 있어서,
    상기 가스계가 투과되지 않는 밀폐용기로서, 상기 가스계가 투과될 수 있는 커버를 장착한 밀폐용기에, 상기 용기가 위치되는 동안에, 상기 용기 내의 상기 적혈구 농축액은, 상기 가스계의 추가적인 펌핑없이, 1atm 이상의 압력하에, 상기 가스계 내에서 유지되고, 적혈구 농축액의 냉각 단계는 밀폐챔버 내의 가스계의 압력이 안정화된 후에 개시되고, 상기 안정화는 포화에서 기인하는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
27. 제 25 항에 있어서,
    상기 용기 내의 상기 적혈구 농축액은 상기 용기가 상기 밀폐용기에 위치되는 동안에 상기 가스계의 추가적인 펌핑없이 상기 가스계 중에서 1atm 이상의 압력하에 유지되고, 적혈구 농축액의 냉각 단계는 밀폐챔버 내의 가스계의 압력이 안정화된 후에 개시되고, 상기 안정화는 포화에서 기인하는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
28. 삭제
29. 삭제
30. 제 1 항에 있어서,
    상기 가스계는 상기 적혈구 농축액의 냉장 전 또는 냉장시에 상기 적혈구 농축액에 1회 초과하여 도입되는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
31. 제 27 항에 있어서,
    상기 가스계는 상기 적혈구 농축액의 냉장 전 또는 냉장시에 상기 적혈구 농축액에 1회 초과하여 도입되는 것을 특징으로 하는 적혈구의 보존 방법.
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