PT876392E

PT876392E - Derivados de lactona de derivados 17beta-carboxi carbotio e amida androstano

Info

Publication number: PT876392E
Application number: PT96942493T
Authority: PT
Inventors: Keith Biggadike; Panayiotis Alexandro Procopiou
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 1995-12-29
Filing date: 1996-12-19
Publication date: 2000-12-29
Also published as: EA199800484A1; NZ324373A; DE69609199T2; CA2241728A1; CN1209135A; AU1140997A; HK1012193A1; IS4781A; TW498072B; BG102625A; WO1997024365A1; JPH11501675A; CZ207498A3; EE9800227A; TR199801247T2; NO983004D0; HUP9903707A2; ES2150150T3; MX9805181A; SK89198A3

Description

DESCRIÇÃO

“DERIVADOS DE LACTONA DE DERIVADOS 17β-ΟΑΕΒΟΧΙ, CARBOTIO E AMIDA ANDROSTANO” A presente invenção refere-se a novos compostos anti- inflamatórios e antialérgicos da série do androstano e aos processos para a sua preparação. A presente invenção também diz respeito às formulações farmacêuticas que contenham tais compostos e às suas utilizações terapêuticas, em particular para o tratamento de doenças inflamatórias e alérgicas.

Os glucocorticosteróides que possuem propriedades anti--inflamatórias são conhecidos e são profusamente utilizados para o tratamento de perturbações ou doenças inflamatórias, tais como a asma ou a rinite. No entanto, uma das possíveis desvantagens dos glucocorticosteróides em geral consiste no facto de poderem provocar efeitos sistémicos indesejáveis a seguir à sua administração. Os documentos WO94/13690, W094/14834, W092/13873 e W092/13872 descrevem glucocorticosteróides que alegadamente possuem actividade anti--inflamatória associada a uma potência sistémica reduzida. 0 documento EP-200 692 descreve compostos éster de cadeia aberta anti-inflamatórios correspondentes às lactonas da presente invenção. A presente invenção proporciona um novo conjunto de compostos que possuem uma actividade anti-inflamatória útil, embora tenham uma fraca ou mesmo nenhuma actividade sistémica. Assim, os compostos da presente invenção representam uma alternativa mais segura aos glu-cocorticóides conhecidos, com perfis fracos de efeitos secundários.

Sendo assim, de acordo com um dos seus aspectos, a presente invenção proporciona um composto de fórmula estrutural (I) 1

e seus solvatos, em que o simbolo Ri representa 0, S ou NH; o simbolo R2 representa individualmente um grupo OC(=0)--alquilo (C1-C6); o símbolo R3 representa individualmente um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo {que pode estar numa das configurações α ou β) ou metileno; ou então os substituintes R2 e R3, considerados em conjunto, formam um grupo de fórmula estrutural -0 -0 /c\

Re R7 em que os substituintes Rê e R7 são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio e grupos alquilo (Ci-C6) ; em que os substituintes R4 e R5 são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio e halogénio; e o símbolo ............ representa uma ligação simples ou dupla.

Nas definições anteriores, o termo “alquilo”, enquanto grupo ou como constituinte de um grupo, designa um radical alquilo de cadeia linear ou então, se isso for possível, de cadeia ramificada. Por exemplo, tal termo pode designar uma função alquilo (C1-C4), tal como representado pelos grupos metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo e t-butilo. 2

Os solvatos podem ser, por exemplo, hidratos.

Doravante, as referências feitas a um composto de acordo com a invenção incluem tanto os compostos de fórmula estrutural (I) como os seus solvatos, em particular os solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Salvo quando indicado de outro modo, faz-se observar que a presente invenção abrange no seu âmbito todos os estereoisómeros dos compostos de fórmula estrutural (I) e suas misturas.

Em particular, os compostos de fórmula estrutural (I) contêm um centro assimétrico no ponto de junção do radical lactona. Sendo assim, a invenção abrange no seu âmbito os dois diastereoisómeros neste centro assimétrico e as suas misturas.

Os diastereoisómeros e as suas misturas no centro assimétrico formado quando os substituintes R2 e R3, considerados em conjunto, formam um grupo de fórmula estrutural

e os símbolos Rê e R7 representam substituintes diferentes, também estão abrangidos no âmbito da presente invenção. O substituinte Rx pode estar ligado aos átomos dc carbono a, β ou γ do grupo lactona

α β sendo no entanto geralmente preferíveis os compostos de fórmula estrutural (I) em que o substituinte Rj, está ligado ao átomo dc carbono a.

Constituem um conjunto preferido os compostos de fórmula estrutural (I) em que o símbolo Ri representa 0 ou S e especialmente S.

Constituem outro conjunto preferido de compostos da invenção os de fórmula estrutural (I) em que o símbolo R2 representa individualmente um grupo OC(=0)-alquilo(Ci~C6) , mais 3 :Λ*0Λί&ΑΐμψΖΛΐ·[Ι*,·'' r' *' ·

preferencialmente um grupo 0C(=0) -alquilo (C1-C3) e em especial um grupo OC(=0)-etilo. De um modo geral, dentro deste conjunto, são preferidos os compostos em que o símbolo R3 representa um grupo metilo.

Constituem um outro conjunto preferido os compostos de fórmula estrutural (I) em que os substituintes R2 e R3, considerados em conjunto, formam um grupo de fórmula estrutural /*· -0 R7 em que os substituintes Rô e R7 são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio e qrupos alquilo(Ci-C6), particularmente entre átomos de hidrogénio e grupos alquilo (Ci~C3) e em especial entre átomos de hidrogénio e grupos metilo ou n-propilo.

Os compostos de fórmula estrutural (I) em que os substituintes R4 e R5 são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio, flúor e cloro, em particular átomos de hidrogénio ou de flúor, s3o preferíveis. SSo especialmente preferidos os compostos em que ambos os símbolos R4 e R5 representam átomos de flúor.

Constituem um conjunto particularmente preferido de compostos da presente invenção os compostos de fórmula estrutural (I) em que o símbolo Ri representa S; o símbolo R2 representa um grupo 0C(=0)--alquilo (Ci-Cõ) , particularmente OC (=0) -alquilo (C1-C3) e em especial OC(=0)-etilo; o símbolo R3 representa um grupo metilo; os substituintes R4 e R5 são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio e flúor e em especial é um átomo de flúor; e o símbolo -------- representa uma ligação simples ou dupla.

Constituem ainda um outro conjunto preferido de compostos da invenção os compostos dc fórmula estrutural (I) em que o símbolo R3 4 ' A? «Vfl^dk Μΐίν·*Α··ί·

representa S; os substituintes R2 e R3/ considerados em conjunto, formam um grupo de fórmula estrutural —°S x* -O R, em que os substituintes R6 e R7 são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio e grupos alquilo(Ci-Cõ) , particularmente entre átomos de hidrogénio e grupos alquilo (C1-C3) e em especial entre átomos de hidrogénio e grupos meti lo ou n-propilo; os substituintes R4 e Rs são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio e flúor e em especial é um átomo de rnior; e o símbolo representa uma ligação simples ou dupla. Dentro deste conjunto são preferidos os isómeros R dos compostos em que os símbolos Rg e R7 representam substituintes diferentes.

Faz-se observar que a presente invenção abrange todas as combinações dos conjuntos particulares e preferidos anteriormente referidos.

Os compostos de fórmula estrutural (I) compreendem os a seguir indicados: Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 17a-butiriloxi- -6a, 9a-diflúor-llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-androsta-l,4-dieno-17P~ -carbotióico; éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 17a-acetiloxi--6a, 9a-diflúor-llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-androsta-l,4-dieno-17p--carbotióico; éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 9a-flúor-lip~ -hidroxi-16p-metil-3-oxo-17p-propioniloxi-androsta-l,4-dieno-17p--carbotióico; éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-4-ílico) do ácido 6a, 9a-diflúor--llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4-dieno--17p-carbotióico; 5

éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ilico) do ácido 6a,9a-diflúor--llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4-dieno--17p-carboxílico; éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-5-ílico) do ácido 6a, 9a-diflúor--lip-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4-dieno--17p-carboxílico; éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-5-ílico) do ácido 6a,9a-diflúor--llp-hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno--17P-carbotióico; éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ilico) do ácido 6a, 9a-diflúor--llp-hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-4-eno-17P--carbotióico; N-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3“il)-amida do ácido 6a, 9a-diflúor-lip--hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno-17p--carboxílico; éster (2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido βα,9a-diflúor-llp--hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno-17p--carboxilico; éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 16a,17a-butilideno--dioxi-llp-hidroxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno-17p-carbotióico/ éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 16a,17a-(R-buti-lideno-dioxi)-6a, 9a-diflúor-llp-hidroxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno--17p-carbotióico; éster (2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ilico) do ácido 16a, 17a-butilideno--dioxi-HP-hidroxi-3-oxo-androsta-l, 4-dieno-17P-carboxilico; N-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-il)-amida do ácido 16a,17a-(R-butilideno--dioxi) -6a, 9a-diflúor-lip-hidroxi-3-oxo-androsta-4-eno-17P-carboxílico; 6

N-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-il)-amida do ácido 6a, 9a-diflúor-llp--hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno-17p~ -carboxílico; éster (5-oxo-tetra-hidrofurano-2-ílico) do ácido 16a,17a- (R-butilideno- -dioxi) -6a, 9a-diflúor-lip-hidroxi-3-oxo-androsta-4-eno-17p-carbotióico; e seus solvatos.

Como compostos preferidos de fórmula estrutural (I) refere-se os seleccionados entre: éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 6a,9a-diflúor--lip-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4-dieno-17β—carbotióico; éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 6a, 9a-diflúor- -lip-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-4-eno-17p- -carbotióico; éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 6a, 9a-diflúor--lip-hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno--17p-carbotióico; éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 16a,17a-(R-buti-lideno-dioxi) -6a, 9a-diflúor-llp-hidroxi-3-oxo-androsta-4-eno-17p--carbotióico; e seus solvatos.

Faz-se observar que cada um dos compostos de fórmula estrutural (I) anteriores compreende os diastereoisómeros R e s individuais no centro assimétrico existente no ponto de ligação do radical lactona e bem as3im as 3uas misturas. Faz-sc ainda observar que os compostos de fórmula estrutural (I) podem compreender os diastereoisómeros R e S individuais no centro assimétrico formado quando os substituintes R2 e R3, considerados em conjunto, formam um grupo de fórmula estrutural 7 1

em que os substituintes Re e R7 são diferentes, e bem assim as suas misturas.

Sendo assim, cada um dos diastereoisómeros R e S individuais, isolado individualmente por forma a ficar praticamente isento do outro diastereoisómero, isto é, puro, e bem assim as suas misturas, também estão abrangidos no âmbito da presente invenção. Um diastereoisómero R ou S individual, isolado por forma a ficar praticamente isento do outro diastereoisómero, isto é, puro, irá ser isolado, de preferência, de maneira a que o outro diastereoisómero esteja presente numa proporção inferior a 10%, de preferência inferior a 1% e especialmente inferior a 0,1%.

Potencialmente, os compostos de fórmula estrutural (I) possuem efeitos anti-inflamatórios ou antialérgicos benéficos, em particular após a sua administração tópica, o que é demonstrado, por exemplo, pela sua capacidade para se ligarem ao receptor glucocorticóide e para desencadearem uma resposta através desse receptor. Por este motivo, os compostos de fórmula estrutural (I) são úteis para o tratamento de doenças inflamatórias e/ou alérgicas. Além disso, os compostos de fórmula estrutural (I) têm a vantagem de não possuírem actividade sistémica ou de esta ser muito pequena. Sendo assim, os compostos da invenção podem representar uma alternativa mais segura aos glucocorticóides anti-inflamatórios conhecidos, com perfis fracos de efeitos secundários.

Como exemplos das doenças para as quais os compostos da invenção são úteis refere-se as doenças da pele, tais como eczema, psoríase, dermatite alérgica, neurodermatite, prurido e reacções de hipersensibilidade; os estados inflamatórios do nariz, da garganta ou dos pulmões, tais como asma (incluindo as reacções asmáticas induzidas por alergénios), rinite (incluindo a febre-dos-fenos), polipos nasais, doença obstrutiva pulmonar crónica, doença intersticial dos pulmões e fibrose; os estados inflamatórios intestinais, 8

ί 07 tais como a colite ulcerativa e a doença de Crohn; e as doenças autoimunitárias, tais como a artrite reumatóide.

Os compostos da invenção também podem ser utilizados para o tratamento da conjuntiva e das conjuntivites.

Faz-se observar aos especialistas na matéria que as referências aqui feitas a tratamentos abrangem a profilaxia e o tratamento dos estados patológicos já declarados.

Conforme referido antes, os compostos de fórmula estrutural (I) são úteis em medicina humana ou veterinária, em particular enquanto agentes anti-inflamatórios e antialérgicos.

Assim, de acordo com outro dos seus aspectos, a invenção proporciona um composto de fórmula estrutural (I), ou um seu solvato fisiologicamente aceitável, utilizável em medicina humana ou veterinária, em particular para o tratamento de pacientes que sofram de doenças inflamatórias e/ou alérgicas.

Os compostos de acordo com a invenção podem ser formulados para administração da qualquer modo conveniente, pelo que a invenção também abrange no seu âmbito as composições farmacêuticas que incorporem um composto de fórmula estrutural (I) ou um seu solvato fisiologicamente aceitável, que pode ser misturado, se desejado, com um ou vários diluentes ou veículos aceitáveis sob o ponto de vista fisiológico.

Além disso, a invenção proporciona um processo para a preparação de tais composições farmacêuticas, o qual consiste em misturar os ingredientes.

Os compostos de acordo com a invenção podem ser formulados, por exemplo, para administração oral, bucal, sublingual, parentérica, local ou rectal e em especial para administração local. A expressão “administração local”, tal como aqui utilizada, designa a administração por insuflação e por inalação. Como exemplos de diversos tipos de preparações para administração local refere-se as seleccionadas entre unguentos, loções, cremes, geles, espumas, preparações para administração por emplastros transdérmicos, pós, 9

(!, —r~C Θ7 vaporizadores, aerossóis, cápsulas ou carregadores utilizáveis num inalador ou num insuflador, gotas (v.g. gotas oftálmicas ou nasais), soluções/suspensões para nebulização, supositórios, pessários, enemas de retenção e comprimidos ou pastilhas para mastigar ou chupar (v.g. para o tratamento de úlceras aftosas) ou ainda preparações llpossómicas ou mlcroencapsuladas.

Os unguentos, cremes e geles podem ser formulados, por exemplo, com uma base aquosa ou oleosa e com a adição de um agente espessante e/ou gelificante adequado e/ou um solvente. Como exemplos de tais bases é possível referir a água e/ou um óleo, tal como a parafina líquida ou um óleo de origem vegetal, tal como o óleo de amendoim ou o óleo de rícino, ou um solvente, tal como o polietileno-glicol. Como agentes espessantes e agentes gelificantes utilizáveis, em função da natureza da base, refere-se os seleccionados entre parafina mole, estearato de magnésio, álcool cetostearílico, polietileno- -glicóis, linolina, cera de abelhas, derivados de carboxipoli-metileno e de celulose e/ou monostearato de glicerilo e/ou agentes emulsionantes não iónicos.

As loçõe3 podem ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa e de um modo geral também contêm um ou vários agentes emulsionantes, agentes estabilizadores, agentes dispersantes, agentes auxiliares da suspensão ou agentes espessantes.

Os pós para aplicação externa podem ser preparados com o auxílio de qualquer base adequada para pós, por exemplo, talco, lactose ou amido. As gotas podem ser formuladas com uma base aquosa ou não aquosa, podendo também compreender um ou vários agentes dispersantes, agentes solubilizantes, agentes auxiliares da suspensão ou agentes conservantes.

As composições micronizáveis podem ser formuladas, por exemplo, sob a forma de soluções ou suspensões aquosas ou sob a forma de aerossóis administrados a partir de embalagens prassurizsrias, tais como um inalador equipado com um doseador, utilizando-se para tal um agente propulsor liquefeito adequado. As 10

r ξΡ

Ar^v' composições adequadas para aerossóis inaláveis podem ser suspensões ou soluções e de um modo geral contêm um composto de fórmula estrutural (I) e um agente propulsor adequado, tal como um composto fluorocarbonado ou um composto clorofluorocarbonado que contenha hidrogénio ou uma mistura destes compostos, em particular hidrofluoroalcanos, especialmente 1,1,1,2-tetrafluoroetano, 1,1,1,2,3,3,3-heptaflúor-n-propano ou uma sua mistura. Facultativamente, a composição em aerossol pode conter outros excipientes de formulação bem conhecidos na especialidade, tais como agentes tensioactivos, v.g. ácido oleico ou lecitina, e co-solventes, v.g. o etanol.

De forma vantajosa, as formulações da presente invenção podem ser tamponadas por adição de agentes tampão adequados.

As cápsulas e os carregadores utilizáveis num inalador ou in-suflador, feitos, por exemplo, de gelatina, podem ser formulados por forma a conterem uma mistura em pó para inalação, constituída por um composto da invenção e por uma base para pós adequada, tal como a lactose ou o amido. De um modo geral, cada cápsula ou carregador pode cunLer enLre 20 pg e 10 my do composLo de fórmula eaLruLurai (I). Em alternativa, o composto da presente invenção pode ser apresentado sem excipientes, tais como a lactose. A proporção do composto activo de fórmula estrutural (I) nas composições locais, de acordo com a invenção, vai depender do tipo concreto de formulação que se pretenda preparar, mas geralmente irá estar compreendida entre 0,001% e 10% em peso. No entanto, de um modo geral, para a maior parte das preparações, a proporção irá estar vantajosamente compreendida entre 0,005% e 1% e de preferência entre 0,01% e 0,5%. No entanto, nos pós para inalação ou insuflação, a proporção utilizada irá estar compreendida entre 0,1% e 5%.

As formulações em aerossol são preparadas preferencialmente por forma a que cada dose calibrada ou “lufador” do aerossol contenha ente 20 μg e 200 μg e de preferência entre cerca de 20 μg 11

Ar&z· r-·

'7 e 500 μg de um composto de fórmula estrutural (I). A administração pode ser realizada uma vez por dia ou diversas vezes por dia, por exemplo, 2, 3, 4 ou 8 vezes, sendo administradas 1, 2 ou 3 doses em cada uma dessas vezes. A dose diária total administrada com um aerossol irá estar compreendida entre 100 μg e 10 mg e de preferência entre 200 pg e 2000 pg. De um modo geral, a dose diária total e a dose calibrada, administradas através de cápsulas ou carregadores num inalador ou insufiador, irão ser o dobro das doses administradas nas formulações em aerossol.

Ao preparações tópicas podem ser administradas à zona afectada em uma ou várias aplicações diárias; sobre áreas da pele é possível utilizar vantajosamente pensos oclusivos. Utilizando um sistema adesivo com reservatório é possível conseguir uma administração contínua ou prolongada.

Para fins de administração interna, os compostos de acordo com a invenção podem ser formulados, por exemplo, de um modo convencional para administração oral, parentérica ou rectal. Como formulações para administração oral refere-se as seleccionadas entre xaropes, elixires, pós, grânulos, comprimidos e cápsulas que contenham tipi-camente excipientes convencionais, tais como agentes aglutinantes, cargas, 1ubrificantes, desintegrantes, agentes humectantes, agentes auxiliares de suspensão, agentes emulsionantes, conservantes, sais tampão, agentes aromatizantes, corantes e/ou edulcorantes, conforme for adequado. No entanto, são preferíveis as formas unitárias de dosagem, conforme adiante descrito.

As formas preferidas de preparações para administração interna são ao formão unitária3 de do3agem, isto é, comprimidos e cápsulas. Tais formas unitárias de dosagem contêm entre 0,1 mg e 20 mg e de preferência entre 2,5 mg e 10 mg de compostos da invenção.

De um modo geral, os compostos de acordo com a invenção podem ser utilizados por administração interna nos casos para os quais seja indicada uma terapia adrenocortical sistémica. 12

Em termos gerais, as preparações para administração interna podem conter entre 0,05% e 10% do ingrediente activo, em função do tipo de preparação em causa. A dose diária pode variar entre 0,1 mg e 60 mg, v.g. entre 5 mg e 30 mg, dependendo isso da doença que se pretenda tratar e da duração do tratamento desejado.

As formulações entéricas revestidas ou de libertação lenta podem ser vantajosas, em particular para o tratamento de doenças inflamatórias intestinais.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção também podem ser utilizadas em combinação com outro agente terapeuticamente activo, por exemplo, um agonista do adreno-receptor β2, um anti--histamínico ou um anti-alérgico. Sendo assim, de acordo com outro dos seus aspectos, a invenção proporciona uma combinação de um composto de fórmula estrutural (I), ou de um seu solvato fisio-logicamente aceitável, com outro agente terapeuticamente activo, por exemplo, um agonista do adreno-receptor β2, um anti-histamínico ou um anti-alérgico. A combinação referida antes pode assumir convenientemente a forma de uma formulação farmacêutica, constituindo assim um outro aspecto da invenção as formulações farmacêuticas que incorporem uma combinação, conforme definida antes, conjuntamente com um diluente ou um veiculo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

Os compostos individuais de tais combinações podem ser adminis-trados de forma sequencial ou simultânea, em formulações farmacêuticas separadas ou combinadas. Os especialistas na matéria determinarão facilmente as doses adequadas de agentes terapêuticos conhecidos.

Os compostos de fórmula estrutural (T) e os seus solvatos podem ser preparados pela metodologia adiante descrita, a qual constitui outro aspecto da presente invenção.

Assim, de acordo com um primeiro processo (A), é possível preparar um composto de fórmula estrutural (I) efectuando o tratamento de um composto de fórmula estrutural (II) 13 ο cox

R3 (II)

possuem as em que os símbolos R2, R3, R^,. k5‘ e significações definidas antes para os compostos de fórmula estrutural (I) e o símbolo X representa um grupo OH ou um seu derivado activado, tal como um triazol ou um anidrido misto, com um composto de fórmula estrutural (III)

(III) e seus sais, em que o oímbolo Z representa um grupo OH, NH2 ou SH.

Deste modo, é possível activar um composto de fórmula estrutural (II), em que o símbolo X representa um grupo OH, recorrendo para tal a um agente de activação, tal como um triazol, v.g. 1-hidroxi- -benzotriazol, e uma carbodiimida, tal como o cloridrato de 1-(3- -dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida, num solvente polar, tal como a dimetilformamida, trabalhando convenientemente a temperaturas elevadas, v.g. aproximadamente 100°C, e sob uma atmosfera inerte, tal como uma atmosfera de azoto ou semelhante, para se obter um derivado activado do composto de fórmula estrutural (II), tal como um derivado de grupo triazol, v.g. um derivado de grupo benzotriazol que satisfaça à fórmula estrutural (IV) 14

Ο

(IV) possuem as significa (em que os símbolos R2, R3, R4, R5 e ções definicias anLes) .

Faz-se reagir o derivado activado, que pode ser isolado se necessário, com um composto de fórmula estrutural (III), em que o símbolo Z representa um grupo NH2, SH ou OH, para se obter o composto de fórmula estrutural (I) pretendido.

Faz-se observar aos especialistas na matéria que a reacção de acoplamento pode ter lugar num só passo, sem se efectuar o isolamento do derivado activado, no caso de o composto de fórmula estrutural (III) estar presente durante a reacção ou se for adicionado após a activação. Em alternativa, o derivado activado pode ser isolado e subsequentemente tratado com um composto de fórmula estrutural (III) para se obter o composto de fórmula estrutural (I) desejado.

Ambos os métodos estão abrangidos no âmbito da presente invenção.

Os compostos de fórmula estrutural (I) também podem ser preparados em conformidade com o processo (A) anterior, efectuando o acoplamento de um composto de fórmula estrutural (II), em que o símbolo X representa um grupo OH, com um composto de fórmula estrutural (III), em que 0 símbolo Z representa um grupo SH, OH ou NH2, utilizando um anidrido misto intermediário, por exemplo, um anidrido misto de fosfato, tal como um composto de fórmula estrutural (V), conforme descrito por Kertesz e Marx em ‘Journal of Organic Chemistry’, 1986, 51, 2315-2328. 15

Assim, é possível activar um composto de fórmula estrutural (II), em que o símbolo X representa um grupo OH, com um agente de activação, tal como o clorofosfato de dietilo, na presença de uma base, tal como uma amina terciária, v.g. trietilamina, e num solvente adequado, tal como um solvente clorado, v.g. diclorometano, para formar vim derivado activado do composto de fórmula estrutural (II), v.g. um derivado que seja um anidrido misto de foefato de dietilo que aati3faça à fórmula cotrutural (V)

(em que os símbolos R2, R3, R4, R5 e...............possuem as significa ções definidas antes).

Faz-se observar aos especialistas na matéria que a reacção de acoplamento pode ter lugar sem se efectuar o isolamento do derivado activado, no caso de o composto de fórmula estrutural (III) estar presente durante a reacção ou se for adicionado após a activação. Em alternativa, o derivado activado pode ser isolado e subsequentemente tratado com um composto de fórmula estrutural (III) para se obter o composto de fórmula estrutural (I) desejado.

Ambos os métodos estão abrangidos no âmbito da presente invenção.

Os compostos de fórmula estrutural (I), em que o símbolo Rx representa 0 ou S, também podem ser preparados em conformidade com um segundo processo (B) em que se efectua o tratamento de um composto de fórmula estrutural (II), possuindo os símbolos R2, R3, 16

R4, R-r e~ 1 as significações definidas antes e em que o símbolo X representa um grupo OH ou SH ou os seus sais correspondentes, com um composto que satisfaça a uma das fórmulas estruturais (VI) ou (VII)

em que o símbolo Q representa um grupo removível adequado (tal como um átomo de Cl ou Br ou um grupo de fórmula geral OSO2A em que o símbolo A representa, por exemplo, um grupo CH3, CF3 ou p-CH3C6H4) , de acordo com métodos convencionais. É possível recorrer ao processo geral (B) referido antes, no qual são utilizados compostos de fórmula estrutural (IV), para a preparação de compostos de fórmula estrutural (I) em que o substi-tuinte Ri está ligado aos átomos de carbono α, β ou γ do grupo lactona.

Os compostos de fórmula estrutural (I), em que o símbolo Ri representa O ou s, podem ser preparados em conformidade com o processo (B) anterior por alquilação de um composto de fórmula estrutural (II), em que o símbolo X representa respectivamente um grupo OH ou SH, com um composto de fórmula estrutural (VI), em que o símbolo Q representa um grupo removível adequado, recorrendo a métodos conhecidos na especialidade ou a uma adaptação de tais métodos.

Assim, por exemplo, é possível preparar um composto de fórmula estrutural (I), em que o símbolo Ri representa 0, por alquilação de um composto de fórmula estrutural (II), em que o 3Ímbolo X representa um grupo OH, convenientemente sob a forma de um sal adequado (tal como um sal de um metal alcalino, v.g. um sal de sódio ou de amónio quaternário), com um composto de fórmula estrutural (VI), em que o símbolo Q representa um grupo removível adequado, de preferência um átomo de cloro ou bromo ou um grupo mesilato. De preferência, efectua-se a reacção de alquilação na presença de um solvente, de forma adequada um solvente polar, sob condições inertes, por exemplo, em atmosfera de azoto ou 17

semelhante, e convenientemente a uma temperatura compreendida entre cerca de 0°C e 100°C. Como solventes polares adequados refere-se os seleccionados entre acetona, di-metilformamida, dimetilacetamida, dimetilsulfóxido, diclorometano ou clorofórmio.

De um modo idêntico, os compostos de fórmula estrutural (I), em que o símbolo Ri representa S, podem ser preparados em conformidade com o processo (B) anterior por alquilação de um composto de fórmula estrutural (II) , em que o símbolo X representa um grupo SH, com um composto de fórmula estrutural (VI) em que o símbolo Q representa um grupo removível adequado, recorrendo para tal a adaptações dos métodos descritos por Phillipps et al. em ‘Journal of Medicinal Chemistry’, 1994, 37, 3717-3729. Assim, é possível preparar um composto de fórmula estrutural (I), em que o símbolo Ri representa S, por alquilação do correspondente composto de fórmula estrutural (II), em que o símbolo X representa um grupo SH, convenientemente sob a forma de um sal adequado (tal como um sal de um metal alcalino, v.g. um sal de sódio ou de amónio quaternário), com um composto de fórmula estrutural (VI), em que o símbolo Z representa um grupo removível adequado, conforme descrito anteriormente para reacções de alquilação semelhantes.

Em alternativa, os compostos de fórmula estrutural (I), em que o símbolo Ri representa 0 ou S, podem ser preparados em conformidade com o processo (B) anterior por alquilação de um composto de fórmula estrutural (II), em que o símbolo X representa um grupo OH ou SH, com um composto de fórmula estrutural (VI), em que o símbolo Q representa um grupo OH, sob condições de Mitsunobu, utilizando trifenilfosfina e um azodicarboxilato de dialquilo, ou então utilizando a metodologia de Vilsmeier, conforme descrito por Barrett e Procopiou em ‘Journal of the Chemical Society’, Chemical Communications, 1995, 1403-1404.

Também é possível preparar um composto de fórmula estrutural (I), em que o símbolo Eq representa 3 e está ligado ao átomo de carbono β do grupo lactona, fazendo reagir o correspondente composto 18

de fórmula estrutural (II), em que o símbolo X representa um grupo SH, com um composto de fórmula estrutural (VII) . Por exemplo, por adição à Michael do composto de fórmula estrutural (II) com o composto de fórmula estrutural (VII) na presença de uma base, tal como carbonato de potássio, num solvente adequado, tal como a di-metilformamida.

Os compostos de fórmula estrutural (I) também podem ser preparados a partir de outros compostos de fórmula estrutural (I), utilizando procedimentos convencionais de interconversão seleccionados entre transacetalação, epimerização ou esterificação. Assim, constitui outro aspecto da presente invenção um processo para preparar um composto de fórmula estrutural (I) por interconversão de um outro composto de fórmula estrutural (I) (processo C).

Os compostos de fórmula estrutural (I) que possuem uma ligação simples 1,2 podem ser preparados por redução parcial do correspondente composto de ligação dupla 1,2, por métodoe convencionais. Assim, por exemplo, é possível efectuar a hidrogenação do correspondente composto de fórmula estrutural (I) ou de um intermediário utilizado para a preparação de compostos de fórmula estrutural (I), utilizando um catalisador de paládio, convenientemente num solvente adequado, v.g. acetato de etilo, ou então, de preferência, utilizando cloreto de tris(trifenilfosfina)-ródio (I) (conhecido pela designação de catalisador de Wilkinson), de forma conveniente num solvente adequado, tal como o tolueno, o acetato de etilo ou o etanal.

Faz-se observar aos especialistas na matéria que pode ser desejável utilizar derivados protegidos dos intermediários utilizados na preparação de compostos de fórmula estrutural (I) . Assim, os processos anteriores podem requerer uma reacção de desprotecção enquanto passo intermediário ou final para a obtenção do composto pretendido. Deste modo, em conformidade com outro processo (D), é possível preparar um composto de fórmula estrutural (I) submetendo um derivado protegido de um composto de fórmula 19

estrutural (I) a uma reacção para remover o grupo ou os grupos de protecção presentes, constituindo isso um outro aspecto da presente invenção.

As reacções de protecção ou desprotecção de grupos funcionais podem ser realizadas utilizando meios convencionais. Sendo assim, 03 grupo3 hidroxilo podem ser protegidos utilizando qualquer grupo convencional de protecção de radicais hidroxilo, por exemplo, conforme descrito em ‘Protective Group.s in Organic Chemistry’, F.d-J.F.W. McOmie (Plenum Press, 1973) ou em ‘Protective Groups in Organic Synthesis’ por Theodora W. Green (John Wiley and Sons, 1991).

Como exemplos de grupos protectores adequados para radicais hidroxilo refere-se os seleccionados entre grupos alquilo (v.g. t-butilo ou metoximetilo), grupos aralquilo (v.g. benzilo, difenil-metilo ou trifenilmetilo), grupos heterociclicos, tais como tetra--hidropiranilo, grupos acilo (v.g. acetilo ou benzoilo) e grupos sililo, tais como trialquilsililo (v.g. t-butil-dimetilsililo) . Os grupos de protecção de radicais hidroxilo podem ser removidos por técnicas convencionais. Assim, por exemplo, os grupos alquilo, sililo, acilo e heterociclicos podem ser removidos por solvólise, v.g. por hidrólise sob condições acidicas ou básicas. De um modo idêntico, também os grupos aralquilo, tais como trifenilmetilo, podem ser removidos por solvólise, v.g. por hidrólise em condições acidicas. 03 grupo3 aralquilo, taÍ3 como benzilo, podem 3cr clivados por hidrogenólise na presença de um catalisador de um metal nobre, tal como o paládio sobre carvão.

Os compostos de fórmulas estruturais (II), (III), (IV), (V), (VI) e (VII) são compostos genericamente conhecidos ou então podem ser preparados por métodos análogos aos descritos na especialidade para a preparação de compostos conhecidos de fórmulas estruturais (II), (III), (IV), (V), (VI) e (VII) ou ainda podem ser preparados pelos métodos aqui descritos. Os novos compostos de fórmulas estruturais (II), (III), (IV), (V) e (VI) constituem um outro aspecto da presente invenção. 20

Por exemplo, é possível preparar os compostos de fórmula estrutural (II), em que o símbolo X representa um grupo OH, por oxidação de um composto adequado 21-hidroxi-20-ceto-pregnano de fórmula estrutural (VIII)

(em que os símbolos Rz, R3, R*, R5 e .......... possuem as significações definidas antes) utilizando, por exemplo, a metodologia descrita por Kertesz e Marx em ‘Journal of Organic Chemistry’, 1986, 51, 2315-2328.

Os compostos de fórmula estrutural (VIII) estão comercialmente disponíveis; por exemplo, o acetoneto de fluocinolona, o budesoneto e o acetoneto de triam-cinolona são fornecidos pela empresa Sigma-Aldrich, ou então podem ser preparados a partir de compostos de fórmula estrutural (VIII) comercialmente disponíveis, por exemplo, por métodos de transacetalação descritos no documento EP0262108 e por redução parcial dos compostos de ligação dupla 1,2 pelos métodos aqui descritos. Em alternativa, os compostos de fórmula estrutural (VIII) podem ser preparados a partir de derivados de grupo 17a-hidroxilo de compostos de fórmula estrutural (VIII) comercialmente disponíveis, por exemplo, betametasona, flumetasona, prednisolona, beclometasona e dexametasona, compostos estes que são fornecidos pela empresa Sigma-Aldrich, por esterificaçâo do grupo 17a-hidroxilo em conformidade com o método descrito por Gardi et al., ‘Tetrahedron Letters’, 1961, 448. Os novos compostos de fórmula estrutural (VIII) constituem ainda outro aspecto da presente invenção. É possível preparar os compostos de fórmula estrutural (II), em que 0 símbolo X representa um grupo SH, por aplicação ou

adaptação de métodos conhecidos, por exemplo, utilizando métodos descritos por Phillipps et al. em ‘Journal of Medicinal Chemistry’, 1994, 37, 3717-3729.

Os compostos de fórmulas estruturais (III), (VI) e (VII) estão comercialmente disponíveis, sendo comercializados pela empresa Sigma-Aldrich, ou então podem ser facilmente preparados por aplicação ou adaptação de métodos conhecidos. Por exemplo, os compostos dc fórmula estrutural (III), em que o símbolo 2 representa um grupo SH, podem ser preparados por métodos descritos por G. Fuchs em ‘Ark-Kemi’, 1966, 26, 111 e 1968, 29, 379; os compostos de fórmula estrutural (III), em que o símbolo Z representa um grupo β-amino, podem ser preparados pelos métodos descritos por G. J. McGarvey et al. em ‘Tetrahedron Letters’, 1983, 24, 2733; os compostos quirais de grupo cx-OH de fórmula estrutural (III) podem ser preparados pelos métodos descritos por Kenne et al. em ‘J. Chem. Soc. Perkin Trans. I’, 1988, 1183; e o composto de grupo α-cloro de fórmula estrutural (VI) pode ser preparado pelos métodos descritos por P. Four et al. em ‘J. Org. Chem.’, 1.981 , 46, 4439.

Os isómeros individuais de fórmula estrutural (I) no local de ligação do radical lactona podem ser preparados a partir de materiais primitivos que possuam a estereoquímica adequada ou então por epimerização, cristalização fraccional por resolução ou cromatografia (v.g. separação por CLER) numa fase adequada da síntese dos compostos pretendidos de fórmula estrutural (I), recorrendo a métodos convencionais.

Assim, por exemplo, faz-se observar que um processo de sintese em que se utilize uma mistura racémica de compostos de uma das fórmulas estruturais (III) ou (VI) irá proporcionar compootoo dc fórmula estrutural (I) sob a forma de uma mistura de diaste-reoisómeros, os quais podem então ser separados. Em alternativa, os diastereoisómeros individuais podem ser preparados utilizando 22

compostos de uma das fórmulas estruturais (III) ou (VI) na sua forma enantiomericamente pura.

De um modo idêntico, os compostos de fórmula estrutural (I) em que os substituintes R2 e R3, considerados em conjunto, formam um grupo de fórmula estrutural -"w*

-O RT em que o substituinte R6 é diferente do substituinte R7, podem existir nas formas diastereoisoméricas R e S. A síntese de tais compostos pode ser estereospecífica, por forma a serem obtidos diastereoisómeros individuais. Assim, por exemplo, o diastereoisómero R de um composto de fórmula estrutural (I), em que o símbolo R6 representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R7 representa um grupo n-propilo, pode ser convenientemente preparado por transacetalação do correspondente derivado de grupo 16a, 17a-isopropilideno-dioxi com butiraldeído, na presença de um catalisador ácido, tal como o ácido perclórico, conforme descrito no documento EP0262108. A reacção de transacetalação pode ser efectuada enquanto passo intermédio ou após a introdução do grupo lactona.

Os solvatos (v.g. hidratos) de um composto de fórmula estrutural (I) podem ser formados durante o procedimento de execução de um dos passos dos processos referidos antes. Assim, os compostos de fórmula estrutural (I) podem ser isolados em conjunto com moléculas de solvente por cristalização ou evaporação a partir de um solvente adequado para se obter os correspondentes solvatos.

Os exemplos seguintes ilustram a invenção, sem contudo a limitarem de nenhum modo.

EXEMPLOS

Geral 23 R7

Os pontos de fusão foram determinados num bloco de Kofler e os seus valores não estão corrigidos. Os espectros de ΗΜΝ-1!! foram registados a 250 MHz ou 400 MHz e os desvios químicos são expressos em ppm relativamente ao tetrametilsilano. Foram utilizadas as abreviaturas a seguir indicadas para descrever as multiplicidades dos sinais: s (singuleto), d (dupleto), t (tripleto), q (quarteto), m (multipleto), dd (dupleto de dupletos), durante (dupleto de tripletos) e lr (largo). As abreviaturas EM(TMM+) e EM(EM+) designam os espectros de massa determinados utilizando respectivamente as técnicas de termomicronizaçâo ou electromicronização em modo positivo. A abreviatura EMER (EM+) refere-se ao espectro de massa determinado por electromicronização de elevada resolução em modo positivo. A CCF (cromatografia em camada fina) foi realizada sobre placas F254 de gel de sílica 60 da Merck e a cromatografia em coluna foi realizada através de gel de sílica 60 (Art. 7734 ou 9385) da Merck. A CCP (cromatografia em camada preparativa) foi realizada em placas de sílica da whatman. A cler (cromatografia em líquido de elevado rendimento) preparativa foi realizada num sistema ‘Gilson Medicai Electronics*, utilizando a fase estacionária indicada no exemplo. A abreviatura DMF é utilizada para designar a N,N-dimetilformamida anidra. Efectuou-se a secagem das soluções orgânicas sobre sulfato de magnésio.

No caso de serem preparadas misturas de isómeros resultantes do centro assimétrico no grupo lactona, é possível separar estes isómeros por técnicas convencionais de cromatografia através de silica, sendo-lhes depois atribuídas as designações de isómeros A e B respectivamente em função da sua ordem de eluição a partir da coluna.

Intermediário 1 Ácido 6a,9a-diflúor-llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi- 24

-androsta-4-eno-17p-carboxílico

Adicionou-se 1,36 g (3 mmol) de ácido 6a,9a-diflúor-ΙΙβ-hidroxi—16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l, 4-dieno-17p-carboxílico a uma solução de 150 mg de catalisador de Wilkinson em 100 mL de acetato de etilo e agitou-se a solução resultante sob uma atmosfera de hidrogénio até se completar a hidrogenação. Verificou-se a evolução da reacção por CLER. Depois extraiu-se a solução com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (4 x 50 mL) e lavou-se as camadas aquosas combinadas, utilizando para tal 75 mL de acetato de etilo, antes da aeidiJCicação da camada aquosa para pH 11 com ácido clorídrico concentrado. Em seguida extraiu-se com 75 mL de acetato de etilo, secou-se e evaporou-se o extracto para se obter 1,14 g (84%) do composto em epígrafe no estado sólido: p.f. 216°C-218°C; EM(TMM+) m/z 455 [MH]+; RMN δ (DMSO-dg) inclui 12,50 (1H, s lr), 5,80 (1H, s), 5,60 e 5,40 (1H, 2m), 5,13 (1H, m), 3,18 (1H, m), 2,34 (2H, q, J 8 Hz), 1,48 (3H, s), 1,00 (6H, set, J 8 Hz), 0,85 (3H, d, J 9 Hz).

Intermediário 2 S-(anidrido ácido Ν,Ν-dimetilcarbâmico) do ácido 6a, 9a-diflúor-ΙΙβ- -hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-4-eno-17P- -carbotióico

Adicionou-se 378 μL (2,72 mmol) de trietilamina a uma suspensão de 825 mg (1,81 mmol) de ácido 6a, 9a-diflúor-lip-hidroxi-16a-metil-3—oxo-17a-propíoniloxi-androsta-4-eno-17p-carboxílico (intermediário 1) em 12 mL de diclorometano anidro sob uma atmosfera de azoto. Obteve-se uma solução límpida, à qual se

adicionou, de uma só vez, 669 mg (5,43 mmol) de cloreto de N,N-dimetiltiocarbamoílo, tendo a solução sido então agitada à temperatura ambiente e a sua evolução verificada por CLER. Depois de se completar a reacção, diluiu-se com 50 mL de acetato de etilo e lavou-se sucessivamente com 30 mL de ácido clorídrico 1M, 30 mL 25

de uma solução de bicarbonato de sódio a 5% e 30 mL de uma solução de salmoura, antes de se realizarem as operações de secagem e evaporação para se obter o produto impuro com o aspecto de uma espuma. Purificou-se este produto por cromatografia em camada preparativa através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura de dicloroiuetano/éter dietilico (5:2), para se obter 507 mg (58%) do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 189°C-191°C; IV (KBr) 3363, 1750, 1722, 1669, 1651 cm"1; RMN δ (CDC13) inclui 6,13 (1H, s), 5,20 e 5, 35 (1H, 2m), 4,37 (1H, m) , 3,33 (1H, m), 3,08 c 3,16 (6H, 2o), 2,42 (2H, q, J7 Hz), 1,51 (3H, s), 1,14-1,20 (6H, set, J 7 Hz), 0,98 (3H, d, J 7 Hz) . (Encontrado: C, 59,53; H, 7,11; N, 2,40 ; S, 5,69 Calculado para C27H37F2N06S: C, 59,87; H, 6,89; N, 2,59; S, 5,92%). Intermediário 3 Ácido 6a, 9a-diflúor-llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi--androsta-4-eno-17P-carbotióico

Preparou-se uma mistura de 490 mg (0,905 mmol) de S-(anidrido do ácido Ν,Ν-dimetilcarbâmico) do ácido 6a,9a-diflúor-lip-hidroxi--16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-4-eno-17p-carbotióico (in-termediário 2) em 5 mL de dietilamina e aqueceu-se ao refluxo sob uma atmosfera de azoto. Verificou-se a evolução da reacção por análise em CCF e quando se conclui que estava completa verteu-se a mistura de reacção sobre uma mistura arrefecida com gelo constituída por 60 mL de ácido clorídrico 3,5M e 40 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com 30 mL de água e extraiu-se com uma 3olução de carbonato de sódio a 5% (3 x 20 mL) . Depois separou-se em camadas os extractos básicos combinados, utilizando para tal 40 mL de acetato de etilo, e ajustou-se o valor do seu pH para 1 com ácido clorídrico 6M. Separou-se a fase orgânica, secou-se e evaporou-se para se obter 190 mg (45%) do composto em epígrafe: p.f. 147°C-151°C; EM(TMM+) m/z 471 [MH]+; RMN 8 (CDC13) inclui 6,13 (1H, s), 5,38 e 5,19 (1H, 2m), 4,40 (1H, m), 3,28 (1H, 26

m), 2,43 (2H, q, J 7 Hz), 1,52 (3H, s), 1,17 (3H, t, J7 Hz), 1,13 (3H, s), 0,99 (3H, d, J 7 Hz).

Intermediário 4 Éster 2-oxo-tetra-hidrofurano-3R-ilico do ácido metano-sulfónico A uma solução agitada de 400 mg (3,92 mmol) de (R)-3-hidroxi-2-oxo-tetra-hidrofurano e 601 μΐι (4,31 mmol) de trietilamina em 15 mL de diclorometano anidro, à temperatura de 0°C e sob uma atmosfera de azoto, adicionou-se 334 jiL (4,31 mmol) de cloreto de metano-sulfonilo. Agitou-se a mistura resultante à temperatura de 0°C durante 0,25 horas e à temperatura de 21°C durante 2,5 horas. Juntou-se mais 109 μΙ< (0,78 mmol) de trietilamina e 61 μΐι (0,78 mmol) de cloreto de metano-sulfonilo e agitou-se a mistura durante 1,5 horas. Verteu-se a mistura de reacção sobre 20 mL de água e extraiu-se com 20 mL de diclorometano a camada aquosa separada. Lavou-se as camadas orgânicao combinadaa, utilizando para tal 20 mL de uma solução saturada de bicarbonato de sódio e 20 mL de salmoura saturada e depois secou-se sobre sulfato de magnésio anidro. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter um resíduo amarelo que foi purificado por cromatografia em coluna intermitente através de gel de sílica, utilizando como eluente uma mistura a 3:2 de acetato de etilo:ciclo-hexano. A remoção do solvente das fracções adequadas, sob pressão reduzida, proporcionou 214 mg (30%) do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino branco: p.f. 69°C- -72°C; EM(TMM+) m/z 198 (M+NH4)+; IV v^. (KBr) 1774, 1363 cm'1; RMN δ (CDC13) 5,33 (1H, t, J 9 Hz), 4,53 (1H, dt, J 9 e 3,5 Hz), 4,43- -4,28 (1H, m) , 3,30 (3H, s), 2,88-2,72 (1H, m) , 2,66-2,47 (1H, m) . (Encontrado: C, 33,53; H, 4,16; S, 17,35-

Calculado para C5H8O5S*0,05H2O: C, 33,17; H, 4,51; S, 17,71%).

Intermediário 5 Éster 2~oxo-tetra-hidrofurano-3S-ílico do ácido metano-sulfónico 27

r> ___

Adicionou-se 1,67 mL (21,56 itimol) de cloreto de metano--sulfonilo a uma solução agitada constituída por .2 g (19,6 mmol) de (S)-3-hidroxi-2-oxo-tetra-hidrofurano, 240 mg (1,96 mmol) de 4-N,N--dimetilaminopiridina e 3,76 mL (21,56 mmol) de diisopropiletilamina em 20 mL de diclorometano anidro, sob uma atmosfera de azoto e à temperatura de -40°C. Agitou-se a mistura durante 30 minutos, depois deixou-se aquecer até à temperatura ambiente, lavou-se então com 50 mL de uma solução de ácido clorídrico 2M, secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por croma-tografia intermitente através de gel de sílica, efectuando a eluiçâo com uma mistura a 1:1 de acetato de etilo/ciclo-hexano. Por trituração com éter dietílico e secagem in vacuo obteve-se 2,23 g (63%) do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino branco: p.f. 70°C-75°C; RMN δ (CDC13) inclui 5,33 (1H, t, J 8 Hz), 4,53 (1H, dt, J 9 e 2 Hz), 4,34 (1H, dt, J 10 e 6 Hz) , 3,28 (3H, s), 2,86- -2,72 (1H, m), 2,65-2,47 (1H, m) .

Intermediário 6 S-(anidrido ácido Ν,Ν-dimetilcarbâmico) do ácido 16a,17g-(R-butileno-dioxi)-6a, 9a-diflúor-ll3-hidroxi-3-oxo-androsta-4-eno-17p-carbotióico

Adicionou-se 550 μL (3,94 mmol) de trietilamina a uma suspensão de 1,345 g (2,96 mmol) de ácido 16a,17a-(R-butilenodioxi)-6a, 9a--diflúor-lip-hidroxi-3-oxo-androsta-4-eno-17p-carboxílico em 20 mL de diclorometano anidro sob uma atmosfera de azoto. Obteve-se uma solução límpida, à qual se adicionou, de uma só vez, 1,11 g (9 mmol) de cloreto de Ν,Ν-dimetíltiocarbamoílo, tendo a solução sido então agitada à temperatura ambiente e a sua evolução verificada por CLER. Depoio de 3e completar a reacção, concentrou ae a mistura sob pressão reduzida, dissolveu-se o resíduo em 50 mL de acetato de etilo e lavou-se sucessivamente com 30 mL de ácido clorídrico 2M, 30 mL de uma solução de bicarbonato de sódio a 5% e 30 mL de uma solução de salmoura, antes de se executarem as operações de secagem 28 ;-**v *«*0 *»$»$*.*

e evaporação para se obter o produto impuro com o aspecto de uma espuma. Purificou-se este produto por cromatografia em coluna através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura de acetona/diclorometano (1:9), para se obter 840 mg (52%) do composto em epígrafe com o aspecto de uma espuma: EM(EM+) m/z 542 (MH)+; RMN δ (CDC13) inclui 6,15 (1H, s), 5,37 e 5,18 (1H, 2m), 4,86 (1H, d, J 5 Hz), 4,78 (1H, t, J 4 Hz), 4,40 (1H, m), 3,14 e 3,09 (6H, 2s) , 1,52 (3H, s), 1,04 (3H, s), 0,96 (3H, d, J7 Hz).

Intermediário 7 Ácido 16a,17a-(R-butilenodioxi)-6a, 9a-diflúor-liP-hidroxi-3-oxo--androsta-4-eno-17P-carbotióico

Preparou-se uma mistura de 830 mg (1,53 mmol) de S-(anidrido ácido N,N-dimetilcarbâmico) do ácido 16a, 17a-(R-butilenodioxi)-6a, 9a—diflúor-llp-hidroxi-3-oxo-androsta-4-eno-17p-carbotióico (intermediário 6) em 8 mL de dietilamina & aqueceu-se ao refluxo sob uma atmosfera de azoto. Verificou-se a evolução da reacção por análise em CCF e quando se concluiu que estava completa concentrou-se a mistura de reacção sob pressão reduzida, dissolveu-se o resíduo em 50 mL de acetato de etilo e acidificou-se com 40 mL de ácido clorídrico 2M. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com 30 mL de água e extraiu-se com uma solução de carbonato de potássio a 5% (5 x 20 mL) . Dispôs- -se em camadas os extractos básicos combinados, utilizando para tal 40 mL de acetato de etilo, e ajustou-se o valor do seu pH para l com ácido clorídrico 6M. Separou-se a fase orgânica, secou-se e evaporou-se para se obter 103 mg (14%) do composto cm epigrafe com o a3pecto de uma espuma: EM(EM+) m/z 469 [M-H]'; RMN δ (CDC13) 6,15 (1H, s), 5,38 e 5,18 (1H, 2m) , 4,9-4,7 (2H, m) , 4,40 (1H, m) , 1,52 (3H, s) , 1,03 (3H, s), 0,96 (3H, t, J 7 Hz).

Exemplo 1 29

^Λ^.ϊί,'Μΐ.'^Μ1**·····?·’-·'* - · · -V Ο, -'r , ... v/ > y\^C-*X·· ’ Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 6a, 9a-diflúor--llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4-dieno--17P-carbotióico

Adicionou-se 76 mg (0,55 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 258 mg (0,55 mmol) de ácido 6a, 9a--diflúor-lip-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l, 4--dieno-17P~carbotióico em 4 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto e depois arrefeceu-se com gelo. Acrescentou-se então 56 μΐ, (0,68 mmol) de a-bromo-y-butirolactona e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme verificado por CCF. Repartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL), secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em coluna intermitente através de gel de sílica, utilizando inicialmente éter como solvente e finalmente acetato de etilo, para se isolar 120 mg (39,5%) do isómero A do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 237°C-238°C; EM(TMM+) m/z 553 [MH]+; IV v^. (KBr) 1768, 1739, 1671, 1633 cm’1; RMN δ (CDC13) 7,17 (1H, d, J 10 Hz), 6,42 (1H, s lr), 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,49 e 5,39 (1H, 2m), 4,50—4,10 (4H, m), 3,31 (1H, m), 2,36 (2H, g, J 7,5 Hz), 1,53 (3H, s), 1,15 (3H, s), 1,13 (3H, t, J 7,5 Hz), 0,99 (3H, d, J 6,25 Hz). (Encontrado: C, 60,72; II, 6,39; S, 5,50. Calculado para C28H34F2O73; C, 60,85; H, 6,30; S, 5,80%) e 116 mg (38,2%) do isómero B do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 220°C-222°C; EM(TMM+) m/z 553 [MH]+; IV v^. (KBr) 1769, 1740, 1678, 1633 cm*1; RMN δ (CDC13) 7,16 (1H, d, J 10 Hz), 6,43 (1H, s lr) , 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,49 e 5,39 (1H, 2m), 4,62-4,32 (3H, m), 4,06 (1H, m), 3,32 (1H, m) , 1,53 (3H, s), 1,12 (6H, m), 0,98 (3H, d, J 6,25 Hz). (Encontrado: C, 60,96; H, 6,28; S, 5,70. Calculado para C28H34F2O7S: C, 60,85; H, 6,20; S, 5,80%)

Exemplo 2 30 ·**»*· ί

Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3S-ílico) do ácido 6a, 9a-diflúor--liP-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4-dieno--17p-carbotióico Método 1

Adicionou-se 168 mg (0,64 mmol) de trifenilfosfina a uma solução de 0,126 mL (0,64 mmol) de azodicarboxilato de diisopropilo em 3 mL de tetra-hidrofurano agitada à temperatura de 0°C sob uma atmosfera do azoto. Após a formação de um precipitado amarelo, juntou-se uma solução de 200 mg (0,43 mmol) de ácido 6a,9a-diflúor-Ιΐβ-hidroxi- -16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4-dicno-17p-carbotióico e 65 mg (0,64 mmol) de (R)-a-hidroxi-y-butirolactona em 3 mL de tetra- -hidrofurano e verificou-se a evolução da reacção por análise em CCF. Depois de terminada a reacção, removeu-se o solvente, fez-se absorver o resíduo directamente em gel de sílica e purificou-se por cromatografia em coluna intermitente, efectuando a eluição com éter dietílico. Isolou-se 149 mg (63%) do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino branco: p.f. 236°C-238°C; os dados analíticos e espectroscópicos eram idênticos aos obtidos anteriormente para o isómero A do exemplo 1. Método 2

Efectuou-se o tratamento de 93 mg (0,52 mmol) do éster 2-oxo--tetra-hidrofurano-3R-ílico do ácido metano-sulfónico (intermediário 4) com uma solução constituída por 253 mg (0,52 mmol) de sal sódico do ácido 6a, 9a-diflúor-lip-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi--androsta-1,4-dieno-17p-carbotióico em 3 mL de DMF e agitou-se a mistura à temperatura de 20°C sob uma atmosfera de azoto durante 2,5 horas. Verificou-se a evolução da reacção por CCF. Depois de se completar a reacçao, diluiu-se a mistura de reacção com acetato de etilo e verteu-se sobre água. Lavou-se a solução orgânica com bicarbonato de sódio, com ácido clorídrico 2M e com salmoura, secou-se e evaporou-se até à secura para se obter 246 mg (86%) do 31

composto em epígrafe: 237°C-238°C; os dados espectroscópicos eram idênticos aos obtidos anteriormente para o isómero A do exemplo 1. Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3R-ílico) do ácido 6a,9a-diflúor--llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17g-propioniloxi-androsta-l,4-dieno--17P-carbotióico

Adicionou-se 168 mg (0,64 mmol) de trifenilfosfina a uma solução de 0,126 mL (0,64 mmol) de azodicarboxilato de diisopropilo em 3 mL de tetra-hidrofurano agitada à temperatura de 0°C sob uma atmosfera de azoto. Após a formação de um precipitado amarelo, juntou-3e uma solução de 200 mg (0,43 mmol) de ácido 6a,Da-diflúor-Ιΐβ-hidroxi- -16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4-dieno-17P-carbotióico c 65 mg (0,64 mmol) dc (S)-a-hidroxi-y-butirolactona em 3 mL de tetra-hidrofurano e verificou-se a evolução da reacção por análise em CCF. Depois de se completar a reacção, removeu-se o solvente, fez-se absorver o resíduo directamente em gel de sílica e purificou-se por cromatografia em coluna intermitente, efectuando a eluição com éter dietílico. Isolou-se 143 mg (61%) do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino branco: p.f. 219°C-222°C; os dados analíticos e espectroscópicos eram idênticos aos obtidos anteriormente para o isómero B do exemplo 1.

Exemplo 4 Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 6a, 9a-diflúor-=m -hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-4-eno-17B--carbotióico

Adicionou-se 102 mg (0,735 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 346 mg (0,735 mmol) de ácido 6a, 9a-diflúor-llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta--4-eno-17p-carbotióico (intermediário 3) em 5 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto e depois arrefeceu- 32 ·*·ΤΓί·<·νΐ,·

(— jf- l·—«* -se com gelo. Acrescentou-se então 70 μΐ< (0,85 mmol) de oc-bromo-y--butirolactona e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme verificado por CCF. Repartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL), secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em coluna intermitente através de gel de sílica, utilizando inicialmente éter como solvente e finalmente acetato de etilo, para se isolar 85 mg (20%) do isómero A do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 244°C-246°C; EM(TMM+) m/z 572 [MNH4]+; IV Vmáx. (KBr) 1773, 1742 cm"1; RMN Ô (CDC13) 6,14 (1H, s) , 5,37 e 5,18 (1H, 2m) , 4,52 (1H, m) , 4,43-4,28 (2H, m), 4,18 (1H, m), 3,33 (1H, m), 2,75 (1H, m), 2,40 (2H, q, J 7 Hz), 1,52 (3H, s), 1,13 (3H, t, J 7 Hz), 1,12 (3H, s) , 1,01 (3H, d, J 7 Hz). (Encontrado: C, 60,33; H, 6,74; S, 5,70. Calculado para C28H36F2O7S: C, 60,63; H, 6,54; S, 5,78%) e 80 mg (20%) do isómero B do composto cm cpigrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 195°C~ 197°C; EM(TMM+) m/z 572 [MNH4]+; IV v^. (KBr) 1770, 1747 cm"1; RMN δ (CDC13) 6,07 (1H, s), 5,30 θ 5,11 (1H, 2m), 4,49 (1H, m) , 4,37-4,24 (2H, m), 3,96 (1H, m), 3,36 (1H, m), 2,64 (1H, m), 2,34 (2H, q, J7 Hz), 1,44 (3H, s), 1,08 (3H, t, J7 Hz), 1,04 (3H, s) , 0,93 (3H, d, J 7 Hz). (Encontrado: C, 60,34; H, 6,60; S, 5,63. Calculado para C28H36F2O7S: C, 60,63; H, 6,54; S, 5,78%).

Exemplo 5 Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 17a-butiriloxi--6a,9a-diflúor-liP-hidroxi-16a-metil-3-oxo-androsta-l,4-dieno-17p--carbotióico

Adicionou-se 59 mg (0,43 mmol) de carbonato de potássio anidro cm pó a uma 3olução agitada de 206 mg (0,43 mmol) de ácido 17a-buti~ riloxi-6a, 9a-diflúor-lip-hidroxi-16a-metil-3-oxo-androsta-l, 4-dieno--17p~carbotióico em 3 mL de DMF anidra. Agitou-oc a mistura aob uma atmosfera de azoto e depois arrefeceu-se com gelo. Acrescentou-se 33

então 46 μL (0,53 mmol) de α-bromo-y-butirolactona e agitou-se a mistura até a reacçâo estar completa, conforme verificado por CCF. Repartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL), secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em camada preparativa através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 2:1 de clorofórmio/acetato de etilo, para se obter 30,7 mg (13%) do isómero A do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 143°C-145°C; EM(TMM+) m/z 567 [MH]+; IV v**. (KBr) 1772, 1741, 1669, 1629 cm-1; RMN δ (CDC13) 7,14 (1H, d, J 10 Hz), 6,42 (1H, s) , 6.39 (1H, d, J 10 Hz), 5,49 e 5,29 (1H, 2m), 4,50 (1H, m) , 4,39 (2H, m), 4,31 (1H, m), 4,13 (1H, m), 3,32 (1H, m), 2,75 (1H, m), 1,54 (3H, s), 1,16 (3H, s), 1,00 (3H, d, J6,25 Hz), 0,95 (3H, t, J 7,25 Hz). (Encontrado: C, 60,87; H, 6,40; S, 5,42. Calculado para C29H36FO7S*0,4H2O: C, 60,70; H, 6,46; S, 5,59%) e 46 mg (19%) do isómero B do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 164°C-166°C; EM(TMM+) m/z 567 [MNH4]+; IV v^. (KBr) 1771, 1743, 1668, 1630 cm'1; RMN 8 (CDCl3) 7,14 (1H, d, J 10 Hz), 6,43 (1H, s), 6,39 (1H, d, J 10 Hz), 5,49 e 5,30 (1H, 2m), 4,55 (1H, m), 4.39 (2H, m), 4,09 (1H, m), 3,31 (1H, m), 2,70 (1H, m), 1,53 (3H,

s), 1,14 (3H, s), 0,95 (6H, d, J 6,25 Hz e t, J 7,25 Hz). EMER (EM+) encontrado 567,2200, [MH]+, calculado para C29H37F2O7S: C, 567,2205.

Exemplo 6 Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 17a-acetiloxi--6a, 9a-diflúor-llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-androsta-l,4-dieno-173~ -carbotióico

Adicionou-se 55 mg (0,40 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 181 mg (0,40 mmol) ácido 17a-acetiloxi--6a, 9a-diflúor-ll|3-hidroxi-16a-metil-3-oxo-androsta-l,4-dieno-17p--carbotióico em 3 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma 34 r\ rPr atmosfera de azoto e depois arrefeceu-se com gelo. Acrescentou-se então 43 μΐ (0,50 mmol) de a-bromo-y-butirolactona e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme verificado por CCF. Repartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL), secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em camada preparativa através de gel de silica, efectuando a eluição com uma mistura a 10:10:1 de clorofórmio:ciclo-hexano:etanol, para se obter 74 mg (34%) do isómero A do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 253°C-255°C; EM(TMM+) m/z 539 [MH]+; IV v^. (KBr) 1766, 1750, 1669, 1631 cm'1; RMN δ (CDC13) 7,13 (1H, d, J 10 Hz), 6.43 (1H, s), 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,49 e 5,28 (1H, 2m), 4,50 (1H, m), 4,37 (2H, m), 4,13 (1H, m), 3,30 (1H, m), 2,74 (1H, m) , 2,06 (3H, s), 1,54 (3H, s), 1,18 (3H, s), 1,00 (3H, d, J1 Hz). (Encontrado: C, 58,81; H, 5,88; S, 5,78. Calculado para C27ll3zFz070»0,7ll20: C, 50,03; II, 6,11; S, 5,02%) e 74 mg (34%) do isómero B do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 258°C-260°C; EM(TMM+) m/z 539 [MH]+; IV v^. (KBr) 1772, 1752, 1668, 1630 cm'1; RMN δ (CDC13) 7,13 (1H, d, J 10 Hz), 6.43 (1H, s lr), 6,39 (1H, d, J 10 Hz), 5,49 e 5,29 (1H, 2m), 4,56 (1H, m), 4,40 (2H, m), 4,10 (1H, m), 3,70 (1H, m), 3,31 (1H, m), 2,10 (3H, s), 1,55 (3H, s), 1,00 (3H, d, J 7 Hz). (Encontrado: C, 58,76; H, 5,77; S, 5,71. Calculado para Cz7H32F2O7S*0,7H20: C, 58,83; H, 6,11; S, 5,82%) .

Exemplo 7 Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 9a-flúor-lip-hidroxi-16p-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4-dieno-17P~ carbotióico

Adicionou-se 76 mg (0,55 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 352 mg (0,75 mmol) de ácido 9a-flúor--lip-hidroxi-16p-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4-dieno- 35 :ίΛ*ι«ίΐ9»*~».ι** 'λ'': :ίΛ*ι«ίΐ9»*~».ι** 'λ'': Ο r (~t? r-C, V,,~ -l7p~carbotióico em 7 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto e depois arrefeceu-se com gelo. Acrescentou-se então 78 μΙ* (0,94 mmol) de a-bromo-y-butirolactona e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme verificado por CCF. Repartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL), secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em coluna intermitente através de gel de sílica, utilizando inicialmente éter como solvente e finalmente acetato de etilo, para se isolar 124 mg (30%) do isómero A do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: EM(TMM+) m/z 535 [MH]+; EMER (EM+) encontrado: 535,2169 [MH]+, calculado para C29H36FO7S: 535,2164; IV v^. (Nujol) 3443, 1772, 1742, 1716, 1663, 1621, 1605 cm-1; RMN Ô (CDCI3) 7,22 (1H, d, J 10 Hz), 6.36 (1H, d, J 10 Hz), 6,14 (1H, s lr), 4,49-4,28 (4H, m), 2,80 (1H, m), 2,37 (2H, q, J7,5 Hz), 1,56 (3H, s), 1,42 (3H, d, J6,35 Hz), 1,14 (3H, t, J 7,5 Hz), 1,06 (3H, s). (Encontrado: C, 61,90; H, 6,69; S, 5,83. Calculado para C28H35FC>7S*0,45H2O: C, 61,97; H, 6,67; S, 5,91%) e 156 mg (37%) do isómero B do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: EM(TMM+) m/z 535 [MH]+; EMER (EM+) encontrado: 535,2165 [MH]+, calculado para C29H36FO7S: 535,2164; IV v^. (Nujol) 3461, 1771, 1743, 1707, 1658, 1614 cm"1; RMN δ (CDC13) 7,22 (1H, d, J 10 Hz), 6,35 (1H, d, J 10 Hz), 6,13 (111, s lr), 4,61 (1H, m), 4,42 (1H, m), 4,34 (1H, m), 3,69 (1H, m), 2,82 (1H, m), 2.37 (2H, q, J7,5 Hz), 1,55 (3H, s), 1,38 (3H, d, J6,25 Hz), 1,15 (3H, t, J 7,5 Hz), 1,01 (3H, s). (Encontrado: C, 61,51; H, 6,72; S, 5,61. Calculado para C28H35FO7S*0,6H2O: C, 61,34; H, 6,71; S, 5,85%).

Exemplo 8 Éster S-(5-oxo-tetra-hidrofurano-2-ilico) do ácido 6a,9a-diflúor-llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4-dieno-17p-carbotióico 36 • V.-nvWÍA-VfWeíl^-JílWH'·

Adicionou-se 76 mg (0,55 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 258 mg (0,55 mmol) ácido 6α,9α--diflúor-llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17{x-propioniloxi-androsta-l, 4-dieno-17p-carbotióico em 5 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto e depois arrefeceu-se com gelo. Acrescentou-se então 69 pL (0,69 mmol) de γ-cloro-y-butirolactona e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme verificado por CCF. Repartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL) , secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em camada preparativa através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 20:20:1 de clorofórmio:ciclo-hexano:etanol, para se obter 50 mg (16%) do isómero A do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 152°C; EM(TMM+) m/z 553 [MH]+; IV v,**. (KBr) 3459, 1791, 1742, 1704, 1667, 1631 cm-1; RMN δ (DMSO-dg) 7,13 (1H, d, J 10 Hz), 6,44 (1H, s), 6,39 (1H, d, J 10 Hz), 6,28 (1H, m), 5,48 e 5,28 (1H, 2m), 4,41 (1H, m) , 3,41 (1H, m), 2,38 (2H, q, J7 Hz), 1,52 (3H, s), 1,14 (3H, l, J7 Hz), 1,14 (3H, s), 1,01 (3H, d, J 7 Hz); EMER (EM+) encontrado: 553,6446 [MH]+, calculado para C2aH35F207S: 553, 6445, e 34 mg (10%) do isómero B do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f, 210°C-213°C; EM (TMM+) m/z 553 [MH]+; TV v^,,. (KBr) 1787, 1743, 1669, 1632 cm'1; RMN δ (CDCls) 7,13 (1H, d, J 10 Hz) , 6,44 (1H, d, J 10 Hz), 6,38 (1H, s), 6,24 (1H, m), 5,48 e 5 ,28 (1H, 2m) , 4,40 (1H, m), 3,32 (1H, m), 2,36 (2H, q» J 7 Hz), 1,52 (3H, s), 1,16 (3H, m), 1,12 (3H, t, J 7 Hz), 1,02 (3H, d, J 7 Hz) ; EMER (EM+) encontrado: 553,6445 [MH]+, calculado para C28H35F2O7S: 553,6445.

Exemplo 9 Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-4-ilico) do ácido 6a,9a-diflúor-lip-liidroxl-16a-metll-3-oxo-17a-proplonlloxl-androsta-l,4-dieno-17P-carbotióico 37 ':;-·... Γ) . r

Adicionou-se 69 mg (0,5 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 234 mg (0,5 mmol) ácido 6α,9α--diflúor-lip-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4--dieno-17p-carbotióico em 2,5 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto e depois arrefeceu-se com gelo. Acrescentou-se então 69 μΐι (0,69 mmol) de y-cloro-y-butirolactona e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme verificado por CCí’. Kepartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL) , secou-se θ evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em camada preparativa através de gel de sílica, utilizando acetato de etilo como eluente, para se obter 9 mg (3%) do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: EM(BAR+) m/z 553 [MH]+; IV Vmáx. (KBr) 3474, 1784, 1745, 1667, 1633 cm"1; RMN δ (CDC13) 7,13 (1H, d, J 10 Hz), 6,45 (1H, s) , 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,48 e 5,28 (1H, 2m), 4,80-4,67 (1H, m), 4,41 (1H, m) , 4,35-4,2 (2H, m), 3,29 (1H, m), 3,05 (0,5H, t, J 5 Hz), 2,52 (0,5H, t, J 5 Hz), 2,47 (3H, q, J 8 HZ), 1,54 (3H, s), 1,05-1,27 (6H, m), 0,97 e 0,98 (3H, 2d, J 8

Hz); EMER (EM+) encontrado: 553,2083 [MH]+, calculado para C28II35F2O7S: 553,2072.

Exemplo 10 Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 6a, 9a-diflúor--1íP-hldroxi-iea-metil-S-oxo-^a-propioniloxi-androsta-l,4-dieno--173-carboxílico

Adicionou-se 103 mg (0,75 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 340 mg (0,75 mmol) de ácido 6a, 9a-diflúor-llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta--1,4-dieno-17p-carboxílico em 7 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto e depois arrefeceu-se com gelo. Acrescentou-se então 78 μΕ (0,94 mmol) de α-bromo-y-butirolactona e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme

í^7 \ X /

verificado por CCF. Repartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL), secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em camada preparativa através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 20s20:1 de clorofórmio:ciclo-hexano:etanol, para se obter 43 mg (11%) do isómero A do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 205°C-206°C; EM(TMM+) m/z 537 [MH]+; IV

Vmáx. (KBr) 3443, 1786, 1747, 1669, 1632, 1612 cm'1; RMN δ (CDC13) 7,27 (1H, d, .7 10 Hz), 6,29 (1H, d, J 10 Hz), 6,11 (1H, s) , 5,68 (1H, m) , 5,70 e 5,55 (1H, 2m), 4,33-4,22 (2H, m), 4,16 (1H, m), 3,21 (1H, m), 2,35 (2H, q, J 7 Hz), 1,48 (3H, s), 1,04 (3H, s). 1,00 (3H, t, J 7 Hz), 0,86 (3H, d, J 7 Hz); EMER (EM+) encontrado: 537,2295 [MH]+, calculado para C28H35F2O8: 537,2294, e 43 mg (11%) do isómero B do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 231°C-233°C; EM(TMM+) m/z 537 [MH]+; IV ν„*χ. (KBr) 3482, 1789, 1747, 1668, 1630 cm'1; RMN δ (CDC13) 7,13 (1H, d, J 10 Hz), 6,41 (1H, s), 6,39 (1H, d, J 10 Hz), 5,51 e 5,20 (1H, 2m), 5,10 (1H, m), 4,58 (1H, m), 4,46-4,32 (2H, m), 3,30 (1H, m), 2,40 (2H, q, J 7 Hz), 1,72 (3H, s), 1,55 (3H, s), 1,00 (3H, t, J 7 Hz), 0,96 (3H, d, J 7 Hz); EMER (EM+) encontrado: 537,2299 [MH]+, calculado para C28H35F2O8: 537,2297.

Exemplo 11 Éster s-(2-oxo-tetra-hidrofurano-5-ilico) do ácido 6a,9a-diflúor--ll3-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4-dieno--Γ/β-carboxílico

Adicionou-se 76 mg (0,55 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 24 9 mg (0,55 mmol) de ácido 6a, 9a--diflúor-ll3-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4--dieno-17p-carboxilico em 5 ml de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto e depois arrefeceu-se com gelo. 39

Acrescentou-se então 83 μΙ. (0,69 mmol) de γ-cloro-y-butirolactona e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme verificado por CCF. Repartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL), secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou- -se o produto impuro por cromatografia em camada preparativa através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 20:20:1 de clorofórmio:ciclo-hexano:etanol, para se obter 62 mg (21%) do isómero A do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 263°C-266°C; EM(TMM+) m/z 537 [MH]+; EMER (EM+) encontrado: 537,5780 [MH]+, calculado para C28H35F2O8: 537,5779; IVv*. (KBr) 3459, 1789, 1733, 1669, 1633 cm'1; RMN δ (DMSO-cfe) 7,10 (1H, d, J 10 Hz), 6,69 (1H, m), 6,44 (1H, s), 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,48 e 5,28 (1H, 2m), 4,37 (1H, m), 3,33 (1H, m), 2,37 (2H, q, J 7 Hz), 1,53 (3H, s), 1,13 (3H, t, J 7 Hz), 1,08 (3H, s), 0,93 (3H, d, J 7 Hz). (Encontrado: C, 61,77; H, 6,15. Calculado para C28H34F2O7*0,3H2O: C, 62,05; H, 6,43%) e 48 mg (16%) do Isómero B do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 241°C-243°C; EM(TMM+) m/z 537 [MH]\· EMER (EM 1) encontrado: 537,5788 [MH]\ calculado para C28H35F2O8: 537,5779; IV vtóx. (KBr) 3480, 1789, 1747, 1668, 1628 cm-1; RMN δ (DMSO-d6) 7,12 (1H, d, J 10 Hz), 6,58 (1H, m), 6,43 (1H, s), 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,48 e 5,28 (1H, 2m), 4,39 (1H, m), 3,22 (1H, m), 2,36 (2H, q, .7 7 Hz), 1,53 (3H, s), 1,11 (3H, t, J 7 Hz), 1,10 (3H, s), 0,95 (3H, d, J7 Hz); (Encontrado: C, 61,69; H, 6,05. Calculado para C28H34F2O8*0,4H2O: C, 61,85; H, 6,45%).

Exemplo 12 Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ilico) do ácido 6a,9a-diflúor-llp-hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno-173-carbotióico

Adicionou-se 44 mg (0,32 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 130 mg (0,286 mmol) de ácido 6<x,9a- 40 ***· Ώ f- ~~Π -diflúor-lip-hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta--1,4-dieno-17p-carbotióico em 1,4 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto e depois arrefeceu-se com gelo. Acrescentou-se então 30 μΐ. (0,36 mmol) de a-bromo-y-butirolactona e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme verificado por CCF. Repartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL), secou-se e evaporou-sc para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por CLER preparativa em fase normal (‘Dynamax* 60Á C18, 25 cm x 41 mm i.d.), efectuando a eluição com acetato de etilo a 70%-90%/heptano com um débito de 45 mL/minuto e uma detecção a 270 nm, para se obter 29 mg (20%) do isómero A do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 308°C-312°C; EM(TMM+) m/z 539 [MH]+; IV v^. (KBr) 3310, 1778, 1694, 1668, 1629 cm'1; RMN 6 (DMSO-dg) 7,24 (1H, d, J 10 Hz), 6,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,12 (1H, s), 5,73 e 5,52 (1H, 2m), 5,58 (1H, s lr), 4,88 (1H, m), 4,47-4,15 (4H, m), 1,49 (3H, s), 1,37 (3H, s), 1,20 (3H, s), 0,90 (3H, s) . (Encontrado: C, 59,77; H, 6,01. Calculado para

CzvHaaFiiOvS-0,3H20: C, 59,61; II, 6,04%) e 43 mg (29%) do isómero B do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 275°C-278°C; F.M (TMM+) m/z 539 [MH]+; IV v^*, (KBr) 3415, 2928, 1779, 1669, 1633 cm-1; RMN δ (DMSO-dg) 7,25 (1H, d, J 10 Hz), 6,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,11 (1H, s), 5,73 e 5,54 (1H, 2m), 5,57 (1H, m) , 4,89 (1H, m), 4,48-4,16 (4H, m) , 1,50 (3H, s) , 1,35 (3H, s), 1,20 (3H, s) , 0,88 (3H, s) . (Encontrado: C, 59,35; H, 6,05. Calculado para C27H32F2O7S*0,4H2O: C, 59,42; H, 6,06%).

Exemplo 13 Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-5-ílico) do ácido 6a,9a-diflúor-llB-hidroxi-16a,17a-isopropll1deno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno-17P-carbotióico

Adicionou-se 61 mg (0,44 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 200 mg (0,44 mmol) de ácido 6α, 9a--diflúor-llp-hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta- 41

-1,4-dieno-17p-carbotióico em 5 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto e depois arrefeceu-se com gelo. Acrescentou-se então 64 μΐι (0,53 mmol) de γ-cloro-y-butirolactona em 1 mL de DMF anidra e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme verificado por CCF. Repartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL), secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em coluna intermitente através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 1:1 de ciclo-hexano/acetato de etilo, para se obter 67 mg (28%) do isómero A do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 304°C-307°C; EM(TMM+) m/z 539 [MHJ+; IV \y*. (KBr) 1784, 1697, 1668, 1630 cm"1; RMN δ (CDC13) 7,14 (1H, d, J 10 Hz), 6,42 (1H, s), 6,39 (1H, d, J 10 Hz), 6,31 (1H, m), 5,50 e 5,30 (1H, 2m), 5,00 (1H, m), 4,42 (1H, m), 1,65 (3H, s), 1,49 (3H, s), 1,37 (3H, s), 1,00 (3H, s) . (Encontrado: C, 59,76; H, 6,13; S, 5,80. Calculado para C27H32F2O7S.0,2H20: C, 59,81; H, 6,02; S, 5,91%) e 67 mg (28%) do isómero B do composto em epígrafe com o aspecto do um sólido cristalino: p.f. 270°C-273°C; EM(TMM+) m/z 539 [MH]+; IV v^. (KBr) 1792, 1700, 1666, 1629 cm'1; RMN δ (mso-dg) 7,26 (1H, d, J 10 Hz), 6,31 (1H, d, J 10 Hz), 6,15 (2H, m), 5,74 e 5,54 (1H, 2m), 5,56 (1H, s) , 4,93 (1H, m), 4,20 (1H, m), 1,50 (3H, s), 1,35 (3H, s) , 1,14 (3H, s), 0,90 (3H, s) . (Encontrado: C, 59,16; H, 6,01; S, 5,54. Calculado para C27H32F2O7S*0,5H20: C, 59,22; H, 6,07; S, 5,86%).

Exemplo 14 Éster S-(2-oxo-leLra-hidrofurano-3-lllco) do âcldo 6a,9a-diflúor-ll3-hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-4-eno-17P-carboLióico A uma suspensão agitada de 448 mg (1,02 mmol) de ácido 6α,9α--diflúor-lip-hidroxi-16a, 17a-isopropilideiio-dioxi-3-oxo-androsta-4--eno-17p-carboxílico em 8 mL de diclorometano adicionou-se 160 μΐ. 42

Γ\ ,ο, \ϋ r. ,-4 \ /

^'Χχ,ΛΛΛλ.^- '......'""·' V (1,15 mmol) de trietilamina e 160 μΕ (1,11 mmol) de clorofosfato de dietilo e depois agitou-se a mistura para que tivesse lugar a formação do anidrido misto intermediário. Acrescentou-se uma solução do sal sódico de a-mercapto-y-butirolactona [composto preparado por adição de hidreto de sódio (70 mg de uma dispersão a 60% em óleo, 1,75 mmol) a uma solução constituída por 170 mg (1,44 mmol) de a- -mercapto-y-butirolactona em 4 mL de DMF] e verificou-se a reacçáo por análise em CCF. guando se conclui que a reacção estava completa, diluiu-se a mistura com 50 mL de acetato de etilo θ lavou-se, uti-lizando para tal HC1 1M (2 x 50 mL) , 50 mL de água, uma solução saturada de bicarbonato de sódio (2 x 50 mL), 50 mL de água e 50 mL de uma solução saturada de salmoura. Depois secou-se e concentrou—se a camada orgânica para se obter o material impuro com o aspecto de uma goma. Purificou-se este material por cromatografia em coluna intermitente através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 1:1 de acetato de etilo/ciclo-hexano. 0 isómero A do composto em epígrafe foi isolado com o aspecto de um sólido cristalino (60 mg, 11%) : p.f. 169°C-173°C; EM(TMM+) m/z 541 [MH]+; IV (KBr) 3397, 2959, 1780, 1690, 1657 cm"1; RMN δ (CDC13) 6,17 (1H, s), 5,36 e 5,24 (1H, 2m) , 5,05 (1H, d, J 5 Hz), 4,49 (1H, t, J 4 Hz), 4,44-4,34 (3H, m), 1,55 (3H, s) , 1,51 (3H, s), 1,29 (3H, s), 1,03 (3H, s) . (Encontrado: C, 58,92; H, 6,03; S, 6,25. Calculado para C27H34F2O7S*0,4H20: C, 59,20; H, 6,40; S, 5,85%) e 79 mg (14%) do isómero B do composto em epígrafe com o aspecto de uma espuma: EM(TMM+) m/z 541 [MH]+; IV v^, (KBr) 3379, 1780, 1691, 1658 cm"1; RMN δ (CDC13) 6,17 (1H, s), 5,36 e 5.24 (1H, 2m), 5,02 (1H, d, J 5 Hz), 4,59 (1H, t, J4,5 Hz), 4,46- 4.25 (2H, m), 3,98 (1H, t, J 10 Hz), 1,54 (3H, s) , 1,51 (3H, s), I, 32 (3H, s), 0,98 (3H, s) . (Encontrado: C, 59,32; H, 6,43; S, 5,96. Calculado para C27H34F2O7S*0,3H20: C, 59,39; H, 6,39; S, 5,87%) . 43

Exemplo 15 N- (2-oxo-tetra-hidrofurano-3S-il)-amida do ácido 6a, 9a-diflúor-liP--hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno-170--carboxílico

Preparou-se uma mistura de 100 mg (0,228 mmol) de ácido 6a,9a--diflúor-llp-hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-1,4—dieno-17p-carboxilico, 46 mg (0,202 mmol) de cloridrato de (S)-a- -amino-y-butirolactona, 31 mg (0,228 mmol) de 1-hidroxibenzotriazol, 81 mg (0,251 mmol) de tetrafluoroborato de O-(lH-benzotriazol-l-il)- -N, N, N\ N’-tetrametil-urónio e 0,04 mL (0,228 mmol) de diisopropil-etilamina em 5 mL de DMF e aqueceu-se sob agitação à temperatura de 100°C, sob uma atmosfera de azoto, até a reacção estar completa, conforme verificado por análise em CCF. Após o arrefecimento até à temperatura ambiente juntou-se 20 mL de acetato de etilo e 15 mL de ácido clorídrico (2M). Separou-se a camada aquosa e extraiu-se com 20 mL de acetato de etilo. Lavou-se as camadas orgânicas combinadas, utilizando para tal 15 mL de água e 15 mL de uma solução saturada de salmoura, secou-se sobre MgSCU anidro e concentrou-se para se obter o produto impuro com o aspecto de uma goma. Purificou-se este produto por cromatografia em coluna intermitente através de gel de sílica, efectuando a eluição com acetato de etilo, para se obter 60 mg (57%) do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 181°C-184°C; EM(TMM+) m/z 522 [MH]+; IV v^. (KBr) 3320, 1774, 1669, 1633 cm-1; RMN δ (CDC13) 7,18 (1H, d, J 10 Hz), 6,93 (1H, s lr), 6,42 (1H, s), 6,38 (1H, d, J 10 Hz), 5,50 e 5,30 (1H, 2m), 5,08 (1H, s lr), 4,91 (1H, m), 4,51 (1H, m), 4,33 (2H, m), 2,72 (1H, m), 1,79 (3H, s), 1,35 (3H, s), 1,22 (3H, s), 1,04 (3H, s). (Encontrado: C, 60,63; H, 6,59; N, 2,44. Calculado para C27H33F2NC>7*0,7H20: C, 60,71; H, 6,49; N, 2,62%). 44

Γ-'-h

Exemplo 16 N- (2-oxo-tetra-hidrofurano-3-il)-amida do ácido 6a, 9a-diflúor-lip--hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l, 4-dieno-17p- -carboxílico

Preparou-se uma mistura de 259 mg (0,591 mmol) de ácido 6α,9a--diflúor-lip-hidroxi-16a, 17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-1,4—dieno-17p-carboxílico, 108 mg (0,591 mmol) de cloridrato de (±)-a—amino-y-butirolactona, 80 mg (0,591 mmol) de 1-hidroxibenzotriazol, 113 mg (0,591 mmol) de cloridrato de 1— (3— dimetilamino-propil)-3- -etil-carbodiimida 0,11 mL (0,650 mmol) de diisopropiletilamina em 20 mL de dimetilformamida e aqueceu-se sob agitação à temperatura de 100°C, sob uma atmosfera de azoto, até se completar a reacção, conforme verificado por análise em CCF. Após o arrefecimento até à temperatura ambiente juntou-se 20 mL de acetato de etilo e 5 mL de ácido clorídrico (2M). Separou-se a camada aquosa e extraiu-se com 20 mL de acetato de etilo. Lavou-se as camadas orgânicas combinadas, utilizando para tal 15 mL de água e 15 mL de uma solução saturada de salmoura, secou-se sobre MgSOí anidro e concentrou-se para se obter o produto impuro com o aspecto de uma goma. Purificou-se este produto por cromatografia em camada preparativa através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 5:2 de acetato de etilo:ciclo-hexano, para se obter o isómero S do composto em epiqrafe, designado por isómero A, com o aspecto de um sólido cristalino, tal como obtido antes, e 40 mg (13%) do isómero R do composto em epígrafe, designado por isómero B, com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 3330C-336°C; EM(TMM+) m/z 522 [MH]+; IV v^, (KBr) 3484, 1775, 1668, 1632 cm'1; RMN δ (DMSO-de) 8,32 (IH, s) , 7,24 (1H, d, J 10 Hz), 6,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,10 (1H, s), 5,72 e 5,52 (1H, 2m), 5,52 (1H, s lr), 4,95 (1H, m), 4,57 (1H, ni), 4,34 (1H, xu) , 4,20 (1H, m) , 2,00 (3H, s) , 1,34 (3H, s), 1,17 (3H, s), 0,91 (3H, s). (Encontrado: C, 62,51; H, 45

6,61; Ν, 2,33. Calculado para C27H33F2NO7: C, 62,18; H, 6,38; N, 2,69%).

Exemplo 17 Éster (2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 6a, 9a-diflúor-ΙΙβ--hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-6xo-androsta-l,4-dieno-17p--carboxilico

Adicionou-se 65 mg (0,47 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 205 mg (0,47 mmol) de ácido 6a,9a-di-flúor-llp-hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4--dieno-17p-carboxilico em 4 mi· de UME anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto e depois arrefeceu-se com gelo. Acrescentou-se então 50 μΐ (0,58 mmol) de «-bromo-y-butirolactona e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme verificado por CCF. Ropartiu-ac a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL) , secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em camada preparativa através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 10:10:1 de clorofórmio:ciclo-hexano:etanol, para se obter 65 mg (27%) do isómero A do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 253°C-255°C; EM(TMM+) m/z 523 [MH]+; IV Vmáx. (KBr) 1785, 1732, 1667, 1631 cm-1; RMN δ (DMS0-de) 7,20 (1H, d, J 10 Hz), 6,44 (1H, s), 6,39 (1H, d, J 10 Hz), 5,68 (1H, m), 5,49 e 5,30 (1H, 2m), 5,18 (1H, m), 4,52 (1H, m), 4,37 (2H, m), 2,71 (1H, m), 1,52 (3H, s), 1,42 (3H, s), 1,21 (3H, s), 1,08 (3H, s). (Encontrado: C, 61,43; H, 6,07. Calculado para C27H32F2O8»0, 3H2O: C, 61,43; H, 6,22) e 53,2 mg (22%) do isómero B do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 300°C-304°C; EM(TMM+) m/z 523 [MH]+; IV Vná*. (KBr) 1/93, 1743, 1666, 1632 cm'1; RMN δ (DMSO-de) 7,10 (1H, d, J 10 Hz), 6,44 (1H, s), 6,39 (1H, d, J 10 Hz), 5,49 e 5,30 (1H, 2iu) , 5,38 (1H, m) , 5,15 (1H, m) , 4,46 (1H, m), 4,39 (2H, m), 2,70 (1H, m), 1,52 (3H, s) , 1,42 (3H, s) , 1,25 46 ·- - ---

61,76; H, 6,11. Calculado (3H, s), 1,06 (3H, s). (Encontrado: C, para C28H32F208: C, 62,06; H, 6,17%). Exemplo 18 do ácido 16a,17g-butilideno- Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) -dioxi-llp-hidroxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno-17P-carbotióico

Adicionou-se 24 mg (0,175 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 69 mg (0,16 mmol) de ácido 16a,17a-butilideno-dioxi-lip-hidroxi-3-oxo-androsta-l, 4-dieno-17p--carbotióico em 1,5 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto e depois arrefeceu-se com gelo. Acrescentou-se então 16,5 μΐ- (0,20 mmol) de α-bromo-y-butirolactona e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme verificado por CCF. Repartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL), secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por CLER preparativa em fase normal (‘Dynamax’ 60Â C18, 25 cm x 41 mm i.d.), efectuando a eluição com acetato de etilo a 70%-90%/heptano a um débito de 45 mL/minuto e com um detecçâo de 270 nm, para se isolar 23 mg (28%) da mistura A diastereomérica do composto em epigrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 129°C-132°C; EM(TMM+) m/z 517 [MH]+; IV v^. (KBr) 3459, 1775, 1693, 1653, 1618 cm-1; RMN δ (DMSO-ds) 7,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,18 (1H, d, J 10 Hz), 5,91 (1H, s), 4,87 (1H, m), 4,65 (2H, m), 4,30 (4H, m), 1,38 (3H, s), 0,97 (6H, m) . (Encontrado: C, 64,34; H, 7,24; S, 5,39. Calculado para C2eH36O7S*0,5H20: C, 64,26; H, 7,19; S, 5,72%) e 29 mg (35%) da mistura B diastereomérica do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 149°C-154°C; EM(TMM+) m/z 539 [MH]+; IV v^. (KBr) 3468, 1775, 1688, 1654, 1617 cm"1; RMN δ (DMS0-d6) 7,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,16 (1H, d, J 10 Hz), 5,90 (1H, s), 4,86 (1H, m), 4,68 (2H, m), 4,30 (4H, m), 1,37 (3H, s), 0,90 (6H, m) . (Encontrado: C, 64,43; H, 7,12; S, 5,78. Calculado para C28H32O7S*0,3H20: C, 64,42; H, 7,07; S, 6,14%). 47

Exemplo 19 Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 16a, 17a-(R-buti-lideno-dioxi)-6a,9a-diflúor-llp-hidroxi-3-oxo-androsta-4-eno-173--carbotióico A uma suspensão agitada de 200 mg (0,44 mmol) de ácido 16a, 17a—(R-butilideno-dioxi)-6a,9a-diflúor-lip-hidroxi-3-oxo-androsta-4-eno—17p-carboxílico em 3 mL de diclorometano adicionou-se 61 μΐ (0,44 mmol) de trietilamina e 64 μΐ, (0,44 mmol) de clorofosfato de dietilo e depois agitou-se a mistura para que tivesse lugar a formação do anidrido misto intermediário. Acrescentou-se uma solução do sal sódico de a-mercapto-γ-butirolactona [composto preparado por adição de hidreto de sódio (24 mg de uma dispersão a 60% em óleo, 0,6 mmol) a uma solução constituída por 72 mg (0,6 mmol) de α-mercapto-y-butiro-lactona em 1,5 mL de DMF] e verificou-se a reacção por análise em CCF. Depois de se completar a reacção, diluiu-se a mistura com 50 mL de acetato de etilo e lavou-se, utilizando para tal ácido clorídrico 1M (2 x 50 mL), 50 mL de água, uma solução saturada de bicarbonato de sódio (2 x 50 mL), 50 mL de água e 50 mL de uma solução saturada de salmoura. Depois secou-se e concentrou-se a camada orgânica para se obter o material impuro com o aspecto de uma goma. Purificou-se este material por eromatografia em camada preparativa através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 1:1 de acetato de etilo/éter do petróleo 40-60. O isómero A do composto em epígrafe foi isolado com o aspecto de uma espuma após a trituração com éter dietílico (84,5 mg, 35%) : EM(TMM+) m/z 555 [MH]+; IV Vmáx. (KBr) 3480, 1777 cm'1; RMN δ (CDCl3) 6,15 (1H, s), 5,37 e 5,18 (1H, 2m), 4,85 (1H, d, J 5 Hz), 4,74 (1H, t, J 4 Hz), 4,40 (1H, m), 4,54-4,22 (3H, m), 1,53 (3H, s), 1,02 (3H, s), 0,96 (3H, t, J 7,5 Hz). (Encontrado: C, 60,91; H, 7,05; S, 5,48. Calculado para C28H36F2O7S*0,55Et20: C, 60,92; H, 7,03; S, 5,39%) e o isómero B do composto em epígrafe foi isolado também com o aspecto de uma espuma 48

Γ\ [-'p ___v^ijtuíS*^ (68 mg, 31%) : ΕΜ(ΤΜΜ+) m/z 555 [ΜΗ]+; IV ν^. (KBr) 3466, 1771 cm'1; RMN δ (CDC13) 6,14 (1Η, s), 5,36 e 5,18 (1H, 2m), 4,82 (1H, d, J 5 Hz), 4,77 (1H, t, J 4,5 Hz), 4,35 (4H, m), 1,52 (3H, s), 0,96 (6H, t, J 7,5 Hz). (Encontrado: C, 61,22; H, 7,06; S, 5,39. Calculado para C28H36F207S*0,2C5Hi2: C, 61,37; H, 6,88; S, 5,59%). Éster S-(2-oxo-tetra-hldrofurano-3-ilico) do ácido 16«, I7a-(K-buti-lideno-dioxi)-6a,9a-diflúor-liP-hidroxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno--17p-carbotlólco A uma suspensão de 10 g de areia em 12,5 mL de heptano, à temperatura ambiente, adicionou-se 0,5 g (0,93 mmol) de éster S-(2-oxo--tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 6a, 9a-diflúor-llp-hidroxi- 16a, 17a—isapropilideno-di oxi-3-oxo-androsta-l,4-dleno-17β-ea rbot ióico (exemplo 12) sob agitação vigorosa. A esta suspensão acrescentou-se 0,123 mL (1,39 mmol) de butanal e depois 0,320 mL (3,71 mmol) de ácido perclórico e agitou-se então a suspensão à temperatura ambiente até a reacção estar completa, conforme comprovado por análise em CCF. Arrefeceu-se a mistura de reacção em gelo antes de se adicionar 8 mL de uma solução aquosa a 10% de K2C03, assegurando-se assim que a tem-peratura interna nâo ultrapassa 25°C. Recolheu-se a areia por filtração e lavou-se com heptano (4 x 20 mL), água (6 x 20 mL) e acetato de etilo (4 x 40 mL), lavou-se as camadas combinadas de acetato de etilo com 20 mL de uma solução de salmoura, secou-se e concentrou-se para se obter o produto impuro no estado sólido. Purificou-se o material por cromatografia em coluna intermitente através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 3:2 de acetato de etilo:ciclo-hexano. Isolou-se 74 mg (15%) do isómero A do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 260eC-264°c; EM(TMM+) m/z 553 [ΜΗ]+; IV v^. (KBr) 3341, 1774, 1698, 1668, 1629 cm'1; RMN δ (DMSO-d6) 7,25 (lH, d, J 10 Hz), 6,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,10 (1H, s lr) , 5,70 e 5,55 (1H, 2m), 5,60 (1H, s lr), 4,70 (2H, m), 4,50-4,15 (4H, m) , 1,48 (3H, s) , 49 • '···.· ?:>»* • '···.· ?:>»*

0,95 (3H, s), 0,86 (3H, t, J 7 Hz). (Encontrado: C, 60,72; H, 6,01; S, 5,51. Calculado para C28H34F2O7S: C, 60,86; H, 6,20; S, 5,80%) e 53 mg (10%) do isómero B do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 254°C-257°C; EM(TMM+) m/z 553 [ΜΗ]1·; IV νπώχ. (KBr) 3376, 1776, 1693, 1667, 1623 cm'1; RMN δ (DMSO-d*) 7,25 (1H, d, J 10 Hz), 6,25 (1H, d, J 10 Hz), 6,10 (1H, s Ir), 5,70 e 5,55 (1H, 2m), 5,60 (1H, s lr), 4,70 (1H, m) , 4,50-4,15 (4H, m), 1,47 (3H, s), 0,86 (6H, s) . (Encontrado: C, 60,91; H, 6,09; S, 5,62. Calculado para C28H34F2O7S: C, 60,86; H, 6,20; S, 5,80%).

Exemplo 21 Éster (2-oxo-tetra-hidrofurano-3-ílico) do ácido 16a, 17a-butilideno--dioxi-liP-hidroxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno-17P-carboxílico

Adicionou-se 37 mg (0,264 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 100 mg (0,24 mmol) de ácido 16a, 17a-butilideno-dioxi-llp-hidroxi-3-oxo-androsta-l, 4-dieno-17P~ -carboxilico em 1,3 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto e depois arrefeceu-se com gelo. Acrescentou-se então 2b μΐϋ (U,30 mmol) de a-bromo-y-butirolactona e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme verificado por CCF. Repartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água (2 x 25 mL), secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por CLER preparativa em fase inversa (‘Dynamax’ 60Â C18, 25 cm x 41 mm i.d.), efectuando a eluição com MeCN a 70%-90%/H2O a um débito de 45 mL/minuto e com um detecção de 230 nm, para se isolar 41 mg (34%) da mistura A diastereomérica do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 177°C-180°C; EM(TMM+) m/z 501 [MH]+; IV v^. (KBr) 3515, 1789, 1738, 1653, 1616 cm' 1; RMN δ (DMSO-dg) 7,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,18 (1H, d, J 10 Hz), 5,91 (1H, s), 5,65 (1H, m), 5,18 (1H, m), 4,86 (2H, m), 4,38 (3H, m), 1,38 (3H, s), 0,93 (3h, s), 0,85 (3H, t, J 7 Hz). (Encontrado: C, 66,31; H, 7,30. Calculado para C28H36O8*0,4H20: C, 66,23; H, 50

7,30%) e 38 mg (31%) da mistura B diastereomérica do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido cristalino: p.f. 128°C-133°C; EM(TMM+) m/z 501 [MH]+; IV v^. (KBr) 3490, 1789, 1738,-1653, 1614 cm"1; RMN δ (DMS0-d6) 7,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,17 (1H, d, J 10 Hz), 5,92 (1H, s), 5,60 (1H, m), 4,77 (3H, m), 4,32 (3H, m), 1,38 (3H, s), 0,95 (3H, s), 0,84 (3H, t, J 7 Hz). (Encontrado: C, 65,73; H, 7,23. Calculado para C28H3608*0, 6H20: C, 65,76; H, 7,33%).

Exemplo 22 N- (2-oxo-tetra-hidrofurano-3-il) -amida do ácido 16a, 17a~ (R -butilideno--dioxi) -6a, 9a-diflúor-lip-hidroxi-3-oxo-androsta-4-eno-17p-carboxilico Prcparou-se uma mistura de 0,98 g (2,16 mmol) de ácido 16a, 17a—(R-butilideno-dioxi)-6a,9a-diflúor-lip-hidroxi-3-oxo-androsta-4-eno—17p-carboxílico, 393 mg (2,16 mmol) de bromidrata de (±)-a-amino- -y-butirolactona, 292 mg (2,16 mmol) de 1-hidroxibenzotriazol, 692 mg (2,16 mmol) de tetrafluoroborato de 0-(lH-benzotriazol-l-il)-W,N,N’rΝ’- -tetrametil-urónio e 1,13 mL (6,48 mmol) de diisopropiletilamina em 25 mL de DMF e aqueceu-se sob agitação à temperatura de 100°C, sob uma atmosfera de azoto, até a reacção estar completa, conforme ve-rificado por análise em CCF. Após o arrefecimento até à temperatura ambiente juntou-se 100 mL de acetato de etilo e 100 mL de ácido clorídrico 2M. Separou-se a camada aquosa e extraiu-se sucessivamente com 100 mL de água, 100 mL de uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1M, 100 mL de água e 100 mL d© uma solução saturada d© salmoura. Secou-se a camada orgânica sobre MgS04 anidro e concentrou—se para se obter o produto impuro com o aspecto de uma goma. Purificou-se este produto por cromatografia em coluna intermitente através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 1.1 de acetato de etilo:ciclo-hexano e depois com acetato de etilo, para se obter duas fracções. Estas fracções foram ainda purificadas por CLER preparativa em fase inversa (‘Dynamax’ 60Â C18, 25 cm x 41 mm i.d.), efectuando a eluição com MeCN a 47%/H20 a um débito de 45 mL/ 51

/minuto e com um detecção de 230 nm, em ambos os casos. A fracção menos polar proporcionou 30 mg (3%) do isómero A do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido branco: p.f. 165°C; EM(TMM+) m/z 538 [ΜΗ]*; IV Vmáx. (KBr) 3468, 3407, 3351, 1778, 1663, 1520 cm'1; RMN δ (CDC13) 6,72 (1H, d, J 8 Hz), 6,14 (1H, s), 5,38 e 5,18 (1H, 2m), 4,98 (1H, d, J5 Hz), 4,82 (1H, m), 4,67 (1H, t, J 4 Hz), 4,50 (1H, t, J 9 Hz), 4,37 (2H, m), 1,05 (3H, s), 0,95 (3H, t, J7 Hz). (Encontrado: C, 63,00; H, 6,75; N, 2,13. Calculado para C2eH37F2N07S C, 62,51; H, 6,88; N, 2,60%). A fracção mais polar foi ainda purificada por CCF preparativa, efectuando a eluição diversas vezes com uma mistura a 3:1 de acetato de etilo:ciclo-hexano, para se obter 25 mg (2%) do isómero B do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido branco: p.f. 155°C-160°C; EM(TMM+) m/z 538 [ΜΗ]*; IV (KBr) 3382, 1779, 1668, 1516 cm'1; RMN δ (CDC13) 6,98 (1H, d, J 6 Hz), 6,13 (1H, s), 5,37 e 5,18 (1H, 2m), 4,94 (1H, d, J5 Hz), 4,54 (1H, t, J 4 Hz), 4,53 (1H, t, J 9 Hz), 4,48-4,24 (3H, m), 1,02 (3H, s), 0,94 (3H, t, J 7 Hz). (Encontrado: C, 60,94; H, 7,15; N, 2,21.

Calculado para C28H37F2NC>7*0,8H20: C, 60,92; H, 7,05; N, 2,54%).

Exemplo 23 N- (2-oxo-tetra-hidrofurano-4S-il)-amida do ácido 6«, 9a-diflúor-ΙΙβ--hidroxi-16«,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno-17P~ -carboxilico

Preparou-se uma mistura de 0,5 g (1,14 mmol) de ácido 6α,9a-di-flúor-llp-hidroxi-16a, 17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-1,4- -dieno-17p-carboxílico, 207 mg (1,14 mmol) de bromidrato de 4S-amino—γ-butirolactona, 154 mg (1,14 mmol) de 1- hidroxibenzotriazol, 365 mg (1,14 mmol) de tetrafluoroborato de 0-(líT-benzotrn azol -1 -i 1) -N, N, Ν’, Ν’- -tetrametil-urónio e 0,6 mL (3,44 mmol) de diisopropiletilamina em 15 mL de DMF e aqueceu-se sob agitação à temperatura de 100°C, sob uma atmosfera de azoto, até a reacção estar completa, conforme ve-rificado por análise em CCF. 52

Após o arrefecimento até à temperatura ambiente juntou-se 100 mL de acetato de etilo e 10Ú mL de ácido clorídrico 2M. Separou-se a camada aquosa e extraiu-se sucessivamente com 100 mL de uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1M e 100 mL de uma solução saturada de salmoura. Secou-se a camada orgânica sobre MgSOa anidro e concentrou-se para se obter o produto impuro com o aspecto de uma goma. Purificou-se este produto por CLER preparativa em fase inversa (‘Dynamax’ 60Ã C18, 25 cm x 41 mm i.d.) , efactuando a eluição com MeCN a 40%/H2O a um débito de 45 mL/minuto e com um detecção de 230 nm, para se obter 129 mg (22¾) do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido branco: p.f. 204°C-206°C; EM(TMM+) m/z 522 [MH]+; IV ν^χ. (KBr) 3325, 1778, 1667, 1631, 1527 cm" 1; RMN δ (DMSO-cfe) 8,44 (1H, d, J 6 Hz), 7,26 (1H, d, J 10 Hz), 6,30 (1H, d, J 10 Hz), 6,11 (1H, s), 5,74 e 5,55 (1H, 2m), 5,46 (1H, s), 4,95 (1H, d, J 2 Hz), 4,57 (1H, m), 4,48 (1H, dd, J8 e 8 Hz), 4,17 (1H, d lr), 4,08 (1H, dd, J 9 e 2 Hz), 2,83 (1H, dd, J 17 e 8 Hz), 1,51 (3H, s), 1,34 (3H, s), 1,12 (3H, s), 0,88 (3H, s). (Encontrado: C, 61,17; H, 6,55; N, 3,35. Calculado para C27H33F2NO7»0,3CH3CN*0,4H2O: C, 61,27; H, 6,46; N, 3,37%).

Exemplo 24 N- (2-oxo-tetra-hidrofurano-4R-il)-amida do ácido 6a, 9a-diflúor-ΙΙβ--hidroxi-16a,17«-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno-173~ -carboxllico

Preparou-se uma mistura de 0,5 g (1,14 mmol) de ácido 6α,9a-di-flúor-llp-hidroxi-16ot,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-1,4- -dieno-17P~carboxílico, 207 mg (1,14 mmol) de bromidrato de 4R-amino—γ-butirolactona, 154 mg (1,14 mmol) de 1- hidroxibenzotriazol, 365 mg (1,14 mmol) de tetrafluoroborato de 0-(lif-benzotriazol-l-il) -N, N, Ν’, Ν’- -tetrametil-urónio e 0,6 mL (3,44 mmol) de diisopropiletilamina em 15 mL de DMF e aqueceu-se sob agitação à temperatura de 100°C, sob uma atmosfera de azoto, até a 53 V\ rfb reacção estar completa, conforme ve-rificado por análise em CCF. Após o arrefecimento até à temperatura ambiente juntou-se 100 mL de acetato de etilo e 100 mL de ácido clorídrico 2M. Separou-se a camada aquosa e extraiu-se sucessivamente com 100 mL de uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1M e 100 mL de uma solução saturada de salmoura. Secou-se a camada orgânica sobre MgS04 anidro e concentrou-se para se obter o produto impuro com o aspecto de uma goma. Purificou-se este produto por cromatograf ia em coluna intermitente através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 4:1 de acetato de etilorciclo-hexano, e ainda por CLER preparativa em fase inversa (‘Dynamax’ 60Á C18, 25 cm x 41 mm i.d.), efectuando a eluição com MeCN a 40%/H2O a um débito de 45 mL/minuto e com um detecção de 230 nm, para se obter 99 mg (17%) do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido branco: p.f. 322°C; EM(TMM+) m/z 522 [MH]+; IV Vmà*. (KBr) 3360, 1780, 1768, 1666, 1627, 1534 cm'1; RMN δ (DMSO-de) 8,50 (1H, d, J 7 Hz), 7,26 (1H, d, J 10 Hz), 6,30 (1H, dd, J 10 e 1 Hz), 6,11 (1H, s), 5,73 e 5,54 (1H, 2m), 5,43 (1H, d lr, J 1 Hz), 4,95 (1H, d, J 4 Hz), 4,58 (1H, m) , 4,43 (1H, dd, J 8 e 8 Hz), 4,37 (1H, d lr), 4,03 (1H, dd, J 9 e 4 Hz), 2,83 (1H, dd, J 18 e 9 Hz), 1,50 (3H, s), 1,34 (3H, s), 1,13 (3H, s), 0,88 (3H, s) . (Encontrado: C, 61,46; H, 6,48; N, 2,76. Calculado para C27H33F2NO7«0,3H20: C, 61,54; H, 6,43; N, 2,66%).

Exemplo 25

Ester S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3S-ílíco) do ácido 6«,9a-ditlúor--HP-hidroxi-16a,17g-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4-dieno--17p-carbotiòico

Adicionou-se 34 mg (0,32 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 250 mg (0,55 mmol) de ácido 6a, 9a-di-flúor-llp-hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4-—dieno-17p—carbcLióico em 10 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto durante 15 minutos. Acrescentou-se então 54

99 mg (0,55 mmol) de éster 2-oxo-tetra-hidrofurano-3R-ilico do ácido metano-sulfónico (intermediário 4) e agitou-se a mistura durante 10 minutos. Repartiu-se a solução entre 50 mL de uma solução saturada de bicarbonato de sódio e 50 mL de acetato de etilo, lavou-se com 50 mL de uma solução 2M de ácido clorídrico, secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por croma-tografia intermitente através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 1:1 de acetato de etilo:ciclo-hexano e depois com uma mistura a 3:1 de acetato de etilo:ciclo-hexano, para se obter 148 mg (50%) do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido branco: p.f. 310°C-314°C; EM(EM+) m/z 539 [MH]*; RMN δ (CDC13) 7,14 (1H, dd, J 10 e 1 Hz), 6,44 (1H, s), 6,38 (1H, dd, J 10 e 1 Hz), 5,49 e 5,29 (1H, 2m) , 5,01 (1H, d, d 4 Hz), 4,58-4,30 (4H, m), 1,53 (3H, s), 1,44 (3H, s), 1,25 (3H, s), 1,02 (3H, s). Este composto é idêntico ao isómero A do exemplo 12.

Exemplo 26 Éster S-(2-oxo-tetra-hidrofurano-3R-ilico) do ácido 6a,9a-diflúor--llp-hidroxi-16a, 17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l, 4-dieno--17P-carbotióico

Adicionou-se 34 mg (0,32 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 250 mg (0,55 mmol) de ácido 6a, 9a-di-flúor-llp-hidroxi-16a,17a-isopropilideno-dioxi-3-oxo-androsta-l,4--dieno-173-carbotióico em 10 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto durante 15 minutos. Acrescentou-se então 99 mg (0,55 mmol) de éster 2-oxo-tetra-hidrofurano-3S-ílico do ácido metano-sulfónico (intermediário 5) e agitou-se a mistura durante 10 minutos. Repartiu se a solução entre 50 mL de uma solução saturada de bicarbonato de sódio e 50 mL de acetato de etilo, lavou-se com 50 mL de uma solução 2M de ácido clorídrico, secou-se e evaporou-se para se obter um sólido. Purificou-se o produto impuro por croma-tografia intermitente através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura a 1:1 de acetato de etilo:ciclo-hexano e depois com uma mistura a 3:1 de acetato de etilo:ciclo-hexano, para se obter 55 Λ 120 mg (41%) do composto em epígrafe com o aspecto de um sólido branco: p.f. 284°C-287°C; EM(EM+) m/z 539 [MH]+; RMN δ (CDC13) 7,13 (1H, dd, J 10 e 1 Hz), 6,43 (1H, s), 6,38 (1H, dd, J 10 e 1 Hz), 5,48 e 5,28 (1H, 2m), 4,97 (1H, d, J 4 Hz), 4,60 (1H, durante, J 9 e 3 Hz), 4,45-4,3 (2H, m), 3,91 (1H, t, J 10 Hz), 1,53 (3H, s), 1,45 (3H, s), 1,27 (3H, s), 0,96 (3H, s) . Este composto é idêntico ao isómero B do exemplo 12.

Exemplo 27 Éster (5-oxo-tetra-hidrofurano-2-ίlico) do ácido 16g,17a- (R- butilideno—dioxi) -6a, 9a-diflúor-llp-hidroxi-3-oxo-androsta-4-eno-17P- carbotióico

Adicionou-se 29 mg (0,21 mmol) de carbonato de potássio anidro em pó a uma solução agitada de 100 mg (0,21 mmol) de ácido 16a,17a--(R-butilideno-dioxi)-6a,9a-diflúor-lip-hidroxi-3-oxo-androsta-4-eno—17p-carbotióico (intermediário 7) em 2 mL de DMF anidra. Agitou-se a mistura sob uma atmosfera de azoto, acrescentou-se 42 mg (0,35 mmol) de y-cloro-y-butirolactona e agitou-se a mistura até a reacção estar completa, conforme verificado por CCF. Repartiu-se a solução entre 25 mL de água e 25 mL de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, lavou-3e com água (2 x 25 mL) , aecou-3e e evaporou-se para se obter uma goma. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em camada preparativa através de gel de sílica, efectuando a eluição com éter dietílico, para se obter 24 mg (21%) do composto em epígrafe com o aspecto de uma espuma: EM{EM+) m/z 555 [MH]+; IV vmáx. (KBr) 3484, 1790, 1700, 1665 cm-1; RMN δ (CDC13) 6,24 (0,5H, dd, J8 e 6 Hz), 6,15 e 6,14 (1H, 2s), 5,86 (0,5H, dd, J 5 e 1 Hz), 5,33 e 5,21 (1H, 2m) , 4,84 (0,5H, d, J 5,5 Hz), 4,80 (0,5H, t, J 4,5 Hz), 4,78 (0,5H, d, J 5,5 Hz), 4,71 (0,5H, t, J4,5 Hz), 4,44 e 4,38 (1H, 2m), 1,53 e 1,52 (3H, 2s), 1,00-0,92 (6H, m) . Os diastereoisómeros individuais foram separados por cromatografia em camada preparativa, efectuando a eluição com éter dietílico (3x), para se obter 8 mg (7%) do isómero A do composto em epígrafe 56

Γ\ Γ--7 com o aspecto de uma espuma: EM(EM+) m/z 555 [MH]+; RMN δ (CDCI3) 6,24 (1H, t, J 7 Hz), 6,14 (1H, s) , 5,38 e 5,28 (1H, 2m), 4,84 (1H, d, J 5 Hz), 4,71 (1H, t, J 4,5 Hz), 4,38 (1H, m), 1,52 (3H, s), 0,97 (6H, m), e 5 mg (4%) do isómero B do composto em epígrafe com 0 aspecto de uma espuma: IV (KBr) 3448, 1790, 1713, 1681, 1651 cm"1; RMN δ (CDC13) 6,15 (1H, s), 5,87 (1H, dd, J 4 e 1 Hz), 5,38 e 5,18 (1H, 2m) , 4,79 (2H, m), 4,44 (1H, m), 1,53 (3H, s), 0,98 (6H, m) .

Actividade farmacológica

In vitro

Estudou-se a actividade farmacológica numa experiência funcional in vitro para se demonstrar a actividade glucocorticóide, a qual faz prever, de um modo geral, uma actividade anti-inflamatória ou antialérgica in vivo. A experiência funcional utilizada foi uma modificação do método descrito por T.S. Berger et al. em J. of Steroid Biochem. Molec. Biol. 1992, 41 (3-8), 733-738, “Interaction of Glucocorticoid analogues with the Human Glucocorticoid Receptor”.

Assim, efectuou-se a transfecção de células Hela com um gene repórter detectável (fo3fataee alcalina placentária acgrcgada, FAPo (o mesmo que sPAP)) sob o controlo de um promotor da resposta glucocorticóide (a RTL do virus do tumor mamário das fêmeas de murganho, VTMM (o mesmo que MMTV)).

Efectuou-se a incubação de diversas concentrações de composto padrão (dexametasona) ou de compostos da invenção com células Hela transfectadas, durante 72 horas. No final da operação de incubação, adicionou-se substrato para t'APs (acetato de p-nitrofenol) e mediu-se o produto por um método espectrofotométrico. A elevada absorvência reflectiu um aumento da transcrição de FAPs, tendo então sido construidas curvas de concentração/resposta por forma a poderem ser determinados os valores CE50. 57

V V υ . v* li ___—Γ"· . Ak 1a 5, 6, 7, 8, o 9 possuíam instáveis no valores CE5o inferiores a 400 nM.

Hidrólise no sangue

Todos os isómeros/compostos dos exemplos eré plasma humano, indicando isto que se prevê que possuam um perfil vantajoso de efeitos secundários in vivo. Os compostos dos exemplos 15, 16, 22 e 23 exibiram períodos de semi-vida inferiores a 3 horas, ao passo que todos os isómeros nos restantes exemplos exibiram períodos de semi-vida inferiores a 60 minutos.

In vivo (i) Actividade anti-inflamatória - Inibição do edema da orelha dos ratos

Dissolve-se os compostos de ensaio em acetona e aplica-se uma quantidade de 40 \il>, contendo 5% de óleo de cróton, à superfície Interna de cada orelha de ratos (machos) com uma massa de 60-80 g. Decorridas 6 horas os animais são mortos e as suas orelhas retiradas. Com um punção efectua-se o corte de discos de tamanho padrão (0,5 cm de diâmetro) que são então pesados. Calcula-se o peso médio dos discos de orelha e a partir daqui calcula-se a percentagem de inibição da inflamação das orelhas em comparação com orelhas tratadas apenas com óleo de cróton.

Composto Dose Inibição (%) Exemplo 2 100 μς 42 Isómero A do exemplo 19 100 μg 54 Isómero B do exemplo 19 100 μg 43 Isómero B do exemplo 16 10 μg 42 (ii) Efeitos sistémicos supressão da HACT em ratos adrenalectomizados Efectuou-se a adreaolectomização de ratos (macho) da estirpe CD (90-120 g) sob anestesia com isoflurano e enriqueceu-se a água 58 s~ que lhes foi fornecida com 0,9% de soluto salino. Decorridos 4 dias administrou-se (sob anestesia com isoflurano), por via intratecal, uma dose individual de composto em suspensão em soluto salino (contendo 0,2% de Tween-80, 0,2 mL) às 10 da manhã. Ao fim de 4 horas os animais foram sacrificados por administração de ‘Euthetal’ e efectuou-se a colheita de amostras de sangue por punção intra-cardíaca, as quais foram colocadas em tubos heparinizados. Centrifugou- -se as amostras (20 minutos a 1000 r.p.m. e a 4°C), recolheu-se o plasma e realizou-se um radioimunoensaio (RIE) para pesquisa da hormona adrenocorticotrófica (HACT), utilizando um estojo duplo de RIE com anticorpos de CDP (o mesmo que DPC) . Em cada experiência foram incluídos grupos de contraprova intactos e estimulados só com veículo para se poder verificar a variação diurna de HACT e os efeitos do veículo. Os resultados foram calculados relativamente à curva padrão do RIE e foram expressos em pg de HACT/mL de plasma, permitindo assim o cálculo da redução percentual da HACT.

Composto Dose Redução da HACT (%) Acetoneto de fluocinolona 1 pg 49 Acetoneto de fluocinolona 5 pg 84 Exemplo 2 500 pg 0

Este resultado ilustra a actividade sistémica mínima associada a estes derivados instáveis no plasma.

Formulações farmacêuticas

Seguidamente são apresentados exemplos de formulações adequadas dos compostos da invenção. A expressão “ingrediente activo” é aqui utilizada para representar um composto da invenção e pode designar, por exemplo, os isómeros (ou uma sua mistura) dos exemplos 1, 12 ou 19. 1. Carregadores para inalação

Ingrediente activo micronizado 1,6% p/p 59 «i «i

s' {—7? lactose BP 98,4% p/p. O ingrediente activo é micronizado de um modo convencional, até serem obtidas partículas finas com tamanhos compreendidos num intervalo tal que seja possivel a inalação de praticamente todo o medicamento para dentro dos pulmões após a sua administração, antes de ser misturado com a lactose de qualidade normal para a preparação de comprimidos, utilizando um misturador de alta velocidade. Com a mistura pulveriforme efectua-se o enchimento de cápsulas de gelatina numa máquina de encapsulaçâo adequada. 0 conteúdo dos carregadores é administrado utilizando um inalador de pó, tal como o inalador ‘ROTAHALER’"’. Em alternativa, com a mistura pulveriforme é possível encher os compartimentos vesiculares de uma embalagem ou fita de tipo vesicular. 0 conteúdo da embalagem ou fita de tipo vesicular é administrado utilizando um inalador de pó, tal como o inalador ‘DISKHALER™’ ou ‘DISKUS™’. [‘ROTAHALER’, ‘DISKHALER’ e ‘DISKUS’ são marcas comercializadas pelas empresas do grupo Glaxo Wellcome]. 2. Formulação em aerossol (i) Suspensão mq/actuação por lata

Ingrediente activo micronizado 0,25 40 mg 1,1,1,2-tetrafluoroetano 74,75 11,96 g O ingrediente activo é pesado directamente para dentro de uma lata de aluminio aberta e depois encaixa-se no lugar próprio uma válvula doseadora. Introduz-se então na lata o 1,1,1,2-tetrafluoroetano, sob pressão, através da válvula, e agita-se a lata para dispersar o fármaco. O inalador resultante contém 0,33% (p/p) de ingrediente activo. (ii) Solução por lata 40 mg mq/actuação 0,25

Ingrediente activo micronizado 60 rr*.·*-.-V. -.---- -

%

Etanol (anidro) 7,5 1,2 g 1,1,1,2-tetrafluoroetano 67,25 10,76 g

Dissolve-se o ingrediente activo no etanol. A solução etanólica resultante de ingrediente activo é introduzida calibradamente numa lata de alumínio aberta e depois encaixa-se no lugar próprio uma válvula doseadora. Introduz-se então o 1,1,1,2-tetrafluoroetano sob pressão, através da válvula. 0 inalador resultante contém 0,33% (p/p) de ingrediente activo e 10% (p/p) de etanol. 3. Creme % (p/p)

Tngreriiemte activo micronizado 0,2

Parafina líquida 40 Álcool cetostearílico 5

Cetomacrogol 1000 1

Miristato de isopropilo 5

Propileno-glicol 10 Ácido benzóico 0,2

Fosfato de sódio 0,05

Monoidrato do ácido cítrico 0,05 Água purificada até 100

Dispersa-se o ingrediente activo micronizado numa porção da água que contém uma porção do cetomacrogol 1000. Funde-se conjuntamente a parafina líquida, o álcool cetostearílico e o miristato de isopropilo, arrefece-se para uma temperatura compreendida entre 50°C e 60°C e junta-se à porção de água restante que contém o propileno-glicol, o ácido benzóico (conservante), o fosfato de sódio e o ácido cítrico (agentes tampão). Adiciona-se a fase oleosa resultante à suspensão do ingrediente activo, sob agitação, até arrefecer. 61

Claims

rjó
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que o símbolo representa S.
4. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 3, em que o substituinte Ri está ligado ao átomo de carbono α do radical lactona.
5. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, em que o símbolo 1½ representa individualmente um grupo OC(=0)~ -alquilo (Ci-C6) .
6. Composto dc acordo com a reivindicação 5, cm que o símbolo R2 representa um grupo OC(=0)-alquilo(C1-C3) .
7. Composto de acordo com uma das reivindicações 5 ou 6, em que o símbolo R2 representa um grupo OC(=0)-etilo.
8. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 5 a 7, em que o símbolo R3 representa um grupo metilo.
9. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, em que os substituintes R2 e R3, considerados em conjunto, formam um grupo de fórmula estrutural /C\ -0 R7 em que 03 3ub3tituintea Rb e R/ são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio e grupos alquilo (C1-C6) .
10. Composto de acordo com a reivindicação 9, em que os substituintes Ré e R7 são iguais ou diferentes e cada um deles é 2 Γ Γ· seleccionado entre átomos de hidrogénio e grupos alquilo(Ci- C3) .
11. Composto de acordo com uma das reivindicações 9 ou 10, em que os substituintes R6 e R7 são iguais ou diferentes e cada um deles è seleccionado entre átomos de hidrogénio e grupos metilo ou n-propilo.
12. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 9 a 11, em que os símbolos Rc e R7 representam ambos grupos metilo.
13. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 9 a 11, em que os substituintes Rê e R7 são diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio e grupos n-propilo.
14. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 13, em que os substituintes R4 e R5 são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio, de flúor ou de cloro.
15. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 14, em que os substituintes R4 e R5 são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio ou de flúor.
16. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 15, em que os símbolos R4 e R5 representam átomos de flúor.
17. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo Ri repre-senta S, o símbolo R2 representa um grupo 0C(=0)-alquiloíCi-Ce), o símbolo R3 representa um grupo metilo, os substituintes R4 e R5 são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio ou d5~' flúor; e o símbolo representa uma ligação simples ou dupla. 3 7 Χϊί, _ Γ\ rç>p U1 l)
18. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que o símbolo R2 representa um grupo 0C(=0)-etilo e cada um dos símbolos R4 e R5 representa um átomo de flúor.
19. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo Ri representa S, os substituintes R2 e R3, considerados em conjunto, formam um grupo de fórmula estrutural y°\ —0 r7 em que os substituintes R6 e R7 são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio e grupos alquilo (Cj-C6); os substituintes R4 e R5 são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio ou de flúor; e o símbolo representa uma ligação simples ou dupla.
20. Composto de acordo com a reivindicação 16, em que os substituintes R6 e R7 são iguais ou diferentes e cada um deles é seleccionado entre átomos de hidrogénio e grupos metilo ou n-propilo e cada um dos símbolos R4 e R5 representa um átomo de flúor.
21. Composto de acordo com a reivindicação 1, seleccionado entre éster S-(2-oxo-tetra-hidro-furano~3-ílico) do ácido 17a-butiriloxi—6a, 9a-diflúor-llp-hidroxi-16a-metil-3-oxo-androsta- 1.4- dieno- -17β carbotióico; éster S-(2-oxo-tetra-hidro-furano-3-ílico) do ácido 17a-acctiloxi—6a, 9a-diflúor-lip-hidroxi-16a-mctil-3-oxo-androata- 1.4- dieno- -17p-carbotióico; éster S-(2-oxo-tetra-hidro-furano-3-ílico) do ácido 9a-flúor-11β—hidroxi-16β-metil-3-oxO“17β-propioniloxi-androsta-l, 4-dieno- -17p-carbotióico; 4 »//*-!' V*·'·» **·* ** TÍr^.-irí »//*-!' V*·'·» **·* ** TÍr^.-irí num C) converter um composto de fórmula estrutural (I) composto diferente de fórmula estrutural (I) por transacetalação, epime-rização ou esterificação; ou D) desproteger um derivado protegido de um composto de fórmula estrutural (I), se necessário ou desejável, sendo cada um dos processos A, B, C ou D anteriores seguidos de uma das operações seguintes (i) formação do 3olvato ou (ii) isolamento dc um ioómcro individual de um composto de fórmula estrutural (I).
32. Composto de acordo com a reivindicação 1, o qual é éster S— (2— -oxo-tetra-hidro-furano-3S-ílico) do ácido 6a, 9a-diflúor-ΙΙβ--hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxi-androsta-l,4-dieno--17p-carbotióico. Lisboa, 3 de Outubro de 2000 3ENTE OF jblAl DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL 9