PT767800E - Derivados de histidina e homohistidina como inibidores de transferase de farnesilo de proteinas - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE HISTIDINA E HOMOHISTIDINA COMO INIBIDORES DE TRANSFERASE DE FARNESILO DE PROTEÍNAS"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a um número de compostos que podem utilizados no campo médico para tratar, profilac· : · ;~> nte ou de outro modo, a proliferação descontrolada ou anormal ce tecidos humanos. Mais especificamente, a presente invenção reíere-se a um número de compostos que actuam para inibir a enzima transferase de farnesilo que se determinou activar as proteínas ras que por sua vez activam a divisão celular e estão imolicadas em cancro e restenose.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A proteína ras (ou p21) tem sido exaustivamente examinada porque se encontram formas mutantes em 20% da maioria dos tipos de cancro humano e mais de 50% em carcinomas do cólon e pancreáticos (Gibbs J.B., Cell, 65:1 (1991), Cartwright T., et al., Chimica Oggi, 10:26 (1992)). Estas proteínas ras mutantes são deficientes na capacidade para regulação por retroacção que está presente na ras nativa e esta deficiência está associada com a sua acção oncogénica uma vez que a capacidade para estimular a divisão celular não pode ser controlada pelos cofactores reguladores endógenos. A verificação recente de que a transformação da actividade do mutante ras é criticamente dependente de modificações pós-tradução (Gibbs J. , et al., Microbial Rev.r 53: 171 (1989) revelou um importante aspecto da função ras e identificou novas possibilidades para terapia do cancro.

Para além do cancro, existem outras condições de proliferação celular descontrolada que podem estar relacionadas 1 com a expressão excessiva e/ou função das proteínas ras nativas. A restenose vascular pós-cirúrgica é uma dessas condições. A utilização de várias técnicas cirúrgicas de revascularização tal como enxerto de "by-pass" de veia safena, endarterectomia e angioplastia coronária transluminar é frequentemente acompanhada por complicações devido a crescimento descontrolado de tecido neoíntimo, conhecido como restenose. As causas bioquímicas da restenose são pouco conhecidas e foram implicados numerosos factores de crescimento e protooncogenes (Naftilan A.J., et al., Hypertension, 13:706 (1989) e J. Clin. Invest., 83: 1419; Gibbons G.H., et al., Hypertension, 14: 358 (1989); Satoh T., et al., Mollec. Cell. Biol., 13:3706 (1993)). O facto de as proteínas ras estarem envolvidas em processos de divisão celular faz destas candidatas para intervenção em muitas situações em que as células se estão a dividir descontroladamente. Em analogia directa com a inibição de cancro relacionado com ras mutante, o bloqueio de processos dependentes de ras tem o potencial de reduzir ou eliminar a proliferação de tecido inapropriada associada com restenose, particularmente nos casos em que a expressão e/ou função de ras normal é exagerada pelos factores estimuladores de crescimento.

0 funcionamento de ras é dependente da modificação de proteínas de modo a associarem-se com a face interna da membrana plasmática. Contrariamente a outras proteínas associadas a membranas, as proteínas ras não possuem sequências transmembranares ou hidrófobas convencionais e são inicialmente sintetizadas numa forma solúvel no citosol. A associação da proteína ras à membrana é desencadeada por uma série de passos de processamento pós-tradução em que são assinaladas por uma sequência de consenso de aminoácidos do terminal carboxílico que é reconhecida por transferases de farnesilo de proteína (PFT). Esta sequência de consenso consiste num resíduo de cisteína localizado a quatro aminoácidos do terminal carboxílico, seguido de dois aminoácidos lipofílicos e do resíduo do terminal C. O 2

grupo sulfidrilo do resíduo de cisteína é alquilado por pirofcsfato de farnesilo numa reacção que é catalisada pela trunsfcrase de farnesilo de proteína. Após prenilação, os três d:i.incácidos do terminal C são clivados por uma endoprotease e o grupo carboxílico alfa então exposto da cisteína prenilada é meti lado por uma transferase de metilo. O processamento enzimático das proteínas ras que começa com farnesilação possibilita a associação da proteína com a membrana celular. A análise mutacional de proteínas ras oncogénicas indica que estas modificações pós-tradução são essenciais para a actividade de transformação. A substituição do resíduo de cisteína da sequência de consenso por outros aminoácidos produz uma proteína ras que já não é farnesilada, não consegue migrar para a membrana celular e não possui a capacidade para estimular a proliferação celular (Hancock, J.F., et al., Cell, 57: 1617 (1989), Schafer W.R., et al., Science, 245: 379 (1989), Casey P.J., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 86: 8323 (1989)).

Recentemente, foram identificadas transferases de farnesilo de proteínas (PFTs, também referidas como transferases de proteína de farnesilo (FPTs) ) e uma PFT específica de cérebro de rato foi purificada até à homogeneidade (Reiss Y., et al., Bioch. Soc. Trans., 20: 487-88 (1992)). A enzima foi caracterizada como um heterodímero composto por uma subunidade alfa (49 kDa) e uma subunidade beta (46 kDa) , sendo ambas requeridas para actividade catalítica. Elevados níveis de expressão de PFT de mamífero num sistema de baculovírus e purificação da enzima recombinante numa forma activa foram também conseguidos (Chen W.-J., et al., J. Biol. Chem., 268: 9675 (1993)). A luz do atrás mencionado, a verificação de que a função das proteínas ras oncogénicas é criticamente dependente do seu processamento pós-tradução proporciona um meio de quimioterapia do cancro através da inibição das enzimas de processamento. A ident-ifiração e isolamento de uma transferase de farnesilo de 3 proteína que catalisa a adição de um grupo farnesilo a proteínas ras fornece um alvo prometedor para tal intervenção. Recentemente, foi determinado que inibidores prototípicos de PFT podem inibir o processamento de ras e reverter a morfologia cancerosa em modelos de células tumorais (Khol N.E., et al., 26Π- 1934 (1993), .James G.L., et al. , Science, 260: 1937 (1993), Garcia, A.M., et al., J. Biol. Chem., 268: 18415 (1993)). Assim, é possível evitar ou atrasar o início da proliferação celular em cancros que exibem proteínas ras mutantes por bloqueio de PFT. Por analogia lógica, a inibição de PFT pode proporcionar um meio potencial para controlo da proliferação celular associada com restenose, especialmente nos casos em que a expressão e/ou função da ras nativa é excessivamente estimulada. 0 pedido PCT W091/16340 revela tetrapéptidos inibidores de PFT contendo cisteína de Fórmula CAAX. 0 Pedido de Patente Europeia 0461869 revela tetrapéptidos inibidores de PFT contendo cisteína de Fórmula Cys-Aaa1-Aaa2-Xaa. 0 Pedido de Patente Europeia 0520823 revela tetrapéptidos inibidores de PFT contendo cisteína de Fórmula Cys-Xaa^dXaa2-Xaa3. O Pedido de Patente Europeia 0523873 revela tetrapéptidos inibidores de PFT contendo cisteína de Fórmula Cys-Xaa1-Xaa2-Xaa3. O Pedido de Patente Europeia 0528486 revela amidas tetrapeptídicas inibidoras de PFT contendo cisteína de Fórmula Cys-Xaa1-Xaa2-Xaa3-NRR1. O Pedido de Patente Europeia 0535730 revela pseudotetrapéptidos inibidores de PFT com as duas fórmulas seguintes: 4

A EP-A-0523 873 revela inibidores de PFT possuindo uma estrutura de amida dipeptídica (substituída) em que o terminal C é substituído por um anel (hetero)aromático (substituído). Os compostos da presente invenção, no entanto, diferem dos compostos das técnicas anteriores principalmente pela presença de um resíduo de histidina no terminal N e uma amida do terminal C duplamente substituída. Em Biorg. Med. Chem. Lett. Vol. 4, N° 7, 1994, páginas 887-892, é revelado um inibidor de PFT possuindo uma estrutura de tetrapéptido incluindo um resíduo de histidina no terminal N. No entanto, para além das diferenças estruturais, o referido composto apresenta apenas uma actividade bastante pobre.

Os compostos revelados nas referências acima não revelam ou sugerem uma nova combinação das variações estruturais verificadas na presente invenção descritas daqui em diante.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Deste modo, a presente invenção é um derivado de histidina ou de homohistidina de Fórmula I, 5

X

Ν CH2) nj—CONr3r4

I

em que: η = 1 ou 2; Γ. (R)MHR2, ou SO2R2 com R2 A = TOR2, COoR2, HONHR2, CISR2, C. (S)OR2 como abaixo definido; R = independentemente H ou Me; R2 = alquilo Ci-C6, (CH2)m cicloalquilo C3-C7, (CH2)m-arilo, em que arilo é definido como um anel aromático que é um grupo fenilo, 5-f luorenilo, 1-naftilo, ou 2-naftilo, não substituído ou substituído por 1 a 3 substituintes seleccionados de alquilo Ci-C6, O-alquilo Ci-C6, e S-alquilo

NHCO-alquilo Ci-C6/ (CH2)pC02-H, (CH2) pC02-alquilo Ci-C6, (CH2)PS03H, (CH2)pP03H2, (CH2) PP03- (alquilo Cu-Ce) 2 (CH2) pS02NH2, e (CH2) pS02NH-alquilo Ci~C6f em que p = 0, 1, 2, ou 3, (CH2)m heteroarilo em que heteroarilo é definido como um anel heteroaromático que é um grupo 2- ou 3-tienilo, 2-ou 3-furanilo, 2- ou 3-pirrolilo, 2-, 3-, ou 4-piridilo, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, ou 7-indolilo, substituído ou não substituído por 1 ou 2 substituintes do grupo de substituintes descritos acima para o arilo com m = 0, 1, 2, ou 3; R3 e R4 = independentemente

ou (CH2) nCONH-R6 com y = 1-5 e n como acima definido e com R5 e R6 como definido abaixo, ou R3 e R4 estão ligados um ao outro para formar um anel do seguinte tipo: 6 com R5 e R6 como definido abaixo, ou (CH2)X-R7, com x = 2-5, e R7 como definido abaixo; R5 = R2, OR2, ou SR2 com R2 como definido acima; (CH2) nR5, (CH2)nC02R2, (CH2) nCONHR2, (CH2)nCONH(CH2)n+iR5, CH (COR8) (CH2) n R5, com n, R2, e R5 como definido acima e R8 como definido abaixo; R7 = (CH2)m cicloalquilo C3-C7, (CH2) m-arilo, (CH2)m-heteroarilo, 0 (CH2) m-cicloalquilo C3-C7, 0 (CH2) m-arilo, 0(CH2)m- heteroarilo, com m = 0, 1, 2, ou 3; em que arilo e heteroarilo possuem o significado acima; R8 = OH, O-alquilo Ci-C6, NH2, NH-alquilo Ci-C6; e X = H, Me, (CH2)nC02R9, ou (CH2)nP(0) (OR9)2, com R9 = H ou alquilo Ci-C6; ou um sal destes farmaceuticamente aceitável. A presente invenção é também dirigida para a utilização de um composto de Fórmula I, ou um sal deste f armaceuticamente aceitável para a preparação de uma composição farmacêutica para inibir a actividade de uma enzima transferase de farnesilo de proteína como um método para tratamento de doenças proliferativas de tecido.

Uma outra realização da presente invenção é a utilização para a preparação de uma composição farmacêutica incluindo uma quantidade terapeuticamente eficaz de Fórmula I, ou um sal deste farmaceuticamente aceitável para tratamento do cancro.

Ainda outra realização da presente invenção é a utilização para a preparação de uma composição farmacêutica incluindo uma quantidade terapeuticamente eficaz de Fórmula I, ou um sal 7

deste farmaceuticamente aceitável, como um método para o tratamento da restenose.

Ainda outra realização da presente invenção é uma composição farmacêutica para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I, ou um sal deste farrracouticamente aceitável, em forma de dose unitária nos métodos de tratamento acima mencionados.

Uma realização final da presente invenção refere-se a métodos para a preparação de compostos de Fórmula I, ou sais destes farrr irent icamente aceitáveis, por síntese em fase sólida, síntese err fr-.se de solução, e sínteses múltiplas simultâneas utilizando um dispositivo Diversomer®.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS REALIZAÇÕES PREFERIDAS

Nos compostos de Fórmula I, o termo "alquilo C1-C6" significa um radical hidrocarboneto linear ou ramificado possuindo de 1 a 6 átomos de carbono e inclui, por exemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, terc-butilo, n-pentilo, n-hexilo, e afins. 0 termo "cicloalquilo C3-C7" significa um anel hidrocarboneto saturado que contém de 3 a 7 átomos de carbono, por exemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, adamantilo, e afins. 0 termo "arilo" significa um anel aromático que é um grupo fenilo, 5-fluorenilo, 1-naftilo, ou 2-naftilo, não substituído ou substituído por 1 a 3 substituintes seleccionados entre alquilo, O-alquilo e S-alquilo, OH, SH, F, Cl, Br, I, CF3, NO2, NH2, NHCH3, N(CH3)2, NHCO-alquilo, (CH2)mC02H, (CH2) mC02-alquÍlo, (CH2)ulS03H, (CH2)J?03H2, (CH2)mP03 (alquilo) 2í (CH2) mS02NH2, e (CH2)mS02NH-alquilo em que alquilo é definido como acima e m = 0, 1, 2, ou 3. O termo "heteroarilo" significa um anel heteroaromático que é um grupo 2- ou 3-tienilo, 2- ou 3-furanilo, 2- ou 3-pirrolilo, 8 2-, 3-, ou 4-piridílo, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, ou 7-indolilo, substituído ou não substituído por 1 ou 2 substituintes do grupo de substituintes descritos acima para o arilo. A tabela seguinte proporciona uma lista de abreviaturas e definições destas utilizadas na presente invenção. TABELA DE ABREVIATURAS Abreviatura* Aminoácido Ala Alanina Arg Arginina Asn Asparagina Asp Ácido aspártico Cys Cisteína Glu Ácido glutâmico Gin Glutamina His Histidina Ile Isoleucina Leu Leucina Lys Lisina Met Metionina Phe Fenilalanina Pro Prolina Ser Serina Thr Treonina Trp Triptofano Tyr Tirosina Vai Valina • Se a actividade óptica do aminoácido é outra que não L(S), o aminoácido ou abreviatura é precedido pela configuração apropriada D(R) ou DL(RS). TABELA DE ABREVIATURAS (cont.) 9

Abreviatura*

A a a-<. .O R (N R) Aaa

Aaa-CCNHH

Hcy Bal His(1-Me) His(Tr)

Ser(OBn) Thr(OBn) Tic

Tyr(OBn) (α-Me)Tyr(OBn) (N-Me)Tyr(OBn)

Aminoácido Modificado e Não Comum Um éster de aminoácido, por exemplo, Gly-C02Bn é Glicina, éster benzílico; Ser(OBn)-C02Me é O-Benzil-serina, éster metilico. (N Me)IIÍ3 é N (a) metil h±3tidina; (N (4 BnO-Bn)Gly é N-(4-fenil-metoxibenzil)-glicina. Uma amida de aminoácido, por exemplo, Gly-CONHBn é Glicina, N-benzilamida; Ser (OBn)-CONHEt é O-Benzilserina, N-etilamida; Tyr (OBn)-CONHCH2CH2OBn é O-Benzil-tirosina, N-(2-(fenilmetoxi) -etil)amida; Cbz-His-CON (CH2CH2OBn) é N-(a)- fenilmetoxicarbonilhistidina, N,N-bis-(2- fenilmetoxietil) amida. Homocisteina Beta-alanina (ou ácido 3-aminopropiónico) 1-Metil-histidina (ou N (τ)-Metil-histidina) 1-Trif enilmetil-histidina (ou N(x)-Tritil-histidína) O-Benzil-serina O-Benzil-treonina Ácido 1,2,3, 4-tetrahidro-3-isoquinolina- carboxílico O-Benzil-tirosina Ácido 2-amino-3- (4-benziloxifenil) -2-metil-propiónico (ou a-Metil-O-benzil-tirosina) N-Metil-O-benzil-tirosina * Se a actividade óptica do aminoácido é outra que não L(S), o aminoácido ou abreviatura é precedido pela configuração apropriada D(R) ou DL(RS). 10 TABELA DE ABREVIATURAS (cont.)

Abreviatura Grupo Protector Ac Acetilo Ada Ácido 1-adamantiloacético Adoc Adamant iloxicarbonilo Bn Benzilo MeBn 4-Metilbenzilo Cbz Benziloxicarbonilo 2-Br-Cbz orto-Bromobenziloxicarbonilo 2-Cl-Cbz orto-Clorobenziloxicarbonilo Bom Benziloximetilo Boc Butiloxicarbonilo terciário Dnp 2,4-Dinitrofenilo For Formilo Fmoc 9-Fluorenilmetiloxicarbonilo no2 Nitro Tos 4-toluenossulfonilo (tosilo) Tr Trifenilmetilo (tritilo) Abreviaturas Solventes e reagentes HOAc Ácido acético CF3SO2H Ácido trifluorometanossulfónico DCM Diclorometano DCC N, N'-diciclohexilcarbodiimida DIC N, Ν'-Diisopropilcarbodiimida DIEA N, N'-Diisopropiletilamina DMAP 4-Dimetilaminopiridina DMF N,Ν'-dimetilformamida EDAC N-Etil-N'-Dimetilaminopropil-carbodiimida EtOAc Acetato de etilo Et20 Éter dietílico HC1 Ácido clorídrico HF Ácido fluorídrico 11 TABELA DE ABREVIATURAS (cont.)

Abreviaturas Solventes e reagentes (cont.) HOBT 1-Hidroxibenzotriazole KOH Hidróxido de potássio MeFN Acetonitrilo MeOH Metanol NMP N-Metilpírrolidona NHOS N-Hidroxissuccinamida iPrOH iso-Propanol TFA Ácido trifluoroacético Abreviaturas Resinas de Síntese de Péptidos em Fase Sólida Resina HMP Resina 4- (hidroximetil) -fenoximetil-poliesti- reno Resina MBHA Resina metilbenzidrilamina Resina PAM Resina 4- (hidroximetil) fenilacetoamido-metil- poliestireno Resina 2-Cl-Tr Resina 2-clorotritil-poliestireno Resina NH2~Rink Resina 4- (Amino- (2' , 4' -dimetoxifenil) -metil) -fenoximetil-poliestireno Resina Wang Resina 4- (hidroximetil) -fenoximetil-poliesti- reno Abreviaturas Reaqentes Biológicos FPP Pirofosfato de farnesilo PFT Transferase de farnesilo de proteína DTT Ditiotritol BSA Albumina de soro bovino Os compostos preferidos da invenção são de Fórmulas II e 12 III,

em que: A está limitado a C02R2, CONHR2, C(S)OR2, ou C(S)NHR2, com R2, como definido abaixo; R = H ou Me; R2 está limitado a alquilo Ci-C6, (CH2)m-cicloalquilo C3-C7, (CH2)m-arilo, (CH2) m-heteroarilo com m = 0, 1, 2, ou 3; R5 está limitado a (CH2) m-arilo, O- (CH2)m-arilo, ou 0-(CH2)m-heteroarilo com m como definido acima; R6 está limitado a CH2-R5, CH2C02R2, CH2CONHR2, com η = 1 ou 2, e com R5 e R2 como definido acima; arilo e heteroarilo estão definidos como acima e X está limitado a H ou Me; ou um sal destes farmaceuticamente aceitável.

Os compostos mais preferidos da invenção são de fórmula II ou III, em que: A está ainda limitado a C02R2 ou CONHR2, com R2 como definido abaixo; R está limitado a H; R2 está ainda limitado a alquilo C1-C6, ou (CH2)m-arilo com m = 0, 1, 2, ou 3; R5 está ainda limitado a (CH2)m-arilo, ou 0- (CH2)m-arilo com m como definido acima; R6 está limitado a CH2-R5 ou CH2CONHR2, com η = 1 ou 2, e com R5 e R2 como definidos acima; arilo e heteroarilo estão definidos como acima descrito e X está limitado a H ou Me; 13

ou um sal destes farmaceuticamente aceitável. A presente invenção é também dirigida à utilização de um composto de Fórmulas II e III, ou um sal destes farmaceuticamente aceitável, para a preparação de uma composição farmacêutica para inibir a actividade de uma enzima transferase de farnesilo de proteína como um método para tratar doenças proliferativas de tecido.

Uma outra realização da presente invenção é a utilização de uma composição farmacêutica incluindo uma quantidade terapeuticamente eficaz de Fórmulas II e III, ou um sal destes farmaceuticamente aceitável, para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento do cancro. Ainda uma outra realização da presente invenção é a utilização para a preparação de uma composição farmacêutica incluindo uma quantidade terapeuticamente eficaz de Fórmulas II e III, ou um sal destes farmaceuticamente aceitável, para o tratamento de restenose.

Ainda uma outra realização da presente invenção é uma composição farmacêutica para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmulas II e III, ou um sal destes farmaceuticamente aceitável, numa forma de unidade de dose nos métodos de tratamento acima mencionados.

Uma última realização da presente invenção refere-se a métodos para a preparação de compostos de Fórmulas II e III, ou sais destes farmaceuticamente aceitáveis, por síntese em fase sólida, síntese em fase de solução, e sínteses múltiplas simultâneas utilizando um dispositivo Diversomer®.

MÉTODOS GERAIS PARA A PREPARAÇÃO, AVALIAÇÃO E UTILIZAÇÃO DE

COMPOSTOS DE FÓRMULA I

Os compostos de Fórmula I podem ser preparados de acordo com a estratégia de síntese descrita no Esquema I. Os derivados de amina secundária podem ser preparados por uma aminação redutora de um aldeído apropriado com uma amina apropriada na 14 presença de um agente de redução tal como triacetoxiborohidreto de sódio. Δ amina secundária pode então ser acoplada na presença de um agente de activação tal como DCC e HOBT a um derivado de histidina adequadamente funcionalizado no terminal N.

Esquema T

NaBH (OAc) 3 , , -*- Ri R NH CU 2C 1 2 A-NH-His , .

-►A-NH-His-CONRJ

DCC/HOBT

Adicií..r.ente, podem ser preparados compostos de Fórmula I por sínteses múltiplas simultâneas em fase sólida utilizando o dispositiv: L:verscmer® descrito por DeWitt S.H., et al. Proc. Natl. Acãd. Sei. USA, 90: 6909 (1993). Por exemplo, (Esquema II abaixo) , Frr.cc-His-OMe é ligado a resina 2-Cl-Tr utilizando uma amina impedida estericamente tal como DIEA como um expulsor de HC1, o grupo protector Fmoc é removido com piperidina, o terminal sem amina resultante é acilado com uma série de isocianatos, ésteres activados, cloretos ácidos e afins, o éster é saponifiçado, o ácido carboxilico resultante é activado com um reagente carbodiimida tal como EDAC, DCC, ou DIC, o grupo carboxilico activado é feito reagir com álcoois tais como HOBT, NHOS ou pentaclorofenol para produzir um éster activado, o éster activado é feito reagir com uma série de aminas e o conjunto de compostos resultantes de Fórmula I é clivado da resina com HOAc quente ou por tratamento com TFA em DCM à temperatura ambiente. Um método alternativo Diversomer® (Esquema III) utiliza N(l) ou N (3) -carboximetil-Fmoc-His-OMe que é ligado ou à resina Wang ou à resina 2-Cl-Tr. O restante da síntese faz paralelo com o descrito no Esquema II.

Para todos os três métodos de síntese descritos acima é dada consideração apropriada à protecção e desprotecção de grupos funcionais reactivos e à sequência dos passos de síntese. 0 conhecimento da utilização de grupos de protecção comuns e da estratégia para a montagem das complexas moléculas orgânicas 15 estão no âmbito normal da experiência de um especialista de química orgânica (ver, por exemplo, Greene T.W. e Wuts P.G.M., Protective Groups in Organic Chemistry, John Wiley and Sons (1991); Corey E.J. e Cheng X.-M., The Logic of Chemical Synthesis, John Wiley and Sons (1989)). A homogeneidade e composição dos compostos resultantes são verificadas por HPLC, electroforese capilar, cromatografia em camada fina (TLC), espectrometria de ressonância magnética de protões nucleares (RMN), espectrometria de massa por bombardeamento atómico rápido (FAB-EM) e espectrometria de massa por electropulverização (ES-EM). 16 ESQUEMA II: Método de Síntese Múltipla Simultânea

1. NaOH 2. EDAC,

HOBT 3. Cinco aminas

40 Compostos de Fórmula I

17

A.Hif >- ESQUEMA III: Método Múltiplo Simultâneo Alternativo

Resina

Piperidina Oito agentes de acilação Me 3. NaOH - 4. EDAC, HOBT 5. Cinco aminas

40 Compostos de Fórmula I 18

Como discutido acima, os compostos de Fórmula I-III são capazes de formar ainda sais f armaceut icamente aceitáveis de adição ácida e/ou básica. Todas estas formas estão no âmbito da presente invenção.

Sais de adição de ácido f armaceuticamente aceitáveis dos compostos d© Fórmula I-III incluem sais derivados de ácidos inorgânicos não tóxicos tais como, ácido clorídrico, nítrico, fosfórico, sulfúrico, bromídico, iodídico, fluorídrico, fosforoso, e afins, assim como os sais derivados de ácidos orgânicos não tóxicos, tais como ácidos alifáticos mono- e dicarboxílicos, ácidos alcanóicos fenil substituídos, ácidos hidroxi-alcanóicos, ácidos alcanodióicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos e aromáticos, etc. Tais sais incluem assim sulfato, pirossulfato, bissulfato, sulfito, bissulfito, nitrato, fosfato, monohidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, cloreto, brometo, iodeto, acetato, trifluoroacetato, propionatc, caprilato, isobutirato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, mandelato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, ftalato, benzenossulfonato, toluenossulfonato, fenilacetato, citrato, lactato, maleato, tartarato, metanossulfonato, e afins. Também estão contemplados sais de aminoácidos tais como arginato e afins e gluconato, galactorunato, n-metilglucamina (ver, por exemplo, Berge, S.M., et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 66: 1-19 (1977).

Os sais de adição ácida dos referidos compostos básicos são preparados por contacto da forma de base livre com uma quantidade suficiente do ácido desejado para produzir o sal de uma forma convencional. Preferencialmente um composto de Fórmulas I-III pode ser convertido num sal acídico por tratamento com uma solução aquosa do ácido desejado, de modo a que o pH resultante seja menor do que 4. A solução pode ser passada através de um cartucho C18 para absorver o composto, 19 lavado com quantidades copiosas de água, o composto eluido com um solvente orgânico polar tal como, por exemplo, metanol, acetonitrilo, e afins, e isolado por concentração sob pressão reduzida seguida de liofilização. A forma de base livre pode ser regenerada por contacto da forma sal com uma base e isolando a base livre da forma convencional ou como acima. As formas de base livre diferem das suas respectivas formas de sal em certas propriedades físicas tais como solubilidade em solventes polares, mas por outro lado os sais são equivalentes à sua respectiva forma de base livre para os fins da presente invenção.

Os sais de adição básica farmaceuticamente aceitáveis são formados com metais ou aminas, tais como, metais alcalinos e alcalino-terrosos ou aminas orgânicas. Exemplos de metais utilizados como catiões são sódio, potássio, magnésio, cálcio, e afins. Exemplos de aminas adequadas são N,N'-dibenziletilenodiamina, cloroprocaina, colina, dietanolamina, diciclohexilamina, etilenodiamina, N-metilglucamina, e procaína (ver, por exemplo, Berge, S.M., et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 66: 1-19 (1977)).

Os sais de adição básica dos referidos compostos acídicos são preparados por contacto da forma de ácido livre com uma quantidade suficiente da base desejada para produzir o sal de uma forma convencional. Pref erencialmente, um composto de Fórmulas I-III pode ser convertido num sal de base por tratamento com uma solução aquosa da base desejada, de modo a que o pH resultante seja maior do que 9. A solução pode ser passada através de um cartucho C18 para absorver o composto, lavada com quantidades copiosas de água, o composto eluido com um solvente orgânico polar tal como, por exemplo, metanol, acetonitrilo e afins, e isolado por concentração sob pressão reduzida seguida de liofilização. A forma de ácido livre pode ser regenerada por contacto da forma sal com um ácido e isolando o ácido livre da forma convencional ou como acima. As formas de 20 ácido livre diferem das suas respectivas formas de sal em certas propriedades tísicas tais como solubilidade em solventes polares, mas por outro lado os sais são equivalentes à sua respectiva forma de ácido livre para os fins da presente invenção.

Certos compostos da presente invenção podem existir em formas não solvatadas assim como em formas solvatadas, incluindo formas hidratadas. Em geral, as formas solvatadas, incluindo as formas hidratadas, são equivalentes a formas não solvatadas e pretendem estar incluídas no âmbito da presente invenção. Certos compostos da presente invenção possuem um ou mais centros quirais e cada centro pode existir na configuração R(D) ou S(L). A presente invenção inclui todas as formas enant ioméricas e epiméricas assim como misturas apropriadas destas. A actividade inibidora de PFT dos compostos de Fórmulas I-III foi ensaiada em tampão de fosfato de potássio a 30 mM, pH 7,4, contendo DTT a 7 mM, MgCl2 a 1,2 mM, leupeptina a 0,1 mM, pepstatina a 0,1 mM, e fluoreto de fenilmetilsulfonilo a 0,2 mM. Foram efectuados ensaios em placas de 96 poços (Wallec) e empregues soluções compostas por vários concentrações de um composto de Fórmula I em DMSO a 100%. Após a adição de ambos os substratos, pirofosfato de farnesilo marcado radioactivamente ([1—3H], actividade específica 15-30 Ci/mmol, concentração final de 0,12 μΜ) e péptido (biotinil) -Ahe-Tyr-Lys-Cys-Val-Ile-Met (concentração final a 0,1 μΜ) , a reacção da enzima foi iniciada pela adição de transferase de farnesilo de cérebro de rato purificada 40 vezes. Após incubação a 37 °C durante 30 minutos, a reacção foi terminada por diluição da reacção 2,5 vezes com um tampão de terminação contendo acetato de magnésio a 1,5 M, H3P04 a 0,2 M, BSA a 0,5%, e esferas de estrepavidina (Amersham) a uma concentração de 1,3 mg/mL. Após deixar a placa assentar durante 30 minutos à temperatura ambiente, a radioactividade foi quantificada num contador microBeta (Modelo 1450, Wallec). Os 21 compostos de Fórmulas I-III apresentam valores de IC50 de 0,5 a 1000 nM neste ensaio e são assim inibidores valiosos da enzima transferase de farnesilo:proteína que podem ser utilizados no tratamento médico de doenças proliferativas do tecido, incluindo cancro e restenose.

Os rnnpo.sfns de presente invenção podem ser preparados e administrados numa vasta variedade de formas de dosagem oral, rectal c p,. r entérica. Assim, os compostos da presente invenção podem scr administrados por injecção, ou seja, intravenosamente, intramuscuiarmente, intracutaneamente, subcutaneamente, intraduoder-.a lmente, ou intraperitonealmente. Também, os compostos da presente invenção podem ser administrados por inalação, per exemplo, intranasalmente. Adicionalmente, os compostos da presente invenção podem ser administrados transdermicumenLe. Deve ser óbvio para os especialistas da técnica que as formas de dosagem podem compreender como componente activo, ou um composto de Fórmulas I-III ou um sal farmaceuticamente aceitável correspondente de um composto de Fórmulas I-III.

Para preparar composições farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da presente invenção, os veículos farmaceuticamente aceitáveis podem ser sólidos ou líquidos. As preparações de forma sólida incluem pós, comprimidos, pílulas, cápsulas, drageias, supositórios, e grânulos dispersíveis. Um veículo sólido pode ser uma ou mais substâncias que podem também actuar como diluentes, agentes aromatizantes, ligantes, conservantes, agentes de desintegração de comprimidos, ou um material de encapsulação.

Em pós, o veículo é um sólido finamente dividido que está numa mistura com o componente activo finamente dividido.

Em comprimidos, o componente activo é misturado com o veículo possuindo as propriedades de ligação necessárias em proporções adequadas e compactado na forma e tamanho desejados. 22

X

Os pós e comprimidos contêm preferencialmente de cinco ou dez a cerca de setenta porcento do composto activo. os veículos adequados são carbonato de magnésio, estearato de magnésio, talco açúcar, lactose, pectina, dextrina, amido, gelatina, tragacanto, metilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, uma cera de baixo ponto de fusão, manteiga de cacau, e afins. O termo "preparação" pretende incluir a formulação do composto activo com o material de encapsulação como um veículo proporcionando uma cápsula na qual o componente activo com ou sem outros veículos, é rodeado por um veículo, que está assim em associação com este. Do mesmo modo, estão incluídas drageias e rebuçados. Comprimidos, pós, cápsulas, pílulas, drageias, e rebuçados podem ser utilizadas como formas de dosagem sólida adequadas para administração oral.

Para preparar supositórios, uma cera de baixo ponto de fusão, tal como uma mistura de glicéridos de ácido gordo ou manteiga de cacau, é primeiro fundida e o componente activo é disperso homogeneamente nele, por agitação. A mistura homogénea fundida é então vertida em moldes de tamanho conveniente, deixada arrefecer, e deste modo solidificar.

As preparações líquidas incluem soluções, suspensões, e emulsões, por exemplo, água ou soluções de propilenoglicol em água. As preparações líquidas para injecção parentérica podem ser formuladas em solução em solução aquosa de polietilenoglicol.

As soluções aquosas adequadas para utilização oral podem ser preparadas dissolvendo o componente activo em água e adicionando corantes, aromatizantes, agentes estabilizadores e espessantes adequados, como desejado.

As suspensões aquosas adequadas para utilização oral podem ser produzidas dispersando o componente activo dividido finamente em água com material viscoso, tal como gomas naturais ou sintéticas, resinas, metilcelulose, carboximetilcelulose de sódio e outros agentes de suspensão bem conhecidos. 23

Também estão incluídas preparações em forma sólida, que se pretende serem convertidas, pouco tempo antes da utilização, em preparações de forma líquida para administração oral. Tais fornas líquidas incluem soluções, suspensões e emulsões. Estas preparações podem conter, adicionalmente ao composto activo, corantes, aromati zantps, estabi tirantes, tampões, adoçantes artificiais e naturais, dispersantes, espessantes, agentes solubi1izantes e afins. A preparação farmacêutica está preferencialmente numa forma de dosagem unitária. Em tal forma a preparação é sub-dividida em doses unitárias contendo quantidades apropriadas do componente activo. A forma de dosagem unitária pode ser uma preparação embalada, contendo a embalagem quantidades discretas de preparação, tais como comprimidos empacotados, cápsulas e pós em frascos ou ampolas. A forma de dosagem unitária também pode ser uma cápsula, comprimido, drageia ou o próprio rebuçado, ou pode ser o número apropriado de qualquer destes em forma embalada. A quantidade de componente activo numa preparação de dose unitária pode ser variada ou ajustada desde 0,1 mg até 100 mg, preferencialmente 0,5 mg a 100 mg de acordo com a aplicação particular e a potência do componente activo. A composição pode, se desejado, conter também outros agentes terapêuticos compatíveis.

Em utilização terapêutica como inibidores de PFT, os compostos utilizados nos métodos farmacêuticos desta invenção são administrados à dosagem inicial de cerca de 0,01 mg até cerca de 20 mg por quilograma diariamente. Uma dose diária varia de cerca de 0,01 mg até cerca de 10 mg por quilograma, se preferido. As dosagens, contudo, podem ser variadas dependendo das necessidades do doente, da severidade da condição a ser tratada, e do composto a ser empregue. A determinação da dosagem apropriada para uma situação particular está dentro da especialidade na técnica. Geralmente, o tratamento é iniciado com dosagens menores que são menos do que a dose óptima do 24 composto. Posteriormente a dosagem é aumentada em incrementos pequenos até ser alcançado o efeito óptimo atendendo às circunstâncias. Para conveniência, a dosagem diária total pode ser dividida e administrada em porções durante o dia, se desejado.

Os seguintes exemplos não limitantes ilustram os métodos preferidos dos inventores para a preparação dos compostos da invenção. EXEMPLO 1 N- [ (Fenilmetcxi ) carbonil] -L-histidil-N- [2 - (fenilmetoxi) etil] -N2-[ [4-(fenilmctoxi)fenil]metil]-glicinamida

Passo 1: Éster metílico de ácido (4-benziloxibenzilamino) acético A uma mistura de cloridrato de éster metilico de glicina (2,07 g, 16,5 mmol) e 4-benziloxibenzaldeído (3,18 g, 15,0 mmol) em CH2CI2 (50 mL) a 0°C foi adicionado triacetoxiborohidreto de sódio (3,81 g, 18,0 mmol). A mistura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 4 horas. Foi adicionado NaHC03 aquoso e a mistura foi agitada durante 30 minutos. A camada aquosa foi extraída três vezes com CH2C12. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução salina, secos sobre MgS04 e concentrados. A cromatografia "flash" (EtOAc a 75%/hexano) produziu 1,98 g (46%) do composto do título como um sólido branco, pf 57-58°C.

Passo 2: Éster metílico de N-[N-[ (fenilmetoxi) carbonil-L- histidil]-N- [ [4-(fenilmetoxi)fenil]metil]glicina

A uma suspensão de CBZ-histidina (1,22 g, 4,21 mmol) em DMF (10 mL) foram adicionados hidrato de HOBT (0,77 g, 5,05 mmol) e DCC (1,04 a, 5,05 mmol). A amina do Pa.sso 1 acima (1,20 g, 4,21 mmol) foi então adicionada e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi filtrada, e o filtrado foi diluído com CHCI3, lavado duas vezes com NaHCC>3 saturado, solução salina, seco sobre MgS04 e concentrado. A 25 cromatografia "flash" produziu 1,68 g (72%) do composto do titulo como uma espuma branca; ES-EM 557 (m + 1) .

Passo 3: N- [N- [ (Fenilmetoxi) carbonil] -L-histidil] -N- [ [4-(fenil-metoxi)feniljmetil]qlicina A uma solução do éster do Passo 2 (1,53 g, 2,75 mmol) em THF (15 mL) e H2O (5 mL) a 0°C foi ariirionado hidrato de LiOH (0,14 g, 3,30 mmol) e a solução foi agitada durante 5 horas a 0°C. A solução foi concentrada, o resíduo foi suspendido em H20, e o pH foi ajustado para 4-5 com HC1 a 1 N. A mistura resultante foi concentrada e seca sob vácuo para produzir 1,65 g do composto do título como um sólido branco; FAB-EM 543 (m + 1).

Anal. calc. para C3oH3oN406-l, 2 LiCl-0H2O: C, 57,24; H, 5,44; N, 8,90.

Encontrado: C, 57,35; H, 5,32; N, 8,62.

Passo 4 : N- [ (Fenilmetoxi) carbonil] -L-histidil-N- [2- (fenilmetoxi) etil] -N2- [ [4- (fenilmetoxi) fenil] -metil] qlicinamida A uma solução do ácido do Passo 3 (2,9 g, 5,33 mmol) em DMF (15 mL) foi adicionado hidrato de HOBT (0,98 g, 6,39 mmol) e DCC (1,32 g, 6,39 mmol) seguido por cloridrato de 2-

benziloxietilamina (1,0 g, 5,33 mmol). Foi adicionado Et3N (0,82 mL, 5,86 mmol) e a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi filtrada e o filtrado foi diluído com CHC13, lavado duas vezes com NaHC03 saturado, solução salina, seco sobre MgS04 e concentrado. A cromatografia "flash" (MeOH a 2-5%/CHCl3) produziu 2,25 g (63%) do composto do título como uma espuma branca; ES-EM 67 6 (m + 1) . EXEMPLO 2 N- [ (Fenilmetoxi) carbonil] -L-histidil-N- [2- (lH-indol-3-il) etil-N2-[ [4- (fenilmetoxi) fenil]metil] glicinamida

De acordo com o Exemplo 1, Passo 4, através da substituição de cloridrato de triptamina por cloridrato de 2- 26 benziloxietilamina, foi obtido o composto do título como uma espuma branca; ES-EM 685 (m + 1). EXEMPLO 3 Éster fenilmetílico de N-[N-[N-[(fenilmetoxi) carbonil]-L-histidil]-N-[[4-(fenilmetoxi)fenil]metil]glicil]qlicina

De acuidu com o Exemplo 1, Passo 4, através da 3ubotituição de cloridrato de éster benzílico de glicina por cloridrato de 2-benziloxietilamina, foi obtido o composto do título como um pó branco; ES-EM 690 (m + 1) . EXEMPLO 4 N- [ (Fenilmetoxi)carbonil]-L-histidil-N-(4-fenilbutil)-N2-[[4-(fenilmetoxi)fenil]metil]glicinamida

De acordo com o Exemplo 1, Passo 4, através da substituição de 4-fenilbutilamina por cloridrato de 2-benziloxietilamina e omitindo EtsN, foi obtido o composto do título como uma espuma branca, pf 58-61°C; ES-EM 674 (m + 1). EXEMPLO 5 Éster metílico de N-[N- [N- (fenilmetoxi) carbonil] -L-histidil] -N-[[4-(fenilmetoxi)fenil]metil]glicil]glicina

De acordo com o Exemplo 1, Passo 4, através da substituição do cloridrato de éster metílico de glicina por 2- benziloxietilamina, foi obtido o composto do título como uma espuma branca; ES-EM 614 (m + 1) . EXEMPLO 6 N-[(Fenilmetoxi)carbonil] -L-histidil-N-[[4-(fenilmetoxi) fenil] metil]glicil-N-fenilmetilglicinamida

De dcuniu com o Exemplo 1, Passo 4, através da substituição do sal de ácido trifluoroacético de N-fenilmetilglicinamida por cloridrato de 2-benziloxietilamina, foi obtido o composto do título como um pó branco; ES-EM 689 (m + 1). 27 EXEMPLO 7 Éster fenilmetílico de N-[N- [N- [ ( feníImetoxi)carbonil]-L-histidil]-N-[ [4 - (fenilmetoxi) fenil]metil]qlicil]-p-alanina

Dc acordo com o Exemplo 1, Passo 4, através da substituição do cloridrato de éster benzilico de β-alanina por cloridrato de 2-benziloxietilamina, o composto do título foi obtido como uma espuma branca; ES-EM 704 (m + 1). EXEMPLO 8 Éster_f enilmetílico_de_N- [N- [ (4-metoxifenil)metil] -N- [N- [ (fenilmetoxi) -carbonil] -L-histidil] glicil] qlicina

Passo 1: Éster etílico de ácido N-(4-metoxibenzilamino) acético A uma mistura de cloridrato de éster etílico de glicina (1,03 g, 7,38 mmol) e 4-metoxibenzaldeído (0,71 g, 5,21 mmol) em CH2CI2 (25 mL) foi adicionado KOAc (0,51 g, 5,21 mmol) seguido por triacetoxiborohidreto de sódio (1,44 g, 6,78 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. Foi adicionado NaHCCh aquoso e a mistura foi agitada durante 30 minutos. A camada aquosa foi extraída três vezes com CH2CI2. Os extractos combinados foram lavados com solução salina, secos sobre MgS04 e concentrados. A cromatograf ia "flash" (EtOAc a 60%/hexano) produziu 1,0 g (86%) do composto do título como um óleo incolor; CI-EM 224 (m + 1) .

Passo 2: Éster etílico de N-[ (4-metoxifenil)metil]-N-[N-[ (fenilmetoxi) carbonil]-L-histidil]glicina ue acordo com o Exemplo 1, Passo 2, através da substituição do composto do Passo 1 acima por éster metílico de N-[[4-(fenilmetoxi) feniljmetil]glicina, foi obtido o composto do título como uma espuma branca; ES-EM 4 95 (m + 1) . 28

Passo 3: N- [ (4-Metoxifenil)metil]-N-[N-[(fenilmetoxi)carbonil]-L-histidil]glicina

De acordo com o Exemplo 1, Passo 3, mas substituindo o composto do Passo 2 acima por éster metilico de N- [N- [ (fenilmetoxi ) carbonil] -L-histidil] -N-[[4-(fenilmetoxi)-fenil]metil] glicina, f c i ohtido o composto do titulo como um sólido branco.

Passo 4 : Z. \ ·. r fenilmetílico de N- [ (4-metoxifenil) metil] -N- [N-[ (fenilm·:.'t:·:: carbonil] -L-histidil]glicina A uma rtluçào do ácido do Passo 3 (0,41 g, 0,88 mmol) em DMF (5 mL) íoi adicionado hidrato de HOBT (0,16 g, 1,05 mmol) e DCC (0,22 g, 1,15 mmol) seguido por cloridrato de éster benzilico de glicina (0,18 g, 0,88 mmol). Foi adicionado Et3N (0,12 mL, 0,88 mmol) e a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi filtrada, o filtrado foi diluído com CHC13, lavado duas vezes com NaHCCb saturado, solução salina, seco sobre MgSO, e concentrado. A cromatografia "flash" (MeOH a 2-5%/CHCl3) produziu 0,29 g (54%) do composto do título como uma espuma branca; ES-EM 614 (m + 1) . EXEMPLO 9 Éster fenilmetílico de N-[ (4-metoxifenil)metil]-N-[N-[(fenil-metoxi) -carbonil]-L-histidil]glicina

De acordo com o Exemplo 8, Passo 4, através da substituição do álcool benzilico por cloridrato de éster benzilico de glicina e omitindo Et3N, foi obtido o composto do título como uma espuma branca; ES-EM 557 (m + 1) . EXEMPLO 10 N- [ (FenilTnetoxi)carbonil]-D-histidil-N-[2-(fenilmetoxi)etil]-N2-[ [4-fenilmetoxi) fenil]metil] -glicinamida

Passo 1: N-BOC-N-[2-(fenilmetoxi)etil]qlicinamida 29 A uma solução de BOC-glicina (0,47 g, 2,69 mmol) em EtOAc (10 mL) foi adicionado hidrato de HOBT (0,49 g, 3,22 mmol) seguido por DCC (0,66 g, 3,22 mmol) . Após 30 minutos, foi adicionada uma solução de benziloxietilamina (0,41 g, 2,69 mmol) em EtOAc (5 mL) e a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi filtrada e o filtrado foi diluído com EtOAc, lavado com NaHC03 aquoso saturado, solução salina, seco sobre MgSOí e concentrado. A cromatografia "flash" (EtOAc) produziu 0,72 g (87%) do composto do título como um óleo amarelo claro que solidificou lentamente; CI-EM 309 (m + 1).

Anal. calc. para C16H24N2O4: C, 62,32; H, 7,84, N, 9,08.

Encontrado: C, 61,94; H, 7,83; N, 9,12.

Passo 2: Sal de ácido N- [2-fenilmetoxi) etil] qlicinamida tri-fluoroacético A uma solução do composto do Passo 1 acima (0,67 g, 2,17 mmol) em CH2CI2 (10 mL) foi adicionado TFA (1 mL) . A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas e depois concentrada. O resíduo foi por duas vezes suspendido em CH2CI2 e reconcentrado. Foram obtidos 0,78 g de uma goma amarela clara que foi utilizada no Passo 3 sem posterior purificação; CI-EM 209 (m + 1).

Passo 3: N-[2-(Fenilmetoxi) etil]-N2- [ [4 - (fenilmetoxi)feniljmetil] qlicinamida A uma solução do composto do Passo 2 acima (0,69 g, 2,14 mmol) em CH2C12 (10 mL) a 0°C foi adicionado 4- benziloxibenzaldeído (0,45 g, 2,14 mmol) seguido por triacetoxiborohidreto de sódio (0,59 g, 2,78 mmol). A mistura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante seis horas. Foi adicionado NaHC03 saturado aquoso e a mistura foi agitada durante 30 minutos. A camada aquosa foi extraída três vezes com CH2CI2. Os extractos orgânicos combinados 30 foram lavados com solução salina, secos sobre MgS04 e concentrados. A cromatografia "flash" (MeOH a 2-5%/CHCl3) produziu 0,46 g (53%) do composto do titulo como um óleo incolor; CI-EM 405 (m + 1) .

Paooo 4: N—[ ( Fcnilmctoxi ) carbonil ]-D-histidil—N— [2-( f cnilmctoxi ) etil ] -N“- [ [ 4- ( fenilmetoxi) fenil] -metil] qlicinamida A uma suspensão de CBZ-D-histidina (0,093 g, 0,32 mmol) em DMF (2 mL) foi adicionado hidrato de HOBT (0, 059 g, 0,39 mmol) seguido por DCC (0,080 g, 0,39 mmol). Foi adicionada uma solução do composto do Passo 3 acima (0,13 g, 0,32 mmol) em DMF (2 mL) e a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi filtrada e o filtrado foi diluído com CHCI3, lavado duas vezes com NaHCCb saturado aquoso, solução salina, seco sobre MgSOs e concentrado. A cromatograf ia "flash" (MeOH a 2-5%/CHCl3) produziu 0,10 g (45%) do composto do título como um pó branco; ES-EM 676 (m + 1) .

Anal. calc. para C39H41N5O60,5H20: C, 68,39; H, 6,18; N, 10,22.

Encontrado: C, 68,56; H, 6,28; N, 9,83. EXEMPLO 11 N- [ (Fenilmetoxi ) carbonil] -L-histidil-N2- [(1,1' -bifenil) -4-il-metil]-N- [2- (fenilmetoxi)etil]-glicinamida

Passo 1: N2- [ (1,1' -Bifenil) -4-ilmetil] -N- [2-fenilmetoxi) etil] qlicinamida

De acordo com o Exemplo 10, Passo 3, através da substituição de 4-bifenilcarboxaldeído por 4-benziloxi-benzaldeido, foi obtido o composto do título como um óleo incolor que solidificou lentamente; XH RMN (300 MHz, CDC13) : δ 7,65-7,27 (m, 15H) , 4,55 (s, 2H) , 3,82 (s, 2H) , 3, 62-3,50 (m, 4H) , 3,35 (s, 2H) . 31

ν

Passo 2 : Ν - [ (Fenilmetoxi) carbonil ] -L-histidil-N2- [ (1,1' -bí fenil) -4-ilmetii]-N-[2-(fenilmetoxi)-etil] qlicinamida

De acordo com o Exemplo 10, Passo 4, através da substituição do composto do Passo 1 acima por N- [2-(fenilmetoxi) etil] -NP-[ [4-(fenilmetoxi) fenil]metil] -glicinamida e CBZ- hisHnina por ORZ-D-hi.st idina, foi obtido o composto do titulo como uma espuma branca; ES-EM 646 (m + 1) . EXEMPLO 12 N- [ (Fenilnetoxi ) carbonil] -L-histidil-N2- [4 - (fenilmetoxi) butil] -N-[2-(fenilmetoxi)etil]glicinamida

Passo 1: Nb- [4- (Fenilmetoxi) butil] -N- [2- (fenilmetoxi) etil] qlicinamida

De acordo com o Exemplo 10, Passo 3, através da substituição de 4-benziloxibutiraldeído por 4-benziloxi-benzaldeído, foi obtido o composto do título como um óleo incolor; XH RMN (300 MHz, CDC13) : δ 7,58 (br m, 1H) , 7,38-7,25 (m, 10H) , 4,53 (s, 2H), 4,50 (s, 2H) , 3, 60-3,42 (m, 6H) , 3,25 (s, 2H) , 2,61 (m, 2H), 1,71-1,50 (m, 5H).

Passo 2 : N- [ (Fenilmetoxi) carbonil] -L-histidil-N2- [4 - (fenilmetoxi) butil]-N-[2-(fenilmetoxi)etil]-qlicinamida

De acordo com o Exemplo 10, Passo 4, através da substituição do composto do Passo 1 acima por N-[2-(fenilmetoxi) etil] -N2- [ [4-(fenilmetoxi) fenil]metil] -glicinamida e CBZ- histidina por CBZ-D-histidina, foi obtido o composto do titulo como uma espuma branca; ES-EM 642 (m + 1) . EXEMPLO 13 N- [ (Fenilmetoxi) carbonil] -L-histidil-N- (3-fenoxipropil) -N2- [ [4-(fenilmetoxi)fenil]metil·]glicinamida 32

Passo 1: N- (Fenoxipropil) -N2- [ [4- (fenilmetoxi) -fenil]metil] glicinamida

De acordo com o Exemplo 10, Passo 3, através da substituição de cloridrato de N- (3-fenoxipropil) glicinamida por sal de ácido N-[2-(fenilmetoxi)etil]glicinamida trifluoro-acético, foi obtido o composto do título como um óleo incolor que solidificou lentamente, pf 55-56°C; CI-EM 405 (m + 1) .

Passo 2 : N- [ (Fenilmetoxi) carbonil] -L-histidil-N- (3-fenoxipropil) -N2- [ [4- (fenilmetoxi) fenil]metil] -glicinamida

De acordo com o Exemplo 10, Passo 4, através da substituição do composto do Passo 1 acima por N-[2-(fenilmetoxi) etil] -N2- [ [4- (fenilmetoxi) fenil]metil] -glicinamida e CBZ- histidina por CBZ-D-histidina, foi obtido o composto do titulo como uma espuma branca; ES-EM 676 (m + 1) . EXEMPLO 14 Éster_f enilmetílico de N-[N-[N-[(fenilmetoxi)carbonil]-L- histidil]-N-[ [3 - (fenilmetoxi) fenil]metil]qlicil3glicina

Passo 1: Éster benzilico de N-BOC-glicilqlicina

De acordo com o Exemplo 10, Passo 1, através da substituição de cloridrato de éster benzilico de glicina por benziloxietilamina e adicionando 1 eq. de Et3N, foi obtido o composto do titulo como um óleo incolor; CI-EM 323 (m + 1).

Passo 2: Sal de ácido trif luoroacético de éster benzilico de qlicilglicina

De acordo com o Exemplo 10, Passo 2, através da substituição do composto do Passo 1 acima por N BOC N [2 - (fenilmetoxi)etil]glicinamida, foi obtido o composto do título como um sólido branco; CI-EM 223 (m + 1) .

Anal. calc. para CnHi4N2C>3-CF3C02H: C, 46,43; H, 4,61; N, 8,33. 33

Encontrado: C, 46,43; H, 4,50; N, 8,33.

Passo 3: Éster benzilico de N-[2-(fenilmetoxi)etil]-N-[[3-(fenilmetoxi)feniljmetil]qlicina

De acordo com o Exemplo 10, Passo 3, através da substituição de 3-benziloxibenzaldeido por 4-benziloxi-benzaldeído e o composto do Passo 2 por sal de ácido N— [ 2 — fenilmetoxi)-etil]glicinamida trifluoroacético, foi obtido o composto do título como um óleo incolor; ΧΗ RMN (300 MHz, CDCL3) : δ 7,74 (br m, 1H) , 7,48-7,21 (m, 11H) , 6,98 (s, 1H), 6,91 (m, 2H) , 5,20 (s, 2H) , 5,09 (s, 2H) , 4,13 (d, J = 6 Hz, 2H), 3,78 (s, 2H), 3,36 (s, 2H).

Passo 4: Éster fenilmetílico de N-[N-[N-[(fenilmetoxi)carbonil]-L-histidil-N- [ [3- (fenilmetoxi) fenil]metil] glicil] qlicina

De acordo com o Exemplo 10, Passo 4, através da substituição do composto do Passo 3 acima por N-[2- (fenilmetoxi) etil] -N2- [ [4- (fenilmetoxi) feniljmetil] -glicinamida e CBZ-histidina por CBZ-D-histidina, foi obtido o composto do título como uma espuma branca; ES-EM 690 (m + 1) . EXEMPLO 15 Éster fenilmetílico de ácido (S) - [ 1-(lH-imidazol-3-ilmetil) -2-oxo-2- [ [2 - (fenilmetoxi) etil] [ 4 - (fenilmetoxi) fenil] metil] amino] - etil]carbâmico

Passo 1: [ [2-(Fenilmetoxi) etil] [4-(fenilmetoxi)-fenil]metil] amina A uma solução de benziloxietilamina (0,75 g, 4,96 mmol) em CH2CI2 (20 ínL) a 0°C foi adicionado 4-benziloxibenzaldeído (0,96 g, 4,51 mmol). Foi adicionado triacetoxiborohidreto de sódio (1,24 g, 5,86 mmol) seguido por AcOH (0,26 mL, 4,51 mmol). A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 4 horas. Foi adicionado NaHC03 saturado aquoso e 34 a mistura foi agitada durante 30 minutos. A camada aquosa foi extraída Lrês vezes com CH2CJI2. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução salina, secos sobre MgSCd e concentrados. A cromatografia "flash" (MeOH a 2%/CHCl3) produziu 1,04 g (66%) do composto do titulo como um óleo incolor; CI-EM 348 (m + 1).

Passo 2: Éster fenilmetílico de ácido (S) - [1- (lH-imidazol-3-ilmetil)-2-OXO-2- [ [2-(fenilmetoxi) etil] [4-(fenilmetoxi) fenil] metil]amino]-etil]carbâmico

De acordo com o Exemplo 10, Passo 4, através da substituição do composto do Passo 1 acima por N-[2- (fenilmetoxi) etil] -N2- [ [ 4 - (fenilmetoxi) fenil] metil] -glicinamida e CBZ-histidina por CBZ-D-histidina, foi obtido o composto do titulo como uma espuma branca; ES-EM 619 (m + 1) .

Anal. calc. para C37H38N4O5: C, 71,83; H, 6,19; N, 9,05.

Encontrado: C, 71,44; H, 6,19; N, 8,99. EXEMPLO 16 Éster fenilmetílico de ácido (S) - [1-(lH-imidazol-3-ilmetil) -2-oxo-2- [bis [ [4 - (fenilmetoxi) fenil]metil] amino] etil] carbâmico

Passo 1: Bis [ [4-(fenilmetoxi) fenil]metil] amina

De acordo com o Exemplo 8, Passo 1, através da substituição de cloridrato de 4-benziloxibenzilamina por cloridrato de éster etílico de glicina e 4-benziloxibenzaldeído por 4-metoxibenzaldeído, foi obtido o composto do título como um sólido branco; C-EM 410 (m + 1) .

Passo 2: Éster fenilmetílico de ácido (S) - [1-(lH-imidazol-3-ilmetil) -2-ΟΧΟ-2- [bis [ [4-(fenilmetoxi)feniljmetil]amino]etil] carbâmico 35

De acordo com o Exemplo 10, Passo 4, através da substituição do composto do Passo 1 acima por N-[2-(fenilmetoxi) etil]-N2- [ [4-(fenilmetoxi) fenil]metil] -glicinamida e CBZ- histidina por CBZ-D-histidina, o composto do titulo foi obtido como uma espuma branca; ES-EM 681 (m + 1).

Anal. calo. para C^HaoNaOs: C, 74,10; H, 5,92; N, 8,23.

Encor.L:u : C, 73, 87; H, 6,00; N, 8,15. EXEMPLO 17 Éster__ror ; 1 ico de O- (fenilmetil) -N- [1,2, 3,4-tetrahidro-2-[N- [ (fenilmet : i '· carbcnil ] -L-histidil] -7- (fenilmetoxi) -L-3-iso-quinolinaoa rooriil ] -L-serina

Passo 1: Éster metílico de N-[N-BOC-[1,2,3, 4-tetrahidro-7-(fenilmetoxi)-L-3-isoquinQlinacarbonil]]-L-serina A uma solução de ácido N-BOC-7-(fenilmetoxi)-L-3-isoquinolina carboxilico (0,50 g, 1,30 mmol) em EtOAc (10 mL) foi adicionado HOBT (0,24 g, 1,56 mmol) seguido por DCC (0,32 g, 1,56 mmol). Foi adicionado cloridrato de éster metílico de serina (0,32 g, 1,30 mmol) seguido por Et3N (0,22 mL, 1,56 mmol) e a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi filtrada e o filtrado foi diluído com EtOAc, lavado com NaHC03 saturado aquoso, solução salina, seco sobre MgS04 e concentrado. A cromatografia "flash" (EtOAc a 40%/hexano) produziu 0,67 g (89%) do composto do título como uma espuma pegajosa; CI-EM 575 (m + 1).

Anal. calc. para C33H38N2O7: C, 68,97; H, 6,67; N, 4,87.

Encontrado: C, 68,57; H, 6,79; n, 4,99.

Passo 2: Sal de ácido trifluoroacético de éster metílico de N-[1,2,3,4-tetrahidro-7- (fenilmetoxi) -L-3-isoquinolinacarbonil] -L-serina 36

De acordo com o substituição do composto metoxi)etil]glicilamida, sólido branco; CI-EM 475

Exemplo 10, Passo 2, através da do Passo 1 acima por N-BOC-N-[2-(fenil-foi obtido o composto do título como um (m + 1) .

Passo 3: Ester metílico de O- (fenilmet.il) -N-[1 , 2, 5, 4-tetrahidro-2 - [N - [ (fenilmetoxi) carbonil] -L-histidil] -7- (fenilmetoxi) -L-3-isoquinolinacarbonil]-L-serina

De acordo com o Exemplo 10, Passo 4, através da substituição do composto do Passo 2 acima por N-[2-(fenilmetoxi) etil] -N2- [ [4-(fenilmetoxi) fenil]metil] -glicinamida e CBZ- histidina por CBZ-D-histidina, foi obtido o composto do título como um sólido branco, pf 82-88°C; ES-EM 746 (m + 1) EXEMPLO 18 Éster fenilmetílico de ácido [ 1-(lH-imidazol-4-ilmetil)-2-oxo-2-[1,2,3, 4-tetrahidro-7- (fenilmetoxi) -3- [ [2- (fenilmetoxi)etil]-amino] carbonil] -2-isoquinolinil·] etil] carbâmico

Passo 1: N- [BOC-1,2,3,4-tetrahidro-7- (fenilmetoxi) -L-3-isoquino-linil] -N' - [2- (fenilmetoxi) etil] -carboxamida

De acordo com o Exemplo 17, Passo 1, através da substituição de benziloxietilamina por cloridrato de éster metílico de serina e omitindo Et3N, foi obtido o composto do título como um óleo incolor; CI-EM 517 (m + 1) .

Passo 2: N-[1, 2,3,4-tetrahidro-7-(fenilmetoxi)-L-3-isoquino- linil] -Ν' - [2- (fenilmetoxi) etil] carboxamida

De acordo com o Exemplo 17, Passo 2, através da substituição do composto do Passo 1 acima por sal de ácido trifluoroacético de éster metílico de N-[1,2,3,4-tetrahidro-7-(fenilmetoxi)-L-3-isoquinolinacarbonil]-L-serina, foi obtido o 37

composto do título como um óleo amarelo claro; CI-EM 417 (m + 1) .

Passo 3: Éster fenilmetílico de ácido [ 1- (lH-imidazol-4- ilmetil)-2-oxo-2-[l,2,3,4-tetrahidro-7-(fenilmetoxi)—3— [ [2— (fe— nllmcLoxi ) elil] aiiiinu] caibunil] -2-isoquinolinil ] etil] carbâmico

De acordo com o Exemplo 10, Passo 4, através da substituição do composto do Passo 2 acima por N-[2- (fenilmetcxi) etil] -N2- [ [4- (fenilmetoxi) feniljmetil] -glicinamida, foi obtido o composto do título como uma mistura de diasterecisómeros separáveis; Diastereoisómero A: ES-EM 688 (m + 1); Diastereoisómero B: ES-EM 688 (m + 1). EXEMPLO 19 1- (2-Metoxi-2-oxoetil) -N- [ (fenilmetoxi) carbonil] -L-histidil-N-[ 2 - ( fenilmetoxi) etil ] -N2- [ [ 4 - (fenilmetoxi) feniljmetil] glicinamida A uma solução de N-[ [fenilmetoxi)carbonil]-L-histidil-N-[2-fenilmetoxi)etil]-Ν'-[[4-(fenilmetoxi) fenil] metil] glicinamida (Exemplo 1) (1,00 g, 1,48 mmol) em CH2CI2 (10 mL) foi adicionado (iPr^NEt (0,28 mL, 1,63 mmol) seguido de bromoacetato de metilo (0,14 mL, 1,48 mmol). A solução foi agitada durante dois dias à temperatura ambiente. Após concentração e cromatografia "flash" (MeOH a l-2%/CHCl3) , foi obtido 0,91 g (82%) do composto do título como uma espuma branca; ES-EM 748 (m + 1).

Anal. calc. para C42H45Ns08: C, 67,46; H, 6,07; N, 9,36.

Encontrado: C, 67,09; H, 5,91; N, 9,12. EXEMPLO 20 1-(Carboximetil)-N-[(fenilmetoxi)carbonil]-L-histidil-N2-[[4-(fenoximetil)feniljmetil] -N-[2-(fenilmetoxi)etil]glicinamida

De acordo com o Exemplo 1, Passo 3, através da substituição do composto do Exemplo 19 por éster metílico de N- [N- 38

[(fenilmetoxi)-carbonil] -L-histidil] -N-[[4- (fenilmetoxi) fenil] metil] glicina, foi obtido o composto do titulo como um pó branco; ES-EM 734 (m + 1) , 740 (m + Li) . EXEMPLO 21 {Fmoc-D-His-(resina 2-Cl-Tr)-C02Me} éster metílico de N-[N-(9H- flnorenn-9-ilmetoxi) -carbonil-histidil] em suporte de fase sólida A uma suspensão de Fmoc-His-Co2Me (1,0 mmol) em CCI3H (10 mL) fci adicionada resina de cloreto de 2-clorotritilo (Novabicchem) (1,0 g) seguido por DIEA (1,1 mmol). A mistura resultante foi sujeita a sonicação breve para dispersar a resina e depois agitada num agitador durante 2,5 horas. A resina modificada foi recolhida por filtração, lavada com CHCI3 (5 x 10 mL) e seca sob vácuo durante 18 horas para produzir a resina carregada. EXEMPLO 22 Éster de ácido metilf (4-benziloxi-benzil) -2 [2-(3-benzil-ureído) -3- (3H-imidazol-4-il) propionil] amino} acético

Fmoc-His (resina 2-Cl-Tr) -C02Me (do Exemplo 21 acima, 0,15 mmol) foi suspendido em piperidina a 20% em DMF (v/v, 4 mL) . a suspensão resultante foi sujeita a sonicação durante 10 minutos e depois agitada em agitador durante 30 minutos. A resina foi filtrada e lavada com DMF três vezes. A resina foi novamente sujeita às mesmas condições de reacção durante mais 20 minutos. A resina foi filtrada e lavada quatro vezes com DMF, três vezes com CHCI3 para proporcionar o His (resina 2-Cl-Tr) -C02Me que foi suspendida em DMC (10 mL), agitada durante 10 minutos por agitação, tratada com isocianato de benzilo (0,6 mmol) e agitada durante mais 30 minutos. A resina foi filtrada, lavada com DCM três vezes, ressuspendida em DCM e o tratamento com isocianato de benzilo foi repetido. A resina foi filtrada e lavada com DMF duas vezes, e CHC13 cinco vezes para produzir BnNHCO-His(resina 2-Cl-Tr)-C02Me que foi de seguida suspendido numa mistura 3:1 de 39 /"—\

dioxano/MeOH (3 mL) e tratada com NaOH a 1,0 N aquoso (0,6 mmol) . A suspensão toi agitada por agitação durante 18 horas, filtrada, lavada sequencialmente com uma mistura 2:1 de dioxano e ácido cítrico aquoso a 10% (3 x 10 mL) , dioxano/MeOH (3 x 10 mL) e CHC13 (3 x 10 mL) para proporcionar BnNHCO-

His(resina 2-C1-Tr)-002H . O RnNHCO-His(resina 2-Cl-Tr)-COzH foi suspendido em DMF (4 mL) e tratado com um reagente de acoplamento de carbodiimida tal como DIC (0,6 mmol) e HOBT (0,6

mmol) . A mistura resultante foi agitada durante 30 minutos e foi adicionado éster metílico de ácido (4-benziloxibenzilamino) acético (0,6 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 18 horas antes da filtração da resina e lavagem três vezes com DMF e três vezes com CHCI3. A resina foi suspendida em DMF (10 mL) e a reacção de acoplamento de carbodiimida/BT/éster metílico de ácido 4-benziloxibenzilaminoacético foi repetida. Após 18 horas a resina foi filtrada e lavada com 10 mL de cada vez de MeOH duas vezes, DCM três vezes, DMF duas vezes, MeOH duas vezes, e CHCI3 duas vezes para produzir BnNHCO-His(resina 2-Cl-Tr)-CON (CH2C02Me) CH2-(4-BnO-Ph) . 0 dipéptido substituído foi clivado da resina através de tratamento com TFA a 70% em DCM, agitando durante 1 hora à temperatura ambiente. O sobrenadante contendo o dipéptido livre foi removido da resina por filtração e a resina foi lavada três vezes com DCM. O sobrenadante e as lavagens combinados foram concentrados sob vácuo para produzir BnNHCO-His-CON (CH2C02Me) CH2-(4-BnO-Ph)-TFA. O produto foi dividido entre água e DCM e ambas as camadas foram tratadas gota a gota com NaHC03 aquoso saturado até que a camada aquosa permanecesse básica. As camadas foram separadas e a fase orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado e seca (MgS04) . A filtração e a concentração produziram BnNHCO-His-CON (CH2C02Me) CH2- (4-BnO-Ph) . EXEMPLO 23 Síntese Múltipla, Simultânea em Fase Sólida 40 0 método descrito no Exemplo 22 pode ser empregue em sínteses múltiplas em simultâneo utilizando o dispositivo descrito por DeWitt S.H., et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 90:6909 (1993). 0 Fmoc-His(resina 2-Cl-tr)-C02Me preparado de acordo com o Exemplo 21 (100-200 mg) é colocado em cada um dos 40 tubos e OS tubos são colocados no dispositivo de sintcoc múltipla. São seguidas as reacções de desprotecção e de acoplamento sequenciais descritas no Exemplo 22, empregando os seguintes agentes de acilação e aminas em todas as combinações possíveis:

Agentes de acilação 1) isocianato de benzilo 2) éster NHOS de benziloxicarbonilo 3) isocianato de fenilo 4) isocianato de 3-piridilmetilo 5) isocianato de fenetilo 6) isocianato de butilo 7) cloreto de fenilacetilo 8) isocianato de 1-naftilo

Aminas 1) HN(CH2C02Me)CH2(4-BnO-Ph) 2) HN (CH2CONHCH2CH2OBn) CH2 (4-BnO-Ph) 3) HN (CH2CONHCH2CH2SBn)CH2( 4-BnO-Ph) 4) HN (CH2CONHCH2CH2OBn)CH2 (4-EtO-Ph)

5)

Após clivagem da resina e processamento como descrito no Exemplo 22, foram isolados os seguintes 40 análogos substituídos de Fórmula I: 41 V,· π \ \

9.

10.

13.

Η Ν

21. 22. 23.

Η

47 24.

48

50

51 39.

52

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS (1) INFORMAÇÃO GERAL: (i) REQUERENTE: Hodges, John C.

Bolton, Gary L. Wilson, Michael W. (ii ) TITULO DA INVENÇÃO: Derivados de Histidina e de Homohistidina como Inibidores de Transferase de Farnesilo de Proteína (iii) NÚMERO DE SEQUÊNCIAS: 4 (iv) ENDEREÇO PARA CORRESPONDÊNCIA: (A) DESTINATÁRIO: Warner-Lambert Company (B) RUA: 2800 Plymouth Rd (C) CIDADE: Ann Arbor

(D) ESTADO: MI

(E) PAÍS: EUA (F) CÓDIGO POSTAL: 48105 (v)

FORMA DE LEITURA EM COMPUTADOR (A) TIPO DE MEIO: Disquete (B) COMPUTADOR: IBM PC compatível

(C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS (D) PROGRAMA INFORMÁTICO: Patent In Release #1.0, Ver #1.25 (vi) DADOS DO PRESENTE PEDIDO;

(A) NÚMERO DE PEDIDO: US (B) DATA DO FICHEIRO: (C) CLASSIFICAÇÃO: 53 (viii) ADVOGADO/AGENTE DE INFORMAÇÃO: (A) NOME: Ashbrook, Charles W. (B) NÚMERO DE REGISTO: 27 610 (C) REFERÊNCIA/NÚMERO DE REGISTO: PD-5077 (ía) INFORMAÇÃO DE TELECOMUNICAÇÕES: (A) TELEFONE: 313 996-5215 (B) TELEFAX: 313 996-1553 54 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 1: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 4 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO:l

Cys Xaa Xaa Xaa 1 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 2: (i) CARACTERÍ STICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 4 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N0:2

Cys Xaa Xaa Xaa 1 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 3: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 4 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear 55 (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO:3

Cys Xaa Xaa Xaa 1 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 4: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 4 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO:4

Cys Xaa Xaa Xaa 1

Lisboa, 14 de Maio de 2001

56

Claims (13)

1. REIVINDICAÇÕES Inibidor de transferase de farnesilo de proteína que é um derivado de histidina ou homohistidina de Fórmula I,

   I em que n Ά = CCR:, CO;R2, CONHR2, CSR2, C(S)OR2, C(S)NHR2, OU S02R2 com R' como definido abaixo; R = independentemente H ou Me; R2 = aquilo Ci-C6, (CH2)m cicloalquilo C3-C7, (CH2)m-arilo, em que arilo é definido como um anel aromático que é um grupo fenilo, 5-fluorenilo, 1-naftilo, ou 2-naftilo, não substituído ou substituído por 1 a 3 substituintes seleccionados de entre alquilo Ci-Cê, O-alquilo Ci-C6, e S-alquilo Ci-C6, OH, SH, F, Cl, Br, I, CF3, N02, NH2, NHCH3, N(CH3)2, alquilo NHCO-Ci-Cg, (CH2)pC02H, (CH2)pC02- alquilo Ci-Cê, (CH2)pS03H, (CH2)pP03H2, (CH2)pP03_ (alquilo Ci-Cg)2, (CH2)pS02NH2, e (CH2) pS02NH-alquilo Ci-Ce em que p = 0, 1, 2, ou 3, (CH2)m heteroarilo em que heteroarilo é definido como um anel heteroaromático que é um grupo 2- ou 3-tienilo, 2- ou 3-furanilo, 2- ou 3-pirrolilo, 2-, 3-, ou 4-piridilo, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, ou 7-indolilo, substituído ou não substituído por 1 ou 2 substituintes do grupo de substituintes acima descritos para arilo com m = 0, 1, 2, ou 3; R3 e R4 = independentemente

   ou (CH2)nCONH-R6 com y = 1-5 e n como definido acima e com R5 e R6 como definido abaixo, ou R3 e R4 são ligados conjuntamente para formar um anel do seguinte tipo:

   CONH-R6 com R5 e Rê como definido abaixo, ou (CH2)X-R7, com x = 2-5, e R' como definido abaixo; R5 = R% OR1, ou SR1 com R2 como definido acima; R6 = (CH2) r.R5, (CH2)nC02R2, (CH2) nCONHR1, (CH2) nCONH (CH2) n+3R5, CH(COR8) (CH2)nR5, com n, R1, e R5 com definidos acima e R8 como definido abaixo; R7 = (CH2) m cicloalquilo C3-C7, (CH2) m-arilo, (CH2)m- heteroarilo, 0 (CH2) m-cicloalquilo C3-C7, O (CH2) m-arilo, 0 (CH2) m-heteroarilo, com m = 0, 1, 2, ou 3; em que arilo e heteroarilo possuem o significado acima; R8 = OH, 0-alquilo Cí-Cõ, NH2, ou NH-alquilo 07-06; e X = H, Me, (CH2)nC02R9, ou (CH2)nP (oTToR9) 2, com R9 = H ou alquilo Ci-C6; ou um sal deste farmaceuticamente aceitável. 2 1 Composto de acordo com a reivindicação 1 que é um composto de Fórmula II: II

   em que: A está limitado a C02R2, CONHR2, C(S)OR2, ou C(S)NHR2, com rd, como definido abaixo; R = K ou Me; está limitado a alquilo C\-Ce, (CH2)m-cicloalquilo C3-C7, (CH2) m-arilo, (CH2) m-heteroarilo com m = 0, 1, 2, ou 3; R5 está limitado a (CH2) m-arilo, O-(CH2)m-arilo, ou 0-(CH2)m-heteroarilo com m como definido acima; R6 está limitado a CH2-R5, CH2C02R2, CH2CONHR2, com η = 1 ou 2, e com R5 e R2 como definidos acima; e X está limitado a H ou Me; em que arilo e heteroarilo e m possuem o significado acima, ou um sal deste farmaceuticamente aceitável.

   Composto de acordo com a reivindicação 1 que é um composto de Fórmula III:

   em que: Ά está limitado a C02R2, CONHR2, C(S)OR2, ou C(S)NHR2, com R2, como definido abaixo; 3 R = H ou Me; R2 está limitado a alquilo Ci-Cê, (CH2)m-cicloalquilo C3-C7, (CH2)m-arilo, (CH2)m-heteroarilo com m = 0, 1, 2, ou 3; R5 está limitado a (CH2)m-arilo, O- (CH2)m-arilo, ou 0-(CH2)m-heteroarilo com m como definido acima; R" cotá limitado a CH2-R5, CH2C02R2, CH2CONHR2, com η - 1 ou 2, e com R5 e R2 como definidos acima; X está limitado a H ou Me e arilo e heteroarilo possuem o significado acima mencionado, ou um sal deste farmaceuticamente aceitável.
2. 4. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é um composto de Fórmula II:

   O II em que: A está ainda limitado a C02R2 ou CONHR2, com R2 como definido abaixo; R está limitado a H; R2 está ainda limitado a alquilo Ci-C6, ou (CH2)m-arilo com m = 0, 1, 2, ou 3; R5 está ainda limitado a (CH2)m-arilo ou O- (CH2)m-arilo com m como definido acima; R6 está limitado a CH2-R5 ou CH2CONHR2, com η = 1 ou 2, e com K5 e K2 como definidos acima; X está limitado a H ou Me e arilo e heteroarilo possuem o significado mencionado acima; ou um sal deste farmaceuticamente aceitável. 4 Composto de acordo com a reivindicação 1 que é um composto de Fórmula III:

   em que: A está ainda limitado a CO2R2 ou CONHR2, com R2 como definido abaixo; R está limitado a H; R2 está ainda limitado a alquilo Ci-C6; ou (CH2)m-arilo com m = 0, 1, 2, ou 3; R5 está ainda limitado a (CH2)m-arilo ou O- (CH2)m-arilo com m como definido acima; R6 está limitado a CH2-R5 ou CH2CONHR2, com η = 1 ou 2, e com R5 e R2 como definidos acima; X está limitado a H ou Me e arilo e heteroarilo possuem o significado mencionado acima; ou um sal deste farmaceuticamente aceitável. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é: N- [ (Fenilmetoxi) carbonil] -L-histidil-N- [2- (fenilmetoxi) etil] -N2- [ [4- (fenilmetoxi) fenil]metil] glicinamída. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é: N-[(Fenilmetoxi)carbonil]-L-histidil-N2- [ (1,1'-bifenil)-4-ilmetil] -N- [2- (fenilmetoxi) etil] glicinamída.
3. 8. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é: Ester fenilmetílico de N-[N-[N-[(fenilmetoxi)carbonil]-L-histidil]-N-[[4-(fenilmetoxi)fenil)metil]glicil]-glicina. S. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é: N-[ (Fenilmetoxi)carbonil)-L-histidil-N-(4-fenilbutil) -N2- [ [4- (fenilmetoxi)fenil]metil]glicinamida.
4. 10. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é: N- [ ( Fenilmetoxi)carbonil]-L-histidil-N-(3-fenoxipropil)-N2-[ [4- (fenilmetoxi)fenil]metil]glicinamida.
5. 11. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é: Éster fenilmetílico de ácido (S)-[1-(lH-imidazol-3-ilmetil) -2-ΟΧΟ-2- [ [2-(fenilmetoxi)etil] [4-(fenilmetoxi)-fenil]me- til] amino] etil] carbâmico.
6. 12. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é: Éster fenilmetílico de ácido [1-(lH-imidazol-4-ilmetil)-2-oxo-2-[l,2,3,4-tetrahidro-7-(fenilmetoxi)-3-[[2-(fenilmetoxi ) etil]amino]carbonil]-2-isoquinolinil]etil]carbâmico.
7. 13. Utilização de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com as reivindicações 1 a 12 para a preparação de uma composição farmacêutica para tratar doenças proliferativas de tecidos.
8. 14. Composição farmacêutica adaptada para administração como um agente anti-prolif erativo compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com as reivindicações 1 a 12 em mistura com um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitáveis. 6 V 15. f\ V \

   Utilização de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com as reivindicações 1 a 12 para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento do cancro.
9. 16. Composição farmacêutica adaptada para administração como um agente anti-cancro compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com as reivindicações 1 a 12 em mistura com um excipiente, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitáveis.
10. 17. Utilização de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com as reivindicações 1 a 12 para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de restenose.
11. 18. Composição farmacêutica adaptada para administração como um agente inibidor de restenose compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com as reivindicações 1 a 12 em mistura com um excipiente, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitáveis.
12. 19. Método de síntese em solução para preparação de um composto de acordo com as reivindicações 1 a 12, ou um sal deste farmaceuticamente aceitável compreendendo a preparação de aminas secundárias e aminoácidos N-substituídos por redução com hidreto de uma imina formada entre um aldeído e uma amina ou um aminoácido, seguido por reacção com uma histidina N-substituída ou derivado de homohistidina, uma carbodiimida c 1-hídroxi-benzotriazole.
13. 20. Método de síntese em fase sólida para preparar um composto de acordo com as reivindicações 1 a 12 ou um sal deste farmaceuticamente aceitável, compreendendo a síntese 7 simultânea de um conjunto de compostos de Fórmula I num dispositivo Diversomer®, utilizando um derivado D- ou L-histidina que está imobilizado numa resina através da ligação ao anel imidazol com desprotecção sequencial e acilação do terminal N por uma série de isocianatos, éslcics activados, cloretos ácidos e afins, seguido por desprotecção sequencial do terminal carboxilo, activação do cari/ x i lo e condensação com uma série de aminas e aminu-ácidos seguido por clivagem do suporte sólido. Lisboa, 14 de Maio de 2001

    OriCV... O . PROPRIEDADE INDUSTRIAL.