PT663832E - Utilizacao de 4'-iodo-4'-desoxidoxorrubicina para o tratamento da amiloidose - Google Patents

Description

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Descrição “Utilização de 4’-iodo-4’-desoxidoxorrubicina para o tratamento da amiloidose” A presente invenção diz respeito a uma nova utilização de uma antraciclina já conhecida com actividade antitumoral.

Mais particularmente, a invenção diz respeito a uma nova utilização de 4’-iodo-4’--desoxidoxorrubicina e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis para o tratamento da amiloidose. O composto 4’-iodo-4’-desoxidoxorrubicina (IDX) de fórmula estrutural

está descrito e reivindicado, conjuntamente com o método para a sua preparação, no documento U.S.P. 4 438 105 em nome de A. Suarato et al.. A referida antraciclina, que difere da doxorrubicina pelo facto de o grupo hidroxilo na posição 4’ do açúcar ter sido substituído por um átomo de iodo, possui uma boa actividade antitumoral. O termo “amiloidose” designa diversos estado mórbidos que possuem como característica patológica comum a tendência de determinadas proteínas polimerizarem e precipitarem no 2 espaço extracelular sob a forma de fibrilhas insolúveis, originando danos estruturais e funcionais a órgãos e tecidos.

Embora possuam uma grande variedade de subunidades proteínicas diferentes, os diversos tipos de amilóides têm a mesma organização ultraestrutural na forma de folhas β entrelaçadas.

As fibrilhas são formadas a partir de cadeia leves particulares de imunoglobulinas monoclonais e de muitas outras proteínas amiloidogénicas, tais como a proteína AA, a transtiretina, a microglobulina β-2 e a proteína β, que constituem a amiloidose associada à doença de Alzheimer e à síndroma de Down, etc.. A utilização de moduladores da fosforilação da cinase das proteínas no tratamento da amiloidose associada à doença de Alzheimer está descrita no documento EP-A-0457295; no entanto, não se faz ali nenhuma referência a nenhum analogénio específico da doxorrubicina.

Na publicação ‘Tumori’, vol. 75, 4, páginas 358-361, 1989, afirma-se que o composto 4’-iodo-4’-desoxidoxorrubicma é capaz de induzir a activação da cinase das proteínas in vitro, embora essa capacidade seja significativamente menor do que a da doxorrubicina.

Também se afirma que a doxorrubicina pode ser utilizada para o tratamento da amiloidose associada a mielomas (Annales de Medicine Interne, vol. 139, 3, páginas 190-193, 1988 e American Journal of Medicine, vol. 80, 3, páginas 413-418, 1986) conjuntamente com muitos outros fármacos, v.g., vincristina, dexametasona, predmisona, etc., sendo explorada a sua actividade antitumoral.

Descobriu-se agora, de forma surpreendente, que o composto EDX, e em particular o seu cloridrato, é activo para induzir a degradação das fibrilhas amilóides. A interacção fármaco/fibrilha é a base dos efeitos clínicos benéficos observados em pacientes com amiloidose. Uma vez que se sabe que a estrutura tem a forma de folhas β, comum a todas as formas de amiloidose, o composto 4,-iodo-4,-desoxidoxorrubicina proporciona 3 uma esperança razoável de cura para todas as formas de amiloidose e em particular para a doença de Alzheimer.

Dados experimentais relativos à ligação entre IPX e as fibrilhas amilóides de diversas composições bioquímicas

Efectuou-se a incubação de uma quantidade predeterminada de fibrilhas amilóides (1 mg/mL) com diferentes concentrações de cloridrato de IDX. A incubação decorreu durante 2 horas em solução fisiológica, tendo o sistema sido mantido em agitação constante e delicada.

Depois efectuou-se a centrifugação das fibrilhas a 5000 r.p.m., tendo sido determinada a densidade óptica do sobrenadante a 478 nm.

Repetiu-se o procedimento de lavagem 3 vezes.

Após o passo final de centrifugação, efectuou-se as análises quantitativa e qualitativa da ligação às fibrilhas, utilizando uma massa agregada.

Análise quantitativa

Colocou-se essa massa agregada em suspensão numa solução com tampão fosfato (STP) e depois manteve-se a incubar de um dia para o outro com a enzima protease. Esta protease realiza a hidrólise completa das proteínas. A quantidade de composto IDX ligado às fibrilhas pode ser medida no sobrenadante por espectrofotometria a 478 nm.

Os testes comprovaram que houve uma ligação de 4 ± 1 g de composto IDX por mg de fibrilhas. 4

Os dados apresentados foram obtidos testando as fíbrilhas amilóides de 2 pacientes (ND e CAT) que padeciam de amiloidose.

Análise qualitativa

Efectuou-se uma análise quantitativa, realizada com um microscópio de imuno-fluorescência, recorrendo às propriedades espectrofluorométricas do composto IDX. Foram avaliadas as fíbrilhas seguintes, constituídas por: cadeias leves da imunoglobulina (AL) amilóide A (AA) microglobulinas β2 (ABzM) proteína β (AB) transtiretina (Var. Met 30) (ATTR).

As fíbrilhas foram incubadas com IDZ 10'7 M e com DOX em NaCl 0,15 M durante 1 hora e foram lavadas exaustivamente com NaCl 0,15 M. Avaliou-se a característica de fluorescência da antraciclina por excitação a 484 nm e leitura a 610 nm.

Todas as fíbrilhas incubadas com IDX revelaram uma fluorescência intensa, ao passo que a incubação com DOX não produziu nenhuma fluorescência apreciável.

Inibição da formação de fíbrilhas de insulina in vitro

Foram utilizados 10 mg de insulina comercial de bovino em suspensão em 1 mL (1,74 x 10'3 M) de ácido acético a 5% que ficaram a incubar a 85°C durante 2 horas até se formar um gel transparente. Após congelação a -80°C, descongelação a 37°C e repetição deste ciclo 5 vezes, efectuou-se a centrifugação das fíbrilhas numa microcentrifugadora. 5

Acrescentou-se os compostos IDX e DX em diversas proporções molares relativamente ao precursor (a insulina) proteínico das fibrilhas. (IDX-DX: insulina; 1:1, 1:2, 1:4, 1:8). O IDX, mas não o composto DX, inibiu totalmente a formação das fibrilhas amilóides aos valores das razões molares de 1:1 e de 1:2 e parcialmente ao valor de razão molar igual a 1:4.

Os testes demonstram que o composto IDX inibe a fibrilhogénese in vitro.

Extraccão de glicosaminoglicanos (GAG) a partir de fibrilhas amilóides e avaliação da ligação com o IPX

Efectuou-se a separação dos GAG a partir das fibrilhas amilóides por cromatografia de permuta tónica na presença de ureia 6 Μ. O método foi praticado por FPLC em coluna de ‘Mono Q’ (Pharmacia).

Dissolveu-se as fibrilhas em tampão fosfato 50 mM a pH 5 contendo ureia 6 M e 0,2% de SCHAP.

Efectuou-se a separação num gradiente de NaCl 0-5 M.

Utilizando este método efectuou-se a separação dos componentes proteínicos das fibrilhas a partir dos glicosaminoglicanos (sulfato de dermatano e sulfato de heparano) sem que tivesse ocorrido qualquer desnaturação irreversível. O componente proteínico separado confirmou a elevada afinidade com o IDX, observada nas fibrilhas naturais.

Os resultados deste teste comprovam que os glicosaminoglicanos, apesar de serem componentes omnipresentes nas fibrilhas amilóides, não o são necessariamente para a ligação do IDX.

Com base nos resultados obtidos, o composto IDX e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis são utilizados com vantagem no tratamento de pacientes que padeçam de amiloidose. y# 6 A administração efectua-se por via parentérica, sob a forma de soluções aquosas adequadas para injecção.

As referidas soluções podem ser preparadas de uma forma convencional na presença de adjuvantes e/ou diluentes convencionais (ver, por exemplo, a obra publicada de L. Gianni et al “Activity and Toxicity of 4’-iodo-4’-deoxydoxorubicin in patients with advanced breast câncer” Annals of Oncology 2: 719-725,1991).

Os regimes de dosagem podem variar entre 5 mg/m2 e 150 mg/m2 de superfície corporal por via intravenosa por semana. De preferência, os regimes de dosagem variam entre 15 mg/m2 e 30 mg/m2 de superfície corporal por via intravenosa por semana durante 2 a 4 semanas.

Seguidamente descreve-se uma experiência clínica essencial, respeitante a 5 pacientes. Paciente n° 1

Este caso diz respeito a um homem (DEP) de 45 anos de idade que padecia de mieloma múltiplo (IgAÀ) e de amiloidose AL com deposição prevalente cutânea e muscular.

Em Julho de 1991 foi objecto de um transplante de medula óssea autóloga.

Administrou-se-lhe IDS por via intravenosa segundo um regime de dosagem de 190 mg em 4 horas.

Logo na manhã seguinte o paciente teve uma melhoria considerável da pele e da mobilidade dos membros. Durante os dias seguintes foi documentada uma emissão urinária de grandes quantidades de fragmentos de proteínas amiloidósicas, conjuntamente com uma redução significativa dos depósitos amilóides cutâneos e dos depósitos ao nível do septo cardíaco interventricular (de 13 mm para 10 mm). 7S& 7 A melhoria evidente da mobilidade dos membros e dos depósitos amilóides prosseguiu nos 6 meses subsequentes, sem mais nenhum tratamento.

Paciente n° 2

Este caso diz respeito a um homem (MAN) de 57 anos de idade que padecia de amiloidose AL (IgAX) com envolvimento prevalente do tracto gastrointestinal (8 a 10 descargas diarreicas por dia), que havia tido uma nítida perda de peso de 15 kg em 6 meses (com o peso de 64 kg) e com síndroma nefrótica (proteinúria igual a 7 g/dia).

Este paciente havia sido tratado com 6 ciclos de melfalano e prednisona, completados em Janeiro de 1991, sem nenhuns resultados. Em Fevereiro de 1992 foi tratado com duas doses (80 mg/m e 100 mg/m ) de LDX. No período imediato a seguir à terapia observou-se um melhoramento da diarreia, controlada parcialmente com ‘Somatostatina’ (marca comercial registada), e da proteinúria (41 g/dia); no entanto, durante os meses subsequentes o alvus melhorou gradualmente, com uma redução nítida das suas descargas (3-4/dia). O paciente readquiriu peso (68 kg) e a proteinúria estabilizou em tomo de 4 g/dia. O estado geral de saúde do paciente melhorou nitidamente, até ao ponto de lhe permitir regressar ao trabalho.

Paciente n° 3

Este caso diz respeito a uma mulher (GAB) que padecia de amiloidose (IgAA.) de localização principalmente renal [síndroma nefrótica com proteinúria (4 g/dia)] e com localização esplénica diagnosticada em 1991.

Entre Dezembro de 1991 e Maio de 1992 a paciente havia sido tratada com agentes alquilantes, sem que tivesse havido melhorias. Em Junho a paciente fez uma cintigrafia corporal δ para determinação dos depósitos amilóides com 131I-SAP, o que confirmou a localização renal e esplénica. Em Julho de 1992 a paciente foi tratada com EDX por via intravenosa, com um regime de dosagem de 30 mg/m2 por semana, durante 2 semanas, e com um regime de dosagem entre 15 mg/m2 e 20 mg/m2 nas duas administrações subsequentes.

Após um aumento inicial, a proteinúria decaiu para 6 g/dia, tendo-se mantido neste valor durante os 6 meses seguintes.

Paciente n° 4

Este caso diz respeito a um homem (GRO) de 70 anos de idade que padecia de plasmacitoma e amiloidose AL (IgGK). O diagnóstico foi feito em Julho de 1991, quando o paciente começou a queixar-se de dores intensas na região do sacro, prolongando-se até ao membro inferior esquerdo, de modo a dificultar-lhe a capacidade para se deslocar. Uma investigação instrumental revelou a presença de uma massa sólida com um diâmetro aproximado de 10 cm, determinante da destruição do hemi-sacro e da ala ilíaca esquerda, exercendo um efeito expansor na cavidade pélvica, penetrando no canal vertebral e infiltrando-se nos músculos gluteais.

Um exame por biopse revelou a existência de um miloidoma.

Entre Outubro de 1991 e Janeiro de 1992 o paciente submeteu-se a 75 sessões de terapia por radiação com cobalto para um total de 50 Gy e em Março de 1992 começou um ciclo de quimioterapia com ciclofosfamida à razão de 500 mg/dia durante 5 dias por mês para um total de 6 ciclos, sem que os exames radiográficos revelassem a existência de qualquer redução evidente das dimensões do amiloidoma ou a redução da sintomatologia dolorosa. Em Novembro de 1992 foi-lhe realizada uma cintigrafia para pesquisa dos depósitos amilóides com 13iI-SAP, o que confirmou a localização do marcador radioactivo ao nível do sacro. 9 O paciente foi então tratado com IDX segundo um regime de dosagem de 20 mgW por via intravenosa durante 2 semanas e segundo um regime de dosagem de 20 mg/m nas duas semanas subsequentes, tendo sido obtida uma redução quase imediata da sintomatologia dolorosa, o que permitiu que o paciente interrompesse a ingestão de analgésicos. O diagnóstico efectuado por meio de ultra-sons em Janeiro de 1993 revelou uma redução da massa infiltrante dos músculos gluteiais (de 12 cm para 5 cm), ao passo que um exame por ressonância magnética, efectuado ao pélvis, revelou uma redução do diâmetro do amiloidoma de cerca de 10 cm para aproximadamente 5 cm. A melhoria da sintomatologia dolorosa persistiu durante 14 meses após o tratamento com IDX. Uma cintigrafia para pesquisa dos depósitos amilóides, efectuada com 131I-SAP um mês após o tratamento com IDX e 14 meses mais tarde, revelou uma resolução gradual, se não mesmo completa, dos depósitos amilóides.

Paciente n° 5

Este caso diz respeito a um homem (LUS) de 48 anos de idade que padecia de amiloidose AL (CCIA) de localização principalmente renal e esplénica. A doença começou em Setembro de 1992, com o aparecimento de edemas de declive. Exames bioumurais revelaram a presença de uma proteinúria mutíssimo intensa (12,6 g/dia), dislipemia e sintomas seroproteínicos electroforéticos compatíveis com a síndroma nefróptica.

Durante o mês de Setembro submeteu-se o paciente a uma biópsia renal guiada pelos ecos que revelou a presença de acumulações amilóides ao nível dos glomérulos e dos vasos intersticiais. Teve então lugar o início do tratamento com corticosteróides, que foi no entanto interrompido ao fim de um curto período porque estava a ser ineficaz. Em Janeiro de 1993 o 10 paciente fez uma cintigrafia coiporal para pesquisa dos depósitos amilóides com l31I-SAP, o que revelou uma acumulação nítida do marcador radioactivo no baço e ao nível dos rins.

Durante o mês de Fevereiro o paciente fez um tratamento intravenoso com EDX, segundo um regime de dosagem de 30 mg/m , para um total de 4 administrações.

Em Março de 1993 os edemas de declive haviam sido reduzidos nitidamente, a proteinúria diária medida tinha um valor aproximado de 6 g/dia e um exame efectuado por meio de ultra--sons demonstrou que as dimensões no baço haviam sido reduzidas de 12,3 cm (diâmetro longitudinal) para 11,3 cm.

Lisboa, 4 de Julho de 2001 O Agente Oficiai da Propriedade industrial

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Claims (2)

1 Reivindicações 1. Utilização de 4’-iodo-4’-desoxidoxormbicina e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis para a preparação de um medicamento para induzir a degradação das fibrilhas amilóides em pacientes com amiloidose.

2. Utilização de acordo com a reivindicação anterior, caracterizada pelo facto de o composto 4’-iodo-4’-desoxidoxorrubicina ser adaptado para administração intravenosa a um paciente em regimes de dosagem semanais variáveis entre 15 mg/m e 30 mg/m de superfície corporal, numa solução preparada de um modo convencional que contenha adjuvantes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis, durante um período compreendido entre 2 e 4 semanas. Lisboa, 4 de Julho de 2001

O Agente Oficial da Propriedade Industrial

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