PT2473507E - Composições estáveis de sns-595 e métodos de preparação - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "Composições estáveis de SNS-595 e métodos de preparação" São proporcionados métodos para a preparação de ácido (+)-1,4-di-hidro-7-[(3S,4S)-3-metoxi-4-(metilamino)-1-pirrolidinil]-4-oxo-l-(2-tiazolil)-1,8-naftaridino-3-carboxilico. São igualmente divulgadas composições compreendendo esta substância. 0 composto ácido (+)-1,4-di-hidro-7-[(3S,4S)-3-metoxi-4-metilamino-l-pirrolidinil]-4-oxo-l-(2-tiazolil)-1,8-naftiridino-3-carboxílico, tem a seguinte estrutura química:

Este composto é igualmente conhecido como SNS-595 ou AG-7352. 0 Conselho de Designações Adoptadas dos Estados

Unidos (USANC) atribuiu o nome de "vosaroxin" a este composto. 0 SNS-595 é conhecido pela sua actividade anti-tumoral (ver, Tsuzuki et al., J .Med.Chem., 47:2097-2106, 2004 e

Tomita et al., J.Med.Chem., 45:5564-5575, 2002). Foi proposto na literatura o tratamento de vários cancros com SNS-595, e o SNS-595 mostrou actividade pré-clínica contra várias linhas celulares de cancro e xenoenxertos. Foram reportados vários regimes de dosagem para o uso deste composto. Por exemplo, ver Pedidos de Patente U.S. Nos. 2005-0203120 Al, 2005-0215583 Al, E 2006-0025437 Al. O SNS-595 está actualmente a ser testado em ensaios clínicos para avaliar a segurança e eficácia em pacientes com cancro humano, e tem demonstrado actividade clínica no tratamento da leucemia mielóide aguda e cancro do ovário. O SNS-595 pode ser preparado utilizando técnicas conhecidas pelos peritos na técnica. Ver, por exemplo, Patente U.S. No. 5,817,669, publicada em 6 de Outubro de 2 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ 1998; Pedido de Patente Japonesa No. Hei 10-173986, publicado em 26 de Junho de 1998; WO 2007/146335, publicada em 21 de Dezembro de 2007; Tsuzuki et al. , J.Med. Chem., 47:2097-2106, 2004; e Tomita et al., J.Med.Chem., 45:5564-5575, 2002. O Pedido de Patente Internacional No. WO 2007/146335 descreve um processo exemplificativo da síntese de SNS-595. Tal como representado no Esquema 1, esta síntese prossegue através do Intermediário 1, o qual é feito reagir com o Composto 2 na presença de uma base, tal como trietilamina ou N,N-diisopropiletilamina para formar o Composto 3. O grupo éster do Composto 3 é subsequentemente hidrolisado a fim de proporcionar o SNS-595.

Esquema 1

No entanto, a via descrita no Esquema 1, produz tipicamente quantidades indesejáveis de impurezas, ou seja, produtos secundários das reacções, os quais são difíceis de destruir ou remover da substância activa SNS-595 e medicamentos de SNS-595.

Apesar de determinados produtos secundários poderem existir em preparações de SNS-595, é importante reduzir a quantidade destas impurezas na substância activa e no produto farmacêutico final. Uma vez que os pacientes com cancro submetidos a quimioterapia e radioterapia significativa podendo, por conseguinte, ter o sistema imunológico comprometido, é benéfico administrar a estes pacientes um medicamento que seja caracterizada por elevada pureza. Além disso, para a administração intravenosa ou intra-arterial de um medicamento, são importantes as características de pureza e físicas do medicamento uma vez que o medicamento entra directamente na corrente sanguínea. 3 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Deste modo, continua a existir uma necessidade de métodos melhorados para preparar SNS-595, substancialmente livre de contaminantes, proporcionando deste modo uma substância activa numa forma substancialmente pura, que é particularmente apropriado para formulação em produtos farmacêuticos para o tratamento de cancro, sem a necessidade de passos de purificação trabalhosos. São proporcionados processos que podem proporcionar a substância SNS-595. Além disso, os processos podem ser aumentados de escala para a produção comercial da substância SNS-595.

Em algumas concretizações, são proporcionados processos para a preparação da substância SNS-595, compreendendo: a) fazer reagir o Composto 3 0

MeO W 3 com uma primeira base aquosa seguido de neutralização para obter um hidrato de SNS-595 preliminar; b) desidratar o hidrato de SNS-595 preliminar do passo (a) , e fazer reagir o produto desidratado com uma segunda base aquosa, seguido de neutralização para se obter um hidrato secundário de SNS-595; e c) desidratar o hidrato secundário de SNS-595 obtido no passo (c) para se obter a substância SNS-595.

Em alguns casos, pode ser desejável fazer reagir a substância SNS-595 obtida no passo (c) com uma outra base aquosa, neutralizar, e posteriormente desidratar para melhorar ainda mais a pureza do produto SNS-595. A primeira base aquosa, a segunda base aquosa, e a(s) outra(s) base(s) aquosa(s) pode(m) ser iguais ou diferentes. Da mesma forma, 4 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ os ácidos utilizados durante os passos de neutralização podem ser iguais ou diferentes. A reciclagem da substância SNS-595 através dos passos descritos de tratamento com base aquosa, neutralização e desidratação pode ser realizada uma pluralidade de vezes para sequencialmente ainda purificar a substância SNS-595 até ser obtida uma substância SNS-595 com um nível de pureza pretendido.

Em algumas concretizações, os processos aqui descritos são realizados à escala de quilograma. A Figura 1 ilustra a relação observada entre quantidades de Composto 6 em soluções medicamentosas de SNS-595 a granel formuladas a partir de substância activa com diferentes quantidades de Composto 4. A Figura 2 ilustra a relação observada entre a quantidade de Composto 4 na substância activa SNS-595 e a quantidade de Composto 1 residual no Composto 3 usado para preparar a substância activa. A Figura 3 ilustra a relação observada entre a quantidade de Composto 5 na substância activa SNS-595 e a quantidade de Composto 1 residual no Composto 3 usado para preparar a substância activa.

DEFINIÇÕES

Salvo definição em contrário, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados possuem o mesmo significado que é vulgarmente entendido por um perito na técnica.

Tal como aqui utilizado, "SNS-595" diz respeito a ácido (+)-1,4-di-hidro-7-[(3S,4S)-3-metoxi-4-metilamino-1-pirrolidinil]-4-oxo-l-(2-tiazolil)-l,8-naftiridino-3-carboxílico, bem como a qualquer forma iónica, sais, solvatos, por exemplo, hidratos, e outras formas desse composto, incluindo as suas misturas. Deste modo, as composições que compreendem SNS-595 incluem: ácido (+)-1,4-di-hidro-7-[(3 S,4S)-3-metoxi-4-metilamino-l-pirrolidinil]-4-oxo-1-(2-tiazolil)-1,8-naftiridino-3-carboxílico, ou, em algumas concretizações, uma forma iónica do mesmo, sal, 5 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ solvato, por exemplo, hidrato, polimorfo, pseudomorfo, ou outra forma do composto. Em algumas concretizações, o SNS-595 é proporcionado sob a forma de sal farmaceuticamente aceitável. 0 SNS-595 é igualmente conhecido como AG-7352, voreloxin e vosaroxin.

Em determinadas concretizações, a substância SNS-595 diz respeito a uma composição que consiste essencialmente em SNS-595, ou seja, compreendendo menos do que cerca de 1,0% de qualquer outro composto individual ou impureza com base no peso total da composição (% em peso).Por exemplo, em algumas concretizações, estas composições compreendem cerca de 0 a 0,5%, cerca de 0 a 0,1%, cerca de 0 a 0,05%, cerca de 0 a 0,03%, cerca de 0 a 0,02%, ou cerca de 0-0,01% de Composto 4 com base no peso total da composição.

OH O

Em algumas concretizações, estas composições consistem essencialmente de 0 a 0,5%, 0 a 0,1%, de 0 a 0,05%, de 0 a 0,03%, de 0 a 0,02% ou 0 a 0,01% de Composto 4 com base no peso total da composição. Em algumas concretizações, tais composições possuem entre 0 e 0,5%, 0 a 0,1%, 0 a 0,05%, 0 a 0,03%, 0 a 0,02% ou 0 a 0,01% de Composto 4 com base no peso total da composição. Em algumas concretizações, as composições possuem < 0,02% de Composto 4 com base no peso total da composição.

Em algumas concretizações, tais composições compreendem cerca de 0 a 0,04%, cerca de 0 a 0,03% ou cerca de 0 a 0,02% de Composto 5 com base no peso total da composição.

5. 6 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Em algumas concretizações, tais composições consistem essencialmente de 0 a 0,04%, de 0 a 0,03%, ou 0-0,02% de Composto 5 com base no peso total da composição. Em algumas concretizações, estas composições possuem de 0 a 0,04%, de 0 a 0,03% ou de 0 a 0,02% de Composto 5 com base no peso total da composição. Em algumas concretizações, as composições possuem < 0,15% de Composto 5 com base no peso total da composição. São aqui descritas outras composições que são substâncias SNS-595 substancialmente puras.

Em algumas concretizações, tais composições compreendem cerca de 0 a 0,5%, cerca de 0 a 0,1%, cerca de 0 a 0,05%, cerca de 0 a 0,03%, cerca de 0 a 0,02% ou cerca de 0 a 0,01% de Composto 6 com base no peso total da composição.

OH OH

Em algumas concretizações, tais composições consistem essencialmente em cerca de 0 a 0,5%, cerca de 0 a 0,1%, cerca de 0 a 0,05%, cerca de 0 a 0,03%, cerca de 0 a 0,02% ou cerca de 0 a 0,01% de Composto 6 com base no peso total da composição. Em algumas concretizações, tais composições possuem cerca de 0 a 0,5%, cerca de 0 a 0,1%, cerca de 0 a 0,05%, cerca de 0 a 0,03%, cerca de 0 a 0,02% ou cerca de 0 a 0,01% de Composto 6 com base no peso total da composição.

Em algumas concretizações, tais composições compreendem cerca de 0 a 0,5%, cerca de 0 a 0,1%, cerca de 0 a 0,05%, cerca de 0 a 0,03%, cerca de 0 a 0,02% ou cerca de 0 a 0,01% de Composto 7 com base no peso total da composição. 7 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Em algumas concretizações, estas composições consistem essencialmente em cerca de 0 a 0,5%, cerca de 0 a 0,1%, cerca de 0 a 0,05%, cerca de 0 a 0,03%, cerca de 0 a 0,02% ou cerca de 0 a 0,01% de Composto 7 com base no peso total da composição. Em algumas concretizações, estas composições possuem cerca de 0 a 0,5%, cerca de 0 a 0,1%, cerca de 0 a 0,05%, cerca de 0 a 0,03%, cerca de 0 a 0,02% ou cerca de 0 a 0,01% de Composto 7 com base no peso total da composição. Em algumas concretizações, as composições possuem <0,15% de Composto 7 com base no peso total da composição.

Em determinadas concretizações, a "substância SNS-595" refere-se a uma composição compreendendo SNS-595 e um ou mais de outros compostos. Em algumas concretizações, a substância SNS-595 compreende SNS-595 e Composto 4 e/ou Composto 5.

Tal como aqui utilizado e salvo indicação em contrário, "cerca de" refere-se até mais ou menos 10% do valor indicado. Por exemplo, "cerca de 0,01%" refere-se a 0,009% a 0,011%, "cerca de 25°C" refere-se a 22,5°C a 27,5°C, e "cerca de 0,6 M" refere-se a 0,54 M a 0,66 M. Em algumas concretizações, cerca de refere-se até mais ou menos 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ou 1% do valor indicado. Da mesma forma, para uma gama de valores, o uso de "cerca de" refere-se tanto ao limite superior como ao limite inferior do intervalo indicado. O termo "cerca de" em relação a um valor de pH pretende significar que o erro aceitável para esse valor de pH não seja superior a 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0, 08, 0, 09, ou 0,1 unidades de pH. Em determinadas concretizações, o erro para um valor de pH não é superior a 0,02 unidades de pH (ver, Método 791 em USP XXVI (2003)) . 8 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Tal como aqui utilizado, "base aquosa" refere-se a qualquer solução aquosa de uma ou mais bases, as quais, em alqumas concretizações, são uma ou mais bases fortes (pKa> 13). Exemplos de bases fortes incluem hidróxidos de metais alcalinos ou alcalino-terrosos ou hidróxido de amónio. As bases aquosas podem ser soluções aquosas de bases orqânicas ou inorqânicas. Em alqumas concretizações, a base é proporcionada sob a forma de uma solução aquosa de hidróxido de potássio, hidróxido de litio, hidróxido de sódio ou hidróxido de amónio. Em algumas concretizações, a base aquosa possui uma concentração molar de cerca de 0,6-1,1 M. Em algumas concretizações, a base aquosa é uma solução aquosa de um hidróxido com uma concentração molar de cerca de 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, ou cerca de 1,1 M. Em algumas concretizações, a base pode ser proporcionada sob a forma sólida. Em algumas concretizações a forma sólida é um grânulo ou um pó.

Tal como aqui utilizado e salvo indicação em contrário, o termo "hidrato" significa um composto ou um seu sal, que inclui ainda uma quantidade estequiométrica ou não estequiométrica de água ligada por forças intermoleculares não covalentes. Tal como aqui utilizado e salvo indicação em contrário, o termo "solvato" significa um solvato formado a partir da associação de uma ou mais moléculas de solvente com um composto aqui proporcionado. O termo "solvato" inclui hidratos (por exemplo, mono-hidrato, di-hidrato, tri-hidrato e tetra-hidrato). Os solvatos de SNS-595 podem ser cristalinos ou não-cristalinos.

Tal como aqui utilizado, "hidrato de SNS-595" refere-se a SNS-595 com uma quantidade estequiométrica ou não estequiométrica de água ligada por forças intermoleculares não covalentes. Em algumas concretizações, o hidrato de SNS-595 é cristalino ou não-cristalino. Em algumas concretizações, o hidrato de SNS-595 compreende cerca de 0,8 a 1,2 equivalentes molares de água por mole de SNS-595. Em algumas concretizações, o hidrato de SNS-595 compreende cerca de 1 equivalente molar de água por mole de SNS-595.

Tal como aqui utilizado, "desidratação" refere-se à remoção da água ligada ao SNS-595 num hidrato de SNS-595. 9 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ Métodos de desidratação são conhecidos pelos peritos na técnica. Em algumas concretizações, a desidratação é realizada por contacto do hidrato de SNS-595 com um composto capaz de remover a água ligada a SNS-595 no hidrato de SNS-595. Tais compostos incluem solventes de desidratação. Em algumas concretizações, o solvente é higroscópico e/ou prótico. Exemplos de solventes incluem metanol, etanol, isopropanol e acetona. Em algumas concretizações, o solvente é anidro. Em algumas concretizações, o solvente é etanol anidro. Em algumas concretizações, o etanol anidro compreende menos de 0,5% de água. Numa concretização especifica, a desidratação é realizada por contacto do hidrato de SNS-595 com etanol anidro a cerca de 25-80°C, a cerca de 40-80°C, a cerca de 60-80°C ou cerca de 80°C. Em alguns casos, a desidratação pode ser realizada por meios térmicos na ausência de um solvente. A quantidade de água num hidrato pode ser analisada utilizando uma variedade de técnicas tal como entendido na técnica. Por exemplo, a quantidade de água pode ser determinada com base na perda de peso observada num termograma de análise termogravimétrica (TGA). Além disso, a saída de gases a partir de uma estufa de TGA pode ser acoplada a um instrumento de análise química, tal como um instrumento de espectrometria de massa ou um instrumento de espectroscopia de infravermelho, para confirmar a pureza química do vapor de água libertado durante o aquecimento. A perda de água pode igualmente ser quantificada por meios gravimétricos directos, tais como "Loss on Drying <731>" tal como descrito na Farmacopeia dos EUA. A análise por Karl Fischer (KF) pode ser utilizada para analisar o teor em água de uma amostra de hidrato. A análise coulométrica de KF para a determinação de água pode ser realizada usando um titulador de Karl Fischer Mettler Toledo DL39, ou outro equipamento. Num método, aproximadamente 14-32 mg de uma amostra é colocada num recipiente de titulação KF contendo reagente HYDRANAL®-Coulomat AD para titulação coulométrica de KF e misturada durante 60 segundos para assegurar a dissolução. A amostra é posteriormente titulada por meio de um eléctrodo gerador, o qual produz iodo por oxidação electroquímica. A análise é repetida para assegurar a reprodutibilidade das medições. 10 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Tal como aqui utilizado, "neutralizante" ou "neutralização" refere-se ao processo de ajustamento do pH de uma solução até à neutralidade ou neutralidade aproximada, por exemplo, um pH de 6,0 a 8,0, 7,0 a 8,0 ou 7,3 a 7,7.

Tal como aqui utilizado, "matéria em partículas" refere-se a qualquer matéria formada como um resultado de subprodutos de uma preparação sintética de SNS-595, que é insolúvel ou parcialmente solúvel em água ou mistura aquosa. Em algumas concretizações, matéria em partículas compreende partículas visíveis. Outras impurezas incluindo partículas, tais como fibras, vidro e metal podem estar presente nas composições de SNS-595 nos níveis permitidos para a administração a seres humanos no tratamento de doenças ou abaixo daqueles.

Tal como aqui utilizado, "partículas visíveis" refere-se a sólidos insolúveis ou parcialmente solúveis numa solução líquida, por exemplo, uma solução aquosa, que sejam visíveis ao olho humano. Em algumas concretizações, as partículas visíveis são visíveis sob luz natural do sol, luz branca, iluminação fluorescente ou iluminação incandescente. Em outras concretizações, as partículas visíveis são visíveis quando observadas sob luz com uma intensidade de 600-7000 lux, 900-4000 lux, 850-4650 lux ou 2000-3750 lux. Em algumas concretizações, as partículas são visíveis quando inspeccionadas durante cerca de 1-60, 1-30, 1-15, 1-10, 1-5, ou 5 segundos.

Em concretização específica, as partículas visíveis são visíveis quando testado de acordo com o método descrito na Farmacopeia Europeia 5.0, Secção 2.9.20. Neste método é usado um equipamento com uma estação de visualização que compreende (1) um painel preto mate de dimensões adequadas mantido numa posição vertical; (2) um painel branco não reflector de dimensões adequadas mantido numa posição vertical, ao lado do painel preto; e (3) um suporte de lâmpada ajustável equipado com uma fonte de luz branca apropriada, sombreada, e com um difusor de luz adequado (por exemplo, um iluminador de visualização contendo dois tubos 11 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ fluorescentes de 13 W, cada um com 525 mm de comprimento). A intensidade da iluminação no ponto de visão é mantida entre 2000 lux e 3750 lux. Podem ser utilizadas valores mais elevados para recipientes de vidro e de plástico. Os rótulos aderentes são removidos do recipiente que contém a amostra a ser testada. O lado exterior do recipiente é lavado e seco. O recipiente é agitado suavemente ou invertido assegurando que não são introduzidas bolhas de ar, e o recipiente é observado durante cerca de 5 segundos em frente ao painel branco para determinar se estão presentes partículas visíveis. O recipiente é posteriormente observado durante cerca de 5 segundos, em frente do painel preto para determinar se estão presentes partículas visiveis. Em algumas concretizações, as partículas visíveis são visíveis contra um painel branco. Em algumas concretizações, as partículas visíveis são visíveis contra um painel preto.

Em algumas concretizações as partículas visíveis possuem um diâmetro médio de pelo menos 50 m, pelo menos, 75 m, pelo menos, 100 m, de pelo menos 150 m, ou pelo menos 200 m. Em algumas concretizações as partículas visíveis têm um diâmetro médio de cerca de 50-500 m, cerca de 50-300 m, cerca de 100-500 m ou cerca de 100-300 m.

Tal como aqui utilizado, "sub-partículas visíveis" refere-se a matéria em partículas detectável pelo obscurecimento Light Obscuration Particle Count Test ou Microscopic Particle Count Test descrito na Farmacopeia dos EUA, <788>; Particulate Matter in Injections.

Em algumas concretizações, as partículas visíveis e/ou sub-visiveis compreendem matéria do processo de produção de uma composição da substância activa, incluindo a síntese ou a formulação da substância activa, ou o acondicionamento da composição. Em algumas concretizações, as partículas visíveis compreendem metal, vidro ou fibras.

Em determinadas concretizações, as partículas visíveis e/ou sub-visiveis compreendem um ou mais do Composto 5 12 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

5, e/ou Composto 6

OH OH

e/ou Composto 7

Tal como aqui utilizado, "essencialmente isenta de partículas visíveis" refere-se a uma composição líquida, por exemplo aquosa, compreendendo SNS-595 que não contêm partículas visíveis. Em algumas concretizações, a composição não contém partículas visíveis quando avaliado pelos métodos descritos pela Farmacopeia Europeia 5.0, Secção 2.9.20 anteriormente referidos.

Tal como aqui utilizado, "essencialmente livre de partículas sub-visíveis" refere-se a uma composição liquida, por exemplo, aquosa, compreendendo SNS-595 que não contém partículas sub-visíveis.

Tal como aqui utilizado, "estável" refere-se a uma composição compreendendo SNS-595 que, quando armazenada num recipiente ou frasco, pode permanecer essencialmente livre de partículas visíveis ou sub-visiveis, ou pode manter uma quantidade especificada de partículas visíveis e/ou sub- 13 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ visíveis, por um determinado período de tempo, por exemplo, 1, 3, 6 ou 9 meses. Por exemplo, uma composição aquosa que é essencialmente isenta de partículas visíveis e estável durante 6 meses com respeito a partículas visíveis refere-se a uma composição aquosa que é considerada como sendo essencialmente livre de partículas visíveis em qualquer ponto no tempo durante o período que tem início a partir de um ponto de partida referenciado, por exemplo, a altura em que a composição foi produzida e/ou adicionada a um recipiente) até 6 meses após a composição ser preparada. Além disso, se a composição estável é uma composição a granel, então essa composição é capaz de ser distribuída num lote de recipientes, por exemplo, frascos, em que qualquer recipiente que contenha a composição distribuída que é essencialmente isenta de partículas visíveis à data de produção do lote, é capaz de permanecer essencialmente livre de partículas visíveis durante o período de tempo especificado, por exemplo, 1 r 3, 6 ou 9 meses. Em algumas concretizações, a composição é estável durante, pelo menos, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 15 r 20, ou 25 dias. Em algumas concretizações, a composição é estável durante, pelo menos, 1, 3, 6, 9, 12, 18, 24, 36 t 42, ou 48 meses. Em algumas concretizações, a composição é estável a partir do momento de produção.

Tal como aqui utilizado, "à data de produção" refere-se ao ponto no tempo em que a composição de SNS-595 ou recipiente compreendendo SNS-595 é produzido. Em algumas concretizações, "à data de produção" é o tempo em que as quantidades pretendidas de substância SNS-595 substancialmente pura, sorbitol, água e ácido metanossulfónico são misturados. Em outras concretizações, "à data de produção" é o tempo em que as quantidades pretendidas de substância SNS-595 substancialmente pura, sorbitol, água e ácido metanossulfónico são misturados e adicionados a um recipiente, por exemplo, frasco. Em algumas concretizações, o tempo é menor do que 7 dias, 6 dias, 5 dias, 4 dias, 3 dias, 2 dias, ou 1 dia após a composição ou recipiente compreendendo SNS-595 ter sido produzido. Em algumas concretizações, o tempo é inferior a 20, 16, 12, 8, 4, ou 2 horas após a composição ou recipiente compreendendo SNS-595 ter sido produzido. 14 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Tal como aqui utilizado e salvo indicação em contrário, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" inclui um sal de um grupo ácido ou básico, que pode estar presente nos compostos aqui proporcionados. Sob determinadas condições ácidas o composto pode formar uma ampla variedade de sais com vários ácidos inorgânicos e orgânicos. Os ácidos que podem ser usados para preparar sais farmaceuticamente aceitáveis de tais compostos básicos são aqueles que formam sais compreendendo aniões farmacologicamente aceitáveis, incluindo acetato, benzenossulfonato, benzoato, bicarbonato, bitartarato, brometo, edetato de cálcio, camsilato, carbonato, cloreto, brometo, iodeto, citrato, dicloridrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, hidroxinaftoato, isetionato, lactato, (mesilato), pantotenato, salicilato, tartarato, lactobionato, malato, maleato, mandelato, metanossulfonato metilsulfato, muscato, napsilato, nitrato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, estearato, succinato, sulfato, tanato, teoclato, trietiodeto, e pamoato. Sob determinadas condições básicas, o composto pode formar sais de base com vários catiões farmacologicamente aceitáveis. Exemplos de tais sais incluem os sais de metais alcalinos ou metais alcalino-terrosos e, particularmente, cálcio, magnésio, sódio, litio, zinco, potássio e sais de ferro.

Tal como aqui utilizado, "reprocessamento" refere-se a sujeição do SNS-595 (tipicamente obtido por saponificação do Composto 3) a condições de saponificação uma segunda vez ou mais. Em algumas concretizações, o SNS-595 é reprocessado mais do que uma vez. Em algumas concretizações, as condições de saponificação utilizam hidróxido de sódio aquoso, etanol e ácido acético. Em algumas concretizações, as condições de saponificação compreendem a reacção do Composto 3 com uma base aquosa seguido de neutralização para formar o hidrato de SNS-595 e desidratando o hidrato de SNS-595.

Em determinadas concretizações "Composto 3" refere-se uma composição que consiste essencialmente em Composto 3 15 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Em algumas formas de realização, composições de Composto 3 pode compreender 0 a 0,3%, 0 a 0,25%, 0 a 0,2%, 0 a 0,1%, 0 a 0,05% ou 0 a 0,01% de Composto 1, com base no peso total da composição.

C02Et

Em algumas concretizações, as composições de Composto 3 podem consistir essencialmente em 0 a 0,3%, 0 a 0,25%, 0 a 0,2%, 0 a 0,1%, 0 a 0,05% ou 0 a 0,01% de Composto l,com base no peso total da composição. Em algumas concretizações, as composições de Composto 3 podem possuir 0 a 0,3%, 0 a 0,25%, 0 a 0,2%, 0 a 0,1%, 0 a 0,05% ou 0 a 0,01% de

Composto 1, com base no peso total da composição. Em algumas concretizações, estas composições compreendem 0 a 0,1%, ou 0 a 0,05% de Composto 1 com base no peso total da composição. A pureza da substância SNS-595 ou Composto 3 aqui proporcionado, bem como as quantidades de outros compostos aqui mencionados, pode ser determinada por métodos usuais de análise utilizados pelos peritos na técnica, tal como cromatografia liquida de alta eficiência (HPLC). Neste pedido, a referência a uma composição contendo "0" de qualquer componente, significa que pelo menos a quantidade medida desse componente é inferior ao limite de detecção utilizando tais métodos analíticos ou é de 0,001% p/p ou inferior. 16 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

MÉTODOS DE PREPARAÇÃO O Pedido de Patente Internacional No. WO 2007/146335 e o Pedido Provisório U.S. No. 61/141,856 descrevem exemplos de processos conhecidos na técnica para a síntese do composto SNS-595. Tal como representado no Esquema 2, esta síntese prossegue através do Intermediário 1, o qual é feito reagir com o Composto 2 na presença de trietilamina ou N, N-diisopropiletilamina, para formar o Composto 3. O grupo éster do Composto 3 é subsequentemente hidrolisado a fim de proporcionar SNS-595.

Esquema 2

No entanto, quando este processo é seguido, podem-se formar várias impurezas. Especificamente, tal como representado no Esquema 3, na sequência da saponificação do Composto 3 em condições básicas, aproximadamente 0,04% de Composto 4 e <0,05% de Composto 5 podem ser observados no produto da reacção, para além do SNS-595.

Esquema 3

SNS-595 4 5 -0.04% 0.05%

Sem estar limitado a qualquer teoria, o Composto 5 pode ser originado pela presença de Composto 1 durante o passo de saponificação. Com efeito, tal como representado no Esquema 4, o produto isolado a partir da reacção dos Compostos 1 e 2 na presença de trietilamina ou N, N-diisopropiletilamina pode conter aproximadamente 0,3-0,6% em peso de Composto 1 residual. 17 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ Esquema 4

NEt3or'Pr2NEt Ο

C02Et

\=J 3 1 residual (0,3 - 0,6%) NaOH AcOH EtOH O OH O rrV ,co2h hAr ,CHO rVV co2h MeHN--/^y N y c N^S MeO \_/ + Av A cr N N N^S w *0 + N^S \=J SNS-595 4 5 -0,04% <0,05% Sem estar ligado a qualquer teoria, o Composto pode ser o resultado de uma reacçao entre o Composto 1 e hidróxido, possivelmente através de uma adiçao 1,4 de água. Com efeito, quando o Composto 1 é tratado com hidróxido de sódio aquoso, pode ser obtido o Composto 4 além do Composto 5, ilustrado no Esquema 5. 18 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Método de Reprocessamento

Em determinadas concretizações, são proporcionados processos para a preparação da substância SNS-595 por reprocessamento de uma substância SNS-595.

Tal como foi observado, a reacção do Composto 1 com o Composto 2 pode resultar na formação de uma mistura do Composto 3 e Composto 1 residual. 0 tratamento subsequente desta mistura com base aquosa, ou seja, condições de saponificação, pode resultar na formação de uma mistura de SNS-595, Composto 4, e Composto 5. No entanto, quando esta mistura é novamente submetida às condições de saponificação, ou seja, reprocessada, o produto resultante pode conter SNS-595 com quantidades menores de Composto 4, tal como representado no Esquema 6. 19 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Esquema 6 Ο

C02Et composto 2 NEt3 or 'Pr2NEt

MeHN

MeO \=J

C02Et residual (-0,6%)

NaOH

AcOH

EtOH

MeHN

MeO \=J SNS-595

OH

-0.04%

Cl

O

co2h N N N^S \=J 5 <0,05%

NaOH

AcOH

EtOH

O

SNS-595

co2h <0 01% r <0,05% 20 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Experiências adicionais demonstram que podem ser usados vários ciclos de tal reprocessamento para reduzir sequencialmente ainda mais a quantidade residual do Composto 4 na composição. Em alqumas concretizações, o reprocessamento é realizado uma série de vezes suficiente para reduzir o nivel de Composto 4 abaixo do limite de detecção por meio de métodos convencionais, tais como aqueles aqui divulgados ou na técnica.

Em determinadas concretizações, o reprocessamento é conseguido através da solubilização de hidrato de SNS-595 com uma base aquosa seguido de neutralização com ácido, seguido de desidratação.

Em determinadas concretizações, são aqui proporcionados processos para a preparação da substância SNS-595 compreendendo: (a) fazer reagir o Composto 3

com uma primeira base aquosa, seguido de neutralizaçao para se obter um hidrato de SNS-595 preliminar; (b) desidratar o hidrato de SNS-595 preliminar do passo (a) , e fazer reagir do produto desidratado com uma segunda base aquosa, seguido de neutralização para se obter um de hidrato de SNS-595 secundário; e (c) desidratar o hidrato de SNS-595 secundário obtido no passo (b) para se obter a substância SNS-595. A primeira e segunda base aquosa podem ser iguais ou diferentes. Em algumas concretizações, a primeira e a segunda base aquosa dos passos (a) e (b) são, cada uma, de modo independente, hidróxido de potássio, hidróxido de sódio ou hidróxido de litio. Em algumas concretizações, a primeira 21 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ e segunda base aquosa dos passos (a) e (b) são, cada uma, de modo independente, hidróxido de sódio ou hidróxido de litio. Em algumas concretizações, a primeira e segunda base aquosa, são cada uma, hidróxido de sódio. Em algumas concretizações, a primeira ou a segunda base aquosa, cada uma, de modo independente, possui uma concentração molar de cerca de 0,6-1,1 M. Em algumas concretizações, a primeira ou a segunda base aquosa é uma solução aquosa de um hidróxido, em que a primeira ou segunda base aquosa, cada uma, de modo independente, possui uma concentração molar de cerca de 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0 ou cerca de 1,1 M.

Os passos de desidratação, de modo independente, podem ser realizados por tratamento com solventes de desidratação conhecidos dos especialistas na técnica. Por exemplo, a desidratação pode ser realizada por tratamento do material a ser desidratado com um solvente higroscópico e/ou prótico. Exemplos de solventes incluem etanol, metanol, isopropanol e acetona. Em algumas concretizações, o solvente de desidratação é anidro.

Em algumas concretizações, o hidrato de SNS-595 do passo (b) ou (c) é desidratado com etanol. Em algumas concretizações, o etanol é anidro. Em concretizações especificas, o etanol anidro compreende menos do que 0,5% de água. Em algumas concretizações, o hidrato de SNS-595 secundário do passo (c) é desidratado com etanol anidro a uma temperatura de cerca de 25-80°C, cerca de 40-80°C, cerca de 60-80°C ou cerca de 80°C.

Os passos de neutralização, de forma independente, podem ser realizados com qualquer ácido conhecido pelos peritos na técnica. Podem ser utilizados ácidos inorgânicos, ácidos orgânicos ou suas combinações. Os ácidos podem também ser aquosos. Exemplos de ácidos incluem o ácido acético, ácido clorídrico, ácido bromidrico, ácido sulfúrico, ácido cítrico, ácido carbónico, ácido fosfórico, ácido oxálico ou ácido nítrico. Em algumas concretizações, a neutralização é realizada com ácido acético. Em algumas concretizações o passo de neutralização ajusta o pH no intervalo de 6,0 a 8,0. Em determinadas concretizações, o pH é ajustado no intervalo de 7,0 a 8,0. Em determinadas concretizações, o pH é ajustado a cerca de 7,3 a 7,7. 22 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Em determinadas concretizações, a primeira e segunda bases aquosas dos passos (a) e (b) são, cada uma hidróxido de sódio; o pH é ajustado a cerca de 7,3 a 7,7 com ácido acético durante a neutralização; os passos (a) e (b) são realizados na presença de etanol e os passos de desidratação são realizados com etanol anidro a uma temperatura entre cerca de 25 a 80°C. A reacção e neutralização com base aquosa podem ser realizadas na presença de solventes orgânicos conhecidos para os peritos na técnica. Em determinadas concretizações, o solvente é capaz de dissolver o hidrato de SNS-595, quando tratado com base aquosa e, ao mesmo tempo, capaz de precipitar o hidrato de SNS-595 após a subsequente neutralização. Em algumas concretizações, o passo (a) ou o passo (b) é realizado na presença de etanol ou metanol. Em algumas concretizações, o passo (a) ou o passo (b) é realizado na presença de etanol. Em algumas concretizações, o passo (a) e o passo (b) é cada um realizado na presença de etanol. 0 volume de etanol ou metanol adequado para levar a cabo os passos (a) ou (b) pode ser facilmente determinado por peritos na técnica. Em determinadas concretizações, o passo (a) ou passo (b) é realizado na presença de etanol ou metanol, em que a base aquosa é cerca de 1 a cerca de 20% de etanol ou metanol em volume. Em concretizações especificas a base aquosa é cerca de 3, 5, 10, ou 15% de etanol em volume.

Em algumas concretizações, a substância SNS-595 obtida no passo (c) compreende cerca de 0 a 0,03% de Composto 4 com base no peso total da substância SNS-595. Em algumas concretizações, a substância SNS-595 obtida no passo (c) compreende cerca de 0 a 0,02% de Composto 4 com base no peso total da substância SNS-595. Em algumas concretizações, a substância SNS-595 obtida no passo (c) compreende cerca de 0 a 0,01% do Composto 4 com base no peso total da substância SNS-595. Em algumas concretizações, a substância SNS-595 obtida no passo (c) compreende cerca de 0 a 0,03%, 0 a 0,02% ou 0 a 0,01% de Composto 4 com base no peso total da substância SNS-595. O Composto 3 pode ser obtido através da reacção do Composto 1 23 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ Ο

C02Et Cl IN ΙΝ \=/ 1 com ο Composto 2

MeQ. NHMe

• 2 TsOH 2. 0 Composto 1 pode ser preparado ou obtido através de qualquer fonte ou método considerado adequado pelos peritos na técnica. Exemplos de métodos estão descritos em WO 2007/146335.

Em algumas concretizações, o Composto 3 está presente na forma de uma mistura que compreende cerca de 0 a 0,7% de Composto 1, com base no peso total da mistura. Em algumas concretizações, o Composto 3 está presente na forma de uma mistura que compreende cerca de 0 a 0,6% de Composto 1, com base no peso total da mistura. Em algumas concretizações, o Composto 3 está presente na forma de uma mistura que compreende cerca de 0 a 0,3% de Composto l,com base no peso total da mistura. Em algumas concretizações, o Composto 3 está presente na forma de uma mistura que possui de 0 a 0,7%, de 0 a 0,6%, ou de 0 a 0,3% de Composto 1 com base no peso total da mistura. Em algumas concretizações, o Composto 3 está presente na forma de uma mistura que compreende 0 a 0,7%, 0 a 0,6% ou 0 a 0,3% de Composto 1 com base no peso total da mistura. Em algumas concretizações, o Composto 3 está presente sob a forma de uma mistura que consiste, essencialmente, de 0 a 0,7%, de 0 a 0,6% ou de 0 a 0,3% de Composto 1 com base no peso total da mistura. Método de N,N-diisopropiletilamina húmida

Em determinadas concretizações, o Composto 1 pode ser feito reagir com o Composto 2 na presença de N,N- 24 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ diisopropiletilamina (DIPEA) e água em acetonitrilo para se obter o Composto 3, o qual pode subsequentemente ser feito reagir com uma base aquosa para se obter a substância SNS-595 .

Quando o Composto 1 é feito reagir com o Composto 2 na presença de DIPEA e água em acetonitrilo, pode ser observado que o Composto 3 podem ser obtido com níveis mais baixos da impureza Composto 1 em comparação com a reacção realizada na ausência de água. Tal como representado no Esquema 7, a subsequente saponificação com base aquosa pode proporcionar SNS-595 possuindo níveis mais baixos tanto de Composto 4 como de Composto 5 em comparação com a reacção de Composto 1 com o Composto 2 em DIPEA na ausência de água. 25 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ Esquema 7

composto 2 Pr2NEt água o

C02Et

COpEt

O

C02H <0,1% saponificação

OH

-0.01%

co2h

W 5 <0.02%

Em algumas concretizações, o Composto 3

é preparado por reacçao do Composto 1 26 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

com ο Composto 2

em DIPEA e água para se obter o Composto 3.

Em algumas concretizações, é usado 0,5% a 10% de água em acetonitrilo. Em algumas concretizações, é usado 2% a 8% de água em acetonitrilo. Em algumas concretizações, é usado 4% a 6% de água em acetonitrilo.

Em algumas concretizações, a água pode ser adicionado no inicio, durante ou no final da reacção.

Em algumas concretizações, o processo é realizado a cerca de 25°C. Em algumas concretizações, a mistura reaccional pode ser aquecida para levar a cabo o consumo de composto 1. Em algumas concretizações, o processo é realizado inicialmente a uma temperatura de cerca de 25°C e, subsequentemente, a uma temperatura mais elevada. Em algumas concretizações, a temperatura mais elevada, é abaixo da temperatura de refluxo. Numa concretização especifica, a temperatura no inicio da reacção é de 25°C; essa temperatura é mantida durante um período de tempo pretendido, após o qual a temperatura é aumentada para cerca de 40-50°C e mantida a cerca de 40-50°C durante um segundo período de tempo pretendido. Em outras concretizações, o processo é realizado inicialmente à temperatura de cerca de 25°C durante cerca de 12 horas (h) e, subsequentemente, a uma temperatura de cerca de 40-45°C durante cerca de 3-5 horas. 27 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ 27 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ 3 obtido ou cerca de

Composto 0 a 0,05%

Em algumas concretizações, ο compreende cerca de 0 a 0,1%, cerca de 0 a 0,03% de Composto 1 tá COgEt

Cl N N \=J 1

N

Em algumas a 0,1%, 0 a com base no peso total de Composto 3. concretizações, o Composto 3 obtido compreende 0 0,05%, ou 0 a 0,03% de Composto 1.

Sao igualmente divulgados processos para a preparaçao de substância SNS-595 compreendendo: (a) fazer reagir o Composto 1

C02Et cr N N S^N \=J 1 com o Composto 2

MeQ. NHMe

/ \ · 2 TsOH

N H em DIPEA e água para se obter o Composto 3

b) fazer reagir o Composto 3 com uma base aquosa, seguido de neutralização para se obter um hidrato de SNS-595 preliminar; e 28 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ c) desidratar ο hidrato de SNS-595 preliminar obtido no passo (a) para se obter a substância SNS-595.

Em algumas concretizações, o passo (a) é realizado na presença de acetonitrilo.

Em algumas concretizações, é utilizado 0,5% a 10% de água em acetonitrilo. Em algumas concretizações, é utilizado 2% a 8% de água em acetonitrilo. Em algumas concretizações, é utilizado 4% a 6% de água em acetonitrilo.

Em algumas concretizações, a água pode ser adicionado no inicio, durante ou no final da reacção.

Em algumas concretizações, o processo é realizado a cerca de 25°C. Em algumas concretizações, a mistura reaccional pode ser aquecida para levar a cabo o consumo de composto 1. Em algumas concretizações, o processo é realizado inicialmente a uma temperatura de cerca de 25°C e posteriormente a uma temperatura mais elevada. Em algumas concretizações, a temperatura mais elevada, é abaixo da temperatura de refluxo. Numa concretização especifica, a temperatura no inicio da reacção é de 25°C; essa temperatura é mantida durante um tempo pretendido, depois do qual a temperatura é aumentada para cerca de 40-50°C e mantida a cerca de 40-50°C durante um segundo período de tempo pretendido. Em algumas concretizações, o passo (a) é realizado inicialmente a cerca de 25°C e subsequentemente a cerca de 40-45°C. Numa concretização específica, o passo (a) é realizado inicialmente a cerca de 25°C durante cerca de 12 horas e subsequentemente a cerca de 40-45°C durante cerca de 3-5 horas. Em algumas concretizações, o passo (a) é realizado a cerca de 25°C.

Em algumas concretizações, o Composto 3 obtido ou cerca compreende cerca de 0 a 0,1%, cerca de 0 a 0,05%, de 0 a 0,03% de Composto 1 29 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ Ο

com base no peso total do Composto 3. Em algumas concretizações, o Composto 3 obtido compreende 0 a 0,1%, 0 a 0,05% ou 0-0,03% de Composto 1.

Em algumas concretizações, a base aquosa é hidróxido de potássio, hidróxido de sódio, ou hidróxido de litio. Em algumas concretizações, a base aquosa é hidróxido de sódio ou hidróxido de litio. Em algumas concretizações, a base aquosa é hidróxido de sódio. Em algumas concretizações, a base aquosa possui uma concentração molar de cerca de 0,6-1,1 M. Em algumas concretizações, a base aquosa é uma solução aquosa de um hidróxido com uma concentração molar de cerca de 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, ou cerca de 1,1 M.

Em algumas concretizações, o passo (b) é realizado na presença de etanol ou metanol. Em algumas concretizações, o passo (b) é realizado na presença de etanol. O volume de etanol ou metanol adequado para levar a cabo o passo (b) pode ser facilmente determinado pelos peritos na técnica. Em determinadas concretizações, o passo (b) é realizado na presença de etanol ou metanol, em que a base aquosa é cerca de 1 a cerca de 20% de etanol ou metanol em volume. Em concretizações particulares, a base aquosa é cerca de 3, 5, 10 ou cerca de 15% do etanol em volume.

Em algumas concretizações, é adicionado um ácido no passo (b) , após reacção do Composto 3 com a base aquosa para ajustar o pH entre 6,0 a 8,0. Os ácidos adequados incluem ácido acético, ácido clorídrico e ácido sulfúrico. Em determinadas concretizações, o ácido é o ácido acético. Em determinadas concretizações, o pH é ajustado entre cerca de 7,3 a 1,1.

Em determinadas concretizações, a base aquosa do passo (b) é o hidróxido de sódio; 0 pH é ajustado a cerca de 7,3 a 7, 7 com ácido acético, após o Composto 3 reagir com o 30 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ hidróxido de sódio no passo (b) ; e o passo (b) é realizado na presença de etanol.

Em algumas concretizações, o hidrato de SNS-595 preliminar do passo (c) é desidratado com etanol. Em algumas concretizações, o etanol é anidro. Em concretizações particulares, o etanol anidro compreende menos do que 0,5% de água. Em algumas concretizações, o hidrato de SNS-595 preliminar do passo (c) é desidratado com etanol anidro a uma temperatura de cerca de 25-80°C, a cerca de 40-80°C, a cerca de 60-80°C, ou cerca de 80°C.

Em determinadas concretizações, a substância SNS-595 obtida no passo (b) compreende cerca de 0 a 0,02% ou cerca de 0 a 0,01% de Composto 4

OH O

com base no peso total da substância SNS-595. Em algumas concretizações, a substância SNS-595 obtida no passo (b) tem 0 a 0,02%, ou 0 a 0,01% de Composto 4. Em algumas concretizações, a substância SNS-595 obtida no passo (b) consiste, essencialmente, de 0 a 0,02%, ou 0 a 0,01% de Composto 4.Em algumas concretizações, a substância SNS-595 obtida no passo (b) compreende 0 a 0,02%, ou 0 a 0,01% de Composto 4.

Em algumas concretizações, a substância SNS-595 obtida no passo (b) compreende cerca de 0 a 0,02% de Composto 5

O O

com base no peso total da substância SNS-595. Em algumas 31 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ concretizações, a substância SNS-595 obtida no passo (b) tem 0 a 0,02% de Composto 5. Em algumas concretizações, a substância SNS-595 obtida no passo (b) consiste, essencialmente, de 0 a 0,02% de Composto 5. Em algumas concretizações, a substância SNS-595 obtida no passo (b) compreende de 0 a 0,02% de Composto 5.

Em algumas concretizações, a substância SNS-595 obtida no passo (b) é reprocessada. Em algumas concretizações, são aqui proporcionados processos para a preparação da substância SNS-595 compreendendo: (a) fazer reagir o Composto 1

1 com o Composto 2

MeQ

O

NHMe 2 TsOH

N H na presença de DIPEA e água para se obter o Composto 3

b) fazer reagir o Composto 3 com uma primeira base aquosa, seguido de neutralização para se obter um hidrato de SNS-595 preliminar; c) desidratar o hidrato de SNS-595 preliminar obtido no passo (b) para formar uma substância SNS-595; 32 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ d) fazer reagir a substância SNS-595 do passo (c) com uma segunda base aquosa seguido de neutralização para se obter um hidrato de SNS-595 secundário; e e) desidratar o hidrato de SNS-595 secundário obtido no passo (d) para obter a substância SNS-595.

COMPOSIÇÕES São divulgadas composições que compreendem a substância SNS-595. São igualmente divulgadas composições que consistem essencialmente em substância SNS-595. São igualmente divulgadas composições, que consistem em substância SNS-595.

Em algumas concretizações, são divulgados composições em que a substância SNS-595 substancialmente pura compreende cerca de 0 a 0,03% de Composto 4

OH O

com base no peso total de substância SNS-595. Em algumas concretizações, a substância SNS-595 compreende cerca de 0 a 0,02% ou cerca de 0 a 0,01% de Composto 4. Em algumas concretizações, a substância SNS-595 compreende 0 a 0,03%, 0 a 0,02% ou 0 a 0,01% de Composto 4.

Em algumas concretizações, são divulgadas substâncias SNS-595 que consistem essencialmente em SNS-595 e cerca de 0,03% em peso ou menos, cerca de 0,02% em peso ou menos ou cerca de 0,01% em peso ou menos de Composto 4. Em algumas concretizações, a composição consiste essencialmente em SNS-595 e 0,03% em peso ou menos, 0,02% em peso ou menos ou 0,01% em peso ou menos de Composto 4. Em algumas concretizações, a composição consiste em SNS-595 e 0,03% em peso ou menos, 0,02% em peso ou menos ou 0,01% em peso ou menos de Composto 4. 33 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Em algumas concretizações, a substância SNS-595 compreende cerca de 0 a 0,03%, cerca de 0 a 0,02%, ou cerca de 0 a 0,01% de Composto 4, no momento da produção. Em algumas concretizações, a composição compreende 0 a 0,03%, 0 a 0,02% ou 0 a 0,01% de Composto 4,no momento da produção.

Em algumas concretizações, são divulgadas substâncias SNS-595, que consistem essencialmente em SNS-595 e cerca de 0,03% em peso ou menos, cerca de 0,02% em peso ou menos ou cerca de 0,01% em peso ou menos de Composto 4, no momento da produção. Em algumas concretizações, a composição consiste essencialmente em SNS-595 e 0,03% em peso ou menos, 0,02% em peso ou menos ou 0,01% em peso ou menos do Composto 4, no momento da produção. Em algumas concretizações, a composição consiste em SNS-595 e 0,03% em peso ou menos, 0,02% em peso ou menos ou 0,01% em peso ou menos do Composto 4, no momento da produção.

Em algumas concretizações, são divulgadas composições em que a substância SNS-595 compreende cerca de 0 a 0,04% de Composto 5 o o

com base no peso total da substância SNS-595. Em algumas concretizações, a substância SNS-595 compreende cerca de 0 a 0,03%, ou cerca de 0 a 0,02% de Composto 5. Em algumas concretizações, a substância SNS-595 compreende 0 a 0,04%, 0 a 0,03% ou 0 a 0,02% de Composto 5.

Em algumas concretizações, são divulgadas substâncias SNS-595, que consistem essencialmente em SNS-595 e cerca de 0,04% em peso ou menos, cerca de 0,03% em peso ou menos ou cerca de 0,02% em peso ou menos de Composto 5. Em algumas concretizações, a composição consiste essencialmente em SNS-595 e 0,04% em peso ou menos, 0,03% em peso ou menos ou 0,02% em peso ou menos de Composto 5. Em algumas concretizações, a composição é composta de SNS-595 e 0,04% 34 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ em peso ou menos, de 0,03% em peso ou menos, ou de 0,02% em peso ou menos do Composto 5.

Em algumas concretizações, a substância SNS-595 compreende cerca de 0 a 0,04%, cerca de 0 a 0,03%, ou cerca de 0 a 0,02% de Composto 5, no momento da produção. Em algumas concretizações, a composição compreende 0 a 0,04%, 0 a 0,03% ou 0 a 0,02% de Composto 5, no momento da produção.

Em algumas concretizações, a substância SNS-595 consiste essencialmente em SNS-595 e cerca de 0,04% em peso ou menos, cerca de 0,03% em peso ou menos ou cerca de 0,02% em peso ou menos de Composto 5, no momento da produção. Em algumas concretizações, a composição consiste essencialmente em SNS-595 e 0,04% em peso ou menos, 0,03% em peso ou menos ou 0,02% em peso ou menos de Composto 5, no momento da produção. Em algumas concretizações, a composição consiste em SNS-595 e 0,04% em peso ou menos, 0,03% em peso ou menos, ou 0,02% em peso ou menos de Composto 5, no momento da produção.

Em algumas concretizações, são divulgadas substâncias SNS-595, em que a substância SNS-595 compreende cerca de 0 a 0,07% no total de Composto 4 e Composto 5 combinados com base no peso total das composições. Em algumas concretizações, a composição compreende cerca de 0 a 0,05% no total de Composto 4 e Composto 5 combinados. Em algumas concretizações, a composição compreende substancialmente cerca de 0 a 0,03% no total de Composto 4 e Composto 5 combinados. Em algumas concretizações, a composição compreende 0 a 0,07%, 0 a 0,05% ou de 0 a 0,03% no total de Composto 4 e Composto 5 combinados.

Em algumas concretizações, são divulgados substâncias SNS-595, que consistem essencialmente em SNS-595 e cerca de 0,07% em peso ou menos, cerca de 0,05% em peso ou menos ou cerca de 0,03% em peso ou menos do total de Composto 4 e Composto 5 combinados. Em algumas concretizações, a composição consiste essencialmente em SNS-595 e 0,07% em peso ou menos, 0,05% em peso ou menos ou 0,03% em peso ou menos no total de Composto 4 e Composto 5 combinados. Em algumas concretizações, a composição consiste em SNS-595 e 35 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ 0,07% em peso ou menos, 0,05% em peso ou menos ou 0,03% em peso ou menos no total de Composto 4 e Composto 5 combinados.

Em algumas concretizações, a substância SNS-595 compreende cerca de 0 a 0,07%, cerca de 0 a 0,05% ou cerca de 0 a 0,03% no total de Composto 4 e Composto 5 combinados, no momento da produção. Em algumas concretizações, a composição compreende 0 a 0,07%, 0 a 0,05% ou 0 a 0,03% no total de Composto 4 ou Composto 5 combinados, no momento da produção.

Em algumas concretizações, são divulgadas substâncias SNS-595, que consistem essencialmente em SNS-595 e cerca de 0,07% em peso ou menos, cerca de 0,05% em peso ou menos ou cerca de 0,03% em peso ou menos do total de Composto 4 e Composto 5 combinados, no momento da produção. Em algumas concretizações, a composição consiste essencialmente em SNS-595 e 0,07% em peso ou menos, 0,05% em peso ou menos ou 0,03% em peso ou menos do total de Composto 4 e Composto 5 combinados, no momento da produção. Em algumas concretizações, a composição consiste em SNS-595 e 0,07% em peso ou menos, 0,05% em peso ou menos, ou 0,03% em peso ou menos do total de Composto 4 e Composto 5 combinados, no momento da produção. A presença do Composto 5 numa solução compreendendo SNS-595 e água pode resultar em partículas microscópicas sub-visíveis. A presença de partículas microscópicas ou sub-visíveis pode ser determinada por qualquer técnica considerada adequada por um perito na técnica. Por exemplo, o número de partículas pode ser determinado pelo método de obscurecimento especificado em USP-NF General Chapter 788, o qual é adiante descrito. Em alternativa, as técnicas de imagiologia de fluxo (tal como as disponíveis a partir de Brightwell Technologies, Inc. podem ser usadas para determinar o teor de matéria em partículas de uma composição.

Em algumas concretizações, são divulgadas composições em que cerca de 100 mg de substância SNS-595 substancialmente pura está presente por cada 10 mL da composição; e em que a 36 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ composição não tem mais de 80, não mais de 70, não mais de 60, não mais de 50, não mais de 40, não mais de 30, não mais de 20, não mais de 15, não mais de 10 ou não mais de 5 partículas > 25 mícrons por 10 mL de composição.

Em algumas concretizações, são divulgadas composições em que cerca de 100 mg de SNS-595 está presente por cada 10 mL de composição; e em que a composição não possui mais do que 3000, não mais do que 2500, não mais que 2000, não mais do que 1500, não mais do que 1000, não mais do que 800, não mais de 645, não mais do que 600, não mais de 300 ou não mais do que 100 partículas d 10 mícrons por 10 mL de composição.

Em algumas concretizações, são divulgadas composições que compreendem SNS-595 e 0,3 mg ou menos, 0,2 mg ou menos, ou 0,1 mg ou menos de Composto 4 por grama de SNS-595. Em algumas concretizações, as composições são soluções aquosas de uma substância SNS-595 substancialmente pura, por exemplo, de 3 mg ou menos de Composto 4 por 10 g de substância SNS-595 substancialmente pura por 100 mL de solução. Em algumas concretizações, as composições compreendem ainda sorbitol. Em algumas concretizações, o sorbitol está presente numa quantidade que proporciona uma solução aquosa a 4,5% de sorbitol. Em algumas concretizações, as composições compreendem ainda o ácido metanossulfónico. Em algumas concretizações, o ácido metanossulfónico está presente numa quantidade suficiente para a solução possuir um pH de 2,5.

Em algumas concretizações, a composição é uma solução aquosa que consiste essencialmente em: a) 10 g de uma substância SNS-595 que consiste em SNS-595 e Composto 4, em que a substância SNS-595 contém 0,3 mg ou menos de Composto 4 por grama; b) 4,5 g de sorbitol; e c) ácido metanossulfónico proporcionar um pH de 2,5; suficiente para 37 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ por 100 mL de solução. São igualmente descritos produtos que compreendem um recipiente que contém uma alíquota dessa solução, por exemplo, 10 mL dessa solução.

Uma composição compreendendo SNS-595 e 0,4 mg ou menos, 0,3 mg ou menos, 0,2 mg ou menos de Composto 5 por grama de SNS-595. Em algumas concretizações, as composições são soluções aquosas de uma substância SNS-595, por exemplo, 0,4 mg ou menos do Composto 5 por 10 g da substância SNS-595 por 100 mL de solução. Em algumas concretizações, as composições compreendem ainda sorbitol. Em algumas concretizações, o sorbitol está presente numa quantidade que proporciona uma solução aquosa a 4,5% de sorbitol. Em algumas concretizações, as composições compreendem ainda ácido metanossulfónico. Em algumas concretizações, o ácido metanossulfónico está presente numa quantidade suficiente para proporcionar à solução um pH de 2,5.

Em algumas concretizações, a composição é uma solução aquosa que consiste essencialmente em: a) 10 g de uma substância SNS-595 que consiste em SNS-595 e Composto 5, em que a substância SNS-595 contém 0,4 mg ou menos de Composto 5 por grama; b) 4,5 g de sorbitol, e c) ácido metanossulfónico suficiente para proporcionar um pH de 2,5; por 100 mL de solução. São igualmente são descritos produtos que compreendem um recipiente contendo uma alíquota dessa solução, por exemplo, 10 mL dessa solução.

Uma composição compreendendo SNS-595 e 0,7 mg ou menos no total de Composto 4 e Composto 5 por grama de SNS-595. Uma composição compreendendo SNS-595 e 0,4 mg ou menos, 0,3 mg ou menos, 0,2 mg ou menos de Composto 5 por grama de SNS-595. Em algumas concretizações, as composições são soluções aquosas de uma substância SNS-595, por exemplo, 4 mg ou menos de Composto 5 por 10 g de substância SNS-595 por 100 mL de solução. Em algumas concretizações, as composições 38 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ compreendem ainda sorbitol. Em algumas concretizações, o sorbitol está presente numa quantidade que proporciona uma solução aquosa a 4,5% de sorbitol. Em algumas concretizações, as composições compreendem ainda ácido metanossulfónico. Em algumas concretizações, o ácido metanossulfónico está presente numa quantidade suficiente para proporcionar à solução um pH de 2,5.

Em algumas concretizações, a composição é uma solução aquosa que consiste essencialmente em: a) 10 g de uma substância SNS-595 que consiste em SNS-595, Composto 4 e Composto 5, em que a substância SNS-595 contém 0,7 mg ou menos do total de Composto 4 e Composto 5 combinados por grama; b) 4,5 g de sorbitol; e c) ácido metanossulfónico suficiente para proporcionar um pH de 2,5; por 100 mL de solução. São igualmente descritos produtos que compreendem um recipiente contendo uma alíquota dessa solução, por exemplo, 10 mL dessa solução.

Além disso, a presença do Composto 4 numa solução compreendendo SNS-595 e água pode resultar na formação de partículas visíveis. Sem estar limitado a qualquer teoria, as partículas visíveis podem compreender Composto 6

OH OH

o qual pode ser derivado a partir do Composto 4. Sem estar limitado a qualquer teoria, o Composto 4, quando exposto a formaldeído, pode reagir para formar o Composto 6. Com efeito, quando o Composto 4 é tratado com formaldeído, foi observada a formação do Composto 6. 39 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Em algumas concretizações, são proporcionados processos que, quando comparados com os processos conhecidos na técnica, produzem substância SNS-595 incluindo quantidades inferiores de Compostos 4 e 5, e, em conformidade, menor quantidade de partículas, por exemplo, Composto 6, quando essa substância SNS-595 substancialmente pura é proporcionada numa solução aquosa.

Em algumas concretizações, são proporcionados processos que, quando comparados com os processos conhecidos na técnica, produzem substância SNS-595, incluindo quantidades inferiores de Composto 7

Em algumas concretizações, são proporcionadas composições que compreendem a substância SNS-595, em que as composições são essencialmente livres de partículas visíveis e são estáveis ao longo do tempo. Em algumas concretizações, a composição é estável durante 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 15, 20 ou 25 dias. Em algumas concretizações, a composição é estável durante 1, 3, 6, 9, 12, 18, 24, 36 ou 42 meses. Em algumas concretizações, a composição é estável a partir do momento de produção. Em algumas concretizações, a composição é estável quando em contacto com o formaldeído. Em algumas concretizações, a composição é estável quando em contacto com um composto capaz de transformar o Composto 4

OH O

no Composto 6 40 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Tal como discutido, as partículas visíveis podem ter, em algumas concretizações, um diâmetro médio de pelo menos 50 m, pelo menos 75 m, pelo menos 100 m, pelo menos 150 m ou pelo menos 200 m. Em algumas concretizações as partículas visíveis têm um diâmetro médio de cerca de 50-500 m, cerca de 50-300 m, cerca de 100-500 m ou cerca de 100-300 m. A cristalinidade e o hábito cristalino podem ser determinados utilizando métodos conhecidos dos peritos na técnica. Por exemplo, a cristalinidade e hábito cristalino podem ser avaliados por microscopia de luz polarizada. Em algumas concretizações, as partículas visíveis são pós cristalinos. Em algumas concretizações, o hábito cristalino das partículas visíveis é o de placas de cerca de 45 ma cerca de 150 m, ou cerca de 50 ma cerca de 100 m. A detecção de partículas visíveis numa composição pode ser determinada por qualquer técnica considerada adequada por um perito na técnica. Por exemplo, podem ser detectadas partículas visíveis através do método especificado na Farmacopeia Europeia 5.0, secção 2.9.20. Determinadas técnicas exemplificativas são adiante descritas com maior detalhe.

Em algumas concretizações, a presença de partículas visíveis é determinada, com uma intensidade de iluminação entre cerca de 2000 e 3750 lux.

Em algumas concretizações, as partículas visíveis compreendem Composto 6.

Em algumas concretizações, as partículas visíveis compreendem Composto 7.

Em algumas concretizações, são proporcionados processos que, quando comparados com os processos conhecidos na 41 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ técnica, produzem substância SNS-595 incluindo quantidades inferiores de partículas sub-visíveis tal como detectado pelo teste Light Obscuration Particle Count, tal como descrito na Farmacopeia dos EUA,, <788> Particulate Matter in Injections. Em algumas concretizações, as partículas sub-visíveis compreendem um ou mais dos compostos 5, 6, e/ou 7.

Em algumas concretizações são aqui divulgadas composições que compreendem substância SNS-595, em que as composições não contêm mais do que 6000 partículas sub-visíveis >10 m por frasco, não mais do que 3000 partículas sub-visíveis >10 m por frasco ou não mais do que 1000 partículas sub-visíveis >10 m por frasco tal como medido pelo obscurecimento de luz. Em algumas concretizações, são aqui divulgadas composições que compreendem substância SNS-595, em que as composições não contêm mais do que 600 partículas sub-visíveis >25 m por frasco, não mais do que 300 partículas sub-visíveis >25 m por frasco ou nem mais de 100 partículas sub-visíveis >25 m por frasco através de obscurecimento de luz. Em algumas concretizações, são aqui divulgadas composições que compreendem substância SNS-595, em que as composições não contêm mais do que 3000 partículas sub-visíveis >10 m por frasco, não mais do que 1500 partículas sub-visíveis >10 m por frasco ou não mais do que 300 partículas sub-visíveis >10 m por frasco tal como medida por avaliação microscópica. Em algumas concretizações, são aqui divulgadas composições que compreendem substância SNS-595, em que as composições não contêm mais de 300 partículas sub-visíveis >25 m por frasco, não mais de 150 partículas sub-visíveis >25 m por frasco ou não mais do que 30 partículas sub-visíveis >25 m por frasco medido por avaliação microscópica.

Em algumas concretizações, a composição compreende sorbitol. Em outras concretizações, a composição compreende ácido metanossulfónico. Em outras concretizações, o sorbitol está presente numa quantidade que proporciona uma solução aquosa de 4,5% de sorbitol. Em algumas concretizações, o ácido metanossulfónico está presente numa quantidade suficiente para proporcionar um pH de 2,5. Em algumas concretizações, a composição é estável. 42 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Em algumas concretizações, a composição consiste essencialmente em 100 mg de substância SNS-595, 450 mg de D-sorbitol, água, e ácido metanossulfónico, em que o ácido metanossulfónico está presente numa quantidade para proporcionar um pH de 2,5 e em que a água está presente numa quantidade suficiente para proporcionar um volume de composição total de 10 mL. Em algumas concretizações, a composição é estável.

Em algumas concretizações, a composição consiste essencialmente em água, substância SNS-595, sorbitol e ácido metanossulfónico. Em algumas concretizações, a composição é estável.

Em algumas concretizações, são divulgadas composições que consistem essencialmente em SNS-595 e 0,03% em peso ou menos de Composto 4.

OH O

4

Em algumas concretizações, são divulgadas composições que consistem essencialmente em SNS-595 e 0,04% em peso ou menos de Composto 5.

O O

\=J 5

Em algumas concretizações, são divulgadas composições que consistem essencialmente em SNS-595 e 0,07% em peso ou menos no total de Composto 4 e Composto 5. 43 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ ΟΗ Ο

5.

Em algumas concretizações, são divulgadas composições que compreendem SNS-595 e 0,3 mg ou menos de Composto 4 por grama de SNS-595.

OH O

Em algumas concretizações, são divulgadas composições que compreendem SNS-595 e 0,4 mg ou menos de Composto 5 por grama de SNS-595.

5

Em algumas concretizações, são divulgadas composições que compreendem SNS-595 e 0,7 mg ou menos no total de Composto 4 e Composto 5 por grama de SNS-595.

Em algumas concretizações, sao divulgadas composições que consistem essencialmente em: (a) 10 g de uma substância SNS-595 que consiste em SNS-595 e Composto 4, em que a substância SNS-595 contém 3 44 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ mg ou menos de Composto 4 por grama 44 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ OH 0

(b) 4,5 g de sorbitol; e (c) ácido metanossulfónico suficiente para proporcionar um pH de 2,5; por 100 mL da solução. Em algumas concretizações, é divulgado um produto que compreende um recipiente contendo 10 mL dessa solução.

Em algumas concretizações, é divulgada uma solução aquosa que consiste essencialmente em: (a) 10 g de uma substância SNS-595 que consiste em SNS-595 e Composto 5

5 em que a substância SNS-595 contém 4 mg ou menos de Composto 5 por grama; (b) 4,5 g de sorbitol; e (c) ácido metanossulfónico suficiente para proporcionar um pH de 2,5; por 100 mL de solução. Em algumas concretizações, é divulgado um produto que compreende um recipiente contendo 10 mL dessa solução. 45 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Em algumas concretizações, é divulgada uma solução aquosa que consiste essencialmente em: (a) 10 g de uma substância SNS-595 que consiste em SNS-595, Composto 4 e Composto 5

em que a substância SNS-595 contém 7 mg ou menos no total de Composto 4 e Composto 5 combinados por grama; (b) 4,5 g de sorbitol; e (c) ácido metanossulfónico suficiente para proporcionar um pH de 2,5; por 100 mL de solução. Em algumas concretizações, é divulgado um produto que compreende um recipiente contendo 10 mL dessa solução. É aqui igualmente descrito um composto de fórmula 6

OH OH

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. É aqui igualmente descrito um composto de fórmula 7 46 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. EXEMPLOS

Determinadas concretizações da matéria reivindicada são ilustradas pelos exemplos que se seguem.

Exemplo 1: Redução do Composto 4 por Reprocessamento

Tal como foi observado, a reacção do Composto 1 com o Composto 2 pode resultar na formação de uma mistura de Composto 3 e Composto 1 residual. 0 tratamento subsequente desta mistura com uma base aquosa, ou seja, condições de saponificação com, por exemplo, hidróxido de sódio aquoso, pode resultar na formação de uma mistura de SNS-595, Composto 4 e Composto 5. Contudo, quando esta mistura é novamente submetida às condições de saponificação, ou seja, reprocessada, o produto resultante pode conter SNS-595 com quantidades mais baixas de Composto 4, tal como anteriormente se vê no Esquema 6.

Foram realizados ensaios para avaliar o efeito desse reprocessamento de substância SNS-595 nos níveis residuais de Composto 4. Os resultados destes ensaios são apresentados na Tabela 1. 47 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Tabela 1: Redução de Composto 4 por reprocessamento

Ensaio Entrada Escala Composto 4 fortificado (real) Composto 4 após tratamento com NaOH Composto 4 após reprocessamento % em peso % em área % em área (% em peso) 1 1 1 g 1 0,70 0, 06 2 Nenhum 0,06 <0, 01 3 <0,01 <0, 01 2 4 i g 1 0,89 0, 06 5 Nenhum 0,06 ND 3 6 25 g 0,3 NA 0,01 (0,033) 4 7 25 g 0,2 NA 0,005 (0,015) 5 8 25 g 0,1 NA 0,002 (0,003) 6 9 40 g 0,021 NA (0,004) 7 10 200 g 0,021 NA (0,005) 8 11 1,49 kg 0,021 NA (<0,005) 9 12 1,2 kg 0,021 NA (<0,015) 1 foi usado SNS-595 com 0,02% de Composto 4 NA = Não disponível; ND = Não detectado

Ensaio 1: A uma solução de hidróxido de sódio (0,15 g) em água (5 mL) , foram adicionados SNS-595 (0,98 g), Composto 4 (0,010 g) e etanol (EtOH) (1 mL) . A mistura foi filtrada e a análise por HPLC do filtrado apresentou Composto 4 a cerca de 0,7% (em área) . O pH do filtrado foi ajustado para 6 através de adição lenta de ácido acético e a solução foi aquecida para precipitar o hidrato de SNS-595. A suspensão foi arrefecida e filtrada para se obter o hidrato de SNS-595. A análise por HPLC do sólido apresentou 0,06% (em área) de Composto 4, indicando que tinha ocorrido uma redução de ~10 vezes de Composto 4. 0 sólido foi re-submetido a reprocessamento usando hidróxido de sódio aquoso (0,18 g em 6 mL de água) e EtOH (1 mL), seguido de ajuste do pH com ácido acético aquoso. Após aquecimento, o sólido foi filtrado para se obter hidrato de SNS-595 com menos de 0,01% de Composto 4, demonstrando, pelo menos, uma redução adicional de seis vezes na quantidade de contaminante. 48 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Ensaio 2: SNS-595 (~1 g) foi fortificado com 1% de

Composto 4. A Análise por HPLC desta amostra fortificada a seguir às condições de reprocessamento, ou seja, tratamento com NaOH, apresentou 0,89% de Composto 4 em área. Este material foi, em seguida, ajustado no pH e o sólido foi isolado tal como anteriormente. A análise por HPLC apresentou 0,06% de Composto 4 em área, indicando que ocorreu uma redução de ~10 vezes de Composto 4, consistente com o primeiro ensaio anterior. Este material, quando novamente submetido a condições de reprocessamento, proporcionou uma substância SNS-595 sem Composto 4 detectável, demonstrando uma redução de pelo menos seis vezes na quantidade daquele contaminante.

Ensaios de Escalabilidade:

Os Ensaios 3-9 foram realizados para avaliar a escalabilidade deste processo. O procedimento do ensaio 8 é proporcionado como um exemplo do procedimento. Os resultados dos Ensaios 3-9 encontram-se resumidos adiante e na Tabela 1.

Exemplo de Procedimento para Reprocessamento em Grande Escala (Ensaio 8): A uma solução de NaOH (0,2 kg) em água (4,8 kg), foi adicionado SNS-595 (1,49 kg) tendo Composto 4 (-0,24% em peso). A esta mistura, foi adicionado EtOH (0,13 kg). A solução foi filtrada e o pH do filtrado foi ajustado a 7,3-7,7 através da adição lenta de ácido acético aquoso. A mistura foi aquecida a 55-65°C, arrefecida e filtrada. O bolo de filtração foi lavado com água, EtOH e seco sob vácuo para se obter um hidrato de SNS-595 (1,36 kg), com 0,013% (em peso) de Composto 4. O hidrato (1,36 kg) foi desidratado através de suspensão em EtOH (23 kg) a 67-78°C. Após arrefecimento, a mistura foi filtrada, lavada com EtOH e secou-se a 65-75°C sob vácuo para se obter uma substância SNS-595 (1,0 kg), com menos do que 0,005% de Composto 4. 49 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Resumo dos Ensaios de Escalabilidade:

No Ensaio 3, 25 g de SNS-595 com 0,3% de Composto 4 foi submetido a condições de reprocessamento, ou seja, hidróxido de sódio, seguido de ajuste de pH e desidratação. A análise por HPLC do SNS-595 resultante apresentou 0,01% em área de Composto 4, indicando que havia ocorrido uma redução de ~30 vezes em Composto 4.

No Ensaio 4, 25 g de SNS-595 com 0,2% de Composto 4 foi submetido a condições de reprocessamento, ou seja, hidróxido de sódio, seguido de ajuste de pH e desidratação. A análise por HPLC do SNS-595 resultante apresentou 0,005% em área de Composto 4, indicando que havia ocorrido uma redução de ~40 vezes em Composto 4.

No Ensaio 5, 25 g de SNS-595 com 0,1% de Composto 4 foi submetido a condições de reprocessamento, ou seja, hidróxido de sódio, seguido de ajuste de pH e desidratação. A análise por HPLC do SNS-595 resultante apresentou 0,002% em área de Composto 4, indicando que havia ocorrido uma redução de ~50 vezes em Composto 4.

No Ensaio 6, 40 g de SNS-595 com 0,02% de Composto 4 foi submetido a condições de reprocessamento ou seja, hidróxido de sódio, seguido de ajuste de pH e desidratação. A análise por HPLC do SNS-595 resultante apresentou 0,004% em área de Composto 4, indicando que havia ocorrido uma redução de ~5 vezes em Composto 4.

No Ensaio 7, 200 g de SNS-595 com 0,02% de Composto 4 foi submetido a condições de reprocessamento, ou seja, hidróxido de sódio, seguido de ajuste de pH e desidratação. A análise por HPLC do SNS-595 resultante apresentou menos de 0,005% em área de Composto 4, indicando que havia ocorrido uma redução de ~4 vezes em Composto 4.

No Ensaio 8, 1,49 kg de SNS-595 com 0,02% de Composto 4 foi submetido a condições de reprocessamento, ou seja, hidróxido de sódio, seguido de ajuste de pH. A análise por HPLC apresentou <0,005% em área de Composto 4, indicando que havia ocorrido uma redução de ~4 vezes em Composto 4. 50 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

No Ensaio 9, 1,2 kg de SNS-595 com 0,02% de Composto 4 foi submetido a condições de reprocessamento ou seja, hidróxido de sódio, seguido de ajuste de pH e desidratação. A análise por HPLC do SNS-595 resultante apresentou <0,015% em área de Composto 4, indicando que havia ocorrido uma redução de ~2 vezes em Composto 4.

Exemplo 2: Redução da quantidade de Composto 6

Tal como discutido, a presença do Composto 4 numa solução de SNS-595 pode ser acompanhada pela formação de partículas visíveis, as quais, sem se estar limitado a qualquer teoria, compreendem Composto 6. Foram realizados ensaios para avaliar o efeito de redução dos níveis de Composto 4 na formação do Composto 6 ao longo do tempo.

Foram preparadas quatro amostras diferentes de soluções de medicamentos a partir das substâncias activas com vários níveis de Composto 4 descritas na Tabela 2 adiante. A Amostra 1 usou o produto reprocessado obtido no Ensaio 6 (descrito no Exemplo 1) e apresentava <0,005% de Composto 4. Sempre que era efectuada adição externa de Composto 4, o Composto 4 foi em primeiro lugar dissolvido numa solução aquosa de NaOH a 5mM. Um total de 2% de solução aquosa de NaOH foi adicionada a cada uma das Amostras de medicamentos para efeitos de consistência.

As várias amostras de medicamentos foram filtradas duas vezes através de filtros SteriCup de 0,22 m em PVDF. Estas amostras do medicamento pré-autoclavadas e filtradas foram analisadas em relação ao teor em Composto 4 seis dias após a sua preparação e armazenamento à temperatura ambiente (TA) protegidas da luz. A Figura 1 e Tabela 2 mostram que a quantidade de Composto 6 no medicamento correlaciona-se directamente com o nível de Composto 4 na substância activa SNS-595.

As Amostras filtradas de substância activa foram posteriormente vertidas em frascos de vidro Schott de 30 mL e foram fechadas com tampa. 0 enchimento e fecho dos frascos foram realizados numa câmara de fluxo laminar. Os frascos e 51 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ as tampas utilizados neste estudo foram lavados com água filtrada e deixados a secar na câmara de fluxo laminar antes de utilização. Os frascos não foram despirogenizados e as tampas não foram esterilizadas antes de uso. Os frascos cheios e fechados foram selados, autoclavados, e armazenados na vertical e protegidos da luz, a 40°C/75% de humidade relativa (HR) . Após 65 dias de armazenamento, os frascos foram inspeccionadas quanto à presença de partículas visíveis e analisados por HPLC em relação ao teor em Composto 6. A análise das amostras com menos de 0,01% de Composto 4 (entrada 1) mostraram que o medicamento resultante não tinha partículas visíveis e nenhuma quantidade detectável de Composto 6 após 65 dias. Os ensaios com Amostras com > 0,02% de Composto 4 apresentaram formação significativa de Composto 6 e partículas visíveis durante o mesmo período de tempo (amostras 2-4). A quantidade de Composto 6 após 65 dias correlacionou-se directamente com a quantidade inicial de Composto 4 na substância SNS-595.

Tabela 2: Efeito do Composto 4 nos níveis de Composto 6 Amostra Composto 4 nominal na substância activa (% p/p) Composto 6 ( g/frascc Após ~6 dias Composto 6 ( g/frascc Após 65 dias 1 <0, 01 0,0 0,0 2 0,02 0,6 7-9 3 0,04 ~2 14-19 4 0,20 ~9 16-24

Exemplo 3: Redução de Compostos 4 e 5 através de DIPEA Húmido

Foram realizados ensaios para avaliar o efeito da água na reacção entre o Composto 1 e o Composto 2 na presença de DIPEA. Foram igualmente realizados ensaios para comparar o efeito da adição de água durante o inicio da reacção com a adição de água no final da reacção.

Quando se fez reagir o Composto 1 com o Composto 2 a 40-45°C, na ausência de água, a análise do produto apresentou entre 0,26% e 0,31% em área de Composto 1 residual. 52 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Numa segunda série de ensaios, fez-se reagir o Composto 1 e o Composto 2, à TA durante 12 h, e, subsequentemente aqueceu-se a 40-45°C durante 3-5 horas. Nestes ensaios, foi adicionada água no inicio da reacção. A análise do produto apresentou entre 0,01% e 0,08% em área de Composto 1 residual.

Numa terceira série de ensaios, fez-se reagir o Composto 1 com o Composto 2, à TA durante 12 h, e, subsequentemente aqueceu-se a 45°C durante 3 horas. Nestes ensaios, foi adicionada água no final da reacção. A análise do produto apresentou ente 0,03% a 0,09% em área de Composto 1 residual.

Os ensaios supra encontram-se resumidos na tabela abaixo.

Tabela 3: Efeito da água na síntese de SNS-595 Condições Reaccionais Água (volume) Escala Composto 1 Residual (% área)* Comentários DIPEA, 40-45°C 0 50 g 0,26 0,31 Sem água DIPEA, TA, 12 horas, posteriormente aquecimento a 40-45°C, 3-5 h 0,5 i g 0, 05 Água adicionada no inicio 10 g 0, 08 50 g 0, 08 100 g 0, 05 1 kg 0, 01 DIPEA, TA, 12 horas, posteriormente aquecimento a 40-45°C, 3 h 0,5 10 g 0, 03 Água adicionada após 12 horas à TA 10 g 0, 05 50 g 0, 09 100 g 0, 07 * Analisado a 275 nm O que se segue é um exemplo de procedimento para os ensaios descritos na Tabela 3 supra. A uma suspensão de Composto 2 em acetonitrilo (ACN, 10 L) , foram adicionados DIPEA (4 L) e água (0,5 L) . À solução, foram adicionados Composto 1 e ACN (1 L) e a mistura 53 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ reaccional foi agitada durante cerca de 12 horas à TA. A mistura reaccional foi posteriormente aquecida até cerca de 45°C durante cerca de 2-6 horas. Após arrefecimento, o produto foi filtrado, lavado com ACN (4 L) e seco sob vácuo para se obter o Composto 3 (1,1 kg) . A análise por HPLC mostrou que este material continha <0,1% de Composto 1.

Foram realizados ensaios para determinar o impacto dos níveis de Composto 1 residual nos níveis de Composto 4 resultantes durante o fabrico de SNS-595. Estes ensaios demonstraram uma correlação entre os níveis de Composto 1 nos níveis de Composto 3 e Composto 4 na substância SNS-595 resultante. Os ensaios à escala laboratorial demonstraram igualmente que usando a substância Composto 3 com <0,1% de Composto 1 proporcionava uma substância SNS-595 com <0,01% de Composto 4. Os resultados destes ensaios encontram-se resumidos adiante na Tabela 4 e Figura 2.

Tabela 4: Impacto de Composto 1 residual nos níveis de Composto 3 e Composto 4 em SNS-595 Entrada Escala Composto 1 % área Composto 4 (% peso) 1 0,15 kg 0,50 0,04 2 0,75 kg 0,60 0,05 3 2,1 kg 0,64 0,04 4 5 kg 0,24 0,02 5 10 g 0,08 0,007 6 50 g 0,09 0,008 7 1 kg 0,01 <0,005 O que se segue é um exemplo de procedimento para os ensaios descritos na Tabela 4 supra.

Foi adicionado Composto 3 (com <0,1% de Composto 1) a uma solução de hidróxido de sódio (0,14 kg) em água (3,3 kg) e EtOH (0,16 L) . A mistura foi agitada durante cerca de 12 horas e filtrada para remoção dos materiais insolúveis. O pH do filtrado foi ajustado a 7,3-7,7 com ácido acético aquoso. A mistura resultante foi aquecida até cerca de 60°C durante 2-4 horas, arrefecida e filtrada. O bolo de filtração foi 54 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ lavado com água, EtOH e secou-se sob vácuo. 0 hidrato de SNS-595 resultante foi suspenso em EtOH (20 L) a cerca de 70°C durante cerca de 4 horas, arrefeceu-se e filtrou-se. O bolo de filtração foi lavado com EtOH e secou-se a 55-75°C sob vácuo para se obter a substância SNS-595 (0,66 kg), com menos do que 0,005% de Composto 4 (Tabela 4, entrada 7).

De um modo similar, foram realizados ensaios para determinar o impacto dos niveis de Composto 1 residual nos niveis de Composto 5 em SNS-595. Estes ensaios demonstraram uma correlação entre os niveis de Composto 1 nos niveis de Composto 3 e Composto 5 em SNS-595. Os resultados destes ensaios encontram-se resumidos adiante na Tabela 5 e na Figura 3.

Tabela 5: Impacto do Composto 1 residual nos níveis de Composto 5 em SNS-595 Entrada Escala Composto 1 (% área) Composto 5 (% peso) 1 0,75 kg 0,60 0,106 2 2,1 kg 0,64 0,077 3 5 kg 0,24 0,028 4 50 g 0,3 0,019 5 50 g 0,2 0,016 6 50 g 0,1 0,011 7 50 g 0,1 0,011 8 1 kg 0, 01 <0, 01

Exemplo 4: Composição farmacêutica adequada para injecção ou Infusão Intravenosa e Determinação de Partículas de Impurezas

Um exemplo ilustrativo de uma composição farmacêutica de SNS-595 adequada compreende: 10 mg de substância activa SNS-595 substancialmente pura por mL de solução aquosa de 4,5% de sorbitol que é ajustada a pH 2,5 com ácido metanossulfónico. Um protocolo para fazer uma tal solução inclui o seguinte para se obter uma apresentação de 100 mg/10 mL: 100 mg de substância SNS-595 (preparada de acordo com os métodos aqui descritos) e 450 mg de D-sorbitol são adicionados a água destilada; o volume é ajustado até um 55 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ volume de 10 mL; e o pH da solução resultante é ajustado a 2,5 com ácido metanossulfónico. A composição de SNS-595 resultante será essencialmente livre de partículas visiveis e estável.

Tal como observado, a presença de partículas em suspensão pode ser determinada utilizando qualquer técnica conveniente. Por exemplo, a presença de partículas visíveis pode ser determinada de acordo com o método descrito pela Farmacopeia Europeia 5.0, Secção 2.9.20. Especificamente, é usado um aparelho com uma estação de visualização que compreende (1) um painel preto mate de dimensões adequadas mantido em posição vertical; (2) um painel branco não reflector de dimensões adequadas mantido numa posição vertical, ao lado do painel preto; e (3) um suporte de lâmpada ajustável equipado com fonte de luz branca apropriada sombreada, e com um difusor de luz adequado (por exemplo, um iluminador de visualização contendo dois tubos fluorescentes 13 W, cada um com 525 milímetros de comprimento). A intensidade da iluminação no ponto de visão é mantida entre 2000 lux e 3750 lux. Os rótulos aderentes são removidos do recipiente. O lado exterior do recipiente é lavado e seco no exterior. O recipiente é agitado suavemente ou invertido assegurando que não são introduzidas as bolhas de ar, e o recipiente é observado durante cerca de 5 segundos em frente do painel branco para determinar a presença de partículas visíveis. O recipiente é posteriormente observado durante cerca de 5 segundos, em frente do painel preto para determinar a presença de partículas visíveis. Se forem detectadas partículas visiveis, da visualização na frente de um ou outro painel, o correspondente recipiente é rejeitado.

Além disso, pode ser usado o ensaio de contagem de partículas de obscurecimento de luz descrito na USP-NF General Chapter 788. Especificamente, é utilizado um aparelho adequado, baseado no princípio de bloqueio de luz que permite uma determinação automática do tamanho das partículas e do número de partículas de acordo com o tamanho. O aparelho é calibrado utilizando dispersões de partículas esféricas de tamanhos conhecidos entre 10 m e 25 56 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ m, USP Particle Count Reference Standard. Estas partículas convencionais são dispersas em água livre de partículas. Tomam-se precauções no sentido de evitar agregação de partículas durante a dispersão. 0 teste é realizado sob condições que limitam as partículas, por exemplo numa câmara de fluxo laminar. 0 material de vidro e equipamento de filtração utilizados são muito cuidadosamente lavados, excepto os filtros de membrana, com uma solução de detergente quente e lavados com abundantes quantidades de água para remover todos os vestígios de detergente. Imediatamente antes da utilização, o equipamento é lavado de cima para baixo, no exterior e, em seguida, no interior, com água livre de partículas.

Tomam-se precauções para não introduzir bolhas de ar na preparação a ser examinada, em especial quando as fracções da preparação estão a ser transferidas para o recipiente no qual a determinação irá ser realizada. Para verificar que o ambiente é adequado para o ensaio, que o material de vidro é devidamente limpo e que a água a ser utilizada é livre de partículas, é realizado o seguinte teste: determinar as partículas em cinco amostras de água isenta de partículas, cada uma de 5 mL, de acordo com o método adiante descrito.

Se o número de partículas de 10 m ou de tamanho superior excede 25 para os 25 mL combinados, as precauções tomadas para o ensaio não são suficientes. As etapas preparatórias são repetidas até que o ambiente, material de vidro e água sejam adequados para o teste. O conteúdo da amostra é misturado invertendo lentamente o recipiente 20 vezes de modo sucessivo. Se necessário, os vedantes são cuidadosamente removidos. As superfícies exteriores da abertura do recipiente, são limpas utilizando um jacto de água livre de partículas e a tampa é removida, evitando qualquer contaminação do conteúdo. As bolhas de gás são eliminadas por meio de medidas adequadas, tal como deixar a amostra em repouso durante 2 min ou por ultra-sons.

Para produtos parentéricos de pequeno volume inferiores a 25 mL de volume, são combinados os conteúdos de 10 ou mais unidades num recipiente limpo para obter um volume não 57 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ inferior a 25 mL; a solução a ser testada pode ser preparada por mistura dos conteúdos de um número apropriado de frascos e diluir para 25 mL com água livre de partículas ou com um solvente livre de partículas apropriado quando a água livre de partículas não for adequada. Produtos parentéricos com um volume de 25 mL ou superior podem ser testados individualmente. 0 número de espécimes a testar é de tal forma de modo a permitir uma correcta avaliação estatística. Para produtos parentéricos de grande volume ou para produtos parentéricos de pequeno volume com um volume de 2 5 mL ou superior, podem ser testadas menos de 10 unidades, com base num plano de amostragem adequado. São retiradas quatro amostras do espécime, cada uma não inferior a 5 mL, e as partículas com diâmetros iguais ou superiores a 10 m e 25 m são contabilizadas. O resultado obtido para a primeira amostra é desprezado e é calculada o número médio de partículas para a amostra.

Exemplo 5: Síntese do Composto 4

Foi adicionado Composto 1 (100 g, 1,0 eq) a uma solução de 25 g de Li0H-H20 (0,25 eq) em 625 mL de água e 125 mL de EtOH. A suspensão resultante foi misturada com agitação a 25-30°C durante a noite. A mistura reaccional foi posteriormente filtrada e lavada com 500 mL de água e 500 mL de EtOH. Os sólidos foram posteriormente secos a 50°C durante a noite in vacuo para proporcionar o Composto 4. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) : 9,95 (s, 1H) , 8,5 (d^J=8,4 Hz, 1H), 7,95 (d, J=4 Hz, 1H) , 7,88 (d, J= 3,2 Hz, 1H) , 7,46 (d, J= 8,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (125 MHz, DMSO-d6) : 193,0, 171,2, 162,0, 155, 6, 153, 7, 152, 0, 140, 9, 137, 9, 124, 4, 119, 9, 110,9, 106,4; MS: m/z 310, 308 (M + H)+. 58 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

Exemplo 6: Síntese do Composto 6

58 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ OH O

OH OH HCHO

0 Composto 4 foi colocado em 500 mL de ácido acético. A suspensão resultante foi agitada durante 15 minutos (min) à TA sob atmosfera de azoto. A suspensão foi posteriormente adicionada a um frasco de fundo redondo com 3 tubuladuras de 10 L contendo 4,5 L de solução aquosa de formaldeido a 37%. A suspensão resultante foi posteriormente agitada a 60-62°C durante a noite e arrefeceu-se a 25-30°C. A mistura reaccional foi posteriormente filtrada, e o pó branco resultante foi seco sob vácuo a 25-30°C durante a noite. O sólido foi re-suspenso em 150 mL de ácido acético e agitou-se durante 3 dias à TA. A suspensão resultante foi, em seguida, filtrada, e os sólidos foram secos in vacuo durante a noite para proporcionar o Composto 6. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) : 8,38 (d*J=8,8 Hz, 2H) , 7,97 (d, J= 3,6 Hz, 2H) , 7,89 (d, J= 3,6 Hz, 2H), 7,46 (d, J= 8 Hz, 2H) , 3,89 (s, 2H) ; MS: m/z 571, 573, 575 (M + H)+. O Composto 6 foi analisado por microscopia de luz polarizada para avaliar a sua cristalinidade e hábito cristalino. O Composto 6 aparenta ser um pó cristalino sob microscópio de luz polarizada dado apresentar uma forte birrefringência. O hábito cristalino é o de placas de 50-100 m, tal como isolado a partir de ácido acético.

Exemplo 7: Preparação de Substância SNS-595 a partir de Ácido 2,6-dicloronicotínico e N-Boc-3-pirrolina

Preparação do Composto 1 a partir de ácido 2,6-dicloro-nicotinico

Foi adicionada uma solução de carbonildiimidazole (CDI) (16,4 kg) em tetra-hidrofurano (THF) a uma suspensão de ácido 2,6-dicloronicotinico (Composto A) (16 kg) em THF. Depois de cerca de 2 horas, foram adicionados etil malonato 59 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ de potássio (Et02CCH2C02K) (19,4 kg), trietilamina (25,9 kg) e cloreto de magnésio (11,9 kg) e a reacção foi agitada durante cerca de 24 horas. A reacção foi terminada com HC1 diluído e extraída com acetato de etilo. A fase orgânica foi concentrada, lavada com uma mistura de solução aquosa de NaCl e NaHC03. A fase orgânica foi diluída com metilciclohexano e secou-se por destilação sob vácuo. A solução foi tratada com ortoformato de trietilo (17,1 kg) e anidrido acético (59 Kg) a cerca de 90 a 110°C. Após a reacção ser considerada completa, o excesso de anidrido acético foi removido por destilações com metilciclohexano. O produto em bruto foi tratado com uma solução de 2-aminotiazole (8,2 kg) em THF. Após cerca de 2 horas, a mistura reaccional foi tratada com carbonato de potássio (13,6 kg) e a mistura foi agitada durante cerca de 6 horas. 0 produto foi precipitado através da adição de água, isolou-se por filtração, lavou-se com ACN-água, ACN, e secou-se para se obter o Composto 1 (13,1 kg). 59 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ

O

1

Preparação do Composto 2 N-Boc-3-pirrolina Éster te_r-butílico de ácido (±)-3-bromo-4-hidroxi- pirrolidino-l-carboxílico_(2) (Tetrahedron Asymmetry, 12(2002) 2989-2997)

Foi adicionado N-Boc-3-pirrolina B (296 g, 1,75 moles) a uma suspensão de 1,3-dibromo-5,5-dimetil-hidantoína (270 g, 0,94 moles) em acetonitrilo (ACN, 1800 mL) e água (296 ml), mantendo a temperatura do recipiente de 0 a 10°C. Após a adição, a mistura reaccional foi aquecida até à TA e agitou-se até que a reacção fosse considerada como completa (TLC ou HPLC). A reacção foi terminada através da adição de solução a 5% de tiossulfato de sódio aquoso (600 mL) e o produto foi extraído com diclorometano (2x750 ml). A fase orgânica combinada foi lavada com água (300 mL) e salmoura (200 mL) . A fase orgânica foi seca em Na2SC>4 e concentrou-se sob pressão reduzida para se obter o Composto B o qual foi 60 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ utilizado directamente no passo seguinte. Éster_ter-but í lico_de_ácido_6-oxa-3-aza- biciclo[3.1.0]hexano-3-carboxílico (Composto D).

Uma solução aquosa de hidróxido de sódio (NaOH, 1,55 L, 2 N) foi adicionada ao Composto C (450 g, 1,69 moles) e a mistura reaccional foi agitada durante 2 horas aproximadamente à temperatura ambiente. O produto foi extraído com diclorometano (2x1,25 L) e a fase orgânica combinada foi lavada com água (2x750 mL) até pH neutro e, em seguida, secou-se em Na2S04 anidro. A evaporação sob pressão reduzida deu origem ao epóxido D (291,0 g) . Éster ter-butílico de ácido_(±) -3-hidroxi-l-4- metilamino-pirrolidino-carboxílico (Composto E).

Foi adicionada solução aquosa de metilamina (solução a 40%, 812 mL, 3,8 mole) ao epóxido D (140 g, 0,65 mole) à TA e a mistura reaccional foi agitada até terminar. O excesso de metilamina foi removido por destilação sob pressão reduzida. Foi adicionado ao resíduo obtido, éter di-isopropílico (800 mL) e a mistura foi agitada durante cerca de 30 min. O sólido foi filtrado, lavado com éter di-isopropílico (200 mL) , sendo posteriormente seco para se obter o Composto E (135 g). Éster ter-butílico de ácido (±)-3-hidroxi-4-metilamino-pirrolidino-l-carboxílico, (Composto E) , a partir do Composto C.

Dez gramas (10 g) de bromohidrina (Composto C) foram tratadas com metilamina aquosa a 40% (50 mL) e bicarbonato de sódio (3,1 g) à TA para se obter o Composto E (8,5 g).

Resolução de éster ter-butílico de ácido (±)-3-hidroxi-4-metilamino-pirrolidino-l-carboxílico, utilizando ácido L-(-)-málico. O aminoálcool (Composto E) (100 g, 0,46 moles) foi dissolvido numa mistura de acetona (600 mL) e água (13 mL) à TA. A mistura reaccional foi aquecida até cerca de 40°C e foi adicionado ácido L-(-)-málico (62 g, 0,48 mole). A mistura foi aquecida a cerca de 50 a 55°C para formar uma solução límpida e, foi posteriormente arrefecida gradualmente até à temperatura ambiente e, em seguida, para 61 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ 5 a 10°C. Os cristais formados foram filtrados, lavados com acetona (2x70 mL) , e secou-se sob pressão reduzida para se obter o sal malato F (60 g, 37%) com pureza por HPLC quiral na proporção de enantiómeros S em relação R de (S: R) = 100:0.

Foi analisada uma pequena amostra em relação à pureza enantiomérica por conversão no Composto G e analisando-se o Composto G resultante por HPLC quiral (Chiracel OD-H SC\522; fase móvel: hexano:IPA 95:5, 1 mL/min). O tempo de retenção para o enantiómero S é 7,725 min.

Resolução de Éster ter-butílico de ácido (±)-3-hidroxi-4-metilamino-pirrolidino-l-carboxílico, utilizando ácido (L)-(-)-piroglutâmico. A resolução do Composto E com ácido (L)-(-)-piroglutâmico (3,58 g) em acetona (120 mL) e água (4 mL) deu origem ao sal piroglutamato (5,7 g) . A cristalização em acetona-água deu origem a 4,2 g do sal PGA com 94:6 de proporção de diastereómeros. Uma recristalização adicional em acetona-água deu origem ao sal PGA diastereomericamente puro (2,3 g, >99% ed).

Preparação de Éster ter-butílico de ácido 3-(ter-butoxicarbonil-metil-amino)-4-hidroxi-pirrolidino-l-carboxílico (Composto G) a partir de sal de ácido L-(-)-málico (Composto F). A uma mistura de Composto F (57 g, 0,16 moles) em metanol (MeOH, 220 mL) , foi adicionado K2CO3 (68,0 g, 0,49 moles) à temperatura ambiente. Anidrido de Boc (40 g, 0,18 moles) foi adicionado gota a gota à mistura reaccional durante cerca de 1 hora e a mistura reaccional foi agitada até a reacção estar completa (cerca de 2 horas). O metanol foi destilado sob pressão reduzida a cerca de 55 a 60°C, foi adicionada água (150 ml) à mistura reaccional e o produto foi extraído com metil ter-butil-éter (MTBE, 2x150 ml) . A fase orgânica combinada foi lavada com água (200 mL) e salmoura (100 ml), e posteriormente secou-se em Na2SC>4 anidro. A concentração sob pressão reduzida deu origem ao Composto G sob a forma de sólido branco (52 g). 62 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ Éster ter-butílico de ácido 3-(ter-butoxicarbonil-metil-amino)-4-metoxi-pirrolidino-l-carboxílico (Composto H).

Uma suspensão do Composto G (52 g, 0,16 mole) em THF (150 mL) foi agitada à TA durante cerca de 30 min e arrefeceu-se até -10 a -15°C. Foi adicionada lentamente uma solução de hexametildisililamida de potássio (KHMDS, 40 solução em THF, 144 mL, 0,256 mole) enquanto se controlava a temperatura entre -5 e -15°C. Após 15 min, foi adicionado gota a gota sulfato de dimetilo (18,7 mL, 1,20 mole) à mistura reaccional enquanto se mantinha a temperatura entre -10 e 0°C, e a mistura reaccional resultante foi posteriormente agitada a esta temperatura durante cerca de 30 min. A reacção foi terminada por meio da adição de água (100 ml), seguido de ácido acético (50 mL). O produto foi extraído com metil ter—butil-éter (2x150 ml) . A fase orgânica combinada foi lavada com água (100 mL) , salmoura (50 mL) e secou-se em Na2SC>4 anidro. A evaporação sob pressão reduzida deu origem ao Composto H sob a forma de óleo (54 g). (+) -(4-Metoxi-pirrolidin-3-il)-metil-amina (Composto 2), preparado utilizando o ácido p-toluenossulfónico (2;1). A uma solução do Composto H (54,0 g, 0,163 moles) em THF (180 mL) e MeOH (90 mL) , foi adicionado ácido p-toluenossulfónico monohidratado (84 g, 0,442 moles) e a mistura reaccional foi aquecida a 55-60°C durante cerca de 5 horas, altura em que a desprotecção estava completa. Depois de arrefecer até cerca de 40-45°C, foram adicionados 0,2 g de cristais de sementeira do Composto 2 à mistura reaccional, resultando em cristalização imediata. A suspensão foi mantida a 40-45°C durante cerca de 30 minutos e, em seguida, arrefecida gradualmente até 0 -5°C. Após agitação durante 2 horas a 0 -5°C, os sólidos foram filtrados, lavados com THF (2x50 mL) , e secou-se para se obter o sal de tosilato do Composto 2 sob a forma de sólido branco (66 g) com pureza por HPLC = 98,9%.

As condições de HPLC foram as seguintes: Coluna:

Chiralcel AD - H, SC\523; fase móvel: Heptano: IPA (0,5% TFA) = 85:15; fluxo: 1,0 mL/min, e tempo de execução: 20 min. O Composto 2 apresenta o tempo de retenção de 12,66 min. O excesso enantiomérico deste material foi superior a 99% ee. 63 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ 9 Bce Β OH Br 0 * t>l£y _1 9 N Boc D OH HíBoíAt· ΟΗ ΟΗ ΗΗΜβ

8οο (*) £ 9 Boc

OOC V-OH CO-jH - 9

Boc Oíóe, NíBocjMs 0

N BOC

NHMe • 2 TsOH

G

Preparação de substância SNS-595 por meio de reprocessamento A uma suspensão do Composto 2 (8,0 kg) em ACN a cerca de 5°C, é adicionado DIPEA (8,7 kg) . Após cerca de 15 min, é adicionado Composto 1 (5,0 kg) à mistura reaccional. A mistura reaccional é aquecida até cerca de 45°C durante cerca de 3 horas, arrefecida e o produto filtrado. O bolo de filtração é lavado com ACN e seco para se obter o Composto 3. A uma solução de NaOH (0,8 kg) em água (19,5 kg), são adicionados Composto 3 e EtOH (0,5 kg). A mistura reaccional é filtrada e o filtrado acidificado até pH 7,3-7,7 por adição de ácido acético. A mistura é posteriormente aquecida a cerca de 55-65°C durante cerca de 2 horas. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reaccional é filtrada e lavada com água e, em seguida, com EtOH. 0 bolo de filtração é seco sob vácuo. O produto em bruto é dissolvido em EtOH a cerca de 80°C. Após arrefecimento, o produto é filtrado, lavado com EtOH e seco para se obter uma mistura de SNS-595.

De seguida, a uma solução de NaOH (0,2 kg) em água (4,8 kg) , são adicionados a mistura de SNS-595 obtida anteriormente (1,49 kg) e EtOH (0,13 kg). A mistura reaccional é filtrada e o filtrado acidificado a pH 7,3-7,7 por adição de ácido acético aquoso (preparado a partir de 0,9 kg de ácido acético e 2,9 kg de água). A mistura é posteriormente aquecida a cerca de 55-65°C durante cerca de 2 horas. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reaccional é filtrada e lavada com água e, em seguida, com EtOH. O bolo de filtração é seco sob vácuo. O produto em bruto é dissolvido em EtOH a cerca de 80°C. Após 64 ΕΡ 2 473 507/ΡΤ arrefecimento, ο produto é filtrado, lavado com EtOH e seco para se obter uma substância SNS-595.

Preparação do substância SNS-595 via N,N-diisopropil-etilamina húmida. A uma suspensão de Composto 2 em acetonitrilo (ACN; 10 L) , foram adicionados di-isopropiletilamina (DIPEA, 4 L) e água (0,5 L). Foram adicionados à solução, Composto 1 (1 kg) e acetonitrilo (1 L) e a mistura reaccional foi agitada durante cerca de 12 horas à TA. A mistura reaccional foi, em seguida, aquecida até cerca de 45°C durante cerca de 2-6 horas. Após arrefecimento, o produto foi filtrado, lavado com ACN (4 L) e seco sob vácuo para se obter o Composto 3 (1,1 kg). A análise por HPLC mostrou que este material continha <0,1% de Composto 1. A uma solução de NaOH (0,135 kg) em água (3,3 L), são adicionados Composto 3 substancialmente puro e EtOH. Após a hidrólise estar completa, a mistura reaccional foi filtrada e o filtrado foi acidificado a pH 7,3-7,7 por adição de ácido acético aquoso. A mistura foi posteriormente aquecida a cerca de 55-65°C durante cerca de 2 horas. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reaccional foi filtrada e lavada com água e, em seguida, com EtOH. 0 bolo de filtração é seco sob vácuo. 0 produto bruto foi suspenso em EtOH a cerca de 80°C. Após arrefecimento, o produto foi filtrado, lavado com EtOH, e seco para se obter uma substância SNS-595 (0,66 kg).

Lisboa, 2014-05-12

Claims (8)

1. ΕΡ 2 473 507/ΡΤ 1/3 REIVINDICAÇÕES 1. Processo para a preparação de uma substância SNS-595, compreendendo: (a) fazer reagir o Composto 3

   com uma primeira base aquosa, seguido de neutralização para se obter um hidrato de SNS-595 preliminar; (b) desidratar o hidrato de SNS-595 preliminar do passo (a), e fazer reagir o produto desidratado com uma segunda base aquosa, seguido de neutralização para se obter um hidrato de SNS-595 secundário; e (c) desidratar o hidrato de SNS-595 secundário obtido no passo (b) para se obter a substância SNS-595.
2. 2. Processo da reivindicação 1, em que a primeira e segunda base aquosa são seleccionadas de entre hidróxido de potássio, hidróxido de sódio e hidróxido de lítio; as neutralizações dos passos (a) e (b) são realizadas com ácido acético; e as desidratações dos passos (b) e (c) são realizadas com etanol.
3. 3. Processo da reivindicação 2, em que a primeira e a segunda base aquosa são hidróxido de sódio.
4. 4. Processo de qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que a substância SNS-595 obtida no passo (c) compreende 0 a 0,01% de Composto 4: OH O

   com base no peso total da substância SNS-595. ΕΡ 2 473 507/ΡΤ 2/3
5. 5. Processo de qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que a substância SNS-595 obtida no passo (c) compreende 0 a 0,02% de Composto 5:

   ΌΗ N S^N \=/ ci com base no peso total da substância SNS-595.
6. 6. Processo de qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que a substância SNS-595 obtida no passo (c) compreende 0 a 0,1% de Composto 7:

   com base no peso total da substância SNS-595.
7. 7. Processo da reivindicação 1, em que o Composto 3 é obtido por reacção do Composto 1

   1 com o Composto 2 MeO, NHMe 2 TsOH 2. ΕΡ 2 473 507/ΡΤ 3/3
8. 8. Processo da reivindicação 1, que compreende: (a) fazer reagir o Composto 1 C02Et XlV' \=J 1 com o Composto 2 l ΝΗΓ O MeQ, .NHMe ' 2 TsOH na presença de DIPEA e água para se obter o Composto 3

   3; (b) fazer reagir o Composto 3 com uma primeira base aquosa, seguido de neutralização para se obter um hidrato de SNS-595 preliminar; (c) desidratar o hidrato de SNS-595 preliminar obtido no passo (b) para formar uma substância SNS-595; (d) fazer reagir a substância SNS-595 do passo (c) com uma segunda base aquosa seguido de neutralização para se obter um hidrato de SNS-595 secundário; e (e) desidratar o hidrato de SNS-595 secundário obtido no passo (d) para obter substância SNS-595. Lisboa, 2014-05-12