PT2470228T - Métodos e dispositivos para transplante celular - Google Patents

Description

DSSSRIÇ&D

3SÉT0D0S 1 DISPOSITIVOS RARA TRANSPLANTS CRLDIAR A presente divulgação está relacionada com o campo da terapia celular e, mais -especificamenfce, com métodos e dispositivos para transplante de células para um corpo hospedeiro.

As descobertas recentes no campo da terapia celular apresentam novas oportunidades para o uso de transplantes celulares em áreas de doenças com necessidades médicas criticas e não atendidas. Atualmente, não hâ terapias medicamentosas totalmente eficazes para muitas condições de doença adquiridas e congénitas, como diabetes ou doença de Parkinson, que são causadas por perda ou dano a células que produzem biomoléculas necessárias para o controlo de funções fisiológicas.. A terapia celular mantém a promessa de substituir células perdidas ou danificadas por células doadoras ou células estaminais para melhorar as funções fisiológicas prejadiçadas. Por exemplo, o transplante de ilhetas de células de Langerhans proporcionaria um meio de restaurar o controlo de carboidratos em pacientes com diabetes insulinodependente. Similarmente, o transplante de neuronics dopaminérgicos ou células estaminais: neurais surgiu como uma terapia promissora, baseada em células para a doença de Parkinson.

Principais fatores limitantes na aplicação da terapia celular é a dificuldade em transplantar células para o tecido hospedeiro e garantir que as células transplantadas continuem a funcionar sem provocar uma resposta imune ou causar outros efeitos colaterais nocivos no hospedeiro. Tentativas foram feitas para administrar células terapêuticas diretamente no organismo hospedeiro, por exemplo, no sistema vascular ou por implantação em um órgão ou tecido. No entanto, com o transplants celular direto, o paciente deve permanecer em terapia imunossupressora ao longo da vida a os medicamentos imunosaupressores poder?; causar toxicidade para o hospedeiro e. as células .1. mp I a n t a d a s, Além disso., a exposição direta das células ao sangue pode levar a uma reação inflamatória imediata mediada pelo sangue (IBMIR). que inicia uma cascata de coagulação e pode destruir uma parte significativa das células transplantadas„

Outra abordagem terapêutica é a entrega de células usando dispositivos que fornecem. ura ambiente biologicamente adequado para que as células residam .no corpo hospedeiro. Ds principais desafios com esta abordagem, são a má incorporação de vasos sanguíneos no dispositivo para alimentar as células e manter um ótimo ambiente dentro do dispositivo para a sobrevivência a longo prazo das células. fía ausência de um ambiente imediatamente vascularizado, as células transplantadas não conseguem obter oxigénio suficiente ou facilmente eliminar resíduos e podem morrer ou se tornarem danificadas rapidamente através dos efeitos da isquemia ou hipoxia. Além disso, mesmo em situações em que alguns vasos crescem no início, os vasos podem não ser sustentados. Além disso, a cascata inflamatória natural d.c corpo também pode resultar na morte ou danos às células. Algumas das outras dificuldades encontradas cora esta abordagem incluem cicatrizaçáo excessiva e/ou remoção do dispositivo, incompatibilidade do material do dispositivo com o meio biológico, dificuldades em imaginar o dispositivo e o ambiente de implantação, dimensões impróprias do dispositivo que afetam a função biológica de as células, incapacidade de carregar o numero apropriado de células para um efeito terapêutico sustentado e dificuldade em remover o dispositivo quando precisa ser substituído. Além disso, a configuração do dispositivo pods não ser acessível aos contornos externos do corpo, o que pode resultar em. protrusõea anormais do dispositivo tornando o dispositivo inaceitável para o paciente sob uma perspetiva estética, A WO 93/08850 Al descreve implantes poliméricos pré vascular!radas para transplante de órgãos. Em particular, a WO 93/08850 Al descreve implantes que se degradam a uma taxa controlada ao longo de um período de tempo em que a matriz biodegradável. 1 M lli liilliiii :ίί|ϊ|^^;^'3?ρτΐ?·|ρ·· : Nintendo células para ser inserido em um hospedeiro. 0 dispositivo possuí um limite poroso em que o tamanho do poro é suficiente para isolar as células do tecido do implante da resposta imune do hospedeiro e em que o tamanho do poro bloqueia a entrada das estruturas vasculares do hospedeiro.

Assim, continua a existir a necessidade de encontrar uma técnica eficaz para o transplante bem sucedido de células terapêuticas. A presente divulgação fornece métodos e dispositivos para entregar e manter células in vivo durante um período de tempo prolongado, ao mesmo tempo em que alivia muitos dos problemas associados às abordagens existentes de terapia celular baseada era dispositivo. .aipélll ,dil!!!||^ invenção é proporcionado um !Í!Í!Í!Í!Í!Í!ltll|bM^ ^dilllliéiuiáS' ηηκί||||:|||ίΐ|| hospedeiro. O dispositivo para implantar células num corpo hospedeiro compreender uma estrutura porosa, compreendendo, lllllllpéii:::: B&0& ;uíftállii:lieí|||ilade ptcximai. lélliiil extremidade distai, tendo a estrutura porosa poros dimensionados para facilitar o crescimento de tecidos mê:|d:s|l|úma câmara í eç· "pêl©· menos, uma ficha removível configurada para ser posicionada dentro de, pelo menos, uma cansara; em que a estrutura porosa compreende uma malha de polipropileno.

Outra forma de realização da presente descrição é m dispositivo para implantar células num corpo hospedeiro, em III o 'i;Íiiél|p:Si:te 'dmalllÉisP:|'ÍtÍ:P porosa guel|||||||||||| compreende uma ou mais câmaras que tem uma extremidade proximal e 'ima extremidade distai, e uma abertura em uma ou ambas a extremidade proximal e extremidade distal, A estrutura porosa compreende os poros dimensionados para facilitar o crescimento de tecidos vasculares e conjuntivos em uma ou mais câmaras, 0 dispositivo também compreende um ou mais sistemas de. dois conectares que compreendem uma ficha externa configurada para ser posicionado dentro de uma ou mais câmaras, e uma ficha interna, configurada para ser posicionado dentro da ficha externa. Além disse, o dispositivo compreende, peio menos, uma vedação configurada para encerrar o sistema de encaixe na câmara e encerrar a abertura em uma ου ambas as extremidades pro.xi.ma.is e a extremidade distai da câmara.

Noutro aspeto da presente descrição, é descrito um método de transplante de células num corpo hospedeiro. 0 método compreende as etapas de implantar um dispositive para manter células no corpo hospedeiro, em que o dispositivo compreende :i|fi! iiiipta petosa :qtld |i|í^réénié:|: :pí©:l-,p-' que tem uma extremidade proximal a uma extremidade distai. O estrutura poroso compreende uma malha com poros dimensionados para facilitar o crescírnentc de tecidos II 'viiiipuláMil :&mf péli|: :áiésdéi|||||i| lp|||||||||||| algumas formas de realização, a estrutura porosa compreende uma malha de poiipropileno, 0 dispositivo compreende ainda, llpéllq íméhbs*. pipé abr ,.||§|§:ipi§f^ !!!!!!!!!!!: d.s, pelo menos, uma câmara, e a menor uma câmara compreende uma abertura em uma ou ambas a extremidade proximal e a extremidade distal. Q método compreende as etapas de fechar |a. liljaertura em uma ou ambas as extremidades proximals e a extremidade distai da câmara após a implantação dispositivo. 0 método compreende ainda a manutenção do dispositivo no corpo hospedeiro até a estrutura porosa ser infiltrada com tecidos vasculares e conjuntivos* aceder ao dispositivo através de uma incisão cirúrgica, reabrindo uma ou amha.s a extremidade proximal e a extremidade distai ds câmara, extraindo a ficha da câmara para criar um espaço dentro da estrutura porosa que ê encapsulada na matriz de colagénio vascularizado, fornecendo uma preparação de células no espaço vascularizado e fechando a abertura em. uma ou ambas as extremidades proximaís e & extremidade distai da câmara ·*·

Numa outra forma de realização alternativa, é proporcionado um dispositivo para utilização num método de implantação de células num corpo hospedeiro compreendendo os passos de; (a) proporcionar um dispositivo implantâvel para manter células no corpo hospedeiro, compreendendo o dispositivo implantâvel uma estrutura porosa que compreende, peio menos, uma câmara tendo uma abertura era uma ou em ambas irra extremidade proximal, e uma extremidade distai da câmara, a estrutura porosa tendo poros dimensionados para facilitar o crescimento de tecidos vasculares e conjuntivos na estrutura porosa, pelo menos, um sistema de dois conectores configurado para ser posicionado dentre da estrutura porosa; peio menos, um sistema d® dois conectores configurado para ser í!!!!!!!!!||l!l! pilélii uma umal!!!!!!!!!!!;í vedação configurada para encerrar a abertura em una ôu ambas as extremidades proximal e distai de, pelo menos, uma câmara; em que, pelo menos, um sistema, de dois conectores compreende uma ficha externa configurada para ser posicionada dentro de, pelo menos, uma câmara e uma ficha interna configurada para ser posicionada dentro do tampão exterior; (b) implantação do dispositivo no corpo hospedeiro; íe) manter o dispositivo no corpo do hospedeiro até que o dispositivo seja infiltrado com tecidos vasculares e conjuntivos; ξά) proporcionar um dispositivo de administração de células que compreende,- pelo menos, um tubo de infusão de células carregado com uma preparação de células# o tubo de infusão de células configurado para ser posicionado dentro da ficha externa; (e) acesso ao dispositivo implantado através de uma incisão cirúrgica e abertura de# pelo menos# uma vedação; {f) retirar a ficha interna do sistema de duas derivações; Cg} inserir o tubo de infusão celular na ficha externa·; (h) retirar o tampão exterior da# pelo menos# uma câmara a# simultaneamente# infundir a câmara com a preparação celular; e (i) reiigar# pelo menos# uxn seio. Deve ser entendido que tanto a descrição geral anterior como a descrição detalhada a seguir são exemplificativas e apenas explicativas e não são restritivas da invenção# conforme reivindicado.

Outro aspeto da divulgação proporciona um dispositivo de transplante celular que compreende uma estrutura poroso com poros dimensionados para facilitar o crescimento de tecidos vasculares e. conjuntivos na estrutura porosa compreendendo# pelo menos# uma câmara e de preferência entre 2~12 câmaras# em que a estrutura porosa è revestida com um material biodegradável biocompatível# projetado para preencher temporariamente os poros da estrutura. Em certas formas de realização# a estrutura porosa compreende uma malha de polipropileno. Materiais biodeompat i ve is e biodegradáveis adequados incluem# por exemplo# eolagénio# fibroneôtina, proteínas da matriz extracelular e proteínas do citoesqueleto da membrana. A divulgação também proporciona um método para, transplantar células para um corpo hospedeiro compreendendo a implantação de um dispositivo de transplante que compreende uma estrutura porosa com poros dimensionados para facilitar o crescimento de tecidos vasculares e lllcpljíiitlvoilliâ eiiiiliilâ diá, cbr^réiidenbó:# !§§|:1ο- ,t®hp;||||P::'' uma câmara e de preferência entre 2-12 câmaras# em que. a estrutura porosa é revestida cora -ura material biodegradável e biodegradável que preenche temporariamente os poros da estrutura, e em que, pelo menos, uma câmara ê preenchida com as células a serem transplantadas e a câmara é selada.

Os desenhos anexos, que são incorporados e constituem parte desta especificação# juntamente com a descrição, ilustram métodos e formas de realização da invenção.

Breve descrição dos desenhos

As FIGS. 1A---1B ilustram várias formas, de realização de um dispositivo de transplante de células de câmara única consistente com a presente descrição; A FIG. 1F ilustra uma forma de realização de um dispositivo de transplante de células de câmara múltipla consistente com ................................. a presente........divulgação;

As FIGS, 2A-2D ilustram várias configurações de malha que podem ser utilizadas para formar um dispositivo de transplante de células consistente com a presente R FIG. 3Ά ilustra um dispositivo de transplante celular de acordo com uma forma de realização, da presente descrição; A FIG. 33 ilustra os componentes do dispositivo de transplante celular da FIG. IA; ;â, EÍ;G«l:lljli|:ÚStfa umá: : 1:;;|e.|| transplante celular consistente com uma forma de realização da presente descrição; Ά FIG. 5A ilustra, uma vedação da um dispositivo de transplante celular consistente com uma forma de realização da presente divulgação?: A FIG. SB é uma vista am corte da vedação mostrada na I! :Fi|||;|A/ III ^1¾% fs lId|f§S: da ficha em dues partes de am dispositivo de transplante de células consistente com uma forma de realisação da presente divulgação; A: FIG» 6B é uma vista .era: corte de ura· tempão exterior ilustrado na FIS:» 5A; Λ FIG. 6C é uma vista era corte transversal de um sistema de encaixe e um único conjunto de estrutura porosa antes da impiantaçã© em um corpo hospedeiro; A FIG. 60 é uma vista era. corte do conjunto ilustrado na FIG* 4€ após .incudação em ura organismo· hospedeiro; A. FIG. 6£ é uma vista era corte transversal de uma estrutura porosa implantada em ura. corpo hospedeiro após a remoção do sistema de encaixe; A FIG* 7 ilustra múltiplas fichas internas de um sistema de ficha de duas partes de ura dispositivo de transplante de células consistente cora uma. forma de realização da presente divulgação;

Jlllll' E :FÍiÍ||ll: : 111¾ For: gue lend|||:||:pei§ias deillplllllllís de uma câmara vascularísada de um dispositivo de transplante de células consistente com uma. forma de realização da presenfea divulgação; A FIG, 9A ilustra um dispositivo para fornecer células a um .illlllliyilppâitlii :d$:;i||ÍlÉ&^ :I||§|ã de realização da presente divulgação; A FIG, SB mostra um mecanismo de infusão celular do dispositivo de distribuição ilustrado na FXG. S&; A fig, 9C mostra passos adicionais do mecanismo de infusão de células do dispositivo de distribuição ilustrado nas FIGS* SMB; A FIG, 10 é um fluxograma que mostra os passes de um método de transplante celular de acordo com a presente divulgação, ! Jp'iGll :IlJ|:||iliodll:|il!iã: :v||;l!!p:tai!ii 11 etapas de um procedimento de infusão celular de acordo eom: a presente divulgação.; A FIG, 12A mostra gráficos de linhas de medições de glucose no sangue após implantação intraperitoneal de dispositivos d.e transplante de células, como descrito no Exemplo 1; A FIG. 12B mostra gráficos de linhas de medições de glucose no sangue após implantação subcutânea de diapositivos de | lÉéhiif ItO: nd Exemplo |||: 1 |A 1.2:θ1;β|:ΐϊ®ή Jfl;? liff£S|,S de ..féápditah dé Jifiiiil | em ratos Lewis transplantados com células de ilhetas aos 40 dias pós-transplanta, 80 dias pos-transplante e remoção pós~ dispositivo (a.os 110 dias pôs-transplante), como descrito no A FIG. 12D mostra gráficos de linha de níveis de insulina em resposta a desafio de glucose em ratos Lewis transplantados com células de IIhotas, como descrito no Exemplo 1? A FIG. 13A demonstra a coloração histológica da insulina dentro da câmara de um dispositivo implantado, como descrito no Exemplo 2; A FIG. 13® demons tr.a a coloração histológica da vascularização {micrgvasculatura) dentx'o da câmara de uxn dispositivo implantado? como descrito no Exemplo 2; A FIG. 14 ê a tabela da espessura média do eol&génio e dos vasos sanguíneos totais/cm2 calculada para dispositivos d.e transplantação de células consistentes com quatro formas de realização da presente descrição? como descrito no Exemplo llll ......3|:: A FIG, ISA demonstra a incorporação de tecido num dispositivo de transplante de células a 2? 4 e 8 semanas após a implantação? como descrito no Exemplo 3?“ A FIG. 15B mostra formação de vasos sanguíneos a várias margens da um dispositivo implantado antes do transplante celular? como descrito no Exemplo 3; A FIG. 15 mostra gráficos em barras de níveis de insulina produzidos por ilhetas maduras e imaturas? como descrito no Exemplo 4; A FIG» 17A demonstra a coloração histológica de insulina e mícrovaseulatura dentro da câmara de um dispositivo implantado? como descrito no Exemplo 4ç A FIG» 17B demonstra a coloração histológica da mícrovaseulatura dentro da câmara de um dispositivo implantado após o transplante de células? çomo descrito no Exemplo 4; A FIG. 18 mostra gráficos de linha de níveis de glucose no sangue após o transplante de autoenxerto de ilhotas? como descrito no Exemplo 4·; A FIG- ISA mostra gráficos de linha de níveis absolutos de glicose no sangue em resposta, ao desafio da glicose em. porcos

Yorkshire-Landrace transplantados com células de ilhotes, | IdPiio; bêsiçxatq ·η$||||§|ί^ A FIG. 19B mostra gráficos de barras de Área Sob a Curva (AUC) para níveis de glicose no sangue em resposta ao desafio de glicose em porcos Yorkshire-Landrace transplantados com | ''ielnlâá de 4 l.&dÍÉ|§|il :hb: ;Sbemplíd: 4:/: ||| A FIG. 13C mostra gráficos de linha de mudança de dobra nos niveis de peptideo C em resposta ao desafio da glicose em porcos Yor.kshire-Landrace transplantados com células de iip.ff§:òlâs:,· bom© ^ddliiillliilliiébpid· é lllllllllli

Descrição das formas de realização exemplares A referência será agora feita em detalhes nas formas de realização desta descrição, exemplos dos quais estão os desenhos anexos. Sempre que possível, os mesmos números de referência serão utilizados era todos os desenhos para se referir às mesmas ou a partes similares. Ao longo da divulgação, os termos infusão de células e transplante de células são utilizados de forma intercambiável,

Dispositivo de transplante celular para conter células terapêuticas ín vivo é fornecido. Numa forma de realização exemplar, o dispositivo de transplante celular compreende, pelo menos, uma estrutura porosa que compreende uma câmara no mesmo e que tem uma. abertura em uma ou ambas uma extremidade proximal e uma extremidade distai da estrutura e, pelo .menos, uma ficha configurada para ser alojada na câmara. A abertura em uma ou ambas as extremidades da câmara são dimensionadas para permitir a inserção e retração do tampão da câmara. Numa forma de realização, pelo menos, uma estrutura porosa tem forma tubular e, pelo menos, uma estrutura porosa que compreende uma câmara no mesmo e que tem uma abertura em uma ou ambas as extremidades proximals e cana extremidade distar da estrutura e, pelo menos, am tampão configurado para ser alojado na câmara. A abertura em uma ou ambas as extremidades da câmara são dimensionadas para permitir a inserção e retração do tampão da câmara, Numa forma de realização·# pelo menos, uma estrutura porosa tem forma tubular e> pelo menos, um tampão ê cilíndrico e se prolonga ao longo de um lúmen de, pelo menos, uma estrutura porosa. Em algumas formas de realização, a estrutura porosa está aberta apenas na extremidade proximal,. Hums tal forma tí.e realização, a extremidade distai da estrutura tubular porosa compreende uma superfície arredondada ou de fundo plano. Noutra forma de realização, os bordos na extremidade distai da estrutura porosa são afanilados a colocados em contacto um com o outro para selar a extremidade distai.

Noutra forma de realização exemplar, o dispositivo de transplante celular compreende uma. estrutura, porosa que compreende uma ou mais câmaras que têm uma extremidade proximal e uma extremidade distai. As uma ou mais câmaras compreendem uma abertura na extremidade proximal, 0 dispositivo também compreende um ou mais sistemas de ficha que compreendem um conectar externo configurado para ser posicionado dentro de uma ou mais câmaras, e: uma ficha interna configurada para ser posicionada dentro do tampão exterior, Além disso, o dispositivo compreende, pelo menos, uma vedação configurada para encerrar o sistema de encaixe dentro da. câmara e selar a abertura na extresd.da.de proximal da câmara, A estrutura porosa ê formada por um material biocompatlvel que deve provocar apenas uma resposta inflamatória leve no corpo. Os componentes inflamatórios leves estimulam a angíogénese e promovem a incorporação de uma matriz de colagénio vascular!zada no dispositivo, mas não resultam em. inflamação significativa ao redor do dispositivo. Um exemplo

de um material tão biooompativel é o poli p r op í 1 e η o« De acordo com a invenção, a estrutura porosa compreende ama malha de polipropileno tecida que possui rigidez suficiente para III £:ad:i:|di:i:l:| a||||||pfct:Í;Í;Ípad ..¾ Iliipilla i§é'|: I polípropileno também é selecionada para permitir que míerovasos entre® no dispositivo e sejam mantidos como vasos robustos e saudáveis, o que é critico para a sobrevivência e o funcionamento normal das células terapêuticas .infundidas llip dllllidiiillvc::»

Ao encorajar o crescimento regulado do tecido vascuiariradc no dispositivo, a estrutura porosa impede o encapsulamento do dispositivo cora tecido cicatricial. Os tecidos engarrafados também estabilizam, o implante e evitam o movimento inadvertido do dispositivo In situ. Além diaao, em |||igHma:i|:|dÍ|í|s'· ||p red|:f iá|i|b,|i| | com agentes biológicos ou não biológicos para estimular a incorporação de tecido e o fator de crescimento), NRP-l (neuropilina-1) , Ang~l, Ang2 (angioporetina 1,2), IGF'-3, endoglín, MCP-1, «νβ3, «:v8S., CD-31, VE-caderina, efrina, ativadorea de plasminogénio, angiogenina, De 1.-.1., aFGF (fator de crescimento de fibroblaato ácido), vFGF (fator de crescimento de fibroblastos básico), folicatina, G (Fator de crescimento de hepatócitos), XI-8 (interleucina-8), leptína, midquina,: factor de crescimento placentário, FD-ECGF, progranulína, proliferação, TGF-σ e TNF-ot.

Em algumas formas de realização, a superfície externa da estrutura porosa é rugosa para estimular a entrada de tecido. Em certas formas de realização, a estrutura porosa inclui varies revestimentos poliméricos eluentes de fármaco. Em outras formas de realização, a estrutura potosa pode ser revestida com- um polímero biodegradável ou não biodegradável sem. um medicamento. A estrutura pode ser pareiaimente ou compietamente revestida com o polímero. Os polímeros representativos que podem ser utilizados para o | elol} M ::il:i;:ipap· dÍf>:Í estão limitados a; polímeros de metacrilato, po.líetíleno-imina e sulfato de dextrano, poli (vínilsíloxano) ecopo.limerepo.li etile.noim.in.a, fosforilcolina, poli (metacrilato de etilo), poliuretano, poli (etilenoglicol ), poli (ácido láotico-glicólico}, hidroxicapetato, poli (ácido láctico}, políhidroxigenada e oopollmeros , II... ::©11ί. sòpo|ii||i:r:0%· ||||||||*olioapp^ (aminoácidos), poli (ortoésteres) , poliésteres, colagènío, gelatina, polímeros de celulose#· quitosanas e alginates ou suas combinações.. Exemplos adicionais que podem ser III ·ρ1ί(11(Κ^«ίθ0;· feiiá r-(((^11 l.fib§í§btb III·® iMʧ§MpÊÊ; % limitados a: colagénio, fihronectina, proteicas da matriz extracelular, vinculina, ágar e agarose. Deve entender-se que podem ser utilizadas várias misturas dos polímeros.

Com respeito â eiuição de fãrmaco, em algumas formas de realização ilustrativas, a estrutura porosa incluí um revestimento antibiótico para minimizar infeções. Os antibióticos representativos incluem, mas não estão limitados a? sapíeilina, tetraciclina, nafcillna, oxacilina, cloxacilina, dicloxacillina, f lucloxacillina, vancoraicína, kanamicína, gentamioina, estreptomicina, elindamieina, tr imetoprim saltametoxazol, linezólido, teieoplanína# e ri t r om i c i n a, c ip r o f 1 ox a o i n ã, r .1 r. a.mp i c i n &, pen ie i 1 in a, amoxicilína , sulfonamides, ácido nalidíxico, norfloxacina, ciprofloxacina, ofloxacina, sparfloxacina, iomefloxasina# fleroxacina, pefloxacina, ami f loxacina, 5-f luoronraci.lo, ||||||iÍ||lilÍ|IÍ|:||||||||||pi|||:|(|;|Í;b;||||||||||^ novobiocins, nitroimadasole, Noutra forma de realização, a estrutura porosa inclui um agente bactericída. Os agentes bactericidas representativos incluem, mas não estão limitados as cloreto de benzalcónío, gluconato de clorohexidina, ácido sórbico e seu sal, tisne rosal, clorofcutanol, álcool fenetilico e p ~ h í d r o x i b e n zoato. : ::ΜϊΤΐ':i:i:i:iliií^lUt*· btaFf&dMv$|||i de transplante celular são revestidas cor; f&rmaeos antifibrótieos para inibir o encapsulamento do tecllill fibroso» Os agentes antifibrótieos .representativos incluem, mas não estão limitados a: pacilcaxel, eve.ro Iímus, tacrolimus, rspamícina, hidrobroae to de halofuginona, c o-job r e ta statin a e análogos e seus derivados (tais como eombretasLatina A-I, A~2, A~3, A~4, Ά--5 A-6, B-l, B~2f 3~3, B~4, D~l, D--2 a toe fato de combretastatina A-4 (Oxigene}), docetaxel, vfnbiastina, vincristína, sulfato de vincristina, vindes! na e vinore.lbina, carapotetecína topetecana,

Irinbtecidil............iieÉiliiiíidb1 :dd:l!: tenipési^ill dntracaiai4|pd:|!ll ϊίϊίϊίϊί^ :£3;χ : |l|iidcincmi:ici|ta &||| olivomicina A, eromomicina A 3, e plicamicina, mstotrexato, edatrexato, trinetrexato, raltitrexed, piritrexim, denopterina, tomudex, pte.ropteri.ua e seus derivados e seus análogos. Em algumas formas de realização, o dispositivo de transplante de células também pode incluir metacrilato de pel .1 me ti Ια ou cimento ósseo ou outros tipos de c i ar o a crilat o,e..

Em algumas formas de realização, a estrutura porosa, é formada gg!!!!!!^ i3Él|lÉiili|.àÍ '1||||||g:, permite |a| imagem; 'lilllÉispbaitilli implantado usando, por exemplo, ressonâncias magnéticas, fMRIs# tomografias, rsiOs-X, ecografias, varreduras de PET, ||||||||||tc. :ilf||g débsae:'1|||ipâs a. «|lpi|Miá parlla. ...................iÉ&s. déllllli; :pfd Jiiipd ©xémpib,: polièsteres, malhas de seda, etc») que é .imunologicamente compatível e permite a imagem. do tecido neovaseularizado, Noutra forma de realização, a estrutura porosa compreende uma combinação de materiais. Numa forma de realização deste tipo, a estrutura porosa compreende polipropile.no entrelaçado e fios de seda. 0 tamanho de poro do material da estrutura ê selecionado para facilitar a incorporação e vascularização do tecido dentro da câmara da estrutura porosa. Em algumas formas de realização, os tamanhos dos poros podem variar entre cerca de 50 rim e 5 mm. Numa forma de realização exemplar, a estrutura porosa compreende uma malha de polipropileno tecida com um diâmetro de poro de 0,53 mm.

Em algumas formas de realização, Q tamanho de poro é selecionado para excluir células imunes ou agentes imunes de penetrar no dispositivo implantado. Em algumas outras formas de: realização,: ® tamanho; dos poros não necessita necessariamente, de excluir células imunes ou agentes imunes de infiltrar o dispositivo. Este seria o caso, por exemplo, quando o dispositivo é usado para transplantar uma combinação de células, incluindo células ímunoprotetoras (por exemplo, células de Sertoli, células estaminais mesenguimais, etc,} que podem fornecer proteção imune às células co-transplantadas, Este também seria o caso, por exemplo, quando o dispositivo ê usado para transplantar células singerié.icas ou células derivadas do paciente que recebe o !!!!!!!!!!liÍÍ:S|d;f:htê * 0 sistema de conexão ou tampão do dispositivo de transplante celPIlilléibllld^K^i^^tado para léllihliatiaillha.' IlilmatS:- ;dent;réll da estrutura porosa. 0 sistema de encaixa ou enchimento pode compreender ura material não poroso (por exemplo, poii.tet.rafiuoroetileno (PT.FE) r pôlipropileno, etc.) que inibe o crescimento de tecido biológico no sistema de encaixe ou tampão. O .sistema de conexão ou tampão pede ser uma éétlllihra biili slilliélidã:* 'Sdllditintd, | é;li;:umiiti|||sâQ pdd:::: fbf usado, deve™se tomar cuidado para evitar a infiltração de colagénío ou qualquer outro material biológico no lúmen do tampSc quando o diapositivo é implantado no tecido hospedeiro v O sistema de derivação é discutido coni raais detaihes abaíxo.

Em algumas formas de realização* a extremidade proximal do sistema de ficha ou tampão está conectada a uma vedação. Em tal forma de realização* a vedação é configurada para fechar a abertura proximal da câmara quando o sistema de tomada ou ficha está completamente inserido na câmara da estrutura porosa» Q selo está estruturado para manter o sistema de encaixe ou tampão no .Lugar dentro da estrutura porosa. Noutra forma de realização* a vedação è separada do sistema de ficha ou tampão. Ainda noutra forma de realização* a vedação está ligada à estrutura porosa» Além disso* em algumas formas de realização exemplificativas, a extremidade proximal da câmara é fechada usando suturas cirúrgicas e/ou grampos vasculares sem usar uma vedação separada.

Quando implantado em um corpo hospedeiro* a estrutura porosa do dispositivo encoraja o crescimento do tecido vascular e conectívo* de modo que o sistema de encaixe ou tampão alojado dentro da estrutura é encapsulado em uma matriz de tecido vascularizado» Quando o sistema de ficha ou tampão ê removido d.a estrutura porosa* é criada uma câmara neovascuiarízads dentro do dispositivo* que poáe então ser usada para manter uma preparação celular no corpo hospedeiro.

Os tamanhos da estrutura porosa e o sistema de encaixe ou tampão são selecionados para fornecer uma relação superficíe-volume ideal para manter células in vivo e para garantir a sobrevivência â longo prazo das células dentro da câmara neovasoularizada. Da mesma forma* o número de câmaras no dispositivo de transplante é determinado com base no volume e/ou no número de células que devem ser transplantadas» Em algumas formas de realização* o volume total do dispositivo de transplante celular ê ajustado aumentando ou diminuindo o número de câmara o enquanto mantém uma relação superfiçie-volume ideal de cada câmara, individual. Em outras formas de realização, o comprimento das câmaras é ajustado para alterar o volume total. Em alternativa, em várias formas de realização, o dispositivo de transplante celular compreende um número fixo de câmaras, mas apenas um número selecionado de câmaras sâo infundidas com células depe.nde.ndo do requisito de volume total do di s p o s i t i v o., 0 dispositivo de transplante de células revelado pode ser alternativa, o dispositivo de implantação celular descrito :ϊ|||ί^ϊίϊ;8$ϊ||ίΙ;$|ί$$§^^ corpo hospedeiro, incluindo no emento ou outro local apropriado e estende-se pars o ambiente subcutâneo» Numa forma de realização, as células podem ser carregadas na porção do dispositivo que se estende para o ambiente subcutâneo enquanto o resto do dispositivo está no ambiente intraperítoneal. Noutra ferroa de realização, o dispositivo de transplante celular pode ser implantado no cérebro, na área da medula espinhal ou em qualquer outro órgão, conforme necessário para provocar um efeito terapêutico a partir de células transplantadas, Na maioria dos casos, o hospedeiro ê um ser humano, mas pode ser outro animal mamífero ou não mamífero. O procedimento de transplante celular é um processo de dois passos que compreende um passo de implantação do dispositivo seguido por um passo de infusão celular (transplante celular}. 0 passo de infusão celular é implementado após um período de incubação in vi iro durante o qual o dispositivo implantado é infiltrado com uma matris de coiagénio vascularizada. Numa forma de realização, o período |||||||||ilíd|||§:ÍÍ||l:|:ld|||||:dÍÍ:;ÍÍÍÍdil tempo adequado para a angiogénese e a infiltração de colagénio da estrutura porosa. 0 periodo da incubação pode ser alongado ou encurtado, dependendo do grau de neovascuiarização e formação de tecido (colagénio com células} necessária ou desejada. Por exemplo, os dispositivos de transplante podem vascularizar a taxas diferentes dependendo do material, dimensões ou revestimentos do dispositivo, como, por exemplo, revestimentos antibióticos, fatores de crescimento, etc. Os dispositivos de transplante também podem vascularizar a taxas diferentes em diferentes hospedeiros ou quando localizados em diferentes tecidos corporais dentro do mesmo hospedeiro, é dentro da habilidade de uma pessoa na técnica determinar o periodo de incubação apropriado. Por exemplo, estudos de imagem podem ser realizados antes da entrega de células para garantir que o tecido vascular e/ou conectivo adequado seja depositado ao redor e através das paredes da estrutura porosa durante o periodo de incubação. Para o passo de infusão celular, o site de implantação ê acedido através e uma incisão cirúrgica e o sistema de ficha ou tampão é removido da estrutura porosa, para. criar um colchão e bolsa revestida de vasos sanguineos dentro da estrutura. A preparação celular é então entregue no bolso vasoularizado, e a estrutura porosa ê re-selada. Noutra forma de realização, o procedimento de transplante celular é um processo de passo único pele qual o dispositivo é colocado e as células podem ser colocadas numa matriz de modo a que não escapem através dos poros do dispositivo ou, em alternativa, o dispositivo pode ser. revestido com um polímero degradável para evitar que as células escapem do dispositivo durante o processo de desenvolvimento de colagénio e angiogênese.

Sm algumas formas de realização, as células a sarem transplantadas podem ser combinadas coin uma solução viscosa biocompativel ou. uma .formulação de polímero biodegradável antes de serem carregadas na câmara de qualquer dos dispositivos de transplante aqui descritos. Este polímero biodegradável protegerá as células atê que o dispositivo seja completamente vascular.izado pelo corpo hospedeiro. Estas formulações podem, ser colocadas nas câmaras antes ou após a colocação do dispositivo em um hospedeiro, mas antes que uma matriz de colagênio e estruturas vasculares se tenham formado no dispositivo. As células combinadas com uma solução viscosa biocompatível ou uma formulação de polímero biodegradável serão particularmente úteis em dispositivos projetados para serem carregados com células antes da implantação do dispositivo no corpo do .hospedeiro.:

Deve notar-se que as células podem ser colocadas no dispositivo; no entanto, as células também podem ser encapsuladas. Gs seguintes «ao, a titulo de exemplo, e não a título de limitação. Exemplos de sistemas de encapsulamento de células polimérícas incluem encapsulamento de alginato, hidroyèis de polissacarídeos, quit o sa.no, albato de cálcio ou bário, uma matriz em camadas de polímero de :gl4c:dl.íl||í dS:::SS:: áíipilhb e .pi|4iísi.ii|lllllllll fotopolimerizávei para encapsular células individuais ou aglomerados de células, poliaerilatos incluindo formas de limitação. Exemplos de sistemas de encapsulamento de células poiiméricas incluem encapsulamento de alg.ínato, nidrogé.ís de 111111111:1111¾ qlliilbbiillb:., 1114 gibitb' db jÉiÚiiiildh::.. bário,: bisplllllllllllliij matriz era camadas de polímero de poli íetilenoçliool} de alginato e polilisina, para encapsular células individuais ou aglomerados de células, poiiaorilatos incluindo ce dill "iiiiábsuiia· lllillllllllli, síj.iciOy nano capsulas de silício o po 1 imembrana (cloreto de acrilonitrllo e cloreto de co-vinil}.

As FIGS, lA-lE ilustram várias formas de realização exemplares de um dispositivo de transplante de células 1. 0 dispositivo 1 compreende uma malha de polímero (por exemplo, uma malha de polipropileno, uma malha de PTFB ou qualquer outro material adequado) que forma uma câmara porosa 2 para conter células num corpo hospedeiro. Em algumas formas de realização, a dispositivo 1 pode compreender 1, 2, 3, 4, 5, 6, ’?8, Bf 1.0, .11, 1.2 ou maia câmaras porosas 2. Ά disponibilidade de cãma ras múltiplas permite © uso de qualquer número ou combinação das câmaras, dependendo do volume de preparação celular requerido, que é dentro do conhecimento e .habilidade dos especialistas na técnica para determinar.

Como mostrado na. FIG. IA, o dispositivo 1 compreende uma extremidade proximal 3, uma extremidade distal 4 e um. encaixe 5 alojados na câmara porosa 2. Numa forma de realização, a. câmara porosa 2 tem forma tubular e o tampão 5 é cilíndrico e prolonga-se ao longo de um lúmen de câmara porosa 2. Em outra forma de realização exemplar, a câmara porosa 2 compreende uma abertura na ext.remida.de proximal 3, A abertura na extremidade proximal 3 é dimensionada para permitir a inserção e retração do tampão 5 da câmara porosa 2. Numa dessas formas de realização, a abertura na extremidade proximal 3 é selado usando suturas cirúrgicas e/ou braçadeiras vasculares durante a incubação do dispositivo e apôs a infusão de células no dispositivo. Gomo seria entendido por uma pessoa com conhecimentos comuns na técnica, qualquer outro elemento de vedação cirúrgica, por exemplo, clipes microvasculares, grampos, etc., pode ser usado para vedar a abertura na extremidade proximal 3. Noutra forma de realização, o dispositivo 1 compreende uma aba não porosa 6 na extremidade proximal 3, como ilustrado aa FIG. 1B. Numa forma de realização deste tipo, a aba 6 ê feita de silicone. A aba 6 pode ser selada usando suturas cirúrgicas* grampos ou qualquer outro mecanismo de vedação adequado durante a incubação do dispositivo e apôs a infusão de células no dispositivo. Numa forma de realização exemplar* a extremidade distal 4 do dispositivo 1 compreende uma superfície arredondada ou de fundo plano. Noutra forma de realização* o dispositivo 1 compreende uma abertura nu extremidade distai 4, que pode ser selada utilizando suturas cirúrgicas, grampos ou qualquer outro elemento de vedação cirúrgica, durante a. incubação do dispositivo e após s infusão de células. Ainda noutra forma de realização exemplar, como mostrado na FIG, 1C, a extremidade distai 4 compreende uma porção não porosa 7, que evita o crescimento do tecido na abertura distai da abertura na extremidade proximal 3 quando o tampão 5 é inserido na câmara 5. 0 selo 8 está estruturado para manter o tampão 5 no lugar dentro da câmara porosa. Noutra forma de realização, o tampão 5 é mais longo que a câmara porosa 2 e atua como uma vedação tanto na extremidade proximal 3 como na extremidade distal 4 do dispositivo, como .mostrado na FIG. I£. As bordas da câmara porosa 2 em torno do tampão 5 são seladas usando suturas cirúrgicas e/ou cola cirúrgica. Apôs a remoção do tampão 5 antes da infusão celular, as aberturas na extremidade III ·ί ροίρρΙΙίβή usáidb? ,|| suturas cirúrgicas, braçadeiras vasculares ou qualquer outro llleblllililiiiá' 'iia ''téqi;ib:|||||||

Sm algumas formas de realização exemplif.icativas, o dispositivo .1. compreende, múltiplas câmaras porosas 2 que estão conectadas lateralmente uma ã outra. Nuraa tal realização, as câmaras porosas múltiplas 2 são formadas, por II οβρριιρΙι | *3 inferior de um material poroso ao longo de -uma linha substancialmente paralela a um eixo longitudinal do dispositivo. Ά FIG, 1F ilustra um dispositivo de transplante celular possuindo oito câmaras porosas 2. Cada câmara 2 iâbilgá: i|ia ||: tlltpãd | |illlliii|il|||dil:: . Incubação :||!i|b·· dispositivo. Os tampões 5 são removidos das câmaras 2 antes da infusão de células nas câmaras. Huma forma de realização, o dispositivo 1 compreende oito câmaras porosas e tem um. i :ddílprimd||; ©!!ii|ai; <§§ S|l|:|iilllllia $ H rnrdt;^;ii;; 1 3Sm:. porosa 2 tem ura diâmetro interno não superior a. 3,5 mm e abriga um tampão 5 com um comprimento de ap r exima da me nt e 40 mm e um diâmetro 2*5 mm, Em tal forma de realização* o tampão 5 é formado de um material não poroso* fciocompativel* por exemplo* poli tetraf 1 uoroet i.1 eno (PTFF.) ,

As formas de realização exemplifícativas do dispositivo de transplante de células da presente descrição são formadas por malhas de poiipropileno de grau médico* por exemplo* malha tricotada de poiipropileno (PPKM; adquirida de realização ilustrativas* as malhas são formadas por monofilamentos com diâmetro de 0,1 mm a 0,3 mm e tamanhos de poros de malha variando de 0*3 mm a 1 mm, de 0*4 jam a 0,65 mm e 0,5 mm a 0,6 mm. As FIGS. 2A-2D ilustram várias configurações de malha exemplares que podem ser usadas para formar os dispositivos de transplante de células. A FIG. 2A ilustra uma malha de poiipropileno ÇPPKM6Q1) tendo um tamanho de: poro de 0*5 mm e uma espessura de monofilamento de 0,3 mm*: A FIG. 2B mostra uma malha de poiipropileno (PPKM602) com um tamanho de poro de 0*53 mm e uma espessura de monof ilamento de 0*18 mm; a FIG. 2C mostra uma malha de poiipropileno (PPKM404) com um tamanho de poro de 0,53 mm a uma espessura de monofilament© de 0*13 mm; e a FIG. 2D mostra uma rede de poiipropileno (PPKK604) com um tamanho de poro de 0*85 mm e espessura de monofilamento de 0*2 mm. A FIG* 3A ilustra outra forma do realização exemplar de urn dispositivo de transplante celular 10. A FIG. 3B ilustra os componentes do dispositivo de transplante celular 10, 0 dispositivo 10 compreende uma estrutura porosa 12, uma vedação primária .14, pelo menos, um sistema de encaixe que compreende um tampão exterior 16 e um tampão interno 18 e um vedante secundário 28.

Como ilustrado na FIG * 4, a es trutura porosa 12 do dispositivo de transplante de cérulas 10 pode compreender uma malha de polímero (por exemplo, uma malha de polipropileno,· uma malha de PTPE ou qualquer outro material adequado) que forma uma ou mais câmaras porosas 22 para conter células em um corpo hospedeiro, Em. algumas formas de .realização, a estrutura porosa 12 pode compreender .1, 2, 3, 4, 5, €, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ou mais câmaras porosas 22. A disponibilidade de câmaras múltiplas permite o uso de qualquer número ou combinação de câmaras, dependendo do volume de preparação celular requerido, que é dentro do conhecimento e habilidade dos especialistas na técnica para determinar.

As câmaras porosas 22 podem ser criadas, por exemplo, unindo as superficies superior e inferior da estrutura porosa 12 ao longo de uma. linha substancialmente paralela a um eixo longitudinal da dispositivo, As câmaras porosas múltiplas 22 podem ter dimensões transversais iguais ou diferentes e áreas superficiais, duma forma de realização, as câmaras porosas múltiplas 22 são formadas por soldagem ultrassónica da malha de polímero a partir de uma extremidade proximal 24 a uma extremidade distai 26 da estrutura. As superficies superior e inferior da estrutura porosa 12 são continuas através de uma ou mais câmaras porosas 22, interrompidas apenas por linhas de solda ultrassónicas 28 que funcionam, substancialmente paralelas a um eixo longitudinal do mancai poroso 12. As superficies superior e inferior do manual poroso 12 pode ser recuado ligeiramente sm cada linha de soída, que oferece área de superfície adicionai para vascularização e fornece estabilidade física aa dispositivo 10 dentro de um hospedeiro, Numa forma de realização, os bordos na extremidade distai 26 sâo afunilados e soldados por ultrassons um ao outro para vedar a extremidade distai 26:*

Com referência â FTG, 33, o vedante primário 14 está configurado para selar uma ou maia câmaras porosas 22 durante a incubação do dispositivo e após a infusão celular, A vedação primária 14 compreende unia película poiimériea :||Í:Í:Í:Íli||||lÍ:; b;ioobtpat.ÍPei but' ilí^ramgSL:· forma: de I vedsçsd :p jlplj jpifÉ" é soldada por ultrassons nos bordos laterais e na extremidade proximal cónica 31, como ilustrado nas FIGS, 5 A e 5B, &amp; extremidade distai 32 do vedante primário 11 está ligada ã extremidade proximal 24 da estrutura de poro 12* Numa forma de realização, a extremidade distai. 32 ê soldada por ultrassons â extremidade proximal 24 ou .a. uma estrutura porosa 12 *

Em várias formas de realização, a vedação primária .14 compreende um bloqueie: re-vedável 34, que auxilia na manutenção de, pelo menos, um tampão exterior 16 dentro de uma câmara porosa 22 durante o periodo de incubação, O bloqueio 34 também evita o vazamento da preparação celular durante o processo de infusão celular. Qualquer mecanismo de bloqueio re-seiávei adequado pode ser usado como travamento 34, Numa forma de realização, o bloqueio 34 compreende característieas de ranhura e cume de interficha, que formam uma vedação apertada quando pressionadas em conjunto e desbloqueia quando as superfícies superior e .inferior da vedação 14 são separadas da extremidade proximal 31, Após o período de incubação do dispositivo, o acesso ao tampão exterior 16 é conseguido cortando a extremidade proximal 31 a preparação da célula ser entregue na estrutura porosa 12, o bloqueio 34 é reafirmado &amp; a extremidade próxima! 31 ê re~ selada usando, por exemplo, suturas cirúrgicas, grampos ou bio adesivos, ou seios herméticos. Q número de sistemas de tampão pode corresponder ao número de câmaras porosas 22 no dispositivo de transplante de células 10, O tampão exterior 16 é alojado dentro da câmara porosa 22 durante o período de incubação do dispositivo. Sm algumas formas de realização, o comprimento do tampão exterior 16 é aproxímadamente igual ao comprimento da respetiva câmara porosa 22. Como ilustrado na FIG. 6A, numa forma de realização, múltiplas fichas exteriores 16 estão ligadas numa extremidade proximal 40 usando uma espinha comum 42. A coluna comum 42 pode incluir uma ou mais ranhuras 43 para facilitar a remoção das fichas exteriores 16 a partir de câmaras porosas 22. Por exemplo, as ranhuras 43 pode permitir que a espinha comum 42 seja agarrada usando fórceps.

Em algumas formas de realização, o tampão exterior 16 tem um !!!|nip;|iii|||:0:· 45 iup: abriga ÚP ;É : !!!|ιο- 'llltliliilB:, humâ- 'forma- de -4.3 é constrangido com uma ou mais protuberâncias internas 47 ao longo do comprimento da superfície interior do tampão. As protuberâncias internas 47 proporcionam um espaço de ar entre o tampão exterior 16 e o .idUpífi f:h|ÍPAÇÍÍÍl.f3 Íliii||né; pérmf:fiiiiii::. que as bolhas de ax. encravadas escapem durante a entrega da preparação celular, que é descrita com mais detalhes abaixo, 0 espaço -dé: ar tÍ!i§éPÍ bviifb .lã dÓ:Í3tdl:lb:· dé :^iiitii||||||||||::. durante a remoção do tampão interno 18 e, assim, mantém a integridade da ma tris de coiagenio vasculari ?.ada recém-formada dentro e ao redor da câmara porosa, Assim, em alguns aspetos, o sistema de encaixe que compreende o tampão exterior 16 e o tampão interno IS pode facilitar a entrega de células para- o dispositivo de transplante celular .10, e. também pode aumentar as chances de sobrevivência celular dentro de uma matrix de colagénio Intacta.

Em algumas formas de realiração, a extremidade proximal 40 e a extremidade distai 41 do tampão exterior 16 compreendem mecanismos de vedação, por exemplo, ranhuras internas ou superficies cónicas, para garantir uma vedação eficaz com. o tampão interno 18. Como mostrado na F1G. 7, a extremidade prdxlítll. :Ι|!||| a ,¾¾t; dl lio: ;liipadliii&amp;te::ripr ;|f 11 podem incluir mecanismos de vedação complementares 53 para evitar a infiltração da matriz de coiagénio no núcleo oco 45 durante o periodo de incubação. Por exemplo, numa forma de realização, o mecanismo de vedação 53 compreende uma ranhura que se prolonga em torno da periferia, das extremidades proximal e distal do tampão interior 18, e o tampão exterior 16 compreende um rebaixo em torno da periferia das suas extremidades distal e proximal, E.m tal forma de realização, a nervura no tampão exterior 16 e a ranhura no tampão interno 18 se encaixam quando o tampão interna 18 é inserido no núcleo oco 45 do tampão exterior 16, de modo a formar uma vedação completa entre o tampão interno e externo e evitar a permeaçào de qualquer material biológico no núcleo oco 45. Além disso, em tais formas de realização, se o tampão externo 16 compreender uma ou mais protuberâncias internas 47, &amp; altura dos rebordos nas extremidades proximal e distal do tampão exterior 16 podem ser superiores à altura das protuberâncias internas 47.

As FIGS. 6C e 6D ilustram vistas em corte da câmara porosa 22 e montagem de ficha 16, 18, de acordo com uma forma de realização da presente descrição. Ά FIG. 6C é uma vista em corte transversal da montagem antes da implantação· em um corpo hospedeiro, e a FIG. 6D ilustra a vista em corte transversal da montagem após a incubação em am corpo hospedeiro, O diâmetro interno da câmara, porosa 22 e o diâmetro externo do tampão exterior 16 são selecionados para manter um espaço 46 em. torno da periferia do tampão exterior 16 para formação de tecido. Por exemplo, numa forma de realização ilustrativa, o diâmetro interno da câmara porosa 22 não ê superior a 4,5 mm e o diâmetro exterior do tampão 16 não é superior a 3,5 mm. Noutra forma de realização, o diâmetro interno da câmara porosa 22 não é superior a 3,5 mm e o diâmetro exterior do tampão 16 não é superior a 2,5 mm.. Estas formas de realização proporcionam, por exemplo, aproximadamenfe 0, 5 mm de espaço em torno do tampão exterior 16 para a formação de uma matriz de colagénio vascular!cada. 0 espaço ao redor do tampão exterior 16 também, oferece espaço suficiente para inserção e. retração do tampão externo dentro e fora da câmara porosa.

Quando o dispositivo de transplante de células 10 é implantado num corpo hospedeiro, os tecidos vascular e conectava penetram através da câmara porosa 22 para o espaço 46 e formam uma matriz de tecido vascularizado 48 em torno do tampão externo 16. 0 tampão 16 evita a penetração da matriz de tecido 48 para dentro do lúmen de porosa câmara 22. Quando o tampão interno 18 e o tampão exterior 16 são retraídos da câmara porosa 22, é criada uma abertura de bolso 4 9 dentro da câmara porosa 22 que pode ser usada, para conter células no corpo hospedeiro, 0 bolso 49 está envolvido na matriz de tecido vascularizado 48, como mostrado na FIG. 6E. 0 número de fichas internas 18 pode corresponder ao número de tampões exteriores 16. 0 tampão interno 18 está alojado dentro do núcleo oco 45 do tampão exterior 16 durante a. fase d.e incubação do dispositivo, Numa forma de realização, ilililililil fichas: .inteiiiân llil :e:sfsd|;ilqãdáil hit®· proximal 50 usando ama espinha comum 52» Em algumas formas de realizaçãof a espinha comum 52 compreende uma ca.racterist.ica de grampo 54 para auxiliar rto manuseamento do tampão interno 18 durante a extração do tampão exterior 16. O selo secundário 20, como ilustrado na FIG, 8, é usado para conter a preparação celular nas câmaras porosas quando a vedação primária 14 é reposta após a entrega de uma preparação de células no dispositivo de transplante celular 10. A vedação secundária 20 é posicionada na extremidade proximal 24 da estrutura 12 porosa após a. preparação da célula é completamente entregue na câmara, porosa 22 e o tampão exterior 16 é retraído do dispositivo 10, Em algumas formas de realização, a vedação secundária 20 compreende ranhuras 60 para facilitar a inserção no dispositivo 10 usando pinças»

Noutro aspeto da presente divulgação, são revelados um dispositivo e um método para fornecer células para um dispositivo de transplante de células e serão explicados com referência ao dispositivo de transplante celular 10» A FIG, 9A ilustra os vários componentes de um dispositivo de distribuição de células ?0. 0 dispositivo de distribuição de células 70 compreende pelo menos um tubo de infusão celular 71, a tampa do conector 72 que tem urna caracteristica de grampo "3 e um eapagador de conector 74» O tubo de infusão de células 71 pode compreender tubagem polimérica (por exemplo, tubagem de pc lie ti 1 exi o) ou qualquer outro material adequado para .libertar a preparação de células na Câmara porosa 22 do dispositivo 10 durante o passo de infusão celular. Q número de tubos de infusão de células no sistema de distribuição pode corresponder ao número de câmaras porosas 22.·*. G espaçador de conector 74 está posicionado na extremidade distal do tubo de infusão de célula 71 e acopla ou interage com a extremidade proximal 40 do tampão exterior 16 durante o processo de entrega celular, O espaçador de conectar 74 inclui um ou mais orifícios de passagem através dos quais ê inserido o tubo de infusão celular 71, como mostrado na FIG. 9A» Os orifícios de passagem são configurados para· proporcionar um ajusta de interferência de luz com o tubo da infusão celular 71, O acessório é adaptado para manter o tubo de infusão celular 7.1 no lugar durante o processo de infusão celular. Alem disso, :jem certas formas de realização.,· o espaçador de conector 74 compreende aberturas de ventilação 76 para expelir o ar dos espaços de ar no tampão exterior 16 criado pelo comando interno 47 durante o processo de entrega celular, conforme descrito mais adiante. Numa forma de realização, o tampão exterior 16 compreende um cubo 78 na extremidade proximal 40, Numa forma de realização deste tipo, o espaçador de conector 74 é inserido no cubo 78 durante © processo de infusão celular para assegurar o dispositivo de distribuição 70 ao dispositivo de transplantação de células | ii;:Sl|||:,:j||| Λ extremidade proximal do tubo de infusão de células 71 compreende a tampa do conector 72, A medida que o tubo é inserido no tampão exterior 1.6? a tampa do conector 72 avança distalmente para o espaçador de tampão 74, Quando o tubo 71 é completamente inserido no tampão exterior 16, a tampa do conector 72 encaixa-se sobre o conector o espaçador 74 e/ou o cubo 78, e a caracteristics, de grampo 73 conecta-se com o tampão exterior 16/ou o cubo 78 ao longo da espinha comum 42, como mostrado na FIG, âC> Isto permite que a tampa do conector 72, o espaçador do conector 74 e o tampão exterior 16 sejam retraídos como uma única unidade á medida que a preparação da célula è infundida na câraara porosa 22,

Ainda noutro aspeto da presente divulgação, um método para o transplante celular é divulgado e será explicado com referência ao diapositivo 10 de transplantação de cernias e ao dispositivo 70 de distribuição celular* 0 método de transplante celular não está limitado às formas de realização do dispositivo aqui descritas e podem ser usadas com qualquer liu^dllliíd: qf$$ i|||||r| :|| tie. :|ρ| | procedimento de transplante celular exemplar, O procedimento de transplante de células ê geralmente um processo de dois passos que compreende um passo de implantação do dispositivo seguido de um passo de infusão celular, O dispositivo 10 é implantado no corpo hospedeiro antes da entrega de células para permitir um tempo adequado para colagénio e vasos sanguíneos para infiltrar a estrutura porosa 12. Em algumas formas de realização, o dispositivo 10 á esterilizado usando oxido de etiieno antes da implantação, 0 dispositivo 10 pode ser embalado numa embalagem auto selsnte ou em qualquer outra embalagem esterilízâvel juntamente com uma tira indicadora de esterilidade para um processo de esterilização à base de óxido de efcileno, .Em algumas outras formas de realização, a radiação gama ou &amp; autoclave em calor seco são usados para esterilizar o dispositivo antes da. implantação, 0 tipo de método de esterilização utilizado depende do material da estrutura, uma vez que o autoclave em calor seco é conhecido por enrolar certos materiais polimêricoa (por exemplo, polípropile.no) devido à baixa temperatura de deflexão do calor, Ά radiação gama, com. uma dose de esterilização d.e 6 Μ-Rad, pode esterilizar com sucesso os dispositivos de implantação de células; no entanto, a radiação gama pode diminuir a vida útil de dispositivos feitos de polipropileno. 0 dispositivo 10 pode ser implantado subcutaneamente ou intrapsri tonealmente , Por exemplo, para a implantação subcutânea do dispositivo no corpo hospedeiro, uma incisão é feita através da derme e epiderme seguida de dissecção brusca cuidadosa do tecido conjuntivo e adiposo, criando um caudal de bolso subcutâneo para a linha de incisão (etapa 810} . Uma vez que um espaço adequado é criado íaproximadamente as dimensões do dispositivo}, o dispositivo 10 ê implantado no bolso subcutâneo e a incisão é suturada (passo 820). Alternativamente, o dispositivo 10 pode ser implantado na cavidade peritoneal através de uma incisão abdominal. As etapas de implantação do dispositivo (passos 810 e 820) são seguidas por um período de incubação do dispositivo (passo 830) durante o qual uma matrix de coiagénio vascularizada é depositada em s ao redor da lll'pptrubura |;2ΐ||ίΡη:ρρ(|1?

Após o período de incubação, o dispositivo 10 é acedido através de uma segunda incisão cirúrgica. Por exemplo, a extremidade proximal 31 da vedação primária 12 pode ser cortada in si tu para abrir o dispositivo 10 (passo 8 4 0}. 0 tampão interno 18 é então extraído do tampão exterior 16 e descartado, (passo 850} , Durante o processo de remoção do tampão interno, o movimento do ar é facilitado pelas protuberâncias internas 47, que impedem a formação de um vácuo dentro do dispositivo,: o .que pode causar a rutura de qualquer vaso sanguíneo recém-formado dentro e ao redor do dispositivo, h remoção do tampão interno 18 desengata a extremidade proximal 50 e a extremidade distai 51 do tampão interior 18 da extremidade proximal 40 e a extremidade distai 41 do tampão exterior 16. Uma preparação celular á então entregue no dispositivo 10 usando o dispositivo de distribuição celular 70.

As FIGS. 11E-11D mostram uma visão gerai esquemática de certas etapas de um procedimento de infusão de células exemplar e serão explicadas com referência ao fluxograma mostrado na FIG. 10. Para administrar as células no dispositivo 10, o tubo de infusão de células 71 do dispositivo de distribuição 70 ê carregado com a -preparação lld:S:g;rÍ:|ld;! dglip'Udlld ©d;i||4:|· ;dç exterior 16, como mostrado na FIG. 11A {passo 860} * 0 espaçador de conector 74 se associa com a extremidade proximal 41 e/ou o cubo 78 do tampão exterior 16. Quando o tubo 71 é avançado para dentro do tampão externo, o ar é ventilado através das saliências internas 4? do tampão exterior 16 e aberturas de ventilação 76 do espaçador de conector 74. Quando o tubo 71 é avançado completamente no tampão externo 16, a tampa do conector 12 interfere com o espaçador do conector 74„ O grampo 73 da tampa do conector 72 é então conectado ao cubo 78 da tampão exterior !.·€ (etapa 870). Kesfce caso, o tampão externo 16, a tampa do conector 72 e o espaçador do conector 74 são então retraídos 1 í.çcíramente da câmara porosa 22 como uma única unidade para criar um espaço na extremidade distai da câmara porosa 22 (passo 875). Sm algumas formas de realícação, o tampão exterior 16 pode ser retraído ligeiramente da câmara porosa 22 antes de conectar o dispositivo de distribuição 70 com o tampão exterior 16. Em outras palavras, o passo 875 pode ser realizado antes do passo 870. Pressão suave é aplicada a uma seringa conectada à célula tubo de infusão 71 para libertaras células: para dentro da câmara porosa. 22 (passo 880) , É tomado cuidado para garantir que o tubo 71 permaneça na câmara porosa 22 â medida que a pressão é aplicada para ||||||||||libertax:: a. p. tampib 111 retraído ligeiramente da câmara porosa 22 antes de conectar o dispositivo de distribuição 70 com o tampão exterior 16.

Sm outras palavras, o passo 875 pode ser realizado antes do passo 370, É aplicada uma pressão suave a uma seringa conectada ao tubo de infusão celular 71 a entregar as células na câmara porosa 22 (passo 880). É tomado cuidado para garantir que o tubo 71 permaneça na câmara porosa 22 á medida que a pressão é aplicada para libertar a preparação celular.

Numa forma de realização,, o tampão exterior 16 é retraído ..............mm i:géldÍÉÉ|· 0¾¾ í1|| na FIG. 11B, Ã. medida que a pressão (?) é aplicada à seringa conectada ao tubo de infusão de células 71, a preparação de células 79 infunde-se na câmara porosa 22,  medida que e de células é entregue na câmara porosa 2-2/ o tampão exterior 16 e o tubo de xnfusão de célula 71 são retirados de o dispositivo, como mostrado nas FIGS. 11C e 11Ό (passo 885}„ Quando o dispositivo estã completamente ebeÍ;©,si:i:i:Í;§Í|i:i:^ 7 9||||(||||||ϊ:|||:0:Ιθ- l;Í:ÍÍ|Í;lar ·1;|; interrompida e o tubo de infusão celular 71 é completamente retraído do dispositivo 10 {passo 890}, A câmara porosa 22 ê então avaliada quanto â capacidade restante para a preparação celular* e qualquer preparação de células remanescente pode ser adicionada cuidadosamente ao final da câmara porosa. A preparação de células está contida dentro da câmara porosa 22 por colocação do vedante secundário 20 na extremidade proximal 40 da câmara porosa 22, seguido do fechamento do fecho selávei 34 da vedação primária 12 e lit fiAi;||§|b dalíé^ibiltidade proxima.1 31 da vedação primária 12 com suturas ou grampos cirúrgicos ou outros mecanismos de vedação adequados (passo 895) , Finalmente, a incisão cirúrgica é fechada usando suturas cirúrgicas, grampos ου adesivos de tecido, completando assim o procedimento de tran spXante celnlar. II Ifã didpp:Í||iivô:S: e métodos para. o transplante de células II féveiáiiillllpodem ser utilizado® para. d trani||i:ih|:|.:| iip:. ||:i|pis.qlil||||iiui;as terapêuticas/ bu uma bcm||§h3'q§p; I |ÍÍ|| l|céâulâd|. çorpç: hospede iroa pa r a fdfnecefl ma:||ê:fl;á:|||||: biológico terapêutico ao hospedeiro para o tratamento de uma || Ipdll&amp;IÊd dillipêhça:., As células podem ser células doadoras alogénicas, xenogénicas ou singénicas, células derivadas do paciente, incluindo células eetaminais, células de sangue do cordão umbilical e células estaminais emfcrionãrias, As células esfcamin&amp;is podara ser diferenciadas nas células terapêuticas aprop.r±adas. &amp;s células podara ser células imaturas ou pareiaImante diferenciadas ou totalmente diferenciadas e maduras quando colocadas no dispositivo. As células também podem ser células geneticamente modificadas ou linhas celulares. Em urn aspeto., uma forma de realização consistente com a presente divulgação é utilizada para o transplante de ill· of as de células de tanger ha n s para proporcionar meios para a regulação da glucose no sangue no organismo hospedeiro. Noutro aspeto, uma forma de realização de. um dispositivo de transplante de células é utilizada para o co transplante de ilhetas de células de Langerhans e Sertoli, onde as células de Sertoli fornecem proteção imunológica a© células de Ilhetas no organismo hospedeiro, A proteção imunológica proporcionada pelas células de Sertoli em um organismo hospedeiro foi descrita anteriormente, por exemplo, na Patente US 5725854, que é incorporado aqui por referência na sua totalidade. Consequenteraente, esta 1111 '.dêl!ii|iiililfeéíep 'dilllilliillidí............. doenças através do transplante de quantidades terapêuticas de células para indivíduos que dela necessitem usando uma 111111 f orma de reall aaçãq!l!i!!pm: de lllllllleéitilaa oomdliiqpi dffiipBb. A densidade das células terapêuticas transplantadas, ou combinações de células, é determinada com base no peso corporal do hospedeiro e nos efeitos terapêuticos das células. Conforme observado anteriormente, as dimensões do dispositivo de transplante de células e o número de câmaras porosas a serem usadas (em um dispositivo de múltiplas câmaras) sâo determinados com base no número de células necessárias, a extensão da vascularização alcançável durante incubação- do dispositivo e as características ® pliftiié cililáiés ílllifrili' 1¾¾ dos dispositivos: implantados:.

Exemplos

Os seguintes exemplos são fornecidos pera explicar melhor as várias formas cie realização e não devem ser interpretados de forma alguma para limitar o alcance da presente divulgação. Os dispositivos de transplante de células utilizados nestes exemplos sâo formados por malhas de polipropileno e compreendem um único tampão de PTFE em cada câmara porosa dos dispositivos. 1. Dispositivos da transplante celular contando células da ilhotaa sâo capazes de restaurar a noraoqlieemia em gatos Lewis

Os dispositivos de transplante de células foram utilizados para implantar células de ilhetas de singene em ratos Lewis para restaurar normoglicemia. A resposta de glicose das células implantadas foi comparada com a resposta de glicose de células de ilhetas administradas diretamente nas veias porta de ratos. Os ratos Lewis foram divididos em três grupos de estudo, com nove ratos em cada grupo. No primeiro e segundo grupos de estude, os dispositivos foram implantados em cavidades intr&amp;peritoneais e subcutâneas, respetivamente. Ho terceiro grupo, as células das íihotas foram administradas diretamente nas veias porta.

Os dispositivos implantados foram incubados nos ratos Lewis durante pelo menos um mês para permitir o crescimento vascular. 0 diabetes foi então induzido quimicamente nos ratos por injeção de estreptozotocina. Os ratos foram considerados diabéticos se três leituras sucessivas de glicose no sangue fossem peio .menos 18,0 mM. As células isoladas de ilhofcas de ratos de Lewis (peso de 10 000 IEQ·/ 1111111111¾llllfdramlllhtll: M||n|ldâll|||;S' !lk$|ppé$É^ 1 diretamente nas veias porta de ratos diabéticos. Os grânulos de insulina foram removidos aos 14 chias após o transplante e;e ilhotas (denotado pelo retângulo fechado acima dos gráficos nas Figuras 11A e 11B) . Os níveis de glicose no sangue nos ratos foram monitorizados durante ura período de 100 dias. Nos .100 dias pós-t ransp'iante, os dispositivos foram removidos para confirmar que as ilhetas transplantadas eram responsáveis pela reversão do diabetes.

As FIGS. 12A e 12B mostrara resultados de normalização da glicose para ratos que recebera dispositivos de transplante de células subcutâneas intraperítoneais {câmara omental) e subcutâneo, respetivamente„ 0 sucesso do transplante de células resultou na normalização dos níveis de glicose no sangue {leitura de glicose inferior a 8,0 raM), tal como indicado pelos traços sólidos. Os transplantes que não alcançara a no rmog 1 í c eraí a são indicados por traços pontilhados. Os resultados indicam que o nível glieêmico llllllllliiPliilllllliilpi !!!lilhll|o IlililIlIlIlBlIll u|me:|i|||| .significativo de ratos diabéticos que receberam as células das ílhotas. Após a reraoçâo dos dispositivos implantados aos 100 dias após o transplante, os ratos que demonstraram previ amante níveis normais d.e glicemia retornaram a níveis híperglicémicos, indicando que os dispositivos continham enxertos que funcionavam completamente e que eram responsáveis pela obtenção de normoglicemia antes da remoção do dispositivo. A FIG. 12C mostra respostas de IVGTT {teste de tolerância à glicose intravenosa) era ratos lewis transplantados com células de ílhotas. O IVGTT foi realizado a 48 dias e. 80 dias pòs-transplante, A resposta de glicose de ratos com transplantes intraperi torreais e subcutâneos foi comparada com resposta de glicose de ratos que receberam células de ilhetas intra-portal. Os IVGTTs foram realizados em três ratos em cada categoria de estudo, Nos 40 dias e 80 dias após o transplante, os níveis de glicose no sangue em ratos fcra.risplant.ados cora células de ilhetas caíram abaixo de 8,0 ífcM dentro de 50 minutes de receber um desafio de glicose, como mostrado r\a FIG. 12C. Os dispositivos de transplante de células foram removidos aos l.QQ dias. Os níveis d.e glicose no sangue não caíram quando ura bolo de glicose foi administrado aos 11Q dias, A FIG. 120 mostra respostas de insulina em ratos Lewis .Ιΐϊί&amp;ζβ ddalIBlildfe liililbotaSi*· id :x is^j^.sdXdj^^iÍiii foram testados usando ensaios de ímonoabsorção ensimática (ELISA), h análise foi realizada em triplicado. Os resultados indicam, uma diferença sign.ifica.tiva nos níveis de insulina no sangue após o desafio da glicose (p <0,005, teste t.) . Como mostrado .na FIG. 12D, os níveis de insulina em ratos que receberam os dispositivos transplantados correlacionaram-se bem com os níveis de insulina em ratos que receberam células de ilbotas intra-portal. 2. Deteção histológica de insulina &amp; vaacularlgação dentro das câmaras porosas de dispositivos de transplante da célttlaa

Após a remoção dos dispositivos implantados aos 100 dias, a insulina foi detetada nos dispositivos que utilizavam anticorpos primários específicos contra a insulina. A FIG. 13&amp; mostra o resultado da coloração de insulina, dentro da câmara porosa de um dispositivo implantado subcutaneamente. A deteção de insulina dentro da câmara indicou que as células de ilhetas contidas nos dispositivos eram viáveis e funcionais a 100 dias pòs-transplante. A avaliação histológica de dispositivos implantados também foi realizada para verificar a formação de tecido vascular na matriz de eolagénid depositada em e ao redor dos dispositivos, h coloração imuno-histoquímica do Fator VIII associado às células endoteliais indicou estruturas vasculares bem fornadas profundamente incorporadas no tecido conjuntivo, como mostrado na FIG. 13B (estrutura escura indica endotêlio, núcleos celulares são indicados par se tas;· . A avaliação histológica também demonstrou a penetração do tecido neovasctilarizado em direção ao núcleo dos dispositivos de transplante de células * 3. Avaliação da atnqiogénesa a deposição de colaçrénio em dispositivos de transplant® da células

Para determinar o comprimento adequado da fase de implantação (tempo entre a implantação do dispositivo e o enxerto de ilhotes), os dispositivos de transplante celular foram oito semanas de idade .por 2, 4 e 8 semanas. Após a implantação do respetivo período de tempo, os dispositivos foram explantadcs e analisados para determinar o nível de angiogénese e deposição de cola-génio. a) Avaliação bruta da angiogénese e deposição de colagénio

Foram tiradas fotos das superficies ventral e dorsal dos dispositivos expIa.ntad.os para análise grosseira da formação de vasos sanguíneos e tecidos. Uma. grade de 1 cm. x 1 cm foi colocada sobre as fotografias para quantificar a formação de microvasos e tecidos (colagénio com células). Cada caixa de 1 cm 2 dentro da grade foi marcada para a f o mação do vaso, permitindo que um vaso total/cm2 seja calculado para toda a superfície dos dispositivos explantados. A espessura média nos perímetros medial e lateral dos dispositivos foi medida para avaliar a quantidade de deposição de colagénio. A FIG, 14 mostra uma tabela da espessura média de colagénio e vaso sanguíneo total/cm2 calculado para quatro dispositivos formados 'asando diferentes materiais porosos (malhas) . Foi observada uma formação suficiente de microvasos e tecidos para todos os quatro tipos de malhas às 2 semanas pós~ implantação. Os resultados também indicam que a quantidade de tempo necessário para a formação de microvasos e deposição d.e colagénio pode variar dependendo do material do dispositivo {porosidade, rugosidade da superfície,, etc. das ίίίίϊίϊίϊί b) Análise histológica da angiogéneae e da deposigÃo de colagénio A angio génese foi determinada por coloração de células endoteliaís com mancha de Hematoxilina e Eosina CH &amp; E) (Figura ISA) e fator de von rdillebrand (Figura 15B) . FIG, ISA demonstra a incorporação de tecido nos dispositivos âs 2, 4 e 8 semanas após a implantação. FIG. 15B mostra a formação de vasos sanguíneos em. várias .margens de ura dispositivo antes do transplante de células. A avaliação da íncorporaçã.o de tecido nos dispositivos mostrou que os dispositivos incorporam colagênio e microvasos em todos os pontos de tempo medidos antes do transplante de ilhotes. 4. Avaliação de Diapositivos de Transplante Celular Recebendo Ilhotas de Auto-Enxerto Porcino

Os porcos YorkSiXire-Landraoe de oito sem ti d a idade foram, implantados com dispositivos de transplante celular durante quatro e oito semanas, Para tornar os animais diabéticos, realizou-se uma pancreatectomia a 90% seguida de uma dose intravenosa de estreptorotocina de 150 mg/Kg um dia apôs a cirurgia. As ilhotes foram isoladas do pâncreas antes de realizar a pancreatectomia, Os enxertos de ilhotas imaturos foram transplantados para os animais cinco dias após o isolamento do enxerto e pancreatectomia para permitir tempo suficiente para recuperação e confirmação do diabetes.

As capacidades de produção de insulina das células das ilhotas imaturas foram testadas antes do transplante. Como mostrado n.a FIG. 1.6, as ilhotas imaturas produziram cerca de 10% da insulina normalmente esperada de ilhotas adultas. Esse fato, combinado com o número baixo de transplante de ilhotas de cerca de 3-5K lEQ/Kg (5-10% de insulinas produtoras de insulina normalmente utilizadas em transplantes intra-pottal) fornece um tests rigoroso dos dispositivos de transplante de células» Atualmente, na terapia de transplante de ilhotas clinicas, a infusão de um® quantidade adequada de massa de. células β representou um obstáculo para o tratamento de diabetes ínsulínodependente» A. independência da insulina. ê rotineiramente alcançada quando uma quantidade suficiente de células de ilhotas são entregues, aproximadamente 10 000 TEQ/Kg de peso corporal do destinatário. Para fornecer esta quantidade de células de ilhotas, os protocolos atuais de transplante de ilhéus exigem mais do que um pâncreas doador por recetor, criando uma pressão sobre um fornecimento de dadores já limitado. Portanto, se o controle glicêmico pode ser alcançado usando apenas 5-10% das ilhotes afualmente utilizadas em transplantes intra-portal* m número de pacientes diabéticos que poderiam receber terapia com transplante de ilhotas aumentaria significativwaenfce:.

Foram realisad&amp;s análises histológicas de dispositivos explactados para testar a sobrevivência e a função a longo prazo das Ilhotas transplantadas» A função do enxerto de islão também foi monitorada através de testes bissemanais de glicose no sangue e bimestrais de tolerância à glicose intravenosa (IVGTTs), a) Análise histológica da função do enxerto de ilhotas

Após a explicação dos dis-positivos âs '3 semanas, a insulina foi detetada nos dispositivos que utilizavam anticorpos primários especificas contra a insulina» FIÇ. 17A mostra o resultado da coloração de insulina dentro da câmara porosa de um dispositivo explantado» A deteção de insulina dentro ':i!ill!llillá. linliiiillilélliá células de ilhotas cbhiidaél|í|ii| dispositivo eram viáveis e funcionais âs 9 semanas pôs-transplante» A coloração irauno-hístoquiaíca das seções de expiastes demonstrou ilhotas saudáveis e bem configuradas cercadas par mierovasas robustos (Figura 17B, micr©vasos indicados por setas), b) tfedigoea de glicose no sangue

Os níveis semanais de gl.ícemia sem jejum a em jejum foram medidos para monitorar a função do enxerto das ilhotas após o transplante, Essas medidas auxiliara na determinação da eficácia geral dos dispositivos de transplante celular no controle â longo prazo dos níveis de glicose no sangue, As leituras de glicose no sangue em jejum fornecem uma medida controlada da função cio enxerto, Resumidamence* uma gota (vários microlitros) de sangue é coletada de uma veia. de ura animal recetor e o nível de glicose no sangue é determinado usando um gleucâmetro Freestyle Lite ou outro dispositivo de teste de glicose.

Como mostrado na FIC. 18, as ilhetas transplantadas demonstraram controle de glicemia a longo prazo até a explicação dos dispositivos aos 73 dias. Os animais do grupo "controle glicêmico" (n :::: 4) eram independentes da insulina e os níveis de glicose no sangue eram controlados pelas ilhotas nas dispositivos de transplante de células sozinhos. Os animais desse grupo apresentaram independência de insulina a longo prazo após o transplante de ilhotas. Alguns animais, no entanto, permaneceram hiperglicémicos (níveis diários elevados de glicose no sangue) após o transplante de ilhotas nos dispositivos (n == 6) . Isso foi relacionado à má qualidade metabólica das ilhotas pré-transplante e baixa dose de transplante de ilhotas ÍIEQ/Kg). A qualidade dos ilhéus antes do transplante se correlacionou bem com a função do islão de ........siiPhgd .piaro........... c) Teste de tolerância à glicose

Os testes de tolerância â glicose são importantes na avaliação da função do enxerto de ilhotas através da comparação dos resultados de IVGTT pré e pés-transplante. Para testar a eficácia dos dispositivos de transplante de células, os TVGTTs foram conduzidos antes da pancreateetomía (linha de base), em vários pontos de tempo após o transplante de ilhetas nos dispositivos e após a explicação dos dispositivos. O IVGTT foi realizado injetando uma dose de dextrose e medindo o tempo necessário para que a insulina endógena levante os níveis de glicose para a linha de base. Além de medir o nível de glicose no sangue, o sangue foi amostrado em vários pontos de tempo para medir o nível de péptido C, que é um subproduto criado quando a insulina é produzida por células β. Os resultados para um IVGTT foram interpretados utilizando valores absolutos do nível de glicemía (Figura 19A>, área sob curva {AGC} do nível de glicose no sangue (Figura 19B) e mudança de dobra no nivei de peptídeo C (Figura 1SG)

Corão mostrado nas FIGS. ISA e 19B, os níveis de glicose aumentam significativamente (p <0,001, Anova) depois que o dispositivo è expiantado, indicando que a remoção do dispositivo resulta na eliminação da função insulinica semelhante a um animal diabético sem ilhetas. Enquanto os níveis de glicose mais baixos foram detetados em animais não parcreatectomizados, os recetores de autoenxerto de ílhotas apresentaram redução significativa nos níveis de glicose após a injeção de dextrose, indicando que as ilhotas imaturas podem sobreviver e funcionar após o transplante.

As amostras de soro dos IVGTTs foram analisadas utilizando o kit de radioimunoensaío C-Peptide de porco finco, que utiliza um anticorpo feito especificamente contra o péptido C porcino sintético. As amostras de soro a 0, 5, 15, 30, 80 e 120 minutos apôs a administração de dextrose foram analisadas quanto á presença, de péptido C porcino. Quatro grupos de estudo foram testados: porcos não- p an create c t omi z. a do 3 (linha de base) f recetores de autoenxertos de ilhetas (transplante pós-ílhéus) * re cep tores de autoenxerto que tiveram os seus dispositivos removidos (remoção pás-dispositivo) e porcos de controle diabético. Ao examinar as mudanças de dobra nos níveis de peptideo C entre os diferentes grupos de estudo, os preceptores de transplante pós-ilhetas e de linha de base mostraram resultados muito comparáveis, embora o nível de peptideo C nos preeeptores de transplante pós-ílhéus tenha aumentado aos 60 minutos em oposição a 30 minutos para o grupo de linha de base (Figura 19C) . Além disso, as mudanças de dobra no peptideo C para o grupo de remoção pós-dispositivo e o grupo de controlo diabético foram semelhantes, indicando que as ilhotas transplantadas eram responsáveis pela liberação do péptido C antes da remoção do dispositivo.

Outras formas de realiração da. invenção serão evidentes para os especialistas na técnica a partir da consideração da especificação e prática da invenção aqui descrita. Pretende-se que a especificação e os exemplos sejam, considerados apenas exemplificativos, com um verdadeiro alcance e espírito da. invenção sendo indicados pelas seguintes rei vinda caçoe Sí,

Claims (19)

1. REIVIHDICAÇÕES

   1. Dispositivo para implantar células era um corpo hospedeiro, compreendendo: ura;; estrutura porosa que !!!!l$$$$p ? lliia·. ο||β|: :q||i ||:-p|s:sull|.....uma......íillllllllll extremidade proximal e uma extremidade distal, a estrutura de poro tem poros dimensionados para facilitar o crescimento de tecidos vasculares e conjuntivos em, pelo menos, uma câmara; e pelo menos um tampão removível 1||!:. çpMtqafâ^ :pdãi:|IÍ||#dp· :¾¾¾ ;Ρ||||||ί|: .lihipi.....uma, câmara; era que o estrutura poroso compreende uma malha de |sspdt!j|rp^
2. 2. Dispositivo da reivindicação 1, em que, pelo menos, uma câmara compreende uma abertura em uma ou ambas as extremidades proxxxaais e a extremidade distai da câmara, e em que o dispositivo compreende: pelo menos, um sistema de dois encaixes que compreende uma ficha externa configurada para ser posicionado dentro da pelo menos uma câmara, e um tampão interno configurado para ser posicionado dentro do tampão externo; e» pelo menos, uma vedação configurada para encerrar a abertura em uma ou ambas as extremidades próximais e a extremidade distai da câmara♦
3. 3, Dispositivo da reivindicação 1, compreendendo ainda uma aba não porosa ligada â rede de polipropíieno numa e/ou uma vedação para fechar a abertura, a vedação opcionalmente compreendendo um. grampo cirúrgico ou saturas cirurgieas„
4. 4, Dispositivo de qualquer reivindicação anterior, em que, pelo menos, uma porção da estrutura porosa é revestida com um ou irais materiais biodegradáveis que enchem os poros da estrutura porosa,
5. 5. Dispositivo de acordo com a reivindicação 4, em que os materiais biodegradáveis compreendem, pelo menos, um dos fatores de crescimento, um agente antifíbrôt. ico, um polímero e/e-a substâncias para estimular a angiogénese e a incorporação de tecido na, pelo menos, uma câmara porosa ::i!iiiiii|:: eiblf' em |||i men|f|ír aitá prfee da ||||: é rugosa para estimular a incorporação de tecido na pelo, menos, uma câmara porosa, i,.....|i:ppg|;l|:|;V|íii .ddllluiiliper· íeivlndlbag^ ál|l estrutura porosa compreende múltiplas câmaras que estão ligadas .late raiments e opcional mente compreendem, unta vedação comum para as câmaras múltiplas ou uma vedação para cada câmara,
6. 7, Dispositivo de acordo com a reivindicação G, em que a, pelo menos, uma. vedação é uma película de polímero que é soldada por ultrassons â estrutura porosa,
7. 8, Dispositivo de acordo com a reivindicação 2, em que o tampão exterior e o tampão interno compreendem, mecanismos de vedação complementares.
8. 9, Dispositivo da reivindicação 8, eia que a parede interior do tampão exterior compreende, pelo menos, uma protrnsão ao longo do comprimento do tampão exterior.
9. 10, Dispositivo de qualquer reivindicação anterior, esi que a estrutura porosa permite o crescimento de tecidos "vasGUláiás. ííip esqgantií^ib^ na ·§1#^|η·|:|3θ:||ί|η peio menos, urn sistema de encaixe numa matriz de coiagénio neovascuiari rada e em que a retirada do sistema de encaixe da câmara cria am espaço dentro da câmara que é encapsulada na matriz de colagénio neovascularizada. 11» Dispositivo de qualquer reivindicação anterior, em quef peio menos, uma parte da estrutura porosa é revestida com um ou ma is d.o fator de crescimento endotelial vascular íVEGP) , ura polímero elusnte de rârmaoo, colagério, t.ibronect.ina, proteínas do citoesquelefco de 11 piplilnà,' ;|§àq$i§i^ ãaíiÍ:#É;!!É^ (ví nils 1.1 oxano) ecopolimerspoly-etilenimina, fosfcri 1 eolma, poli {etí lenoglicol), poli (ácido láctico-glioõliço), poli (ácido láctico), polilridroxigenada e copolímeros, poli hidroxibutirato e copolímeros, polídis.xangna, pol.ianidri.dos, poli {aminoácidos) ), poli (orto ésteres), políésteres, oolagénío, gelatina, polímeros de celulose, quitocanas, alginates, fibronsctina, proteínas da matrí2 extracelular, vinculina, agar, agarose, ácido hiaiúrénico, ..raatrigel e suas combinações» 12» Dispositivo de acordo com a reivindicação 2, que compreende ainda um dispositivo de distribuição de células que compreende, pelo menos, um tubo de infusão celular configurado para ser posicionado dent.ro do tampão exterior:»
10. 13. Dispositivo de acordo com a reivindicação 12, em que o dispositivo de entrega de células compreende ainda um 'Íél|ppuÍbÍ5âr :áí|:l:taifip:ip5 extériilllllllllllll quando, pelo menos, um tubo de infusão de célula é inserido no tampão externo e opcionalmente em que o conector compreende um grampo para conectar ao tampão exterior e, opcionalmente, em que a fixação do conector ao tampão exterior permite que o conector e o tampão exterior sejam retraídos do dispositivo como uma única •un idade,
11. 14, Dispositivo de qualquer reivindicação anterior, em que a estrutura porosa compreende uma câmara, duas câmaras, três câmaras, quatro câmaras, cinco câmaras, seis câmaras, sete câmaras, oito câmaras era der ou maís ......................
12. 15, Dispositivo de acordo com a reivindicação 1, em que o dispositivo compreende células encapsuladas dentro da câmara,
13. 16, Dispositivo de qualquer reivindicação anterior, para utilização num método de transplante de células num corpo hospedeiro, compreendendo os passos de; a, fornecer um dispositivo implantava! para manter as células no corpo hospedeiro, o dispositivo implantave.1 compreendendo; uma estrutura porosa compreendendo, pelo menos, uma câmara que tem uma abertura em uma ou ambas as extremidades próximais e uma extremidade distai da câmara, a estrutura rígida com poros dimensionados para facilitar o crescimento de tecidos vasculares e conjuntivos no estrutura poroso; pelo menos, um sistema de dois conestores configurado para ser posicionado dentro da, peio menos, uma câmara; e, pelo menos, uma vedação 1|: :gia; ir-sá-.clM: I i j "M. jâbilide ãtólfft!! extremidade proximal e a extremidade distai da estrutura porosa; eis que, pelo menos, um sistema de dois conectores compreende um tampão externo configurado para ser posicionado dentro da, pelo menos, uma câmara, e um tampão interno configurado para ser posicionado dentro do tampão externo; b* implantação do dispositivo no corpo hospedeiro? c, manter o dispositivo no corpo hospedeiro até o dispositivo se infiltrar com. tecidos vasculares e conjuntivos; d. proporcionar art dispositivo de administração de células compreendendo, pelo menos, um tubo de; infusão de células carregado com ima preparação de células, o tubo de infusão de células configurado para ser posicionado dentro do tampão externo; e. aceder ao dispositivo implantado através de uma incisão cirúrgica e abrindo, pelo menos, um selo; f, retirar o tampão interno do sistema de duas derivações; g, inserir o tubo de infusão celular no tampão externo; fc. retirar o tampão exterior da, pelo menos, uma câmara e infundindo a câmara com a preparação celular; e i. fechar, pelo menos, um selo.
14. 17. Dispositivo de acordo com a reivindicação '16, para utilização num método de transplante de células num corpo hospedeiro, em que o método compreende ainda o passo de imagem da estrutura porosa antes da entrega de células. v.........v.lS.-,,....I>is.posltivo. de acordo com a reivindicação 16 ou 17, para utilização num método de transplante de células num corpo hospedeiro, em que a preparação de células compreende uma ou mais ilfcotas de células de Langerhans, células de Sertoli, células estaminais mesenquimais, células estaminais, células de cordão umbilical, células estaminais embrionár ias, cé1u1as genetioamente modificadas du linhas celulares e uma combinação delas.
15. 19. Dispositivo de acordo com a reivindicação 16, 1? ou 18, :t|é 'ÍP»dépl:ÍlbÍ!:!:·® num corpo hospedeiro, em. que a preparação d.e células compreende células doadoras alogénicas, xenogénicas, derivadas do paciente ou sinégicas >
16. 20. Dispositivo de qualquer das reivindicações .16--19, para utilização num método de transplante de células num corpo hospedeiro, em que a preparação de células compreende células ou .linhas celulares geneticamente modificadas.
17. 21. Dispositivo de qualquer uma das reivindicações 16-20, para utilização num método de transplante de células num corpo hospedeiro, em que as células compreendem ilhetas de células de Langerhans a Sertoli.
18. 22. Dispositivo de qualquer uma das reivindicações 16-21, !!!!!!!!!!!!!!!!l:|ara; "ufilizaçlilí de: til||i|?l:an:te:lde: ''déluias: num· corpo hospedeiro, em que a preparação de células compreende células encapsuladas,
19. 23. Dispositivo da reivindicação 15 ou o dispositivo para utilização de acordo com a reivindicação 22, em que as células sâo encapsuladas em algínato, hidrogel de polissacâr1do, quitosano, alteafco de cálcio ou bário, uma matriz em camadas de alginato e poli .11 sina, poli (etilenoglicol) fotopciimerlzável poli.rn.ero, um poliacrilato, metacrilato cie fcidrexietilo, metacrilato ide: 1111111.,1111¾ de ai lici;i:| ||3ti§: nipo j:ilgai|il::|||||l silicic ou uma polímembrana {cloreto de acrilenitrilo e cloreto de co-vinil).