RU2663470C2 - Способ стимулирования ангиогенеза с использованием генетически модифицированных клеток крови пуповины - Google Patents

Способ стимулирования ангиогенеза с использованием генетически модифицированных клеток крови пуповины Download PDF

Info

Publication number
RU2663470C2
RU2663470C2 RU2017116582A RU2017116582A RU2663470C2 RU 2663470 C2 RU2663470 C2 RU 2663470C2 RU 2017116582 A RU2017116582 A RU 2017116582A RU 2017116582 A RU2017116582 A RU 2017116582A RU 2663470 C2 RU2663470 C2 RU 2663470C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
umbilical cord
vegf
stimulating angiogenesis
cord blood
ang
Prior art date
Application number
RU2017116582A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2017116582A (ru
Inventor
Игорь Валерьевич Саматошенков
Юрий Александрович Челышев
Сергей Александрович Андреев
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Казанский государственный медицинский университет"
Игорь Валерьевич Саматошенков
Юрий Александрович Челышев
Сергей Александрович Андреев
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Казанский государственный медицинский университет", Игорь Валерьевич Саматошенков, Юрий Александрович Челышев, Сергей Александрович Андреев filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Казанский государственный медицинский университет"
Priority to RU2017116582A priority Critical patent/RU2663470C2/ru
Publication of RU2017116582A publication Critical patent/RU2017116582A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2663470C2 publication Critical patent/RU2663470C2/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/861—Adenoviral vectors

Abstract

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ стимулирования ангиогенеза, в котором в область ишемии вводят трансдуцированные комбинацией Ad VEGF + Ad Ang мононуклеарные клетки крови пуповины. Изобретение обеспечивает увеличение количества и размеров эндотелиальных клеток и может быть полезно при лечении различных видов ишемических поражений. 1 з.п. ф-лы, 1 пр.

Description

Изобретение относится к медицине, касается стимулирования ангиогенеза и может быть использовано в сердечно-сосудистой хирургии для лечения ишемии с использованием генно-клеточного материала.
В настоящее время ишемия, в частности хроническая ишемия нижних конечностей, лечится медикаментозным и оперативным путем, однако ни один из применяемых в практической медицине методов в полной мере не устраняет основную причину и не приводит к полному восстановлению микроциркуляции пораженной ткани. Так, по мнению ряда авторов, улучшение гемодинамики конечности хирургическим путем, возможна лишь в 70% всех случаев [Савельев, 1997].
Известно, что существуют способы введения ангиогенных генов для стимулирования ангиогенеза. Основу лечебной тактики ангиогенеза, предложенной М.
Figure 00000001
в 1993 г. [.
Figure 00000001
М., Schlenger К., Doctrow S. Therapeutic angiogenesis. Arch. Surg. 1993; 128: 423-9.], составляет стимулирование ангиогенеза в ишемизированных тканях под действием ангиогенных факторов роста, например при помощи VEGF. Данный ген можно вводить при помощи аденовируса (Ad VEGF) в виде инъекции в мышечную ткань, испытывающую ишемию, в виде прямой генной терапии. Согласно данным литературы, в условиях прямой генной терапии показано улучшение структуры и функции ишемизированной мышцы [Jazwa A, Tomczyk М, Taha НМ, Hytonen Е, Stoszko М, Zentilin L, Giacca М, Yla-Herttuala S, Emanueli С, Jozkowicz A, Dulak J. Arteriogenic therapy based on simultaneous delivery of VEGF-A and FGF4 genes improves the recovery from acute limb ischemia. Vascular Cell 2013, 5:13. doi: 10.1186/2045-824X-5-13.; Sanada F, Taniyama Y, Azuma J, Yuka I, Kanbara Y, Iwabayashi M, Rakugi H, Morishita R. Therapeutic Angiogenesis by Gene Therapy for Critical Limb Ischemia: Choice of Biological Agent. Immunol Endocr Metab Agents Med Chem. 2014; 14 (1): 32-39].
Известен способ введения комбинации генов в поврежденную нервную ткань. (Патент РФ C12N 15/79 (2006.01) №2459630) путем доставки в область повреждения спинного мозга прямым введением плазмидного вектора на основе двухкассетной плазмиды pBud-VEGF-FGF2, одновременно экспрессирующей комбинацию клонированных генов нейротрофических и ангиогенных факторов человека VEGF и FGF2). Однако этот способ имеет отношение к восстановлению нервной ткани, и не используется для стимулирования ангиогенеза.
Более близких аналогов к заявляемому изобретению обнаружено не было. Обнаруженные изобретения касаются восстановления функции нервной ткани.
Задачей предлагаемого изобретения является создание способа, который бы давал возможность эффективного стимулирования ангиогенеза для формирования нового сосудистого русла.
Поставленная задача решается предлагаемым способом стимулирования ангиогенеза путем введения трансдуцированных Ad VEGF + Ad Ang мононуклеарных клеток крови пуповины (МККП) в область ишемии.
Данные клетки вводят в область ишемии в объеме 0,2 мл клеток, с трансдуцированными генами VEGF + ANG, с общим количеством вирусных частиц в объеме 2×1010.
Заявляемый способ иллюстрируется следующими исследованиями: Данное исследование проводили на 30 особях крыс мужского пола линии Wistar массой 220-280 г. Все вмешательства соответствовали правилам, утвержденным локальным этическим комитетом при Казанском государственном медицинском университете. Животных содержали в пластмассовых клетках при температуре 18-20°C со свободным доступом к воде и пище. Хирургические манипуляции на крысах проводили после их наркотизирования путем внутрибрюшинной инъекции хлоралгидрата (Sigma) (80 мг/мл, 0,4 мл на 100 г). Ишемию задней конечности создавали путем наложения на бедренную артерию сразу у места отхождения от подвздошной артерии двух лигатур, которые плотно затягивали. Участок между лигатурами резецировали. После операции животные получали инъекцию 1 мл разведенного в физиологическом растворе антибиотика гентамицина в мышцу бедра на неоперированной ноге с целью профилактики послеоперационных инфекционных осложнений. Сразу после создания ишемии крысы получали трансдуцированные Ad VEGF + Ad Ang МККП, в объеме 60 мкл, в 4 точки в дистальную часть икроножной мышцы оперированной конечности, по 15 мкл в каждую точку, общая концентрация вирусных частиц, кодирующих VEGF и Ang 2×1010.
Примеры выполнения способа. Перед оперативным вмешательством животное наркотизировали внутрибрюшинной инъекции хлоралгидрата (Sigma) (80 мг/мл, 0,4 мл на 100 г). Операционное поле в области медиальной части голени и бедра очищали от шерсти. Ишемию задней конечности создавали путем наложения на бедренную артерию сразу у места отхождения от подвздошной артерии двух лигатур, которые плотно затягивали. Участок между лигатурами резецировали. После операции животные получали инъекцию 1 мл разведенного в физиологическом растворе антибиотика гентамицина в мышцу бедра на неоперированной ноге с целью профилактики послеоперационных инфекционных осложнений. Сразу после оперативного вмешательства после зашивания кожи крысы получали трансдуцированные Ad VEGF + Ad Ang МККП, в объеме 60 мкл, в 4 точки в дистальную часть икроножной мышцы оперированной конечности, по 15 мкл в каждую точку, общая концентрация вирусных частиц, кодирующих VEGF и Ang 2×1010. Результаты работы были оценены по количеству и среднему размеру эндотелиальных клеток, выявляемых на продольных срезах при помощи антител против CD31 и CD34- иммунопозитивных клеток, позволяющие идентифицировать эндотелиальные клетки как маркеры ангиогенеза. По сравнению с контрольной группой животных, получавших 60 мкл NaCl в дистальную часть икроножной мышцы в том же объеме и в те же точки, зарегистрировали значительное увеличение как количества эндотелиальных клеток, так и их размеров. Полученные данные позволяют утверждать, что у животных из группы Ad VEGF + Ad ANG МККП, произошли такие процессы как гипертрофия и гиперплазия эндотелиальных клеток, что можно трактовать как усиление ангиогенеза.
По сравнению с прямой генной терапией, предполагающей непосредственную инъекцию ДНК-содержащих векторов в организм, клеточно-опосредованная доставка терапевтических генов имеет очевидные преимущества. Главное из них, основанное на феномене адресной миграции клеток (хоуминг), состоит в потенциальной возможности обеспечить доставку генов к множественным очагам ишемии, наличие которых характерно для проявления большинства ишемических заболеваний. Другое преимущество генно-клеточной терапии связано с возможностью длительной продукции в области повреждения молекул стимуляторов регенерации в оптимальных дозах. Наконец, сами трансплантируемые клетки служат источником молекул-стимуляторов регенерации и молекул внеклеточного матрикса, поддерживающих рост новых сосудов.
Авторами впервые исследована и показана возможность эффективного стимулирования ангиогенеза для формирования нового сосудистого русла, что позволит эффективнее лечить такие заболевания как ишемия нижних конечностей, а так же в перспективе большинство сосудистых заболеваний, связанных со стенозом или окклюзией артериального русла вследствие атеросклероза- ишемическая болезнь сердца, хроническая ишемия головного мозга, путем создания нового коллатерального русла, или биологического шунтирования, основанного на применении генно-модифицированных стволовых клеток.

Claims (2)

1. Способ стимулирования ангиогенеза с использованием генетически модифицированных клеток крови пуповины, заключающийся в том, что в область ишемии вводят трансдуцированные комбинацией Ad VEGF + Ad Ang мононуклеарные клетки крови пуповины.
2. Способ стимулирования ангиогенеза по п. 1, заключающийся в том, что трансдуцированные комбинацией Ad VEGF + Ad Ang мононуклеарные клетки крови пуповины вводят в область ишемии в объеме 0,2 мл клеток с трансдуцированными генами VEGF + ANG с общим количеством вирусных частиц в объеме 2×1010.
RU2017116582A 2017-05-11 2017-05-11 Способ стимулирования ангиогенеза с использованием генетически модифицированных клеток крови пуповины RU2663470C2 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017116582A RU2663470C2 (ru) 2017-05-11 2017-05-11 Способ стимулирования ангиогенеза с использованием генетически модифицированных клеток крови пуповины

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017116582A RU2663470C2 (ru) 2017-05-11 2017-05-11 Способ стимулирования ангиогенеза с использованием генетически модифицированных клеток крови пуповины

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2017116582A RU2017116582A (ru) 2017-09-26
RU2663470C2 true RU2663470C2 (ru) 2018-08-06

Family

ID=59931034

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017116582A RU2663470C2 (ru) 2017-05-11 2017-05-11 Способ стимулирования ангиогенеза с использованием генетически модифицированных клеток крови пуповины

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2663470C2 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060165667A1 (en) * 2004-12-03 2006-07-27 Case Western Reserve University Novel methods, compositions and devices for inducing neovascularization
EA025142B1 (ru) * 2009-08-28 2016-11-30 Сернова Корпорэйнш Способ и устройство для клеточной трансплантации

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060165667A1 (en) * 2004-12-03 2006-07-27 Case Western Reserve University Novel methods, compositions and devices for inducing neovascularization
EA025142B1 (ru) * 2009-08-28 2016-11-30 Сернова Корпорэйнш Способ и устройство для клеточной трансплантации

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHO Y.H. et al. A novel way of therapeutic angiogenesis using an adeno-associated virus-mediated angiogeningene transfer. Exp Mol Med. 2007 Jun 30; 39(3): 412-8. *
CHO Y.H. et al. A novel way of therapeutic angiogenesis using an adeno-associated virus-mediated angiogeningene transfer. Exp Mol Med. 2007 Jun 30; 39(3): 412-8. MACK C.A. et al. Salvage angiogenesis induced by adenovirus-mediated gene transfer of vascular endothelial growth factor protects against ischemic vascular occlusion. J Vasc Surg. 1998 Apr; 27(4): 699-709. *
MACK C.A. et al. Salvage angiogenesis induced by adenovirus-mediated gene transfer of vascular endothelial growth factor protects against ischemic vascular occlusion. J Vasc Surg. 1998 Apr; 27(4): 699-709. *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2017116582A (ru) 2017-09-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4615064B2 (ja) 不完全な組織修復を治療するための組成物および低侵襲的方法
US8741282B2 (en) Method for treatment of tendinosis with platelet rich plasma
US20070014784A1 (en) Methods and Systems for Treating Injured Cardiac Tissue
US20070093748A1 (en) Methods and systems for treating injured cardiac tissue
Raimondo et al. Combined delivery of VEGF and IGF-1 promotes functional innervation in mice and improves muscle transplantation in rabbits
TW201117841A (en) Pharmaceutical composition for improving myocardial infarction
JP2016520560A (ja) 結腸切除なしに炎症性腸疾患を処置するための方法および組成物
JP6540797B2 (ja) コドン最適化組み換えプラスミド、末梢神経再生の刺激方法、及び損傷ヒト神経の治療様式
Souza et al. The no-touch technique of harvesting the saphenous vein for coronary artery bypass grafting surgery
JP2006232834A (ja) 組織損傷の治療のための方法及びキット
JP2009530411A (ja) 損傷心臓組織治療の方法と方式
RU2663470C2 (ru) Способ стимулирования ангиогенеза с использованием генетически модифицированных клеток крови пуповины
Yousaf et al. Extended islanded reverse sural artery flap for staged reconstruction of foot defects proximal to toes
US8852936B2 (en) Autologous lymph node transfer in combination with VEGF-C or VEGF-D growth factor therapy to treat lymphedema and to improve reconstructive surgery
Moscoso et al. Analysis of different routes of administration of heterologous 5-azacytidine–treated mesenchymal stem cells in a porcine model of myocardial infarction
CN113980144B (zh) 一种多肽类似物及其应用
Alexandrescu Angiosomes applications in critical limb ischemia
US9913832B2 (en) Accelerating thrombus resolution through augmentation of p53 activity
RU2703395C1 (ru) Способ комбинированной хирургической стимуляции неоангиогенеза хронической ишемии нижних конечностей
Zhu et al. Establishment of a rabbit model of coronary artery bypass graft and endothelial nitric oxide synthase gene transfection
RU2572798C1 (ru) Способ лечения коронарной недостаточности
RU2649498C1 (ru) Способ лечения ишемической ангиопатии сосудов нижних конечностей
Bilewska et al. Stem cell therapy for single ventricle congenital heart disease–current state and future directions
JP2009507522A (ja) 損傷のある心臓組織を処置する方法およびシステム
CN108939092B (zh) 肌肉细胞etv2基因表达促进剂在制备治疗肢端缺血性疾病的药物中的用途