PT2316473E - Utilização de calcitonina na osteoartrite - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "UTILIZAÇÃO DE CALCITONINA NA OSTEOARTRITE" A presente invenção refere-se a uma nova utilização de calcitonina em métodos de tratamento e/ou de prevenção da osteoartrite em mamíferos, particularmente humanos.

As calcitoninas, e. g. , calcitonina de salmão, de (Asu 1-7)-enguia ou humana, da invenção são compostos que são hormonas polipeptídicas de cadeia longa segregadas pelas células parafoliculares da glândula tiróide em mamíferos e pela glândula ultimobranquial de aves e peixes. A calcitonina é conhecida principalmente como um inibidor potente da reabsorção osteoclástica, que envolve a ligação de osteoclastos e degradação enzimática do osso. Além disso, foi verificado que existem efeitos da Calcitonina Intra-nasal de Salmão na Artrite Idiopática Juvenil em humanos (Siamopoulou A. et al., 2001, Calcif Tissue Int 69: 25-30) e na prevenção da erosão óssea e perda óssea na artrite reumatóide em humanos (Sileghem A., 1992, Annals of Rheumatic Diseases 51: 761-764). O processo de degradação associa síntese de várias proteases e metaloproteinases, activação de pró-enzimas inactivas e inibição de enzimas activas (Leloup G, 1994, J Bone Miner Res, 9, 891-902). A calcitonina é conhecida por induzir a retracção osteoclástica (Zheng MH, et al., 1992, Exper Mole Pathol, 57:105-115) e interferir com, pelo menos, alguns dos passos do processo enzimático da reabsorção óssea (Einhorn TA et al., 1991, Clin Orthop 262: 286-297). Existem alguns estudos descritos sobre os efeitos da calcitonina sobre a cartilagem 1 articular. Foi verificado in vitro que a calcitonina estimula a síntese de proteoglicano e colagénio na cartilagem epifisária animal (Baxter et al., 1984, Endocrinology 114:1196-1202), assim como na cartilagem de coelho e humana (Franchimont P, 1989, J Clin End Metab 69:259-266). O estudo da calcitonina no tratamento da osteoartrite experimental proporcionou resultados contraditórios. E. g. , foi verificado que a calcitonina previne a destruição da cartilagem em coelhos tratados com esteróides, meninsectomia parcial ou imobilização da articulação (Badurski JE et al; , 1991, Lab lnvest 49: 27-34), mas não foi observado qualquer efeito na cartilagem num outro modelo de meninsectomia (Colombo et al., 1983, Arthritis Rheum 26: 1132-1139). Além disso, está ainda a ser debatida a importância relativa das alterações da cartilagem e do osso na iniciação e progressão da osteoartrite. Nenhum estudo em humanos mostrou ainda, de acordo com o conhecimento das requerentes, a eficácia da calcitonina na osteoartrite.

De acordo com a presente invenção, foi agora surpreendentemente verificado que as calcitoninas de salmão, são úteis na prevenção e no tratamento da osteoartite em mamíferos, particularmente humanos. Em particular, a distribuição oral de calcitonina de salmão, como descrito na presente invenção, mostra esse efeito. A referida distribuição oral da calcitonina é geralmente o método de distribuição de eleição dado que é conveniente, relativamente fácil e geralmente indolor, resultando em maior aceitação pelo doente do que outros modelos de distribuição.

De acordo com as verificações particulares da presente invenção, é proporcionada: 2 1. Uma calcitonina de salmão na forma livre ou de sal para utilização num método para prevenir e/ou tratar osteoartrite num doente com necessidade desta, em que a calcitonina é distribuída oralmente numa composição compreendendo calcitonina de salmão e 5-CNAC e em que a referida composição compreende 1 mg de calcitonina de salmão. 2. A calcitonina de salmão na forma livre ou de sal para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a calcitonina é distribuída oralmente numa composição compreendendo a calcitonina de salmão e um sal dissódico de 5-CNAC e em que a referida composição compreende 1 mg de calcitonina de salmão. 3. Uma calcitonina de salmão para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a calcitonina de salmão é distribuída com uma dosagem eficaz de uma composição farmacêutica oral compreendendo calcitonina de salmão, pelo menos, um agente de diminuição do pH farmaceuticamente aceitável, pelo menos, um intensificador da absorção e um revestimento entérico. 4. Uma calcitonina de salmão para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a referida composição compreende 5-CNAC na forma micronizada. A presente descrição refere-se também a: 1.1 Um método para prevenir e/ou tratar a osteoartrite num doente com necessidade deste, compreendendo administrar ao referido doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de 3 calcitonina, e. g.f calcitonina de salmão na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável; 1.2 Um método para prevenir e/ou tratar osteoartrite num doente com necessidade deste, compreendendo administrar ao referido doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de calcitonina, e. g., calcitonina de salmão na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável, em que a quantidade terapeuticamente eficaz de calcitonina é distribuída oralmente numa composição compreendendo a calcitonina e um agente de distribuição para a calcitonina.

Na presente divulgação é também proporcionado: 1.3 Um método para prevenir e/ou tratar a osteoartrite num doente com necessidade deste, compreendendo administrar ao referido doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de calcitonina, e. g., calcitonina de salmão na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável, em que a quantidade terapeuticamente eficaz de calcitonina é distribuída oralmente numa composição compreendendo a calcitonina que é conjugada com uma molécula de polímero; 1.4 Um método de inibição da reabsorção e de normalização da renovação de osso subcondral num doente com necessidade deste, compreendendo administrar ao referido doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de calcitonina, e. g., calcitonina de salmão na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral 4 farmaceuticamente aceitável; 1.5 Um método de conservar e estimular a cartilagem através de um efeito directo ou indirecto sobre os condrócitos num doente com necessidade deste, compreendendo administrar ao referido doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de calcitonina, e. g., calcitonina de salmão na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável; 1.6 Um método de inibição da fosfolipase A2 e/ou da actividade da colagenase num doente com necessidade deste, compreendendo administrar ao referido doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de calcitonina, e. g., calcitonina de salmão na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável; 1.7 Um método de efeito estimulante sobre a síntese de glicosaminoglicanos e/ou proteoglicanos num doente com necessidade deste, compreendendo administrar ao referido doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de calcitonina, e. g., calcitonina de salmão na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável; 1.8 Um método de actuação sobre a não-homogeneidade na densidade ou rigidez do osso subcondral num doente com necessidade deste, compreendendo administrar ao referido doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de calcitonina, e. g., calcitonina de salmão na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de 5 distribuição oral farmaceuticamente aceitável; 1.9 Um método de actuação sobre o processo inflamatório, originando atenuações da dor no movimento e sintomas relacionados (e. g., rotação do joelho, ângulo de flexão do joelho, inchaço, rigidez) num doente com necessidade deste, compreendendo administrar ao referido doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de calcitonina, e. g., calcitonina de salmão na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável; 2.0 Um método para reduzir a alteração degenerativa na articulação num doente com necessidade deste, compreendendo administrar ao referido doente uma quantidade terapeuticamente eficaz de calcitonina, e. g., calcitonina de salmão na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável; 2.1 Um método tal como definindo acima, compreendendo a co-administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de calcitonina, e. g., calcitonina de salmão na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável e uma segunda substância farmacológica, sendo esta referida segunda substância um inibidor da reabsorção óssea, fármaco formador de osso ou fármaco redutor da dor na forma livre ou na forma de sal.

Num outro aspecto, é também divulgada uma gama particular de dosagem para uma calcitonina, e. g., calcitonina de salmão 6 que é eficaz e bem tolerada, i. e., segura para um doente tomar. É preferida uma gama entre 0,4 e 2,5 mg de calcitonina de salmão para um doente, e. g., humano, e. g., um humano médio com cerca de 70 kg. São mais preferidas doses de cerca de 1 mg, e. g., entre 0,8 e 1,2 mg. São também preferidas doses inferiores a 1 mg mas superiores a 0,4 mg. É ainda mais preferida uma dose de cerca de 1 mg, e. g., 1 mg. É muito preferida uma dose de cerca de 1 mg, e. g., entre 0,8 e 1,2 mg, administrada uma vez por dia, a um doente com necessidade desta. As composições farmacêuticas compreendendo as referidas doses, de acordo com a invenção, podem ser as composições como proporcionadas nos Exemplos, mas podem ser, de um modo preferido, composições orais, e. g., composições como definidas no Exemplo 8. O regime de dosagem pode ser uma vez por dia ou duas vezes por dia, de um modo preferido, uma de manhã e uma à noite. 2.2 Um método para prevenir e/ou tratar a osteoartrite num doente com necessidade deste, compreendendo administrar ao referido doente uma composição farmacêutica compreendendo entre 0,4 e 2,5 mg, de um modo preferido, entre 0,8 e 1.2 mg, de um modo muito preferido, cerca de 1 mg de uma calcitonina, e. g., calcitonina de salmão. 2.3 Uma composição farmacêutica compreendendo entre 0,4 e 2,5 mg, de um modo preferido, entre 0,8 e 1,2 mg, de um modo muito preferido, cerca de 1 mg de uma calcitonina, e. g., calcitonina de salmão. 2.4 A utilização de uma calcitonina, e. g., calcitonina de salmão, na preparação de um medicamento para o tratamento e/ou a prevenção da osteoartrite, em que a referida calcitonina é proporcionada numa composição farmacêutica 7 compreendendo entre 0,4 e 2,5 mg, de um modo preferido entre 0,8 e 1,2 mg, de um modo muito preferido, cerca de 1 mg de uma calcitonina, e. g., calcitonina de salmão. 2.5 Uma composição farmacêutica para utilização no tratamento e/ou na prevenção da osteoartrite compreendendo entre 0,4 e 2,5 mg, de um modo preferido, entre 0,8 e 1,2 mg, de um modo muito preferido, cerca de 1 mg de uma calcitonina, e. g., calcitonina de salmão.

As segundas substâncias farmacológicas adequadas podem incluir uma calcitonina de origem diferente, e. g., calcitonina de salmão, (Asu 1-7)-enguia ou humana, um análogo da calcitonina ou um seu derivado, uma hormona esteróide, e. g., um estrogénio, um agonista parcial do estrogénio ou uma combinação estrogénio-gestagénio, um SERM (Modulador do Receptor de Estrogénio Selectivo) e. g., raloxifeno, lasofoxifeno, TSE-424, FC1271, Tibolone (Livial®) , vitamina D ou um seu análogo ou PTH, um fragmento de PTH ou um derivado de PTH e. g., PTH (1-84), PTH (1-34), PTH (1-36), PTH (1-38), PTH (1-31)NH2 ou PTS 893, bisfosfonatos (e. g., aledroanato, risedronato, ácido zoledrónico, ibandronato) ; inibidores da protease, e. g., inibidor da catepsina, de um modo preferido, um inibidor da catepsina K, libertadores de PTH; SARM (moléculas receptoras de androgénio selectivas); inibidores de MMP (inibidores de metaloprotease), ranelato de estrôncio, inibidores de COX-2, e. g., lumiracoxib (Prexige®) , celecoxib (Celebrex®) , rofecoxib (Vioxx®) , valdecoxib (Bextra®) , etoricoxib (Arcoxia®) ou inibidores mistos de COX-1 e COX-2, e. g., diclofenac.

As expressões "co-administração" ou "administração combinada" ou semelhantes, como aqui utilizadas, pretendem abranger a administração dos agentes terapêuticos seleccionados a um único doente e pretendem abranger regimes de tratamento em que os agentes não são necessariamente administrados pela mesma via de administração ou ao mesmo tempo.

Na presente divulgação são também proporcionados: 3. Uma calcitonina, e. g., calcitonina de salmão (Asu 1-7)-enguia ou humana na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável, para utilização em qualquer método como definido sob 1.1 a 2.2 acima; ou 4. Uma calcitonina, e. g., calcitonina de salmão (Asu 1-7)-enguia ou humana na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável, para utilização na preparação de um medicamento em qualquer das indicações como definidas sob 1.1 a 2.2 acima; ou 5. Uma composição farmacêutica para utilização em quaisquer indicações como definidas sob 1.1 a 2.2 acima, compreendendo uma calcitonina, e. g., calcitonina de salmão, (Asu 1-7)-enguia ou humana na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável, em conjunto com um ou mais diluentes ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis consequentemente. 6. Uma combinação farmacêutica compreendendo: a) um primeiro agente que é uma calcitonina: e. g., 9 calcitonina de salmão, (Asu 1-7)-enguia ou humana na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável e b) um co-agente que é inibidor da reabsorção óssea, fármaco formador de osso ou agente de redução da dor, e. g., como divulgado acima. 7. Kit de componentes para utilização na prevenção e/ou no tratamento da osteoartrite, compreendendo o referido kit: a) um primeiro agente que é uma calcitonina: e. g., calcitonina de salmão, de (Asu 1-7)-enguia ou humana na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável e b) um co-agente que é inibidor da reabsorção óssea, fármaco formador de osso ou agente da reabsorção de redução da dor, e . g. , como divulgado acima. 0 termo "doente", como utilizado aqui, significa um doente com necessidade de tratamento ou de prevenção da osteoartrite ou de qualquer método como definido sob 1.1 a 2.2 acima, em que doente significa mamíferos, tais como roedores, vacas, porcos, cães, gatos e primatas, em particular, humanos. A expressão "combinação farmacêutica", como aqui utilizada, significa um produto que resulta da mistura ou combinação de mais de um ingrediente activo e inclui tanto combinações fixas como não-fixas dos ingredientes activos. A expressão "combinação 10 fixa" significa que os ingredientes activos, e. g., calcitonina de salmão e um co-agente, são ambos administrados a um doente simultaneamente na forma de uma única entidade de dosagem. A expressão "combinação não-fixa" significa que os ingredientes activos, e. g., calcitonina de salmão e um co-aente, são ambos administrados a um doente como entidades separadas, simultaneamente, paralelamente ou sequencialmente sem limites de tempo específicos, em que essa administração proporciona níveis terapeuticamente eficazes dos 2 compostos no organismo do doente.

De um modo preferido, a calcitonina, e. g., calcitonina, de salmão na forma livre ou na forma de sal farmaceuticamente aceitável, é co-administrada com um inibidor de protease, e. g., um inibidor da catepsina, e. g., um inibidor da catepsina K. A utilidade da calcitonina, e. g.r calcitonina de salmão na forma livre ou na forma de sal, de um modo preferido, numa forma de distribuição oral farmaceuticamente aceitável para utilização em qualquer método como definido sob 1.1 a 1.9, pode ser demonstrada em métodos de teste em animais assim como em clínica, por exemplo, de acordo com o método aqui de seguida descrito no Exemplo B.

Quando o agente farmacologicamente activo é calcitonina de salmão, a dosagem adequada irá, obviamente, variar dependendo, por exemplo, do hospedeiro e da natureza e da gravidade da patologia a ser tratada. No entanto, em geral, irão ser obtidos resultados satisfatórios sistemicamente com dosagens diárias de de cerca de 0,5 pg/kg a cerca de 10 pg/kg de peso corporal do animal, de um modo preferido, 1 pg/kg a cerca de 6 pg/kg de peso corporal. Os excipientes inactivos farmaceuticamente aceitáveis 11 que são utilizados na formulação da calcitonina, e. g., na formulação oral da calcitonina, podem incluir polímeros e compostos inactivos que, por exemplo, auxiliam na formulação ou na preparação da forma de dosagem oral sólida contemplada pela presente invenção ou que podem auxiliar a libertação da composição oral sólida no ambiente gastrointestinal. Os ingredientes farmaceuticamente inactivos, referidos acima, incluem opcionalmente, por exemplo, crospovidonas e povidonas, que podem ser qualquer crospovidona e povidona. A crospovidona é um homopolímero reticulado sintético de N-vinil-2-pirrolidona, também designado l-etenil-2-pirrolidinona, tendo um peso molecular de 1000000 ou superior. As crospovidonas comercialmente disponíveis incluem Polyplasdone XL, Polyplasdone XL-10, Polyplasdone INF-10 disponíveis de ISP, Kollidon CL, disponível de BASF Corporation. A crospovidona preferida é Polyplasdone XL. A povidona é um polímero sintético que consiste em grupos lineares de l-vinil-2-pirrolidinona tendo um peso molecular geralmente entre 2500 e 3000000. As povidonas comercialmente disponíveis incluem Kollidon K-30, Kollidon K-90F disponíveis de BASF Corporation e Plasdone K-30 e

Plasdone K-29/32, disponíveis de ISP. Como referido acima, as crospovidonas e povidonas estão comercialmente disponíveis. Em alternativa, estas podem ser sintetizadas por processos conhecidos. A crospovidona, a povidona ou suas combinação, estão geralmente presentes nas composições numa quantidade de 0,5 a 50 por cento em peso em relação ao peso total da composição farmacêutica global, de um modo preferido, numa quantidade de 2 a 25 por cento, de um modo mais preferido, 5 a 20 por cento em peso em relação ao peso total da composição farmacêutica.

Os agentes de distribuição úteis na presente formulação oral é o ácido N-(5-clorosaliciloil)-8-aminocaprílico (5-CNAC). 12 0 sal dissódico pode ser preparado a partir do solvato de etanol por evaporação ou secagem do solvato de etanol por métodos conhecidos na técnica para formar o sal dissódico anidro. A secagem é geralmente realizada a uma temperatura de cerca de 80 a 120 °C, de um modo preferido, de cerca de 85 a cerca de 90 °C e, de um modo muito preferido, de cerca de 85 °C. 0 passo da secagem é geralmente realizado a uma pressão de 26" Hg ou superior. O sal dissódico anidro contém geralmente etanol a menos de cerca de 5% em peso e, de um modo preferido, etanol a menos de cerca de 2% em peso, baseado em 100% do peso total do sal dissódico anidro. 0 sal dissódico do agente de distribuição pode também ser preparado por preparação de uma pasta do agente de distribuição em água e adicionando dois equivalentes molares de hidróxido de sódio, alcóxido de sódio aquosos ou semelhantes. Os alcóxidos de sódio adequados incluem, mas não estão limitados a, metóxido de sódio, etóxido de sódio e suas combinações. Um outro método adicional para preparar o sal dissódico é por reacção do agente de distribuição com um equivalente molar de hidróxido de sódio, para originar o sal dissódico. O sal dissódico pode ser isolado como um sólido por concentração da solução contendo o sal dissódico numa pasta espessa por destilação em vácuo. Esta pasta pode ser seca num forno em vácuo para obter o sal dissódico do agente de distribuição como um sólido. O sólido pode ainda ser isolado por secagem por pulverização numa solução aquosa do sal dissódico. Os agentes de distribuição podem ser preparados por métodos conhecidos na técnica, e. g., como referido acima, por métodos descritos nas Patentes US N° 5773647 e 5866536. Os solvatos de etanol, como descrito na documento WO 00/059863 referido acima, incluem, mas não estão limitados a, um complexo iónico de moléculas ou iões de solvente etanol com moléculas ou iões do sal dissódico do agente de distribuição. Tipicamente, o solvato 13 de etanol contém cerca de uma molécula ou ião de etanol para cada molécula de sal dissódico do agente de distribuição. 0 solvato de etanol do sal dissódico do agente de distribuição pode ser preparado por dissolução do agente de distribuição em etanol. Tipicamente, cada grama do agente de distribuição é dissolvida em cerca de 1 a cerca de 50 mL de etanol e geralmente, cerca de 2 a cerca de 10 mL de etanol. O agente de distribuição/solução de etanol é então feito reagir com um excesso molar de um sal contendo sódio, tal como um sal contendo monossódio, em relação ao agente de distribuição, i. e., para cada mole de agente de distribuição existe mais de uma mole de catiões de sódio, originando o solvato de etanol. Os sais monossódicos adequados incluem, mas não estão limitados a, hidróxido de sódio; alcóxidos de sódio, tais como metóxido de sódio e etóxido de sódio; e qualquer combinação dos anteriores. De um modo preferido, são adicionados, pelo menos, dois equivalentes molares do sal contendo monossódio à solução de etanol, i. e., por cada mole de agente de distribuição existem pelo menos cerca de duas moles de catiões de sódio. Geralmente, a reacção é realizada à temperatura de refluxo da mistura ou abaixo, tal como à temperatura ambiente. O solvato de etanol é então recuperado por métodos conhecidos na técnica, tais como a concentração da pasta em destilação atmosférica, arrefecimento da pasta concentrada e filtração do sólido. O sólido recuperado por ser então seco por vácuo para obter o solvato de etanol. Os hidratos dos sais dissódicos dos agentes de distribuição podem ser preparados por secagem do solvato de etanol para formar um sal dissódico anidro, como descrito acima e hidratando o sal dissódico anidro. De um modo preferido, é formado o mono-hidrato do sal dissódico. Dado que o sal dissódico anidro é muito higroscópico, forma-se o hidrato após exposição à humidade atmosférica. Geralmente, o passo de hidratação é realizado entre 14 cerca da temperatura ambiente até cerca de 50 °C, de um modo preferido, entre a temperatura ambiente até cerca de 30 °C e num ambiente com uma humidade relativa de pelo menos 50%. Em alternativa, o sal dissódio anidro pode ser hidratado com vapor de água. Os agentes de distribuição preferidos são ácido N-(S-clorosaliciloil)-8-aminocaprílico (S-CNAC) e os seus sais monossódicos e dissódicos, solvatos de etanol dos seus sais de sódio e mono-hidratos dos seus sais de sódio e quaisquer suas combinações. O agente de distribuição muito preferido é o sal dissódico de S-CNAC e o seu mono-hidrato. De um modo preferido, o sal dissódico está presente na quantidade de mais de 90% do peso em peso total do S-CNAC presente na composição. O agente de distribuição, 5 CNAC, é muito hidrossolúvel e quase totalmente, i. e., mais de 90%, absorvido pelo tracto gastrointestinal quer seja ingerido na forma micronizada ou grosseira. No entanto, foi verificado, surpreendentemente, que quando é utilizada uma forma micronizada de um dos agentes veículos na composição, a absorção do agente farmacologicamente activo da presente composição é mais completamente absorvido na corrente sanguínea. Consequentemente, a utilização de um agente veículo micronizado é um elemento necessário da presente invenção. Uma forma micronizada do agente veículo, que é utilizada na preparação da forma de dosagem oral sólida da presente invenção, é definida como um agente veículo que, quando adicionado à presente mistura de composição de agente farmacologicamente activo e ingredientes farmaceuticamente inactivos, tem um tamanho de partícula médio inferior a 40 micrómetros. Desejavelmente, o agente veículo da presente invenção tem uma forma micronizada que é definida como um tamanho de partícula médio inferior a 20 mícrones. De um modo mais interessante, o agente veículo para a presente invenção tem uma forma micronizada que é definida como um tamanho de partícula médio inferior a 10 mícrones. As formas micronizadas 15 do agente veículo da presente invenção podem ser preparadas pela sua trituração num moinho de trituração que seja aceitável para triturar ingredientes farmacêuticos e que seja capaz de triturar os ingredientes farmacêuticos e/ou agente veículo num tamanho de partícula micronizada fino e uniforme. Um exemplo desses moinhos de trituração é um Air Jet Mill Gem T® (Copley Scientific, Ltd., Nottingham, RU) 0 agente veículo finamente moído quer separadamente quer agente veículo finamente moído mais qualquer combinação de ingredientes adicionais finamente moídos da presente invenção podem ser peneirados, e. g., através um peneiro de crivo tendo as aberturas adequadas, de forma a permitir que passem apenas os ingredientes que têm o tamanho de partícula necessário e serem recolhidos para utilização na presente invenção. As composições farmacêuticas da presente invenção contêm tipicamente uma quantidade eficaz na distribuição de um ou mais agentes de distribuição, i. e., uma quantidade suficiente para distribuir o ingrediente activo para o efeito pretendido. Geralmente, o agente de distribuição está presente numa quantidade de 2,5% a 99,4% em peso, de um modo mais preferido, 25% a 50% em peso.

Como estabelecido nas reivindicações, é proporcionada uma utilização médica da calcitonina de salmão na forma livre distribuída como uma composição farmacêutica compreendendo calcitonina e um agente de distribuição para a calcitonina. O agente de distribuição da presente invenção é 5-CNAC. De um modo mais preferido, a referida composição farmacêutica compreende um agente de distribuição na forma micronizada.

Alternativamente, a calcitonina pode ser distribuída oralmente com outras tecnologias, tais como as descritas nos documentos WO 94/26778; US 5359030; US 5438040; US 5681811; 16 US 6191105; US 6309633; US 6380405; US 6436990; US 6458776; e US 6479692. Em resumo, essas formulações orais referem-se geralmente a composições de (poli)péptido e proteína de estabilizadas por conjugação.

Mais particularmente, essas formas de distribuição oral referem-se a um aspecto geral de composição para conjugar covalentemente complexos de calcitonina, em que a calcitonina é ligada covalentemente a uma ou mais moléculas de um polímero incorporando como uma sua parte integral uma parte hidrofílica, e. g., um polialquilenoglicol linear e em que o referido polímero incorpora uma parte lipofílica como uma sua parte integral. Num aspecto particular, essas formas de distribuição oral referem-se a uma composição de calcitonina fisiologicamente activa compreendendo um péptido fisiologicamente activo ligado covalentemente com um polímero compreendendo (i) uma parte polialquilenoglicol linear e (ii) uma parte lipofílica, em que o péptido, a parte polialquilenoglicol linear e a parte lipofílica estão dispostas conformacionalmente em relação entre si de forma a que o péptido fisiologicamente activo na composição de calcitonina fisiologicamente activa tem uma resistência intensificada à degradação enzimática in vivo, em relação à calcitonina fisiologicamente activa isolada (i. e., numa forma não conjugada isenta do polímero ligada a esta). Num outro aspecto, essas formas de distribuição oral referem-se a uma composição de calcitonina fisiologicamente activa de conformação tridimensional compreendendo uma calcitonina fisiologicamente activa ligada covalentemente com um complexo de polisorbato compreeendendo (i) uma parte polialquilenoglicol linear e (ii) uma parte lipofílica, em que a calcitonina fisiologicamente activa, a parte polialquilenoglicol linear e a parte lipofílica estão dispostas conformacionalmente em relação entre si de forma 17 a que (a) a parte lipofílica esteja disponível externamente na conformação tridimensional e (b) a calcitonina fisiologicamente activa na composição de calcitonina fisiologicamente activa tenha uma resistência intensificada à degradação enzimática in vivo, em relação à calcitonina fisiologicamente activa isoladamente. Num aspecto adicional, essas formas de distribuição oral referem-se a um complexo de calcitonina conjugada multiligando compreendendo uma parte cadeia principal do triglicérido tendo: uma calcitonina bioactiva ligada covalentemente com uma parte cadeia principal do triglicérido através de um grupo espaçador polialquilenoglicol ligado a um átomo de carbono da parte cadeia principal do triglicérido; e, pelo menos, uma parte ácido gordo ligada covalentemente quer directamente a um átomo de carbono da parte cadeia principal do triglicérido quer ligada covalentemente através de uma parte espaçadora polialquilenoglicol. Nesse complexo de calcitonina conjugada multiligando, os átomos de carbono d e B da parte bioactiva do triglicérido podem ter porções de ácido gordo ligadas por ligação covalente quer directamente a estas quer indirectamente ligadas covalentemente a estas através de partes espaçadoras polialquilenoglicol. Alternativamente, pode ser ligada covalentemente uma parte ácido gordo quer directamente quer através de uma parte espaçadora polialquilenoglicol aos carbonos a e d da parte cadeia principal do triglicérido, com a calcitonina bioactiva covalentemente a ser ligada ao carbono-13 da parte cadeia principal do triglicérido, quer sendo directamente ligada covalentemente a estas ou indirectamente ligada a esta através de uma parte espaçadora polialquileno. Nesse complexo de calcitonina conjugada multiligando, a calcitonina bioactiva pode ser vantajosamente ligada covalentemente com a parte cadeia principal modificada do triglicérido através de grupos espaçadores alquilo ou 18 alternativamente, outros grupos espaçadores aceitáveis, dentro do âmbito abrangente da invenção. Como utilizado neste contexto, a aceitabilidade do grupo espaçador refere-se a características de aceitabilidade específicas da aplicação, esféricas, composicionais e de utilização final. Em ainda um outro aspecto, essas formas de distribuição oral referem-se a um complexo de polisorbato contendo uma parte polisorbato incluindo uma cadeia principal de triglicérido e grupos de funcionalizantes, incluindo: (i) um grupo ácido gordo; e (ii) um grupo polietilenoglicol tendo uma parte fisiologicamente activa ligada covalentemente a este, e. g., uma parte fisiologicamente activa está ligada covalentemente a uma funcionalidade adequada do grupo polietilenoglicol.

Essa ligação covalente pode ser quer directa, e. g., a uma funcionalidade terminal hidroxilo do grupo polietilenoglicol ou alternativamente, a ligação covalente pode ser indirecta, e. g., por remate reactivamente do terminal hidroxilo do grupo polietilenoglicol com um grupo espaçador de funcionalidade terminal carboxilo, de forma a que o grupo polietilenoglicol rematado resultante tenha uma funcionalidade carboxilo à qual a parte fisiologicamente activa pode ser ligada covalentemente. Essas formas de distribuição oral referem-se num aspecto adicional a um complexo de calcitonina conjugado, estável, hidrossolúvel compreendendo uma calcitonina fisiologicamente activa ligada covalentemente a uma parte glicolípidica modificada com polietilenoglicol fisiologicamente compatível. Nesse complexo, a calcitonina fisiologicamente activa pode ser ligada covalentemente à parte glicolípidica modificada com polietilenoglicol fisiologicamente compatível por uma ligação covalente lábil a um grupo aminoácido de ramificação do polipéptido. A parte glicolípidica modificada com 19 polietilenoglicol fisiologicamente compatível pode compreender vantajosamente um polímero de polissorbato, e. g., um polímero de polissorbato compreendendo grupos éster de ácido gordo seleccionados do grupo consistindo em monopalmitato, dipalmitato, monolaurato, dilaurato, trilaurato, monoleato, dioleato, trioleato, monoestearato, diestearato e triestearato. Nesse complexo, a parte glicolípidica modificada com polietilenoglicol fisiologicamente compatível pode compreender, adequadamente, um polímero seleccionado do grupo consistindo em éteres polietilenoglicólicos de ácidos gordos e ésteres polietilenoglicólicos de ácidos gordos, em que os ácidos gordos, e. g., compreendem um ácido gordo seleccionado do grupo consistindo em ácido láurico, palmítico, oleico e esteárico. No complexo acima, a calcitonina fisiologicamente activa pode, a título de ilustração, compreender uma calcitonina seleccionada do grupo consistindo em insulina, calcitonina, ACTH, glucagina, somatostatina, somatotropina, somatomedina, hormona paratiróide, eritropoetina, factores de libertação hipotálmica, prolactina, hormonas de estimulação da tiróide, endorfinas, encefalinas, vasopressina, opióides de ocorrência não natural, superóxido dismutase, interferão, asparaginase, arginase, desaminase de arginina, desaminase de ribonuclease de adenosina, tripsina, quimiotripsina e papaína. Num outro aspecto, a presente invenção refere-se a uma forma de dosagem de administração oral para a mediação da deficiência em insulina, compreendendo um veículo farmaceuticamente aceitável e um complexo de insulina conjugada solúvel em água estável, compreendendo insulina ou pró-insulina ligadas covalentemente a uma parte glicolípidica modificada com polietilenoglicol fisiologicamente compatível.

Além disso, uma outra segunda forma de dosagem de distribuição oral alternativa que pode ser utilizada de acordo 20 com a invenção é uma tecnologia descrita nos documentos WO 97/33531; US 5912014 e US 608618. Resumidamente, essa forma de distribuição oral adicional protege a calcitonina do ambiente acidico e das enzimas digestivas que esta passa através do estômago e intestino e facilita a sua entrada na corrente sanguinea. Uma vez estando na corrente sanguínea em segurança, a calcitonina pode exercer o seu efeito terapêutico. Essa forma de distribuição oral é, e. g., uma composição farmacêutica para distribuição oral de calcitonina de salmão compreendendo: (A) uma quantidade terapeuticamente eficaz da referida calcitonina de salmão; (B) pelo menos um agente de diminuição do pH farmaceuticamente aceitável; (C) pelo menos um intensificador da absorção eficaz para promover a biodisponibilidade da referida calcitonina de salmão; e (D) um revestimento entérico; em que o referido agente de diminuição do pH está presente na composição farmacêutica numa quantidade que, se adicionado a 10 mililitros de solução aquosa de bicarbonato de sódio 0,1 M, irá ser suficiente para baixar o pH da referida solução para não mais de 5,5. A composição farmacêutica, em que o referido revestimento entérico está presente num peso que não é mais de 20% do peso do remanescente da referida composição farmacêutica, excluindo o referido revestimento entérico. A composição farmacêutica acima, em que o referido revestimento entérico está presente num peso que não é mais de 5-15% do peso do remanescente da referida composição farmacêutica excluindo o referido revestimento entérico.

As composições farmacêuticas com as quais é mostrada a utilidade da calcitonina no tratamento da osteoartrite, podem ser proporcionadas como uma cápsula incluindo uma cápsula de gel mole, comprimido, comprimido oval, supositório ou outra forma sólida de dosagem oral, todas as quais podem ser preparadas por 21 métodos conhecidos na técnica.

As composições farmacêuticas sólidas da presente invenção podem se preparadas por trituração inicial quer do agente veiculo quer do agente veiculo com qualquer combinação dos ingredientes adicionais da presente composição num tamanho de partícula micronizada. 0 agente veículo micronizado ou o agente veículo micronizado mais ingredientes adicionais da presente invenção micronizados podem ser processados adicionalmente por métodos convencionais, e. g., por combinação de uma mistura do agente activo ou dos agentes activos, agente de distribuição, crospovidona ou povidona e outros ingredientes, amassando e enchendo em cápsulas ou em lugar do enchimento em cápsulas, moldagem seguida por compressão adicional ou compressão-moldagem para originar comprimidos. Além disso, pode ser formada uma dispersão sólida por métodos conhecidos seguidos por processamento adicional para formar um comprimido ou uma cápsula.

Os exemplos seguintes servem para ilustrar adicionalmente a invenção e devem ser facilmente entendidos por um comum especialista na técnica. Os exemplos não pretendem ser limitantes da presente invenção de qualquer forma. 22

Exemplos A. Exemplos de Formulação EXEMPLO 1: Formulação 1 (3 lotes)

Preparação de 5-CNAC Micronizado: É adicionado 5-CNAC grosseiro, que se destina a ser micronizado, a um moinho a jacto (Air Jet Mi 11 Gem T® Copley Scientific , Ltd., Nottingham, RU) utilizando um moinho a jacto de leito fluidizado cerâmico O co com 8 cm de diâmetro, N2 a 6 bar, bocais de 0,5 mm com alimentação manual de cerca de 700 g/h. O 5-CNAC grosseiro é moído a jacto e amostrado periodicamente ao microscópio com medições com régua de referência para identificar quando é obtido o tamanho médio de partícula micronizada pretendido. São moídos três lotes diferentes para criar lotes de 6 um, 35 um e 46 um. É então realizado o peneiramento individual dos lotes micronizados utilizando um moinho de peneira cónica (Quadro Comil, Quadro Engineering Incorporated 613 Colby Drive,

Waterloo, Ontário, Canada N2V 1A1) com uma peneira cónica U 10, de 813 um, misturador redondo, operando a 1500 upm com um débito de cerca de 150 kg/h.

Formulação 1-3. Formulação de Calcitonina de Salmão com 5-CNAC com Diferentes Tamanhos de Partícula 23

Ingrediente Quantidade (mg) Percentagem (%)

Calcitonina de Salmão 1 0,25 5-CNAC micronizado 228 57 Avicel PH102® 147 36, 75 Crospovidona, NF 20 5 Estearato de Magnésio 4 1 Total 400 100

Preparação da Formulação 1: São preparados três lotes diferentes de comprimidos utilizando os três diferentes lotes de 5-CNAC dissódico micronizado, tendo um lote de comprimidos um tamanho de partícula médio de 5-CNAC dissódico de 46 mícrones (Lote A) , tendo um segundo lote de comprimidos um tamanho de partícula médio de 5-CNAC dissódico de 6 mícrones (Lote B) e tendo um terceiro lote de comprimidos um tamanho de partícula médio de 5-CNAC dissódico de 35 mícrones (Lote C). São combinadas 0,50 g de calcitonina de salmão, pré-peneirada através de uma peneira com crivo 40, 57 g de sal de 5-CNAC dissódico micronizado, peneirado através de uma peneira com crivo 35 e 10 g de Polyplasdona XL (crospovidona, NF, International Specialty Products, 1361 Alps Road, Wayne, New Jersey, 07470, EUA) num frasco de 500 mL e são misturadas utilizando uma misturadora Turbula, durante 100 rotações, a uma velocidade de 46 rpm. São adicionadas 57 g de sal de 5-CNAC dissódico adicionais, peneiradas através de uma peneira com crivo 35 e 36,75 g de Avicel PH 102® ao frasco, durante 500 rotações, a uma velocidade de 46 rpm. São adicionadas ao frasco 36,75 g adicionais de Avicel PH 102® e são misturadas, durante 100 rotações adicionais, a uma velocidade de 46 rpm. São peneiradas 4,0 g de estearato de magnésio para o interior do 24 frasco utilizado uma peneira com crivo 35 e são misturadas durante 1 minuto, a uma velocidade de 46 rpm. A mistura final é comprimida em comprimidos utilizando uma prensa de comprimidos Manesty B3B. 0 peso do comprimido é de aproximadamente 400 mg. A biodisponibilidade dos comprimidos criados no Exemplo 1 pode ser testada como se segue: EXEMPLO 2

Administração a Primatas

Os comprimidos são preparados como no Exemplo 1 utilizando três lotes diferentes de 5-CNAC dissódico micronizado, tendo um lote de comprimidos um tamanho de partícula médio de 5-CNAC dissódico de 46 mícrones (Lote A) , tendo um segundo lote de comprimidos um tamanho de partícula médio de 5-CNAC dissódico de 6 mícrones (Lote B) e tendo um terceiro lote de comprimidos um tamanho de partícula médio de 5-CNAC dissódico de 35 mícrones (Lote C). Os comprimidos preparados a partir de cada um dos três diferentes lotes são administrados aos mesmos quatro macacos Rhesus, separadamente em dias diferentes, como se segue:

Os macacos Rhesus ficaram em jejum durante a noite anterior à dosagem e são amarrados em cadeiras, totalmente conscientes, ao longo da duração do período de estudo. É administrado um comprimido do Lote A ou Lote B ou Lote C a cada macaco através de um tubo de alimentação forçada, seguido por 10 mL de água. São recolhidas amostras de sangue dos macacos Rhesus imediatamente antes da administração e às 0,25, 0,5, 0,75, 1, 25 1,5, 2, 3, 4, 5 e 6 horas após a administração. É doseado um comprimido de cada um dos restantes dois lotes de comprimidos e são recolhidas amostras de sangue de forma semelhante mas em dias distintos para cada um dos lotes de comprimidos remanescentes. É determinada por radioimunoensaio a calcitonina de salmão plasmática resultante para cada dose e para cada macaco. Para cada macaco, são calculados a calcitonina de salmão no plasma do primata (SCt) para um lote e um período de tempo, as concentrações médias de SCt para todos os macacos para um lote e um período de tempo, o Desvio Padrão (SD) das concentrações plasmáticas de SCt para um lote e um período de tempo e Erro Padrão da Média (SEM) para concentrações plasmáticas de SCt para todos os macacos para um lote e um período de tempo e descritos nas Tabelas 1, 2 e 3, como se segue.

TABELA 1 LOTE A: TAMANHO MEDIO DE PARTÍCULA DE 5-CNAC DE

46 MICRÓMETROS

Concentrações Único (200 mg Plasmáticas 5-CNAC + 1 de Calcitonina (SCt) de Salmão mg SCt) para o Macaco Rhesus) [pg/mL] (Comprimido Oral N° do Animal 0 0,25 0,50 0,75 Tempo [horas] 1 1,5 2 3 4 5 6 1 0,0 17, 8 91,7 279,7 449,2 278,8 48,0 10,5 5,3 3,3 0,0 2 0,0 117, 4 535, 0 430,8 981,4 1718,0 2396,4 719,5 253,6 102,1 62,9 3 0,0 113,9 754,5 1502,0 2351,0 2066,0 2684,4 1310,0 649,6 280,6 156,5 4 0,0 46, 0 127, 0 425,5 765,5 1102,0 1599,0 1022,0 419,3 87, 0 23,4 Média 0,0 73, 8 377, 1 659,5 1136,9 1291,2 1682,0 765,5 332,0 118,3 60,7 SD 0,0 49, 7 322,2 566, 0 838,4 783,8 1182,1 558,1 271,6 116,6 68,9 SEM 0,0 24, 9 161, 1 283, 0 419,2 391,9 591, 0 279, 0 135, 8 58,3 34,5 Limite inferior de Quantificação (LLOQ) =2,5 pg/mL, concentrações abaixo do foram ajustadas para zero para a Tabela 1 LLOO 26

TABELA 2 LOTE B: TAMANHO MÉDIO DE PARTÍCULA DE 5-CNAC DE

6 MICRÓMETROS

Concentrações Plasmáticas de Calcitonina (SCt) Oral Único (200 mg 5-CNAC + 1 mg SCt) de Salmão ([pg/mL] (Comprimido para o Macaco Rhesus N° do Tempo [horas] Animal 0 0,25 0,50 0,75 1 1,5 2 3 4 5 6 1 0, 0 265, 6 315,8 245, 6 357, 2 1927,0 3010,0 863,2 139, 4 48,5 20,8 2 0, 0 607, 0 777,0 1336,0 1602,0 4146,0 7521,0 2681,0 420,8 73,9 43,2 3 0,0 80,9 225,5 325,6 655,6 1478,0 3979,0 2775,0 520,2 91,5 41,3 4 0,0 286,4 155,3 237, 7 241, 0 269,7 294,2 321,0 179,8 67,5 13,6 Média 0,0 310,0 368,4 536,2 714, 0 1955,2 3701,1 1660,1 315, 1 70,4 29,7 SD 0,0 218,5 280,2 534, 7 617,2 1619,6 2986,3 1253,5 184, 8 17, 8 14, 8 SEM 0,0 109,2 140, 1 267,3 308,6 809,8 1493,1 626,7 92,4 8,9 7,4 Limite inferior de quantificação (LLOQ) = 2,5 pg/mL, concentrações abaixo do LLOQ foram ajustadas para zero para a Tabela 2

TABELA 3 LOTE C: TAMANHO MEDIO DE PARTÍCULA DE 5-CNAC DE

35 MICRÓMETROS

Concentrações Plasmáticas de Calcitonina (SCt) de Salmão ([pg/mL] Oral Único (200 mg 5-CNAC + 1 mg SCt) para o Macaco Rhesus) (Comprimido N° do Animal 0 0,25 0,50 0,75 Tempo [horas] 1 1,5 2 3 4 5 6 1 0,0 36,1 94, 7 428,0 739,4 2568,0 4025,0 1348,0 499,6 218,4 98, 1 2 0,0 10,9 55, 0 168,9 248,2 507,3 654, 0 434, 8 177,3 68,8 38,9 3 0,0 172,3 336,6 409,5 584,9 1487,0 2087,0 1479,0 162,0 52, 0 17,2 4 0,0 7,9 46,9 208,1 390,1 1237,0 2347,0 1342,0 192,3 42,3 19,2 Média 0,0 56,8 133,3 303,6 490,7 1449,8 2278,3 1151,0 257, 8 95, 4 43,4 SD 0,0 78,0 137,1 134, 1 215, 8 853,5 1382,1 481,6 161, 7 82,7 37,8 SEM 0,0 39,0 68,6 67, 1 107,9 426,7 691, 1 240,8 80,8 41, 4 18,9 Limite inferior de quantificação (LLOQ) = 2,5 pg/mL, concentrações abaixo do LLOQ foram ajustadas para zero para a Tabela 3 27 EXEMPLO 3: Preparação das Formulações 2-4 (apenas para fins de referência) Alternativamente, são proporcionadas formulações adicionais:

Formulação 2:

Ingrediente Quantidade (mg) sCT 0,25 5-CNAC (micronizado) 28,5 Avicel PHI02 238,25 Crospovidona XL 15 Pluronic F68 3 Cab-O-Sil 3 Talco 6 Estearato de Mg 6 Total 300

Formulação 3:

Ingrediente Quantidade (mg) sCT 0,5 5-CNAC (micronizado) 28,5 Avicel PH102 238 Crospovidona XL 15 Pluronic F68 3 Cab-O-Sil 3 Talco 6 Estearato Mg 6 Total 300 28

Formulação 4:

Ingrediente Quantidade (mg) sCT 0,5 5-CNAC (não-micronizado) 28,5 Avicel PH102 238 Crospovidona XL 15 Pluronic F68 3 Cab-O-Sil 3 Talco 6 Estearato Mg 6 Total 300 acima é vez que existem 0 processo para a preparação das formulações semelhante ao do descrita no Exemplo 1. No entanto, uma existem mais alguns componentes para a fórmula actual, alguns desvios que são descritos abaixo: peneira 1. Pré-pesar 0,3 g de sCT, passar sCT através de com crivo N° 60 2. Pesar 0,25 g de sCT DS peneirada adequado durante 3. Misturar sCT e Crospovidona num recipiente utilizando uma Misturadora Turbula, misturar 10 minutos 4. Passar através de peneira com crivo N° 45 29 5. Adicionar 5-CNAC à mistura do passo N° 3, misturar durante 10 minutos 6. Passar através de peneira com crivo N° 35 7. Adicionar metade de Avicel à Mistura N° 5, misturar durante 10 minutos 8. Passar através de peneira com crivo N° 35 9. Adicionar Avicel, Pluronic F68 e Cab-O-Sil remanescentes e misturar durante 20 minutos 10. Adicionar Talco e Estearato de Mg na mistura acima e misturar durante 2 minutos

Todos os equipamentos utilizados são os mesmos como descritos no Exemplo 1. EXEMPLO 4: Preparação da Formulação 5: A formulação alternativa é apresentada resumidamente abaixo: são combinados 0,502 de calcitonina de salmão, pré-peneirada através de uma peneira de crivo 40, 120 g de sal dissódico de 5-CNAC, pré-peneirado através de uma peneira de crivo 35 e 20 g de Polyplasdona XL (crospovidona, NF) num frasco de 500 mL e são misturados com uma misturadora Turbula, durante 2 minutos, a uma velocidade de 46 rpm. São adicionadas ao frasco mais 125,4 g de sal dissódico de 5-CNAC, pré-peneirado através de uma peneira com crivo 35 e 32,5 g de Avicel PH 102 e são 30 misturadas durante um período de 8 minutos a uma velocidade de 46 rpm. São adicionadas ao frasco mais 32,5 g de Avicel PH 102 ® e são misturadas, durante 5 minutos, a uma velocidade de 46 rpm. São peneiradas 4,0 g de estearato de magnésio para o interior do frasco utilizado uma peneira de crivo 35 e são misturadas, durante 1 minuto, a uma velocidade de 46 rpm. A mistura final é comprimida em comprimidos utilizando uma prensa de comprimidos Manesty B3B. 0 peso do comprimido é de aproximadamente 400 mg. EXEMPLO 5: Preparação da Formulação 6: (apenas para fins de referência)

Uma formulação alternativa compreendendo calcitonina de salmão adequada para administração nasal:

Quantidade de Ingrediente (por mL) 1) Calcitonina de salmão (ingrediente activo) 0,1375 mg excesso de 10% 0,01375 mg 0,15125 mg 7, 5 mg 0,1 mg 2) NaCl 3) Cloreto de benzalcónio 4) HC1 (1 N) adicionado a pH 3,7 5) Água destilada para um volume final de 1,0 mL.

Os componentes 1 a 3 são combinados sob protecção de gás nitrogénio (numa escala para produzir um volume final de 2500 mL) de forma convencional, com 10% de calcitonina de salmão adicionada para permitir perda na filtração. É depois adicionado 4) para levar o pH a 3,7 e é adicionada água destilada para um volume final de 2500 mL. A solução obtida é filtrada (e. g., utilizando um filtro de 0,2 mu.m) para originar uma composição 31 adequada para aplicação nasal e para enchimento de um dispensador nasal de pulverização com um volume de solução de 2 mL. EXEMPLO 6: Preparação da Formulação 7: (apenas para fins de referência) São preparados supositórios contendo 300 I.U. (Unidades Internacionais) de calcitonina de salmão de acordo com, e. g., o documento US 5149537 contendo a seguinte composição por supositório:

Ingrediente Mg/Supositório Calcitonina de Salmão (300 I.U.) 0,0692. sup.+ (1 mg de substância contém 4767 I. U. (utilizada uma média de 10%) Ácido cítrico anidro 00 r- o Di-hidrato de citrato trissódico 0,50 Manitol 48,615 Taurocolato de sódio 30,0 Base de supositório A 1420,0 1500 mg

Como base de supositório A pode ser utilizada manteiga de cacau. É preferido utilizar bases de supositório sintéticas ou semi-sintéticas. Estas podem ser gorduras insolúveis em água, e. g., glicéridos (mono, di e/ou tri) de ácidos gordos, e. g. , preparadas a partir de óleo de coco ou óleo de palma. São preferidos glicéridos de ácido gordo de C.sub.10-18 de 32 cadeia linear, convenientemente saturados. São exemplos Witepsol (Marca Comercial Registada), e. g., Witepsol série H, disponível de Dynamit Nobel, W. Alemanha; Suppocire (Marca Comercial Registada), e. g., Suppocire AM ou AS2, disponível de Gattefosse, França e Novata (Marca Comercial Registada), e. g., Novata BD, disponível de Henkel GmbH, W. Alemanha.

Alternativamente, podem ser utilizados álcoois Guerbet e bases de supositório hidrossolúveis, tal como polietilenoglicol.

De um modo preferido, a base de supositório tem uma baixa gama de fusão, e. g., 30 a 36 °C.

Processo de preparação a) Preparação do granulado (para 3500 doses) São misturadas 0,2423 g de calcitonina, 2,73 g de ácido cítrico, 1,75 g de sal trissódico no estado seco e dissolvidas em 14,0 g de água. São adicionadas 170,3 g de manitol peneirado (AS 700 micrones, WD 120 micrones) A massa é amassada é peneirada (AS 1,600 micrones, WD 450 micrones). O pó desaglomerado é seco a 40 °C, durante 25 minutos e peneirado (AS 450 micrones, AS 120 micrones) b) Adição de intensificador e moldagem (para 3000 doses) São misturadas 150 g de pó obtido no passo a) e 90 g de taurocolato de sódio moído, peneiradas (AS 250; WD 100 micrones) e misturadas novamente. A mistura é adicionada a 4260 g de base 33 de supositório A a 38 °C. É realizada homogeneização (aparelho Polyton, velocidade ajustada em 4) durante 3 minutos. A massa é transferida a 33 °C, para um recipiente pré-aquecido numa máquina de preparação de supositórios (BONAPACE).

Os supositórios são moldados a uma temperatura de 33 a 35 °C em folha de polivinilcloreto neutro (ou folha de alumínio) em doses de cerca de 1,5 mL e 1,5 g de peso. 0 arrefecimento é realizado com uma corrente de ar a 20 °C. Origina 2590 supositórios. Tempo de desintegração 6 minutos. Ponto de fusão 34,9 °C. Dureza 81 N a 20 °C, pH em água 4,2. B. Exemplo mostrando a eficácia da calcitonina na osteoartrite:

Exemplo 7: Ensaio Clinico São incluídos 36 doentes osteoartríticos concluindo o ensaio, num estudo paralelo de 12 semanas (84 dias) duplamente cego, controlado com placebo, monocentro. O objectivo é determinar, in vivo, os efeitos de uma formulação oral de calcitonina sobre marcadores bioquímicos de osso, cartilagem e metabolismo sinovial na osteoartrite humana. Os doentes são divididos em três grupos: dois grupos tratados com calcitonina oral quer 0,5 mg quer 1 mg uma vez por dia e um grupo de controlo recebendo um placebo.

Os critérios de inclusão são (tabela 4): • Mulheres ou com mais de 55 anos de idade ou com mais de 50 anos de idade e, pelo menos, 5 anos em menopausa (natural 34 ou cirúrgica)

Homens com mais de 50 anos de idade. Os que estão a ter coito com uma mulher que não esteja na pós-menopausa irão ter que utilizar um contraceptivo de barreira durante toda a duração do estudo e prosseguindo durante 4 semanas após a conclusão do estudo.

Doentes sofrendo de osteoartrite activa na anca e/ou no joelho. É obrigatória hiperactividade da articulação doente documentada em cintigramas ósseos recentes (= 6 meses antes do inicio do estudo).

Doentes com, pelo menos, dor moderada no movimento activo (superior ou igual a 10 na escala de LEQUESNE (ver MG Lequesne, 1997, J of Rheumatology 24: 779-781)

Doentes que leram a folha de informação e assinaram o formulário de consentimento.

Os critérios de exclusão são (tabela 5):

Doentes sofrendo de osteoartrite aguda e necessitando de intervenção de artroplastia durante a duração do estudo ou requerendo imobilização da articulação durante várias semanas antes ou durante o período do estudo.

Doentes sofrendo de doenças de depósito de cristais ou com defeitos hereditários ou congénitos conhecidos.

Doentes sofrendo de doenças hepáticas, renais, cardiovasculares, psiquiátricas, endócrinas e/ou hematológicas clinicamente significativas.

Doentes sofrendo de qualquer outra doença sistémica ou local considerada ser incompatível com o presente protocolo pelo Investigador.

Doentes com valores de laboratório anormais considerados como clinicamente significativos.

Doentes que receberam qualquer injecção intra-articular ou administração sistémica de corticoesteróides durante as 8 semanas antes do início do estudo.

Doentes com uma história conhecida de abuso de álcool e/ou de drogas ou os improváveis de cooperarem com o Investigador de acordo com o protocolo do estudo.

Os pontos terminais do estudo são (tabela 6):

Os pontos terminais primários do estudo são os níveis circulantes dos marcadores humanos do metabolismo da cartilagem, sinóvio e osso.

Os pontos terminais secundários do estudo são a eficácia e tolerabilidade do tratamento como o fármaco, como avaliado pelo doente e pelo Investigador.

Adicionalmente, avaliações de segurança consistem na monitorização e registo de todos os eventos adversos e eventos adversos graves, monitorização regular dos valores da hematologia, química do sangue e urina, medições regulares dos sinais vitais e o desempenho em exames 36 físicos. O processo do estudo: Após um período de eliminação pré-tratamento de 2 semanas, durante as quais apenas é permitida a ingestão de paracetamol na dose máxima diária de 3000 mg, cada doente é aleatoriamente atribuído à ingestão quer de placebo quer de uma das duas dosagens da formulação oral de calcitonina. Durante o período de tratamento de 12 semanas, o doente está autorizado a tomar paracetamol em caso de necessidade numa dose diária máxima de 3000 mg.

Os pontos temporais de avaliação dos doentes são (tabela 7): • Visita 1: dia -14: Visita de triagem. Início do período de eliminação. • Visita 2: dia 0: Visita de linha base. Início do tratamento. • Visita 3: dia 14: 2 semanas de tratamento concluídas. • Visita 4: dia 42: 6 semanas de tratamento concluídas. • Visita 5: dia 84: Visita final. 12 semanas de tratamento concluídas.

Os tipos de avaliações (tabela 8): • Nas visitas 2, 3, 4 e 5, foram recolhidas amostras da segunda urina em jejum da manhã assim como plasma, soro e fluído sinovial (se existente) e analisadas para marcadores de metabolismo da cartilagem, sinóvio e osso por 37 imunoensaios específicos. São registados os eventos adversos nas visitas 3, 4 e 5.

Uma ou mais articulações (joelho ou anca) são avaliadas pelo questionário de LEQUESNE na visita 1 (visita de triagem) e documentados como elegíveis para a selecção na visita seguinte, com base de intensidade da dor sob movimento activo. Na visita 2 (visita de linha de base), estas articulações elegíveis são reavaliadas e é seleccionada a articulação mais dolorosa em que a intensidade da dor é igual ou superior a 10 no questionário de LEQUESNE, como articulação alvo. A eficácia do fármaco na articulação alvo é realizada com base na avaliação da intensidade da dor entre as visitas 2 e 5 (em relação à intensidade da dor na visita 1) por um exame clínico e pelo questionário de LEQUESNE.

No que respeita à avaliação da eficácia do tratamento, é considerada a quantidade de medicação de emergência (paracetamol) tomada pelo doente durante o período de 12 semanas de tratamento. São adicionalmente a eficácia do fármaco e a tolerabilidade avaliadas e o doente nas visitas 3, 4 e 5 através de duas escalas VAS distintas (ver Huskinson E.C., 1974, The Lancet: 1127-1131) 38

Exemplo 8: tratamento de 3 meses com calcitonina de salmão oral suprime produtos de degradação de colagénio do tipo II urinário em mulheres em pós-menopausa

Indivíduos e Métodos: A população em estudo consiste em 152 mulheres dinamarquesas geralmente saudáveis em pós-menopausa com 55-85 anos de idade, que tenham estado em pós-menopausa durante, pelo menos, 5 anos. As mulheres receberam tratamento com sCT doseado oralmente diariamente (0,15, 0,4, 1,0 ou 2,5 mg) (ver abaixo as composições farmacêuticas) combinado com molécula excipiente baseada em tecnologia eligen (200 mg) ou placebo, durante 3 meses. Todas as participantes receberam um suplemento de cálcio de 1000 mg e 400 IU de vitamina D, diariamente, ao longo do estudo. Os parâmetros de eficácia são o telopéptido do terminal C do colagénio do tipo I urinário às 24 horas (CTX-I) e CTX-II corrigido para excreção de creatinina avaliada na linha de base e após a terapia de 3 meses.

Composições Farmacêuticas compreendendo calcitonina de salmão utilizadas no estudo

Ingrediente Quantidade por comprimido (mg)

Calcitonina de Salmão Sal dissódico de 0,15 0,4 1 2,5 5-CNAC (não micronizado) Celulose microcristalina, NF 228 228 228 228 (Avicel PH-102) 147,85 147, 6 147 145, 5 Crospovidona, NF 20 20 20 20 Estearato de Magnésio NF, EP 4 4 4 4 Total 400 400 400 400 39

Processo de preparação: i) Pesar 5-CNAC e dividir em 2 partes iguais e marcar como A e B. ii) Pesar Avicel e dividir em 2 partes iguais e marcar como A e B. 1) Colocar a crospovidona numa peneira com crivo 35. Colocar a calcitonina pré-pesada em cima da crospovidona e depois adicionar a parte A de 5-CNAC. 2) Peneirar a crospovidona/calcitonina/5-CNAC e transferir para uma misturadora de tamanho adequado e misturar durante 500 rotações. 3) Peneirar a parte B de 5-CNAC através de uma peneira com crivo 35. 4) Adicionar a parte B de 5-CNAC peneirado e a parte A de Avicel à mistura do passo 2) e misturar durante 800 rotações. 5) Adicionar a parte B de Avicel à mistura acima do passo 4) e misturar durante 500 rotações. 6) Peneirar o estearato de magnésio através de uma peneira de crivo 35 e adicionar à mistura do passo 5) e misturar durante 100 rotações. 40

Resultados: Não existem diferenças significativas nos diferentes grupos de intervenção de sCT em termos de idade, BMI, concentração urinária de linha de base de CTX-I e CTX-II. Existe uma relação evidente e significativa dependente da dose na resposta do CTX-II urinário às 24 horas a sCT oral (ANOVA = 0,012). Em comparação com o placebo, o grupo das 1,0 mg diárias revela o maior decréscimo no CTX-II urinário após o tratamento de 3 meses (-19,7%, p = 0,009). As mulheres que receberam 0,4 mg e 2,5 mg de sCT têm também decréscimos significativos no CTX-II urinário (respectivamente, -15,2%, p = 0,04 e -17,5%, p = 0,02) Encontram-se respostas dependentes da dose semelhantes para o CTX-I urinário às 24 horas no tratamento de 3 meses. As mulheres que receberam 1,0 mg de sCT têm também a maior redução no CTX- I urinário ás 24 horas (-41,0%, p < 0,001) em comparação com as mulheres no grupo placebo. Na estratificação da população do estudo em tereis de CTX-II urinário de linha de base, o média de CTX-II nos diferentes tereis foi, respectivamente, de 114,6, 197,9 e 385,4 mg/mmol. As mulheres no tercil mais elevado de CTX-II urinário na linha de base apresentam as maiores respostas a sCT oral de uma forma dependente da dose. As mulheres que receberam 1,0 mg de sCT e têm a maior renovação da cartilagem na linha de base, têm os maiores decréscimos no CTX-II urinário após o tratamento de 3 meses em comparação com mulheres no tercil inferior (-36,6% vs. -9,9%, p=0, 005). É observada uma tendência semelhante com 0,4 mg de sCT quando se comparam mulheres no tercil superior de CTX-II urinário com as do tercil inferior. O C-telopéptido de colagénio do tipo I (CTX I) é considerado um marcador específico sensível à reabsorção óssea; pelo contrário, o C-telopéptido de colagénio do tipo II (CTX II) é considerado um marcador da cartilagem útil. 41

Conclusão: 0 estudo das requerentes sugere significativamente que a CT de salmão reduz a degradação da cartilagem e, por esse motivo, pode proporcionar benefícios terapêuticos para a osteoartrite numa gama de dose de 0,4 a 2,5 mg de calcitonina de salmão, de um modo mais preferido cerca de 1 mg de calcitonina de salmão.

Lisboa, 13 de Setembro de 2013 42

Claims (5)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Calcitonina de salmão na forma livre ou de sal para utilização num método para prevenir e/ou tratar osteoartrite num doente na necessidade desta, em que a calcitonina é distribuída oralmente numa composição compreendendo calcitonina de salmão e 5-CNAC e em que a referida composição compreende 1 mg de calcitonina de salmão.
2. 2. Calcitonina de salmão na forma livre ou de sal para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a calcitonina é distribuída oralmente numa composição compreendendo calcitonina de salmão e um sal dissódico de 5-CNAC e em que a referida a composição compreende 1 mg de calcitonina de salmão.
3. 3. Calcitonina de salmão para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a calcitonina de salmão é distribuída com uma dosagem eficaz de uma composição farmacêutica oral compreendendo calcitonina de salmão, pelo menos, um agente de diminuição do pH farmaceuticamente aceitável, pelo menos, um intensificador da absorção e um revestimento entérico.
4. 4. Calcitonina de salmão para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a referida composição compreende
5. 5-CNAC na forma micronizada. Lisboa, 13 de Setembro de 2013 1