PT2282206E - Método e aparelho para testar vários analitos simultaneamente com um controlo interno - Google Patents

Método e aparelho para testar vários analitos simultaneamente com um controlo interno Download PDF

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PT2282206E
PT2282206E PT101841435T PT10184143T PT2282206E PT 2282206 E PT2282206 E PT 2282206E PT 101841435 T PT101841435 T PT 101841435T PT 10184143 T PT10184143 T PT 10184143T PT 2282206 E PT2282206 E PT 2282206E
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Dorothee Monika Runge
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Description

DESCRIÇÃO
MÉTODO E APARELHO PARA TESTAR VÁRIOS ANALITOS SIMULTANEAMENTE COM UM CONTROLO INTERNO A presente invenção refere-se a um dispositivo para detectar moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas em que pelo menos duas superfícies são quimicamente ou fisicamente modificadas sobre um painel do dispositivo de tal modo que as referidas superfícies são proporcionadas com meios para imobilizar moléculas, ou classes e/ou misturas de moléculas, de modo que uma superfície é usada para fins de controlo ou padronização e a outra serve para detectar um analito, de modo que as duas superfícies são estruturadas de tal maneira que entram em contacto (Princípio de Teste Tanqencial-Toque) essencialmente no mesmo momento com uma completa matriz de amostra da qual cada molécula ou classes de moléculas ou misturas de moléculas serão testadas e, desse modo, ambas as superfícies são estruturadas e dispostas em relação uma à outra de tal maneira que são avaliadas em conjunto, desse modo formando uma disposição gráfica que pode ser lida visualmente. De acordo com a invenção, pares de símbolos podem ser tornados visíveis, para negativo e " + " para positivo, ou um círculo para negativo e um círculo com um ponto ou pontos no seu interior para positivo. Anticorpos, ADN, ARN, enzimas, substratos, receptores, ligandos ou combinações destes podem ser fornecidos como meios para imobilizar as moléculas, ou classes e/ou misturas de moléculas.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO 1
Todas as referências aqui citadas são integralmente incorporadas por referência para os fins da presente invenção.
Nos campos da investigação, medicina, biologia, química, toxicologia, bem como muitas outras áreas de aplicação, ensaios laboratoriais analíticos que servem para testar qualitativamente e/ou quantitativamente moléculas ou sua actividade ou composição constituem a base para declarações aprofundadas, estendendo-se até o desenvolvimento de novos métodos ou dispositivos. Exemplos são os métodos analíticos de biologia molecular, que são utilizados em pesquisa, em técnicas forenses para investigar crimes, ou então em medicina para detectar a presença de cancro. A base para isto compreende os métodos geralmente conhecidos de análise de ADN/ARN ou análise de proteínas. Outro exemplo é a grande variedade de processos e métodos analíticos que são empregues para examinar as reacções de anticorpos, chamadas imunorreacções, que servem para testar germes, proteínas, fármacos e muitas outras substâncias. Estes processos analíticos têm um dos âmbitos mais amplos em áreas de aplicação. São utilizados em todos os campos da medicina, pesquisa, tecnologia de produtos alimentares e fármacos.
Ao longo dos anos, estas técnicas de laboratório têm sido continuamente refinadas através da ampla gama de usos analíticos de ADN/ARN, proteínas e outra moléculas. Isto conduziu a um sucesso cada vez maior, expandindo ainda mais as áreas de aplicação. Isto resulta em números crescentes de amostras de moléculas específicas que podem ser sistematicamente examinadas. Uma vez que um grande número de amostras individuais só podem ser examinadas com um esforço considerável, hoje em dia são usados os chamados 2 robôs de laboratório, ou mais recentemente, as chamadas tecnologias de chip, que são capazes de examinar simultaneamente até várias centenas de amostras.
Em contraste com estes rigorosos métodos de exames laboratoriais (documento EP 1 338 895, intitulado "High-density allergen microarray" ou o documento EP 0 875 758 Bl, intitulado "Immunoassay") os chamados testes rápidos que proporcionam médicos e terapeutas com resultados de análises rápidos e simples e que são limitados aos pontos essenciais estão a ser utilizados cada vez com mais frequência. Há uma grande demanda e esta demanda está a crescer continuamente. Estes testes são muitas vezes utilizados na área chamada "fase de cuidados", o que quer dizer, imediatamente antes, durante, ou depois de medidas terapêuticas. Outro objectivo é proporcionar uma alternativa económica aos testes laboratoriais clássicos. No entanto, a fiabilidade da aplicação e/ou o número de analitos que podem ser testados simultaneamente, assim como a precisão analitica são todos muito limitados. Há uma considerável necessidade de melhorias neste domínio. São conhecidos métodos de ensaios rápidos tais como o ensaio de fluxo lateral (LFT), o ensaio de fluxo (FTT), o ensaio de aglutinação (AT) e o ensaio de fase sólida (SPT). Todos estes métodos servem para detectar analitos, rapidamente, sem o uso de instrumentos e são adequados para avaliação visual. Todos estes métodos têm desvantagens e, portanto, só podem substituir parcialmente os testes laboratoriais ou então só podem ser usados por pessoas leigas, até um certo ponto. É por este motivo que algumas vezes este métodos são incrementados por ajudas técnicas. Exemplos desses métodos podem ser encontrados, entre outros lugares, nas memórias descritivas das patentes DE 197 3 21151,
EI 98 928 264 WO 98/5332; intitulada "Streifentest zur in vit>~^ „· _ J‘ ^ Hx.^tí^gxeaictgnostik" [Teste-tira para diagnóstico de aleroi s i η tw τμλ
J 01 in Viti°j; EP i 369 391; WO 96/i0/4/' intltulaaa "Device and method util±zing arrays of structures for analyte captureWO 03/094715; US 2003- 212316, intitulada "Method and mmranc - , . " ^ cLiiu. d PP d T. d u U 6 Ζ'ΟΓ d ΘΓ.Θ JCTU X Π ±Ω€Τ blood varameters and vital r-e . .
ViLai signs or. a patient"; W O 02/084249, intitulada "Thera-n&nt ί r· di ^JÍ-ia^outic dragnostic uses of antibody speciticity profilesWO 00/40967, intitulada :ection use o± lateral j.j.oiv aosayo , EP 132 7884 , intitulada "Reagent test strip comprising control means and timer means"; WO 97/31268, "Method and device for diagnosing allergy symptoms”; WO 02/006602, ϋΡ looOil.l; WO 93/10458, intitulada "Bindíng of milk allergens to a solid phase"; Pat. U.S, n° 6, 528, 325, WO 02/056017, intitulada ”Method for the visual det of specific antibodies m huwan se rum by the and intitulada "Chromatographic strip having detection controí zones onented parallel to the direction of flow Pat. U.S, N° 6,040,195, intitulada "Diagnostic sanitary test strip"; Pat. U.S. N° 6, 509,196, WO 01/50129, intitulada "Compensation for non-specific signals in quanti ta tive immunoassays",
Os Ensaios de Fluxo jateral (LFTs) são os ensaios rápidos mais amplamente utilizados. Neste ensaio, a amostra, por exemplo, o soro ou a urina, é aplicada sobre uma superfície. De urna maneira que é directamente comprada com cromatografia de camada fina, o liquido (amostra) flui através de uma camada de separação que contém reagentes, tais como, por exemplo, anticorpos marcados, e subsequen temente flui através de uma camada de nitrocelu lo se . A camada de nitrocelulose contém camadas de captura (em cont jC âStS com 0 SPT, em que as camadas de captura estão presentes na superfície do veículo) que ligam 4 anticorpos marcados e formam a linha que é visível a olho nu. Estes métodos foram descritos na literatura cientifica antes de 1980, tanto para uso em cromatografia de camada fina clássica como para um ensaio rápido, As únicas diferenças estão no uso de um reactor padronizado ou de uma camada de separação que pode ser usada universalmente muitas vezes. O ensaio de fluxo (FTT) é comparável à cromatografia em coluna. Neste ensaio, a amostra (liquido) flui através de camadas de membranas e camadas de sucção. Como no LFT, por exemplo, anticorpos que são capazes de se ligar a analitos são ligados às membranas de detecção. Os analitos ligados tornam-se visíveis como pontos por meio de vários reagentes de detecção. Tais métodos foram descritos na literatura científica antes de 1980, tanto no seu uso como cromat ografia em coluna como para um ensaio ráp ido, As únicas diferenças estão no US' o de um reactor ou de uma coluna que pode se r usada universalme nte muitas veze 5S . O ensaio de aglutinação (AT) é baseado em partículas que são revestidas com anticorpos e que estão numa camada uniforme. Se for adicionada uma amostra positiva, a camada uniforme é destruída por reticulação, que é visível a olho nu no caso de reacções fortes.
Com o método de fase sólida (SPT), também muitas vezes referido como ensaio "dipstick" (fita reagente), os anticorpos ou antigénios ligam o analito a uma superfície (em contrate como o LPT, no qual os analitos são ligados a uma superfície) e posteriormente detectados por reacções subsequentes. Dependendo do método de detecção utilizado, o resultado pode ser um ponto ou superfície que é visível a olho nu. Este método é o método descrito na memória 5 descritiva da Patente Europeia EP 98 928 265.5 (intitulada "Streifentest zur in vitro AI1ergiediagnostik" [Teste-tira para diagnóstico de alergia in vitro]. Tais métodos, no entanto, também foram descritos na literatura cientifica ante R fi P e 1 individuai avariação 9 8 ( D . s estes método: s têm . S Um ensaio rápido ct olho nu, deve ria ser em uma amostra, deveria deveria permiti] controlo de runção, controlo de qualidade e determinação de quantidade e aeveria também permitir que uma pessoa leiga realizasse a avaliação. Além disso, o ensaio deveria ser rápido, em outras palavras, deveria ser possível de ser realizado em cerca de 25 minutos ou menos, e também deveria ser económico de ser produzido.
Os ensaios LF só podem determinar analitos individuais - e, apenas em casos excepcionais, vários analitos — numa amostra u.m.a vez que, neste ensaio a amostra líquida tem que fluir através da membrana. Embora seja po ssív el um C( mtr: olo po sitivo -negativo ne: 3t .e ens aio rq ;r$ o é PO C; o *j t / Ί re alizar uma qi uantif ícaçao. 0 me; srr ío se apl j aos ΘΓ\ saio S AT, FTT e SPT, que em. gerai ut i. 1. i z am um pad rão ex tem Γ\ ^ f t al como um cart ão de c or (ver a. memó ria de scri ti va aa pa tente EP 98928264.5) O' ϋ. uma esc :ala de O '' nza. st a. p uma desvantagem para uma 1: iação v i s u d -A f ou seja, uma avaiiaçao a olho nu, porque interpretações erróneas podem facilmente ocorrer nestes casos. Além disso, a sensibilidade é muito diminuída. Os métodos SPT, AT e esde o início dos anos CO O testar inúmeros analitos numa às t ecnologias de chip ma.is FTT, que sao conhecidos desde o oferecem a possibilidade d gre1ha (matriz) comp a ráveI recentes no laboratorio. Nenhum destes métodos, no entanto, 6 um co nt ro 1. o de :m cada um dos de um padrão vez que uma e capaz de realizar um controlo de função, qualidade ou uma. determinação de quantidade e pontos da grelha, por exemplo, por meio interno. No entanto, isto é necessário uma distribuição irregular da amostra líquida sobre a superfície de teste leva a. diferentes concentrações no anaiito a testar nesta superfície específica. Isto, inevitavelmente, causa interpretações erróneas. Uma série padrão com ou sem um controlo positivo ou negativo conduz a este efeito da interpretação errónea nas bordas dos pontos na grelha ou, caso contrário, devido a cartões de cor externos ou escalas de cinza.
Desse modo, é o objectivo da presente invenção evitar as desvantagens existentes dos procedimentos e métodos prevaientes do domínio dos ensaios rápidos sem perder as vantagens dos métodos de ensaio laboratoriais clássicos, incluindo robôs laboratoriais e/ou sistemas de chips. S igualmente o objectivo da invenção simplificar os métodos de ensaio a tal ponto que os mesmos possam, ser realizados até por pessoas leigas. Outro objectivo é permitir que as análises sejam realizadas sem e/ou com apenas ajudas ou i n s t r u m e n t o s s i inp 1 e s .
Este objectivo é alcançado de acordo com a invenção por um dispositivo no qual as moléculas são imobilizadas sobre um painel, as referidas moléculas sendo capazes de reagir: com os analitos a serem testados, de modo que estes são ligados e podem então ser detectados numa. reacção subsequente ou em várias etapas de reacção. Tais moléculas são, por exemplo, anticorpos, antigénios, ADN, ARN, enzimas, receptores, lectinas, proteínas ou péptidos. As superfícies de imobilização são dispostas de tal maneira que um controlo positivo ou negativo está numa relação 7 θspaoia.-i- directa com o anal :· i- -- ^ bra exempio que não limita o âmbito da patente é um cí^^ni^ ·, L1 a^° com um pondo no seu centro, por exemplo, (Ver a FIG. 1). 0 .-í^nmo «v^ov·™ a +. , / . u wxrcuj.o externo e o controlo positivo, portanto sempre tem de sr' a.iii ae aparecer, o ponto no centro só aparece quando o analito está presente na amostra (figurativamente: na mosca). A concentração do controlo positivo no anel pode ser coordenada de tal maneira que só se torna visível acima de um certo valor limite (valor de corte, cui-off value). Isto permite uma quantificação visual em cada ponto da grelha. Se o analito estiver presente na amostra numa alta concentração, a cor do ponto :entral faz com que o mesmo se sobressaia contra o an externo. oe o analito estiver presente numa baixa concentração, a cor do ponto central é apenas ligeiramente distinta do anel externo e, se o resultado for negativo, o anel é vazio. Se forem utilizados vários anéis, uma série padrão pode ser representada, por exemplo, (ver FIG. 2). Os aneis externos são concentrações padrão com um corte definido, o ponto central é o ponto de medição da amostra. Este exemplo demonstra claramente que uma combinação ç^ráfica directa de padrão (superfície de mdição) para ponto de meaiçao (superfície) produz um grau considerável de confiabilidade e uma maior quantidade de informação. A patente WO 94/03774 A é relacionada com um imunoensaio no qual uma avaliação é conduzida por meio do auxílio de uma luz óptica sobre película fina. A patente WO 99/30154 A divulga um ensaio de camadas múltiplas, essencialmente fornecido por um material poroso.
Baldwin et al. (BALDWIN C I; CALVERT J E; RENOUF D V; KWOK C; HOUNSELL E F: "Analysis of pigeon intestinal mucin allergens using a novel dot blot assay" CARBOHYDRATE RESEARCH, ELSEVIER SCIENTIFIC PUBLISHING COMPANY, Bd. 326, 43-49 (2000)) divulgam a detecção de antigénios por meio do auxilio dos chamados métodos dot blot usando um ensaio à base de hidrocelulose.
Kanbe et al. (KANBE T; UTSUNOMIYA K; ISHIGURO A: "A crossreactivity at the immunoglobulin E levei of the cell wall mannoprotelns of Candida alblcans with other pathogenic Candida and airborne yeast species" CLINICAL AND EXPERIMENTAL ALLERGY, Bd. 27, 1449-1457 (1997)) descrevem um teste de alergia, que é igualmente concebido como um método dot blot.
Blais et al. (BLAIS BURTON W; GAUDREAULT MELISSA; PHILLIPPE LUCILLE M: "Multiplex enzyme Immunoassay System for the simultaneous detection of multiple allergens in foods" FOOD CONTROL, Bd. 14, 43-47 (2003)) descrevem igualmente um teste para alergia para alergia alimentar, que é também desenvolvido com base num método dot blot. A patente EP 0 119 858 refere-se a um dispositivo para um teste de alergia que pode ser conduzido como um e n s a i o de 1 i ga ç ã o . A patente WO 01/71345 descreve, dc· mesmo modo, um dispositivo para conduzir um ensaio de ligação que consiste numa câmara com uma entrada, e uma saída.. A patente EP 1 226 871 descreve um ensaio de ligação com deteccão fluorescente.
No entanto, todos estes documentos acima mencionados não divulgam uma matriz gráfica (graphics array) que 9 permite uma avaliação visual vantajosa cie analitos múltiplos a olho nu.
De facto, a patente U. S. . 5,16 0,701 divulga uma ma triz gráfica de leitura ópi 11 c a, no entanto na forma de realização de um ensaio LFT, como é necessário para, por exemplo, determinação de gra vi dez a partir da urina. Em particular, este documento não se refere a um sistema coordenado de uma matriz gráfica para a avaliação de diversos analitos.
Desse modo, a invenção apresentada nesta memória descritiva de patente, possibilita preparar um método de ensaio rápido que pode ser empregue universalmente a fim de ser capaz de testar um amplo espectro de analitos numa amostra. Além disso um ou mais ou então inúmeros analitos podem ser testados em paralelo. Isto pode ser feito em qualquer grelha desejada (matriz ou array), por exemplo, 1 i n e a r o u qu a d r a d a . T a i s d i s p o s i ç õ e s c o m s u p e r f í c i e s qu e desempenham tareias definidas, sejam estas activamente ou passivamente, podem já ser encontradas na literatura
Cxd.atj.fica anterior de codas as áreas técnicas e são, desse modo, parte do estado da técnica; exemplos destas são matrizes aot blot, sistemas coordenados de placas de micro titulação (MPT) . De acordo com a invenção, são utilizados padrões internos para realizar um controlo de função, determinações de controlo de qualidade e/ou quantidade em cada grelha de pontos, de modo que se os interpretac erróneas. Com analitos a testar dão um gradiente de concentração acima da grelha, isto não causa selecçao apropriada da reacção de detecção, por exemplo, um nzimático (ET A) , uma detecção ouro, selénio P o látex ligadas ser avaliado 3. oiho nu, em ou :ra palavras, 10 s imp 1 esmente vi. sua Imente. Além disso, por meio de auxílios simp1es, o ensaio também. pode utilizar métodos de detecção tais como marcação scente, detecc ?ão eiect roquímica ou métodos espectroscópicos.
Além disso, uma confiabilidade de avaliação especialmente boa pode ser assegurada por meio do desenho gráfico do padrão em comparação com a amostra. Neste caso, são utilizados símbolos geralmente compreendidos, por exemplo, "+" para positivo (analito presente) e para negativo (nenhum analito presente). Isto foi descrito para LFT na memória descritiva da Patente Europeia EP 0 421 294 Bl, mas neste caso somente um analito pode ser detectado na amostra líquida e não há possibilidade de quantificação. No ensaio de acordo com. a i Lnvenç ão, vários anatitos a test.a.i podem ser repre sentados desta maneira e a quantificação é simultaneamente possível em cada ponto da grelha. Além disso, outras formas de represent ação podem ser s e 1 e c c i o n a d a s, tais com o um anel com um ponto no seu interior ou uma estrela.
Outro exemplo não limitativo é o símbolo de uma estr e 1 a (ver FIG. 2) . N este c aso, cinco das seis ponta s da estr ela são C 0 Π t. rolos pos it ivos (cor] respondentes a uma. séri e pa drão de um método d€ i ensaio 1 aboratoriai). E stes são conj Eicrur ados de t al ma neira que cada um tom a-se v i s í vel acim a d e cert. os 1 i miares de c o n c e n t. r a ç ã o (por exemplo, em elevação). Se presente na amostra, o analito torna-se igualmente visível como função da sua. concentração. A combinação espacial directa do ponto de mediç ão (ponto do analito) e os controlos (nesse caso uma série padrão) peru V? t* que uma dei :erminação de concentra ção seja realrzada de forma COl nfiável. A escolha da repre sentação gráí :ica depende da aplicação subsequente. Os 11 símbolos " + um círculo com um ponto ou uma estrela provaram serem eficazes sempre que se deseja um formato de ensaio que possa ser avaliado meramente visualmente, ou seja, a olho nu. Se for desejado um formato de ensaio a ser avaliado por mexo de ajuda técnica de qualquer tipo que seja, um círculo com um ponto no centro e um quadrado com uma cruz no centro demonstraram. ser eficientes. Em particular, a avaliação com ajuda técnica tal com uma câmara CCD, detecção fluorescente, detecção electroquímíca ou outros métodos espectroscópicos também pode reconhecer e avaliar erros relacionados com a produção uma vez que a transferencia do material de ensaio pode ser facilmente reconhecida com base na perda de resolução entre os pontos gxáficos e isto pode então ser avaliado automaticamente por computador. Isto não é possível com qualquer das variantes coru cnip, tanto chips de ADN, ARN ou proteína, uma vez crue não foi alcançada uma relação espacial fechada. Se a imobilização das moléculas adicionalmente utiliza superfícies que são lisas ou cujos poros são pequenos ou inactivados, então os materiais de amostras (matrizes de amostras) tais como sangue inteiro, sangue capilar, soro, plasma, urina, fezes ou amostras que têm uma alta viscosidade e/ou uma coloração forte podem ser utilizados directamente no método de ensaio de acordo com a invenção sem métodos de preparação adicionais. Além disso, podem ser utilizadas suspensões de células, biooptantes de tecidos ou qualquer: tipo de solução. 0 dispositivo de acordo com a invenção é também caracterizado por não ser um método cromatográfico como o ensaio de fluxo lateral (LFT), o ensaio de fluxo (FTT), nem é um método como o ensaio de aglutinação (AT) ou o ensaio de fase sólida (SPT), mas, ao contrário, é um princípio de teste tangencial-toque (TTT) . Com este tipo de método de 12 acordo com a invenção, é suficiente se a amostra a analisar entra em contacto com a superfície de imobilização e, neste caso, é irrelevante se a amostra está a fluir, está em repouso ou é aplicada activamente e/ou passivamente sobre a superfície. 0 princípio TTT difere especificamente por, com este método, as superfícies de medição e as superfícies de controlo poderem ser postas em contacto com as amostras, tanto em termos de tempo como espaço. Desse modo, isto não é possível, por exemplo, com todos os chamados métodos "dipstick" ou métodos cromatográficos, uma vez que o humedecimento com a amostra sempre tem lugar sequencialmente: uma fita reagente é imersa na amostra líquida ou a amostra é extraída cromatograficamente através de materiais ou então os materiais fluem através da mesma. Do mesmo modo, não é necessário dispor as superfícies de imobilização de tal maneira que as mesmas estejam perfeitamente alinhadas com a direcção do fluxo (por exemplo, patente EP 0 421 294 Bl), intitulada "Improved self-performing immunochromatographic device"). A combinação de moléculas imobilizadas sobre superfícies, independentemente do tipo e formato ou material, em áreas delimitadas para fins de detectar analitos e uma superfície ou superfícies de imobilização adicionais graficamente coordenadas que são espacialmente próximas uma da outra para fins de controlo de função e/ou quantificação em cada ponto de medição de analito que emprega o princípio de teste tangencial-toque não foi descrita até agora e constitui o dispositivo de acordo com a invenção. 0 dispositivo de acordo com a invenção é incrementado por um método de acordo com a invenção que é caracterizado por o analito ligado através de moléculas imobilizadas 13 poder ser testado por meio de uma reacção ou reacções subsequentes que serão referida adiante como uma reacção de detecção ou como reacções de detecção. Os reagentes de detecção necessários para realizar o método podem estar presentes sobre a superfícies de forma completamente livre, por exemplo, como um liofilizado ou em solução, ou então podem ser adicionados parcialmente ou totalmente em etapas separadas. A vantagem do dispositivo e do método é que todos os métodos clássicos de detecção podem ser empregues, tais como o método de reacção antigénio-anticorpo, anticorpos ou antigénios marcados, biotina avidina, sondas de ADN ou ARN, métodos de detecção electroquímica ou métodos espectroscópicos, a combinação destes métodos de detecção com o dispositivo de acordo com a invenção constitui o método de acordo com a invenção. 0 número e a disposição dos elementos combinados da grelha só são limitados pela aplicação ou pela finalidade da aplicação. Em aplicações que envolvem uma avaliação exclusivamente visual, o limite de resolução do olho humano é, em última instância, o factor limitante. Neste caso de aplicação, formatos com até 100 grelhas demonstraram ser eficazes. Se forem utilizadas ajudas técnicas para a avaliação, então, dependendo do método técnico e da complexidade, até 100.000 elementos podem ser avaliados.
Antes dos antecedentes do que foi dito acima, um primeiro aspecto da presente invenção é, desse modo, um dispositivo para detectar moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas que é caracterizado por a) pelo menos duas superfícies que são quimicamente ou fisicamente modificadas sobre um painel do dispositivo de tal maneira que as referidas superfícies são proporcionadas com meios de imobilizar moléculas e/ou classes ou misturas de 14 moléculas, de modo que uma superfície é utilizada para fins de controlo ou padronização, e a outra serve para detectar um analito, em que b) as duas superfícies são estruturadas de tal maneira que as mesmas entram em contacto (principio do Teste Tangencial-Toque) essencialmente no mesmo momento com uma matriz completa de amostras da qual moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas serão testadas, e c) em que ambas as superfícies são estruturadas e dispostas uma em relação à outra de tal maneira que podem ser avaliadas em conjunto, deste modo formando uma disposição gráfica que pode ser lida visualmente.
Desse modo, a invenção refere-se a um painel sobre o qual duas superfícies foram quimicamente ou fisicamente modificadas de tal maneira que moléculas ou classes de moléculas e/ou misturas destas podem ser imobilizadas sobre estas superfícies, de modo que as mesmas então formam a base que serve, por um lado, para a finalidade de controlo ou padronização (interna) e, por outro lado, para detectar um analito numa amostra (correspondente à matriz de amostras). A imobilização de materiais de teste sobre uma superfície é conhecida no estado da técnica e depende dos próprios materiais de teste e da superfície de teste. A imobilização pode ter lugar de forma covalente ou não-covalente e tanto directamente como por meio de grupos químicos.
Conforme já explicado anteriormente, devido à disposição das superfícies (ou também dos pontos de medição, pontos da grelha), o presente ensaio é capaz de proporcionar um controlo de função, um controlo de qualidade e uma determinação de quantidade em cada ponto da grelha, por exemplo, por meio de um padrão interno. Isto é vantajoso, uma vez que, no caso de uma distribuição 15 irregular da amostra líquida sobre a superfície de teste, ocorrem diferenças de concentração nos analitos a detectar sobre a superfície. Esta inevitabilidade leva a interpretações erróneas. Uma série padrão com ou sem controlo positivo ou negativo exacerba ainda mais este efeito de interpretações erróneas na borda dos pontos da grelha ou então através de cartões de cor externos ou escala de cinza. De acordo com a invenção, ambas as superfícies são estruturadas e dispostas sobre o painel em relação uma à outra de tal modo que possam ser avaliadas em conjunto, em que esta estruturação permite que as mesmas formem uma disposição gráfica visualmente legível. Desse modo, preferência é dada a um dispositivo de acordo com a invenção para testar moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas que é caracterizado por as superfícies serem dispostas em relação uma à outra de uma maneira plana, de uma maneira espacial e/ou numa forma sólida. De uma maneira igualmente preferida, as superfícies são estruturadas e dispostas sobre o painel em relação uma à outra de acordo com a invenção de tal maneira que as mesmas podem ser avaliadas visualmente em conjunto. Esta avaliação visual é feita, por exemplo, através de superfícies graficamente coordenadas que são dispostas espacialmente muito próximas uma da outra.
De acordo com a invenção, as duas superfícies são estruturadas de tal maneira que as mesmas entram em contacto essencialmente no mesmo momento com uma matriz de amostra completa da qual as moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas serão testadas. De acordo com a invenção, isto é entendido como o princípio de Teste Tangencial-Toque. Além disso, com este tipo de método de acordo com a invenção, é suficiente se a amostra a analisar entre em contacto com a superfície de imobilização 16 e neste caso é irrelevante se a amostra está a fluir, está em repouso ou é aplicada activamente e/ou passivamente sobre a superfície. Desse modo, o princípio TTT difere dos outros métodos especificamente por, com este método, as superfícies de medição e as superfícies de controlo poderem ser postas em contacto com as amostras, tanto em termos de tempo como espaço.
De acordo com a invenção, a matriz de amostras da qual o analito ou analitos é/são testados pode estar presente na forma líquida, sólida ou gasosa, ou então em estados físicos intermédios ou combinações destes.
Num outro aspecto do dispositivo de acordo com a invenção para detectar moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas, o referido dispositivo é caracterizado por as superfícies serem representadas por um ou vários símbolos de forma linear ou numa matriz disposta de uma maneira diferente.
Em ainda outro aspecto do dispositivo de acordo com a invenção para detectar moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas, o referido dispositivo é caracterizado por as moléculas ou classes e/ou misturas de moléculas imobilizadas poderem ser verificadas visualmente por meio de uma reacção de detecção sem ajudas técnicas adicionais, em que as várias superfícies aparecem coloridas, pretas ou cinza, ou são tingidas numa mistura de cores e/ou tons de cinza.
Preferência é dada a um dispositivo de acordo com a invenção para detectar moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas que é configurado como um vaso que tem uma ou mais aberturas. Preferência é também dada a um 17 dispositivo de acordo com a invenção para detectar moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas que é caracterizado por as superfícies serem localizadas no interior do vaso ou então uma ou mais superfícies serem localizadas na parede do vaso.
Em ainda outro aspecto do dispositivo de acordo com a invenção para detectar moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas, o referido dispositivo é caracterizado por pares de símbolos serem tornados visíveis, para negativo e " + " para positivo, ou um círculo para negativo e um círculo com um ponto ou pontos no seu interior para positivo.
Em ainda outro aspecto do dispositivo de acordo com a invenção para detectar moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas, o referido dispositivo é caracterizado por o meio para imobilizar as moléculas ou classes e/ou misturas de moléculas ser seleccionado do grupo que consiste em anticorpos, antigénios, ADN, ARN, enzimas, substratos, receptores, ligandos ou combinações destes. 0 objectivo da presente invenção é também alcançado por meio de um método para detectar moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas, o referido método compreendendo a) estabelecer contacto entre uma matriz de amostra da qual as moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas serão testadas, com o painel de um dispositivo de tal maneira que o dispositivo entre em contacto (princípio de Teste Tangencial-Toque) essencialmente no mesmo momento com a matriz de amostra inteira da qual as moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas serão testadas, em que pelo menos 18 duas superfícies são quimicamente ou fisicamente modificadas sobre o painel do dispositivo de tal maneira que as referidas superfícies são proporcionadas com meios para imobilizar as moléculas ou classes e/ou misturas de moléculas, em que uma superfície é usada para fins de controlo ou padronização, e a outra serve para detectar um analito, e em que as duas superfícies são estruturadas e dispostas em relação uma à outra de tal maneira que são avaliadas em conjunto, deste modo formando uma disposição gráfica que pode ser lida visualmente, e b) uma leitura e avaliação das superfícies. Preferência é dada a um método de acordo com a invenção que é caracterizado por as superfícies serem lidas de uma maneira plana, de uma maneira espacial e/ou de forma sólida.
De acordo com outro aspecto do método da invenção, o referido método é caracterizado por as várias superfícies de detecção aparecerem coloridas, pretas ou cinza, ou são tingidas numa mistura de cores e/ou tons de cinza. De preferência, as superfícies são lidas em um ou muitos símbolos de forma linear ou numa matriz disposta de uma maneira diferente. Exemplos de tais disposições são semelhantes a grelha, ou semelhante a tabuleiro de jogo de damas ou uma disposição num círculo, outros símbolos gráficos ou letras ou números. Igualmente preferido é que os símbolos sejam tornados visíveis, para negativo e "+" para positivo, ou um círculo para negativo e um círculo com um ponto ou pontos no seu interior para positivo.
De acordo com ainda outro aspecto do método da invenção, o referido método é caracterizado por símbolos que consistem em vários círculos dentro uns dos outros que têm um ponto central serem tornados visíveis, o referido ponto aparecendo apenas num caso de detecção positiva e em 19 que cada círculo individual só se torna visível acima de um certo valor de concentração do analito ou uma estrela em que cada uma das pontas da estrela torna-se visível acima de um certo valor de concentração e, no caso positivo, uma ponta predefinida aparece ou as pontas individuais detectam a presença de vários analitos e uma ponta aparece acima de um certo valor de concentração ou uma combinação desses pares de símbolos.
De acordo com ainda outro aspecto do método da invenção, o referido método é caracterizado por a matriz de amostra da qual o analito ou analitos é/são testados pode estar presente na forma líquida, sólida ou gasosa, ou então em estados físicos intermédios ou combinações destes. Preferência é dada à utilização de sangue inteiro, sangue capilar, sangue do cordão umbilical, sangue inteiro arterial ou venoso, soro, plasma, urina, fezes, lágrimas, saliva, muco corporal, soluções secas, soluções que contêm constituintes sólidos ou líquidos de alta viscosidade como a matriz da amostra.
Igualmente preferido é que a amostra seja preparada antes, durante ou depois por meio de purificação, aliquotação, derivatização e/ou isolamento a fim de ser aplicada sobre o painel de acordo com a invenção.
De acordo com ainda outro aspecto do método da invenção, o referido método é caracterizado por as reacções de detecção de moléculas, classes de moléculas ou misturas de moléculas serem seleccionadas de corante, rádio nucleótido, anticorpo, ADN ou ARN, biotina, avidina ou reacções de detecção de enzima ou combinações destes. 20
Preferência é dada a um método da invenção no qual as moléculas ou classes e/ou misturas de moléculas imobilizadas podem ser testadas visualmente por meio de uma reacção de detecção sem ajuda técnica adicional. No entanto, um método alternativo da invenção pode ser caracterizado por serem utilizadas ajudas técnicas para a leitura e/ou avaliação a fim de permitir uma avaliação visual, ou então métodos, por exemplo, métodos densitométricos, métodos espectroscópicos ou electroquimicos serem combinados com a leitura e/ou avaliação de acordo com a invenção. 0 método de acordo com a invenção também pode ser caracterizado por ser combinado com ensaios de fluxo, ensaios de aglutinação e/ou ensaios de fase sólida e compreende um, vários ou muitos pares de símbolos. 0 método de acordo com a invenção também pode ser caracterizado por ser combinado com o método de ensaio de fluxo lateral rápido, e compreender dois, vários ou miotos pares de símbolos.
Um último aspecto da presente invenção, desse modo, refere-se à utilização de um dispositivo da invenção a fim de detectar moléculas ou classes de moléculas em medicina humana, medicina veterinária ou em diagnóstico de doenças de plantas, diagnóstico de produtos alimentares, diagnósticos ambientais, diagnósticos forenses, farmacologia, toxicologia, doenças do sistema autoimune ou do sistema metabólico, doenças infecciosas, doenças venéreas, doenças parasíticas, detecção de pequenas moléculas tais como fármacos, produtos farmacêuticos ou metabolitos, mediadores celulares, tipificação de tecido, tipificação de espécies, tipificação de alimento, tipificação de antigénio, tipificação de epítopos e detecção de ADN ou ARN. Preferência é dada a um método de 21 acordo com a invenção para diagnóstico imediatamente antes durante ou depois de uma medida terapêutica.
Os termos utilizados no âmbito da presente invenção têm o seguinte significado (lista de definições, na medida em que os mesmos não tenham sido ainda internacionalmente estipulados. As abreviaturas não listadas adiante sempre referem-se aos padrões internacionais que foram estipulados ou que são habitualmente utilizados:
Aliquotação divisão de líquidos em unidades ou volumes de quantidades menores, por exemplo, extracção de uma pequena quantidade de uma amostra Analito molécula ou grupo de moléculas a ser detectado AT ensaio de aglutinação Purificação separação de líquidos, partículas, classes de substâncias, células ou componentes celulares, Derivatização impurezas modificação química ou física de uma substância ou classe de substância FTT ensaio de fluxo Isolamento separação de uma substância ou classe de substância de uma mistura complexa, independentemente de estar presente numa fase sólida, gasosa ou líquida ou numa combinação LFT ensaio de fluxo lateral Detecção ensaio para detectar a presença de uma ou mais das moléculas ou grupo de moléculas com ou sem sua quantificação Parâmetro sinónimo de analito Quantificação determinação da quantidade de moléculas ou grupos de moléculas SPT ensaio de fase sólida
Ajuda técnica o termo ajuda técnica refere-se a todos os 22
Avaliação visual
Negativo
Positivo
Matriz MTP Corte meios simples que são utilizados para tornar resultados visiveis, para fins de intensificação, modificação e avaliação ou uma combinação destes. Por exemplo, películas, fontes de luz, todos os tipos de detectores, reacções quimicas ou fisicas que são utilizadas antes, durante ou depois da medição. Óculos que só servem para corrigir a visão natural não são considerados como ajuda técnica. avaliação de um resultado medido exclusivamente visualmente ou a olho nu. Neste contexto, óculos não são considerados como ajuda técnica. o analito não está na amostra ou está abaixo de um valor de corte estipulado o analito está na amostra e/ou está acima de um valor de corte estipulado sinónimo: array; qualquer disposição e número de superfícies que podem ser identificadas individualmente dentro de um sistema coordenado, por exemplo, um sistema coordenado do tipo tabuleiro de damas clássico ou um sistema coordenado de MTP placas de microtitulação valor limite de concentração acima do qual, se o analito estiver presente, o resultado deve ser considerado positivo quando o resultado é avaliado 0 método de acordo com a invenção pode ser realizado de maneiras técnicas alternativas que diferem umas das outras e também pode ser utilizado em combinação com métodos rápidos de ensaio clássicos. 23 A invenção será explicada em maior detalhe adiante com referência aos desenhos associados. Os exemplos não devem ser interpretados como limitativos do âmbito da invenção, mas ao contrário, servem para demonstrar as possibilidades do método. A FIG. 1 mostra exemplos dos pares gráficos de símbolos com um controlo positivo simples tendo um corte definido. FIG 1 a - símbolo de "cruz"; FIG 1 b - símbolo de "cruz com ponto"; FIG. 1 C - símbolo de "diamante com diamante interno"; FIG. 1 d - símbolo de "polígono com centro poligonal"; e FIG. 1 e - símbolo de "triângulo com ponto". A FIG. 2 mostra exemplos de pares gráficos de símbolos com uma série padrão graduada, com ou sem controlo negativo. FIG 2 a - símbolo de "estrela com controlo negativo"; FIG. 2b- símbolo de "círculo sem controlo negativo". A FIG. 3 mostra exemplos de formas de realização da invenção de disposições com base em dois painéis de inalação (FIGs. 3 a, b) e dois painéis de alimento (FIGs. 3 c, d) . A FIG. 4 mostra um exemplo de uma forma de realização da invenção de um dispositivo (1) do Exemplo 7, com uma câmara (2), uma membrana (3), uma tampa da câmara (4), uma abertura superior da câmara (5) , uma abertura inferior da câmara (6) e um sistema coordenado (7).
EXEMPLOS 24 0 método de acordo com a invenção pode ser combinado com os métodos de ensaios rápidos conhecidos tais como o ensaio de fluxo lateral (LTF), o ensaio de fluxo (FTT), o ensaio de aglutinação (AT) ou o ensaio de fase sólida (SPT). Além disso, todos os métodos ópticos tais como métodos densitométricos, espectroscópicos ou electroquimicos podem ser combinados com o método de acordo com a invenção. Exemplos de combinações de processo-tecnologia são: 1. Reacções anticorpo/antigénio, reacções de sonda de ADN ou ARN, reacções de enzima/substrato, reacções de receptor/ligando ou reacções de afinidade à superfície ou então combinações destas, podem todas ser utilizadas para tornar os símbolos visíveis que são graficamente directamente conectados, usando o método de acordo com a invenção, independentemente do nível de sensibilidade (visualmente ou com ajuda técnica). A selecção da reacção de detecção só é dependente do analito ou analitos a serem detectados e das condições nas quais a detecção ocorre. 2. Execução do método com o dispositivo de acordo com a invenção utilizando um vaso especial ou sem este vaso. 3. Execução do método com uma purificação, aliquotação, derivatização e/ou isolamento realizado antes, durante ou depois. A combinação que consiste no dispositivo e no método de acordo com a invenção pode ser utilizada para muitas áreas de aplicação, entre outras, diagnóstico para medicina humana ou medicina veterinária, diagnóstico de produtos alimentares, diagnósticos ambientais. Diagnósticos forenses. Alguns exemplos seleccionados serão apresentados 25 adiante os quais servem para ilustrar o âmbito da patente mas que não devem ser interpretados como uma limitação da mesma. 1. A combinação que consiste no método e no dispositivo de acordo com a invenção pode ser utilizada para testar anticorpos específicos para doentes ou perfis de epítopos. Neste caso, vários anticorpos ou epítopos específicos diferentes encontrados no corpo do doente têm de ser testados simultaneamente. Isto é necessário no caso de doenças tais como alergias ou doenças dos sistema autoimune ou do sistema metabólico. 2. A combinação que consiste no método e no dispositivo de acordo com a invenção pode ser utilizada para testar componentes de produtos alimentares. Isto pode ser feito em duas direcções, nomeadamente, por um lado, testar os ingredientes contidos num produto alimentar e, por outro lado, testar produtos alimentares individuais em misturas (alimentos processados, etc.). 3. A combinação que consiste no método e no dispositivo de acordo com a invenção pode ser utilizada para testar doenças infecciosas, doenças venéreas ou doenças parasíticas. Neste caso, tanto os antigénios específicos do germe como os anticorpos específicos do germe podem ser testado em grelhas. 4. A combinação que consiste no método e no dispositivo de acordo com a invenção pode ser utilizada para testar doenças metabólicas. Neste caso, várias enzimas metabólicas e/ou seus metabolitos podem ser simultaneamente testados num só teste. 26 5. A combinação que consiste no método e no dispositivo de acordo com a invenção pode ser utilizada para testar moléculas pequenas tais como fármacos, produtos farmacêuticos, mediadores celulares ou substâncias pequenas comparáveis. Estas determinações são necessárias em farmacologia, toxicologia e análises forenses. 6. A combinação que consiste no método e no dispositivo de acordo com a invenção pode ser utilizada para testar espécies de ADN e/ou ARN. Desta maneira, por exemplo, doenças metabólicas causadas geneticamente podem ser testadas ou infecções virais podem ser detectadas nos seus estágios iniciais. Além disso, isto permite todos os tipos de tipificação de tecido, incluindo os de seres humanos, animais, plantas e fungos.
Exemplo 7 - Exemplo de um Dispositivo de Acordo com a Invenção e sua Utilização
Um exemplo de um dispositivo TTT de acordo com a invenção e sua utilização envolve um teste de rastreio de alergias para 12 alergénios alimentares realizado pelo médico com duas gotas de sangue. Em cada caso, 100 yL de sangue com EDTA, sangue ou soro com haparina também podem ser utilizados. Este teste permite uma visão rápida dos alergénios aos quais o doente reage. Um teste de confirmação quantitativa bem como um teste para outros alergénios podem ser realizados posteriormente. O métodos é aproximadamente dividido em a) colheita do sangue (tempo de incubação para o sangue: 15 minutos); b) procedimento de lavagem (tempo de incubação do substrato: 5 a 10 minutos); c) segundo procedimento de lavagem; d) leitura; e e) avaliação. 27
Conteúdo da embalagem do Dispositivo FastCheckPOC® de Acordo com a Invenção • 50 mL de solução de lavagem, 300 pL de solução de teste, 3 mL de substrato corante • lxpipeta, lxlanceta, lxtubo capilar, lxsenringa de
plástico de 10 mL, lx seringa de plástico de 5 mL • lxunidade de filtro com 12 alergénios e 3 controlos • informação sobre a avaliação do teste
Preparações/Colheita do Sangue 1. Retirar da embalagem o tubo capilar, o tubo com tampa de rosca e a lanceta. 2. Abrir o tubo castanho de tampa de rosca de 2 mL que contém a solução de teste e colocá-lo na vertical sobre uma superfície plana. 3. Tirar o sangue, por exemplo da ponta do dedo usando, por exemplo, a lanceta. Alternativamente, 100 pL de sangue com EDTA, sangue ou soro com heparina também podem ser utilizados. 4. Remover o capilar do tubo transparente e abrir a tampa. Colher duas gotas inteiras de sangue como capilar. Adicionar o sangue no tubo de tampa de rosca que contém a solução de teste. Como resultado, o sangue é transferido para a solução de teste.
Execução do Teste 1. Abrir o frasco que contém a solução de lavagem e a câmara com o filtro de teste e humedecer o filtro de teste com uma pequena quantidade da solução de lavagem. Uma 28 pipeta descartável deve ser utilizada para distribuir o liquido uniformemente. 2. Pegar todo o sangue e solução de teste com a pipeta descartável. Aplicar esta solução sobre o filtro na câmara de teste e distribuir a solução sobre a membrana usando a pipeta descartável. 3. Fechar a câmara primeiro só até que a pequena aba do lado direito da câmara de teste possa ser fechada. A floculação do sangue não afecta o resultado de forma prejudicial. No entanto, nenhum sangue deve ser deixado para trás na tampa da câmara uma vez que, caso contrário, o filtro não será humedecido de forma adequada. 0 tempo de incubação é de 15 minutos. 4. Fechar completamente a câmara de teste. Depois de completamente fechada a câmara não pode mais ser aberta. Remover a tampa da abertura da câmara superior. 5. Numa primeira etapa de lavagem, primeiro enxaguar a câmara de teste com água da torneira. Para esta finalidade, fixar a seringa (10 mL) à abertura superior da câmara e a água é forçada uniformemente para dentro da câmara. Segurar a câmara com a abertura inferior em cima de uma pia ou recipiente dentro do qual o liquido pode drenar. Repetir o procedimento 2 ou 3 vezes. O filtro pode apresentar uma coloração rosa. Colher a solução de lavagem com a seringa (10 mL) e injectar a solução através da abertura superior da câmara para dentro do alojamento aplicando pressão lenta e firme. Um pouco da solução de lavagem permanece na câmara por 2 minutos, e só então a seringa é removida da abertura de modo que o líquido possa ser completamente drenado. Este procedimento é repetido 29 mais 2 vezes. Em seguida, o filtro de teste é lavado duas vezes com 10 mL de solução de lavagem cada vez. Deixar que o liquido drene. 6. Encher a pequena seringa de 5 mL com o substrato (frasco preto de 3 mL) e conectar o mesmo à câmara na abertura superior grande e ao mesmo tempo segurar o alojamento horizontal neste processo a fim de evitar bolhas de ar. Injectar o substrato uniformemente dentro da câmara. 7. Colocar a câmara de teste sobre uma superfície plana. A câmara tem de ficar na horizontal e a seringa deve permanecer na abertura da câmara de modo que o substrato não vaze para fora. Incubar o substrato durante 5 a 10 minutos na câmara. 8. Remover a seringa e deixar o líquido drenar da câmara. 9. Encher com água da torneira usando a seringa grande de plástico (10 mL) e conectar a mesma na abertura superior da câmara. 10. Enxaguar a membrana com o conteúdo da seringa segurando a câmara com a segunda abertura mais pequena apontando para baixo em cima de uma pia ou recipiente dentro do qual o líquido de lavagem pode drenar. O procedimento tem de ser repetido, mas desta vez um pouco de água deve permanecer na câmara com a finalidade de facilitar a leitura. A avaliação deve ser feita dentro de 10 minutos desde que o filtro ainda esteja húmido. Se o tempo de espera for mais prolongado, reacções subsequentes não especificadas podem ocorrer, o que falsifica o resultado. 30
Avaliação 1. 0 filtro de teste tem cinco filas em três colunas. A fila do fundo contém, da esquerda para a direita, um controlo negativo, um controlo de valor limite e um controlo positivo ao passo que as outras quatro filas contêm os alergénios. 2. Avaliar os resultado com base no sistema coordenado e transferir os mesmos para o formulário de avaliação. 3. Um sinal de menos significa que o teste é negativo, neste caso, não há alergénios presentes. Um sinal de mais indica uma reacção positiva, um IgE especifico contra o alergénio em questão está presente. A posição dos alergénios é indicada no formulário de avaliação. 4. Marcar o resultado na coluna apropriada do formulário de avaliação.
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Pat, U.S. N‘ 040,195 intitulada " Diaqností· sanitary test strip' 32
Pat "Compensa immunoass , u. S. N ° 6, 509, 196, WO 01/50129, intitulada tion f o r non-svecific si gnals in quant.it ative ays" 33

Claims (15)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Dispositivo para a detecção de moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas em medicina humana, medicina veterinária ou diagnóstico de doenças de plantas, diagnóstico de produtos alimentares, diagnósticos ambientais, diagnósticos forenses, farmacologia, toxicologia, doenças do sistema autoimune ou do sistema metabólico, doenças infecciosas, doenças genitais, doenças parasíticas, determinação de pequenas moléculas tais como fármacos, medicamentos ou metabolitos, mediadores celulares, em tipificação de tecido, tipificação de espécies, tipificação de alimento, tipificação de antigénio, tipificação de epitopos e detecção de ADN ou ARN, caracterizado por a) pelo menos duas áreas de superfície na superfície do dispositivo serem proporcionadas com moléculas ou classes de moléculas imobilizadas, em que uma superfície é utilizada para fins de controlo ou padronização, e a outra área de superfície é utilizada para detectar um analito, em que b) as duas superfícies são estruturadas de tal maneira que as mesmas entram em contacto essencialmente no mesmo momento com uma matriz completa de amostra da qual moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas serão determinadas, e c) em que ambas as superfícies são estruturadas e dispostas uma em relação à outra de tal maneira que podem ser avaliadas em conjunto, formando uma disposição gráfica que pode ser lida visualmente, e d) em que as áreas de superfície são dispostas num sistema coordenado ou matriz e podem ser avaliadas a olho nu, e e) em que este dispositivo é concebido como um vaso, f) em que as áreas de superfície são representadas numa pluralidade de símbolos de uma maneira linear ou numa matriz que é disposta de uma maneira diferente. 1
  2. 2. Dispositivo para a detecção de moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por as áreas de superfície terem uma disposição plana e/ou espacial em relação umas às outras.
  3. 3. Dispositivo para a detecção de moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado por as áreas de superfície serem representadas em num ou mais símbolos de uma maneira linear ou numa matriz que é disposta de uma maneira diferente.
  4. 4. Dispositivo para a detecção de moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por as moléculas ou classes de moléculas imobilizadas serem visualmente avaliadas em conjunto por meio de uma reacção de detecção sem ajudas técnicas adicionais, em que as várias áreas de superfície aparecem coloridas, pretas ou cinza ou numa mistura de cores e/ou tons de cinza.
  5. 5. Dispositivo para a detecção de moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por este dispositivo ser concebido como um vaso que compreende uma ou mais aberturas.
  6. 6. Dispositivo para a detecção de moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por as áreas de superfície serem localizadas no interior do vaso ou uma ou mais áreas de superfície serem localizadas na parede do vaso. 2
  7. 7. Dispositivo para a detecção de moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado por as áreas de superfície serem tornadas visíveis como símbolos, para negativo e "+" para positivo, ou um círculo para negativo e um círculo com um ponto ou pontos no seu interior para positivo.
  8. 8. Dispositivo para a detecção de moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado por as moléculas ou classes e/ou misturas de moléculas imobilizadas serem seleccionadas do grupo que consiste em anticorpos, antigénios, ADN, ARN, enzimas, substratos, receptores, ligandos, ou combinações destes.
  9. 9. Método para detecção de moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas em medicina humana, medicina veterinária ou diagnóstico de doenças de plantas, diagnóstico de produtos alimentares, diagnósticos ambientais, diagnósticos forenses, farmacologia, toxicologia, doenças do sistema autoimune ou do sistema metabólico, doenças infecciosas, doenças genitais, doenças parasíticas, determinação de pequenas moléculas tais como fármacos, medicamentos ou metabolitos, mediadores celulares, em tipificação de tecido, tipificação de espécies, tipificação de alimento, tipificação de antigénio, tipificação de epítopos e detecção de ADN ou ARN, que compreende as seguintes etapas: a) estabelecer contacto entre uma matriz de amostra da qual as moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas serão determinadas e uma superfície do dispositivo de tal maneira que este dispositivo entre em contacto essencialmente no mesmo momento com a matriz de amostra inteira da qual as 3 moléculas ou classes de moléculas ou misturas de moléculas serão determinadas, em que pelo menos duas áreas de superfície são proporcionadas com moléculas ou classes e/ou misturas de moléculas imobilizadas de tal maneira que uma área de superfície é proporcionada para fins de controlo ou padronização, e a outra é proporcionada para a detecção de um analito, e em que ambas as áreas de superfícies são estruturadas e dispostas em relação uma à outra de tal maneira que são avaliadas em conjunto, formando uma disposição gráfica que pode ser lida visualmente, e b) leitura e avaliação das áreas de superfície com base num sistema coordenado ou matriz, em que este dispositivo é concebido como um vaso e as áreas de superfície são representadas numa pluralidade de símbolos de uma maneira linear ou numa matriz que é disposta de uma maneira diferente.
  10. 10. Método de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por as áreas de superfície serem lidas de uma maneira plana e/ou espacial.
  11. 11. Método de acordo com a reivindicação 9 ou 10, caracterizado por as áreas de superfície serem lidas num ou mais símbolos de uma maneira linear ou numa matriz que é disposta de uma maneira diferente.
  12. 12. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 11, caracterizado por as áreas de superfície serem tornadas visíveis como símbolos, para negativo e "+" para positivo, ou um círculo para negativo e um círculo com um ponto ou pontos no seu interior para positivo.
  13. 13. Método de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por os símbolos que consistem em vários círculos dentro uns 4 dos outros e têm um ponto central serem tornados visíveis, o referido ponto aparecendo apenas num caso de detecção positiva, e em que cada círculo individual só se torna visível acima de um certo valor de concentração do analito, ou uma estrela em que cada uma das pontas da estrela torna-se visível acima de um certo valor de concentração e, no caso positivo, uma ponta predefinida aparece ou as pontas individuais detectam vários analitos e uma ponta aparece num certo valor de concentração, ou uma combinação desses símbolos.
  14. 14. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 13, caracterizado por sangue inteiro, sangue capilar, sangue do cordão umbilical, sangue inteiro arterial ou venoso, soro do sangue, plasma, urina, fezes, fluido lacrimal, saliva, muco, soluções secas, soluções contendo constituintes sólidos ou líquidos de alta viscosidade serem utilizados como amostra.
  15. 15. Utilização de um dispositivo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9 para a detecção de moléculas ou classes de moléculas em medicina humana, medicina veterinária ou diagnóstico de doenças de plantas, diagnóstico de produtos alimentares, diagnósticos ambientais, diagnósticos forenses, farmacologia, toxicologia, doenças do sistema autoimune ou do sistema metabólico, doenças infecciosas, doenças genitais, doenças parasíticas, determinação de pequenas moléculas tais como fármacos, medicamentos ou metabolitos, mediadores celulares, em tipificação de tecido, tipificação de espécies, tipificação de alimento, tipificação de antigénio, tipificação de epítopos e detecção de ADN ou ARN. 5
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