PT2206710E - Derivados de indole como agonistas do recetor s1p1 - Google Patents

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PT2206710E PT10158582T PT10158582T PT2206710E PT 2206710 E PT2206710 E PT 2206710E PT 10158582 T PT10158582 T PT 10158582T PT 10158582 T PT10158582 T PT 10158582T PT 2206710 E PT2206710 E PT 2206710E
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James Myatt
David Norton
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Description

ΡΕ2206710 1 DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE ÍNDOLE COMO AGONISTAS DO RECETOR SlPl" A presente invenção diz respeito a novos derivados de oxadiazole tendo atividade farmacológica, processos para a sua preparação, composições farmacêuticas que os contêm e seu uso no tratamento de várias desordens.
Esfingosina-l-fosfato (S1P) é um mediador de lipido bioativo formado pela fosforilação de esfingosina por esfingosina-cinases e é encontrada em niveis altos no sangue. É produzida e segregada por numerosos tipos de células, incluindo as de origem hematopoiética tais como plaquetas e mastócitos (Okamoto et al., J Biol Chem, 273(42) 27104; Sanchez e Hla, J Cell Biochem, 92 (2004) 913) . Tem uma larga gama de ações biológicas, incluindo regulação da proliferação, diferenciação, motilidade, vascularização e ativação de células inflamatórias e plaquetas (Pyne e Pyne, Biochem J., 349 (2000) 385). Cinco subtipos de recetores responsivos a S1P foram descritos, SlPl (Edg-1) , S1P2 (Edg-5) , S1P3 (Edg-3) , S1P4 (Edg-6) e S1P5 (Edg-8), formando parte da família de recetores do
gene de diferenciação endotelial acoplado à proteína G (Chun et al., Pharmacological Reviews, 54 (2002) 265, Sanchez e Hla, J Cellular Biochemistry, 92 (2004) 913) . Estes 5 recetores mostram expressão de mRNA diferencial, 2 ΡΕ2206710 com S1P1-3 sendo largamente expresso, S1P4 expresso em tecidos linfoide e hematopoiético e S1P5 principalmente no cérebro e num grau mais baixo no baço. Eles sinalizam via subconjuntos diferentes de proteínas G para promoverem uma variedade de respostas biológicas (Kluk e Hla, Biochem et Biophysica Acta, 1582 (2002) 72, Sanchez e Hla, J Cellular
Biochem, 92 (2004) 913) .
Os papéis propostos para o recetor S1P1 incluem o tráfico de linfócitos, indução/supressão de citocinas e efeitos sobre células endoteliais (Rosen e Goetzl, Nat. Rev. Immunol., 5 (2005) 560). Os agonistas do recetor S1P1 têm sido usados em numerosos modelos de animais autoimunes e de transplantação, incluindo modelos de Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE) de EM, para reduzir a severidade da doença induzida (Brinkman et al., JBC, 277 (2003) 21453; Fujino et al., J Pharmacol Exp Ther, 305 (2 0 03) 70; Webb et al., J Neuroimmunol, 153 (2 004) 108;
Rausch et al., J Magn Reson Imaging, 20 (2004) 16) . Esta atividade é relatada como sendo mediada pelo efeito de agonistas de S1P1 sobre a circulação de linfócitos através do sistema linfático. O tratamento com agonistas de S1P1 resulta no sequestro de linfócitos no interior de órgãos linfoides secundários tais como nodos de linfa, induzindo uma linfopenia periférica reversível em modelos de animal (Chiba et al., J Immunology, 160 (1998) 5037, Forrest et al., J Pharmacol Exp Ther, 309 (2004) 758; Sanna et al., JBC, 279 (2004) 13839). Os dados publicados sobre agonistas sugerem que o tratamento com composto induz a perda do 3 ΡΕ2206710 recetor S1P1 a partir da superfície celular via internalizaçao (Graler e Goetzl, FASEB J, 18 (2004) 551; Matloubian et al., Nature, 427 (2004) 355; Jo et al. , Chem Biol, 12 (2005) 703) e é esta redução do recetor S1P1 sobre células imunes que contribui para a redução do movimento de células T dos nodos de linfa de volta à corrente sanguínea. A deleção do gene SlPl é causa de letalidade embrionária. Os experimentos para examinar o papel do recetor SlPl na migração e tráfico de linfócitos têm incluído a transferência de células T deficientes de SlPl rotuladas para ratos do tipo selvagem irradiados. Estas células mostraram um egresso reduzido a partir de órgãos linfoides secundários (Matloubian et al., Nature, 427 (2004) 355). A SlPl foi também atribuído um papel na modulação da junção da célula endotelial (Allende et al., 102 (2003) 3665, Blood Singelton et al., FASEB J, 19 (2005) 1646). Com respeito a esta ação endotelial, os agonistas de SlPl foram relatados como tendo um efeito sobre nodos de linfa isolados que podem estar a contribuir para um papel na modulação de desordens imunes. Agonistas de SlPl causaram um fecho das "portas" estromáticas endoteliais de seios linfáticos que drenam os nodos de linfa e previnem o egresso de linfócito (Wei et al., Nat. Immunology, 6 (2005) 1228). O composto imunossupressivo FTY720 (JP 11080026- 4 ΡΕ2206710 -A) foi mostrado a reduzir os linfócitos circulantes em animais e no homem, tem atividade de modulação de doença em modelos de animal de desordens imunes e reduzem as taxas de remissão em Esclerose Múltipla remitente relapsa (Brinkman et al., JBS, 277 (2002) 21453, Mandala et al., Science, 296 (2002) 346, Fujino et al., J Pharmacology and Experimental Therapeutics, 305 (2003) 45658, Brinkman et al., American J Transplantation, 4 (2004) 1019, Webb et al., J Neuroimmunology, 153 (2004) 108, Morris et al., Eur J Immunol, 35 (2005) 3570, Chiba, Pharmacology and Therapeutics, 108 (2005) 308, Kahan et al., Transplantation, 76 (2003) 1079, Kappos et al., New Eng J Medicine, 335 (2006) 1124) . Este composto é um pró-fármaco que é fosforilado in vivo por esfingosina-cinases para dar uma molécula que tem atividade agonista nos recetores S1P1, S1P3, S1P4 e S1P5. Estudos clinicos têm demonstrado que o tratamento com FTY720 resulta em bradicardia nas primeiras 24 horas de tratamento (Kappos et al., New Eng J Medicine, 335 (2006) 1124). A bradicardia é pensada como sendo devida a agonismo no recetor S1P3, baseada em numerosas células e experimentos em animais. Estes incluem o uso de animais nocaute S1P3 que, ao contrário dos ratos de tipo selvagem, não demonstram bradicardia a seguir à administração de FTY720 e ao uso de compostos seletivos de S1P1. (Hale et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 14 (2004) 3501, Sanna et al., JBC, 279 (2004) 13839, Koyrakh et al., American J Transplantation, 5 (2005) 529).
Por isso, existe uma necessidade de compostos 5 ΡΕ2206710 agonistas do recetor S1P1 com selectividade relativamente a S1P3 que possam ser esperados a mostrarem uma tendência reduzida para induzir bradicardia.
Os seguintes pedidos de patente descrevem derivados de oxadiazole como agonistas de S1P1: WO 03/105771, WO 05/058848, WO 06/047195, WO 06/100633, WO 06/115188, WO 06/131336, WO 07/024922 e WO 07/116866. O seguinte pedido de patente descreve derivados de indole-oxadiazole como agentes antipicornavirais: WO 96/009822. Os seguintes pedidos de patente descrevem derivados de ácido indole-carboxilicos como antagonistas do recetor de leucotrieno, pesticidas e fungicidas agroqui-micos respetivamente: WO 06/090817, EP 0 439 785 e DE 39 39 238. O pedido de patente JP 2007/262009 descreve derivados de indole como tendo atividade de agonista do recetor S1P1. Os pedidos de patente WO 04/103279 e WO 05/032465 revelam derivados de oxadiazole como agonistas do recetor de S1P. A presente invenção por conseguinte proporciona um composto que é ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)-oxi] - 3-piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il) -lfí-indol-l-il ] buta-nóico e seus sais farmaceuticamente aceitáveis. A presente especificação também descreve com- ΡΕ2206710 6 postos de fórmula aceitável: (I) ou um seu sal f armaceuticamente
em que um de R5 e Rí é hidrogénio ou R2 e o outro é (a)
A é um anel fenilo ou um anel heteroarilo de 5 ou 6 membros;
Ri é hidrogénio ou até três substituintes independentemente selecionados de entre halogéneo, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C6, alcoxi Ci-C6, cicloalquiloxi C3-C6, trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluorometilo, ciano, nitro, piperidina facultativamente substituída, pirrolidina facultativamente substituída, fenilo facultativamente substituído e anéis de heteroarilo de 5 ou 6 membros facultativamente substituído; quando Ri é fenilo, piperidina, pirrolidina ou um anel heteroarilo de 5 ou 6 membros, ele pode ser substituído por até 3 substituintes selecionados de entre halogéneo, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, trifluorometoxi, difluoro-metoxi, cicloalquilo C3-C6, trifluorometilo e ciano; R2 é hidrogénio ou até três substituintes independentemente selecionados de entre halogéneo, alquilo C1-C4, 7 ΡΕ2206710 alcoxi C1-C4, trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluoro-metilo e ciano; R7 é hidrogénio ou halogéneo; Z é alquilo C1-C4 que é facultativamente interrompido por N ou 0 e é facultativamente substituído por halogéneo ou metilo.
Numa forma de realização de fórmula (I), quando A é fenilo ou piridilo, Ri é dois substituintes nas posições para e meta em A relativamente ao anel de oxadiazole.
Numa forma de realização de fórmula (I), quando A é tienilo, Ri é dois substituintes nas posições 4 e 5.
Numa forma de realização de fórmula (I), R5 é hidrogénio e Ré é (a) e/ou; A é tienilo, piridilo ou fenilo; e/ou
Ri é até três substituintes seleccionados de entre halogéneo, alcoxi Ci-Cõ, ou trifluorometilo, fenilo facultativamente substituído, ciclo-hexilo facultativamente substituído, ciano, trifluorometoxi, piperidina facultativamente substituída, pirrolidina facultativamente substituída, alquilo C1-C6 e NO2; e/ou; R2 é hidrogénio; e/ou R7 é hidrogénio ou halogéneo; e/ou Z é alquilo C1-C4 que é facultativamente interrompido por N ou 0 e é facultativamente substituído por flúor ou metilo. ΡΕ2206710
Numa forma de realização de fórmula (I),
Rs é hidrogénio e Rs é (a) ; e/ou A é piridilo ou fenilo; e/ou
Ri é até dois substituintes seleccionados de entre halogéneo, alcoxi C1-C6, ou trifluorometilo, fenilo facultativamente substituído, ciclo-hexilo facultativamente substituído, ciano, trifluorometoxi, piperidina facultativamente substituída, pirrolidina facultativamente substituída, alquilo C1-C6 e NO2; e/ou R2 é hidrogénio; e/ou R7 é hidrogénio, cloro ou bromo; e/ou Z é alquilo C2-C3 não substituído.
Numa forma de realização de fórmula (I), R5 é hidrogénio e Rí é (a) ; e/ou A é piridilo ou fenilo; e/ou
Ri é até dois substituintes seleccionados de entre cloro, bromo, metoxi, propoxi, isopropoxi, trifluorometilo, fenilo substituído por halo, fenilo, ciclo-hexilo, ciano, trifluorometoxi, piperidina, pirrolidina, etilo ou N02; e/ou R2 é hidrogénio; e/ou R7 é hidrogénio, cloro ou bromo; e/ou Z é alquilo C2-C3 não substituído.
Numa forma de realização de fórmula (I), R5 é hidrogénio e R6 é (a) ; e/ou A é piridilo ou fenilo; e/ou
Ri é até dois substituintes seleccionados de entre cloro, isopropoxi e ciano; e/ou 9 ΡΕ2206710 R2 é hidrogénio; e/ou R7 é hidrogénio; e/ou Z é alquilo C2-C3 não substituído.
Numa forma de realização de fórmula (I), R5 é (a) e Rô é hidrogénio. A é tiofeno ou fenilo facultativamente substituído; e/ou
Ri é hidrogénio, halogéneo, alcoxi C1-C4, ou trifluoro-metilo; e/ou R2 é hidrogénio, e/ou Z é etileno.
Numa outra forma de realização de fórmula (I),
Rs é (a) e Rè é hidrogénio; e/ou A é tiofeno substituído por fenilo; e/ou Ri é hidrogénio, halogéneo, alcoxi C1-C4, ou trifluo-rometilo; e/ou R2 é hidrogénio, e/ou Z é etileno.
Quando Ri é fenilo ou um anel heteroarilo de 5 ou 6 membros ele pode ser substituído por até três substituintes selecionados de entre halogéneo, alquilo C1-C4, alcoxi C1-C4, trifluorometoxi, difluorometoxi, tri-fluorometilo e ciano. A presente invenção também descreve compostos de fórmula (IA) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: 10 ΡΕ2206710
em que: um de R5 e Rè é hidrogénio ou R2 e o outro é (a) P—'j\
A é um anel fenilo ou um anel heteroarilo de 5 ou 6 membros;
Ri é hidrogénio ou até três substituintes independentemente selecionados de entre halogéneo, alquilo C1-C4, alcoxi C1-C4, trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluoro-metilo, ciano, anéis fenilo facultativamente substituídos e heteroarilo de 5 ou 6 membros facultativamente substituído; R2 é hidrogénio ou até três substituintes independentemente selecionados de entre halogéneo, alquilo C1-C4, alcoxi C1-C4, trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluoro-metilo e ciano; R3, R3', R4 e R4' são cada um independentemente selecionados de entre hidrogénio, halogéneo e metilo; R7 é hidrogénio ou halogéneo; X é NH facultativamente substituído por metilo, O, CH2 facultativamente substituído por flúor ou metilo, ou uma ligação direta; 11 ΡΕ2206710 m é 0 - 2; e n é 0-4.
Quando Ri é fenilo ou um anel heteroarilo de 5 ou 6 membros ele pode ser substituído por até três subs-tituintes selecionados de entre halogéneo, alquilo C1-C4, alcoxi C1-C4, trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluoro-metilo e ciano.
Quando X é NH ele pode ser substituído por me- tilo.
Quando X é CH2 ele pode ser substituído por fluoro ou metilo.
Numa forma de realização de fórmula (IA), A é tiofeno ou fenilo facultativamente substituído;
Ri é hidrogénio, halogéneo, alcoxi C1-C4 ou trifluo-rometilo; R2, R3 e R4 são cada um hidrogénio; X é uma ligação direta; m é 2; e n é 0 .
Numa outra forma de realização de fórmula (IA), A é tiofeno substituído por fenilo;
Ri é hidrogénio, halogéneo, alcoxi C1-C4, ou trifluo-rometilo; 12 ΡΕ2206710 R2, R3 e R4 são cada um hidrogénio; X é uma ligação direta; m é 2; e n é 0 . 0 termo "alquilo" como um grupo ou parte de um grupo por exemplo alcoxi ou hidroxialquilo refere-se a um grupo alquilo linear ou ramificado em todas as formas isoméricas. 0 termo "alquilo C1-C6" refere-se a um grupo alquilo, conforme acima definido, contendo pelo menos 1, e no máximo 6 átomos de carbono. Exemplos de tais grupos alquilo incluem metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo ou terc-butilo. Exemplos de tais grupos alcoxi incluem metoxi, etoxi, propoxi, isopro-poxi, butoxi, isobutoxi, sec-butoxi e terc-butoxi.
Grupos cicloalquilo C3-C6 adequados incluem ci-clopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclo-hexilo.
Grupos cicloalquiloxi C3-C6 adequados incluem ciclo-propoxi, ciclobutoxi, ciclopentoxi e ciclo-hexiloxi.
Conforme aqui usado, o termo "halogéneo" refere--se a flúor (F) , cloro (Cl), bromo (Br) ou iodo (I) e o termo "halo" refere-se ao halogeno: fluoro (-F), cloro (-C1), bromo(-Br) e iodo(-I). 0 termo "heteroarilo" representa um anel insa-turado que compreende um ou mais heteroátomos. Quando o 13 ΡΕ2206710 termo heteroarilo representa um grupo de 5 membros ele contém um heteroátomo selecionado de entre 0, N ou S e pode facultativamente conter ainda 1 a 3 átomos de azoto. Quando heteroarilo representa um grupo de 6 membros, ele contém desde 1 a 3 átomos de azoto. Exemplos de tais anéis heteroarilo de 5 ou 6 membros incluem pirrolilo, triazolilo, tiadiazolilo, tetrazolilo, imidazolilo, pirazolilo, isotia-zolilo, tiazolilo, isoxazolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, furazanilo, furanilo, tienilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo e triazinilo.
Em certos compostos de fórmula (I), dependendo da natureza do substituinte, existem átomos de carbono quirais e por conseguinte os compostos de fórmula (I) podem existir como estereoisómeros. A descrição estende-se a todos os isómeros óticos tais como as formas estereoisoméricas dos compostos de fórmula (I) incluindo enantiómeros, diaste-reoisómeros e suas misturas, tais como racematos. As diferentes formas estereoisoméricas podem ser separadas ou resolvidas uma da outra por métodos convencionais ou qualquer isómero dado pode ser obtido por sinteses este-reosselectivas ou assimétricas convencionais.
Certos compostos presentes podem existir em várias formas tautoméricas e deve ser entendido que a invenção abrange todas tais formas tautoméricas.
Compostos adequados de fórmula (I) são: ácido 3- (5 —{5 —[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]--1,2,4-oxadiazol-3-il} -lfí-indol-l-il) propanóico 14 ΡΕ2206710 ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanóico ácido 3-[3-cloro-5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]-fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanóico ácido 3-(3-cloro-5-{5-[4-fenil-5-(trifluorometil)-2--tienil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico ácido 3- (4 — {5—[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico ácido 3-[4-(5-{3-cloro-4-[(trifluorometil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanóico ácido 3-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanóico ácido 3-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3--piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanóico ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanóico ácido (5—{5—[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)acético ácido 3-[3-bromo-5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi] -fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]-propanóico ácido 5-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-ΙΗ-indol-l-il]pentanóico ácido 4-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico ácido 4-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)-oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico 15 ΡΕ2206710 ácido (2S)-3-[5-(5-(3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fe-nil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-ΙΗ-indol-l-il]-2-metilpropanóico ácido 2,2-dimetil-3-(5-[5-[4-fenil-5-(trifluorometil)--2-tienil] -1,2,4-oxadiazol-3-il) -lfí-indol-1-)propanóico ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]-2,2,3-trifluoro-propanóico ácido 4—[4—(5—{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-ΙΗ-indol-l-il]butanóico ácido 3—[5—(5—{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanóico ácido 3—[4—(5—{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il ]propanóico ácido 3—(4-{5-[2—(trifluorometil)-4-bifenilil]-1,2,4--oxadiazol-3-il} -ΙΗ-indol-l-il)propanóico ácido 3-(4-(5-[4-ciclo-hexil-3-(trifluorometil)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-ΙΗ-indol-l-il)propanóico ácido 3—(4—(5—[4—[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil) fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico ácido [4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]acético ácido [4-(5-(3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]acético ácido 3—(4—(5—[2'-fluoro-2-(trifluorometil)-4--bifenilil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-ΙΗ-indol-l-il)propanóico ácido 4-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-ΙΗ-indol-l-il]butanóico 16 ΡΕ2206710 ácido 4-[4-(5-{3-cloro-4-[(trifluorometil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-ΙΗ-indol-l-il]butanóico ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3--piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-ΙΗ-indol-l-il]butanóico ácido 4-(4 — {5 —[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-ΙΗ-indol-l-il)butanóico ácido 4-(4-(5-[2-(trifluorometil)-4-bifenilil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-ΙΗ-indol-l-il)butanóico ácido 3-(4-(5-[4-(metiloxi)-3-(trifluorometil)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-ΙΗ-indol-l-il)propanóico ácido 4 —{4 — [5 - (3-ciano-4-{ [(1R)-1-metilpropil]oxi}-fenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]-ΙΗ-indol-l-il(butanóico ácido 4 —{4 — [5 - (3-ciano-4-{ [ (IS)-1-metilpropil]oxi}-fenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]-ΙΗ-indol-l-il(butanóico ácido 3-(4-{5-[3-etil-4-(1-piperidinil)fenil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-ΙΗ-indol-l-il)propanóico ácido 3-(4 - [5 - (4-ciclo-hexil-3-etilfenil)-1,2,4--oxadiazol-3-il]-ΙΗ-indol-l-il(propanóico ácido 3 - (4-(5 - [5-cloro-6-(1-pirrolidinil)-3--piridinil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-ΙΗ-indol-l-il)propanóico ácido 4-(4-(5-(3-bromo-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-ΙΗ-indol-l-il]butanóico ácido 4-(4-{5-[3-cloro-4-(2-metilpropil)fenil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)butanóico ácido 3-(4 — {5 —[4-(2-metilpropil)-3-(trifluorometil)-fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-ΙΗ-indol-l-il)propanóico 17 ΡΕ2206710 ácido 4-(4-(5-[3-ciano-4-(2-metilpropil)fenil]-l,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)butanóico ácido 4-(4-(5- (2-ciano-4-bifenilil)-1,2,4-oxadiazol-3--il]-lH-indol-l-il(butanóico ácido 3-(3-cloro-4-{5-[4-fenil-5-(trifluorometil)-2--tienil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico ácido 3-[3-cloro-5-(5-(3-cloro-4-[(trifluorometil)-oxi]fenil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il ]propanóico ácido 3-(3-cloro-5-{5-[3-cloro-4-(propiloxi)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico ácido 3-(3-cloro-5-{5-[3-cloro-4-(metiloxi)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico ácido 3-(3-cloro-5-{5-[4-(metiloxi)-3-(trifluorometil) fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico ácido 3-(3-cloro-5-{5-[3-cloro-4-(etiloxi)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico ácido 3-(3-cloro-5-(5-(3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi] -fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il)propanóico ácido 3-(3-cloro-5-(5-[4-nitro-3-(trifluorometil)-fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico ácido 3-[3-cloro-5-(5-{4-cloro-3-[(1-metiletil)-oxi]fenil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanóico ácido 3-(3-cloro-5-{5-[6-(metiloxi)-3-bifenilil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico ácido 3-(5-(5-(6-(trifluorometil)-3-bifenilil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico 18 ΡΕ2206710 ácido 3-{5- [5- (4-fenil-2-tienil)-1,2,4-oxadiazol-3--il]-lH-indol-l-iljpropanóico ácido 3-{3-cloro-5-[5-(4-ciclo-hexilfenil)-1,2,4--oxadiazol-3-il]-lH-indol-l-il}propanóico ácido 3-(3-cloro-5-{5-[6-(4-fluorofenil)-3-piridinil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico ácido 3-(3-cloro-5-{5-[6-(4-fluorofenil)-3-piridinil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-ΙΗ-indol-l-il)propanóico ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Os derivados farmaceuticamente aceitáveis do ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico incluem qualquer sal, éster ou sal de tal éster farmaceuticamente aceitável que, na administração ao recipiente é capaz de proporcionar (diretamente ou indiretamente) o ácido 4 — [ 4 — -(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxa-diazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico ou um seu metabólico ativo ou resíduo. 0 ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3--piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico pode formar sais. Será evidente que para uso em medicina os sais do ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3--piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico deverão ser farmaceuticamente aceitáveis. Os sais farmaceuticamente aceitáveis adequados serão evidentes para os peritos na técnica e incluem aqueles descritos em J. Pharm. Sci.r 66 (1977) 1-19, tais como os sais de adição de 19 ΡΕ2206710 ácido formados com ácidos inorgânicos por exemplo ácido cloridrico, bromídrico, sulfúrico, nitrico ou fosfórico; e ácidos orgânicos por exemplo ácido succinico, maleico, acético, fumárico, citrico, tartárico, benzóico, p-tolue-nossulfónico, metanossulfónico ou naftalenossulfónico. Certos compostos de fórmula (I) podem formar sais de adição de ácido com um ou mais equivalentes do ácido. A presente invenção inclui dentro do seu âmbito e alcance todas as possíveis formas estequiométricas e não estequiométricas. Os sais também podem ser preparados a partir de bases farmaceuticamente aceitáveis incluindo bases inorgânicas e bases orgânicas. Os sais derivados de bases inorgânicas incluem os de alumínio, amónio, cálcio, cobre, ferro férrico, ferro ferroso, lítio, magnésio, sais mangânico e manganoso, potássio, sódio, zinco e semelhantes. Os sais derivados de bases orgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, e aminas cíclicas. As bases orgânicas farmaceuticamente aceitáveis particulares incluem arginina, betaína, cafeína, colina, N,N'-dibenziletilenodiamina, di-etilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, eta-nolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperi-dina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isso-propilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, tris(hidroximetil)aminome-tano (TRIS, trometamol) e semelhantes. Os sais também podem ser formados a partir de resinas de permuta iónica básicas, por exemplo resinas de poliamina. Quando o composto da 20 ΡΕ2206710 presente invenção é básico, os sais podem ser preparados a partir de ácidos farmaceuticamente aceitáveis, incluindo ácidos inorgânicos e orgânicos. Tais ácidos incluem ácido acético, benzenossulfónico, benzóico, canforossulfónico, citrico, etanossulfónico, etanodissulfónico, fumárico, glucónico, glutâmico, bromidrico, cloridrico, isetiónico, lático, maleico, málico, mandélico, metanossulfónico, múcico, pamóico, pantoténico, fosfórico, propiónico, suc-cínico, sulfúrico, tartárico, p-toluenossulfónico e semelhantes . 0 ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil) oxi]-3--piridinil}-!, 2,4-oxadiazol-3-il) -lfí-indol-l-il] butanóico pode ser preparado em forma cristalina ou não cristalina e, se cristalina, pode facultativamente ser hidratado ou solvatado. Esta invenção inclui dentro do seu âmbito e alcance hidratos ou solvatos estequiométricos bem como compostos contendo quantidades variáveis de água e/ou solvente.
Incluídos dentro do âmbito e alcance da invenção estão todos os sais, solvatos, hidratos, complexos, polimorfos, pró-fármacos, derivados radiomarcados, estereo-isómeros e isómeros óticos do ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[ (1--metiletil)oxi]-3-piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-1H--indol-l-il]butanóico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Num aspeto adicional, esta invenção proporciona processos para a preparação do ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6- 21 ΡΕ2206710 -[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-1H--indol-l-il]butanóico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, um composto de fórmula (I) . Num aspeto, o composto de fórmula (I) pode ser preparado pelo processo do Esquema I onde A, Z, Ri, R2, R7 são conforme definidos para a fórmula (I):
Esquema I
0 primeiro passo do processo (II a III) é realizado num solvente adequado, tal como metanol ou etanol e é aquecido até uma temperatura no intervalo 50-80 °C. No 22 ΡΕ2206710 segundo passo do processo (III a V) reagentes adequados incluem EDC-HCl e HOBt num solvente tal como DMF a uma temperatura entre a temperatura ambiente e 90 °C ou alternativamente PyBOP em DMF. Alternativamente (III) pode ser convertido a (V) por tratamento com o éster carboxilico de (IV) e etóxido de sódio em etanol numa reação de micro--ondas a uma temperatura tal como 120 °C. No terceiro passo (V a VII) uma base tal como carbonato de césio ou alternativamente carbonato de potássio é usada e a reação pode ser aquecida quer convencionalmente quer usando um reator de micro-ondas a uma temperatura tal como 140 °C. O quarto passo do processo (VII a I) é realizado num solvente adequado tal como metanol ou alternativamente etanol e pode ser realizado a quer temperatura ambiente quer temperatura elevada tal como 40 ou 50 °C.
Os compostos de fórmula (IV) ou estão comercialmente disponíveis, ou podem ser preparados usando métodos descritos na literatura ou podem ser preparados conforme descrito na secção experimental. Os brometos de fórmula (VI) ou estão comercialmente disponíveis ou estão comercialmente disponíveis, ou podem ser preparados usando métodos descritos na literatura ou usando os métodos revelados.
Num outro aspeto a preparação de um composto de fórmula (I) pode ser preparada pelo processo no Esquema II onde A, Z, Rlr R2, R7 são conforme definidos para a fórmula (I). No primeiro passo a reação (II a VIII) pode ser aquecida a 80 °C. O segundo passo do processo (VIII a IX) é realizado num solvente adequado tal como etanol ou 23 ΡΕ2206710 metanol. 0 terceiro passo deste processo (IX a VII) requer reagentes de acoplamento de amida tais como EDC-HCl e HOBt num solvente tal como DMF a uma temperatura entre a temperatura ambiente e 120 °C. O quarto passo do processo é realizado num solvente adequado tal como etanol ou metanol. Os compostos de fórmula (IV) ou estão comercialmente disponíveis, ou podem ser preparados usando métodos descritos na literatura ou podem ser preparados conforme descrito na secção experimental. Os brometos de fórmula VI ou estão comercialmente disponíveis, ou podem ser preparados usando métodos descritos na literatura ou pelos métodos revelados.
Esquema II
NaOH(aq) solvente
I ΡΕ2206710 24
Nos casos onde o substituinte R7 na fórmula I é um átomo de cloro ligado a C-3 do anel indole este pode ser introduzido de várias maneiras. 0 intermediário (V) no Esquema I onde R7 = H e Ri, R2 e A são conforme definidos na fórmula (I) pode ser tratado com IV-clorossuccinimida em diclorometano para originar o composto 3-cloro- (Va) o qual pode em seguida ser convertido a (I) conforme descrito no esquema I (Esquema III).
Esquema III
Va v
Alternativamente, o intermediário (II) onde R7 H pode ser clorado por tratamento com IV-clorossuccinimida em DMF para originar um 3-cloro-indole (lia) o qual pode ser convertido a um composto de estrutura (I) conforme descrito no esquema II (Esquema IV).
Esquema IV
lí
NCS
DCM
Há
Onde R7 = Br, o intermediário (V) onde R7 = H e 25 ΡΕ2206710 A, Rx e R2 são conforme definidos na fórmula (I) pode ser bromado por tratamento com Br2 em DMF para originar (Vb) onde R7 = Br (Esquema V) .
Esquema V
Bíj DMF
Nos casos onde Ri é um grupo fenilo, é possivel introduzir este grupo por uma reação de acoplamento cruzado num composto de estrutura VII para originar Vila (Esquema VI) onde A, Z, R2 e R7 são conforme definidos na fórmula (I) e Ar é fenilo facultativamente substituído, seguido por hidrólise até ao composto I. Nesta transformação, M é um grupo tal como B(OH)2 que permite à reação de acoplamento cruzado ocorrer, Y é um grupo tal como bromo, iodo ou trifluorometanossulfonato e o catalisador uma espécie de paládio tal como tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0). Tais reacções são tipicamente realizadas a temperatura elevada.
Esquema VI
Nos casos onde Ri é um grupo alcoxi tal como 26 ΡΕ2206710 O-etilo ou O-isopropilo, o substituinte alquilo pode ser introduzido num composto de fórmula VII onde Ri = OH e A, Z, R7 e R2 são conforme definidos na fórmula (I) para originar um composto de fórmula Vllb onde Ri = O-alquilo (Esquema VII). Neste caso Y é um halogéneo tal como iodo. A reação pode ser realizada num solvente polar tal como DMF na presença de uma base tal como carbonato de potássio.
Esquema VII
Em certos casos é possível alquilar o intermediário índole (V) onde Ri, R2, R7 e A são conforme definidos na fórmula (I) diretamente com brometo de alquilo substituído por ácido carboxílico para originar o composto final (I) sem a necessidade de um passo de hidrólise (Esquema VIII). Uma base adequada para esta transformação é carbonato de césio.
Esquema VIII
Os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados convencionalmente por reação com o ácido ou derivado de ácido apropriado. 27 ΡΕ2206710
As potências e eficácias dos compostos desta invenção para o recetor S1P1 podem ser determinadas por ensaio GTPyS realizado no recetor clonado humano conforme aqui descrito ou pelo ensaio de ligação de levedura, também aqui descrito. 0 ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)-oxi]-3-piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]buta-nóico tem demonstrado actividade agonista no recetor SlPl, usando os ensaios funcionais aqui descritos. 0 ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3--piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico e seus sais farmaceuticamente aceitáveis são por conseguinte úteis no tratamento de condições ou desordens que são mediadas via recetor SlPl. Em particular o ácido 4—[4— (5 — -{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-l,2,4-oxadia-zol-3-il)-lfí-indol-l-il] butanóico e seus sais farmaceuticamente aceitáveis são úteis no tratamento de esclerose múltipla, doenças autoimunes, desordens inflamatórias crónicas, asma, neuropatias inflamatórias, artrite, transplante, doença de Crohn, colite ulcerativa, lúpus erite-matoso, psoriase, lesão de isquemia-reperfusão, tumores sólidos e metástase de tumor, doenças associadas com angiogénese, doenças vasculares, condições de dor, doenças virais agudas, condições inflamatórias do intestino, diabetes dependente de insulina e não dependente de insulina (daqui em diante referidas como "Desordens da Invenção").
Deve ser compreendido que "tratamento" conforme 28 ΡΕ2206710 aqui usado inclui profilaxia bem como alivio dos sintomas estabelecidos.
Por conseguinte, a invenção também proporciona o ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso como substância terapêutica, em particular no tratamento de condições ou desordens mediadas via recetor S1P1. Em particular, a invenção proporciona o ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil) oxi]-3-piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il] -butanóico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso como substância terapêutica no tratamento de esclerose múltipla, doenças autoimunes, desordens inflamatórias crónicas, asma, neuropatias inflamatórias, artrite, transplante, doença de Crohn, colite ulcerativa, lúpus erite-matoso, psoriase, lesão de isquemia-reperfusão, tumores sólidos e metástase de tumor, doenças associadas com angiogénese, doenças vasculares, condições de dor, doenças virais agudas, condições inflamatórias do intestino, diabetes dependente de insulina e não dependente de insulina. A invenção proporciona ainda um método de tratamento de condições ou desordens em mamiferos incluindo humanos as quais podem ser mediadas via recetor S1P1, o qual compreende a administração ao sofredor de uma quantidade terapeuticamente segura e eficaz de ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6- [ (1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indol-l-il]butanóico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 29 ΡΕ2206710
Num outro aspecto, a invenção proporciona o uso de ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridi-nil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável no fabrico de um medicamento para uso no tratamento das condições ou desordens mediadas via recetor S1P1.
De modo a usar o ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[ (1--metiletil) oxi] - 3-piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il) — 1 ff— -indol-l-il]butanóico e seus sais farmaceuticamente aceitáveis em terapia, eles serão normalmente formulados numa composição farmacêutica de acordo com a prática farmacêutica padrão. A presente invenção também proporciona uma composição farmacêutica, a qual compreende o ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um agente de suporte ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
Num outro aspecto, a presente invenção proporciona um processo para a preparação de uma composição farmacêutica, compreendendo o processo a mistura de ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável e um agente de suporte ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
Uma composição farmacêutica da invenção, a qual 30 ΡΕ2206710 pode ser preparada por mistura por adição, adequadamente à temperatura ambiente e pressão atmosférica, está usualmente adaptada para administração oral, parentérica ou retal e, como tal, pode estar na forma de comprimidos, cápsulas, preparações liquidas orais, pós, grânulos, pastilhas, pós reconstituiveis, soluções ou suspensões injectáveis ou para infusão ou supositórios. As composições administráveis oralmente são geralmente preferidas.
Os comprimidos e cápsulas para administração oral podem estar em forma de dose unitária e podem conter excipientes convencionais, tais como agentes de ligação (por exemplo, amido de milho pré-gelatinizado, polivinil-pirrolidona ou hidroxipropilmetilcelulose); agentes de enchimento (por exemplo, lactose, celulose microcristalina ou hidrogenofosfato de cálcio); lubrificantes para fazer comprimidos (por exemplo, estearato de magnésio, talco ou silica); desintegrantes (por exemplo, amido de batata ou glicolato de amido sódico); e agentes molhantes aceitáveis (por exemplo, sulfato de laurilo e sódio). Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na prática farmacêutica normal.
As preparações liquidas orais podem estar na forma de, por exemplo, suspensão aquosa ou oleosa, soluções, emulsões, xaropes ou elixires, ou podem estar na forma de um produto seco para reconstituição com água ou outro veiculo adequado antes do uso. Tais preparações liquidas podem conter aditivos convencionais tais como 31 ΡΕ2206710 agentes de suspensão (por exemplo, xarope de sorbitol, derivados de celulose ou gorduras edíveis hidrogenadas), agentes de emulsificação (por exemplo, lecitina ou acácia), veículos não aquosos (os quais podem incluir óleos edíveis por exemplo óleo de amêndoa, ésteres oleosos, álcool etílico ou óleos vegetais fraccionados), conservantes (por exemplo p-hidroxibenzoatos de metilo ou propilo ou ácido sórbico) e, se desejado, aromatizantes ou corantes convencionais, sais tamponantes e agentes adoçantes conforme apropriado. As preparações para administração oral podem ser adequadamente formuladas para dar uma libertação controlada do composto ativo.
Para administração parentérica, as formas de dosagem unitária fluidas são preparadas utilizando um composto da invenção ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis e um veículo estéril. As formulações para injecção podem ser apresentados em forma de dosagem unitária, por exemplo em ampolas ou em multi-dose, utilizando um composto da invenção ou seus derivados farmaceuticamente aceitáveis e um veículo estéril, facultativamente com um conservante adicionado. As composições podem tomar formas tais como suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos, e podem conter agentes de formulação tais como agentes de suspensão, estabilização e/ou dispersão. Alternativamente, o ingrediente ativo pode estar na forma de pó para constituição com um veículo adequado, por exemplo água livre de pirogénio estéril, antes do uso. 0 composto, dependendo do veículo e concentração usados, pode 32 ΡΕ2206710 ser ou suspenso ou dissolvido no veiculo. Na preparação de soluções, o composto pode ser dissolvido para injecção e esterilizado por filtração antes do enchimento num frasco ou ampola adequados e selagem. Vantajosamente, adjuvantes tais como um anestésico local, conservantes e agentes de tamponamento são dissolvidos no veiculo. Para aumentar a estabilidade, a composição pode ser congelada após enchimento no frasco e a água removida sob vácuo. As suspensões parentéricas são preparadas substancialmente da mesma maneira, excepto que o composto é suspenso no veiculo em vez de ser dissolvido, e a esterilização não pode ser conseguida por filtração. 0 composto pode ser esterilizado por exposição a óxido de etileno antes da suspensão num veiculo estéril. Vantajosamente, um agente tensioativo ou molhante é incluído na composição para facilitar a distribuição uniforme do composto.
As loções podem ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa e em geral conterão também um ou mais agentes de emulsificação, agentes de estabilização, agentes de dispersão, agentes de suspensão, agentes espessantes ou agentes de coloração. Os rebuçados podem ser formulados com uma base aquosa ou não aquosa compreendendo também um ou mais agentes de dispersão, agentes de estabilização, agentes de solubilização ou agentes de suspensão. Eles também podem conter um conservante. 0 ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3--piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il ]butanóico 33 ΡΕ2206710 ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis também podem ser formulados em composições retais tais como supositórios ou clisteres de retenção, por exemplo contendo bases para supositório convencionais tais como manteiga de cacau ou outros glicéridos. 0 ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3--piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis também podem ser formulados como preparações para depósito. Tais formulações de longa atuação podem ser administradas por implantação (por exemplo subcutaneamente ou intramuscularmente) ou por injeção intramuscular. Por conseguinte, por exemplo, os compostos da invenção podem ser formulados com materiais poliméricos ou hidrofóbicos adequados (por exemplo na forma de uma emulsão num óleo aceitável) ou resinas de permuta iónica, ou na forma de derivados escassamente solúveis, por exemplo, na forma de um sal escassamente solúvel.
Para administração intranasal, o ácido 4—[4— (5 — -{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-l,2,4-oxadia-zol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico ou seus sais farmaceuti-camente aceitáveis, podem ser formulados na forma de soluções para administração via um dispositivo adequado de dose medida ou unitária ou alternativamente na forma de uma mistura pulverulenta com um agente de suporte adequado para administração usando um dispositivo de entrega adequado. Por conseguinte, o ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)-oxi]-3-piridinil]-l,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]buta- 34 ΡΕ2206710 nóico ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser formulados para administração oral, bucal, parentérica, tópica (incluindo oftálmica e nasal), por depósito ou retal ou numa forma adequada para administração por inalação ou insuflação (quer através da boca quer do nariz). 0 ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil) oxi]-3--piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser formulados para administração tópica na forma de pomadas, cremes, géis, loções, pessários, aerossóis ou gotas (por exemplo gotas para o olho, ouvido ou nariz). As pomadas e cremes podem, por exemplo, ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa com a adição de agentes espessantes e/ou de gelificação adequados. As pomadas para administração ao olho podem ser fabricadas de um modo estéril usando componentes esterilizados. A composição pode conter desde 0,1% a 99% numa base ponderai, preferivelmente desde 10 a 60% numa base ponderai, do material ativo, dependendo do método de administração. A dose do composto usado no tratamento das desordens acima mencionadas variará de uma maneira usual com a severidade das desordens, o peso do paciente e outros factores semelhantes. Contudo, como guia geral as doses unitárias adequadas podem ser de 0,05 a 1000 mg, mais adequadamente de 1,0 a 500 mg ou de 1,0 a 200 mg, e tais doses unitárias podem ser administradas mais do que uma vez num dia, por exemplo duas ou três vezes num dia. 35 ΡΕ2206710 0 ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3--piridinil}-l,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser usados em preparações de combinação. Por exemplo, o composto da invenção pode ser usado em combinação com ciclosporina A, metotrexato, esteroides, rapamicina, inibidores de citocina pró-inflamatória, imunomoduladores incluindo produtos biológicos ou outros compostos terapeuticamente ativos. A especificação sujeita também descreve compostos marcados isotopicamente, os quais são idênticos aos descritos nas fórmula (I) e seguintes, excepto para o facto de que um ou mais átomos são trocados por um átomo tendo uma massa atómica ou número de massa diferente da massa atómica ou número de massa usualmente encontrado na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogénio, carbono, azoto, oxigénio, fósforo, flúor, iodo e cloro, tal
3[t 11 r· 14 r* 18^ 123τ Λ 125T como H, C, C, F, I e I.
Os compostos de fórmula (I) e sais farmaceuti-camente aceitáveis dos referidos compostos que contêm os isótopos acima mencionados e/ou outros isótopos de outros átomos estão dentro do âmbito e alcance da presente invenção. Os compostos marcados isotopicamente da presente invenção, por exemplo aqueles nos quais isótopos rádio- ativos tais como 3H e 14C são incorporados, são úteis em 36 ΡΕ2206710 ensaios de distribuição de fármaco e/ou substrato no tecido. Isótopos tritiados, isto é 3H, e carbono-14, isto é 14C, são particularmente preferidos pela sua facilidade de preparação e detetabilidade. Os isótopos 11F e 18F são particularmente úteis em PET (tomografia de emissão de positrão), e os isótopos 125I são particularmente úteis em SPECT (tomografia computorizada de emissão de fotão único), todos úteis em imagiologia do cérebro. Além disso, a substituição com isótopos mais pesados tais como deutério, isto é 2H, pode produzir certas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo meia-vida in vivo aumentada ou necessidades de dosagem reduzidas e, por isso, podem ser preferidos em algumas circunstâncias. Os compostos de fórmula (I) marcados isotopicamente podem geralmente ser preparados realizando os procedimentos revelados nos Esquemas e/ou nos Exemplos abaixo, substituindo um reagente não marcado isotopicamente por um reagente marcado isotopicamente prontamente disponível.
As seguintes Descrições e Exemplos ilustram a preparação de ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]--3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanóico.
Condições, Hardware e Software para Sistemas LCMS Analítica
Hardware
Bomba de Gradiente Agilent 1100 Auto-amostrador Agilent 1100 37 ΡΕ2206710
Detetor Agilent 1100 DAD Desgaseador Agilent 1100 Forno Agilent 1100 Controlador Agilent 1100
Gestor de Solvente Binário Waters Acquity Gestor de Amostra Waters Acquity PDA Waters Acquity Espetrómetro de Massa Waters ZQ
Sedere Sedex 55, Sedere Sedex 85, Sedere Sedex 75 ou Polymer Labs PL-ELS-2100 Software
Waters MassLynx versão 4.0 SP2 ou versão 4.1 Para método de 5 minutos Coluna A coluna usada é uma Waters Atlantis, as dimensões da qual são 4,6 mm x 50 mm. O tamanho de partícula da fase estacionária é 3 pm. Solventes A: Solvente aquoso = água + ácido fórmico 0,05% B: Solvente orgânico = acetonitrilo + ácido fórmico 0,05% Método
O método genérico usado tem um tempo de jato de 5 minutos. Tempo/min % B 3 3 97 97 3 3 0 0,1 4 4,8 4,9 5, 0 38 ΡΕ2206710
Caudal 0 método acima tem uma caudal de 3 mL/min
Para método de 2 minutos Software
Waters MassLynx versão 4.1 Coluna A coluna usada é uma Waters Acquity BEH UPLC C18, cujas dimensões são 2,1 mm x 50 mm. O tamanho de partícula da fase estacionária é 1,7 ym.
Solventes A: Solvente aquoso = água + ácido fórmico 0,05% B: Solvente orgânico = acetonitrilo + ácido fórmico 0,05% Lavagem Fraca = Metanol:Água 1:1 Lavagem Forte = Água Método O método genérico usado tem um tempo de jato de 2 minutos.
Tempo/min % B 0 3 0,1 3 1,5 97 1, 9 97 2,0 3 O método acima tem uma caudal de 1 mL/min O volume de injecção para o método genérico é 0,5 yL A temperatura da coluna é 40 ° O intervalo de detecção em UV é desde 220 a 330 nm 39 ΡΕ2206710
Condições Para Sistema AutoPrep Dirigido a Massa de Acesso Aberto (MDAP)
Hardware
Os instrumentos de Prep Dirigido a Massa de Acesso Aberto consistem do seguinte: 1 bomba Waters 600 Gradient 1 injetor/coletor Waters 2767 1 Gestor de Reagent Waters 1 Espectrómetro de Massa MicroMass ZQ 1 coletor de resíduos - Gilson Aspec 1 detetor de UV Gilson 115 pós-fração 1 Sistema Computador.
Software
MicroMass MassLynx v4.0 Coluna A coluna usada é tipicamente uma coluna Supelco LCABZ++ cujas dimensões são 20 mm de diâmetro interno por 100 mm de comprimento. O tamanho de partícula da fase estacionária é 5 ym.
Solventes A: Solvente aquoso = água + ácido fórmico 0,1% B: Solvente orgânico = MeCN:água 95:5 + ácido fórmico 0,05% Solvente de caraterização = MeOH:água 80:20 + acetato de amónio 50 mmol
Solvente de lavagem da agulha = MeOH:água:DMSO 80:10:10 Métodos
Um de cinco métodos pode ser usado dependendo do tempo de retenção analítico do composto de interesse. 40 ΡΕ2206710
Todos têm um tempo de jato de 15 minutos, o qual compreende um gradiente de 10 minutos seguido por um jorro na coluna de 5 minutos e passo de reequilibração. MDP 1,5-2,2 = 0-30% B MDP 2,0-2,8 = 5-30% B MDP 2,5-3,0 = 15-55% B MDAP 2,8-4,0 = 30-80% B MDP 3,8-5,5 = 50-90% B Caudal
Todos os cinco métodos têm uma caudal de 20 mL/min.
Sistema alternativo:
Hardware Módulo de Gradiente Binário Waters 2525
Bomba de Caraterização Waters 515 Módulo de Controlo de Bomba Waters
Injetor Coletor Waters 2767
Gestor Fluidico de Coluna Waters
Detetor com Arranjo de Fotodiodo Waters 2996
Espectrómetro de Massa Waters ZQ
Coletor de fração Gilson 202
Coletor de resíduo Gilson Aspec
Software
Waters MassLynx versão 4 SP2 Coluna
As colunas usadas são Waters Atlantis, cujas dimensões são 19 mm x 100 mm (pequena escala) e 30 mm x 100 mm 41 ΡΕ2206710 (grande escala). 0 tamanho de partícula da fase estacionária é 5 mm.
Solventes A: Solvente aquoso = água + ácido fórmico 0,1% B: Solvente orgânico = Acetonitrilo + ácido fórmico 0,1% Solvente de caraterização = metanol:água 80:20 Solvente de lavagem da agulha = metanol Métodos
Há cinco métodos usados dependendo do tempo de retenção analítico do composto de interesse. Eles têm um tempo de jato de 13,5 minutos, o qual compreende um gradiente de 10 minutos seguido por um jorro na coluna de 3,5 minutos e passo de reequilibração. Grande/Pequena Escala 1,0-1,5 = 5-30% B Grande/Pequena Escala 1,5-2,2 = 15-55% B Grande/Pequena Escala 2,2-2,9 = 30-85% B Grande/Pequena Escala 2,9-3,6 = 50-99% B
Grande/Pequena Escala 3,6-5,0 = 80-99% B (em 6 minutos seguido por 7,5 minutes de jorro e reequilibração)
Caudal
Todos os métodos acima têm uma caudal de ou 2 0 mL/min (Pequena Escala) ou 40 mL/min (Grande Escala).
Gradientes rasos
Grande 1,5 a 2,3 min = 13-29% B Grande 1,9 a 2,3 min = 25-41% B Grande 2,3 a 2, 6 min = 37-53% B Grande 2, 6 a 3,1 min = 49-65% B Grande 3,1 a 3, 6 min = 61-77% B 42 ΡΕ2206710
Condições usadas para NMR
Hardware
Ultraescudo Bruker 400MHz Autoamostrador Bruker B-ACS60 Consola Bruker Advance 400 Bruker DPX250 Bruker AVANCE 500 Bruker DRX600
Software
Interface do utilizador - NMR Kiosk Software de controlo - XWin NMR versão 3.0
Cromatografia A menos que indicado de outra maneira, toda a cromatografia em coluna foi realizada usando colunas de sílica.
Abreviaturas g - grama mg - miligrama mL - mililitro yL - microlitro
MeCN - acetonitrilo
MeOH - metanol
EtOH - etanol
Et20 - éter dietílico
EtOAc - acetato de etilo DCM - diclorometano 43 ΡΕ2206710 DIAD - azodicarboxilato de diisopropilo DME - 1,2-bis(metiloxi)etano DMF - N, iV-dimetilf ormamida DMSO - dimetilsulfóxido EDAC - hidrocloreto de N- (3-dimetilaminopropil) -IV'-etilcar-bodiimida EDC - hidrocloreto de N- (3-dimetilaminopropil) -IV'-etilcar-bodiimida EDCI - hidrocloreto de N- (3-dimetilaminopropil) -IV'-etilcar-bodiimida HOBT/HOBt - hidroxibenzotriazole IPA - álcool isopropilico NCS - N-clorossuccinimida
PyBOP - hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxitripirro-lidinofosfónio THF - tetra-hidrofurano dba - dibenzilideno-acetona RT - temperatura ambiente °C - graus Celsius M - molar H - protão s - singleto d - dupleto t - tripleto q - quarteto MHz - mega-hertz MeOD - metanol deuterado LCMS - cromatografia liquida acoplada à espectrometria de massa 44 ΡΕ2206710 LC/MS - cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa MS - espectrometria de massa ES - electrospray MH+ - ião molecular + H+ MDAP - (cromatografia líquida autopreparativa dirigida à massa) («mass directed automated preparative liquid chromato- graphy») sat° - saturado
Secção de química geral
Os intermediários para a preparação dos exemplos podem não ter sido preparados necessariamente a partir do lote específico descrito.
Descrição para Dl Z/-Hidroxi-l.ff-indole-5-carboximidamida (Dl)
5-Cianoindole (1,00 g) , hidroxilamina-HCl (978 mg) e NaHC03 (2,95 g) foram dissolvidos/suspensos em MeOH (14 mL) , aquecidos até 50 °C e agitados durante a noite. A análise por LCMS mostrou que a reação estava incompleta depois deste tempo, de modo que uma outra porção de hidroxilamina-HCl (978 mg) foi adicionada e a temperatura de reação subiu até 80 °C. A reação ficou completa após 4 horas. A mistura reacional foi arrefecida até à temperatura 45 ΡΕ2206710 ambiente e evaporada até à secura sob pressão reduzida. 0 resíduo foi tratado com HC1 aquoso 1 M (50 mL) e extraído com EtOAc (2 x 50 mL) . Isto não resultou para extrair o produto da solução aquosa e por isso foi tratado com NaOH aquoso 2 M para ajustar o pH até aproximadamente 7 e em seguida reextraído com EtOAc (3 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água salgada (30 mL) , secos sobre MgSCb, filtrados e evaporados até à secura para dar o composto mencionado em título (1,36 g) na forma de um óleo castanho. δΗ (MeOD, 400 MHz) 6,50 (1H, s), 7,27 (1H, s), 7,36-7,45 (2H, m) , 7,88 (1H, s) . MS (ES) : C9H8N3O requer 175; encontrado 176 (MH+) .
Descrição para D2 5-{5-[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4-oxadiazol- -3-il}-lH-indole (D2)
Dl (174 mg) e 4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tio-fenocarboxilato de metilo (286 mg) foram combinados, tratados com etóxido de sódio (21% m/m em EtOH, 411 yL) e aquecida a 120 °C num reator de micro-ondas durante 30 minutos. A análise por LCMS mostrou que a reação estava incompleta, por isso o aquecimento por micro-ondas foi continuado durante mais dois períodos de 30 minutos. A mistura reacional foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente, extinta com H2O (2 mL) e evaporada 46 ΡΕ2206710 até à secura sob pressão reduzida para dar o produto cru (411 mg) na forma de um sólido castanho. 0 residuo cru foi purificado num cartucho 40+S Biotage, eluindo com uma mistura 0 a 50% de Et20 em éter de petróleo. Isto deu o composto mencionado em titulo (122 mg) na forma de um sólido esbranquiçado. δΗ (CDC13, 400 MHz) : 6,68 (1H, s) , 7,30 (1H, t), 7,41-7,55 (6H, m) , 7,92 (1H, s) , 7,99 (1H, d), 8,36 (1H, br. s) , 8,50 (1H, s) . MS (ES) : C2iH12F3N30S requer 411; encontrado 410 (M-H+) .
Descrição para D 3 3-(5-{5-[4-Fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-l.ff-indol-l-il)propanoato de etilo (D3)
D2 (100 mg) foi dissolvido em DMF (1,2 mL), tratado com K2CO3 (50 mg) em seguida 3-bromopropionato de etilo (90 mg) e aquecida a 130 °C durante a noite. Após este tempo, LCMS mostrou a reação revelou-se incompleta por isso mais 3-bromopropionato de etilo foi adicionado (45 mg) a agitação continuou a 130 °C durante 2 horas. LCMS não mostrou alteração por isso a mistura reacional foi evaporada e em seguida repartida entre DCM e H20. A camada orgânica foi removida e a solução aquosa extraída com DCM. Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e evaporados para dar o produto cru (148 mg) . Este foi purificado sobre um cartucho de sílica (25+S), 47 ΡΕ2206710 eluindo com uma mistura de 0 a 25% de EtOAc em éter de petróleo e em seguida outra vez sobre um cartucho 25+M com uma mistura de 0 a 30% de EtOAc em éter de petróleo para dar o composto mencionado em titulo MF105672-144A3 (38 mg) na forma de um sólido branco. δΗ (CDC13, 400 MHz): 1,21 (3H , t) , 2,85 (2H, t) , 4, 12 (2H, 0 LO σ (2H, t) , 6, 60 (1H , d) , 7,21 (1H, d) , 7, 42-7,52 (6H, m) , 7, 91 (1H, s) , 8,00 (1H, d), 8,46 (1H, s) . MS (ES+) : C26H20F3N3O3S requer 511; encontrado 512 (MH+) .
Descrição para D3 (Procedimento alternativo) 3-(5-{5-[4-Fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-l.ff-indol-l-il)propanoato de etilo (D3)
5-{5-[4-Fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-lfí-indole (D2) (600 mg), 3-bromopropanoato de etilo (374 pL) , carbonato de césio (950 mg) e DMF foram aquecidos a 140 °C durante 1 hora num reator de micro--ondas. 1 eq adicional de 3-bromopropanoato de etilo (187 pL) foi adicionado e a mistura foi aquecida durante 30 minutos. A mistura reacional foi em seguida evaporada, dissolvida em DCM e filtrada para dar o composto mencionado em titulo (650 mg) na forma de um sólido castanho. (CDC13, 400 MHz): 1,21 (3H, t), 2,85 (2H, t) , 4,13 (2H, 4,50 (2H, t), 6,61 (1H, d), 7,22 (1H, d) , 7,44-7,52 , m) , 7,89· -7,92 (1H, m) , 7,98· -8,02 (1H, m) , 8,45-8,46 48 ΡΕ2206710 (1Η, m) . MS (ES) : C26H20F3N3O3S requer 511; encontrado 512 (MH+) .
Descrição para D 4 Ácido 3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]benzóico (D4)
O
OH
Propan-2-ol (2,45 mL) e PPh3 (1,18 g) foram dissolvidos em THF (30 mL) , arrefecidos até 0 °C, tratados com 3-cloro-4-hidroxibenzoato de metilo (6,00 g) seguido pela adição gota a gota de DIAD (9,44 mL) e agitados à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi em seguida evaporada e purificada sobre cartuchos de silica (4 x 100 g) , eluindo com uma mistura 0 a 40% de EtOAc em pentano para dar o produto cru (7,00 g) na forma de um óleo incolor. Este foi dissolvido em MeOH (30 mL) e NaOH aquoso 2 M (30 mL) e agitado à temperatura ambiente durante um fim-de-semana. A mistura reacional foi em seguida evaporada e redissolvida em H20. Esta solução foi lavada com Et20, acidificada até pH = 1 e extraída com Et20. Estes últimos extratos foram secos sobre MgS04, filtrados e evaporados para darem o composto mencionado em título (4,16 g) na forma de um sólido branco. δΗ (MeOD, 400 MHz) : 1,37 (6H, d), 4,77 (1H, septeto) , 7,12 (1H, d), 7,90 (1H, d), 7,98 (1H, s) . MS (ES) : Ci0HhC1O3 requer 214; encontrado 215 (MH+) . 49 ΡΕ2206710 Síntese alternativa: Ácido 3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]benzóico (D4) 0
OH 4-Hidroxi-3-clorobenzoato de metilo (13,4 g) foi dissolvido em DMF (150 mL) , tratado com K2CO3 (19,9 g) seguido por brometo de isopropilo (13,5 mL) e a mistura resultante aquecida a 70 °C e agitada durante a noite. A mistura reacional foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente, evaporada até à secura, redissolvida em EtOH, filtrada e evaporada uma vez mais para dar o éster intermediário (22,2 g) na forma de um sólido branco. Este composto era uma mistura de ésteres de etilo e metilo e foi usado cru na reação seguinte. 0 intermediário cru (22,2 g) foi dissolvido em MeOH (75 mL), tratado com NaOH aquoso 2 M (75 mL), aquecido a 60 °C e agitado durante 2 horas. A mistura reacional foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente, o MeOH evaporado e a solução aquosa restante acidificada com HC1 aquoso 5 M (30 mL) . O precipitado foi separado por filtração e seco para dar o composto mencionado em titulo (15,1 g) na forma de um sólido branco. δΗ (CDCI3, 400 MHz) : 1,42 (6H, d), 4,70 (1H, septeto) , 6,97 (1H, d), 7,97 (1H, d), 8,12 (1H, s) . MS (ES) : C10H11CIO3 requer 214; encontrado 213 (M-H+) . 50 ΡΕ2206710
Descrição para D5 MF105 672-175A2 5-(5-{3-Cloro—4-[(1-metiletil)oxi]fenilj-l,2,4-oxadiazol-3- -il)-lH-indole (D5)
Dl (500 mg), D4 (611 mg) e PyBOP (1,66 g) foram dissolvidos em DMF e agitados durante a noite. A mistura reacional foi em seguida evaporada e repartida entre EtOAc e H20. A camada orgânica foi lavada com H20 (x 2) em seguida água salgada, seca sobre MgS04, filtrada e evaporada para dar o produto cru. Este foi purificado sobre um cartucho de silica, eluindo com uma mistura 0 a 50% de Et20 em hexano para dar o composto mencionado em titulo (120 mg) na forma de um sólido branco. δΗ (CDCI3, 400 MHz) : 1,43 (6H, d) , 4, 69 (1H , septeto), 6, 92 (1H, s), 7,04 (1H d), 7,25 (1H, s), 7, 48 (1H, d), 8,00 (1H, d) , 8,07 (1H, d) 8,25 (1H, s), 8,39 (1H, br. s) , 8,50 (1H, s) . MS (ES) :
Ci9Hi6ClN302 requer 353; encontrado 354 (MH+) .
Descrição para D5 (procedimento alternativo) 5-(5-{3-Cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4-oxadiazol-3- -il)-lH-indole (D5)
Uma mistura de 5-cianoindole (5,00 g), NH2OH-HCl (6,11 g) e NaHC03 (14,77 g) em EtOH (176 mL) foi aquecida a 70 °C sob uma atmosfera de Ar durante a noite e em seguida a 80 °C durante 2,5 horas. A mistura reacional foi em 51 ΡΕ2206710 seguida filtrada e evaporada para dar um sólido amarelo--laranja (material cru Dl). D4 (7,55 g), HOBT (5,23 g) e EDCI (7,42 g) foram dissolvidos em DMF (88 mL). Esta mistura foi agitada durante 10 minutos e em seguida o sólido amarelo-laranja de cima (6,16 g) dissolvido em DMF (88 mL) foi adicionado. A mistura reacional foi aquecida a 80 °C durante a noite em seguida evaporada e repartida entre EtOAc e H20. As fases foram separadas e a solução aquosa extraida com duas outras porções de EtOAc. as soluções orgânicas combinadas foram secas e evaporadas. Parte do resíduo cru foi purificado sobre um cartucho 40+M Biotage, eluindo com uma mistura 5-30% de EtOAc em hexano. Isto deu o composto mencionado em título (1, 45 g) na forma de um sólido esbranquiçado. δΗ (CDC13, 400 MHz): 1,45 (6H, d), 4,72 (1H, septeto), 6,66-6,69 (1H, m) , 7,06 (1H, d), 7,29 (1H, tripleto aparente ou dd) , 7,50 (1H, d) , 8,01 (1H, dd) , 8,08 (1H, dd), 8,27 (1H, d), 8,49-8, 52 (1H , m). MS (ES) : C19H16C1N302 requer 353; encontrado 354 (MH+) . O resíduo cru restante foi triturado com MeOH frio para dar o composto mencionado em título (3,54 g) na forma de um sólido esbranquiçado. Dados de MS como acima.
Descrição para D 6 3-[5-(5-{3-Cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il) -líí-indol-l-il]propanoato de etilo (D6)
52 ΡΕ2206710 D5 (100 mg) foi dissolvido em DMF (1,5 mL) . A esta solução foi adicionado K2CO3 (58 mg) seguido por 3-bromopropionato de etilo (72 pL) e a mistura agitada e aquecida a 100 °C. Após 1 hora apenas 5% da conversão foi observada por LCMS, por isso mais porções de K2CO3 (97 mg) e 3-bromopropionato de etilo (72 pL) foram adicionados. Depois de 3 horas, a mistura reacional foi evaporada e em seguida repartida entre DCM e H2O. A camada aquosa foi extraida com DCM e em seguida as soluções de DCM combinadas foram lavadas com água salgada, secas sobre MgS04, filtradas e evaporadas para dar o produto cru. Este foi purificado sobre um cartucho de sílica, eluindo com uma mistura 0 a 50% de Et20 em éter de petróleo. Isto deu o composto mencionado em título (40 mg) na forma de um sólido branco. δΗ (CDCI3, 400 MHz) : 1,21 (3H, t) , 1,45 (6H, d) , 2,85 (2H, t), 4,13 (2H, q), 4, 51 (2H, t) , 4,71 (1H, septeto), 6,60 (1H, d) , 7,07 (1H, d) , 7,21 (1H, d), 7,45 (1H, d), 8,02 (1H, d) , 8,08 (1H, d) , 8,27 (1H, s) , 8,47 (1H, s) . MS (ES) : C24H24CIN3O4 requer 453; encontrado 454 (MH+) .
Descrição para D 7 3-Cloro-5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indole (D7) ct
D5 (300 mg) e NCS (113 mg) foram dissolvidos em DCM (4,2 mL) e agitados durante a noite à temperatura 53 ΡΕ2206710 ambiente. A mistura reacional foi em seguida diluída com DCM e lavada com H20. A solução aquosa foi extraída com duas outras porções de DCM e as soluções orgânicas combinadas foram evaporadas até à secura. 0 produto cru foi triturado com metanol para dar o composto mencionado em título (42 mg) na forma de um sólido castanho. 0 metanol foi em seguida evaporado e o sólido castanho resultante triturado com DCM para dar um segundo lote do composto mencionado em título (205 mg) na forma de um sólido castanho. δΗ (de-DMSO, 400 MHz): 1,37 (6H, d) , 4,89 \—1 septeto), 7,45 (1H, d), 7,62 (1H, d), 7,70 (1H, s) , 7, 93 (1H, d), 8,15 (1H, d), 8,24 (1H, s) , 8,25 (1H, s) , 11,77 (1H, s) . MS (ES) : C19H1535C1N302 requer 387; encontrado 388 (MH+) .
Descrição para D 8 3-Cloro-5-{5-[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-lJí-indole (D8) α
D2 (200 mg) e NCS (65 mg) foram dissolvidos em DCM (5 mL) e agitados durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi em seguida repartida entre DCM e H20. A solução de DCM foi evaporada até à secura e purificada num cartucho de sílica Biotage, eluindo com uma mistura 25-75% de éter dietílico em hexano. Isto deu o composto mencionado em título (36 mg) na forma de um 54 ΡΕ2206710 sólido castanho. Um segundo lote do composto mencionado em título foi também obtido a partir desta purificação (86 mg) na forma de um sólido castanho. δΗ (CDCI3, 400 MHz) : 7,28 (1H, m) , 7,45-7,54 (6H, m) , 7,93 (1H, s) , 8,05 (1H, d), 8,28 (1H, br s) , 8,49 (1H, s) . MS (ES) : C21HUCIF3N3OS requer 445; encontrado 444 (M-H+) .
Descrição 9 W-Hidroxi-lJí-indole-4-carboximidamida (D9)
4-Cianoindole (850 mg) foi dissolvido em EtOH (25 mL) . A esta solução foi adicionado NaHCCh (2,51 g) e NH20H-HC1 (831 mg). A mistura foi aquecida a 70 °C e agitada durante a noite. A reação estava incompleta e por isso foi aquecida a 80 °C durante mais 4 horas. A mistura reacional foi filtrada e evaporada para dar o composto mencionado em título (980 mg) na forma de um semissólido amarelo. Nenhuma purificação tentada.
Descrição para D9 (procedimento alternativo) W-Hidroxi-lií-indole-4-carboximidamida (D9)
fd ^ Kí
55 ΡΕ2206710
Uma mistura de 4-cianoindole (5,0 g, 35,2 mmol), hidrogenocarbonato de sódio (8,9 g, 105,6 mmol) e hidrocloreto de hidroxilamina (4,9 g, 70,4 mmol) em etanol (200 mL) foi aquecida a 55 °C durante a noite. Hidrogenocarbonato de sódio (5,9 g, 70 mmol) e hidrocloreto de hidroxilamina (4,9 g, 70,4 mmol) foram adicionados. A mistura foi aquecida durante 4 dias até apenas uma pequena quantidade de material de partida estar presente. Os materiais inorgânicos foram separados por filtração, lavando bem o sólido com etanol e separando por evaporação o solvente. O residuo foi triturado com éter dietilico para dar 5,8 g de sólido esbranquiçado. δΗ (400 MHz, metanol-d4) 6, 76-6, 78 (1H, m) , 7,12 (1H, t) , 7,24 (1H, dd) , 7,29-7,33 (1H, m) 7,46 (1H, dd).
Descrição para D10 4-{5-[4-Fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4-oxadiazol- -3-il}-l.ff-indole (D10)
Ácido 4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tiofenocarbo-xilico (310 mg), HOBT (170 mg) e EDCI-HC1 (242 mg) foram dissolvidos em DMF (3 mL) e agitados à temperatura ambiente durante 20 min. D9 (200 mg) foi dissolvido em DMF (3 mL) e adicionado à solução acima e a agitação continuou à temperatura ambiente durante duas horas. A mistura 56 ΡΕ2206710 reacional foi em seguida aquecida a 90 °C, arrefecida até à temperatura ambiente, repousou durante a noite, foi reaquecida a 80 °C e agitada durante 3 horas, arrefecida até a temperatura ambiente e evaporada até à secura. O resíduo foi redissolvido em H20 e extraído com EtOAc (x 3) e os extratos orgânicos combinados evaporados até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, eluindo com uma mistura 25-75% de éter dietílico em hexano para dar o composto mencionado em título (265 mg) na forma de um sólido castanho. Uma amostra deste composto (100 mg) foi purificada por MDAP para dar o composto mencionado em título (62 mg) na forma de um sólido esbranquiçado. δΗ (CDCI3, 400 MHz) : 7,33-7,36 (2H, m) , 7,41-7,42 (1H, m) , 7,46-7,52 (5H, m) , 7,61 (1H, d), 7,94 (1H, s), 8,06 (1H, d), 8,46 (1H, br s) . MS (ES) : C2iH12F3N3OS requer 411; encontrado 412 (MH+) .
Descrição para Dll 3-Bromo-2,2-dimetilpropanoato de etilo (Dll)
Ácido 3-bromo-2,2-dimetilpropanóico (200 mg) foi dissolvido em EtOH (5 mL) e tratado com H2S04 concentrado (0,4 mL) . Esta mistura foi aquecida em refluxo durante a noite e em seguida evaporada. 0 resíduo foi extraído a partir de H20 com EtOAc (x 2) e as soluções orgânicas combinadas foram secas e evaporadas para darem o composto 57 ΡΕ2206710 mencionado em título (316 mg) na forma de um óleo límpido. δΗ (CDCls, 400 MHz) 1,20 (3H, t) , 1,32 (6H, s) , 3,51 (2H, s) , 4,18 (2H, q) .
Descrição para D12 3-Etil-4-(1-piperidinil)benzonitrilo (D12)
ÇN íTd
4-Amino-3-etilbenzonitrilo (3,0 g, 20,5 mmol), 1,5-dibromopentano (11,1 mL, 82,1 mmol), carbonato de potássio (5,67 g, 41,0 mmol) e água (39,6 mL) foram todos divididos igualmente entre dez frascos de micro-ondas e cada um aquecido a 160 °C durante 1 h. Todas as misturas reacionais foram combinadas e extraídas duas vezes com acetato de etilo (40 mL) e as frações orgânicas combinadas secas (separador de fase) e concentradas em vácuo. Diclorometano foi adicionado e em seguida a mistura filtrada antes o filtrado foi purificado por cromatografia sobre sílica, eluindo acetato de etilo 2-5% em hexano para dar o composto mencionado em título na forma de um óleo incolor (823 mg, 3,85 mmol). A análise indicou que o composto continha uma pequena impureza de dibromopentano. δΗ (metanol-d4, 400 MHz) 7,52 (1H, dd) , 7,47 (1H, dd), 7, 13 (1H, d), 2,89 (4H, dd) , 2,71 (2H, q), 1,76-1,71 (4H, m) , 1, 64-1,56 (2H, 58 ΡΕ2206710 m) , 1,25 (3H, t) . MS (ES): Ci4Hi8N2 requer 214; encontrado 215 (MH+) .
Descrição para D13
Acido 3-etil-4-(l-piperidinil)benzóico (D13)
3-Etil-4-(1-piperidinil)benzonitrilo (D12) (817 mg, 3,82 mmol) e hidróxido de potássio (2,14 g, 38,2 itunol) em etanol (35 mL) e água (8 mL) foram aquecidos a 90 °C (temperatura de bloco) durante 9 h. Mais hidróxido de potássio (2,14 g, 38,2 mmol) e água (8 mL) foram adicionados e a reação aquecida durante mais 18 h. A reação foi deixada arrefecer e foi neutralizada com HC1 aquoso. Um sólido branco foi recolhido por filtração e foi feita uma tentativa para purificar o filtrado por cartucho SCX, mas isto falhou. Não só o sólido mas também o produto da SCX foram combinados, metanol foi adicionado e em seguida a mistura foi acidificada com ácido acético. A mistura foi filtrada para se obter o filtrado, o qual foi em seguida aprisionado no cartucho SCX, lavado com metanol e eluido com amónia 2 M em metanol. À escala de teste, isto deu o composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco (96 mg, 0,41 mmol) e no restante material deu um óleo 59 ΡΕ2206710 incolor (563 mg, 2,41 mmol) . δΗ (metanol-d4, 400 MHz) : 7,85 (1H, d) , 7,74 (1H, dd) , 7,03 (1H, d) , 2,85 (4H, dd) , 2,73 (2H, q), 1,72 (4H, m) , 1,61 (2H, m) , 1,25 (3H , t) ppm. MS (ES) : C14H19NO2 requer 233; encontrado 234 (MH+) .
Descrição para Dl4 5-Cloro-6-(1-pirrolidinil)-3-piridinacarboxilato de etilo (D14)
Uma mistura de éster de etilo do ácido 5,6-diclo-ronicotínico (1,00 g, 4,57 mmol), pirrolidina (325 mg, 4,57 mmol), carbonato de potássio (632 mg, 4,57 mmol) e pó de cobre (34 mg) em DMF (6,8 mL) foi aquecida a 130 °C no micro-ondas durante 20 min. Mais pirrolidina (163 mg, 2,29 mmol) foi adicionada e a reação aquecida a 130 °C durante 20 min. Água (7 mL) foi adicionada e a mistura extraída com acetato de etilo (2 x 14 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (7 mL) e água salgada (7 mL) antes de serem secos (separador de fase) e concentrados em vácuo para dar o composto mencionado em título na forma de um óleo laranja (1,06 g, 4,17 mmol). δΗ (metanol-d4, 400 MHz): 8,45 (1H, d), 7,98 (1H, d), 4,31 (2H, q) , 3, 82-3, 75 (4H, m) , 2,0-1,93 (4H, m) , 1,36 (3H, t) ppm. MS (ES) : C12H15CIN2O2 requer 254, 256; encontrado 255, 257 (MH+) . ΡΕ2206710 60
Descrição para D15 Ácido 5-cloro-6-(1-pirrolidinil)-3-piridinacarboxílico (D15)
OH 5-Cloro-6- (1-pirrolidinil)-3-piridinacarboxilato de etilo (D14) (1,06 g, 4,16 mmol) em etanol (20 mL) e hidróxido de sódio aquoso (2 M, 2,08 mL, 4,16 mmol) foram aquecidos a 40 °C durante 18 h. A mistura reacional foi deixada arrefecer e foi neutralizada com HC1 2 M (aq) . O composto mencionado em titulo formou-se na forma de um sólido branco e foi separado por filtração e lavado com metanol para dar o composto mencionado em título (243 mg, 1,08 mmol) SJ108923-113A3. O filtrado foi aprisionado numa coluna de SCX, eluindo com amónia 2 M em metanol para dar mais composto mencionado em título na forma de um sólido laranja (467 mg, 2,07 mmol). δΗ (metanol-d4, 400 MHz): 8,55 (1H, d), 8,03 (1H, d), 3, 76-3, 70 (4H, m) , 1, 96-1, 90 (4H, m) . MS (ES) : CioHiiC1N202 requer 226, 228; encontrado 227, 229 (MH+) .
Descrição para Dl6 3-Etil-4-iodobenzonitrilo (D16) 61 ΡΕ2206710
A 4-amino-3-etilbenzonitrilo (2,50 g, 17,1 mmol) agitado em água (14 mL) a 0 °C foi adicionado ácido clorídrico concentrado (7,80 mL, 257 mmol) gota a gota seguido por uma solução de nitrito de sódio (1,24 g, 18,0 mmol) em água (3,43 mL) gota a gota. A mistura resultante foi agitada durante 15 minutos e em seguida adicionada ao longo de 15 minutos a uma solução de iodeto de potássio (2,98 g, 18,0 mmol) em água (6,0 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foi extraída com acetato de etilo (3 x 100 mL) e as frações orgânicas combinadas lavadas com água salgada (100 mL), secas (separador de fase) e concentradas em vácuo para dar o composto mencionado em titulo na forma de um sólido castanho (4,21 g, 16,4 mmol). δΗ (metanol-d4, 400 MHz) : 8,02 (1H, d), 7,61 (1H, d), 7,24 (1H, dd) , 2,80 (2H, q), 1,21 (3H, t). MS (ES): Nenhum ião mássico observado.
Descrição para Dl7 4-(1-Ciclo-hexen-l-il)-3-etilbenzonitrilo (D17) 62 ΡΕ2206710
Uma mistura de 3-etil-4-iodobenzonitrilo (D16) (1,23 g, 4,80 mmol), ácido 1-ciclo-hexen-l-ilborónico (907 mg, 7,20 mmol), metóxido de sódio (778 mg, 14,4 mmol) e cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II) (337 mg, 0,48 mmol) em metanol anidro (12 mL) foi aquecida a 80 °C durante 10 minutos no micro-ondas. A mistura reacional foi repartida entre acetato de etilo (40 mL) e água (40 mL) antes da camada orgânica ser ainda lavada com água (40 mL) , seca (separador de fase) e concentrada em vácuo. O material cru foi purificado por cromatografia sobre sílica, eluindo com EtOAc 0-5% em hexano ao longo de 30 minutos para dar o composto mencionado em título na forma de um óleo (824 mg, 3,91 mmol). δΗ (metanol-d4, 400 MHz) 7,56 (1H, d), 7,46 (1H, dd) , 7,19 (1H, d), 5,61-5,56 (1H, m) , 2,68 (2H, quart), 2,23-2,16 (4H, m), 1,85-1, 68 (4H, m) , 1,20 (3H, t) . MS (ES): Nenhum ião mássico observado.
Descrição para Dl8
Acido 4-(1-ciclo-hexen-l-il)-3-etilbenzóico (D18) 63 ΡΕ2206710
4-(1-Ciclo-hexen-l-il)-3-etilbenzonitrilo (D17) (824 mg, 3,91 mmol) e hidróxido de potássio (2,19 g, 39,1 mmol) em etanol (36 mL) e água (8 mL) foram aquecidos a 90 °C (temperatura de bloco) durante 20 h. A mistura reacional foi concentrada em vácuo e o residuo repartido entre acetato de etilo (120 mL) e ácido cloridrico aquoso (2 M, 50 mL) antes da fase orgânica foi lavada com mais ácido cloridrico (2 M, 50 mL) , seca (separador de fase) e concentrada em vácuo para dar o composto mencionado em título na forma de um óleo (808 mg, 3,51 mmol). δΗ (metanol-d4) , 400 MHz) 7,87 (1H, d), 7,76 (1H, dd), 7,11 (1H, d) 5,59-5,54 (1H, m) , 2,68 (2H, q) , 2,25-2,15 (4H, m) , 1, 84-1, 67 (4H, m) , 1,20 (3H, t) . LCMS (ES) : C15Hi802 requer 230; encontrado 229 (M-H+) .
Descrição para Dl9 Ácido 4-ciclo-hexil-3-etilbenzóico (D19)
64 ΡΕ2206710 Ácido 4-(1-ciclo-hexen-l-il)-3-etilbenzóico (D18) (803 mg, 3,49 mmol) foi dissolvido em metanol (70 mL) e hidrogenado num Η-Cube usando um cartucho de paládio sobre carbono. A solução produto foi concentrada em vácuo para dar o composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco (792 mg, 3,41 mmol) . δΗ (metanol-d4, 400 MHz) : 7,82-7,68 (2H, m) , 7,33 (1H, d), 2,83 (1H, m) , 2,73 (2H, q) , 1,87 (2H, m) , 1,85-1,70 (3H, m) , 1,58-1,30 (5H, m) , 1,22 (3H, t). LCMS (ES): nenhum ião mássico observado.
Descrição para D20 3-Bromo-4-[(1-metiletil)oxi]benzoato de metiletilo (D20)
Uma mistura de ácido 3-bromo-4-hidroxibenzóico (2,00 g, 9,22 mmol), 2-iodopropano (1,85 mL, 18,4 mmol) e carbonato de potássio (2,55 g, 18,4 mmol) em DMF (175 mL) foi aquecida em refluxo durante 5 h. A reação foi deixada arrefecer e foi filtrada. O filtrado foi concentrado em vácuo e o residuo repartido entre acetato de etilo (150 mL) e água (150 mL) , que foi basificada com NaOH 2M. A fase orgânica foi seca (separador de fase) e concentrada em vácuo para dar o composto mencionado em titulo na forma de um óleo (2,36 g, 7,84 mmol). δΗ (metanol-d4, 400 MHz): 8,05 65 ΡΕ2206710 (1H, d), 7,90 (1H, dd) , 7,25 (1H, d), 5, 10 (1H, septeto), 4,81 (1H, septeto) , 1,32 (6H, d), 1,31 (6H, d) ppm. MS (ES): nenhum ião mássico observado.
Descrição para D21 Ácido 3-bromo-4-[(1-metiletil)oxi]benzóico (D21)
Uma solução de 3-bromo-4-[(1-metiletil)oxi]-benzoato de 1-metiletilo (D20) (2,36 g, 7,84 mmol) em etanol (100 mL) e hidróxido de sódio aquoso (2 M, 39 mL) foi aquecida em refluxo durante 5 h. A mistura reacional foi concentrada em vácuo e repartida entre acetato de etilo (125 mL) e água (125 mL) , a última acidificada com HC1 2 M (40 mL) . A camada aquosa foi extraida com mais acetato de etilo (70 mL) e os extratos orgânicos combinados secos (separador de fase) e concentrados em vácuo para darem o composto mencionado em titulo na forma de um sólido esbranquiçado (1,83 g, 7,06 mmol). δΗ (metanol-d4, 400 MHz) : 8,05 (1H, d), 7,89 (1H, dd) , 7,23 (1H, d), 4,79 (1H, septeto) , 1,32 (6H, d). MS (ES) : CioHnBrCh requer 258, 260; encontrado 257, 259 (M-H+) . ΡΕ2206710 66
Descrição para D22 4-Bromo-3-clorobenzoato de etilo (D22)
Br A uma suspensão de ácido 4-bromo-3-clorobenzóico (5,00 g, 21,2 mmol) em etanol (50 mL) foi adicionado ácido sulfúrico (5 mL) e a mistura resultante aquecida em refluxo durante 60 h. A reação foi repartida entre acetato de etilo (50 mL) e água (50 mL) . A camada aquosa foi extraída com mais acetato de etilo e as frações orgânicas combinadas secas (separador de fase) e concentradas em vácuo para dar o composto mencionado em titulo na forma de um óleo/sólido castanho (5,09 g, 19,3 mmol). δΗ (d6-DMSO, 400 MHz) : 8,06 (1H, d), 7,96 (1H, d), 7,80 (1H, dd) , 4,33 (2H, q) , 1,33 (3H, t). MS (ES): nenhum ião mássico observado.
Descrição para D23 3-Cloro-4-(2-metilpropil)benzoato de etilo (D23) 67 ΡΕ2206710
Uma solução de brometo de isobutilzinco em THF (0,5 M, 30 mL, 15,0 mmol) foi adicionada sob árgon a 4-bromo-3-clorobenzoato de etilo (D22) (2,00 g, 7,60 inmol) e em seguida complexo dicloreto de 1,1'-bis(difenilfosfi-no)ferroceno-paládio (II)/diclorometano (930 mg, 1,14 mmol) foi adicionado. A reação foi aquecida em refluxo durante 4,5 h. A mistura foi concentrada em vácuo e o resíduo repartido entre acetato de etilo (125 mL) e água (125 mL) . Formou-se um sólido, o qual foi separado por filtração e desprezado. A camada orgânica foi lavada com água (100 mL) , seca (separador de fase) e concentrada em vácuo. O produto cru foi purificado por cromatografia sobre sílica, eluindo com EtOAc 0-5% em hexano ao longo de 30 minutos para dar o composto mencionado em título na forma de um óleo incolor (1,76 g, 7,33 mmol). δΗ (d6-DMSO, 400 MHz) : 7,91 (lH,d), 7,80 (1H, dd) , 7,46 (1H, d), 4,30 (2H, q) , 2,66 (2H, d), 1,88-2,01 (1H, m) , 1,32 (3H, t) , 0,89 (6H, d). MS (ES) : nenhum ião mássico observado.
Descrição para D24 Ácido 3-cloro-4-(2-metilpropil)benzóico (D24)
68 ΡΕ2206710
Uma solução de 3-cloro-4-(2-metilpropil)benzoato de etilo (D23) (1,76 g, 7,33 mmol) , e hidróxido de sódio aquoso (2 M, 3,70 mL, 7,4 mmol) em etanol (30 mL) foi aquecida a 40 °C durante 3 h. A mistura reacional foi concentrada em vácuo e o resíduo repartido entre acetato de etilo (100 mL) e água (100 mL) , a última acidificada com HC1 2 M (4 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (100 mL) e os extratos orgânicos combinados secos (separador de fase) e concentrados em vácuo para dar o composto mencionado em título na forma de um sólido branco (1, 35 g, 6,36 mmol ) . δΗ (d6- DMSO, 400 MHz) : 13,20 (1H, br s) , 7,89 (1H, d) , 7,82 (1H, dd) , 7,44 (1H, d), 2,64 (2H, d) , 1, 94 (1H, m) , 0,89 (6H, d) . MS (ES) : Cu Hi335C102 requer 212; encontrado 211 (M-H+) .
Descrição para D25 3-Ciano-4-{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}benzoato de metilo (D25)
A uma solução de 3-ciano-4-hidroxibenzoato de metilo (3 g, 16,93 mmol) e trietilamina (3,54 mL, 25,4 mmol) em diclorometano seco (60 mL) a 0 °C sob um fluxo de árgon foi adicionado anidrido trifluorometanossul- 69 ΡΕ2206710 fónico (3,15 mL, 18,63 iranol) lentamente gota a gota. A reação foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 1 h. A mistura reacional foi lavada com carbonato de potássio aquoso 10% (2 x 50 mL) e em seguida HC1 aquoso (2 M, 2 x 50 mL) antes da fase orgânica ser seca (separador de fase) e o solvente removido em vácuo para dar o composto mencionado em título na forma de um óleo castanho escuro, (5,165 g, 16,70 mmol) . δΗ (CDCI3, 400 MHz): 8,44 (1H, d), 8,38 (1H, dd), 7,60 (1H, d), 3,99 (3H, s). MS (ES): nenhum ião mássico observado.
Descrição para D26 2-Ciano-4-bifenilcarboxilato de metilo (D26)
A reação seguinte foi dividida em dois lotes com metade das quantidades: 3-ciano-4-{ [ (trifluorometil)sulfo-nil]oxi}benzoato de metilo (D25) (1,5 g, 4,85 mmol) , ácido fenilborónico (1,183 g, 9,70 mmol), carbonato de potássio (2,011 g, 14,55 mmol) e tetraquistrifenilfosfinapaládio (0) (0,561 g, 0,485 mmol) foram recebidos em DMF (24 mL) e a mistura aquecida no micro-ondas durante 30 min a 150 °C. As duas reações foram combinados e diluídas com acetato de etilo (50 mL) e a mistura filtrada através de Kieselguhr 70 ΡΕ2206710 para remover resíduos de paládio. O filtrado foi concentrado em vácuo para reduzir a quantidade de DMF e em seguida o resíduo foi repartido entre bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL) e acetato de etilo (50 mL) . A fase orgânica foi lavada com mais bicarbonato de sódio (50 mL) e em seguida água (50 mL) antes de ter sido seca (MgS04) , filtrada e o solvente removido em vácuo. O sólido castanho foi purificado por cromatografia sobre sílica, eluindo com EtOAc 0-25% em iso-hexano ao longo de 35 minutos para dar o composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco (935 mg, 3,94 mmol) . δΗ (d6-DMSO, 400 MHz) : 8,42 (1H, d), 8,29 (1H, dd) , 7,81 (1H, d), 7,65 (2H, m) , 7, 60-7,50 (3H, m), 3,92 (3H, s). MS (ES): nenhum ião mássico observado.
Descrição para D27 Ácido 2-ciano-4-bifenilcarboxílico (D27)
A 2-ciano-4-bifenilcarboxilato de metilo (D26) (935 mg, 3,94 mmol) foi adicionado etanol (18 mL) mas a dissolução não ocorreu e por isso foi adicionado dicloro-metano (10 mL). Hidróxido de sódio (2 mL, 4,00 mmol) foi em 71 ΡΕ2206710 seguida adicionado e a reação agitada durante 2 h. À mistura foi adicionado diclorometano (20 mL) e HC1 2 M aquoso (10 mL). As camadas foram separadas e a aquosa extraída com mais diclorometano (20 mL) . A fase orgânica combinada foi seca (separador de fase) e o solvente removido em vácuo para dar um sólido branco, o qual foi dissolvido em metanol (30 mL) e foi adicionado hidróxido de sódio aquoso (2 M, 3 mL) . A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h antes da adição de água (20 mL). A reação foi agitada durante mais 1 h. Diclorometano (60 mL) foi adicionado e a mistura agitada e as camadas separadas. A fase aquosa foi extraída com mais diclorometano (50 mL) antes da fase orgânica combinada ter sido seca (separador de fase) e o solvente removido em vácuo para dar o composto mencionado em título na forma de um sólido branco (849 mg, 3,80 mmol) . δΗ (d6-DMSO, 400 MHz) : 13,60 (1H, br s) , 8,38 (1H, d), 8,28 (1H, dd) , 7,78 (1H, d), 7,63 (2H, m) , 7, 60-7,50 (3H, m) . MS (ES) : C14H9NO2 requer 223; encontrado 222 (M-H+) .
Descrição para D28 4-Cloro-3-(trifluorometil)benzoato de etilo (D28)+
Cl 72 ΡΕ2206710 Ácido 4-cloro-3-(trifluorometil)benzóico (1 g, 4,45 mmol) foi dissolvido em etanol (3 mL) e ácido sulfúrico concentrado (0,15 mL) foi adicionado. A mistura foi aquecida no micro-ondas a 100 °C durante 5 minutos e em seguida a 120 °C durante 15 minutos. O solvente foi removido em vácuo e o resíduo repartido entre bicarbonato de sódio aq° saturado (50 mL) e acetato de etilo (50 mL). A camada aquosa foi extraída com mais EtOAc (50 mL) e as fases orgânicas foram combinadas, secas com a separador de fase e concentradas em vácuo para dar o composto mencionado em título (1, 026 g) (DN108121-148A3) na forma de um óleo incolor. δΗ (metanol-d4, 400 MHz) 1,40 (3H, t) , 4,41 (2H, q) , 7,76 (1H, d), 8,21 (1H, dd) , 8,33 (1H, d). MS (ES) nenhum ião mássico observado.
Descrição para D29 Ácido 2-(trifluorometil)-4-bifenilcarboxilico (D29)
CF9 A reação foi dividida em 4, usando um quarto dos reagentes em cada uma: a uma mistura de 4-bromo-3-(trifluo- 73 ΡΕ2206710 rometil)benzonitrilo (4 g, 16,00 mmol), ácido fenilborónico (3,90 g, 32,0 mmol) e carbonato de potássio (6,63 g, 48,0 mmol) em N,N-dimetilformamida (DMF) (64 mL) foi adicionado tetraquistrifenilfosfinapaládio (0) (1,849 g, 1,600 mmol). Cada reação foi aquecida no micro-ondas a 150 °C durante 30 min. As misturas reacionais combinadas foram filtradas através de Celite, lavadas com acetato de etilo e o solvente removido em vácuo. O residuo foi repartido entre acetato de etilo (100 mL) e água (100 mL) e a fase orgânica lavada com solução de bicarbonato de sódio (100 mL) . A fase orgânica foi seca (MgSCd) , filtrada e o solvente removido em vácuo. O óleo castanho foi triturado com diclorometano e filtrado para dar um sólido amarelo pálido, 2-(trifluorometil)-4-bifenilcarboxamida (2,47 g), o qual foi usado sem outra purificação. A 2-(trifluorometil)-4-difenilcarboxamida (2 g, 7,54 mmol) em etanol (80 mL) foi adicionado hidróxido de potássio (4,23 g, 75 mmol) e água e a mistura aquecida a 90 °C durante 18 h. A mistura reacional foi concentrada em vácuo e o residuo repartido entre diclorometano (100 mL) e HC1 2 M (100 mL) . A fase orgânica foi isolada e seca (separador de fase) e o solvente removido em vácuo para dar o produto cru. A purificação usando o Biotage Horizon, cartucho de inversão de fases, eluindo com MeCN 5-100% em água para dar um sólido esbranquiçado o composto mencionado em titulo (960 mg) (N2123-46-A5) . MS (ES) : C14H9F3O2 requer 266; encontrado 265 (M-H+) . ΡΕ2206710 74
Descrição para D29 (Procedimento alternativo) Ácido 2-(trifluorometil)-4-bifenilcarboxílico (D29)
cf3
Lote A: Uma mistura de D98 (1,0 g, 3,96 mmol) , ácido fenilborónico (724 mg, 5,94 mmol), acetato de paládio (44 mg), (diciclo-hexilfosfino)bifenilo (140,2 mg) e fluoreto de potássio (689 mg, 11,9 mmol) em THF (8 mL) foi aquecida no micro-ondas a 120 °C durante um total de 40 minutos.
Lote B: Uma mistura de D28 (500 mg, 1,98 mmol), ácido fenilborónico (290 mg, 2,38 mmol), acetato de paládio (2,2 mg), (diciclo-hexilfosfino)bifenilo (7 mg) e fluoreto de potássio (344 mg, 5,8 mmol) em THF (4 mL) foi aquecida no micro-ondas a 120 °C durante 20 minutos. As misturas reacionais dos lotes A e B foram combinadas, filtradas e o filtrado concentrado em vácuo. O residuo foi purificado por cromatografia flash (0 a 5% de EtOAc em hexano para dar a mistura de material de partida e produto acoplado. Este material foi dissolvido em etanol (10 mL) e NaOH 2 M (aq) (5 mL) e em seguida aquecido em refluxo durante 3 h. O solvente foi removido em vácuo e o residuo repartido entre 75 ΡΕ2206710 DCM e HC1 aq 2 Μ. A fase aquosa foi extraída com mais DCM. As fases orgânicas foram combinadas e concentradas em vácuo. 0 material cru foi purificado por cromatografia de inversão de fases no Horizon eluindo com 5 a 100% de MeCN em água para produzir o composto mencionado em título na forma de um sólido branco (367 mg) . δΗ (dô-DMSO, 400 MHz) 7,31-7,40 (2H, m) , 7,44-7,52 (3H, m) , 7,57 (1H, d), 8,24 (1H, dd) , 8,29 (1H, d), 13,57 (1H, br s) . MS (ES) : C14H9F3O2 requer 266; encontrado 265 (M-H+) .
Descrição para D30 Ácido 2'-fluoro-2-(trifluorometil)-4-bifenilcarboxílico (D30)
Este material foi preparado usando um método semelhante ao descrito para D29 usando ácido (2-fluorofenil)borónico e D98 exceto que apenas uma única reação de acoplamento foi realizada, semelhante ao lote A e a reação de acoplamento foi aquecida durante 20 minutos. MS (ES) : C14H8F4O2 requer 284; encontrado 283 (M-H+) . 76 ΡΕ2206710
Descrição para D31 3-Ciano-4-(2-metilpropil)benzoato de metilo (D31)
A 3-ciano-4-{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}benzo-ato de metilo (D25) (1,5 g, 4,85 mmol) foi adicionado bromo(2-metilpropil)zinco (48,5 mL, 24,25 mmol) em tetra--hidrofurano (50 mL) sob árgon. À solução foi em seguida adicionado complexo 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodiclo-ro-paládio (II)/diclorometano (0,355 g, 0,485 mmol) e a reação aquecida em refluxo durante 6 h. A mistura foi extinta com água (2 mL) e em seguida filtrada através de Celite, lavando com acetato de etilo. O solvente foi removido em vácuo. O residuo foi repartido entre acetato de etilo (50 mL) e água (50 mL) e a fase orgânica seca (separador de fase) e o solvente removido em vácuo. O residuo foi purificado por cromatografia sobre silica, eluindo com EtOAc 0-15% em iso-hexano ao longo de 40 min. Dois lotes foram recolhidos, um dos quais foi o composto mencionado em titulo na forma de um óleo incolor (233 mg,
1,072 mmo1) . δΗ (CDC13, 400 MHz) : 8,28 (1H, d) , LO \—1 ao (1H dd) , 7,38 (1H, d), 3,94, 3H, s) , 2,78 (2H, d) , 2,02 (1H m) , 0,96 (6H, d) . 77 ΡΕ2206710
Descrição para D32 Ácido 3-ciano-4-(2-metilpropil)benzóico (D32)
3-Ciano-4-(2-metilpropil)benzoato de metilo (D31) (233 mg, 1,072 mmol) foi dissolvido em etanol (4 mL) e hidróxido de sódio aquoso 2 Μ (1 mL, 2 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada durante 1 h. HC1 2 M aquoso (10 mL) foi adicionado e a mistura extraída com diclorometano (20 mL+10 mL) . As fases orgânicas foram isoladas e secas por separador de fase e combinados antes do solvente ser removido em vácuo para dar o composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco (203 mg, 0,999 mmol) . δΗ (d6~DMSO, 400 MHz) 13,43 (1H, br s) , 8,29 (1H, d), 8,14 (1H, dd), 7,59 (1H, d), 2,74 (2H, d) , 1, 96 \—1 m) , 0,91 (6H, d) . MS (ES) : C12H13N02 requer 203; encontrado 202 (M-H+) .
Descrição para D33 4-(2-Metilpropil)-3-(trifluorometil)benzamida (D33) 78 ΡΕ2206710
cf3 A uma solução de 4-bromo-3-trifluorometilbenzoni-trilo (1,25 g, 5,0 mmol) e brometo de isobutilzinco (25 mmol) em THF (50 mL, 25 mmol) sob árgon foi adicionado complexo 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloro-paládio (11)/diclorometano (612 mg, 0,75 mmol) e a reação aquecida em refluxo durante 5 h. A mistura foi concentrada em vácuo e o residuo repartido entre acetato de etilo (80 mL) e água (80 mL). Formou-se um sólido e foi separado por filtração e desprezado. A camada orgânica foi lavada com água (80 mL) antes de ter sido seca (separador de fase) e concentrada em vácuo para dar o composto mencionado em titulo cru na forma de um óleo negro. Este foi usado diretamente no passo seguinte (1,35 g).
Descrição para D34 Ácido 4-(2-metilpropil)-3-(trifluorometil)benzóico (D34) 79 ΡΕ2206710 4-(2-Metilpropil)-3-(trifluorometil)benzamida (D33) (1,35 g, 5,50 iranol) foi dissolvida junto com hidróxido de potássio (3,09 g, 55,0 mmol) em etanol (40 mL) e água (10,0 mL) e a solução aquecida em refluxo durante 18 h. A mistura reacional foi concentrada em vácuo e a mistura separada entre EtOAc (150 mL) e hidróxido de sódio aquoso (2 M, 150 mL). As camadas foram separadas e a fase orgânica extraida com mais solução de hidróxido de sódio (200 mL) . LCMS de ambas as fases mostrou o produto em ambas. Por conseguinte a fase aquosa foi acidificada até pH 1 com HC1 (5 M) e contraextraida em EtOAc (2 x 150 mL) e estas fases orgânicas combinados com a fase orgânica original. O solvente foi removido em vácuo e o residuo purificado por cromatografia de inversão de fases, eluindo com MeCN 5-100% em H20 ao longo de 2000 mL e o solvente removido em vácuo para dar um sólido castanho (690 mg, 2,410 mmol). Este sólido foi triturado com hexano para dar o composto mencionado em titulo na forma de um sólido cor-de-búfalo (135 mg, 0,548 mmol) e o filtrado purificado por MDAP para dar mais composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco (102 mg, 0,414 mmol) . δΗ (d6“DMSO, 400 MHz) : 13,39 (1H, br s) , 8,16 (1H, s) , 8,13 (1H, d), 7,62 (1H, d), 2,69 (2H, d), 1,97 (1H, m) , 0,90 (6H, d). MS (ES) : C12H13F3O2 requer 246; encontrado 245 (M-H+) .
Descrição para D35 5-Formil-2-{[(IS)-1-metilpropil]oxijbenzonitrilo (D35) 80 ΡΕ2206710
(2S)-2-Butanol (0,99 g, 0,013 mol) foi dissolvido em DMF (50 mL) e a solução arrefecida até 0 °C. A isto foi adicionado hidreto de sódio, (dispersão 60% em óleo mineral, 1,54 g, 0,036 mol) em porções, a mistura foi agitada a 0 °C durante 10 minutos depois da adição estar completa. 2-Fluoro-5-formilbenzonitrilo (2,0 g, 0,013 mol) foi em seguida adicionado e a mistura reacional deixada aquecer até à temperatura ambiente (lentamente sem banho de gelo) e a mistura reacional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi em seguida arrefecida até 0 °C, extinta com água salgada e diluida com EtOAc (~25 mL). A mistura foi repartida e a fração orgânica extraida com água ( — 30 mL) , os extratos orgânicos combinados foram secos por passagem através de um cartucho de separação de fases e em seguida evaporados até à secura sob pressão reduzida para dar o produto cru. O residuo cru foi purificado sobre um cartucho 40+M Biotage, eluindo com uma mistura de EtOAc 20 a 50% em hexano. Isto deu o composto mencionado em título (220 mg) na forma de um sólido branco. δΗ (d6-DMSO, 400 MHz) : 9,88 (1H, s) , 8,30 (1H, s), 8,15 (1H, d), 7,49 (1H, d), 4,73-4,81 (1H, m) , 1, 63-1,79 (2H, m) , 1,33 (3H, d), 0,95 (3H, t) . MS (ES) : C12H13NO2 requer 203; encontrado 204 (MH+) . 81 ΡΕ2206710
Descrição para D36 Ácido 3-ciano-4-{[(IS)-1-metilpropil]oxijbenzóico (D36)
A uma solução de 5-formil-2-{[(IS)-1- metilpropil]oxijbenzonitrilo (D35) (220 mg, 1,08 mmol) em ácido acético (20 mL) foi adicionado tetra-hidrato de perborato de sódio (334 mg, 2,17 mmol), a mistura reacional foi aquecida a 50 °C ao longo do fim-de-semana. A mistura reacional foi concentrada em vácuo. Água (—50 mL) foi adicionada, EtOAc (—30 mL) foi adicionado e as camadas repartidas, a camada aquosa foi extraída duas vezes mais com EtOAc (~30 mL) e os extratos orgânicos combinados foram evaporados até à secura sob pressão reduzida para dar o composto mencionado em título (245 mg) na forma de um sólido esbranquiçado. δΗ (d6-DMSO, 400 MHz) : 8,17 (2H, d aparente), 7,39 (1H, s), 4,68-4,74 (1H, m), 1,55-1,76 (2H, m) , 1,31 (3H, d), 0,95 (3H, t) . MS (ES) : C12Hi3N02 requer 219; encontrado 220 (MH+) .
Descrição para D37 5-Formil-2-{[(1K)-1-metilpropil]oxijbenzonitrilo (D37)
82 ΡΕ2206710 (2R)-2-Butanol (0,99 g, 0,013 mol) foi dissolvido em DMF (50 mL) e a solução arrefecida até 0 °C. A isto foi adicionado hidreto de sódio, dispersão 60% em óleo mineral (1,54 g, 0,036 mol) em porções, a mistura foi agitada a 0 °C durante 10 minutos depois da adição estar completa. 2-Fluoro-5-formilbenzonitrilo (2,0 g, 0,013 mol) foi em seguida adicionado e a mistura reacional deixada aquecer até à temperatura ambiente (lentamente sem banho de gelo) e a mistura reacional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi em seguida arrefecida até 0 °C, extinta com água salgada e diluida com EtOAc (~25 mL). A mistura foi repartida e a fração orgânica extraída com água ( — 30 mL) , os extratos orgânicos combinados foram secos por passagem através de um cartucho de separação de fases e evaporados até à secura sob pressão reduzida para dar o produto cru. O resíduo cru foi purificado sobre um cartucho 40+M Biotage, eluindo com uma mistura 20 a 50% de EtOAc em hexano. Isto deu o composto mencionado em título (310 mg) na forma de um óleo . ÔH (d6- DMSO, 400 MHz) : 9,88 (1H, s) , 8,30 (1H, s), 8,15 (1H, d), 7,49 (1H, d), 4,73-4 ,81 (1H, m) , 1,63-1,79 (2H, m) , 1,33 (3H, d), 0,95 (3H, t) Ppm.
Descrição para D38 Ácido 3-Ciano-4-{[(R)-1-metilpropil]oxijbenzóico (D38)
83 ΡΕ2206710 A uma solução de 5-formil-2-{[(IR)-1-metil-propil]oxijbenzonitrilo (D37) (310 mg, 1,53 mmol) em ácido acético (30 mL) foi adicionado tetra-hidrato de perborato de sódio (471 mg, 3,05 mmol) e a mistura reacional foi aquecida a 50 °C ao longo do fim-de-semana. A mistura reacional foi concentrada em vácuo e foi adicionada água (~50 mL), EtOAc (—30 mL) foi adicionado e as camadas repartidas, a camada aquosa foi extraida duas vezes mais com EtOAc (—30 mL) e os extratos orgânicos combinados evaporados até à secura sob pressão reduzida para dar o composto mencionado em titulo (315 mg) na forma de um sólido esbranquiçado. δΗ (d6~DMS0, 400 MHz): 8,07-8,24 (2H, m) , 7,38 (1H, d), 4, 63-4,77 (1H, m) , 1,55-1,83 (2H, m) , 1,31 (3H, d), 0,95 (3H, t) . MS (ES+) : C12H13N02 requer 219; encontrado 220 (MH+) .
Descrição para D39 6-(Metiloxi)-3-bifenilcarboxilato de metilo (D39)
3-Bromo-4-(metiloxi)benzoato de metilo (245 mg, 1 mmol, comercialmente disponível) foi dissolvido em DME:Na2C03 2 N (2:1, 18 mL) e em seguida ácido fenilborónico (244 mg) e tetraquistrifenilfosfinapaládio (0) (58 mg) foram adicionados. A reação foi aquecida a 84 ΡΕ2206710 80 °C e em seguida deixada arrefecer ao longo do fim-de--semana. EtOAc e água foram adicionados, as fases orgânicas foram separadas, secas e evaporadas para dar uma goma preta. A purificação por cromatografia flash produziu o composto mencionado em titulo (194 mg) na forma de uma goma. δΗ (d6-DMSO, 400 MHz) 3,83 (3H, s) , 3,85 (3H, s) , 7,24 (1H, d), 7,33-7,50 (5H, m) , 7,83 (1H, d), 7,97 (1H, dd) . MS (ES) : C15H14O3 requer 242; encontrado 243 (MH+) .
Descrição para D40 Ácido 6-(metiloxi)-3-bifenilcarboxílico (D40)
6-(Metiloxi)-3-bifenilcarboxilato de metilo (D39) (194 mg, 0,8 mmol) dissolvido em NaOH aq 2 N (3 mL) e metanol (3 mL). Agitou-se à temperatura ambiente durante a noite e em seguida o solvente orgânico foi evaporado em vácuo. EtOAc/água foi adicionado, fez-se a separação e em seguida acidificou-se o aquoso e reextraido. Os extratos orgânicos foram secos e evaporados para produzirem 202 mg do composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco. δΗ (d6-DMSO, 400 MHz) 3,84 (3H, s) , 7,22 (1H, d), 7,33-7,49 (5H, m) , 7,82 (1H, d), 7,95 (1H, dd) . MS (ES+) : C14H12O3 requer 228; encontrado 229 (M+H+) . 85 ΡΕ2206710
Descrição para D41 3-Bromo-5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4-—oxadiazol-3-il)-lH-indole (D41)
A 5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indole (D5) (450 mg, 1,27 mmol) dissolvidos em DMF (12 mL) foi adicionado bromo (213 mg, 1,35 mmol) gota a gota. Agitou-se durante 15 minutos, DMF foi separada por evaporação, éter dietilico (70 mL) foi adicionado e lavou-se com água (2x70 mL) . A mistura foi seca sobre MgSC>4 e o solvente foi separado por evaporação. 0 resíduo foi cristalizado em éter dietílico/hexano para dar 160 mg do composto mencionado em título na forma de um sólido branco. δΗ (400 MHz, dg-DMSO) 1,37 (6H, d), 4,88 (1H, sept), 7,44 (1H, d), 7,59 (1H, dd), 7,72 (1H, d), 7,91 (1H, dd) , 8,13-8,32 (3H, m) . MS (ES) Ci9H1579BrClN302 requer 431; encontrado 432 (MH+) .
Os seguintes ésteres foram preparados de uma maneira semelhante aos exemplos previamente descritos (tal como D6) usando o índole e agente de alquilação apropriado. Os haletos de alquilo estavam comercialmente disponíveis fora o Dll usado para preparar D48. A menos que indicado de outra maneira, as reações foram realizadas em DMF. Nalgumas ocasiões, as reações foram manipuladas por um procedimento 86 ΡΕ2206710 de manipulação aquosa ao passo que noutras o material cru tenha sido usado diretamente no passo de hidrólise a seguir à evaporação do solvente da reação.
Estrutura Nome índole precursor Comentários MH+ D42 * (5-{5-[4-fenil-5--(trifluorome-til)-2-tienil]--1,2,4-oxadiazol--3-il}-lH-indol-— 1 — i1)acetato de etilo D2 solvente DMPU em vez de DMF. Reação a 100-120 °C em micro-ondas. D43 H,C y~cK> ΛβκΝ JT 0 V™ 3-[3-bromo-5-(5--{3-cloro-4-[(1--metiletil)oxi]-fenil}-1,2,4-oxa-diazol-3-il)-1H--indol-l-il]pro-panoato de etilo D41 Reação convencionalmente aquecida a 80 °C 534 para 81Br35Cl D44 à Q \ 5 - [5 - (5-{3-cloro--4-[(1-metil-etil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-— 3 — i1)-lH-indol--1-il]pentanoato de metilo D5 Reação convencionalmente aquecida a 80 °C 468 D45 ΛΧΧ^ΚOQ 4-[5-(5-{3-cloro--4-[(1-metil-etil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-— 3 — i1)-lH-indol--1-il]butanoato de etilo D5 Reação aquecida no micro-ondas a 130 °C. Material cru usado no passo que segue à evaporação D46 (2R)-3-[5-(5 —{3 — -cloro-4-[(1-me-tiletil)oxi]fenil } -1 , 2,4-oxa-diazol-3-il)-1H--indol-l-il]-2--metilpropanoato de metilo D5 Reação aquecida no micro-ondas a 140 °C. Material cru usado no passo que segue à evaporação ΡΕ2206710 87 (continuação)
Estrutura Nome índole precursor Comentários MH+ D47 (2S)-3-[5-(5 —{3 — -cloro-4-[(1-metiletil) oxi]fe-nil} -1,2,4-oxa-diazol-3-il)-1H--indol-l-il]-2--metilpropanoato de etilo D5 Reação aquecida no micro-ondas a 130 °C. Material cru usado no passo que segue à evaporação D48 2,2-dimetil-3-(5--{5-[4-fenil-5--(trifluorome-til)-2-tienil]--1,2,4-oxadiazol--3-il} -líf-indol--1-il)propanoato de etilo D2 Reação aquecida no micro-ondas a 131-150 °C. Material cru usado no passo que segue à evaporação 540
Descrição para D49 5-[3-(lH-indol-4-il)-1,2,4-oxadiazol-5-il]-2-[(1--metiletil)oxi]benzonitrilo
A ácido 3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]benzóico (pode ser preparado conforme descrito em WO2005/58848) (500 mg, 2,44 mmol) em DMF (15 mL) foi adicionada EDAC (514 mg, 2,67 mmol) e HOBt (367 mg, 2,67 mmol) e a solução foi deixada em repouso durante 30 minutos. N-hidroxi-lH-in-dole-4-carboximidamida (D9) (427 mg, 2,44 mmol) e deixada em repouso durante 1 hora. À solução foram adicionados EDAC ΡΕ2206710 (117 mg, 0,61 mmol) e HOBt (84 mg, 0,61 mmol) e deixada em repouso durante 2 horas. À solução foram adicionados EDAC (234,9 mg, 1,22 mmol) e HOBt (167,7 mg, 1,22 mmol) e deixada em repouso durante a noite. Foi aquecida a 80 °C durante a noite, arrefecida e adicionado EtOAc (30 mL) . Foi lavada com água (30 mL) , hidrogenocarbonato de sódio sat° (30 mL) e água (30 mL) . Foi seca sobre MgS04 e o solvente separado por evaporação. O residuo foi triturado com éter dietilico para dar 353 mg do composto mencionado em titulo
na forma de um sólido castanho pálido . δΗ (400 MHz, d6- DMSO) 1,39 (6H, d), 4,94 -5, 03 (1H, m), 7,09-7,10 (1H, m) , 7,30 (1H, t) , 7,56-7,59 (2H, m) , 7,67 (1H, d), 7,92 (1H, dd), 8,45 (1H, dd), 8,55 (1H, d), 11,52 (1H, s largo) . MS (ES) C20H16N4O2 requer 344; encontrado 345 (MH+) .
Descrição para D50 4-[4-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanoato de etilo (D50)
Uma mistura de 5-[3-(lH-indol-4-il)-1,2,4-oxadia-zol-5-il]-2-[(1-metiletil)oxi]benzonitrilo (D49) (100 mg, 89 ΡΕ2206710 0,29 mmol), 4-bromobutirato de etilo (85 mg, 0,44 mmol) e carbonato de césio (189 mg, 0,58 mmol) em DMF (2 mL) foi aquecida a 80 °C durante 1 hora. Foi adicionado 4-bromobutirato de etilo (85 mg, 0,44 mmol) e aqueceu-se durante a noite a 80 °C. Foi adicionado 4-bromobutirato de etilo (85 mg, 0,44 mmol) e carbonato de césio (189 mg, 0,58 mmol) e aqueceu-se durante 24 horas. Foi adicionado 4-bromobutirato de etilo (85 mg, 0,44 mmol) e aqueceu-se durante 24 horas. Foi adicionado 4-bromobutirato de etilo (85 mg, 0,44 mmol) e aqueceu-se durante 6 horas. Foi adicionado EtOAc (20 mL) e lavou-se com água (20 mL). Foi seca sobre MgS04 e o solvente separado por evaporação. O resíduo foi cristalizado em etanol para dar o composto mencionado em título (55 mg) na forma de um sólido branco. MS (ES) C26H26N4O4 requer 458; encontrado 459 (MH+) .
Descrição 51 3-(5-Ciano-lJí-indol-l-il)propanoato de etilo (D51)
Uma mistura de lH-indole-5-carbonitrilo (1,42 g, 10 mmol), 3-bromopropanoato de etilo (l,92ml, 15 mmol) e carbonato de césio (6,5 g, 20 mmol) em DMF (50 mL) foi aquecida a 80 °C durante 4 horas. A solução foi arrefecida, foi adicionado éter dietilico (300 mL) e lavada com água 90 ΡΕ2206710 (3 χ 300 mL) . Foi seca sobre MgS04 e o solvente separado por evaporação para produzir 2,4 g de óleo laranja pálido. Este produto cru foi usado no passo seguinte (preparação de D52) .
Descrição para D52 3— {5— [ (Hidroxiamino) (imino)metil] -lJí-indol-l-il}propanoato de etilo
3-(5-Ciano-lH-indol-l-il)propanoato de etilo (D51) (1,7 g, 7,2 mmol), hidrocloreto de hidroxilamina (1,0 g, 14,4 mmol) e hidrogenocarbonato de sódio (2,42 g, 28,9 mmol) foram suspensos em etanol (100 mL) e agitados a 50 °C durante 3 dias. Formou-se um único produto mas restou 15% do material de partida. Arrefeceu-se, separou-se por filtração o material inorgânico e o solvente foi separado por evaporação. O produto foi cristalizado numa mistura de EtOAc, éter dietilico e hexano para produzir 1,9 g do composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco. MS (ES) C14H17N3O3 requer 275; encontrado 276 (MH+) .
Descrição para D53 3-[5-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lJí-indol-l-il]propanoato de etilo (D53) ΡΕ2206710 91 Ν
COaEt Ácido 3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]benzóico (pode ser preparado conforme descrito em WO2005/58848) (215 mg, 1,05 mmol) , EDAC (219 mg, 1,14 mmol) e HOBt (156 mg, 1,14 mmol) em DMF seca (10 mL) foram agitados à temperatura ambiente durante 10 minutos. Foi adicionado 3-{5-[(hidroxi-amino) (imino)metil]-líí-indol-l-iljpropanoato de etilo (D52) (288 mg, 1,05 mmol) e agitou-se durante 1 hora à temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 80 °C durante 7 horas. A solução foi arrefecida e EtOAc (50 mL) adicionado. Foi lavada com água (50 mL) , hidrogenocarbonato de sódio sat° (50 mL) e água (50 mL) . Foi seca sobre MgS04 e o solvente separado por evaporação. 0 resíduo foi cristalizado em éter para produzir 200 mg do composto mencionado em titulo na forma de um sólido cor-de-rosa muito pálido. MS (ES) C2SH24N4O4 requer 444; encontrado 445 (MH+) .
Descrição para D54 3-(4-Ciano-l.ff-indol-l-il)propanoato de etilo (D54)
4-Cianoindole (2,5 g) foi dissolvido em DMF 92 ΡΕ2206710 (7,5 mL). Cs2C03 (11,46 g) foi adicionado seguido por 3-bromopropionato de etilo (3,38 mL). Esta mistura foi aquecida a 80 °C durante 40 minutos. Uma outra porção de DMF (5 mL) foi adicionada e o aquecimento a 80 °C continuou durante 1 hora. A mistura reacional foi evaporada, em seguida dissolvida em H20 (200 mL) e extraída com EtOAc (200 mL) . Isto foi evaporado para dar um óleo amarelo (3,5 g) que foi purificado sobre um cartucho 40+M Biotage, eluindo com uma mistura 25-75% de Et20 em hexano. Isto deu o composto mencionado em titulo (3,44 g) na forma de um óleo amarelo pálido. δΗ (CDCI3, 400 MHz) : 1,19 (3H, t) , 2,82 (2H, t), 4,12 (2H, q) , 4,50 (2H, t) , 6,71 (1H, d), 7,23-7,28 (1H, m) , 7,33 (1H, d), 7,47 (1H, d), 7,60 (1H, dd) . MS (ES) : C14H14N2O2 requer 242; encontrado 243 (MH+) . 0 exemplo seguinte foi preparado por um método semelhante ao descrito acima. A reação não ficou completa depois da manipulação e por isso o material foi ressubmetido às condições de reação com 0,2 equivalentes extra de base e agente de alquilação e o produto foi purificado por trituração com éter.
Numero Estrutura Nome MH+ D55 CN r? CH* (4-ciano-lH-indol--1-il)acetato de etilo 229 93 ΡΕ2206710
Descrição para D56 4-(4-Ciano-l.ff-indol-l-il)butanoato de etilo (D56)
Combinaram-se 4-cianoindole (5 g, 35,2 mmol), 4-bromobutanoato de etilo (10,29 g, 52,8 mmol) e carbonato de césio (22, 92 g, 70,3 mmol) e aqueceu-se a 80 °C sob árgon durante 1 hora. A reação foi deixada arrefecer e em seguida 150 mL de éter dietilico foram adicionados e a solução orgânica foi lavada com 3 x 150 mL de H20. A solução orgânica foi seca sobre MgS04 e o solvente evaporado. Foi seca em alto vácuo ao longo do fim-de-semana para produzir o composto mencionado em titulo (8,25 g) na forma de um óleo laranja. δΗ (400 MHz, de-DMSO). 1,13 (3H, t) , 1, 96- 2,05 (2H, m) , 2,26 (2H, t), 3,99 (2H, q) , 4,29 (2H, t) , 6, 60 (1H, dd), 7,29 (1H , t aparente) , 7,55 (1H, dd) , 7,68 (1H, d), 7,90 (1H, d) . MS (ES) : C15H16N2O2 requer 256; encontrado 257 (MH+) .
Descrição para D57 3— {4— [ (Hidroxiamino) (imino)metil] -líí-indol-l-il}propanoato de etilo (D57) 94 ΡΕ2206710 OH !
3-(4-Ciano-lH-indol-l-il)propanoato de etilo (D54) (3, 44 g) , NH20H-HC1 (1,97 g) e Na2C03 (5, 96 g) foram dissolvidos em EtOH (75 mL) . Esta mistura foi aquecida a 50 °C durante a noite. Uma outra porção de NH20H-HC1 (985 mg) foi adicionada e a mistura foi agitada a 70 °C durante a noite. A mistura reacional foi em seguida filtrada e evaporada para dar o composto mencionado em titulo (4,06 g) . MS (ES) : C14H17N3O3 requer 275; encontrado 276 (MH+) .
Descrição para D57 (procedimento alternativo) 3—{4—[(Hidroxiamino)(imino)metil]-lH-indol-l-il}propanoato de etilo (D57)
Uma mistura de lH-indole-4-carbonitrilo (3,4 g, 23,92 mmol), 3-bromopropanoato de etilo (4,57 mL, 35,9 mmol) e carbonato de césio (15,59 g, 47,8 mmol) foi aquecida a 80 °C durante 2 horas e deixada em repouso durante a noite. Éter (400 mL) foi adicionado e a mistura resultante foi lavada com água (3 x 400 mL) , seca sobre MgS04 e evaporada para produzir 6, 6 g de óleo limpido amarelo pálido. 95 ΡΕ2206710 0 óleo Ν4111-30-Α2 (6,6 g, 27,2 iranol), hidro-cloreto de hidroxilamina (3,79 g, 54,5 iranol) e bicarbonato de sódio (9,15 g, 109 iranol) em etanol foram agitados a 50 °C durante a noite. Foi adicionado mais hidrocloreto de hidroxilamina (2,3 g) e aqueceu-se a 50 °C durante 24 horas. A reação foi filtrada e o residuo lavado com DCM (50 mL). O solvente foi removido por evaporação e o residuo triturado com hexano para se obter o composto mencionado em titulo (4,2 g) na forma de um sólido branco. Mais composto mencionado em titulo (1,0 g) na forma de um sólido branco foi obtido da trituração de resíduos. Dados de espectro de massa consistentes com a síntese prévia. 0 seguinte foi feito de uma maneira semelhante ao primeiro procedimento listado para D57: bicarbonato de sódio foi a base usada e a reação foi realizada a 55 °C.
4—{4— [ (Hidroxiamino) (imino) metil] -l.ff-indol-1-ilJbutanoato de etilo (D59) 96 ΡΕ2206710
4-(4-Ciano-lH-indol-l-il)butanoato de etilo (D56) (8,25 g, 32,2 mmol) foi dissolvido em EtOH e tratado com NH20H-HC1 (4,47 g, 64,4 mmol) e NaHC03 (8,11 g, 97 mmol) e aquecido a 55 °C durante 1 dia e duas noites. Mais NfbOH-HCl (500 mg) e NaHC03 (500 mg) foram adicionados e a reação foi aquecida durante outras 3 horas e em seguida os materiais inorgânicos foram separados por filtração, lavando bem com EtOH. O solvente foi evaporado e o resíduo seco sob alto vácuo. A trituração com éter e diclorometano produziu dois lotes do composto mencionado em título N2668-20-A8 (5,14 g) e N2668-20-A9 (976 mg). δΗ (400 MHz, dô-DMSO) 1,15 (3H, t), 1,98 (2H, quint aparente), 2,25 (2H, t), 4,03 (2H, q) , 4,21 (2H, t) , 5,73 (2H, br s) , 6,82 (1H, dd) , 7,15 (1H, t aparente), 7,27 (1H, dd) , 7,35 (1H, d), 7,51 (1H, d), 9,58 (1H, br s) . MS (ES) : C15H19N303 requer 28 9; encontrado 2 90 (MH+) .
Descrição para D60 5-Cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinacarboxilato de 1-metiletilo (D60) ΡΕ2206710 97
0 ácido 5-cloro-6-hidroxi-3-piridinacarboxílico (1 g, 5,76 mmol) foi suspenso em tolueno (200 mL) e tratado com carbonato de prata (3,97 g, 14,40 mmol) e 2-iodopropano (3,46 mL, 34,6 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente no escuro durante 3 dias. LC/MS mostrou 2/3 de produto. Foi adicionado 2-iodopropano (3 mL) e agitou-se durante 24 horas. LC/MS mostrou 80% de produto. Foi adicionado EtOAc (200 mL) e lavou-se com água (200 mL) + NaHCCM sat° (50 mL) seguido por água (200 mL). A mistura foi seca sobre MgS04 e o solvente separado por evaporação para produzir 1,0 g do composto mencionado em titulo na forma de um óleo incolor límpido. MS (ES+) Ci2Hi635C1N03 requer 257; encontrado 257.
Descrição para D 61 Ácido 5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinacarboxílico (D61)
υπ 5-Cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinacarboxila-to de 1-metiletilo (D60) (1,6 g, 6,21 mmol) em isopropanol (70 mL) e água (35,0 mL) foi tratado com hidróxido de sódio 98 ΡΕ2206710 2 Ν (6,21 mL, 12,42 mmol) e agitada durante 3 horas para dar 2N hidróxido de sódio um produto único. Separou-se por evaporação o IPA, acidificou-se com ácido acético glacial e extraiu-se produto para EtOAc (100 mL) . Secou-se sobre MgS04 e o solvente foi separado por evaporação para produzir 1,30 g do composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco. MS (ES) C9Hio35C1NC>3 requer 215; encontrado 214 (M-H+) .
Descrição para D62 3-[4-(5-{5-Cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanoato de etilo (D62)
A ácido 5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridina-carboxílico (D61) (1,504 g, 6,97 mmol) em DMF seca (30 mL) foram adicionados EDC (1,604 g, 8,37 mmol) e HOBT (1,282 g, 8,37 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos em seguida foi adicionado 3-{4-[(hidro-xiamino)(imino)metil]-lH-indol-l-ilIpropanoato de etilo (N4111-31-A4) (D57) (1,92 g, 6,97 mmol). A mistura foi agitada durante 30 minutos. LC/MS mostrou um produto (intermediário). A solução foi aquecida a 80 °C durante 2 99 ΡΕ2206710 horas. Deixou-se em repouso durante a noite à temperatura ambiente, em seguida foi aquecida a 80 °C durante mais 2 horas para dar por completa a reação. Arrefeceu-se e adicionou-se EtOAc (250 mL) . O EtOAc foi lavado com NaHCCb sat° (150 mL) seguido por água (2 x 200 mL). A mistura foi seca sobre MgS04 e o solvente separado por evaporação. O resíduo foi sujeito a cromatografia na Biotage (EtOAc/-hexano 1:2). Na evaporação da maior parte do solvente das frações límpidas e adição de hexano formou-se um precipitado branco. O sólido foi separado por filtração para se obter 1,1 g do produto mencionado em título. MS (ES) C23H2335C1N404 requer 454; encontrado 455 (MH+) .
Descrição para D63 3-[4-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanoato de etilo (D63) [0230]
0 ácido 3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]benzóico (pode ser preparado conforme descrito em WO2005/58848) (113 mg, 0,55 mmol), EDAC (115 mg, 0,60 mmol) e HOBt (82 mg, 0,60 mmol) foram dissolvidos em DMF (5 mL) e deixou-se em repouso durante 15 minutos. Foi adicionado 3- 100 ΡΕ2206710 { 4-[ (hidroxiamino) (imino) metil]-lfí-indol-l-il }propanoato de etilo (D57) (150 mg, 0,55 mmol) e deixou-se repousar duran te a noite à temperatura ambiente. A solução foi aquecida a 80 °C durante 2 horas. LC/MS mostrou principalmente o produto. Após aquecimento durante mais umas poucas horas não houve alteração. Foi adicionado EtOAc (20 mL) e lavou-se com água (30 mL) . Foi lavado com hidrogenocarbonato de sódio saturado (30 mL) e água (2 x 30 mL) . Foi seco sobre MgS04 e o solvente separado por evaporação para se obter 81 mg do composto mencionado em titulo na forma de um sólido castanho pálido. MS (ES) C25H44N4O4 requer 444; encontrado 445 (MH+) .
Descrição para D64 3-(4-{5-[2-(Trifluorometil)-4-bifenilyl]-1,2,4-oxadiazol-3--il}-lJí-indol-l-il)propanoato de etilo (D64)
Ao ácido 2-(trifluorometil)-4-bifenilcarboxílico (D29) (146 mg, 0,55 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionada EDC (115 mg, 0,60 mmol) e HOBt (82 mg, 0,60 mmol) e a solução foi deixada em repouso durante 15 minutos. Foi adicionado 101 ΡΕ2206710 3 —{4 —[(hidroxiamino) (imino)metil]-lH-indol-l-il}propanoato de etilo (D57) (150 mg, 0,55 mmol) e agitou-se à tempera tura ambiente durante 1 hora. Aqueceu-se a 80 °C durante 1 hora em seguida aqueceu-se durante a noite. Arrefeceu-se e em seguida adicionou-se EtOAc (20 mL). A mistura foi lavada com água (20 mL) , hidrogenocarbonato de sódio aquoso sat° (20 mL) e água (20 mL) . Foi seca sobre MgS04 em seguida evaporou-se o solvente. O residuo foi triturado com etanol para dar 157 mg do composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco. δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 1,11 (3H, t), 2, 90 (2H, t) , 4,02 (2H, q), 4,55 (2H, t), 7,10 (1H, d), 7, 32- •7,48 (3H, m) , 7,49-7 ,61 (3H, m) , 7,61 (1H, d), 7,73- 7, 84 (2H, m) , 8,00 (1H, d) , 8,53 -8,56 (2H , m) , . MS (ES) C28H22F3N3O3 requer 505; encontrado 506 (MH+) .
Descrição para D65 (Alternativa à Descrição para D50) 4-[4-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanoato de etilo (D65)
102 ΡΕ2206710
Uma mistura de ácido 3-ciano-4-[(1-metiletil)-oxijbenzóico (pode ser preparado conforme descrito em WO2005/58848) (1,21 g, 5,88 mmol) , EDC (1,35 g, 7,05 mmol) e HOBt (1,08 g, 7,05 mmol) em DMF seca (85 mL) foi agitada durante 20 minutos à temperatura ambiente. Foi adicionado 4 —{4 —[(hidroxiamino) (imino)metil]-lH-indol-l-il}butanoato de etilo (D59) (1,70 g, 5,88 mmol) e agitou-se à temperatu ra ambiente durante 1 hora. A mistura foi aquecida a 80 °C durante 5 horas e deixada durante a noite à temperatura ambiente. Foi aquecida a 80 °C durante 6 horas em seguida a DMF foi separada por evaporação. Foi adicionado EtOAc (200 mL) e lavou-se com NaHCCb sat° (200 mL) e água (200 mL) . Secou-se sobre MgSCh e o solvente foi separado por evaporação. Sujeitou-se o resíduo a cromatografia usando o Biotage (EtOAc/hexano 1:2) e evaporaram-se as frações mais límpidas para produzir 1,42 g do composto mencionado em título na forma de um sólido branco. δΗ (400 MHz, de-DMSO) 1,15 (3H, t) , 1,39 (6H, d), 2,04 (2H, quinteto aparente), 2,24 (2H, t) , 4,00 (2H, q) , 4,31 (2H, t), 4, 94-5, 04 (1H, m) , 7,10 (1H, dd) , 7,31 (1H, t) , 7,56-7,60 (2H, m) , 7,77 (1H, d), 7,95 (1H, d), 8,45 (1H, dd) , 8,56 (1H, d). MS (ES) C26H26N4O4 requer 458; encontrado 459 (MH+) .
Descrição para D66 4-(1-Ciclo-hexen-l-il)-3-(trifluorometil)benzamida (D66)
cf3 í h8 103 ΡΕ2206710 4-Bromo-3-(trifluorometil)benzonitrilo (comercial) (1,2 g, 4,80 mmol), ácido 1-ciclo-hexen-l-ilborónico (0,907 g, 7,20 mmol), metóxido de sódio (0,778 g, 14,40 mmol) e cloreto de bis (trifenilfosfina)paládio (II) (0,337 g, 0,480 mmol) foram adicionados a metanol seco (12 mL) e a mistura foi aquecida no micro-ondas a 80 °C durante 10 minutos. A mistura reacional foi repartida entre acetato de etilo (40 mL) e água (40 mL) e em seguida a fase orgânica lavada com mais água (40 mL). A fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e o solvente removido em vácuo. O produto cru foi purificado por cromatografia flash sobre silica, eluindo com acetato de etilo 0-75% em hexano para dar o composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco (1,02 g) . δΗ (CDC13, 400 MHz) : 8,09 (1H, m) , 7,90 (1H, dd) , 7,32 (1H, d), 6,3-5,8 (2H, m) 5,61 (1H, s) , 2,25-2,13 (4H, m) , 1,80-1, 60 (4H, m) . MS (ES) : C14H14F3NO requer 2 69; encontrado 27 0 (MH+) .
Descrição para D67 GSK1929583A, N2123-11-A2 4-Ciclo-hexil-3-(trifluorometil)benzamida (D67)
4-(1-ciclo-hexen-l-il)-3-(trifluorometil)benzamida (D66) (850 mg, 3,16 mmol) foi dissolvida em metanol (63 mL) e hidrogenada usando Η-Cube, usando paládio sobre carbono a 40 °C com uma caudal de 2 mL/min. O solvente foi removido em vácuo para dar o composto mencionado em titulo 104 ΡΕ2206710 na forma de um sólido branco (822 mg) . δΗ (CDCI3, 400 MHz) : 8,08 (1H, d), 7,94 (1H, dd) , 7,52 (1H, d), 6,54 (2H, brs) , 2,97 (1H, m), 1, 90-1,75 (5H, m) , 1,50-1,22 (5H, m) . MS (ES) : C14H16F3NO requer 271; encontrado 272 (MH+) .
Descrição para D 68 Ácido 4-ciclo-hexil-3-(trifluorometil)benzóico (D68)
A uma solução de 4-ciclo-hexil-3-(trifluoro-metil)benzamida (D67) (822 mg, 3,03 mmol) em etanol (40 mL) foi adicionado hidróxido de potássio (1,700 g, 30,3 mmol) e água (5 mL) e a reação aquecida à temperatura de bloco de 90 °C durante 3 h e agitada à temperatura ambiente durante 16 h. Mais hidróxido de potássio (1,700 g, 30,3 mmol) foi adicionado e a reação aquecida em refluxo durante 27 h. Outros 5 mL de água foram adicionados e a reação aquecida durante 66 horas (fim-de-semana). A mistura reacional foi concentrada em vácuo e o residuo repartido entre acetato de etilo (25 mL) e ácido cloridrico aquoso (2 M, 25 mL) . A camada aquosa foi ainda extraida com acetato de etilo (25 mL) e as fases orgânicas combinados foram secas (MgS04) , filtradas e o solvente removido em vácuo para dar o composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco (737 mg). δΗ (metanol-d4, 400 MHz): 8,24 (1H, d), 8,18 (1H, dd) , 7,68 (1H, d), 2,98 (1H, t) , 1,72-1,95 (5H, m) , 1,30-1,58 (5H, m) . MS (ES) : C14H15F3O2 requer 272; encontrado 271 (M-H+) . 105 ΡΕ2206710
Descrição para D69 3-(4-{5-[4-Ciclo-hexil-3-(trifluorometil)fenil]—1,2,4— -oxadiazol-3—il}-líí-indol-l-il)propanoato de etilo (D69)
Uma solução de ácido 4-ciclo-hexil-3-(trifluoro- metil)benzóico (D68) (148 mg, 0,545 mmol), EDC (115 mg, 0,599 mmol) e HOBt (92 mg, 0,599 mmol) em DMF (5 mL) foi agitada durante 10 min antes da adição de 3-{4-[((hidroxi-amino)(imino)metil]- lH-indol-l-ilIpropanoato de etilo (D57) (150 mg, 0,545 mmol). A reação foi agitada durante 30 min à temperatura ambiente seguido por 16 h a 80 °C. A mistura reacional foi repartida entre acetato de etilo (25 mL) e água (25 mL) e a fase orgânica lavada com bicarbonato de sódio aquoso (25 mL) e em seguida água (25 mL) . A fase orgânica foi seca (separador de fase) e o solvente removido em vácuo. O produto cru foi purificado por MDAP. Alguma da mistura submetida a MDAP tinha precipitado e foi triturada com etanol e filtrada. Os sólidos brancos foram combinados para dar o composto mencionado em titulo (63 mg) . MS (ES) : C28H28F3N3O3 requer 511; encontrado 512 (MH+) . 106 ΡΕ2206710
Descrição para D70 4-[(1-Metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)benzoato de 1-metiletilo (D70)
Uma mistura de ácido 4-hidroxi-3-(trifluoro-metil)benzóico (comercial) (450 mg, 2,18 mmol), 2-iodo-propano (435 pL, 4,36 mmol) e carbonato de potássio (603 mg, 4,36 mmol) em N,N'~dimetilformamida (40 mL) foi aquecida a 7 0 °C durante 4 h antes de mais 2-iodopropano (218 pL, 2,18 mmol) ser adicionado e o aquecimento continuar durante 18 h. 0 sólido inorgânico foi separado por filtração e lavado com acetato de etilo. O filtrado foi concentrado em vácuo e repartido entre acetato de etilo (150 mL) e água (150 mL) contendo algum hidróxido de sódio aquoso. A camada orgânica foi seca (separador de fase) e concentrada em vácuo para dar o composto mencionado em titulo cru (704 mg) na forma de um óleo. MS (ES) : C14H17F3O3 requer 290; encontrado 291 (MH+) .
Descrição para D71 Ácido 4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)benzóico (D71)
OH 107 ΡΕ2206710 A uma mistura de 4-[(1-metiletil)oxi]-3-(tri-fluorometil)benzoato de 1-metiletilo (D70) (704 mg, 2,43 mmol) em etanol (110 mL) foi adicionado hidróxido de sódio aquoso (2 M, 12,2 mL, 24,3 mmol) e a reação aquecida em refluxo durante 1 h. A mistura foi concentrado em vácuo e o resíduo repartido entre acetato de etilo (100 mL) e água (100 mL) e acidificado com ácido clorídrico aquoso (2 M, 13 mL). A camada aquosa foi extraída ainda com acetato de etilo (100 mL) e as camadas orgânicas combinadas secas e concentradas em vácuo para dar o composto mencionado em título na forma de um sólido amarelo (563 mg). δΗ (metanol-d4, 400 MHz) : 8,21-8,17 (2H, m), 7,26 (1H, d), 4,84 (1H, septeto), 1,38 (6H, d). MS (ES): C11H11F3O3 requer 248; encontrado 247 (M-H+) .
Descrição para D72 3-(4—{5—[4-[(1-Metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-l.H-indol-l-il) propanoato de etilo (D72)
Ácido 4- [ (1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)ben- 108 ΡΕ2206710 zóico (D71) (136 mg, 0,55 mmol), EDC (116 mg, 0,61 mmol) e HOBt (82 mg, 0,61 mmol) foram agitados em N,N-dimetil-formamida (5 mL) durante 20 min. 3-{4-[(Hidroxiamino)-(imino) metil]-lií-indol-l-il jpropanoato de etilo (D57) (150 mg, 0,55 mmol) foi adicionado e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h e em seguida 80 °C durante 18 h. A mistura reacional foi repartida entre acetato de etilo (25 mL) e água (25 mL). A camada orgânica foi lavada com bicarbonato de sódio aquoso (25 mL) e água (25 mL) antes de ter sido seca (separador de fase) , filtrada e concentrada em vácuo. 0 resíduo foi triturado com etanol para dar 0 composto mencionado em título (85 mg) . δΗ (d6- DMSO, 400 MHz) : 8,44 (1H, dd) , 8,35 (1H, d) , 7 ,95 (1H, d) , 7,81 (1H, d) , 7, 62-7,58 (2H, m) , 7, •36 (1H, t apar.), 7,07 (1H, d) , 4, 99 (1H, septeto), 4,54 (2H, t), r 4, ,02 (2H, q), 2,89 (2H, t) , 1,36 (6H, d), 1,11 (3H, t) . MS (ES+) : C25H24F3N3O4 requer 487; encontrado 488 (MH+) .
Os seguintes exemplos foram preparados de uma maneira semelhante à descrita acima. Na ocasião foi requerido EDAC adicional (até 2,6 eq) e no caso de D80 foi necessário elevar a temperatura até 120 °C. A manipulação foi ou aquosa ou alternativamente o solvente foi removido em vácuo. No caso de D92 etanol, foi adicionado à mistura reacional e o precipitado resultante foi filtrado. Os compostos foram purificados ou por trituração, MDAP, cromatografia normal ou de inversão de fases. 109 ΡΕ2206710
Estrutura Precursores Nome MH+ D73 CU» ti v \ CH3 0—/ / ^ Λλ r°~< } o D58 e D4 [4-(5-{3-cloro-4- [ (1--metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-1-il]acetato de etilo 440/44 2 D74 fi o—/ / ^ 00 1 D58 [4-(5-{3-ciano-4- [ (1--metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-1-il]acetato de etilo 431 D75 % 0^ °i· p—/ / \\ nvn O D59 4 - [4 - (5-{3-ciano-4-[ (í- -metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il] -butanoato de etilo 459 110 ΡΕ2206710 (continuação)
Estrutura Precursores Nome MH+ D76 \ ^=0 w0 D57 e D30 3- (4-{5-[2'-fluoro-2--(trifluorometil)-4--bifenilil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-1H--indol-l-il)propanoato de etilo 524 D77 CNa a, o—^ fi CHl 0~η{ O D59 e D4 4-[4-(5-{3-cloro-4-[ (í- -metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]-butanoato de etilo 468 D78 F p ? % X'0'/ 0 D59 4- [4- (5-{3-cloro-4--[(trifluorometil)oxi] fenil}—1,2,4— oxadiazol-3-il)-1H-indol-l-il]butanoato de etilo 494 111 ΡΕ2206710 (continuação)
Estrutura Precursores Nome MH+ D79 ,0H, Ct Q—/ \ N V; °~€ ! \\ 1 D59 e D61 4- [4- (5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3--piridinilj-1,2,4--oxadiazol-3-il)-1H--indol-l-il]butanoato de etilo 469 D80 f FsJ^F ^—- O - Q D59 4-(4-{5-[4-fenil-5--(trifluorometil)-2--tienil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-1H--indol-l-il)butanoato de etilo 526 D81 \^0 ***1^ 0 D59 e D29 4- (4-{5-[2- -(trifluorometil)-4--bifenilil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-1H--indol-l-il)butanoato de etilo 520 112 ΡΕ2206710 (continuação)
Estrutura Precursores Nome MH+ D82 \_/ r D57 3-(4 —{5 —[4-(metiloxi)-3- (trifluorometil)-fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indol-l-il)propanoato de etilo 460 D83 \ o-/Hi >—/ V.CH, \} o~~/ t % rt D59 e D38 4-{4 - [5 - (3-ciano-4--{[(IR)-1-metilpropil]-oxijfenil)-1,2,4--oxadiazol-3-il]-1H--indol-l-iljbutanoato de etilo 473 D84 H \ o-/"· y V-cH, \ 7 Vjjgy' o—/ / w N\^ N \ ) O D59 e D36 4-{4-[5-(3-ciano-4--{ [ (15)-1-metilpropil]-oxi}fenil)-1,2,4--oxadiazol-3-il]-1H--indol-l-iljbutanoato de etilo 473 D85 D57 e D13 3- (4-{5-[3-etil-4-(1--piperidinil)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il) -propanoato de etilo 473 113 ΡΕ2206710 (continuação)
Estrutura Precursores Nome MH+ D86 o5^ D57 e D19 3-{4- [5- (4-ciclo-hexil-3-etilfenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]-lH-indol-1- iljpropanoato de etilo 472 D87 cr· D57 e D15 3- (4-{5- [5-cloro-6-(1--pirrolidinil)-3-piri-dinil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indol-l-il)propanoato de etilo 466 D88 D59 e D21 4- [4 - (5-{3-bromo-4-[ (í- -metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]-butanoato de etilo 512 D89 JUÇr^T á D59 e D24 4- (4-{5- [3-cloro-4-(2--metilpropil)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il) -butanoato de etilo 466 D90 PHa / ^CH, 0~tr O—/ í % D57 e D34 3- (4-{5-[4-(2- -metilpropil)-3--(trifluorometil)-fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indol-l-il)propanoato de etilo 486 114 ΡΕ2206710
Descrição para D93 3-Cloro-4-{5-[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-l.ff-indole (D93)
115 ΡΕ2206710
Este material foi preparado de uma maneira semelhante a D7 (CQ107723-108A2) a partir de D10 exceto que a reação foi agitada durante quatro horas em vez de durante a noite. MS (ES) : C21H11CIF3N3OS requer 445; encontrado 446 (MH+) .
Descrição para D94 3-Cloro-lJí-indole-5-carbonitrilo (D94)
A uma solução de 5-cianoindole (3,0 g, 21 minol) em DMF seca (50 mL) foi adicionada iV-clorossuccinimida (2,94 g, 22 mmol) e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A solução foi deixada em repouso ao longo do fim-de-semana. LC/MS mostrou um produto único. Foi adicionado acetato de etilo (150 mL) e éter dietilico (50 mL) e lavou-se com água (3 x 300 mL) . A mistura foi seca sobre MgSCq e o solvente separado por evaporação para produzir 3,9 g do composto mencionado em título na forma de um sólido amarelo pálido. δΗ (400 MHz, d6-DMS0) 7,54 (1H, dd) , 7,61 (1H, dd) , 7,78 (1H, d), 8,01-8,02 (1H, m) , 12,2 (1H, s largo) . MS (a partir de LCMS da mistura reacional) (ES) : C9H5CIN2 requer 176; encontrado 177 (MH+) .
Descrição para D95 3-(3-Cloro-5-ciano-lfí-indol-l-il)propanoato de etilo (D95) 116 ΡΕ2206710
Uma mistura de 3-cloro-lfí-indole-5-carbonitrilo (D94) (1,8 g, 10 mmol), 3-bromopropionato de etilo (1,92 mL, 15 mmol), carbonato de césio (6,5 g, 20 mmol) e DMF (50 mL) foi aquecida a 80 °C durante 4 horas para dar reação completa. Depois de se deixar arrefecer a mistura até à temperatura ambiente, foi adicionado éter dietilico (300 mL) e a solução foi lavada com água (3 x 300 mL) . Foi seca sobre MgSCU e o solvente separado por evaporação para dar um sólido castanho. O sólido foi triturado com a mistura de éter dietilico e hexano para se obter 2,5 g do composto mencionado em titulo na forma de um sólido acastanhado. Produto cru usado no passo seguinte (síntese de D96) .
Descrição para D96 3-{3-Cloro-5-(hidroxiamino)(imino)metil]-lH-indol-l--iljpropanoato de etilo (D96)
Uma mistura de 3-(3-cloro-5-ciano-lH-indol-l-il)- 117 ΡΕ2206710 propanoato de etilo (D95) (2,0 g, 7,2 mmol), hidrocloreto de hidroxilamina (1,0 g, 14,4 mmol), hidrogenocarbonato de sódio (2,42 g, 28,9 mmol) e etanol (100 mL) foi aquecida a 50 °C ao longo do fim-de-semana. Presentes ainda 25% do material de partida por LC/MS. Foi adicionado hidrocloreto de hidroxilamina (0,5 g, 7,2 mmol) e hidrogenocarbonato de sódio (1,2 g, 14,3 mmol) e a mistura foi aquecida a 50 °C durante 24 horas. Existia apenas uma pequena quantidade de material de partida presente de modo que foi decidido manipular a reação. O material inorgânico foi separado por filtração. O solvente foi evaporado e o residuo triturado usando acetato de etilo e éter dietilico para produzir 1,9 g do composto mencionado em titulo na forma de um sólido amarelo pálido. MS (ES) C14H16CIN3O3 requer 309; encontrado 310 (MH+) .
Descrição para D97 3-[3-Cloro-5-(5-{3-cloro-4-[(trifluorometil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-l.ff-indol-1-il]propanoato de etilo (D97)
Ácido 3-cloro-4-[(trifluorometil)oxi]benzóico (comercial: ABCR) (168 mg, 0,70 mmol) em agitação em DMF (6 mL) foi tratado com EDC (146 mg, 0,76 mmol) seguido por HOBt (104 mg, 0,76 mmol) . A solução resultante foi agitada 118 ΡΕ2206710 durante 15 minutos. Foi adicionado 3-{3-cloro-5-[(hidroxi-amino)(imino)metil]-lH-indol-l-il}propanoato de etilo (D96) (216 mg, 0,70 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 45 minutos. A solução foi aquecida a 80 °C durante 6 horas e em seguida deixada em repouso à temperatura ambiente durante a noite. Produto único formado, por LC/MS. Foi adicionado EtOAc (50 mL) e lavou-se com água (50 mL) , hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL) e água (50 mL) . Foi seco sobre MgSCq e o solvente separado por evaporação. O residuo foi cristalizado em etanol para produzir 200 mg de sólido branco. δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 1,11 (3H, t) , 2, 92 (2H, t), 4,00 (2H, q), 4,49 (2H, t) , 7,75 (1H, s) , 7,80 (1H, d), 7,85 (1H, dd) , 7, 95 (1H, dd) 8,23 (1H, d) 8,30 (1H, dd), 8,47 (1H, d) . MS (ES) C22Hi635Cl37ClF3N3C>4 requer 515; encontrado 516 (MH+) .
Descrição para D98 (alternativa à descrição para D28) 4-Cloro-3-(trifluorometil)benzoato de etilo (D98)
Uma solução de ácido 4-cloro-3-trifluorometil-benzóico (10 g, 44,5 mmol) em etanol (10 mL) foi dividida igualmente entre dois frascos de micro-ondas. Ácido sulfúrico concentrado (0,75 mL) foi adicionado a cada frasco (1,5 mL no total). As reações foram aquecidas no micro-ondas a 120 °C durante 30 minutos no total. As misturas reacionais foram combinadas e concentradas em 119 ΡΕ2206710 vácuo. 0 resíduo foi repartido entre EtOAc (100 mL) e bicarbonato de sódio aq° (100 mL) , a fase orgânica foi separada, lavada com bicarbonato de sódio aq° (100 mL) e água (2 x 100 mL) e em seguida seca (separador de fase) e o solvente removido em vácuo para dar o composto mencionado em título (4,126 g) na forma de um óleo incolor. δΗ (400 MHz, metanol-d4) 1,40 (3H, t) , 4,41 (2H, quart) , 7, 76 (1H, d) , 8,22 (1H, dd) , 8,34 (1H, d) .
Descrição para D99 3-Cloro-4-(propiloxi)benzoato de metilo (D99)
4-Hidroxi-3-clorobenzoato de metilo (10 g, 53,6 mmol) foi dissolvido em DMF (110 mL) e em seguida carbonato de potássio (14,8 g, 107,2 inmol) foi adicionado seguido por iodeto de n-propilo (10,4 mL, 107,2 mmol). A reação foi aquecida a 70 °C durante a noite, filtrada e em seguida o filtrado foi repartido entre EtOAc e água. A camada orgânica foi separada, seca e evaporada para dar o composto mencionado em título na forma de um óleo (12,37 g) . δΗ (400 MHz, de-DMSO) 1,00 (3H, t) , 1,72-1,92 (2 H, m) , 3, 82 (3H, s), 4,10 (2H , t), 7,24 (1H, d) , 7,85- 8,10 (2H, m) . MS (ES) CnHi335C103 requer 22 8; encontrado 229 (MH+) . 120 ΡΕ2206710
Descrição para Dl00 Ácido 3-cloro-4-(propiloxi)benzóico (D100)
Uma solução de 3-cloro-4-(propiloxi)benzoato de metilo (D99) (12,22 g, 0,053 mol) em etanol (40 mL) e NaOH aq° 2 M (40 mL) foi aquecida a 60 °C durante 3 horas. A reação foi deixada arrefecer e em seguida deixada à temperatura ambiente ao longo do fim-de-semana. A mistura reacional foi vertida numa mistura de HC1 aq° diluido e EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca e evaporada para dar um sólido que foi triturado com éter para dar o composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco (7,7 g) . δΗ (400 MHz, d6-DMS0) 1,00 (3H, t) , 1, 67-1, 87 (2H, m) 4,10 (2H, t), 7,24 (1H, d), 7, 84-8, 06 (2H, m) , 12,97 (1H, br s) . MS (ES) CioHn35ClC>3 requer 214; encontrado 213 (M-H+) .
Descrição para Dl01 3-(3-Cloro-5-{5-[3-cloro-4-(propiloxi)fenil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-l.ff-indol-l-il) propanoato de etilo (D101) 121 ΡΕ2206710
Ácido 3-cloro-4-(propiloxi)benzóico (D100) (150 mg, 0,70 mmol) em agitação em DMF foi tratado com EDC (146 mg, 0,76 mmol) seguido por HOBt (104 mg, 0,76 mmol). A solução resultante foi agitada e 3-{3-cloro-5-[(hidroxi-amino)(imino)metil]-lH-indol-l-iljpropanoato de etilo (D96) (216 mg, 0,70 mmol) adicionado. Aqueceu-se a mistura a 80 °C até a reação estar completa. Da manipulação obteve-se o composto mencionado em titulo na forma de 16 0 mg de sólido creme pálido. δΗ (400 MHz, de-DMSO) 1,03 (3H, t) , 1,10 (3H, t), 1,77-1,86 (2H, m) , 2,90 (2H, t) , 4,05 (2H, q), 4,18 (2H, t) , 4,49 (2H, t) , 7,40 (1H, d), 7,74 (1H, s), 7,81 (1H, d), 7,91 (1H, dd) , 8,15 (1H, dd) , 8,22-8,23 (2H, m) . MS (ES) C24H2335Cl2N304 requer 487; encontrado 488 (MH+) .
Os seguintes compostos foram preparados por métodos semelhantes aos descritos acima. As reações foram manipuladas por repartição do material cru entre acetato de etilo e bicarbonato de sódio aq°, separação da camada orgânica, secagem e evaporação até à secura. Os compostos foram purificados por trituração ou cromatografia de fase normal. 122 ΡΕ2206710
Estrutura Precurso r Nome MH+ D102 Hp-O c'"v/ C[ ? K 0 D96 3- (3-cloro-5-{5-[3--cloro-4-(metiloxi)-fenil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-1H--indol-l-il)-propanoato de etilo 460 D103 Hfi-0 F a ' ^ 0 D96 3- (3-cloro-5-{5-[4--(metiloxi)-3-(tri-fluorometil)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3--il}-lH-indol-l-il)-propanoato de etilo 494 D104 HaC 0 Q Vmw D96 3- [3-cloro-5-(5-{3--ciano-4-[(1-metil--etil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3--il)-lH-indol-l-il]-propanoato de etilo 479 D105 -O \^D Q D96 3- (3-cloro-5-{5-[4--nitro-3-(trifluoro-metil)fenil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-1H--indol-l-il)-propanoato de etilo
Descrição para Dl06 3-(5-{5-[3-Bromo-4-(metiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}--3-cloro-l.ff-indol-l-il)propanoato de etilo (D106) 123 ΡΕ2206710
0 ácido 3-bromo-4-(metiloxi)benzóico (comercial: ICN) (243 mg, 1,05 mmol) em agitação em DMF (10 mL) foi tratado com EDC (219 mg, 1,14 mmol) seguido por HOBt (156 mg, 1,14 mmol). A solução resultante foi agitada durante 10 minutos. Foi adicionado 3-{3-cloro-5-[(hidroxi-amino)(imino)metil]-ltf-indol-l-il}propanoato de etilo (D96) (324 mg, 1,05 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos. A solução foi aquecida a 80 °C durante 4 horas em seguida deixada em repouso durante a noite. A solução foi aquecida a 80 °C durante mais 4 horas para dar um produto principal. DMF foi separada por evaporação, EtOAc foi adicionado (50 mL) e lavou-se com água (50 mL) . O EtOAc foi lavado com hidrogenocarbonato de sódio aquoso sat° (50 mL) e água (50 mL) em seguida seco sobre MgS04. O solvente foi separado por evaporação e cristalizado em etanol para produzir o composto mencionado em titulo como 280 mg de sólido creme. δΗ (400 MHz, d6- DMSO) 1,10 (3H, t), 2, 90 (2H, t), 3,99-4,05 (5H, m) , 4,49 (2H, t), 7 ,38 (1H, d) , , 7,74 (1H, s) , 7,80 (1H, d) , 7, 97 (1H, d), 8,21-8,23 (2H, m) , 8,36 (1H, d) . MS (ES) C22Hi981Br35ClN304 requer 505; encontrado 50 6 (MH+) . 124 ΡΕ2206710
Descrição para Dl07 3-(3-Cloro-5-{5-[6-(metiloxi)-3-bifenilil]-1,2,4-oxadiazol--3-il}-l.ff-indol-l-il)propanoato de etilo (D107)
3-(5-{5-[3-Bromo-4-(metiloxi)fenil]-1,2,4-oxadi-azol-3-il}-3-cloro-lfí-indol-l-il) propanoato de etilo (D106) (212 mg, 0,42 mmol) , ácido fenilborónico (104 mg, 0,84 mmol), Pd(PPh3)4 (20 mg) e solução aquosa 2 N de carbonato de sódio (3 mL, 6 mmol) foram suspensos em DME (6 mL) e aquecidos a 90 °C durante 2 horas. Foi adicionado ácido fenilborónico (30 mg, 0,24 mmol) e Pd(PPh3)4 (20 mg) e aqueceu-se a 90 °C durante mais 2 horas. Foi adicionado EtOAc (70 mL) e lavou-se com água (100 mL) . A mistura foi seca sobre MgS04 e o solvente separado por evaporação. O resíduo foi cristalizado em etanol para produzir o composto mencionado em título na forma de 90 mg de sólido acastanhado claro. MS (ES) C28H2435ClN304 requer 501; encontrado 502 (MH+) .
Descrição para Dl08 3-{3-Cloro-5-[5-(3-cloro-4-hidroxifenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]-lH-indol-l-il}propanoato de etilo (D108) 125 ΡΕ2206710
Ácido 3-cloro-4-hidroxibenzóico (comercial) (240 mg, 1,40 mmol) em DMF seca (8 mL) foi tratado com EDC (292 mg, 1,52 mmol) e HOBt (208 mg, 1,52 mmol) e agitado durante 5 minutos. Foi adicionado 3-{3-cloro-5-[(hidroxi-amino) (imino) metil ]-lfí-indol-l-il jpropanoato de etilo (D96) (432 mg, 1,40 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura reacional foi aquecida a 80 °C durante 7 horas. Foi adicionado EtOAc (70 mL) e lavou-se com água (70 mL), hidrogenocarbonato de sódio aq° sat° (70 mL) e água (70 mL). A mistura foi seca sobre MgS04 e o solvente separado por evaporação. O resíduo foi sujeito a cromatografia usando um Biotage (EtOAc/hexano 1:2) para se obter o composto mencionado em título como 200 mg de sólido branco. δΗ (400 MHz, de-DMSO) 1,10 (3H, t), 2,91 (2H, t) , 4,04 (2H, q) , 4,50 (2H, t), 7,67-7,70 (2H, m), 7,75 (1H, s) , 7,80-7,81 (2H, m), 7,94 (1H, dd), 8,22-8,25 (1H, m) , 10, 95 (1H, s largo) . MS (ES) C2iH17j5C12N304 requer 445; encontrado 446 (MH+) .
Descrição para Dl09 3-(3-Cloro-5-{5-[3-cloro-4-(etiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol--3-il}-lfí-indol-l-il)propanoato de etilo (D109) 126 ΡΕ2206710
A 3-{3-cloro-5-[5-(3-cloro-4-hidroxifenil) -1,2,4--oxadiazol-3-il]-lH-indol-l-iljpropanoato de etilo (D108) (180 mg, 0,40 mmol) e K2C03 (138 mg, 1,0 mmol) em DMF seca (3 mL) foi adicionada iodeto de etilo (78 mg, 0,50 mmol) e a mistura aquecida a 80 °C com agitação durante 30 minutos. A mistura foi arrefecida e foi adicionado EtOAc (50 mL) . Foi lavada com água (3 x 40 mL) e seca sobre MgSCL- 0 solvente foi separado por evaporação e cristalizou-se em etanol para produzir o composto mencionado em titulo na forma de 110 mg de sólido branco . δΗ (400 MHz, d6- DMSO) 1,10 (3H, t), 1,42 (3H, t) , 2, 90 (2H, t) , 4,02 (2H t q), 4,27 (2H, q) # 4,49 (2H, t) , 7,40 (1H, d) , 7,74 (1H , s) , 7,80 (1H, d) , 7, 95 (1H, dd) , 8,16 (1H, dd) , 8,21- 8,22 (2H, m) . MS (ES) C23H2i35Cl2N304 requer 473; encontrado 474 (MH+) .
Descrição para Dl 10 3-[3-Cloro-5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanoato de etilo (D110) 127 ΡΕ2206710
A 3-{3-cloro-5-[5-(3-cloro-4-hidroxifenil)-1,2,4--oxadiazol-3-il]-lH-indol-l-iljpropanoato de etilo (D108) (180 mg, 0,40 mmol) e K2C03 ( 138 mg, 1,0 mmol) em DMF seca (5 mL) foi adicionado iodeto de isopropilo (85 mg, 0,50 mmol) e a mistura foi agitada a 80 °C durante 30 minutos. A mistura foi arrefecida e adicionou-se EtOAc (50 mL) . Foi lavada com água (2 x 50 mL) e seca sobre MgSC>4. Separou-se por evaporação o solvente e cristalizou-se em etanol para produzir o composto mencionado em titulo na forma de 120 mg de sólido branco. δΗ (400 MHz, d6_DMSO) 1,12 (3H, t) , 1,37 (6H, d) , 2, 91 (2H, t), 4,02 (2H, q), 4,50 (2H, t) , 4,89-4,98 (1H, m) , 7,72-7,85 (5H, m), 7,95- 8,00 (1H, m) , 8,24 (1H, d) . MS (ES) C24H2335C12N304 requer 487; encontrado 488 (MH+) .
Descrição para Dl 11 Ácido 3-iodo-4-(trifluorometil)benzóico (Dlll)
OH Ácido 3-Amino-4-(trifluorometil)benzóico (comercialmente disponível) (6,5 g, 31,7 mmol) e triiodometano 128 ΡΕ2206710 (37,4 g, 95,1 mmol) foram dissolvidos em THF (300 mL) . A mistura reacional foi aquecida a 80 °C e em seguida nitrito de butilo (5,56 mL, 47,6 mmol) foi adicionado lentamente a esta temperatura. O aquecimento foi continuado a esta temperatura durante 4 horas e em seguida a reação foi concentrada em vácuo para dar o produto cru. A purificação por cromatografia em coluna (hexano até 30% de EtOAc em hexano) . Este material foi combinado com um outro lote de uma reação semelhante realizada sobre 2 g de ácido 3-amino-4-(trifluorometil)benzóico. O material combinado foi purificado por HPLC preparativa para dar o composto mencionado em titulo (6,1 g) . MS C8H4F3IO2 requer 316; encontrado 315 (M-H+) .
Descrição para Dl 12 3-(5-{5-[3-Iodo-4-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3--ilJ-lH-indol-l-il)propanoato de etilo (D112)
Dlll (1,0 g, 3,16 mmol) foi dissolvido em DMF (25 mL) sob azoto. EDC (0,7 g, 3,7 mmol) e HOBt (0,5 g) foram adicionados. A reação foi agitada à temperatura 129 ΡΕ2206710 ambiente durante 15 minutos e em seguida trietilamina (0,87 mL, 6,32 mmol) foi adicionada e a reação foi agitada durante mais 5 minutos. D52 (0,87 g, 3,16 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A reação foi concentrada em vácuo e o óleo resultante diluido com acetato de etilo (100 mL) . A camada orgânica foi lavada com água (2 x 30 mL) , seca (Na2S04) e concentrada em vácuo para dar o produto cru que foi purificado por cromatografia em coluna. 0 produto foi eluido em 7% de EtOAc em hexano e a evaporação produziu o composto mencionado em titulo (0,45 g) . MS C22H17F3IN3O3 requer 555; encontrado 556 (MH+) .
Descrição para Dl 13 3-(5—{5—[6—(trifluorometil)-3-bifenilil]-1,2,4-oxadiazol-3--ilj-líí-indol-l-il) propanoato de etilo (D113)
Este material foi preparado por um método semelhante ao usado para D107 a partir de D112. MS (ES) C28H22F3N3O2 requer 505; encontrado 50 6 (MH+) . 130 ΡΕ2206710
Exemplos
Exemplo de Referência 1 Ácido 3-(5-{5-[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-l.ff-indol-l-il)propanóico (El)
D3 (38 mg) foi dissolvido em NaOH aquoso 2 M (0,5 mL) e MeOH (0,5 mL) e em seguida foi agitado à temperatura ambiente durante a noite. A análise por LCMS mostrou 41% do produto por isso a mistura reacional foi aquecida a 50 °C e agitada ao longo do fim-de-semana. LCMS mostrou a reação completa. A mistura reacional foi evaporada e em seguida repartida entre H20 e DCM. A camada orgânica foi extraida com H20. Os extratos aquoso combinados foram acidificados até pH = 1 e extraídos com DCM. Estes extratos de DCM foram secos sobre MgS04, filtrados e evaporados para darem o produto cru MF105672-149A1 (30 mg). O produto cru foi purificado sobre um cartucho de sílica (12+S), eluindo com uma mistura 0 a 10% de MeOH em DCM para dar o produto purificado. Este foi dissolvido em CHCI3 e evaporado para dar o composto mencionado em título (3 mg) na forma de um sólido branco. δΗ (CDCls, 400 MHz) : 2,92 (2H, t) , 4,50 (2H, t) , 6,51 (1H, d), 7,24 (1H, d), 7,40-7,53 (6H, m) , 7,90 (1H, s) , 8,00 (1H, d), 8,45 (1H, s) . MS (ES+) : C^HieFsNsOsS requer 483; encontrado 484 (MH+) . 131 ΡΕ2206710
Exemplo de Referência 1 (procedimento alternativo) Ácido 3-(5-{5-[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-l.ff-indol-l-il)propanóico (El)
D3 (600 mg) foi tratado com NaOH aq° 2 M (25 mL) e MeOH (25 mL). Esta mistura foi agitada durante a noite e em seguida aquecida a 50 °C durante 6 horas. O MeOH foi em seguida evaporado e a solução restante acidificada e extraída com EtOAc (x3). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com água salgada e evaporadas para dar o resíduo cru C (302 mg) na forma de um sólido esbranquiçado.
Este foi triturado com MeOH frio para dar 0 composto mencionado em título (162 mg) na forma de um sólido cinzento. δΗ (d6-DMSO, 400 MHz) : 2, 80 (2H, t) , 4,46 (2H, t), 6,64 (1H, d), 7,49-7,59 (6H, m) , 7,72 (1H, d), 7,85 (1H, dd) , 8,22-8,25 (1H, m) , 8,31-8,34 (1H, m) . MS (ES) : C24H16F3N3O3S requer 483; encontrado 484 (MH+) .
Exemplo de Referência 2 3-(5-{5-[4-Fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4--oxadiazol-3-ilJ-lJí-indol-l-il)propionato de sódio (E2)
El (30 mg) foi dissolvido em EtOAc (1 mL), 132 ΡΕ2206710 tratado com NaOH aquoso 2 M (40 yL) , diluído com H20 (1 mL) e extraído com EtOAc (3x5 mL), usando um pequeno volume de água salgada durante a terceira extração para ajudar a separação de fases. Os extratos orgânicos combinados foram evaporados para darem o composto mencionado em título (37 mg) na forma de um sólido verde. δΗ (metanol-d4, 400 MHz) : 2,68 (2H, t), 4,48 (2H, t) , 6, 55 (1H, d), 7,49 (1H, d), 7,45-7,56 (5H, m), 7, 62 (1H, d), 7, 92 (1H, d), 8,03 (1H, s) , 8,35 (1H, s) . MS (ES+) : C24H 16F3N3O3S requer 483; encontrado 484 (MH+) .
Exemplo de Referência 3 Ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenilj-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanóico (E3)
D6 MF105672-178A2 (38 mg) foi dissolvido em EtOH, tratado com NaOH aquoso 12,5 M (2 mL) e agitado à temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura reacional foi evaporada, redissolvida em H20 e lavada com éter dietílico. A solução aquosa foi acidificada e em seguida extraída com DCM. As soluções de DCM foram combinadas, secas sobre MgS04, filtradas e evaporadas para dar o composto mencionado em título MF105672-181A1 (5 mg) na forma de um sólido amarelo pálido. δΗ (CDCI3, 400 MHz) : 1,44 (6H, d), 2,94 (2H, t), 4,51 (2H, t) , 4,73 (1H, septeto) , 6,61 (1H, 133 ΡΕ2206710
d), 7, 07 (1H, d), 7,22 (1H, d) , 7,45 (1H, d), 7, 94 (1H 8,07 (1H, d), 8,27 (1H, s) , 8,47 (1H, s) . MS C22H20CIN3O4 requer 425; encontrado 426 (MH+) .
Exemplo de Referência 4 3-[3-Cloro-5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenilj-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanoato de sódio (E4)
D7 (200 mg) e CS2CO3 (336 mg) foram colocados num frasco de micro-ondas, tratados com DMF (2,8 mL) e 3-bromo-propionato de etilo (99 pL) e sujeitos a ultrassons durante 10 minutos. A mistura foi em seguida aquecida a 120 °C num reator de micro-ondas durante 25 min. A mistura reacional foi em seguida evaporada, redissolvida em MeOH (10 mL) e tratada com NaOH aq° 2 M (10 mL). Esta mistura foi sujeita a ultrassons brevemente e em seguida aquecida a 50 °C durante a noite. A mistura reacional foi em seguida evaporada, diluida com H2O (70 mL) e extraída com EtOAc, adicionando NaCl e acetona para melhorar a extração. Os extratos orgânicos foram evaporados para darem o produto cru que foi acidificado com HC1 para dar o ácido livre. Este foi insuficientemente solúvel para purificação por cromatografia e por isso foi triturado com MeOH, tratado com NaOH aq° 2 M (1,5 eq), evaporado, dissolvido em EtOAc, filtrado e evaporado para dar o composto mencionado em titulo (56 mg) na forma de um sólido castanho. δΗ (metanol- 134 ΡΕ2206710 d4, 400 MHz): 1,42 (6H, d) , 2, 66 (2H, t) , 4, 47 (2H, t) , 4,82 (1H, m) , 7,29 (1H, d) , 7 / , 44 (1H, s) , 7, 65 (1H, d) , 7, 98 (1H, d) , 8,12 (1H, d) , 8 / ,20 (1H, s) , 8, 30 (1H, s) . MS (ES) : C22Hi935Cl2N3C>4 requer 459; encontrado 460 (MH+) .
Exemplo de Referência 5 Ácido 3-(3-cloro-5-{5-[4-fenil-5-(trifluorometil)-2—tie-nil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico (E5)
F P
P Ν' % \ / D8 (86 mg), 3-bromopropionato de (52 mg), CS2CO3 (126 mg) e DMF (1 mL) foram colocados num frasco de micro-ondas e agitados a 131 °C no reator de micro-ondas durante 1,5 horas. A mistura reacional foi em seguida evaporada até à secura e tratada com NaOH aq° 2 M e EtOH (20 mL) . Esta solução foi agitada a 50 °C durante 4 horas e em seguida neutralizada com HC1 e evaporada para remover o EtOH. A solução aquosa foi em seguida extraída duas vezes com EtOAc e os extratos combinados evaporados. O resíduo foi dissolvido em DMSO, filtrado, tratado com MeCN causando a precipitação do produto que foi filtrado e lavado com MeCN para dar o composto mencionado em titulo (23 mg) na forma de um sólido esbranquiçado. δΗ (dg-DMSO, 400 MHz) : 2,47-2,57 (solvente + 2H) 4,37 (2H, t), 7,51-7,59 (5H, m) , 7,72 (1H, s), 7,76 (1H, d), 7,89 (1H, d), 8,17 (1H, s) , 8,25 (1H, s) . MS (ES) : C24H15CIF3N3O2S requer 517; encontrado 516 (M-H+) . 135 ΡΕ2206710
Exemplo de Referência 6 Ácido 3-(4—{5—[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-1H-indol-l-il)propanóico (E6)
de micro-ondas com CS2CO3 (135 mg) e DMF (1 mL) . Este foi agitado brevemente e bromopropionato de etilo (40 pL) foi adicionado. A mistura foi aquecida a 130 °C durante 1,5 horas no reator de micro-ondas. A mistura reacional foi transferida para um recipiente contendo NaOH aquoso 2 M (5 mL) e EtOH (5 mL) , em seguida agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi em seguida evaporada e o resíduo acidificado até pH = 2,5 com HCl aquoso 2 M. Esta solução foi extraída com EtOAc duas vezes e os extratos combinados evaporados para darem um resíduo amarelo que foi purificado por MDAP para dar o composto mencionado em título (50 mg) na forma de um sólido branco.
δΗ (CDCls, 400 MHz): 2, 93 (2H, t) , 4, 50 (2H, t), 7,26 (1H, s), 7,33 (1H, d), 7,37 (1H, t ap) , 7, Γ45-7,52 (5H, m), 7,55 (1H, d), 7, 93 (1H, s), 8,04 (1H, d) . MS (ES) : C24H15F3N303S requer 483; encontrado 482 (M-H+) .
Exemplo de Referência 7 Ácido 3-[4-(5—{3-cloro-4-[(trifluorometil)oxi]fenil}—1,2,4--oxadiazol-3-il) -lJí-indol-l-il] propanóico (E7) 136 ΡΕ2206710
Ácido 3-cloro-4-[(trifluorometil)oxi]benzóico (fonte comercial) (131 mg), EDCI (1 14 mg) e HOBT (81 mg) foram dissolvidos em DMF (2,5 mL) e agitados à temperatura ambiente durante 10 minutos. 3-{5-[(Hidroxiamino)(imino)-metil ]-1/í-indol-l-il jpropanoato de etilo (D57) (150 mg) em DMF (2,5 mL) foi adicionado e a agitação continuou à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi em seguida aquecida a 80 °C durante a noite. A mistura reacional foi evaporada até à secura e em seguida extraída com EtOAc (2 x 25 mL) a partir de H20 (25 mL). As soluções orgânicas combinadas foram evaporadas até à secura e o residuo tratado com EtOH e NaOH aq° 2 M (mistura 1:1, 20 mL) . Esta mistura foi agitada a 50 °C durante 2 horas, em seguida evaporada para remover o EtOH. O precipitado resultante foi separado por filtração e lavado com uma mistura de H20 e EtOH e em seguida HC1 2 Μ. O residuo foi recristalizado em EtOH quente para dar o composto mencionado em título (62 mg) na forma de um sólido branco. δΗ (de-DMSO, 400 MHz) : 2,81 (2H, t) , 4,50 (2H, t) , 7,08 (1H, d), 7,36 (1H, t aparente), 7,61 (1H, d), 7,83 (1H, d), 7,89 (1H, d), 7,96 (1H, d), 8,32 (1H, dd) , 8,50 (1H, d). MS (ES) : C2oHi335ClF3N304 requer 451; encontrado 450 (M-H+) .
Exemplo de Referência 8 Ácido 3-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il) -lJí-indol-l-il] propanóico (E8) 137 ΡΕ2206710
Ácido 3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]benzóico (D4) (117 mg) foi adicionado a EDCI (114 mg) e HOBT (81 mg) dissolvidos em DMF (2,5 mL). Isto foi agitado à temperatura ambiente durante 10 minutos e em seguida 3-{4-[(hidroxi-amino)(imino)metil]-lH-indol-l-iljpropanoato de etilo (D57) (150 mg) em DMF (2,5 mL) foi adicionado e a agitação continuou à temperatura ambiente durante 2 horas e em seguida a 80 °C durante a noite. A mistura reacional foi evaporada até à secura e extraída a partir de H20 (25 mL) com EtOAc (2 x 25 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram evaporados e tratados com NaOH aq° 2 M (10 mL) e EtOH (10 mL) , agitados a 50 °C durante 2 horas e em seguida evaporados para remover o EtOH. A solução restante foi acidificada, filtrada e o precipitado lavado com Et0/H20 em seguida recristalizado em EtOH quente/H20 em seguida em DMSO. Lavando com Et20 e MeOH deu o composto mencionado em título (46 mg) na forma de um sólido branco. δΗ (dg-DMSO, 400 MHz): 1,37 (6H, d) , 2,81 (2H, t) , 4,50 (2H, t) , 4,89 (1H, septeto), 7,08 (1H, d) , 7,35 (1H, t aparente), 7,46 (1H, d), 7, 60 (1H, d) , 7,81 (1H, d) , 7,94 (1H, d), 8,15 (1H, dd) , 8,23 (1H, d) . MS (ES") : C22H2o 35C1N304 requer 425; encontrado 424 (M-H+) .
Exemplo de Referência 9 Ácido 3-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}--1,2,4-oxadiazol-3-il) -lJí-indol-l-il]propanóico (E9) 138 ΡΕ2206710
3-{4-[(Hidroxiamino)(imino)metil]-lH-indol-l-il}-propanoato de etilo (D57) (150 mg) em DMF (2,5 mL) foi adicionado a uma solução de ácido 5-cloro-6-[(1-metiletil)-oxi]-3-piridinacarboxílico (D61) (118 mg), HOBT (81 mg) e EDCI (114 mg) que tinham estado em agitação à temperatura ambiente durante 10 minutos em DMF (2,5 mL) . A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas, em seguida aquecida a 80 °C durante três dias. A mistura reacional foi evaporada até à secura e extraída a partir de H2O (25 mL) com EtOAc (2 x 25 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram evaporados e o resíduo agitado em EtOH/NaOH aq° 2 M (mistura 1:1, 20 mL) a 50 °C durante 2 horas. O EtOH foi evaporado e o precipitado removido por filtração. Este foi acidificado e em seguida purificado por MDAP para dar o composto mencionado em título (48 mg) na forma de um sólido esbranquiçado. δΗ (d6-DMSO, 400 MHz) : 1,40 (6H, d), 2,80 (2H, t) , 4,50 (2H, t) , 5,46 (1H, septeto) , 7,08 (1H, d), 7,36 (1H, t aparente), 7,60 (1H, d), 7,82 (1H, d), 7,95 (1H, d), 8,60 (1H, d), 8,97 (1H, d). MS (ES“) : C2iHi935ClN404 requer 426; encontrado 425 (M-H+) .
Exemplo de Referência 9 (procedimento alternativo)
Acido 3-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanóico (E9) 139 ΡΕ2206710
3-[4 - (5-{5-Cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridi-nil}-1,2,4-oxadiazol-3-il) -lfí-indol-l-il ] propanoato de etilo (D62) (1,1 g, 2,418 mmol) foi dissolvido numa mistura de 1,4-dioxano (100 mL) e etanol (100 mL) . Água (50,0 mL) foi adicionada seguido por hidróxido de sódio 2 N (2,418 mL, 4,84 mmol) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora e meia para dar um produto único. Separou-se por evaporação a maior parte do solvente, acidificou-se com ácido acético glacial, adicionou-se água (50 mL) e extraiu-se o produto em EtOAc (200 mL) . Foi lavado com água (30 mL) e seco sobre MgSCú. O solvente foi separado por evaporação até um precipitado branco se ter formado. O sólido foi separado por filtração e lavado com éter . A massa de composto mencionado em titulo obtido foi 780 mg. δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 1,38 (6H , d), 2, 81 (2H, t), 4,50 (2H, t), 5,41-5,51 (1H, m) , 7,07 (1H, dd) , 7,36 (1H, t) , 7,59 (1H, d), 7,81 (1H, d), 7,94 (1H, dd) , 8,58 (1H, d) , 8,96 (1H, d), 12,40 (1H, s largo). MS (ES) C2iH1935ClN404 requer 426; encontrado 427 (MH+) . 140 ΡΕ2206710
Exemplo de Referência 10 3-[5-(5-{3-Cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l, 2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanoato de sódio (E10)
(D5) (200 mg) foi dissolvido em DMF (4 mL), tratado com CS2CO3 (368 mg) e em seguida bromopropionato de etilo (109 pL). A mistura resultante foi aquecida a 120 °C num reator de micro-ondas durante 2 horas. A mistura reacional foi decantada do residuo insolúvel e evaporada até à secura para dar um óleo laranja pálido. Este óleo foi dissolvido em EtOH (2 mL) e tratado com NaOH aquoso 2 M (2 mL). Isto produziu um precipitado branco de modo que uma outra porção de EtOH (2 mL) foi adicionada para produzir uma solução homogénea. A mistura resultante foi aquecida a 60 °C durante 1 hora em seguida repousou à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi evaporada até à secura, redissolvida em H20 (10 mL) , tratada com água salgada (2 mL) e extraída com uma mistura de EtOAc e MeCN (2 x 20 mL) . A evaporação deu o produto cru (313 mg) na forma de um sólido verde pálido. Este foi dissolvido em MeOH (5 mL) , filtrado e evaporado e em seguida triturado com Et20 para dar o composto mencionado em titulo (247 mg) na forma de um sólido verde pálido. δΗ (metanol-d4, 400 MHz): 1,42 (6H, d), 2,68 (2H, t), 4,48 (2H, t), 4,83 (1H, septeto), 6, 55 (1H, dd) , 7,30 (1H, d), 7,38 (1H, d), 7,61 (1H, d) , 7, 91 (1H, dd), 8,12 (1H, dd), 8,21 (1H, d), 141 ΡΕ2206710 8,34 (1Η, dd) . MS (ES~) : C22H20CIN3O4 requer 425 encontrado 424 (M-H+) .
Os seguintes compostos foram preparados de uma maneira semelhante à do Exemplo 1. 0 solvente para o passo de hidrólise foi ou metanol ou etanol e a temperatura de reação entre a temperatura ambiente e 60 °C. Nalguns casos, as reações foram manipuladas por extração do produto ou acidificando o produto num solvente orgânico e noutros casos o composto final precipitou na camada aquosa e foi isolado por filtração. A purificação foi por MDAP, trituração ou recristalização.
Exemplo Estrutura Nome Comentários MS de Referência Eli r o Ácido (5—{5—[4— -fenil-5-(trifluo-rometil)-2-tie-nil]-1,2,4-oxadi-azol-3-il}-lH-in-dol-l-il)acético Hidrólise de D42 470 (MH+) de Referência E12 H<\ Wcs*. Q 3-[3-Bromo-5-(5--{3-cloro-4-[(1--metiletil)oxi]-fenil}-1,2,4-oxa-diazol-3-il)-1H--indol-l-il]-propanoato de sódio Hidrólise de D43 504 (M-H+ para 35C1 e 81Br) de Referência E13 NtC y— -b -•-cn Νβ / O" 5- [5- (5-{3-cloro--4-[(1-metiletil)-oxi]fenil}-1,2,4--oxadiazol-3-il)--lií-indol-l-il] -pentanoato de sódio Hidrólise de D44 454 (MH+ para 35C1) ΡΕ2206710 142 (continuação)
Exemplo Estrutura Nome Comentários MS de Referência E14 h. Ácido 4-[5-(5-(3--cloro-4-[(1-metiletil) oxi]fe-nil}-l,2,4-oxadi-azol-3-il)-lH-in-dol-l-il]butanóico Hidrólise de D45 440 (MH+ para 35C1) de Referência E15 Ácido (2í?) — 3— [5 — - (5-{3-cloro-4--[(1-metiletil) -oxi]fenil}-1,2,4--oxadiazol-3-il)--lií-indol-l-il] -2--metilpropanóico Hidrólise de D46 440 (MH+ para 35C1) de Referência E16 0 Ácido (2S)-3-[5-- (5-{3-cloro-4--[(1-metiletil)-oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)--líf-indol-l-il] -2--metilpropanóico Hidrólise de D47 440 (MH+ para 35C1) de Referência E17 *//**<> HO Ácido 2,2-dimetil--3- (5-{5-[4-fenil--5- (trifluorome-til)-2-tienil]--1,2,4-oxadiazol--3-il}-lH-indol-l--il)propanóico Hidrólise de D48 512 (MH+)
Exemplo de Referência 18 Ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il) -lJí-indol-l-il] -2,2,3-trif luoropropanóico (E18)
D5 (200 mg), CS2CO3 (552 mg) e DMF (2,8 mL) foram agitados à temperatura ambiente e tratados com ácido 3-bromo-2,2,3-trifluoropropanóico (175 mg). Esta mistura foi aquecida a 140 °C durante 1 hora num reator de micro- 143 ΡΕ2206710 -ondas. 2 outros equivalentes de CS2CO3 (368 mg) foram adicionados e o aquecimento continuou a 140 °C durante 10 horas. A mistura reacional foi em seguida evaporada, tratada com H2O, agitada e filtrada para dar um resíduo sólido castanho. Este foi purificado por MDAP para dar o composto mencionado em título (12 mg) na forma de um sólido branco. δΗ (met anol -d4, 400 MHz): 1,42 (6H, d) , 4,83 (1H, sept( 210) , 6,87 (1H, d) , 7, 29 (1H, d), 7,45 (1H, d) , 7,54 (1H, d) , 7, 61 (1H, d) , 7, 80 (1H, d), 8,06 (1H, d) , 8,11 (1H, d) , 8,19-8 , 22 (1H, m) , 8, 44 (1H, s)
Exemplo de Referência 19 4-[4-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butanoato de sódio (E19)
A uma solução de 4-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil) oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]butano-ato de etilo (D65) (1,42 g, 3,09 mmol) numa mistura de dioxano (70 mL) e etanol (70 mL) foi tratada com hidróxido 144 ΡΕ2206710 de sódio 2 N (1,86 mL, 3,71 iranol) seguido por água (35 mL). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. Separou-se por evaporação a maior parte do solvente e separou-se por filtração o sólido branco do solvente restante. Lavou-se o sólido com água seguido por éter e foi seco para dar 580 mg do composto mencionado em titulo. ôh (400 MHz, metanol-d4) 1,45 (6H, d) , o CM CM CM CM 1 (4H, m) , 4, 30 (2H, t), 4,92-4,98 (1H, m), 7,15 (1H, d), 7,31 (1H, t) , 7,38-7,43 (2H, m), 7,69 (1H, d) , 7, 95 (1H, d) , 8 ,43- 8, 46 (2H, m) . MS (ES) C 24H22N4O4 requer 430; encontrado 431 (MH ) .
Exemplo de Referência 20 3-[5-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanoato de sódio
3-[5-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-lií-indol-l-il] propanoato de etilo (D53) (150 mg, 0,38 mmol) foi dissolvido em etanol (25 mL) por aquecimento a 60 °C. Deixou-se a solução arrefecer até a temperatura ambiente em seguida hidróxido de sódio 2 N (3 mL, 6 mmol) foi adicionado. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. LC/MS mostrou um 145 ΡΕ2206710 produto único. Separou-se por evaporação o etanol e separou-se por filtração o sólido que precipitou da solução. A massa do composto mencionado em titulo na forma de um sólido castanho claro obtida na secagem foi de 50 mg. δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 1,45 (6H, d), 2,67 (2H, t) , 4,48 (2H, t), 4, 92-4,98 (1H, m) , 6,54- 6,55 (1H, m) , 7,34 (1H, d) 7,38 (1H, d), 7, 60 (1H, d), 7,91 (1H, dd) , 8,35 (1H, d) 8,41-8,46 (2H, m) . MS (ES) C23H20N4O4 requer 416; encontrado 417 (MH+) .
Exemplo de Referência 21 3-[4-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-lJí-indol-l-il]propanoato de sódio (E21)
3-[4-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il]propanoato de etilo (D63) (81 mg, 0,18 mmol) foi dissolvido em etanol por aquecimento a 50 °C. Foi adicionado hidróxido de sódio 2 N (0,25 mL, 0,5 mmol) seguido por água (2 mL) , aqueceu-se a 50 °C para dar uma solução límpida, em seguida deixada em 146 ΡΕ2206710 repouso à temperatura ambiente durante 30 minutos. LC/MS mostrou um produto único. O etanol foi separado por evaporação para se obter um precipitado que foi separado por filtração e seco. A massa do composto mencionado em titulo na forma de um sólido castanho pálido obtida foi 6 0 mg. δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 1,39 (6H, d) , 2,32 (2H, t) , 4,39 (2H, t) , 4, 96- 5, 00 (1H, m) , 7,01 (1H, d) , 7,31 (1H, t) , 7,56-7 ,61 (2H, m) , 7,74 (1H, d), 7, 91 (1H, d) , 8,45 (1H, dd) , 8,55 (1H, d). MS (ES) C23H20N4O4 requer 416; encontrado 417 (MH+) .
Exemplo de Referência 22 3-(4-{5-[2-(Trifluorometil)-4-bifenilil]-1,2,4-oxadiazol-3--il}-lJí-indol-l-il)propanoato de sódio (E22)
3- (4 —{5 —[2 - (Trifluorometil)-4-bifenilil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-lfí-indol-l-il) propanoato de etilo (D64) (15 mg, 0,31 mmol) foi dissolvido em etanol (50 mL) por aquecimento a 40 °C durante 10 minutos e em seguida hidróxido de sódio 2 N (4 mL, 8 mmol) foi adicionado seguido por água (8 mL) . A solução foi deixada em repouso durante 1 hora. Separou-se por evaporação o etanol e 147 ΡΕ2206710 separou-se por filtração o sólido esbranquiçado. A massa do composto mencionado em titulo na forma de um bege obtida na secagem foi 42 mg. δΗ (400 MHz, metanol-d4) 2,69 (2H, t) , 4.53 (2H, t), 7,17-7,18 (1H, m) , 7,32-7,40 (3H, m) , 7,46-4,49 (4H, m) , 7,66 (1H, d), 7,75 (1H, d), 8,02 (1H, d), 8.53 (1H, dd) , 8,63 (1H, d). MS (ES) CzeHigFgNgOg requer 477; encontrado 478 (MH+) .
Exemplo de Referência 23 3-(4-{5-[4-Ciclo-hexil-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanoato de sódio (E23)
3-(4 —{5 —[4-Ciclo-hexil-3-(trifluorometil)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3-il}-lA-indol-l-il) propanoato de etilo (D69) (63 mg, 0,123 mmol) foi dissolvido em etanol (8 mL) e hidróxido de sódio (2 M, 0,5 mL, 1,000 mmol) foi adicionado. A reação foi aquecida a 40 °C durante 18 h. LCMS mostrou conversão completa ao produto. A mistura reacional foi concentrada em vácuo e o sólido branco separou-se por filtração e foi lavado com água. Na filtração, muito do composto foi redissolvido e passou através do filtro, por 148 ΡΕ2206710 isso o sólido e filtrado foram combinados e separados entre diclorometano (10 mL) e HC1 2 M (3 mL) . A fase aquosa foi extraida com mais diclorometano (10 mL). As fases orgânicas foram isoladas por separador de fase, combinadas e o solvente removido em vácuo. O sólido foi em seguida dissolvido em acetonitrilo e água com adição de uma quantidade equimolar de hidróxido de sódio (2 M, 53 pL) antes da solução ser seca por congelação para dar o composto mencionado em titulo (42 mg) na forma de um sólido branco. δΗ (metanol-d4, 400 MHz) : 8,48 (1H, d), 8,43 (1H, dd) , 7,98 (1H, dd) , 7,86 (1H, d), 7,73 (1H, d), 7,46 (1H, d), 7,32 (1H, t apar.), 7,15 (1H, dd), 4,52 (2H, t), 3, 04 (1H, t), 2, 69 (2H, t), 2,0-1,8 (5H, m) , 1, 63 (2H, dd) , 1,53-1,37 (3H, m) . MS (ES) C26H24F3N3O3 requer 483; encontrado 482 (M-H+) .
Exemplo de Referência 24 3—(4—{5—[4—[(1-Metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)fenil]-1,-2,4-oxadiazol-3-il}-l.ff-indol-l-il)propanoato de sódio (E24)
A uma suspensão de 3-(4-{5-[4-[(1-metiletil)oxi]- 149 ΡΕ2206710 -3- (trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-1--il) propanoato de etilo (D72) (81 mg, 0,17 inmol) em etanol
(8 mL) foi adicionado hidróxido de sódio aquoso (2 M, 0,8 mL, 1,6 mmol) e a reação aquecida a 50 °C para dissolver os reagentes antes de aquecimento a 40 °C durante 1H. O solvente foi removido em vácuo e o residuo repartido entre acetato de etilo (20 mL) e água (20 mL) e acidificado com ácido cloridrico aquoso (2M) . A fase aquosa foi extraida com mais acetato de etilo (2 x 20 mL) e os extratos orgânicos combinados secos (separador de fase) e concentrados em vácuo. O sólido foi em seguida dissolvido em acetonitrilo e água com adição de uma quantidade equimolar de hidróxido de sódio (2 M) antes da solução ser seca por congelação para dar o composto mencionado em titulo (57 mg). δΗ (d6~DMSO, 400 MHz) : 8,44 (1H, dd) , 8,35 (1H, d) , 7, 93 (1H, dd) , 7,74 (1H, d) , 7, 65-7,54 (2H , m) , 7,31 (1H, t apar.), 7,00 (1H, dd) 4, 99 (1H, septeto), 4,38 (2H, t) , 2,34 (2H, t) , 1,36 (6H, d) . MS (ES) : C23H20 F3N3O4 requer 459; encontrado 460 (MH+) .
Os seguintes exemplos foram preparados por reações de hidrólise semelhantes às descritas acima. Pelo menos dois equivalentes de hidróxido de sódio foram usados. O solvente foi ou etanol ou metanol. Nalguns casos, foi usado um cossolvente (diclorometano ou dioxano) para ajudar a dissolução do material de partida. As reações foram realizadas a uma temperatura entre a temperatura ambiente e 50 °C. Nalguns casos, algum ou todo o solvente foi removido depois da reação estar completa. As reações foram quer ΡΕ2206710 150 manipuladas por aquosa que por aquoso. Nalguns por trituração, ácido ou de sal partição entre uma camada orgânica e uma filtração do produto sólido do solvente casos os produtos crus foram purificados Os produtos foram ou isolados na forma do de sódio.
Exemplo Estrutura Precursor Nome MS ie Referência 225 CH, CHs Na’ O 373 [4 - (5-{3-cloro-4-- [(1-metiletil) -sxi ] fenil}-l, 2,4--oxadiazol-3-il)-1H-Lndol-l-il]acetato ie sódio J12 (MH+ sara 35C1) ie Referência 226 V/~r o ^ m' 0-“^ 0 374 [4 - (5-{3-ciano-4-- [(1-metiletil) -sxi ] fenil}-l, 2,4--oxadiazol-3-il)-1H-Lndol-l-il]acetato ie sódio J 03 (MH+) ie Referência 227 (L jL / fia' l o 376 3- (4-{5-[2'-fluoro--2-(trifluorometil)-i-bifenilil]-1,2,4-sxadiazol-3-il)-1H-Lndol-1- -il]propanoato de sódio Ϊ96 (MH+) ΡΕ2206710 151 (continuação)
Exemplo Estrutura Precursor Nome MS ie Referência 228 CHa f \ CHí \ Na* O 377 J- [4- (5-{3-cloro-4-- [(1-metiletil) -3xi]fenil}-1,2,4--oxadiazol-3-il)-1H-Lndol-l-il]butanoato ie sódio J40 (MH+ 3ara 35C1) ie Referência 229 ctw°if P ' P~< OO IV \ ozt 0 378 i- [4- (5-{3-cloro-4-- [ (trifluorometil)-3xi]fenil}-1,2,4--oxadiazol-3-il)-1H-Lndol-l-il]butanoato ie sódio J 66 (MH+ 3ara 35C1) 2xemplo 1 yCM= C-”f b “ r% cih O 379 íidrocloreto do ácido 4- [4-(5 —{5 — -cloro-6-[(1--metiletil)oxi]-3--piridinil}-l,2,4--oxadiazol-3-il)-1H-Lndol-l-il]butanóico J41 (MH+ Bra 35C1) ie Referência 231 ? O 380 ácido 4- (4-{5-[4--fenil-5-(trifluorometil) -2-tienil]--1,2,4-oxadiazol-3--il)-lH-indol-1--il]butanóico J98 (MH+) ΡΕ2206710 152 (continuação)
Exemplo Estrutura Precursor Nome MS ie Referência 232 V y··'·»/ 0 381 ácido 4- (4-{5- [2-- (trifluorometil) -4-oifenilil]-1,2,4-5xadiazol-3-il)-1H-Lndol-l-il]butanóico J 92 (MH+) ie Referência 233 r\/ HQ 382 ácido 3- (4-{5-[4- - (metiloxi)-3- - (trifluorometil)-fenil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-1H-Lndol-l-il)-oropanóico J32 (MH+) ie Referência 234 U*. _,N H Na* 383 J-{4- [5-(3-ciano-4-{ [ (1JR) -1-metil-oropil]oxi}fenil)--1,2,4-oxadiazol-3--il]-lH-indol-1--ilJbutanoato de sódio J45 (MH+) ie Referência 235 2"'í »í^.N <5 384 ícido 4-{4- [5-(3--ciano-4-{[(IS)-1--metilpropil]oxi}-fenil)-1,2,4--oxadiazol-3-il]-1H-Lndol-l-il}butanóico J45 (MH+) ie Referência 236 07 385 3- (4-{5-[3-etil-4-- (1-piperidinil)-fenil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-1H-Lndol-l-il)-sropanoato de sódio J45 (MH+) ΡΕ2206710 153 (continuação)
Exemplo Estrutura Precursor Nome MS ie Referência 237 P í ° 386 3-{4-[5-(4-ciclo--hexil-3-etilfenil)-L,2,4-oxadiazol-3-Ll]-lH-indol-l-il}-sropanoato de sódio J44 (MH+) ie Referência 238 O^' 387 ácido 3- (4-{5-[5--cloro-6-(1--pirrolidinil)-3--piridinil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-1H-Lndol-l-il)-sropanóico J38 (MH+ 3ara 35C1) ie Referência 239 x 388 ácido 4- [4- (5 —{3 — -bromo-4-[(1-metil--etil)oxi]-fenil}--1,2,4-oxadiazol-3--il}-lH-indol-1--il)propanóico J 84 (MH+ aara 79Br) ie Referência 240 a 389 ácido 4- (4-{5-[3--cloro-4-(2-metil--propil)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3--il}-lH-indol-1--il)butanóico J38 (MH+ jara 35C1) ie Referência 241 CWS v í^a* 0' 390 3- (4-{5- [4- (2--metilpropil)-3-- (trifluorometil)-fenil]-1,2,4-axadiazol-3-il}-1H--indol-l-il)-sropanoato de sódio J56 (M-H+) ie Referência 242 CHj »^}n nr\ OH 391 ácido 4- (4-{5-[3--ciano-4-(2-metil--propil)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3--il}-lH-indol-1--il)butanóico 32 9 (MH+) ΡΕ2206710 154 (continuação)
Exemplo de Referência 44 Ácido 3-(3-cloro-4-{5-[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tie-nil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico (E44)
Este material foi preparado de uma maneira semelhante a E5 (a partir de D93) exceto que o passo de alquilação levou 4,5 h no micro-ondas e o passo de hidrólise foi realizado à temperatura ambiente durante a noite. MS (ES) : C24H15CIF3N3O3S requer 517; encontrado 516
Exemplo de Referência 45 3-[3-Cloro-5-(5-{3-cloro-4-[(trifluorometil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3-il) -lJí-indol-l-il] propanoato de sódio (E45) 155 ΡΕ2206710
A 3- [3-cloro-5-(5-{3-cloro-4-[(trifluorometil)-oxi]fenil}-l,2,4-oxadiazol-3-il) -lfí-indol-l-il ] propanoato de etilo (D97) (150 mg, 2,9 mmol) em etanol (10 mL) foi adicionado NaOH 2 N (2 mL, 4 mmol) e a mistura foi aquecida a 50 °C durante 30 minutos. Separou-se por evaporação o etanol e separou-se por filtração o sólido creme pálido que tinha precipitado da solução restante. A massa do composto mencionado em titulo obtida na secagem foi 100 mg. δΗ (400 MHz, de-DMSO) 2,35 (2H, t) , 4,35 (2H, t) , 7,73-7,75 (2H, m) , 7,86 (1H, d), 7,92 (1H, d), 8,22 (1H, s) , 8,30-8,32 (1H, m) , 8,49 (1H, d). MS (ES) C2oHi235Cl2F3N304 requer 485; encontrado 486 (MH+) .
Exemplo 46 3-(3-Cloro-5-{5-[3-cloro-4-(propiloxi)fenil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanoato de sódio (E46)
Na+ 156 ΡΕ2206710 A 3- (3-cloro-5-{5-[3-cloro-4-(propiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanoato de etilo (D101) (120 mg, 2,5 mmol) em etanol (10 mL) foi adicionado NaOH 2 N (2 mL) e a mistura foi aquecida a 50 °C durante 30 minutos. Separou-se por evaporação o etanol e separou-se por filtração o sólido branco que tinha precipitado da solução restante. A massa do composto mencionado em titulo obtida na secagem foi de 85 mg. δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 1,03 (3H, t), 1,77-1, 86 (2H, m) , 2,34 (2H, t) , 4,17 (2H, t) , 4,35 (2H,t), 7,40 (lH,d), 7,71-7,74 (2H,m), 7,91 (1H, d), 8,15 (1H, dd) , 8,20-8,21 (2H,m). MS (ES) C22Hi935Cl2N304 requer 459; encontrado 460 (MH+) .
Os seguintes exemplos foram preparados por um método semelhante ao descrito acima, usando 2-60 equivalentes de hidróxido de sódio (Quadro 8) . As reações foram manipuladas por remoção do etanol e filtração do sólido resultante ou extração do produto em acetato de etilo. Se requerido, os produtos foram purificados por trituração com éter.
Exemplo Estrutura Precursor Nome MS de Referência E47 H,C~0 _ f . $ * D102 3 - (3-cloro-5-{5-[3--cloro-4-(metil--oxi)fenil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}--lH-indol-l-il)-propanoato de sódio 430, 432 (M-H+ para 35C12, 35C137C1) 157 ΡΕ2206710 (continuação)
Exemplo Estrutura Precursor Nome MS de Referência Ξ48 N* D103 3- (3-cloro-5-{5-[4--(metiloxi)-3-(tri-fluorometil)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3--il}-lH-indol-1--il)propanoato de sódio 466 (MH+ para 35C1) de Referência E49 D Kfe / o D109 3- (3-cloro-5-{5-[3--cloro-4-(etiloxi) -fenil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}--lH-indol-l-il)-propanoato de sódio 444, 446 (M-H+ para 35ci2, 35C137C1) de Referência E50 NX V-o-t \ssN 2 à-O Ns o D104 3- [3-cloro-5-(5-{3--ciano-4-[(1-metil--etil)oxi]fenil}--1,2,4-oxadiazol-3--il}-lH-indol-1--il)propanoato de sódio 451 (MH+ para 35C1) de Referência E51 QSSf# Na' / V—οΛ © D105 3- (3-cloro-5-{5-[4--nitro-3-(tri-fluorometil)fenil]--1,2,4-oxadiazol-3--il}-lH-indol-1--il)propanoato de sódio 478, 480 em ES”
Exemplo de Referência 53 3-(3-Cloro-5-{5-[6-(metiloxi)-3-bifenilil]-1,2,4-oxadiazol--3-ilJ-lií-indol-l-il) propanoato de sódio (E53)
Na O )=0 158 ΡΕ2206710 3-(3-Cloro-5-{5-[6-(metiloxi)-3-bifenilil]-l,2,4-oxadiazol-3-il}-lfí-indol-l-il) propanoato de etilo (D107) (90 mg, 0,18 mmol) foi aquecido em etanol (10 mL) para dar uma solução límpida. Esta solução foi tratada com hidróxido de sódio 2 N (3 mL, 6 mmol) e agitada a 50 °C durante 30 minutos. Separou-se por evaporação o etanol e separou-se por filtração o sólido branco que precipitou da solução, lavando bem o sólido com uma pequena quantidade de água e éter. Agitou-se o sólido numa pequena quantidade de acetona durante 1 hora, foi filtrado r lavado com uma pequena quantidade de éter e seco para produzir o composto mencionado em titulo na forma de 4 5 mg de sólido branco. δΗ (400 MHz , de-DMSO) 2,34 (2H, t) , 3,91 (3H, s), 4 ,34 (2H, 7,41-7,46 (2H, m) , 7,48-7,50 (2H, m) , 7,57 -7,59 (2H, 7,63-7,66 (2H, m) , 7,80 (1H, d), 8,10 (1H, d) , 8,10- (2H, m) . MS (ES) C26H2o35C1N304 requer 473; encontrado 474 (MH+) .
Exemplo De Referência 54 Ácido 3-(5—{5—[6—(trifluorometil)-3-bifenilil]-1,2,4--oxadiazol-3-il}-lH-indol-l-il)propanóico (E54)
Este material foi preparado por um método semelhante para preparar E53. O solvente foi uma mistura de etanol e 1,4-dioxano e foram usados 0,071 mL de NaOH aq° 159 ΡΕ2206710 2 M para hidrolisar 51 mg de D113. MS (ES) C26H18F3N3O3 requer 477; encontrado 476 (M-H+) .
Ensaio de ligação de GTPyS Células de leucemia basofílica de ratazana (RBL ou LBR) expressando estavelmente o recetor S1P1 foram postas a crescer até 80% de confluência antes de serem colhidas em 10 mL de salina tamponada por fosfato (PBS) e centrifugadas a 1200 rpm durante 5 minutos. Após remoção do sobrenadante, o pélete foi ressuspenso e homogeneizado em 20 volumes de tampão de ensaio (HEPES 20 mM pH 7,4, NaCl
100 mM, MgCl2-6H20 10 mM, GDP 10 μΜ, saponina 10 yg/mL) . A suspensão de membrana foi ainda centrifugada durante 20 minutos a 20 000 rpm, re-homogeneizada e turbilhonada outra vez. A seguir à segunda centrifugação, o pélete foi ressuspenso num volume apropriado (1 mL para cada frasco de células) e ensaiado à concentração de proteína.
Estoque concentrado de S1P foi sujeito a ultrassons antes de diluições em série serem preparadas a partir de uma concentração de partida de 10”5 M. Membranas diluídas (10 yg/cavidade) foram incubadas com várias concentrações de S1P e 35S-GTPyS 0,3 nM (NEN; atividade específica 1250 Ci/ mmol) em 96 placas de cavidade profunda. A ligação foi realizada a 30 °C durante 45 minutos e terminada pela colheita das membranas sobre placas de filtro GF/B usando um colhedor Packard Universal. Após secagem das placas durante 45 minutos, 50 yL de 160 ΡΕ2206710
Microscint 0 foram adicionados a cada cavidade e a ligação medida num Topcount NXT (Perkin Elmer). Os dados foram analisados usando Graphpad Prism 4 e expressos como percentagem de estimulação acima da basal. Os Valores CE5o foram definidos como a concentração de agonista requerida para dar 50% da estimulação máxima.
Preparação da membrana (método alternativo)
Para as preparações de membrana todos os passos foram realizadas a 4 °C. Células de hepatoma de ratazana estavelmente expressando o recetor S1P1 humano ou células de leucemia basofilica de ratazana (RBL) estavelmente expressando o recetor S1P3 humano foram postas a crescer até 80% de confluência antes de serem colhidas em 10 mL de salina tamponada por fosfato (PBS) e centrifugadas a 1200 rpm durante 5 minutos. Após remoção do sobrenadante, o pélete foi ressuspenso e as células foram homogeneizadas dentro de um misturador Waring de vidro durante 2 tempos de funcionamento de 15 s em 200 mL de tampão (HEPES 50 mM, leupeptina 1 mM, bacitracina 25 yg/ mL, EDTA 1 mM, PMSF 1 mM, pepstatina A 2 μΜ). O recipiente misturador foi mergulhado em gelo durante 5 min após o primeiro tempo de funcionamento e 10-40 min após o tempo de funcionamento final para permitir à espuma dissipar. O material foi em seguida turbilhonado a 500 g durante 20 min e o sobrenadante turbilhonado durante 36 min a 48 000 g. O pélete foi ressuspenso no mesmo tampão que acima mas sem PMSF e pepstatina A. O material foi em seguida forçado 161 ΡΕ2206710 através de uma agulha de 0,6 mm, até fazer o volume requerido (usualmente x4 o volume do pélete celular original), aliquotado e armazenado congelado a -80 °C.
Ensaio de SlPl—GTPyS (método alternativo)
Membranas de hepatoma de ratazana de SlPl humano (1,5 μg/cavidade) foram aderidas a pérolas de ensaio de proximidade de cintilação (SPA) revestidas de aglutinina de germe de trigo (WGA) (0,125 mg/cavidade) em tampão de ensaio (HEPES 20 mM, MgCl2 10 mM, NaCl 100 mM e pH ajustado a 7,4 usando KOH 5 M, GDP 10 μΜ FAC (ou CFE -concentração final no ensaio) e saponina 90 μρ/ιτΛ FAC foi também adicionado).
Após 30 minutos de pré-acoplamento em gelo a suspensão de pérola e membrana foi dispensada numa placa LV de 384 cavidades de polipropileno Greiner (5 μΐ/cavidade), contendo 0,1 μ]1 do composto. 5 μΐ/cavidade de [35S] -GTPyS (conc. de radioligando final 0,5 nM) feito em tampão de ensaio foi em seguida adicionado a placas de agonista. O coquetel de ensaio final (10,1 μ]1) foi em seguida centrifugado a 1000 rpm durante 5 minutos e em seguida lido imediatamente num leitor Viewlux.
Todos os compostos de teste foram dissolvidos em DMSO numa concentração de 10 mM e foram preparados em DMSO 100% usando um passo de diluição 1 em 4 para proporcionar curvas de resposta a dose de 11 pontos. As diluições foram 162 ΡΕ2206710 transferidas para as placas de ensaio assegurando que a concentração de DMSO estava constante ao longo da placa para todos os ensaios.
Todos os dados foram normalizados para a média de 16 cavidades de alto e 16 cavidades de baixo controlo em cada placa. Um ajustamento de curva de quatro parâmetros foi em seguida aplicado.
Os compostos da invenção exemplificados que foram testados neste ensaio tinham pCE5o > 5. S1P3
Membranas S1P3 de células de leucemia basofilica de ratazana (RBL-2H3) (1,5 foram aderidas a pérolas SPA revestidas de WGA (0,125 mg/cavidade) em tampão de ensaio (HEPES 20 mM, MgCl2 3 mM, NaCl 100 mM e pH ajustado a 7,4 usando KOH 5 M) , GDP 10 μΜ FAC e saponina 90 μρ/ηϋΐ FAC foram também adicionados) .
Após 30 minutos de pré-acoplamento em gelo a suspensão de pérola e membrana foi dispensada numa placa LV de 384 cavidades de polipropileno Greiner (5 μΐ/cavidade), contendo 0,1 pL do composto. 5 μΐ/cavidade de [35S]-GTPyS (conc. de radioligando final 0,5 nM) feito em tampão de ensaio foi em seguida adicionado a placas de agonista. O coquetel de ensaio final (10,1 μ]1) foi em seguida centrifugado a 1000 rpm durante 5 minutos e em seguida lido imediatamente num leitor Viewlux. 163 ΡΕ2206710
Todos os compostos de teste foram dissolvidos em DMSO numa concentração de 10 mM e foram preparados em DMSO 100% usando um passo de diluição 1 em 4 para proporcionar curvas de resposta a dose de 11 pontos. As diluições foram transferidas para as placas de ensaio assegurando que a concentração de DMSO estava constante ao longo da placa para todos os ensaios.
Todos os dados foram normalizados para a média de 16 de alto e 16 de baixo controlo cavidades em cada placa. Um ajustamento de curva de quatro parâmetros foi em seguida aplicado.
Os compostos exemplificados testados neste ensaio tinham pCE5o < 6, muitos tinham uma pCE50 < 5.
Ensaio de levedura Células de levedura (Saccharomyces cerevisiae) expressando o recetor S1P1 humano foram geradas por integração de uma cassete de expressão no sitio cromossómico ura3 de estirpe de levedura MMY23. Esta cassete consistiu de sequência de DNA codificando o recetor S1P1 humano flanqueado pelo promotor GPD de levedura à extremidade 5' de S1P1 e uma sequência terminadora transcricional de levedura à extremidade 3' de S1P1. MMY23 expressa uma subunidade alfa de proteína G quimérica de levedura/mamífero em que os 5 aminoácidos C-terminal de Gpal são trocados com os 5 aminoácidos C-terminal de Gail/2 humano (conforme descrito em Brown et al., Yeast, 164 ΡΕ2206710 16 (2000) 11-22) . As células foram postas a crescer a 30 °C em meio de levedura Sintético Completo (SC) liquido (Guthrie e Fink, Methods in Enzymology, 194 (1991)) faltando uracilo, triptofana, adenina e leucina à última fase logarítmica (aproximadamente 6 OD60o/mL) .
Os agonistas foram preparados como soluções 10 mM em DMSO. Os valores CE5o (a concentração requerida para produzir 50% de resposta máxima) foram estimados usando diluições 4 vezes (BiomekFX, Beckman) em DMSO. As soluções de agonista em DMSO (volume de ensaio final 1%) foram transferidas para placas de microtitulação pretas de Greiner (384 cavidades) . As células foram suspensas a uma densidade de 0,2 OD6oo/mL em meio SC com falta de histidina, uracilo, triptofana, adenina e leucina e suplementado com 3-aminotriazole 0,1 mM, fosfato de sódio 0,1 M pH 7,0, e fluoresceína di^-D-glucopiranósido (FDGIu) 10 μΜ. Esta mistura (50yL por cavidade) foi adicionada a agonista nas placas de ensaio (Multidrop 384, Labsystems). Após incubação a 30 °C durante 24 horas, a fluorescência resultante da degradação de FDGIu a fluoresceína devida a exoglucanase, uma enzima de levedura endógena produzida durante o crescimento celular estimulado por agonista, foi determinada usando um leitor de placa de microtitulação de fluorescência (Tecan Spectrofluor ou LJL Analyst, comprimento de onda de excitação: 485 nm; comprimento de onda de emissão: 535 nm). A fluorescência foi representada em gráfico contra a concentração do composto e a curva interativamente ajustada usando um ajustamento de quatro 165 ΡΕ2206710 parâmetros para originar o valor do efeito da concentração. A Eficácia (Emáx) foi calculada a partir da equação
Emax = Ma.X[composto X] ΜΐΠ[composto X] / MâX[slp] Mlll[slp] * 100% onde Máx [composto x] e Min[COmPosto x] são o máximo e minimo ajustados respetivamente da curva do efeito da concentração para o composto X, e Máx[Sip] e Min[slP] são o máximo e mínimo ajustados respetivamente da curva do efeito da concentração para esfingosina-l-fosfato (disponível em Sigma). Os valores da Razão Molar Equieficaz (EMR) foram calculados a partir da equação EMR = CE50 [composto X] / CE50 [S1P] onde CE50 [composto x] θ a CE50 do composto X e CE50 [sip] s a CE50 de SIP.
Onde testados, os compostos da invenção exemplificados tinham um pCE50 > 4,5 no ensaio de levedura.
Lisboa, 3 de Setembro de 2012

Claims (6)

  1. ΡΕ2206710 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de fórmula:
    ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}--1,2,4-oxadiazol-3-il)-lH-indol-l-il ]butanóico e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
  2. 2. Um composto de acordo com a reivindicação 1 para utilização no tratamento de condições ou desordens mediadas por recetores S1P1, em que a condição ou desordem é esclerose múltipla, doenças autoimunes, desordens inflamatórias crónicas, asma, neuropatias inflamatórias, artrite, transplante, doença de Crohn, colite ulcerativa, lúpus eritematoso, psoríase, lesão de isquemia-reperfusão, tumores sólidos e metástase de tumor, doenças associadas com angiogénese, doenças vasculares, condições de dor, 2 ΡΕ2206710 doenças virais agudas, condições inflamatórias do intestino, diabetes dependente de insulina e não dependente de insulina.
  3. 3. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 2, em que a condição é esclerose múltipla.
  4. 4. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para utilização no tratamento de condições ou desordens mediadas por recetores S1P1, em que a condição ou desordem é esclerose múltipla, doenças autoimunes, desordens inflamatórias crónicas, asma, neuropatias inflamatórias, artrite, transplante, doença de Crohn, colite ulcerativa, lúpus erite-matoso, psoriase, lesão de isquemia-reperfusão, tumores sólidos e metástase de tumor, doenças associadas com angiogénese, doenças vasculares, condições de dor, doenças virais agudas, condições inflamatórias do intestino, diabetes dependente de insulina e não dependente de insulina.
  5. 5. Utilização de acordo com a reivindicação 4, em que a condição é esclerose múltipla.
  6. 6. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com a reivindicação 1. Lisboa, 3 de Setembro de 2012 1 ΡΕ2206710 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição * WOSS0G9822 * WOS8S90S17à * EP 0430785  « SE 3033238 * 3P 2007282008 A * WO 84103278 A * WO 05032485  * WO 200558848 A * JP11O80S2SA * WO0318S771 A * WO 0585884« A - WO0SG471S5A » WO 08180833  * WO 08115188A * WD 06131338 A * WQ QTC24922A « V¥C 07118888 A Literatura que não é de patentes citada na Descrição OfcaroeÉ© et at, J BM Omn, 1908, vol 273 (42), 27104 S,3RShss ; MM.. J CsS SíosOem 2804, vX 02, 913 Pyn» j Pyne, mochem X 288¾ vc*. 343,383 Chun atai, 2882, «A. 34, 2SS Sa«efc«; His. J GeÍki^ Bkxhmmsity, 2-334, voS, 82, 313 Kiuk; Hla* Srâcft®!» si Btoptiysk* Acte, 2002. voS, 1582,72 Saficfcsz ; Mia. J Ce&star 8ksdmmr 2804. woi. 82, 813 Sexen; 2065, v©í. S, 536 Bfinfcroan »t st. JBC< SOS, «sá. 277, 21453 Fu|ína ai aLJPhmmwíExp Tiser, 2003, «sá. 39S, 70 Wfebfc at al. J NouMÍMGmBi, 2634, vtá. 153,108 Ratsscft et aL J Msgíí Re&m imsging, 2304, veL 20, IS Chsfea et sSL J immmokw, «88, «A. 18-0, 5037 Fonsst «t a!, J Phmmcet Exp 70sr, 2064, wá. 399, 758 SatsiíS: et. ai. JBQ. 2084, wá. 273, 13833 Srafer; S&sfei, FASES J. 2004, «sá, 18,551 « MatteeMa» at at ftfe&r», 2004, v®L 427,355 * Jf® St ai. Cfiern S&f, 2005, VDi. 12,703 * Siood Stageitosetsi. FASES Jf 2805, soí, 18,1846 * 8Μ «vt l®af. iMnwotogp, 2095, «ci. S, 1228 « SriítSHBM st ai, JSC, 2002, «sá, 277,21453 * «ami^a st at Ssssscs. 2002, voi, 296,348 * Fujís® ai aL J Pfiamecskiw má Bspartmmlaí Tt!e*apBa8GSf .2033, voi, 305, 4S55S * Sibrian» et ai, Am&issn J TrmsptePtstiQP, 2034, vgí. 4, 1013 * Wsbb etsLJ fteKM&nmsmíQSB?, 2004, «al 153,. 106 * atenis et et EuarJ Ifnmwxsi, 2005, vat. 35, 3570 * Síhffea, Phemamíegymâ 7&arapeaífcs, 2065,. «®i, 106, 388 * Kaits® et aí, Trm^mÊa8ms 2003, vcl 76, 1073 * Xsppes st aí. mw Eng J mákms, 2003, vcl. 335, 1124 * Hatsst at, Síssjrgas® & Meékmsí Ctmmsir/Ls&sfs. 2004, ml 14, 3SOI * Keyfakh et at. Amolem J JfSRSpfentafâm, 2005, vc-i. S, 523 * J-. FOsm ScL 1977. vot, §8,1-19 * Srewa st at, Yssst 200¾ *®í. 18,11-22 * Qetlvte; Rnfí, Metôxtâi m Emymokig:?, 1981, vot. 194
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