ES2361962T3 - Derivados de indazol sustituidos con oxadiazol para su uso como agonistas de esfingosina 1-fosfato-(s1p). - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de la fórmula (I) o sales del mismo: **Fórmula** en la que uno de R5 y R6 es hidrógeno o R2 y el otro es (a) **Fórmula** uno de R3 y R4 es hidrógeno y el otro es (b) **Fórmula** A es un fenilo o un anillo heteroarilo de 5 o 6 miembros; R1 es hidrógeno o representa hasta tres sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, alquilo C(1-4), alcoxi C(1-4), cicloalquilo C(5-7), cicloalcoxi C(5-7), trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluorometilo, ciano, fenilo, anillos heteroarilo de 5 o 6 miembros, piperidinilo y pirrolidinilo; R2 es hidrógeno o representa hasta tres sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, alquilo C(1-4), alcoxi C(1-4), trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluorometilo y ciano; R7 es hidrógeno o halógeno; Z es alquilo C(1-4) que puede estar opcionalmente interrumpido una vez por N o O y que puede estar opcionalmente sustituido sobre carbono con hasta cuatro sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, metilo e hidroxilo, con la condición de que ningún átomo de carbono esté sustituido con dos grupos hidroxilo.
Description
La presente invención se refiere a nuevos derivados de oxadiazol que tienen actividad farmacológica, a procedimientos para su preparación, a composiciones farmacéuticas que los contienen y a su uso en el tratamiento de diferentes trastornos.
La esfingosina-1-fosfato (S1P) es un mediador lipídico bioactivo formado por la fosforilación de la esfingosina mediante las esfingosina-cinasas y se encuentra en altos niveles en la sangre. Es producida y segregada por una serie de tipos de células, incluyendo las de origen hematopoyético tales como las plaquetas y las células madres (Okamoto et al 1998 J Biol Chem 273(42):27104; Sanchez and Hla 2004, J Cell Biochem 92:913). Tiene un amplio campo de acciones biológicas, incluyendo la regulación de la proliferación celular, diferenciación, motilidad, vascularización, y activación de las células inflamatorias y las plaquetas (Pyne and Pyne 2000, Biochem J. 349: 385). Se han descrito cinco subtipos de receptores sensibles a S1P, S1P1 (Edg-1), S1P2 (Edg-5), S1P3 (Edg-3), S1P4 (Edg-6), y S1P5 (Edg-8), que forman parte de la familia de los receptores de los genes de diferenciación endotelial acoplados a la proteína G (Chun et al 2002 Pharmacological Reviews 54:265, Sanchez and Hla 2004 J Cellular Biochemistry, 92:913). Estos 5 receptores presentan una expresión diferencial de mRNA, estando el S1P1-3 ampliamente expresado, el S1P4 expresado en los tejidos linfoide y hematopoyético y el S1P5 principalmente en el cerebro y en menor grado en el bazo. Ellos señalan por medio de diferentes subconjuntos de proteínas G la promoción de una variedad de respuestas biológicas (Kluk and Hla 2002 Biochem et Biophysica Acta 1582:72, Sanchez and Hla 2004, J Cellular Biochem 92:913).
Los papeles propuestos para el receptor S1P1 incluyen el tráfico de linfocitos, la inducción/inhibición de las citocinas y los efectos sobre las células endoteliales (Rosen and Goetzl 2005 Nat Rev Immunol. 5:560). Los agonistas del receptor S1P1 han sido utilizados en una serie de modelos animales autoinmunes y de transplantes, incluyendo los modelos de encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) de MS, para reducir la gravedad de la enfermedad inducida (Brinkman et al 2003 JBC 277:21453; Fujino et al 2003 J Pharmacol Exp Ther 305:70; Webb et al 2004 J Neuroimmunol 153:108; Rausch et al 2004 J Magn Reson Imaging 20:16). Se describe que esta actividad está mediada por el efecto de los agonistas del S1P1 sobre la circulación de los linfocitos a través del sistema linfático. El tratamiento con los agonistas del S1P1 da como resultado el secuestro de los linfocitos dentro de los órganos linfoides secundarios tales como los nódulos linfáticos, induciendo una linfopenia periférica reversible en modelos animales (Chiba et al 1998, J Immunology 160:5037, Forrest et al 2004 J Pharmacol Exp Ther 309:758; Sanna et al 2004 JBC 279:13839). Los datos publicados sobre los agonistas dan a entender que el tratamiento con el compuesto induce la pérdida del receptor S1P1 desde la superficie de la célula a través de la internalización (Graler and Goetzl 2004 FASEB J 18:551; Matloubian et al 2004 Nature 427:355; Jo et al 2005 Chem Biol 12:703) y es esta reducción del receptor S1P1 sobre las células inmunitarias la que contribuye a la reducción del movimiento de las células T desde los nódulos linfáticos de vuelta al torrente sanguíneo.
La deleción del gen S1P1 produce letalidad embrionaria. Los experimentos para examinar el papel del receptor S1P1 en la migración y tráfico de los linfocitos han incluido la transferencia adoptiva de células T deficientes en S1P1 marcadas en ratones naturales irradiados. Estas células mostraron una reducción de la salida desde los órganos linfoides secundarios (Matloubian et al 2004 Nature 427:355).
También se ha atribuido al S1P1 un papel en la modulación de la unión de las células endoteliales (Allende et al 2003 102:3665, Blood Singelton et al 2005 FASEB J 19:1646). Con respecto a esta acción endotelial, se ha indicado que los agonistas de S1P1 tienen un efecto sobre los nódulos linfáticos aislados que puede ser el contribuir a un papel en la modulación de los trastornos inmunitarios. Los agonistas de S1P1 produjeron un cierre de las ‘puertas’ estromales endoteliales de los senos linfáticos que drenan los nódulos linfáticos y evitan la salida de los linfocitos (Wei et al 2005, Nat. Immunology 6:1228).
Se ha demostrado que el compuesto inmunodepresor FTY720 (JP11080026-A) reduce los linfocitos circulantes en los animales y en el hombre, tiene actividad moduladora de la enfermedad en modelos animales de trastornos inmunitarios y reduce las tasas de remisión en la esclerosis múltiple recurrente remitente (Brinkman et al 2002 JBC 277:21453, Mandala et al 2002 Science 296:346, Fujino et al 2003 J Pharmacology and Experimental Therapeutics 305:45658, Brinkman et al 2004 American J Transplantation 4:1019, Webb et al 2004 J Neuroimmunology 153:108, Morris et al 2005 Eur J Immunol 35:3570, Chiba 2005 Pharmacology and Therapeutics 108:308, Kahan et al 2003, Transplantation 76:1079, Kappos et al 2006 New Eng J Medicine 335:1124). Este compuesto es un profármaco que es fosforilado in vivo por las esfingosina-cinasas para dar una molécula que tiene actividad agonista en los receptores S1P1, S1P3, S1P4 y S1P5. Los estudios clínicos han demostrado que el tratamiento con FTY720 produce bradicardia en las primeras 24 horas de tratamiento (Kappos et al 2006 New Eng J Medicine 335:1124). Se cree que la bradicardia es debida al agonismo en el receptor S1P3, basándose en una serie de experimentos basados en células y animales. Estos incluyen el uso de animales carentes de S1P3, que a diferencia de los ratones naturales, no presentan bradicardia después de la administración de FTY720 y el uso de compuestos selectivos de S1P1. (Hale et al 2004 Biorganic & Medicinal Chemistry Letters 14:3501, Sanna et al 2004 JBC 279:13839, Koyrakh et al 2005 American J Transplantation 5:529)
Las siguientes solicitudes de patentes describen derivados de oxadiazol como agonistas de S1P1: WO03/105771, WO05/058848, WO06/047195, WO06/100633, WO06/115188 y WO06/131336.
La siguiente solicitud de patente describe derivados de indol-oxadiazol como agentes antipicornavirales: WO96/009822. Las siguientes solicitudes de patentes describen derivados de ácido indol-carboxílico como antago5 nistas del receptor de leucotrieno, pesticidas y fungicidas agroquímicos respectivamente: WO06/090817, EP 0 439 785 y DE 39 39 238.
La solicitud de patente internacional WO06/001463 describe diferentes compuestos como agonistas del receptor S1P1.
La solicitud de patente internacional PCT/EP2007/064185 describe compuestos de indol-oxadiazol como agonistas 10 del receptor S1P1.
La solicitud de patente internacional WO05/032465 describe compuestos de indol útiles como agonistas del receptor S1P1.
Se ha encontrado ahora una clase de compuestos estructuralmente nuevos que proporciona agonistas del receptor S1P1.
15 La presente invención proporciona por tanto compuestos de la fórmula (I) o una de sus sales:
en la que
uno de R5 y R6 es hidrógeno o R2 y el otro es (a)
O N
N R1
(a)
20 uno de R3 y R4 es (b)
OH (b) A es un fenilo o un anillo heteroarilo de 5 o 6 miembros; R1 es hidrógeno o representa hasta tres sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, alquilo
C(1-4), alcoxi C(1-4), cicloalquilo C(5-7), cicloalcoxi C(5-7), trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluorometilo, ciano, fenilo, ani
25 llos heteroarilo de 5 o 6 miembros, piperidinilo y pirrolidinilo; R2 es hidrógeno o representa hasta tres sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, alquilo C(1-4), alcoxi C(1-4), trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluorometilo y ciano;
R7 es hidrógeno o halógeno;
Z es alquilo C(1-4) que puede estar opcionalmente interrumpido una vez por N o O y que puede estar opcionalmente
30 sustituido sobre carbono con hasta cuatro sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, metilo e hidroxilo, con la condición de que ningún átomo de carbono esté sustituido con dos grupos hidroxilo. La presente invención proporciona por tanto compuestos de la fórmula (IA) o sales de los mismos:
R6
OH (IA)
en la que A, R1, R2, R5, R6, R7 y Z son como se definen para la fórmula (I).
La presente invención proporciona por tanto compuestos de la fórmula (IB) o sales de los mismos:
en la que A, R1, R2, R5, R6, R7 y Z son como se definen para la fórmula (I).
La presente invención proporciona por tanto compuestos de la fórmula (II) o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos:
en la que 10 uno de R5 y R6 es hidrógeno o R2 y el otro es (a)
O
N N
R1
(a)
uno de R3 y R4 es hidrógeno y el otro es (b)
OH (b) A es un fenilo o un anillo heteroarilo de 5 o 6 miembros; 15 R1 es hidrógeno o representa hasta tres sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, alquilo
C(1-4), alcoxi C(1-4), trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluorometilo, ciano, y fenilo opcionalmente sustituido o anillos heteroarilo de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituidos; R2 es hidrógeno o representa hasta tres sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, alquilo
C(1-4), alcoxi C(1-4), trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluorometilo y ciano; 20 R7 es hidrógeno o halógeno; Z es alquilo C(1-4) que está opcionalmente interrumpido por N o O y está opcionalmente sustituido con halógeno o
metilo. Cuando R1 es fenilo o un anillo heteroarilo de 5 o 6 miembros puede estar sustituido con hasta tres sustituyentes seleccionados entre halógeno, alquilo C(1-4), alcoxi C(1-4), trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluorometilo y ciano.
Se debe observar que para los compuestos de la fórmula (II), cuando R4 es (b) R3 no estará presente y los enlaces
en los anillos aromáticos estarán ordenados como se representa en la fórmula (IB) descrita anteriormente. El término “alquilo” como un grupo o parte de un grupo, por ejemplo alcoxi o hidroxialquilo, se refiere a un grupo alquilo lineal o ramificado en todas las formas isoméricas. El término “alquilo C(1-4)” se refiere a un grupo alquilo, como se ha definido antes, que contiene como mínimo 1, y como máximo 4 átomos de carbono. Ejemplos de tales grupos alquilo incluyen metilo, etilo, propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, terc-butilo, 1-metilpropilo o 2metilpropilo. Ejemplos de tales grupos alcoxi incluyen metoxi, etoxi, propoxi, iso-propoxi, butoxi, iso-butoxi, secbutoxi, terc-butoxi, o 1-metilpropoxi.
Los grupos cicloalquilo C(5-7) adecuados incluyen ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo.
Los grupos cicloalquiloxi C(5-7) adecuados incluyen ciclopentoxi, ciclohexiloxi y cicloheptoxi.
Como se usa aquí, el término “halógeno” se refiere a flúor (F), cloro (Cl), bromo (Br), o yodo (I) y el término “halo” se
refiere al halógeno: fluoro (-F), cloro (-Cl), bromo (-Br) y yodo (-I).
El término “heteroarilo” representa un anillo insaturado que comprende uno o más heteroátomos. Cuando el término
heteroarilo representa un grupo de 5 miembros contiene un heteroátomo seleccionado entre O, N o S y puede contener opcionalmente además 1 a 3 átomos de nitrógeno. Cuando el heteroarilo representa un grupo de 6 miembros,
contiene de 1 a 3 átomos de nitrógeno. Ejemplos de tales anillos heteroarilo de 5 o 6 miembros incluyen pirrolilo,
triazolilo, tiadiazolilo, tetrazolilo, imidazolilo, pirazolilo, isotiazolilo, tiazolilo, isoxazolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, furazanilo, furanilo, tienilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo y triazinilo.
Una realización de la invención es un compuesto de la fórmula (I) en la que
A es tiofeno, piridilo o fenilo; y
R1 representa dos sustituyentes seleccionados independientemente entre, cloro, bromo, isopropoxi, propoxi, metoxi,
1-metilpropoxi, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, ciclohexilo, piperidina, pirrolidinilo, etilo, 2-metilpropilo, fenilo y
ciclopentoxi; y
R2 es hidrógeno; y
R7 es hidrógeno; y
Z es etileno o propileno, cada uno opcionalmente sustituido con gem-dimetilo.
Una realización de la invención es un compuesto de la fórmula (I) en la que
R6 es (a) y R5 es hidrógeno; y
A es tiofeno, piridilo o fenilo; y
R1 representa dos sustituyentes seleccionados independientemente entre cloro, bromo, isopropoxi, propoxi, metoxi,
1-metilpropoxi, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, ciclohexilo, piperidina, pirrolidinilo, etilo, 2-metilpropilo, fenilo y
ciclopentoxi; y
R2 es hidrógeno; y R7 es hidrógeno; y Z es etileno o propileno, cada uno opcionalmente sustituido con gem-dimetilo. Una realización de la invención es un compuesto de la fórmula (IA) en la que R6 es (a) y R5 es hidrógeno; y A es fenilo; y R1 representa dos sustituyentes seleccionados independientemente entre cloro, isopropoxi, ciano, trifluorometilo,
trifluorometoxi, piperidina, etilo y fenilo; y R2 es hidrógeno; y R7 es hidrógeno; y Z es etileno o propileno. Una realización de la invención es un compuesto de la fórmula (IA) en la que R6 es (a) y R5 es hidrógeno; y A es fenilo; y R1 es cloro e isopropoxi; y R2 es hidrógeno; y R7 es hidrógeno; y Z es etileno o propileno. Una realización de la invención es un compuesto de la fórmula (IB) en la que R6 es (a) y R5 es hidrógeno; y A es fenilo; y R1 representa dos sustituyentes seleccionados independientemente entre cloro, isopropoxi y ciano; y R2 es hidrógeno; y R7 es hidrógeno; y Z es etileno o propileno. Una realización de la invención es un compuesto de la fórmula (I) en la que R5 es (a) y R6 es hidrógeno; y A es tiofeno, piridilo o fenilo; y R1 representa dos sustituyentes seleccionados independientemente entre, cloro, bromo, isopropoxi, propoxi, metoxi,
1-metilpropoxi, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, ciclohexilo, piperidina, pirrolidinilo, etilo, 2-metilpropilo, fenilo y ciclopentoxi; y R2 es hidrógeno; y R7 es hidrógeno; y Z es etileno o propileno, cada uno opcionalmente sustituido con gem-dimetilo. Una realización de la invención es un compuesto de la fórmula (IA) en la que R5 es (a) y R6 es hidrógeno; y A es fenilo; y R1 es cloro e isopropoxi; y R2 es hidrógeno; y R7 es hidrógeno; y Z es etileno. Una realización de la invención es un compuesto de la fórmula (IB) en la que R5 es (a) y R6 es hidrógeno; y/o A es fenilo; y R1 representa dos sustituyentes seleccionados independientemente entre cloro, isopropoxi, fenilo y trifluorometilo; y R2 es hidrógeno; y R7 es hidrógeno; y Z es propileno.
En una realización de la invención están los compuestos de la fórmula (II) en la que R3 es (b); y/o R5 es (a) y R6 es hidrógeno; y/o A es tiofeno opcionalmente sustituido o fenilo; y/o R1 es hidrógeno, halógeno, alcoxi C1-4, o trifluorometilo; y/o R2 es hidrógeno; y/o Z es etileno. En otra realización de la invención están los compuestos de la fórmula (II) en la que R3 es (b); y/o R5 es (a) y R6 es hidrógeno; y/o A es tiofeno sustituido con fenilo; y/o R1 es hidrógeno, halógeno, alcoxi C1-4, o trifluorometilo; y/o R2 es hidrógeno; y/o Z es etileno. La invención se extiende a todos los isómeros ópticos tales como las formas estereoisómeras de los compuestos de
la fórmula (I) incluyendo enantiómeros, diastereoisómeros y sus mezclas, tales como los racematos. Las diferentes formas estereoisómeras se pueden separar o resolver unas de otras por métodos convencionales, o cualquier isómero dado se puede obtener por síntesis convencionales estereoselectivas o asimétricas.
Son compuestos adecuados de la invención: ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico ácido 3-(5-{5-[3-cloro-4-(etiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 3-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico ácido 4-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico ácido 3-(5-{5-[4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 4-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico ácido 3-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico ácido 3-(5-{5-[3-cloro-4-(propiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(trifluorometil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico ácido 3-(5-{5-[4-ciclohexil-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 3-(5-{5-[4-(metiloxi)-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido [5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]acético ácido 3-(5-{5-[3-cloro-4-(metiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 3-(5-{5-[3-etil-4-(1-piperidinil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 3-{5-[5-(4-ciclohexil-3-etilfenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]-1H-indazol-1-il}propanoico ácido 3-(5-{5-[3-ciano-4-(2-metilpropil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 3-[5-(5-{3-bromo-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico ácido 3-(5-{5-[3-cloro-4-(2-metilpropil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 4-(5-{5-[4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)butanoico ácido 3-{5-[5-(2-ciano-4-bifenilil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]-1H-indazol-1-il}propanoico ácido 3-(5-{5-[3-cloro-4-(1-pirrolidinil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico hidrocloruro de ácido 4-[5-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico hidrocloruro de ácido 4-[5-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]butanoico ácido 4-(5-{5-[2-(trifluorometil)-4-bifenilil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)butanoico ácido 4-(5-{5-[2-(trifluorometil)-4-bifenilil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-2H-indazol-2-il)butanoico ácido 3-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico ácido 3-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]propanoico ácido 3-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]propanoico ácido 4-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico ácido 4-(4-{5-[3-etil-4-(1-piperidinil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)butanoico ácido 4-(4-{5-[2-(trifluorometil)-4-bifenilil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)butanoico ácido 4-[4-(5-{3-cloro-4-[(trifluorometil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico ácido 3-(4-{5-[4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico ácido 4-(4-{5-[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)butanoico ácido 4-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]butanoico sal de sodio del ácido 3-{5-[5-(3-ciano-4-{[(1S)-1-metilpropil]oxi}fenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]-1H-indazol-1-il}propanoico sal de sodio del ácido 3-{5-[5-(3-ciano-4-{[(1R)-1-metilpropil]oxi}fenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]-1H-indazol-1-il}propanoico ácido 3-(5-{5-[3-ciano-4-(ciclopentiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 4-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico ácido 4-(5-{5-[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)butanoico ácido 4-[5-(5-{3-|ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]butanoico ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico: ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]-2,2-dimetilpropanoico ácido 3-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico ácido 3-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico ácido 3-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico ácido 4-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilbutanoico ácido 3-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico ácido 3-[5-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico ácido 4-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilbutanoico ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilbutanoico
o sales de los mismos.
Los derivados farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula (I) incluyen cualquier sal, éster o sal de tal éster, farmacéuticamente aceptable, de un compuesto de la fórmula (I) que, tras la administración al paciente, es capaz de proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto de la fórmula (I) o un metabolito o resto activo del mismo.
Ciertos ésteres de los compuestos de la fórmula (I) se describen aquí como intermedios en la síntesis de algunos de los ejemplos descritos. Dichos ésteres pueden presentar también actividad como agonistas de S1P1 y como tales forman parte de la invención.
Los compuestos de la fórmula (I) pueden formar sales. Se podrá apreciar que para su uso en medicina, las sales de los compuestos de la fórmula (I) deberían ser farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables, adecuadas, serán evidentes para los expertos en la técnica e incluyen las descritas en J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19, tales como las sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos, por ejemplo, ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico o fosfórico; y ácidos orgánicos, por ejemplo ácido succínico, maleico, acético, fumárico, cítrico, tartárico, benzoico, p-toluenosulfónico, metanosulfónico o naftalenosulfónico. Ciertos compuestos de la fórmula (I) pueden formar sales de adición de ácidos con uno o más equivalentes del ácido. La presente invención incluye dentro de su alcance todas las formas estequiométricas y no estequiométricas posibles. Las sales se pueden preparar también a partir de bases farmacéuticamente aceptables incluyendo bases inorgánicas y bases orgánicas. Las sales derivadas de bases inorgánicas incluyen sales de aluminio, amonio, calcio, cobre, férricas, ferrosas, de litio, de magnesio, sales mangánicas, manganosas, de potasio, de sodio, de cinc y similares. Las sales derivadas de bases orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias, y terciarias; aminas sustituidas incluyendo las aminas sustituidas naturales; y las aminas cíclicas. Las bases orgánicas farmacéuticamente aceptables particulares incluyen arginina, betaína, cafeína, colina, N,N'-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etil-morfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, tris(hidroximetil)aminometano (TRIS, trometamol) y similares. Las sales se pueden formar también a partir de resinas básicas de intercambio iónico, por ejemplo resinas de poliamina. Cuando el compuesto de la presente invención es básico, se pueden preparar sales a partir de ácidos farmacéuticamente aceptables, incluyendo ácidos inorgánicos y orgánicos. Tales ácidos incluyen ácido acético, bencenosulfónico, benzoico, canforsulfónico, cítrico, etanosulfónico, etanodisulfónico, fumárico, glucónico, glutámico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanosulfónico, múcico, pamoico, pantoténico, fosfórico, propiónico, succínico, sulfúrico, tartárico, p-toluenosulfónico y similares.
Los compuestos de la fórmula (I) se pueden preparar en forma cristalina o no cristalina y, si se obtienen en forma cristalina, pueden estar opcionalmente hidratados o solvatados. Esta invención incluye dentro de su alcance hidratos
o solvatos estequiométricos así como compuestos que contienen cantidades variables de agua y/o de disolvente.
En un aspecto adicional, esta invención proporciona procedimientos para la preparación de un compuesto de la fórmula (I). Se podrá apreciar por los expertos en la técnica que los esquemas 1 a 8 son aplicables también para la producción de compuestos de la fórmula (I) en la que R6 es (a) (en lugar de que R5 sea (a) como se representa) usando los intermedios apropiados. Los compuestos de la fórmula (IV) son conocidos en la bibliografía y están comercialmente disponibles como isómeros en los que o bien R6 es (a) o bien R5 es (a).
Una ruta que se puede usar para preparar los compuestos de la fórmula (IA) se ilustra en el esquema 1.
NH2OH.HCl NC imagen1
CHO N2H4 NC
NaHCO3 N MeOH
NF
R2 imagen1
R2H
(IV)(III)
HO
N
O
H2N
(VI) R1
Cs2CO3, imagen2
Oimagen1
N N O
DMF N
Br
(VIII) O
MeOH N
(IA)
Esquema 1
Los compuestos de la fórmula (III) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (IV) mediante tratamiento con hidrato de hidrazina, alternativamente los compuestos de la fórmula (IV) pueden estar comercialmente disponibles o 5 se pueden preparar como se describe en la bibliografía.
Los compuestos de la fórmula (IV) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (V) mediante tratamiento con hidrocloruro de hidroxilamina y una base apropiada, tal como bicarbonato de sodio, en un disolvente tal como metanol o etanol a una temperatura elevada tal como 50 °C.
Los compuestos de la fórmula (V) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (VII) mediante tratamiento con
10 un ácido carboxílico de la fórmula (VI) en presencia de EDAC y HOBt en un disolvente adecuado tal como DMF. Dichas reacciones se llevan a cabo típicamente a temperatura elevada, tal como 50-80 °C. Típicamente, se agitan el ácido (VI), EDAC y HOBt durante un periodo de tiempo a temperatura ambiente antes de la adición del compuesto de la fórmula (V). Los ácidos de la fórmula (VI) o bien están comercialmente disponibles o bien se pueden preparar por una serie de rutas como en las descripciones que siguen.
15 Los compuestos de la fórmula (VII) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (IX) mediante tratamiento con un agente alquilante (VIII) en presencia de una base tal como carbonato de cesio en un disolvente tal como DMF o DMPU. Dichas reacciones se pueden llevar a cabo a temperatura elevada, tal como 80 °C o en un reactor de microondas a una temperatura tal como 140 °C. Los agentes alquilantes (VIII) están típicamente comercialmente disponibles o se pueden preparar usando métodos estándar.
Los compuestos de la fórmula (IX) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (IA) mediante tratamiento con una base tal como hidróxido de sodio acuoso en un disolvente alcohólico tal como etanol o metanol. Se puede añadir un co-disolvente, tal como THF, para ayudar a la disolución. La reacción de hidrólisis se puede llevar a cabo a temperatura ambiente o a una temperatura elevada tal como 50-80 °C. Alternativamente, esta transformación se
5 puede llevar a cabo usando hidróxido de sodio sólido en etanol en un reactor de microondas a una temperatura tal como 100 °C. Alternativamente, dichas reacciones se pueden llevar a cabo en un reactor de microondas, usando dimetilamina en etanol con adición de agua a una temperatura tal como 160 °C.
La reacción entre (VII) y (VIII) para generar (IX) puede generar también compuestos isoméricos de la fórmula (X) (esquema 2). El tratamiento de un compuesto de la fórmula (VII) con un agente alquilante de la fórmula (VIII) con
10 una base tal como carbonato de cesio en un disolvente tal como DMF como se ha descrito previamente, genera una mezcla de compuestos de la fórmula (IX) y (X) que se pueden separar típicamente por cromatografía.
R1 R2
+
(VII) base
O
Br
Z
N
R1 R2 (X)
Esquema 2.
Un compuesto de la fórmula (X) se puede convertir en un compuesto de la fórmula (IB) mediante una etapa de hidró15 lisis descrita en el esquema 3.
O
O
N
R1
R2 R1
(X) R2 (IB)
Esquema 3
Alternativamente, los compuestos de la fórmula (IA) y (IB) se pueden preparar por la ruta indicada en los esquemas 4, 5 y 6. Los compuestos de la fórmula (XI) y (XII) se pueden generar a partir de compuestos de la fórmula (IV) me
20 diante reacción con un agente alquilante de la fórmula (VIII) en presencia de una base tal como carbonato de cesio en un disolvente tal como DMF. Típicamente dichas reacciones se llevan a cabo a una temperatura elevada tal como 80 °C. En algunas ocasiones los compuestos (XI) y (XII) se separan por cromatografía mientras que en otras ocasiones se usa una mezcla de los dos en posteriores reacciones generando una mezcla de (IX) y (X) que se pueden separar típicamente por cromatografía.
NC
N N
N
+
O
Br
O
(VIII) NC imagen1
NO
R2 (XII)
Esquema 4
Los compuestos de la fórmula (XI) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (IX) como se indica en el esquema 5.
N HON
NC imagen1
N Z
Z H2N OO R2
R2 (XI) (XIII)
EDAC, HOBt imagen2
O imagen1
N N
NO
R1
OH R2
(IX)
(VI)
5 R1
Esquema 5
Los compuestos de la fórmula (XI) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (XIII) mediante tratamiento con hidrocloruro de hidroxilamina y una base tal como bicarbonato de sodio en un disolvente tal como etanol a temperatura elevada, por ejemplo 50 °C.
10 Los compuestos de la fórmula (XIII) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (IX) mediante tratamiento con un ácido carboxílico de la fórmula (VI) en presencia de EDAC y HOBt en un disolvente adecuado tal como DMF. Dichas reacciones se llevan a cabo típicamente a temperatura elevada, tal como 50-120 °C. Algunas veces se agitan el ácido (VI), EDAC y HOBt durante un periodo de tiempo a temperatura ambiente antes de la adición del compuesto de la fórmula (XII), alternativamente todos los reactivos se pueden reunir y calentar juntos. Los compuestos
15 de la fórmula (IX) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (IA) como se ha descrito previamente.
Los compuestos de la fórmula (XII) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (X) como se indica en el esquema 6
NH2OH
Nimagen1
O
NC imagen1
Nimagen1
O
H2N
R2
R2 (XII) (XIV)
(X)
(VI)
R1
Esquema 6
Los compuestos de la fórmula (XII) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (XIV) mediante tratamiento con hidrocloruro de hidroxilamina y una base tal como bicarbonato de sodio en un disolvente tal como etanol a tempera5 tura elevada, por ejemplo 50 °C.
Los compuestos de la fórmula (XIV) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (X) mediante tratamiento con un ácido carboxílico de la fórmula (VI) en presencia de EDAC y HOBt en un disolvente adecuado tal como DMF. Dichas reacciones se llevan a cabo típicamente a temperatura elevada, tal como 80-120 °C. El ácido (VI), EDAC y HOBt se pueden agitar durante un periodo de tiempo a temperatura ambiente antes de la adición del compuesto de
10 la fórmula (IX), alternativamente todos los reactivos se pueden reunir y calentar juntos. Los compuestos de la fórmula (X) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (IB) como se ha descrito previamente.
Los compuestos de la fórmula (XI) en la que Z es –CH2-CH2- (presentados como compuestos de la fórmula (XVIII)) se pueden preparar también por la ruta indicada en el esquema 7.
Br
Br Br
N
N
N
R2 H
(XVI)
(XVII)
(XV)
O
NC
N
N
Rimagen1
2 H
(IV)
NC
(XVIII)
O O
Esquema 7
Los compuestos de la fórmula (XV) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (XVI) mediante tratamiento con anhídrido acético en un disolvente, tal como cloroformo a una temperatura entre 5 °C y 15 °C, seguido por tratamiento con una base tal como acetato de potasio y nitrito de isoamilo a una temperatura entre temperatura ambiente y 80 °C.
Los compuestos de la fórmula (XVI) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (XVI) evitando la formación del isómero (XIX):
Br
10 mediante tratamiento con 2-propenoato de etilo en presencia de una base tal como DBU y en un disolvente tal como acetonitrilo a temperatura de reflujo.
Los compuestos de la fórmula (XVII) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (XVIII) mediante tratamiento con dicianocinc en presencia de un catalizador tal como Pd2(dba)3 y de un ligando tal como DPPF en un disolvente tal como 1,4-dioxano a temperatura de reflujo.
15 Alternativamente, los compuestos de la fórmula (XVI) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (IV) mediante tratamiento con dicianocinc [Zn(CN)2] en presencia de un catalizador tal como Pd(PPh3)4 en un disolvente tal como NMP a una temperatura tal como 80 °C. Los compuestos de la fórmula (IV) se pueden convertir entonces en compuestos de la fórmula (XVIII) de una manera similar a las usadas para convertir los compuestos de la fórmula
(XV) en compuestos de la fórmula (XVII).
20 Los compuestos de la fórmula (XIII) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (IX) según la ruta indicada en el esquema 8:
5
10
15
20
25
30
O
OH
(VI)
O
Cl
NOH
(XX)
N imagen1
imagen8
R1 imagen8
O NO
N
R1
OR2 (XIII) R2 (XXI)
O Cl
(XX) R1
O
R1
O R2
(IX)
Esquema 8
Los compuestos de la fórmula (VI) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (XIX) mediante tratamiento con cloruro de oxalilo en presencia de DMF en un disolvente tal como diclorometano a temperatura ambiente.
Los compuestos de la fórmula (XIII) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (XXI) mediante tratamiento con compuestos de la fórmula (XX) en presencia de una base tal como trietilamina en un disolvente tal como diclorometano a 0 oC.
Los compuestos de la fórmula (XXI) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (IX) después de calentar a 100 oC en presencia de un disolvente tal como acetonitrilo.
"Alternativamente, los compuestos de la fórmula (XIII) se pueden convertir en compuestos de la fórmula (IX) mediante tratamiento con compuestos de la fórmula (XX) y trietilamina en un disolvente tal como acetonitrilo a una temperatura entre temperatura ambiente y 110 oC.":
Los compuestos de la fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables son por tanto útiles en el tratamiento de enfermedades o trastornos que están mediados por el receptor S1P1. En particular los compuestos de la fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables son útiles en el tratamiento de esclerosis múltiple, enfermedades autoinmunes, trastornos inflamatorios crónicos, asma, neuropatías inflamatorias, artritis, transplantes, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, lupus eritematoso, psoriasis, lesiones por isquemia-reperfusión, tumores sólidos, y metástasis tumoral, enfermedades asociadas con angiogénesis, enfermedades vasculares, condiciones dolorosas, enfermedades virales agudas, trastornos inflamatorios del intestino, diabetes dependiente de insulina y no dependiente de insulina (de aquí en adelante denominados como los ‘’trastornos de la invención’’).
Debe entenderse que "tratamiento", como se usa en esta memoria, incluye tanto la profilaxis como el alivio de síntomas manifiestos.
De esta manera, la invención proporciona también un compuesto de la fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso como una sustancia terapéutica, en particular en el tratamiento de las enfermedades o trastornos mediados por el receptor S1P1. En particular la invención proporciona un compuesto de la fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables para uso como una sustancia terapéutica en el tratamiento de la esclerosis múltiple, enfermedades autoinmunes, trastornos inflamatorios crónicos, asma, neuropatías inflamatorias, artritis, transplantes, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, lupus eritematoso, psoriasis, lesiones por isquemiareperfusión, tumores sólidos, y metástasis tumoral, enfermedades asociadas con angiogénesis, enfermedades vasculares, condiciones dolorosas, enfermedades virales agudas, trastornos inflamatorios del intestino, diabetes dependiente de insulina y no dependiente de insulina. También se describe un método de tratamiento de enfermedades o trastornos en los mamíferos incluyendo los seres humanos que pueden estar mediados por el receptor S1P1, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente segura y eficaz de un compuesto de la fórmula (I)
o de una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
En otro aspecto, la invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) o de una de sus sales farmacéuticamente aceptables en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de las enfermedades o trastornos mediados por el receptor S1P1.
Para utilizar los compuestos de la fórmula (I) en terapia, normalmente se formularán en una composición farmacéutica de acuerdo con las prácticas farmacéuticas clásicas. La presente invención proporciona también una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de la fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un procedimiento para preparar una composición farmacéutica, procedimiento que comprende mezclar un compuesto de la fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Una composición farmacéutica de la invención, que se puede preparar por mezcla, adecuadamente a temperatura ambiente y a presión atmosférica, se adapta normalmente para administración oral, parenteral o rectal y, como tal, puede estar en forma de comprimidos, cápsulas, preparaciones líquidas orales, polvos, gránulos, comprimidos para chupar, polvos reconstituibles, soluciones o suspensiones inyectables o para perfusión o supositorios. Se prefieren generalmente las composiciones administrables oralmente.
Las potencias y eficacias de los compuestos de esta invención para el receptor S1P1 se pueden determinar por el ensayo GTPγS realizado sobre el receptor humano clonado como se describe aquí o por el ensayo de unión a levadura, también descrito aquí. Los compuestos de la fórmula (I) han demostrado actividad agonista en el receptor S1P1, usando los ensayos funcionales descritos aquí.
Los comprimidos y cápsulas para administración oral pueden estar en forma de dosis unitarias y pueden contener excipientes convencionales, tales como agentes aglutinantes (por ejemplo, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona o hidroxipropilmetilcelulosa); agentes de carga (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina o hidrógeno-fosfato de calcio); lubricantes para compresión (por ejemplo, estearato de magnesio, talco o sílice); desintegrantes (por ejemplo, almidón de patata o glicolato sódico de almidón); y agentes humectantes aceptables (p. ej., laurilsulfato de sodio). Los comprimidos se pueden recubrir de acuerdo con métodos bien conocidos en la práctica farmacéutica clásica.
Las preparaciones líquidas orales pueden estar, por ejemplo, en forma de suspensiones, soluciones, emulsiones, jarabes o elixires acuosos u oleosos, o pueden estar en forma de un producto seco para reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Tales preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de suspensión (p. ej., jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestibles hidrogenadas), agentes emulsionantes (p. ej., lecitina o goma arábiga), vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles, p. ej., aceite de almendras, ésteres oleosos, alcohol etílico o aceites vegetales fraccionados), conservantes (p. ej., p-hidroxibenzoatos de metilo o propilo o ácido sórbico) y, si se desea, agentes saporíferos o colorantes convencionales, sales tamponantes y agentes edulcorantes en la medida apropiada. Las preparaciones para administración oral se pueden formular adecuadamente para dar una liberación controlada del compuesto activo.
Para administración parenteral, se preparan formas de dosificación unitaria fluidas utilizando un compuesto de la invención o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y un vehículo estéril. Las formulaciones para inyección se pueden presentar en forma de dosis unitarias, p. ej. en ampollas o en multi-dosis, utilizando un compuesto de la invención o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y un vehículo estéril, opcionalmente con un conservante añadido. Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Como alternativa, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para reconstitución con un vehículo adecuado, p. ej. agua estéril libre de pirógenos, antes de su uso. El compuesto, dependiendo del vehículo y de la concentración usados, puede estar suspendido o disuelto en el vehículo. En la preparación de soluciones, el compuesto se puede disolver para inyección y esterilizar por filtración antes de cargarlo en un vial o ampolla adecuado y sellarlo. De manera ventajosa, se disuelven en el vehículo adyuvantes tales como anestésicos locales, conservantes o agentes de tamponamiento. Para mejorar la estabilidad, se puede congelar la composición una vez cargada en el vial y el agua se puede retirar al vacío. Las suspensiones parenterales se preparan esencialmente de la misma manera, con la excepción de que el compuesto se suspende en el vehículo en lugar de disolverse, y la esterilización no se puede efectuar por filtración. El compuesto se puede esterilizar por exposición a óxido de etileno antes de ser suspendido en un vehículo estéril. Ventajosamente, se incluye un tensioactivo o agente humectante en la composición para facilitar la distribución uniforme del compuesto.
Se pueden formular lociones con una base acuosa u oleosa y, en general, contendrán también uno o más agentes emulsionantes, agentes estabilizantes, agentes dispersantes, agentes de suspensión, agentes espesantes o agentes colorantes. Se pueden formular gotas con una base acuosa o no acuosa que también comprenden uno o más agentes dispersantes, agentes estabilizantes, agentes solubilizantes o agentes de suspensión. Pueden contener también un conservante.
Los compuestos de la invención se pueden formular también en composiciones rectales tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo que contienen bases de supositorios convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos.
Los compuestos de la invención se pueden formular también como preparaciones de depósito. Estas formulaciones de actuación prolongada pueden administrarse por implantación (por ejemplo, por vía subcutánea o por vía intramuscular) o por inyección intramuscular. De esta manera, por ejemplo, los compuestos de la invención se pueden formular con materiales poliméricos o hidrófobos adecuados (por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico o como derivados poco solubles, por ejemplo, como una sal poco soluble.
Para la administración intranasal, los compuestos de la invención se pueden formular como soluciones para administración por medio de un dispositivo de dosis medidas o de dosis unitarias o, como alternativa, como una mezcla en polvo con un vehículo adecuado para administración usando un dispositivo de liberación adecuado. De esta manera, los compuestos de la fórmula (I) se pueden formular para administración oral, bucal, parenteral, tópica (incluyendo oftálmica y nasal), de depósito o rectal o en una forma adecuada para administración por inhalación o insuflación (a través de la boca o de la nariz).
Los compuestos de la fórmula (I) o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se pueden formular para administración tópica en forma de pomadas, cremas, geles, lociones, pesarios, aerosoles o gotas (por ejemplo, gotas para los ojos, oídos o nariz). Las pomadas y las cremas se pueden formular, por ejemplo, con una base acuosa u oleosa con la adición de agentes espesantes y/o gelificantes adecuados. Las pomadas para administración oftálmica se pueden fabricar de manera estéril usando componentes esterilizados.
La composición puede contener de 0,1 % a 99 % en peso, preferiblemente de 10 a 60 % en peso, del material activo, dependiendo del método de administración. La dosis del compuesto usada en el tratamiento de los trastornos mencionados anteriormente variará de manera usual con la gravedad de los trastornos, el peso del paciente, y otros factores similares. Sin embargo, como norma general, las dosis unitarias adecuadas pueden ser de 0,05 a 1000 mg, de 1,0 a 500 o de 1,0 a 200 mg, y dichas dosis unitarias se pueden administrar más de una vez al día, por ejemplo dos o tres veces al día.
Los compuestos de la fórmula (I) o las farmacéuticamente aceptables sales de los mismos se pueden usar en preparaciones de asociación. Por ejemplo, los compuestos de la invención se pueden usar en asociación con ciclosporina A u otros compuestos terapéuticamente activos.
La presente invención también incluye compuestos marcados con isótopos, que son idénticos a los citados en las fórmulas I y siguientes, salvo en que uno o más átomos se han reemplazado por un átomo que tiene una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico encontrado habitualmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor, yodo y cloro, tales como 3H, 11C, 14C, 18F, 123I y 125I.
Los compuestos de la fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos que contienen los isótopos mencionados antes y/o otros isótopos de otros átomos están dentro del alcance de la presente invención. Los compuestos marcados con isótopos de la presente invención, por ejemplo aquellos en los que se incorporan isótopos radioactivos tales como 3H o 14C, son útiles en ensayos de distribución de fármacos y/o sustratos en tejidos. Se prefieren particularmente los isótopos tritio, es decir 3H, y carbono-14, es decir, 14C, por su facilidad de preparación y detectabilidad. Los isótopos 11C y 8F son particularmente útiles en PET (tomografía de emisión de positrones), y los isótopos 125I son particularmente útiles en SPECT (tomografía computarizada de emisión de un solo fotón), todos útiles en la formación de imágenes del cerebro. Además, la sustitución con isótopos más pesados, tales como deuterio, es decir 2H, puede producir ciertas ventajas terapéuticas debidas a una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo una mayor semivida in vivo o menores requisitos de dosificación y, por lo tanto, pueden preferirse en algunas circunstancias. Los compuestos marcados isotópicamente de la fórmula I y siguientes de esta invención se pueden preparar generalmente llevando a cabo los procedimientos descritos en los Esquemas y/o en los Ejemplos descritos más adelante, reemplazando un reactivo no marcado isotópicamente con un reactivo marcado isotópicamente fácilmente disponible.
Las siguientes Descripciones y Ejemplos ilustran la preparación de compuestos de la invención.
La siguiente información sobre hardware y software para los métodos analíticos se da con fines de ilustración solamente.
Condiciones, hardware y software para sistemas analíticos de LCMS
Hardware
Bomba de gradiente Agilent 1100
Autoinyector Agilent 1100
Detector Agilent 1100 DAD Desgasificador Agilent 1100 Estufa Agilent 1100 Controlador Agilent 1100 Conductor de disolventes Waters Acquity Binary Conductor de muestras Waters Acquity Waters Acquity PDA Espectrómetro de Masas Waters ZQ Sedere Sedex 55, Sedere Sedex 85, Sedere Sedex 75 o Polymer Labs PL-ELS-2100
Software
Waters MassLynx version 4.0 SP2 o version 4.1
Para el método de 5 minutos Columna
La columna usada es una Waters Atlantis, cuyas dimensiones son 4,6 mm x 50 mm. El tamaño de partícula de la fase estacionaria es de 3 μm.
Disolventes
A: disolvente acuoso = agua + ácido fórmico al 0,05 %
B: disolvente orgánico = acetonitrilo + ácido fórmico al 0,05 %
Método
El método genérico usado tiene un tiempo de ejecución de 5 minutos. Tiempo/min % de B 0 3 0,1 3 4 97 4,8 97 4,9 3 5,0 3
Caudal
El método anterior tiene un caudal de 3 ml/min
Para el método de 2 minutos Software
Waters MassLynx version 4.1
Columna
La columna usada es una Waters Acquity BEH UPLC C18, cuyas dimensiones son 2,1 mm x 50 mm. El tamaño de partícula de la fase estacionaria es de 1,7 μm.
Disolventes
A: disolvente acuoso = agua + ácido fórmico al 0,05 %
B: disolvente orgánico = acetonitrilo + ácido fórmico al 0,05 % Lavado débil = metanol: agua 1:1 Lavado fuerte = agua
Método
El método genérico usado tiene un tiempo de ejecución de 2 minutos.
- Tiempo / min
- % de B
- 0
- 3
- 0,1
- 3
- 1,5
- 97
- 1,9
- 97
- 2,0
- 3
5 El método anterior tiene un caudal de 1 ml/min.
El volumen de inyección para el método genérico es 0,5 ul.
La temperatura de la columna es de 40 grados.
El intervalo de detección UV es de 220 a 330 nm.
Sistema Open Access Mass Directed Auto Prep (MDAP) 10 Hardware
Los instrumentos Open Access Mass Directed Prep consisten en lo siguiente:
1 Bomba de gradiente Waters 600
1 Inyector/colector Waters 2767
1 Conductor de reactivos Waters
15 1 Espectrómetro MicroMass ZQ Mass 1 Gilson Aspec - colector de deshechos 1 Detector UV post-fracción Gilson 115 1 Sistema de ordenador.
Software
20 MicroMass MassLynx v4.0
Columna
La columna usada es típicamente una columna Supelco LCABZ++ cuyas dimensiones son 20 mm de diámetro interno por 100 mm de longitud. El tamaño de partícula de la fase estacionaria es 5 µm.
Disolventes
25 A:. disolvente acuoso = agua + ácido fórmico al 0,1 % B:. disolvente orgánico = MeCN: agua 95:5 + ácido fórmico al 0,05 % disolvente de preparación = MeOH: agua 80:20 + acetato amónico 50 mM disolvente de aclarado de la aguja = MeOH: agua: DMSO 80:10:10
Métodos
30 Uno de los cinco métodos que se pueden usar dependiendo del tiempo de retención analítico del compuesto de interés.
Todos tienen un tiempo de realización de 15 minutos, que comprende 10 minutos de gradiente seguido por un lavado abundante de la columna de 5 minutos y etapa de re-equilibrado. MDP 1,5-2,2 = 0-30 % de B MDP 2,0-2,8 = 5-30 % de B MDP 2,5-3,0 = 15-55 % de B MDP 2,8-4,0 = 30-80 % de B MDP 3,8-5,5 = 50-90 % de B
Caudal
Todos los métodos anteriores tienen un caudal de 20 ml/min.
Sistema alternativo:
Hardware
- •
- Módulo de gradiente binario Waters 2525
- •
- Bomba de preparación Waters 515
- •
- Módulo de control de la bomba Waters
- •
- Inyector/Colector Waters 2767
- •
- Conductor de fluidos de la columna Waters
- •
- Detector de serie de fotodiodos Waters 2996
- •
- Espectrómetro de masas Waters ZQ
- •
- Colector de fracciones Gilson 202
- •
- Colector de deshechos Gilson Aspec Software Waters Masslynx versión 4 SP2
Columna
Las columnas usadas son Waters Atlantis, cuyas dimensiones son 19 mm x 100 mm (escala pequeña) y 30 mm x 100 mm (escala grande). El tamaño de partícula de la fase estacionaria es de 5 mm. Disolventes
A: disolvente acuoso = agua + ácido fórmico al 0,1 %
B: disolvente orgánico = acetonitrilo + ácido fórmico al 0,1 % disolvente de preparación = metanol: agua 80:20 disolvente de aclarado de agujas = metanol Métodos Se usan cinco métodos dependiendo del tiempo de retención analítico del compuesto de interés. Todos tienen un
tiempo de ejecución de 13,5 minutos, que comprende un gradiente de 10 minutos seguido de un lavado abundante de la columna de 3,5 minutos y una etapa de re-equilibrado. Escala Grande/Pequeña 1,0-1,5 = 5-30 % de B Escala Grande/Pequeña 1,5-2,2 = 15-55 % de B Escala Grande/Pequeña 2,2-2,9 = 30-85 % de B Escala Grande/Pequeña 2,9-3,6 = 50-99 % de B
Escala Grande/Pequeña 3,6-5,0 = 80-99 % de B (en 6 minutos seguida de lavado abundante de 7,5 minutos y re-equilibrado) Caudal Todos los métodos anteriores tienen un caudal de 20 ml/min (escala pequeña) o 40 ml/min (escala grande) Gradientes débiles Escala grande 1,5 a 2,3 min = 13-29 % de B Escala grande 1,9 a 2,3 min = 25-41 % de B Escala grande 2,3 a 2,6 min = 37-53 % de B Escala grande 2,6 a 3,1 min = 49-65 % de B Escala grande 3,1 a 3,6 min = 61-77 % de B
Condiciones usadas para la NMR Hardware
Bruker 400 MHz Ultrashield Automuestreador Bruker B-ACS60 Consola Bruker Advance 400 Bruker DPX250 Bruker AVANCE 500 Bruker DRX600
Software
Interfase del usuario - NMR Kiosk
Software de control - XWin NMR versión 3.0.
Cromatografía
A menos que se indique otra cosa, toda la cromatografía se llevó a cabo usando columnas de sílice
- Abreviaturas:
- g –
- gramos
- mg –
- miligramos
- ml –
- mililitros
- ul –
- microlitros
- CHCl3
- - cloroformo
- MeCN
- – acetonitrilo
- MeOH –
- metanol
- EtOH –
- etanol
- EtOAc –
- acetato de etilo
- DBA -
- dibencilidenacetona
- DCM –
- diclorometano
- DMF –
- N,N-dimetilformamida
- DMPU –
- 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(1H)-pirimidinona
- DMSO
- – dimetilsulfóxido
- DPPF -
- 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno
- EDC –
- hidrocloruro de N-(3-dimetilaminopropil)-N′-etilcarbodiimida
- EDAC –
- hidrocloruro de N-(3-dimetilaminopropil)-N′-etilcarbodiimida
- EDCl.HCl –
- hidrocloruro de N-(3-dimetilaminopropil)-N′-etilcarbodiimida
- HATU -
- 2-(1H-7-azabenzotriazol-1-il)--1,1,3,3-tetrametil-uronio hexafluorofosfato Metanaminio
- IPA –
- isopropanol
- NMP-
- N-metil-2-pirrolidinona
- piBOP –
- hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxitripirrolidinofosfonio
- THF -
- tetrahidrofurano
- dba –
- dibenciliden-acetona
- RT –
- temperatura ambiente
- °C –
- grados Celsius
- M –
- Molar
- H –
- proton
- s –
- singlete
- d –
- doblete
- t –
- triplete
- q –
- cuadruplete
- LCMS –
- cromatografía de líquidos/espectrometría de masas
- LC/MS –
- cromatografía de líquidos/espectrometría de masas
- NMR –
- resonancia magnética nuclear
- MS –
- espectrometría de masas
- ES –
- electronebulización
- MH+ –
- masa del ion + H+
- MDAP –
- cromatografía de líquidos preparativa automática dirigida por masas
- SCX –
- intercambio catiónico fuerte
Química general
Los intermedios para la preparación de los ejemplos no han sido necesariamente preparados a partir del lote específico descrito.
Descripción de D1 1H-Indazol-5-carbonitrilo (D1)
Se disuelve 2-fluoro-5-cianobenzaldehído (1,1 g) en hidrato de hidrazina (19 ml) y se agita a temperatura ambiente durante 18 horas. Se destila después la solución y se purifica el residuo por cromatografía rápida en columna sobre sílice, eluyendo con DCM. Esto da el compuesto del epígrafe (300 mg).
Descripción de D1 (procedimiento alternativo) 1H-Indazol-5-carbonitrilo (D1)
Se disolvió 5-ciano-3-fluorobenzaldehído (4 g, 26,8 mmol) en hidrato de hidrazina y se agitó a temperatura ambiente
5 durante 18 horas. Se vertió la solución sobre hielo y se separó el sólido resultante por filtración y después se secó a vacío a 60 °C para obtener el compuesto del epígrafe (1,27 g) como un sólido rosa. Se aisló material adicional a partir de la capa acuosa. MS (ES): C8H5N3 requiere 143; encontrado 144 (MH+).
El 1H-indazol-5-carbonitrilo se puede preparar también como se ha descrito previamente (Halley and Sava 1997, Synth. Commun. 27(7):1199-1207).
10 Descripción de D2
N-Hidroxi-1H-indazol-5-carboximidamida (D2)
Se disolvieron/suspendieron en MeOH (18 ml), 5-ciano-indazol (D1) (500 mg), hidroxilamina HCl (485 mg) y NaHCO3 (1,47 g), se calentaron a 50 °C y se agitaron durante 19 horas y durante la noche. Se filtró entonces la mezcla 15 de reacción, se lavó con MeOH y se evaporó para dar el compuesto del epígrafe (584 mg) como un sólido blanco. MS (ES): C8H8N4O requiere 176; encontrado 177 (MH+).
Descripción de D3
Ácido 3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]benzoico (D3)
O
20 Se disolvió 4-hidroxi-3-cloro-benzoato de metilo (13,4 g) en DMF (150 ml), se trató con K2CO3 (19,9 g) seguido por bromuro de isopropilo (13,5 ml) y se calentó la mezcla resultante a 70 °C y se agitó durante la noche. Se enfrió entonces la mezcla de reacción a temperatura ambiente, se evaporó a sequedad, se re-disolvió en EtOH, se filtró y se evaporó una vez más para dar el intermedio éster (22,24 g) como un sólido blanco. Este compuesto era una mezcla
3:1 de ésteres etílico y metílico y se usó crudo en la siguiente reacción.
25 Se disolvió el intermedio crudo (22,24 g) en MeOH (75 ml), se trató con NaOH 2 M acuoso (75 ml), se calentó a 60 °C y se agitó durante 2 horas. Se enfrió entonces la mezcla de reacción a temperatura ambiente, se evaporó el Me-OH y la solución acuosa remanente se acidificó con HCl 5 M acuoso (30 ml). Se separó por filtración el precipitado y se secó para dar el compuesto del epígrafe (15,1 g) como un sólido blanco. �H (CDCl3, 400MHz): 1,42 (6H, d), 4,70 (1H, septete), 6,97 (1H, d), 7,97 (1H, d), 8,12 (1H, s). MS (ES): C10H11ClO3 requiere 214; encontrado 213 (M–H+).
30 El ácido 3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]benzoico se puede preparar como se describe en el documento WO2006047195.
Descripción de D4
5-(5-{3-Cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol (D4)
ONCl
NO H
Se disolvieron en DMF (16,5 ml), ácido 3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]benzoico (D3) (712 mg), EDCI.HCl (699 mg) y 35 HOBT (493 mg) y se agitaron a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió N-hidroxi-1H-indazol-5carboximidamida (D2) (584 mg) y se calentó la mezcla a 80 °C durante 12 horas. Se enfrió entonces la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se dejó en reposo durante el fin de semana, se evaporó a sequedad y se re-disolvió en H2O. Se extrajo esta solución con EtOAc (x 3) y los extractos reunidos se lavaron con salmuera, se evaporaron y se trituraron dos veces con DCM, se sonicaron durante 4 minutos antes de filtrar, secar y repetir una vez
5 más para dar el compuesto del epígrafe (407 mg) como un sólido rosa. �H (d6-DMSO, 400MHz): 1,37 (6H, d), 4,89 (1H, septete), 7,46 (1H, d), 7,73 (1H, d), 8,04 (1H, d), 8,13 (1H, d), 8,20 (1H, s), 8,28 (1H, s), 8,58 (1H, s). MS (ES): C18H15ClN4O2 requiere 354; encontrado 355 (M+H).
Descripción de D5
3-[5-(5-{3-Cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoato de etilo (D5)
ON
Cl
10
Se disolvió en DMPU (2,8 ml), 5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol (D4) (200 mg) y se trató con Cs2CO3 (367 mg) seguido por 3-bromopropionato de etilo (145 ul). Se calentó la mezcla resultante a 140 °C en un reactor de microondas durante 1,5 horas. Se enfrió entonces la mezcla de reacción a temperatura ambiente, se evaporó a sequedad y se disolvió en H2O. Se extrajo esta solución con EtOAc (x 3) y los extractos reunidos se
15 lavaron con salmuera y se evaporaron para dar el compuesto del epígrafe (240 mg) como un aceite pardo. MS (ES): C23H2335ClN4O4 requiere 454; encontrado 455 (MH+).
Descripción de D5 (procedimiento alternativo)
3-[5-(5-{3-Cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoato de etilo (D5)
COOEt
20 Una solución de 3-{5-[(hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}propanoato de etilo (D52) (2,04 g, 7,38 mmol), ácido 3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]benzoico (D3)
(1,743 g, 8,12 mmol), EDC (2,123 g, 11,08 mmol) y HOBT (1,357 g, 8,86 mmol) en N,N-dimetilformamida (DMF) (25 ml), se agitó durante la noche y después se calentó a 120 ºC durante 4 horas. Se disolvió la mezcla en EtOAc después se lavó con agua y NaHCO3 y se purificó por cromatografía rápida, eluyendo con EtOAc al 10-90 % en iso
25 hexano y después al 10-30 %. Se evaporó el disolvente para dar 1,95 g de un sólido blanco. MS (ES): C23H2335ClN4O4 requiere 454; encontrado (MH+) 455.
Descripción de D6
3-Cloro-4-(etiloxi)benzoato de metilo (D6)
O
30 Se suspendieron en DMF (110 ml), 4-hidroxi-3-clorobenzoato de metilo (10 g, 53,6 mmol) y carbonato de potasio (14,8 g, 107,2 mmol) y se añadió después yoduro de etilo (8,56 ml, 107,2 mmol). Se calentó la mezcla de reacción a 70 °C durante la noche. Se filtró la mezcla de reacción y se lavó el residuo con éter. Las soluciones orgánicas se evaporaron en vacío y después se disolvieron en EtOAc y se lavaron con NaOH acuoso y agua, se secaron y se evaporaron a sequedad en vacío para obtener el compuesto del epígrafe (11,24 g) como un aceite amarillo. MS (ES): C10H1135ClO3 requiere 214; encontrado (MH+) 215.
Descripción de D7
Ácido 3-cloro-4-(etiloxi)benzoico (D7)
O
A una suspensión en agitación de 3-cloro-4-(etiloxi)benzoato de metilo (D6) (11,24 g, 52,4 mmol) en metanol (40 ml), se añadió NaOH 2 M acuoso (40 ml) y se calentó la mezcla resultante a 60 °C durante 2 horas. La mezcla de
10 reacción se sometió a reparto entre EtOAc y ácido clorhídrico diluido. Se separaron los extractos orgánicos, se secaron y se evaporaron en vacío para dar el producto crudo. Se trituró este material con éter para dar el compuesto del epígrafe como un sólido blanco (8,21 g). MS (ES): C9H935ClO3 requiere 200; encontrado (MH+) 201.
Descripción de D8
3-Etil-4-(1-piperidinil)benzonitrilo (D8)
CN
15
Se dividieron a partes iguales entre diez viales de microondas, 4-amino-3-etilbenzonitrilo (3,0 g, 20,5 mmol), 1,5dibromopentano (11,1 ml, 82,1 mmol), carbonato de potasio (5,67 g, 41,0 mmol) y agua (39,6 ml), y cada uno de los viales se calentó a 160 °C durante 1 h. Se reunieron todas las mezclas de reacción y se extrajeron dos veces con acetato de etilo (40 ml) y las fracciones orgánicas reunidas se secaron (separador de fases) y se concentraron en
20 vacío. Se añadió diclorometano, se filtró la mezcla y después se purificó el filtrado por cromatografía sobre sílice, eluyendo con acetato de etilo al 2-5 % en hexano para dar el compuesto del epígrafe como un aceite incoloro (823 mg, 3,85 mmol). El análisis indicó que el compuesto contenía pequeñas cantidades de una impureza de dibromopentano. MS (ES): C14H18N2 requiere 214; encontrado 215 (MH+).
Descripción de D9
Ácido 3-etil-4-(1-piperidinil)benzoico (D9)
Se calentaron a 90 °C (temperatura del bloque) durante 9 h, 3-etil-4-(1-piperidinil)benzonitrilo (D8) (817 mg, 3,82 mmol) e hidróxido de potasio (2,14 g, 38,2 mmol) en etanol (35 ml) y agua (8 ml). Se añadieron adicionalmente 5 hidróxido de potasio (2,14 g, 38,2 mmol) y agua (8 ml) y se calentó la reacción durante 18 h más. Se dejó que se enfriara la reacción y se neutralizó con HCl acuoso. Se separó por filtración un sólido blanco y se hizo un intento para purificar el filtrado mediante un cartucho de SCX, pero falló. Tanto el sólido como el producto de SCX se reunieron, se añadió metanol y después se acidificó la mezcla con ácido acético. Se filtró la mezcla para obtener el filtrado, que se atrapó después sobre un cartucho de SCX, se lavó con metanol y se eluyó con amoniaco 2 M en
10 metanol. A escala de ensayo esto dio el compuesto del epígrafe como un sólido blanco (96 mg, 0,41 mmol) y sobre el material remanente dio un aceite incoloro (563 mg, 2,41 mmol). MS (ES): C14H19NO2 requiere 233; encontrado 234 (MH+).
Descripción de D10
3-Etil-4-yodobenzonitrilo (D10)
CN
15
A 4-amino-3-etilbenzonitrilo (2,50 g, 17,1 mmol) agitado en agua (14 ml) a 0 °C, se añadió ácido clorhídrico concentrado (7,80 ml, 257 mmol) gota a gota seguido por una solución de nitrito de sodio (1,24 g, 18,0 mmol) en agua (3,43 ml) gota a gota. Se agitó la mezcla resultante durante 15 minutos y después se añadió a lo largo de 15 minutos a una solución de yoduro de potasio (2,98 g, 18,0 mmol) en agua (6,0 ml) a 0 °C. Se agitó la mezcla a temperatura
20 ambiente durante 2 h. Se extrajo la mezcla con acetato de etilo (3 x 100 ml) y las fracciones orgánicas reunidas se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron (separador de fases) y se concentraron en vacío para dar el compuesto del epígrafe como un sólido pardo (4,21 g, 16,4 mmol). δH (metanol-d4, 400 MHz): 8,02 (1H, d), 7,61 (1H, d), 7,24 (1H, dd), 2,80 (2H, q), 1,21 (3H, t).
Descripción de D11 4-(1-Ciclohexen-1-il)-3-etilbenzonitrilo (D11)
Una mezcla de 3-etil-4-yodobenzonitrilo (D10) (1,23 g, 4,80 mmol), ácido 1-ciclohexen-1-ilborónico (907 mg, 7,20 mmol), metóxido de sodio (778 mg, 14,4 mmol) y cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) (337 mg, 0,48 mmol) en 5 metanol anhidro (12 ml), se calentó a 80 °C durante 10 minutos en el microondas. La mezcla de reacción se sometió a reparto entre acetato de etilo (40 ml) y agua (40 ml) antes de que la capa orgánica fuera adicionalmente lavada con agua (40 ml), secada (separador de fases) y concentrada en vacío. Se purificó el material crudo por cromatografía sobre sílice, eluyendo con EtOAc al 0-5 % en hexano a lo largo de 30 minutos para dar el compuesto del epígrafe como un aceite amarillo (824 mg, 3,91 mmol). δH (metanol-d4, 400 MHz) 7,56 (1H, d), 7,46 (1H, dd), 7,19 (1H,
10 d), 5,61-5,56 (1H, m), 2,68 (2H, quart), 2,23-2,16 (4H, m), 1,85-1,68 (4H, m), 1,20 (3H, t).
Descripción de D12
Ácido 4-(1-ciclohexen-1-il)-3-etilbenzoico (D12)
Se calentaron a 90 °C (temperatura del bloque) durante 20 h, 4-(1-ciclohexen-1-il)-3-etilbenzonitrilo (D11) (824 mg,
15 3,91 mmol) e hidróxido de potasio (2,19 g, 39,1 mmol) en etanol (36 ml) y agua (8 ml). Se concentró la mezcla de reacción en vacío y se sometió el residuo a reparto entre acetato de etilo (120 ml) y ácido clorhídrico acuoso (2 M, 50 ml) antes de que la fase orgánica se lavara con más ácido clorhídrico (2 M, 50 ml), se secara (separador de fases) y se concentrara en vacío para dar el compuesto del epígrafe como un aceite amarillo (808 mg, 3,51 mmol). LCMS (ES): C15H18O2 requiere 230; encontrado 229 (M-H+).
Descripción de D13
Ácido 4-ciclohexil-3-etilbenzoico (D13)
Se disolvió ácido 4-(1-ciclohexen-1-il)-3-etilbenzoico (D12) (803 mg, 3,49 mmol) en metanol (70 ml) y se hidrogenó en una cubeta de H usando un cartucho de paladio sobre carbono. Se concentró la solución del producto en vacío para dar el compuesto del epígrafe como un sólido blanco (792 mg, 3,41 mmol). δH (metanol-d4, 400 MHz): 7,827,68 (2H, m), 7,33 (1H, d), 2,83 (1H, m), 2,73 (2H, q), 1,87 (2H, m), 1,85-1,70 (3H, m), 1,58-1,30 (5H, m), 1,22 (3H, t).
Descripción de D14
3-Bromo-4-[(1-metiletil)oxi]benzoato de 1-metiletilo (D14)
10
Se calentó a reflujo durante 5 h, una mezcla de ácido 3-bromo-4-hidroxibenzoico (2,00 g, 9,22 mmol), 2yodopropano (1,85 ml, 18,4 mmol) y carbonato de potasio (2,55 g, 18,4 mmol) en DMF (175 ml). Se dejó que se enfriara la reacción y se filtró. Se concentró el filtrado en vacío y se sometió el residuo a reparto entre acetato de etilo (150 ml) y agua (150 ml), que se basificó con NaOH 2 M. Se secó la fase orgánica (separador de fases) y se con
15 centró en vacío para dar el compuesto del epígrafe como un aceite amarillo (2,36 g, 7,84 mmol). δH (metanol-d4, 400 MHz): 8,05 (1H, d), 7,90 (1H, dd), 7,25 (1H, d), 5,10 (1H, septete), 4,81 (1H, septete), 1,32 (6H, d), 1,31 (6H, d).
Descripción de D15
Ácido 3-bromo-4-[(1-metiletil)oxi]benzoico (D15)
Se calentó a reflujo durante 5 h, una solución de 3-bromo-4-[(1-metiletil)oxi]benzoato de 1-metiletilo (D14) (2,36 g, 7,84 mmol) en etanol (100 ml) e hidróxido de sodio acuoso (2 M, 39 ml). Se concentró la mezcla de reacción en vacío y se sometió a reparto entre acetato de etilo (125 ml) y agua (125 ml), acidificada esta última con HCl 2 M (40 ml). Se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo adicional (70 ml) y los extractos orgánicos reunidos se secaron (separador de fases) y se concentraron en vacío para dar el compuesto del epígrafe como un sólido de color blanco sucio (1,83 g, 7,06 mmol). MS (ES): C10H11BrO3 requiere 258, 260; encontrado 257, 259 (M-H+).
Descripción de D16
4-Bromo-3-clorobenzoato de etilo (D16)
Br
10 A una suspensión de ácido 4-bromo-3-clorobenzoico (5,00 g, 21,2 mmol) en etanol (50 ml), se añadió ácido sulfúrico (5 ml) y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante 60 h. Se sometió la reacción a reparto entre acetato de etilo (50 ml) y agua (50 ml). Se extrajo la capa acuosa con más acetato de etilo y las fracciones orgánicas reunidas se secaron (separador de fases) y se concentraron en vacío para dar el compuesto del epígrafe como un aceite/sólido pardo (5,09 g, 19,3 mmol). δH (d6-DMSO, 400 MHz): 8,06 (1H, d), 7,96 (1H, d), 7,80 (1H, dd), 4,33 (2H, q), 1,33 (3H,
15 t).
Descripción de D17
3-Cloro-4-(2-metilpropil)benzoato de etilo (D17)
OO
Cl
Se añadió una solución de bromuro de isobutil-cinc en THF (0,5 M, 30 ml, 15,0 mmol) bajo argón a 4-bromo-3
20 clorobenzoato de etilo (D16) (2,00 g, 7,60 mmol) y después se añadió complejo de dicloruro de 1,1'bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio(II) en diclorometano (930 mg, 1,14 mmol). Se calentó la reacción a reflujo durante 4,5 h. Se concentró la mezcla en vacío y se sometió el residuo a reparto entre acetato de etilo (125 ml) y agua (125 ml). Se formó un sólido, que se separó por filtración y se despreció. Se lavó la capa orgánica con agua (100 ml), se secó (separador de fases) y se concentró en vacío. Se purificó el producto crudo por cromatografía sobre sílice, elu
25 yendo con EtOAc al 0-5 % en hexano a lo largo de 30 minutos para dar el compuesto del epígrafe como un aceite incoloro (1,76 g, 7,33 mmol). δH (d6-DMSO, 400 MHz): 7,91 (1H, d), 7,80 (1H, dd), 7,46 (1H, d), 4,30 (2H, q), 2,66 (2H, d), 1,88-2,01 (1H, m), 1,32 (3H, t), 0,89 (6H, d).
Descripción de D18
Ácido 3-cloro-4-(2-metilpropil)benzoico (D18)
Se calentó a 40 °C durante 3 h, una solución de 3-cloro-4-(2-metilpropil)benzoato de etilo (D17) (1,76 g, 7,33 mmol), e hidróxido de sodio acuoso (2M, 3,70 ml, 7,4 mmol) en etanol (30 ml). Se concentró la mezcla de reacción en vacío
5 y se sometió el residuo a reparto entre acetato de etilo (100 ml) y agua (100 ml), acidificada esta última con HCl 2 M (4 ml). Se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (100 ml) y los extractos orgánicos reunidos se secaron (separador de fases) y se concentraron en vacío para dar el compuesto del epígrafe como un sólido blanco (1,35 g, 6,36 mmol). MS (ES): C11H1335ClO2 requiere 212; encontrado 211 (M-H+).
Descripción de D19
10 3-Ciano-4-{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}benzoato de metilo (D19)
F3C O
A una solución de 3-ciano-4-hidroxibenzoato de metilo (3 g, 16,93 mmol) y trietilamina (3,54 ml, 25,4 mmol) en diclorometano seco (60 ml) a 0 ºC bajo una corriente de argón, se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (3,15 ml, 18,63 mmol) lentamente gota a gota. Se dejó que la reacción se calentara a temperatura ambiente y se agitó duran
15 te 1 h. Se lavó la mezcla de reacción con carbonato de potasio al 10 % acuoso (2 x 50 ml) y después con HCl acuoso (2 M, 2 x 50 ml) antes de que la fase orgánica se secara (separador de fases) y se separara el disolvente en vacío para dar el compuesto del epígrafe como un aceite de color marrón oscuro, (5,165 g, 16,70 mmol). δH (CDCl3, 400 MHz): 8,44 (1H, d), 8,38 (1H, dd), 7,60 (1H, d), 3,99 (3H, s).
Descripción de D20 2-Ciano-4-bifenilcarboxilato de metilo (D20)
La siguiente reacción se dividió en dos lotes con la mitad de las cantidades: se disolvieron 3-ciano-4{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}benzoato de metilo (D19) (1,5 g, 4,85 mmol), ácido fenilborónico (1,183 g, 9,70 mmol), 5 carbonato de potasio (2,011 g, 14,55 mmol) y paladio-tetrakistrifenilfosfina(0) (0,561 g, 0,485 mmol) en DMF (24 ml) y se calentó la mezcla en el microondas durante 30 min a 150 ºC. Se reunieron las dos reacciones y se diluyeron con acetato de etilo (50 ml) y se filtró la mezcla a través de kiéselgur para separar los residuos de paladio. Se concentró el filtrado en vacío para reducir la cantidad de DMF y después se sometió el residuo a reparto entre bicarbonato de sodio saturado acuoso (50 ml) y acetato de etilo (50 ml). Se lavó la fase orgánica con más bicarbonato de
10 sodio (50 ml) y después con agua (50 ml) antes de que fuera secada (MgSO4), filtrada y separado el disolvente en vacío. Se purificó el sólido pardo por cromatografía sobre sílice, eluyendo con EtOAc al 0-25 % en iso-hexano a lo largo de 35 minutos para dar el compuesto del epígrafe como un sólido blanco (935 mg, 3,94 mmol). δH (d6-DMSO, 400 MHz): 8,42 (1H, d), 8,29 (1H, dd), 7,81 (1H, d), 7,65 (2H, m), 7,60 -7,50 (3H, m), 3,92 (3H, s).
Descripción de D21
15 Ácido 2-ciano-4-bifenilcarboxílico (D21)
A 2-ciano-4-bifenilcarboxilato de metilo (D20) (935 mg, 3,94 mmol) se añadió etanol (18 ml) pero no se logró la diso
lución por lo que se añadió diclorometano (10 ml). Se añadió entonces hidróxido de sodio 2 M acuoso (2 ml, 4,00
mmol) y se agitó la reacción durante 2 h. Se añadieron a la mezcla diclorometano (20 ml) y HCl 2 M acuoso (10 ml). 20 Se separaron las capas y se extrajo la capa acuosa con más diclorometano (20 ml). Se secó la fase orgánica reuni
da (separador de fases) y se separó el disolvente en vacío para dar un sólido blanco, que se disolvió en metanol (30
ml) y se añadió hidróxido de sodio acuoso (2 M, 3 ml). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 1 h an
tes de la adición de agua (20 ml). Se agitó la reacción durante 1 h más. Se añadió diclorometano (60 ml) y se agitó
la mezcla y se separaron las capas. Se extrajo la fase acuosa con más diclorometano (50 ml) antes de que la fase 25 orgánica reunida se secara (separador de fases) y se separara el disolvente en vacío para dar el compuesto del epí
grafe como un sólido blanco, (849 mg, 3,80 mmol). MS (ES): C14H9NO2 requiere 223; encontrado 222 (M-H+).
Descripción de D22 4-Cloro-3-(trifluorometil)benzoato de etilo (D22)
Cl
Se disolvió ácido 4-cloro-3-(trifluorometil)benzoico (1 g, 4,45 mmol) en etanol (3 ml) y se añadió ácido sulfúrico concentrado (0,15 ml). Se calentó la mezcla en el microondas a 100 °C durante 5 minutos y después a 120 °C durante
5 15 minutos. Se separó el disolvente en vacío y se sometió el residuo a reparto entre bicarbonato de sodio saturado acuoso (50 ml) y acetato de etilo (50 ml). Se extrajo la capa acuosa con más EtOAc (50 ml) y las fases orgánicas se reunieron, se secaron con un separador de fases y se concentraron en vacío para dar el compuesto del epígrafe (1,026 g) como un aceite incoloro. δH (metanol-d4, 400 MHz) 1,40 (3H, t), 4,41 (2H, q), 7,76 (1H, d), 8,21 (1H, dd), 8,33 (1H, d).
10 Descripción de D22 (procedimiento alternativo)
4-Cloro-3-(trifluorometil)benzoato de etilo (D22)
Una solución de ácido 4-cloro-3-trifluorometil-benzoico (10 g, 44,5 mmol) en etanol (10 ml), se dividió a partes iguales entre dos viales de microondas. Se añadió ácido sulfúrico concentrado (0,75 ml) a cada vial (1,5 ml en total). Se
15 calentaron las reacciones en el microondas a 120 °C durante 30 minutos en total. Se reunieron las mezclas de reacción y se concentraron en vacío. Se sometió el residuo a reparto entre EtOAc (100 ml) y bicarbonato de sodio acuoso (100 ml), se separó la fase orgánica, se lavó con bicarbonato de sodio acuoso (100 ml) y agua (2 x 100 ml) y después se secó (separador de fases) y se separó el disolvente en vacío para dar el compuesto del epígrafe (4,126 g) como un aceite incoloro. δH (400 MHz, metanol-d4) consistente con el ejemplo anterior.
20 Descripción de D23
Ácido 2-(trifluorometil)-4-bifenilcarboxílico (D23)
Se dividió la reacción en 4 partes, usando un cuarto de los reactivos en cada una: a una mezcla de 4-bromo-3(trifluorometil)benzonitrilo (4 g, 16,00 mmol), ácido fenilborónico (3,90 g, 32,0 mmol) y carbonato de potasio (6,63 g, 25 48,0 mmol) en N,N-dimetilformamida (DMF) (64 ml), se añadió paladio-tetrakistrifenilfosfina(0) (1,849 g, 1,600 mmol). Se calentó cada reacción en el microondas a 150 ºC durante 30 min. Las mezclas de reacción reunidas se filtraron a través de celita, se lavaron con acetato de etilo y se separó el disolvente en vacío. Se sometió el residuo a reparto entre acetato de etilo (100 ml) y agua (100 ml) y se lavó la fase orgánica con solución de bicarbonato de so-dio (100 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO4), se filtró y se separó el disolvente en vacío. Se trituró el aceite pardo con diclorometano y se filtró para dar un sólido amarillo pálido, 2-(trifluorometil)-4-bifenilcarboxamida (2,47 g), que se usó sin purificación adicional. A 2-(trifluorometil)-4-bifenilcarboxamida (2 g, 7,54 mmol) en etanol (80 ml), se añadie5 ron hidróxido de potasio (4,23 g, 75 mmol) y agua y se calentó la mezcla a 90 ºC durante 18 h. Se concentró la mezcla de reacción en vacío y se sometió el residuo a reparto entre diclorometano (100 ml) y HCl 2 M (100 ml). Se aisló la fase orgánica y se secó (separador de fases) y se separó el disolvente en vacío para dar el producto crudo. Por purificación usando el Biotage Horizon, cartucho de fase reversa, eluyendo con MeCN al 5-100 % en agua, se obtuvo el compuesto del epígrafe como un sólido de color blanco sucio (960 mg). MS (ES): C14H9F3O2 requiere 266; en
10 contrado 265 (M-H+).
Descripción de D23 (procedimiento alternativo)
Ácido 2-(trifluorometil)-4-bifenilcarboxílico (D23)
Lote A: Una mezcla de 4-cloro-3-(trifluorometil)benzoato de etilo (D22)
15 (1,0 g, 3,96 mmol), ácido fenil-borónico (724 mg, 5,94 mmol), acetato de paladio (44 mg), (diciclohexilfosfino)bifenilo (140,2 mg) y fluoruro de potasio (689 mg, 11,9 mmol) en THF (8 ml), se calentó en el microondas a 120 °C durante un total de 40 minutos.
Lote B: Una mezcla de 4-cloro-3-(trifluorometil)benzoato de etilo (D22) (500 mg, 1,98 mmol), ácido fenil-borónico (290 mg, 2,38 mmol), acetato de paladio (2,2 mg), (diciclohexilfosfino)bifenilo (7 mg) y fluoruro de potasio (344 mg,
20 5,8 mmol) en THF (4 ml), se calentó en el microondas a 120 °C durante 20 minutos.
Las mezclas de reacción de los lotes A y B se reunieron, se filtraron y el filtrado se concentró en vacío. Se purificó el residuo por cromatografía rápida (SiO2, EtOAc de 0 a 5 % en hexano) para dar una mezcla de material de partida y producto acoplado. Se disolvió este material en etanol (10 ml) y NaOH 2 M (acuoso) (5 ml) y después se calentó a reflujo durante 3 h. Se separó el disolvente en vacío y se sometió el residuo a reparto entre DCM y HCl 2 M acuoso.
25 La capa acuosa se extrajo con más DCM. Las fases orgánicas se reunieron y se concentraron en vacío. El material crudo se purificó por cromatografía de fase reversa sobre el Horizon eluyendo con MeCN de 5 a 100 % en agua para obtener el compuesto del epígrafe como un sólido blanco (367 mg) (DN108121-170A2, GSK1869780A). MS (ES): C14H9F3O2 requiere 266; encontrado 265 (M-H+).
Descripción de D24
30 3-Ciano-4-(2-metilpropil)benzoato de metilo (D24)
A 3-ciano-4-{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}benzoato de metilo (D19) (1,5 g, 4,85 mmol) se añadió bromo(2metilpropil)cinc (48,5 ml, 24,25 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) bajo argón. Se añadió entonces a la solución com
plejo de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocenodicloro-paladio(II) en diclorometano (0,355 g, 0,485 mmol) y se calentó la reacción a reflujo durante 6 h. Se sofocó la mezcla con agua (2 ml) y después se filtró a través de celita, lavando con acetato de etilo. Se separó el disolvente en vacío. Se sometió el residuo a reparto entre acetato de etilo (50 ml) y agua (50 ml) y la fase orgánica se secó (separador de fases) y el disolvente se separó en vacío. Se purificó el residuo por cromatografía sobre sílice, eluyendo con EtOAc al 0-15 % en iso-hexano a lo largo de 40 min. Se recogieron dos lotes, uno de los cuales era el compuesto del epígrafe como un aceite incoloro (233 mg, 1,072 mmol). δH (CDCl3, 400 MHz): 8,28 (1H, d), 8,15 (1H, dd), 7,38 (1H, d), 3,94, 3H, s), 2,78 (2H, d), 2,02 (1H, m), 0,96 (6H, d).
Descripción de D25
Ácido 3-ciano-4-(2-metilpropil)benzoico (D25)
10
Se disolvió 3-ciano-4-(2-metilpropil)benzoato de metilo (D24) (233 mg, 1,072 mmol) en etanol (4 ml) y se añadió hidróxido de sodio 2 M acuoso (1 ml, 2 mmol). Se agitó la reacción durante 1 h. Se añadió HCl 2 M acuoso (10 ml) y se extrajo la mezcla con diclorometano (20 ml + 10 ml). Se aislaron las fases orgánicas y se secaron por separador de fases y se reunieron antes de que se separara el disolvente en vacío para dar el compuesto del epígrafe como un
15 sólido blanco (203 mg, 0,999 mmol). MS (ES): C12H13NO2 requiere 203; encontrado 202 (M-H+).
Descripción de D26
5-Formil-2-{[(1S)-1-metilpropil]oxi}benzonitrilo (D26)
NC
Se disolvió (2S)-2-butanol (0,99 g, 0,013 mol) en DMF (50 ml) y se enfrió la solución a 0 ºC. Se añadió a esto hidruro
20 de sodio, (dispersión al 60 % en aceite mineral, 1,54 g, 0,036 mol) en porciones, se agitó la mezcla a 0 ºC durante 10 minutos después de completar la adición. Se añadió entonces 2-fluoro-5-formilbenzonitrilo (2,0 g, 0,013 mol) y se dejó que se calentara la mezcla de reacción a temperatura ambiente (lentamente dentro del baño de hielo) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se enfrió entonces la mezcla de reacción a 0 ºC, se sofocó con salmuera y se diluyó con EtOAc (~25 ml). Se sometió la mezcla a reparto y la fracción orgánica se extra
25 jo con agua (~30 ml), los extractos orgánicos reunidos se secaron pasando a través de un cartucho de separación de fases y después se evaporaron a sequedad a presión reducida para dar el producto crudo. Se purificó el residuo crudo sobre un cartucho 40+M Biotage, eluyendo con una mezcla de EtOAc al 20 a 50 % en hexano. Esto dio el compuesto del epígrafe (220 mg) como un sólido blanco. MS (ES): C12H13NO2 requiere 203; encontrado 204 (MH+).
30 Descripción de D27
Ácido 3-ciano-4-{[(1S)-1-metilpropil]oxi}benzoico (D27)
NC
A una solución de 5-formil-2-{[(1S)-1-metilpropil]oxi}benzonitrilo (D26) (220 mg, 1,08 mmol) en ácido acético (20 ml), se añadió perborato de sodio tetrahidratado (334 mg, 2,17 mmol), se calentó la mezcla de reacción a 50 ºC durante el fin de semana. Se concentró la mezcla de reacción en vacío. Se añadió agua (~50 ml), se añadió EtOAc (~30 ml) y se realizó el reparto entre las capas, se extrajo la capa acuosa dos veces más con EtOAc (~30 ml) y los extractos orgánicos reunidos se evaporaron a sequedad a presión reducida para dar el compuesto del epígrafe (245 mg) como un sólido de color blanco sucio. MS (ES): C12H13NO2 requiere 219; encontrado 220 (MH+).
Descripción de D28
5-Formil-2-{[(1R)-1-metilpropil]oxi}benzonitrilo (D28).
NC
10 Se disolvió (2R)-2-butanol (0,99 g, 0,013 mol) en DMF (50 ml) y la solución se enfrió a 0 ºC. Se añadió a esto hidruro de sodio, (dispersión al 60 % en aceite mineral, 1,54 g, 0,036 mol) en porciones, se agitó la mezcla a 0 ºC durante 10 minutos después de completar la adición. Se añadió entonces 2-fluoro-5-formilbenzonitrilo (2,0 g, 0,013 mol) y se dejó que se calentara la mezcla de reacción a temperatura ambiente (lentamente dentro del baño de hielo) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se enfrió entonces la mezcla de reacción a 0 ºC, se
15 sofocó con salmuera y se diluyó con EtOAc (~25 ml). Se sometió la mezcla a reparto y la fracción orgánica se extrajo con agua (~30 ml), los extractos orgánicos reunidos se secaron pasando a través de un cartucho de separación de fases y se evaporaron a sequedad a presión reducida para dar el producto crudo. Se purificó el residuo crudo sobre un cartucho 40+M Biotage, eluyendo con una mezcla de EtOAc de 20 a 50 % en hexano. Esto dio el compuesto del epígrafe (310 mg) como un aceite amarillo. δH (d6-DMSO, 400 MHz): 9,88 (1H, s), 8,30 (1H, s), 8,15 (1H,
20 d), 7,49 (1H, d), 4,73-4,81 (1H, m), 1,63-1,79 (2H, m), 1,33 (3H, d), 0,95 (3H, t).
Descripción de D29
Ácido 3-ciano-4-{[(1R)-1-metilpropil]oxi}benzoico (D29)
A una solución de 5-formil-2-{[(1R)-1-metilpropil]oxi}benzonitrilo (D37) (310 mg, 1,53 mmol) en ácido acético (30 ml),
25 se añadió perborato de sodio tetrahidratado (471 mg, 3,05 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 50 ºC durante el fin de semana. Se concentró en vacío la mezcla de reacción y se añadió agua (~50 ml), se añadió EtOAc (~30ml) y se hizo el reparto entre las capas, se extrajo la capa acuosa dos veces más con EtOAc (~30 ml) y los extractos orgánicos reunidos se evaporaron a sequedad a presión reducida para dar el compuesto del epígrafe (315 mg) como un sólido de color blanco sucio. MS (ES): C12H13NO2 requiere 219; encontrado 220 (MH+).
Descripción de D30
5-Cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridincarboxilato de 1-metiletilo (D30)
Se suspendió ácido 5-cloro-6-hidroxi-3-piridincarboxílico (3,00 g, 17,28 mmol) en tolueno (75 ml) y se trató con carbonato de plata (12,4 g, 24,8 mmol) y 2-yodopropano (6,9 ml, 69,12 mmol) y se agitó a temperatura ambiente en la oscuridad durante 18 horas. Se filtró la mezcla y se evaporó el filtrado para dar el compuesto del epígrafe con impurezas (1,32 g). δH (d6-DMSO) 1,31 (6H, d), 1,35 (6H, d), 5,13 (1H, septete), 5,40 (1H, septete), 8,22 (1H, d), 8,65 (1H, d).
Descripción de D30 (procedimiento alternativo)
5-Cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridincarboxilato de 1-metiletilo (D30)
10
Se suspendió ácido 5-cloro-6-hidroxi-3-piridincarboxílico (1 g, 5,76 mmol) en tolueno (200 ml) y se trató con carbonato de plata (3,97 g, 14,40 mmol) y 2-yodopropano (3,46 ml, 34,6 mmol) y se agitó a temperatura ambiente en la oscuridad durante 3 días. Se añadió más 2-yodopropano (3 ml) y se agitó durante 24 horas. Se añadió EtOAc (200 ml) y se lavó con agua (200 ml) y NaHCO3 saturado (50 ml) seguido por agua (200 ml). Se secó sobre MgSO4 y se se
15 paró el disolvente por evaporación para dar 1,0 g del compuesto del epígrafe como un aceite incoloro límpido, que se usó sin caracterización adicional.
Descripción de D30 (procedimiento alternativo) 5-Cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridincarboxilato de 1-metiletilo (D30)
Se añadió 2-yodopropano (12,42 ml, 124 mmol) a una suspensión de ácido 5-cloro-6-hidroxi-3-piridincarboxílico (comercialmente disponible de Fluka, 5,4 g, 31,1 mmol) y Ag2CO3 (21,45 g, 78 mmol) en CHCl3 (200 ml) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 3 días. Se separó el precipitado por filtración y se separó el disolvente en vacío para dar el compuesto del epígrafe (4 g, 47 %) como un aceite amarillo que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. MS (ES) C12H16ClNO3 requiere 257; encontrado 258 [M+H]+
Descripción de D31
Ácido 5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridincarboxílico (D31)
10
Se trató con hidróxido de sodio 2 N (6,21 ml, 12,42 mmol), 5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridincarboxilato de 1metiletilo (D30) (1,6 g, 6,21 mmol) en isopropanol (70 ml) y agua (35,0 ml), y se agitó durante 3 horas para dar un único producto. Se separó el IPA por evaporación, se acidificó con ácido acético glacial y se extrajo el producto con EtOAc (100 ml). Se secó sobre MgSO4 y se separó el disolvente por evaporación para dar 1,30 g del compuesto del
15 epígrafe como un sólido blanco. MS (ES) C9H1035ClNO3 requiere 215; encontrado 214 (M-H+).
Descripción de D31 (procedimiento alternativo)
Ácido 5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridincarboxílico (D31)
Se añadió hidróxido de sodio (29,1 ml, 58,2 mmol) a una solución de 5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridincarboxilato de 1-metiletilo (D30) (3 g, 11,64 mmol) en metanol (25 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se evaporó el disolvente antes de neutralizar con HCl 2 M y extraer con éter. Se secó entonces sobre sulfato de magnesio y se evaporó para dar un sólido blanco impuro. Por trituración con DCM se obtuvo el compuesto del epígrafe como un sólido blanco puro. MS (ES) C9H10ClNO3 requiere 215; encontrado 216 [M+H]+
Descripción de D32
4-(1-Ciclohexen-1-il)-3-(trifluorometil)benzamida (D32)
CF3
Se añadieron a metanol seco (12 ml), 4-bromo-3-(trifluorometil)benzonitrilo (comercial) (1,2 g, 4,80 mmol), ácido 1
10 ciclohexen-1-ilborónico (0,907 g, 7,20 mmol), metóxido de sodio (0,778 g, 14,40 mmol) y cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio(II) (0,337 g, 0,480 mmol) y se calentó la mezcla en el microondas a 80 °C durante 10 minutos. Se sometió la mezcla de reacción a reparto entre acetato de etilo (40 ml) y agua (40 ml) y después se lavó la fase orgánica con más agua (40 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO4), se filtró y se separó el disolvente en vacío.
Se purificó el producto crudo por cromatografía rápida sobre sílice, eluyendo con acetato de etilo al 0-75 % en hexa
15 no para dar el compuesto del epígrafe como un sólido blanco (1,02 g). MS (ES): C14H14F3NO requiere 269; encontrado 270 (MH+).
Descripción de D33
4-Ciclohexil-3-(trifluorometil)benzamida (D33)
CF3
20 Se disolvió en metanol (63 ml), 4-(1-ciclohexen-1-il)-3-(trifluorometil)benzamida (D32) (850 mg, 3,16 mmol) y se hidrogenó usando una cubeta de H, usando paladio sobre carbono a 40 ºC con un caudal de 2 ml/min. Se separó el disolvente en vacío para dar el compuesto del epígrafe como un sólido blanco (822 mg). MS (ES): C14H16F3NO requiere 271; encontrado 272 (MH+).
Descripción de D34
25 Ácido 4-ciclohexil-3-(trifluorometil)benzoico (D34)
CF3
A una solución de 4-ciclohexil-3-(trifluorometil)benzamida (D33) (822 mg, 3,03 mmol) en etanol (40 ml), se añadió hidróxido de potasio (1,700 g, 30,3 mmol) y agua (5 ml) y se calentó la reacción a 90 ºC, temperatura de bloque, durante 3 h y se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Se añadió más hidróxido de potasio (1,700 g, 30,3 30 mmol) y se calentó la reacción a reflujo durante 27 h. Se añadieron 5 ml más de agua y se calentó la reacción durante 66 horas (fin de semana). Se concentró en vacío la mezcla de reacción y se sometió el residuo a reparto entre acetato de etilo (25 ml) y ácido clorhídrico acuoso (2 M, 25 ml). Se extrajo además la capa acuosa con acetato de etilo (25 ml) y las fases orgánicas reunidas se secaron (MgSO4), se filtraron y se separó el disolvente en vacío para dar el compuesto del epígrafe como un sólido blanco (737 mg). MS (ES): C14H15F3O2 requiere 272; encontrado 271
35 (M-H+).
Descripción de D35
4-[(1-Metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)benzoato de 1-metiletilo (D35)
Una mezcla de ácido 4-hidroxi-3-(trifluorometil)benzoico (comercial) (450 mg, 2,18 mmol), 2-yodopropano (435 µl,
5 4,36 mmol) y carbonato de potasio (603 mg, 4,36 mmol) en N,N’-dimetilformamida (40 ml), se calentó a 70 °C durante 4 h antes de que se añadiera más 2-yodopropano (218 µl, 2,18 mmol) y se continuó calentando durante 18 h. Se separó el sólido inorgánico por filtración y se lavó con acetato de etilo. Se concentró el filtrado en vacío y se sometió a reparto entre acetato de etilo (150 ml) y agua (150 ml) que contenía algo de hidróxido de sodio acuoso. Se secó la capa orgánica (separador de fases) y se concentró en vacío para dar el compuesto del epígrafe crudo (704 mg) co
10 mo un aceite amarillo. MS (ES): C14H17F3O3 requiere 290; encontrado 291 (MH+).
Descripción de D36
Ácido 4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)benzoico (D36)
OH
A una mezcla de 4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)benzoato de 1-metiletilo (D35) (704 mg, 2,43 mmol) en etanol 15 (110 ml), se añadió hidróxido de sodio acuoso (2 M, 12,2 ml, 24,3 mmol) y se calentó la reacción a reflujo durante 1
h. Se concentró la mezcla en vacío y el residuo se sometió a reparto entre acetato de etilo (100 ml) y agua (100 ml) y se acidificó con ácido clorhídrico acuoso (2 M, 13 ml). Se extrajo la capa acuosa con más acetato de etilo (100 ml) y las capas orgánicas reunidas se secaron y se concentraron en vacío para dar el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo (563 mg). MS (ES): C11H11F3O3 requiere 248; encontrado 247 (M-H+).
20 Descripción de D37
3-Cloro-4-(propiloxi)benzoato de metilo (D37)
O
Se disolvió 4-hidroxi-3-clorobenzoato de metilo (10 g, 53,6 mmol) en DMF (110 ml) y después se añadió carbonato de potasio (14,8 g, 107,2 mmol) seguido por yoduro de n-propilo (10,4 ml, 107,2 mmol). Se calentó la reacción a 70 °C durante la noche, se filtró y después el filtrado se sometió a reparto entre EtOAc y agua. Se separó la capa orgánica, se secó y se evaporó para dar el compuesto del epígrafe como un aceite amarillo (12,37 g). MS (ES) C11H1335ClO3 requiere 228; encontrado 229 (MH+).
Descripción de D38
Ácido 3-cloro-4-(propiloxi)benzoico (D38)
O
Una solución de 3-cloro-4-(propiloxi)benzoato de metilo (D37) (RD108825-58-B1) (12,22 g, 0,053 mol) en etanol (40
10 ml) y NaOH 2 M acuoso (40 ml), se calentó a 60 °C durante 3 horas. Se dejó que se enfriara la reacción y después se mantuvo a temperatura ambiente durante el fin de semana. Se vertió la mezcla de reacción sobre una mezcla de HCl acuoso diluido y EtOAc. Se separó la capa orgánica, se secó y se evaporó para dar un sólido que se trituró con éter para dar el compuesto del epígrafe como un sólido blanco (7,7 g). MS (ES) C10H1135ClO3 requiere 214; encontrado 213 (M-H+).
15 Descripción de D39
3-Cloro-4-(1-pirrolidinil)benzoato de etilo (D39)
Una mezcla de 4-bromo-3-clorobenzoato de etilo (D16) (2,53 g, 9,62 mmol), pirrolidina (1,03 ml, 12,5 mmol), tercbutóxido de sodio (1,29 g, 13,5 mmol), BINAP (196 mg, 0,29 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (58 mg, 20 0,10 mmol) en tolueno (120 ml), se calentó a reflujo bajo argón durante 3 h. Se dejó que se enfriara la reacción y se filtró. Se lavó el sólido con tolueno y después se concentró el filtrado. Se sometió el residuo a reparto entre acetato de etilo (150 ml) y agua (100 ml) con bicarbonato de sodio acuoso (50 ml) añadido. Se secó la fase orgánica (separador de fases) y se concentró para dar un aceite naranja. Se purificó el aceite por cromatografía en fase reversa, eluyendo con acetonitrilo de 5-100 % en agua para dar el compuesto del epígrafe como un aceite naranja (600 mg).
25 Este contenía algunas impurezas. MS (ES): C13H1635ClNO2 requiere 253; encontrado 254 (MH+).
Se preparó más compuesto del epígrafe (85 mg) por un método similar.
Descripción de D40
Ácido 3-cloro-4-(1-pirrolidinil)benzoico (D40)
Una mezcla de 3-cloro-4-(1-pirrolidinil)benzoato de etilo (D39) (685 mg, 2,71 mmol) e hidróxido de sodio acuoso (2 M, 1,36 ml, 2,72 mmol) en etanol (15 ml), se calentó a 40 ºC durante 17 h. Se añadió más hidróxido de sodio (1,36
5 ml, 2,72 mmol) y se calentó la reacción durante otras 8 h. Se concentró la mezcla y se disolvió el residuo en agua (100 ml). Se lavó la fase acuosa con acetato de etilo (2 x 100 ml) y después se acidificó a pH 6. Se formó un sólido blanco y de aquí se separó por filtración, se lavó con agua y se secó en una estufa de vacío para dar el compuesto del epígrafe como un sólido de color blanco sucio (362 mg). MS (ES): C11H1235ClNO2 requiere 225; encontrado 226 (MH+).
10 Descripción de D41
2-(Ciclopentiloxi)-5-formilbenzonitrilo (D41)
O
Una solución de ciclopentanol (1,15 g, 0,013 mol) en DMF (50 ml), se enfrió a 0 °C. Se añadió hidruro de sodio (1,54
g, 0,016 mol) en porciones a la solución y se agitó la mezcla a 0 °C durante 10 minutos después de completar la 15 adición. Se añadió entonces 3-ciano-4-fluorobenzaldehído (comercial) (2,0 g, 0,013 mol) y se dejó que se calentara
la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se enfrió la mezcla de reacción a 0 °C y se añadió
salmuera, se diluyó la mezcla con acetato de etilo (~25 ml) y se sometió a reparto, la capa orgánica se lavó con
agua (~30 ml) y se pasó a través de un cartucho separador de fases para secar. Se concentró la solución en vacío y
se purificó el residuo por Biotage SP4, 40M con acetato de etilo al 20-60 % /hexano como eluyente. Las fracciones 20 que contienen el producto se concentraron en vacío para dar el compuesto del epígrafe (1,02 g, 4,2 mmol) como un
líquido amarillo. MS (ES): C13H13NO2 requiere 215; encontrado 216 (MH+).
Descripción de D42
Ácido 3-ciano-4-(ciclopentiloxi)benzoico (D42)
O
A una solución de (D41) (0,13 g, 0,604 mmol) en ácido acético (20 ml) a 50 ºC, se añadió perborato de sodio te
5 trahidratado (0,186 g, 1,208 mmol) en porciones. Se agitó la mezcla de reacción a 50 ºC durante la noche. Se continuó agitando a 50 ºC durante 48 h, se añadió perborato de sodio tetrahidratado (0,093 g, 0,604 mmol) a la mezcla de reacción y se continuó agitando durante 2 días más, se dejó entonces la mezcla de reacción en reposo durante 2 días a temperatura ambiente.
Se separó el disolvente en vacío y se sometió la mezcla a reparto entre acetato de etilo (~20 ml) y agua (~20 ml), se
10 extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (2 x ~15 ml) y las capas orgánicas reunidas se concentraron en vacío para dar el compuesto del epígrafe (106 mg, 0,435 mmol) como un sólido amarillo. MS (ES): C13H13NO3 requiere 231; encontrado 230 (M-H+).
Descripción de D43
5-[3-(1H-Indazol-5-il)-1,2,4-oxadiazol-5-il]-2-[(1-metiletil)oxi]benzonitrilo (D43)
15
Se disolvieron en DMF (30 ml), ácido 3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]benzoico (se puede preparar como se describe en el documento WO2005/58848) (1,52 g), EDAC (2,14 g) y HOBt (1,51 g), y después se agitaron durante 5 minutos. Se añadió N-hidroxi-1H-indazol-5-carboximidamida (D2) (1,3 g) y se calentó la reacción a 80 °C durante 6 horas y se dejó que se enfriara durante la noche. Se separó el disolvente en vacío y el crudo se sometió a reparto entre EtOAc
20 y bicarbonato de sodio acuoso. Se separó la capa orgánica, se secó y se evaporó a sequedad en vacío. Se trituró el sólido resultante con éter y acetato de etilo, se lavó con metanol y éter para dar el compuesto del epígrafe (816 mg) como un sólido rosa. MS (ES): C19H15N5O2 requiere 345; encontrado (MH+) 346
Descripción de D43 (procedimiento alternativo)
5-[3-(1H-Indazol-5-il)-1,2,4-oxadiazol-5-il]-2-[(1-metiletil)oxi]benzonitrilo (D43)
Se disolvieron cloruro de 3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]benzoilo (D106) (545 mg, 2,437 mmol) y N-hidroxi-1H-indazol-5carboximidamida (D2) (685 mg, 2,437 mmol) en acetonitrilo (30 ml), antes de añadir trietilamina (0,374 ml, 2,68 mmol). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 3 h y después a 80 ºC durante 48 h y después se enfrió a temperatura ambiente. Se separó por filtración el precipitado formado y se disolvió en EtOAc y se lavó
5 con agua, se evaporó y se cromatografió [EtOAc al 0-15 % en ciclohexano] para dar el compuesto del epígrafe (170 mg, 17 %) como un sólido rosa. MS (ES): C19H15N5O2 requiere 345; encontrado (MH+) 346
Descripción de D44 y D45
4-[5-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2Hindazol-2-il]butanoato de etilo (D44) y 4-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol10 2-il]butanoato de etilo (D45)
O
N
N
N
O
O N
Se disolvió 5-[3-(1H-indazol-5-il)-1,2,4-oxadiazol-5-il]-2-[(1-metiletil)oxi]benzonitrilo (D43) (200 mg, 0,58 mmol) en DMF (5 ml) y se añadieron Cs2CO3 (567 mg, 1,74 mmol) y 4-bromobutanoato de etilo (0,166 ml, 1,16 mmol). Se calentó la reacción a 80 °C durante 12 horas y después se dejó que se enfriara. La mezcla de reacción se sometió a 15 reparto entre agua y EtOAc. Se separó la capa orgánica, se secó y se evaporó en vacío para generar el producto crudo que se purificó por cromatografía rápida (EtOAc/gasolina para uso técnico 1:6 a 1:1) para generar 4-[5-(5-{3ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoato de etilo (D44) (151 mg) como un sólido blanco. δH (d6-DMSO) 1,14 (3H, t), 1,39 (6H, d), 2,04-2,18 (2H, m), 2,31 (2H, t), 4,01 (2H, q), 4,51 (2H, t), 4,99 (1H, septete), 7,57 (1H, d), 7,87 (1H, d), 8,08 (1H, dd), 8,29 (1H, d), 8,43 (1H, dd), 8,52 (1H, d), 8,57-8,58 (1H, m). MS
20 (ES): C25H25N5O4 requiere 459; encontrado (MH+) 460 y RD108825-187A2 4-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]butanoato de etilo (D45) (66 mg) como un sólido blanco. δH (d6-DMSO) 1,16 (3H, t), 1,37 (6H, d), 2,14-2,26 (2H, m), 2,32 (2H, t), 4,03 (2H, q), 4,51 (2H, t), 4,99 (1H, septete), 7,57 (1H, d), 7,787,80 (1H, m), 7,89 (1H, dd), 8,42 (1H, dd), 8,52 (1H, d), 8,57-8,58 (1H, m), 8,62 (1H, s). MS (ES) C25H25N5O4 requiere 459; encontrado (MH+) 460.
25 Descripción de D46
[5-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]acetato de etilo (D46)
O
N
O
N
N
O
N
Se preparó de una manera similar a (D44) a partir de 5-[3-(1H-indazol-5-il)-1,2,4-oxadiazol-5-il]-2-[(1metiletil)oxi]benzonitrilo (D43) y bromoacetato de etilo. Se purificó el material crudo por trituración con éter dietílico para dar el compuesto del epígrafe como un sólido amarillo. MS (ES) C23H21N5O4 requiere 431; encontrado (MH+)
432.
Descripción de D47
3-(5-Ciano-1H-indazol-1-il)propanoato de etilo (D47)
O
A una solución de 1H-indazol-5-carbonitrilo (D1) (2,8 g, 19,72 mmol) en DMF (60 ml), se añadió carbonato de cesio (12,86 g, 39,4 mmol) seguido por 3-bromopropanoato de etilo (3,8 ml, 29,6 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a
10 80 °C durante 3 horas y después se dejó que se enfriara. Se separó el disolvente en vacío y se sometió el material crudo a reparto entre EtOAc (x2) y agua, los extractos orgánicos se reunieron, se secaron y se evaporaron. El crudo se sometió a azeotropía con tolueno y después se purificó por cromatografía rápida (EtOAc/hexano 1:3) para dar 3,75 g de un sólido rosa que después de trituración con hexano dio el compuesto del epígrafe (3,2 g) como un sólido rosa. MS (ES): C13H13N3O2 requiere 243 encontrado (MH+) 244.
15 Descripción de D47 (procedimiento alternativo)
3-(5-Ciano-1H-indazol-1-il)propanoato de etilo (D47)
O
A una solución de 1H-indazol-5-carbonitrilo (D1) (3,88 g, 27,3 mmol) en DMF (85 ml), se añadió Cs2CO3 (17,8 g, 54,6 mmol) y después se añadieron 3-bromopropanoato de etilo (3,5 ml), 27 mmol) y 3-cloropropanoato de etilo (3,3
20 g, 24,2 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a 80 °C durante 4 horas y después se dejó que se enfriara. Se separó el disolvente en vacío y el material crudo se sometió a reparto entre EtOAc y agua, los extractos orgánicos se separaron, se lavaron con salmuera, se secaron y se evaporaron. El crudo se sometió a azeotropía con tolueno y después se purificó por cromatografía rápida (EtOAc/hexano 1:9 a 1:1) para dar 3,84 g de una goma amarilla. Los datos MS son como los del ejemplo anterior.
Descripción de D47 (procedimiento alternativo) 3-(5-Ciano-1H-indazol-1-il)propanoato de etilo (D47)
Se disolvió 1H-indazol-5-carbonitrilo (D1) (3,5 g, 24,45 mmol) en N,N-dimetilformamida (60 ml) y se añadieron carbonato de cesio (15,93 g, 48,9 mmol) y 3-bromopropanoato de etilo (4,68 ml, 36,7 mmol). Se calentó la mezcla a 80 5 ºC durante 4 horas. Se diluyó con EtOAc y se lavó con agua (3 x 40 ml), se secó sobre MgSO4 y se evaporó. Se purificó la mezcla por cromatografía rápida, eluyendo con EtOAc/iso-hexano al 10-30 % y después al 10-20 % para dar 3,682 g para el primer isómero (aceite amarillo) y 1,509 g para el segundo isómero (sólido rosa). El análisis del primer isómero por 1H NMR indicó que era el 1-isómero contaminado con el 2-isómero (aproximadamente 20 %) δH (d6-DMSO, 400MHz) 1,05 (3H, t), 2,95 (2H, t), 3,97 (2H, q), 4,69 (2H, t), 7,74 (1H, dd), 7,92 (1H, dt), 8,28 (1H, d),
10 8,38 (1H, dd). EM (ES+): C13H13N3O2 requiere 243; encontrado (MH+) 244.
Descripción de D48
Una mezcla de 4-(4-ciano-2H-indazol-2-il)butanoato de etilo y 4-(4-ciano-1H-indazol-1-il)butanoato de etilo (D48)
Nimagen1
N N
N
CO2Et
EtO2C
15 Una mezcla de 4-bromobutanoato de etilo (0,390 g, 1,998 mmol), 1H-indazol-4-carbonitrilo (0,143 g, 0,999 mmol) y carbonato de cesio (0,976 g, 3,00 mmol) en N,N-dimetilformamida (4 ml), se agitó y se calentó a 80 °C durante 90 minutos. Se enfrió, se diluyó con acetato de etilo/agua (30 ml de cada uno) y la capa orgánica se lavó con 3 x 15 ml de agua, se secó (sulfato de magnesio), se evaporó y se purificó por cromatografía rápida eluyendo con acetato de etilo/hexano 1:2 para dar una separación parcial de los dos isómeros que después de caracterización se reunieron
20 para dar la mezcla de isómeros del epígrafe (249 mg). δH (CDCl3, 400MHz) para el 1-isómero: 1,24 (3H, t), 2,29 (4H, m), 4,12, (2H, q), 4,53 (2H, t), 7,45 (1H, dd), 7,54 (1H, dd), 7,71 (1H, dd), 8,19 (1H, d). δH (CDCl3, 400MHz) para el 2-isómero 1,25 (3H, t), 2,35 (4H, m), 4,14, (2H, q), 4,58 (2H, t), 7,33 (1H, dd), 7,54 (1H, dd), 7,96 (1H, dd), 8,15 (1H, d).
Descripción de D48 (procedimiento alternativo)
Una mezcla de 4-(4-ciano-2H-indazol-2-il)butanoato de etilo y 4-(4-ciano-1H-indazol-1-il)butanoato de etilo (D48)
Una mezcla de 4-bromobutanoato de etilo (5,36 ml, 37,4 mmol), 1H-indazol-4-carbonitrilo (2,68 g, 18,72 mmol) y
5 carbonato de cesio (18,30 g, 56,2 mmol) en N,N-dimetilformamida (50 ml), se calentó a 80 °C durante 90 minutos. Se enfrió, se diluyó con EtOAc/agua y la capa orgánica se lavó con 3 x 30 ml de agua, se secó (sulfato de magnesio) y se evaporó. Se purificó por cromatografía rápida eluyendo con EtOAc/hexano 1:3 para dar la mezcla de isómeros del epígrafe (4,7 g) como un aceite amarillo. EM (ES+): C14H15N3O2 requiere 257; encontrado (MH+) 258.
Descripción de D49
10 Una mezcla de 3-(4-ciano-2H-indazol-2-il)propanoato de etilo y 3-(4-ciano-1H-indazol-1-il)propanoato de etilo (D49)
CNCN
N N
N O
O O Una mezcla de 3-bromopropanoato de etilo (1,808 g, 9,99 mmol), 1H-indazol-4-carbonitrilo (0,715 g, 4,99 mmol) y carbonato de cesio (4,88 g, 14,98 mmol) en N,N-dimetilformamida (DMF) (10 ml), se agitó y se calentó a 80 °C du
15 rante 2 horas. Se enfrió, se diluyó con acetato de etilo (40 ml) y agua (40 ml) y la capa orgánica se lavó con 3 x 15 ml de agua, se secó (sulfato de magnesio), se evaporó y se purificó por cromatografía rápida eluyendo con acetato de etilo/hexano 3:7 para dar 1,19 g de aceite incoloro que cristalizó lentamente como un sólido blanco. Por NMR y LC/MS se demostró que éste era una mezcla ~3:1 de isómeros. MS (ES): C13H13N3O2 requiere 243 encontrado (MH+) 244.
Descripción de D50 y D51
4-(5-Ciano-1H-indazol-1-il)butanoato de etilo (D50) y 4-(5-ciano-2H-indazol-2-il)butanoato de etilo (D51)
NC
N
N
N imagen1
N
O O O
A una solución de 1H-indazol-5-carbonitrilo (D1) (1,93 g, 13,59 mmol) en DMF (45 ml), se añadió carbonato de cesio (9,1 g, 27,9 mmol) y después 4-bromobutanoato de etilo (2,92 ml, 20,4 mmol). Se calentó la reacción a 80 °C duran5 te 6 horas. Se separó la mayor parte de la DMF en vacío y se sometió el material resultante a reparto entre acetato de etilo y agua, los extractos orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron y se evaporaron para obtener 4 g de una goma. Se purificó el material crudo por cromatografía rápida usando EtOAc en hexano 1:4. Se aisló la mancha que corría en el frente para obtener RD107973-39B1 que se identificó como 4-(5-ciano-1H-indazol-1-il)butanoato de etilo (D50). δH (d6-DMSO) 1,13 (3H, t), 2,04-2,13 (2H, m), 2,29 (2H, t), 3,99 (2H, q), 4,51 (2H, t), 7,74 (1H, dd), 7,88
10 (1H, d), 8,28 (1H, d), 8,41-8,44 (1H, m). MS (ES): C14H15N3O2 requiere 257 encontrado (MH+) 258.
Se aisló la mancha que corría en la parte inferior para obtener el compuesto del epígrafe. δH (d6-DMSO) 1,15 (3H, t), 2,15-2,22 (2H, m), 2,31 (2H, t), 4,01 (2H, q), 4,49-4,55 (2H, m), 7,48 (1H, dd), 7,78 (1H, dd), 8,43-8,44 (1H, m), 8,67 (1H, d). C14H15N3O2 requiere 257 encontrado (MH+) 258.
Descripción de D52
15 3-{5-[(Hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}propanoato de etilo (D52)
O
- O
- N
- N
- HON
-
imagen1 imagen1
NH2
Se disolvió 3-(5-ciano-1H-indazol-1-il)propanoato de etilo (D47) (1g, 4,11 mmol) en etanol (30 ml) y se añadieron bicarbonato de sodio (1,73 g, 20,55 mmol) e hidrocloruro de hidroxilamina (571 mg, 8,22 mmol). Se calentó la reacción a 50 °C durante la noche y después se dejó que se enfriara. Se filtró la mezcla de reacción y se lavó el residuo
20 con etanol. Se evaporó el filtrado a sequedad en vacío y el compuesto del epígrafe crudo resultante (1,06 g) se usó en las reacciones posteriores.
Description de D52 (procedimiento alternativo) 3-{5-[(Hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}propanoato de etilo (D52)
NH2
Se disolvió en etanol (30 ml), 3-(5-ciano-1H-indazol-1-il)propanoato de etilo (D47) (1 g, 4,11 mmol) y se añadieron
5 bicarbonato de sodio (1,73 g, 20,88 mmol) e hidrocloruro de hidroxilamina (571 mg, 8,22 mmol). Se dejó la reacción a temperatura ambiente durante la noche y después se calentó a 50 °C durante 4 horas y después se dejó que se enfriara durante la noche. Se filtró la mezcla de reacción y se lavó el residuo con etanol. Se evaporó el filtrado etanólico a sequedad en vacío y después se trituró con éter para dar el compuesto del epígrafe (764 mg) como un sólido blanco de aproximadamente 90 % de pureza. MS (ES): C13H16N4O3 requiere 276; encontrado (MH+) 277.
10 Descripción de D52 (procedimiento alternativo)
3-{5-[(Hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}propanoato de etilo (D52)
O
NH2
Se disolvió en etanol (100 ml), 3-(5-ciano-1H-indazol-1-il)propanoato de etilo (D47) (3,84 g, 15,8 mmol) y se añadieron bicarbonato de sodio (6,6 g, 79 mmol) y después hidrocloruro de hidroxilamina (3,3 g, 47,4 mmol). Se calentó la
15 reacción a 50 °C durante un total de 11 horas y después se dejó que se enfriara durante la noche. Se filtró la reacción y se lavó el residuo con etanol. Se evaporó el filtrado a sequedad en vacío y el sólido resultante se trituró con éter para generar el compuesto del epígrafe (3,79 g) como un sólido blanco. MS (ES): C13H16N4O3 requiere 276; encontrado (MH+) 277.
Descripción de D52 (procedimiento alternativo)
20 3-{5-[(Hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}propanoato de etilo (D52)
O
Se disolvió en etanol (40 ml), 3-(5-ciano-1H-indazol-1-il)propanoato de etilo D47 (3,6 g, 14,80 mmol) y se añadieron hidrocloruro de hidroxilamina (2,057 g, 29,6 mmol) y bicarbonato de sodio (6,22 g, 74,0 mmol). Se calentó la mezcla a 60 ºC durante la noche. Se enfrió, se filtró y el filtrado se evaporó, se disolvió en EtOAc, se lavó con agua (3 x 20
25 ml), se secó sobre MgSO4 y se evaporó de nuevo para dar 1,75 g de producto. Se recuperaron 0,290 g adicionales de cristales blancos desde el evaporador rotatorio. EM (ES+): C13H16N4O3 requiere 276; encontrado (MH+) 277.
Descripción de D53 4-{5-[(Hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}butanoato de etilo (D53)
Se preparó este compuesto por un método similar al descrito antes a partir del D50 RD107973-039B1. MS (ES): C14H18N4O3 requiere 290; encontrado (MH+) 291.
Descripción de D54
4-{5-[(Hidroxiamino)(imino)metil]-2H-indazol-2-il}butanoato de etilo (D54)
CO2Et
Se preparó este compuesto por un método similar al descrito antes a partir de 4-(5-ciano-2H-indazol-2-il)butanoato 10 de etilo (D51) . MS (ES): C14H18N4O3 requiere 290; encontrado (MH+) 291.
Descripción de D55
Una mezcla de 3-{4-[(hidroxiamino)(imino)metil]-2H-indazol-2-il}propanoato de etilo y 3-{4-[(hidroxiamino) (imino)metil]-1H-indazol-1-il}propanoato de etilo (D55)
H2N imagen1
NOH
H2N NOH
N
N
CO2Et
15 Se calentó a 50 °C durante 3 horas una mezcla de 3-(4-ciano-2H-indazol-2-il)propanoato de etilo y 3-(4-ciano-1Hindazol-1-il)propanoato de etilo (D49) (1,2 g, 4,938 mmol) (la muestra era una mezcla ~3:1 de los isómeros 1 y 2), hidrocloruro de hidroxilamina (0,686 g, 9,87 mmol) y bicarbonato de sodio (2,072 g, 24,66 mmol) en etanol (15 ml). Se filtró el sólido y el filtrado se evaporó a sequedad para dar 1,4 g de un aceite incoloro. Por LCMS y NMR se confirmó una mezcla ~3:1 de isómeros. MS (ES): C13H16N4O3 requiere 276; encontrado (MH+) 277.
Descripción de D56
Una mezcla de 4-{4-[(hidroxiamino)(imino)metil]-2H-indazol-2-il}butanoato de etilo y 4-{4-[(hidroxiamino) (imino)metil]-1H-indazol-1-il}butanoato de etilo (D56)
H2N imagen1
NOH H2N imagen1
NOH
N NN CO2Et
N
EtO2C
Una mezcla de 4-(4-ciano-2H-indazol-2-il)butanoato de etilo y 4-(4-ciano-1H-indazol-1-il)butanoato de etilo (D48)
5 (0,249 g, 0,968 mmol) (la muestra era una mezcla ~3:2 de los isómeros 1 y 2), hidrocloruro de hidroxilamina (0,135 g, 1,936 mmol) y bicarbonato de sodio (0,407g, 4,84 mmol) en etanol (5 ml), se agitó y se calentó a 80 °C durante 90 minutos, después se diluyó con acetato de etilo (30 ml) / agua (50 ml) y la capa orgánica se secó (sulfato de magnesio) y se evaporó para dar la mezcla del epígrafe (270 mg) como una goma incolora. La LC/MS mostró una mezcla
3:2 de isómeros con un par de pequeñas impurezas. MS (ES): C14H18N4O3 requiere 290; encontrado (MH+) 291
10 Descripción de D56 (procedimiento alternativo)
Una mezcla de 4-{4-[(hidroxiamino)(imino)metil]-2H-indazol-2-il}butanoato de etilo y 4-{4-[(hidroxiamino) (imino)metil]-1H-indazol-1-il}butanoato de etilo (D56)
H2N imagen1
NOH H2N imagen1
NOH
N NN CO2Et
N
EtO2C
Una suspensión de una mezcla de 4-(4-ciano-2H-indazol-2-il)butanoato de etilo y 4-(4-ciano-1H-indazol-1
15 il)butanoato de etilo (D48) (4,7 g, 9,13 mmol) (la muestra era una mezcla ~2:1 de los isómeros 1 y 2), hidrocloruro de hidroxilamina (2,54 g, 36,5 mmol) y bicarbonato de sodio (7,67 g 91 mmol) en etanol (50 ml), se calentó a 50 °C durante 3 horas, se enfrió y se evaporó y se sometió a reparto entre EtOAc/agua. La capa orgánica se secó (sulfato de magnesio), se evaporó y se trituró con éter para dar la mezcla del epígrafe (4 g) como un sólido blanco. Las NMR y LCMS mostraron una mezcla 2:1 de isómeros. MS (ES): C14H18N4O3 requiere 290; encontrado (MH+) 291.
Descripción de D57 3-(5-{5-[3-Cloro-4-(etiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoato de etilo (D57).
Se agitaron juntos 3-{5-[(hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}propanoato de etilo (D52) (265 mg, 0,96 mmol) y ácido 3-cloro-4-(etiloxi)benzoico (D7) (192 mg, 0,96 mmol) en DMF (5 ml) a 80 °C y se añadieron EDAC (203 mg) y
5 HOBt (142 mg). Cuando se consideró que la reacción era completa (análisis por LCMS) se enfrió la misma y se sometió la mezcla de reacción a reparto entre EtOAc y solución acuosa de bicarbonato de sodio. Se separó la capa orgánica y se lavó con agua, se secó y se evaporó y se trituró con etanol para dar el producto crudo. Por purificación por cromatografía rápida (EtOAc/hexano 1:3 a 1:1) se obtuvo el compuesto del epígrafe (87 mg) como un sólido blanco. MS (ES): C22H2135ClN4O4 requiere 440; encontrado (MH+) 441.
10 Descripción de D58
3-[5-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoato de etilo (D58)
O
Se agitaron en DMF (5 ml) a 80 °C durante 2 horas, 3-{5-[(hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}propanoato de etilo (D52) (265 mg, 0,96 mmol), ácido 3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]benzoico (se puede preparar como se describe en
15 el documento WO2005/58848) (197 mg, 0,96 mmol), EDAC (203 mg) y HOBt (142 mg). Se agitó a temperatura ambiente durante el fin de semana, después se calentó a 80 °C durante otras 4 horas. Se enfrió la mezcla de reacción y después se sometió a reparto entre EtOAc y bicarbonato de sodio. Se separó la capa orgánica, se lavó con salmuera, se secó y se evaporó a sequedad en vacío. Se purificó el material crudo por cromatografía rápida para obtener el compuesto del epígrafe (214 mg) como un sólido blanco. MS (ES): C24H23N5O4 requiere 445; encontrado (MH+) 446.
Descripción de D58 (procedimiento alternativo) 3-[5-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoato de etilo (D58)
CO2Et
Una mezcla de ácido 3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]benzoico (se puede preparar como se describe en el documento
WO2005/58848) (371 mg, 1,81 mmol), EDAC (547 mg, 2,85 mmol) y HOBt (437 mg, 2,85 mmol) en DMF (5 ml), se
5 dejó en reposo a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió 3-{5-[(hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol
1-il}propanoato de etilo (D52) (500 mg, 1,81 mmol) y se dejó en reposo durante la noche a temperatura ambiente.
Se añadió EDAC (200 mg, 1,04 mmol) y se dejó en reposo durante 24 horas. Se calentó la mezcla a 80 °C durante 2
días, dejando a temperatura ambiente cada noche. Se calentó la mezcla a 80 °C durante otras 4 horas. Se añadió
EtOAc (50 ml) y se lavó con agua (60 ml), NaHCO3 saturado (60 ml) y agua (60 ml). La capa de EtOAc se secó 10 (MgSO4) y se evaporó el disolvente. Triturando con etanol se obtuvo el compuesto del epígrafe (523 mg) como un
sólido beige. MS (ES): C24H23N5O4 requiere 445; encontrado (MH+) 446.
Descripción de D59
3-(5-{5-[4-[(1-Metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoato de etilo (D59)
O
Cimagen1
N
F3imagen1
N O O
15 Se disolvió ácido 4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)benzoico (D36) (100 mg, 0,4 mmol) en DMF (5 ml) y después se añadieron EDAC (115 mg, 0,6 mmol) y HOBt (81 mg, 0,6 mmol). Se agitó la mezcla durante 30 minutos y después se añadió 3-{5-[(hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}propanoato de etilo (D52) (111 mg, 0,40 mmol) y se calentó la reacción durante la noche a 80 °C. Se añadió más EDAC (50 mg) y se calentó la reacción durante otras 4 horas. Se añadió más EDAC (20 mg) y se calentó la reacción durante la noche. Se añadió la mezcla de reacción a
20 una mezcla de acetato de etilo y bicarbonato de sodio, se separaron los extractos orgánicos y se extrajo la capa acuosa con más acetato de etilo. Los extractos orgánicos reunidos se lavaron con agua y después con salmuera, se secaron y se evaporaron para dar el producto crudo. Este material se purificó por cromatografía rápida (SiO2) para obtener el compuesto del epígrafe (82 mg). MS (ES): C24H23F3N4O4 requiere 488; encontrado (MH+) 489.
Descripción de D60 4-[4-(5-{3-Cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoato de etilo (D60)
Una mezcla de 4-{4-[(hidroxiamino)(imino)metil]-2H-indazol-2-il}butanoato de etilo y 4-{4-[(hidroxiamino)(imino)metil]
5 1H-indazol-1-il}butanoato de etilo (D56) (0,27 g, 0,930 mmol) (una mezcla 3:2 de los isómeros 1 y 2), ácido 3-cloro4-[(1-metiletil)oxi]benzoico (D3) (0,200 g, 0,930 mmol), EDC (0,196 g, 1,023 mmol) y HOBT (0,157 g, 1,023 mmol) en N,N-dimetilformamida (5 ml), se agitó a 80 °C durante 16 horas y después a 120 °C durante 2 horas. Se enfrió la reacción, se diluyó con acetato de etilo (40 ml) y agua (40 ml) y la capa orgánica se lavó con 3 x 15 ml de agua, se secó (sulfato de magnesio) y se evaporó. Se purificó el material crudo por cromatografía rápida eluyendo con aceta
10 to de etilo/hexano 3:7 para dar dos productos que se trituraron con éter/hexano 1:1 para dar 66 mg de la mancha superior y 36 mg de la mancha inferior. La mancha superior era el indazol 1-sustituido deseado. δH (CDCl3, 400MHz): 1,24 (3H, t), 1,46 (6H, d), 2,31 (4H, m), 4,12 (2H, q), 4,55 (2H, t), 4,73 (1H, m), 7,08 (1H, d), 7,52 (1H, dd), 7,62 (1H, d), 8,07 (1H, dd), 8,11 (1H, dd), 8,29 (1H, d), 8,70 (1H, d).
Descripción de D60 (procedimiento alternativo)
15 4-[4-(5-{3-Cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoato de etilo (D60)
N2665-84-A1
Una solución de una mezcla de 4-{4-[(hidroxiamino)(imino)metil]-2H-indazol-2-il}butanoato de etilo y 4-{4[(hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}butanoato de etilo (D56) (4 g, 13,78 mmol), ácido 3-cloro-4-[(120 metiletil)oxi]benzoico (D3) (2,96 g, 13,78 mmol), EDC (2,91 g, 15,16 mmol) y HOBT (2,321 g, 15,16 mmol) en DMF (40 ml), se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas para formar el intermedio y después se calentó a 120 ºC durante 2 horas para formar el ciclo. Se enfrió la solución, se diluyó con EtOAc, se lavó con agua 3x, se secó (sulfato de magnesio) y se evaporó. Se purificó por cromatografía rápida eluyendo con EtOAc/iso-hexano 1:3. Las fracciones reunidas se evaporaron para dar el compuesto del epígrafe (1,5 g) como un sólido blanco. MS (ES):
25 C24H2535ClN4O4 requiere 468; encontrado (MH+) 469. δH (CDCl3, 400MHz): 1,24 (3H, t), 1,46 (6H, d), 2,31 (4H, m), 4,12 (2H, q), 4,55 (2H, t), 4,73 (1H, m), 7,08 (1H, d), 7,52 (1H, dd), 7,62 (1H, d), 8,06 (1H, dd), 8,10 (1H, dd), 8,29 (1H, d), 8,70 (1H, d).
Descripción de D61 3-[4-(5-{3-Cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoato de etilo (D61)
O
N
N
N
CO2Et
Una mezcla de 3-{4-[(hidroxiamino)(imino)metil]-2H-indazol-2-il}propanoato de etilo y 3-{4-[(hidroxiamino) (imino)metil]-1H-indazol-1-il}propanoato de etilo (D55) (700 mg, 1,27 mmol) (una mezcla 3:1 de los isómeros 1 y 2), áci5 do 3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]benzoico (D3) (0,544 g, 2,53 mmol), EDC (0,534 g, 2,79 mmol) y HOBT (0,427 g, 2,79 mmol) en N,N-dimetilformamida (10 ml), se calentó a 120 °C durante 2 horas, se enfrió, se diluyó con acetato de etilo (60 ml) y se lavó con agua (3 x 20 ml). Se secó la capa orgánica (MgSO4), se evaporó y se purificó por croma
tografía rápida eluyendo con EtOAc/hexano 1:4 para dar el compuesto del epígrafe (380 mg) como un sólido blanco. δH (CDCl3, 400MHz): 1,17 (3H, t), 1,46 (6H, d), 3,02 (2H, t), 4,10 (2H, q), 4,70-4,77 (3H, m), 7,08 (1H, d), 7,53 (1H,
10 dd), 7,69 (1H, d), 8,05-8,12 (2H, m), 8,29 (1H, d), 8,71 (1H, d). MS (ES): C23H2335ClN4O4 requiere 454; encontrado (MH+) 455.
Los siguientes compuestos se prepararon mediante una química similar a la de los ejemplos previos. En algunos casos el ácido carboxílico, EDAC y HOBt se agitaron juntos antes de la adición de la amidoxima. En algunos casos se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente antes de calentar. A menos que se indique otra cosa, las
15 reacciones se llevaron a cabo a una temperatura entre 80 y 120 °C en DMF. En algunos casos se añadieron EDAC y/o HOBt adicionales. En el caso de D91 se añadió más ácido carboxílico. Los productos se purificaron o por cromatografía rápida, trituración, MDAP, cromatografía en fase reversa, precipitación del producto a partir de la mezcla de reacción usando etanol o por una combinación de estos métodos.
- Número
- Estructura Nombre Precursor MS
- D62
- O N O N Cl NN O O 3-(5-{5-[3-cloro-4(propiloxi)fenil]-1,2,4oxadiazol-3-il}-1Hindazol-1il)propanoato de etilo D38 y D52 [MH+] 455
- D63
- O N NCl O N N OO 4-[5-(5-{3-cloro-4-[(1metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol-3-il)1H-indazol-1-il]butanoato de etilo D53 y D3 [MH+] 469
- D64
-
S O N NF F F
imagen1 N N 4-(5-{5-[4-fenil-5(trifluorometil)-2tienil]-1,2,4-oxadiazol3-il}-1H-indazol-1il)butanoato de etilo D53 [MH+] 527
- OO
- D65
-
O N N Cl O F F F
imagen1 N N O O 3-[5-(5-{3-cloro-4[(trifluorometil)oxi]fenil}-1,2,4oxadiazol-3-il)-1Hindazol-1-il]propanoato de etilo D52 [MH+] 481
- D66
- F F F 3-(5-{5-[4-ciclohexil-3(trifluorometil)fenil] D34 y [MH+] 513
- O N N
- N N O O 1,2,4-oxadiazol-3-il}1H-indazol-1il)propanoato de etilo D52
- D67
- NN O O 3-(5-{5-[4-(metiloxi)-3(trifluorometil)fenil]1,2,4-oxadiazol-3-il}1H-indazol-1-il)propanoato de etilo D52 [MH+] 461
- O
-
imagen1
- NF
-
imagen1
- O N F F
- D68
- O 3-(5-{5-[3-cloro-4(metiloxi)fenil]-1,2,4 D52 [MH+] 427
- NN
- O oxadiazol-3-il}-1Hindazol-1-il)propanoato de etilo
- N
-
imagen1
- Cl
- N
- O
- H3C
- O
- D69
- NN O O 3-(5-{5-[3-etil-4-(1piperidinil)fenil]-1,2,4oxadiazol-3-il}-1Hindazol-1-il)propanoato de etilo D52, D9 [MH+] 474
- N
- N
- imagen1
- O
- N
-
imagen1
- D70
- NN O O 3-{5-[5-(4-ciclohexil-3etilfenil)-1,2,4oxadiazol-3-il]-1Hindazol-1il}propanoato de etilo D13, D52 [MH+] 473
- N
- N
- imagen1
- O
- D71
- NN O O 3-(5-{5-[3-ciano-4-(2metilpropil)fenil]1,2,4-oxadiazol-3-il}1H-indazol-1-il)propanoato de etilo D52 y D25 [MH+] 444
- NC
- O N N
- D72
- O 3-[5-(5-{3-bromo-4 D52 y D15 [MH+]
- NN
-
imagen1 O [(1-metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol-3-il)1H-indazol-1-il]propanoato de etilo 499, 501
- N
- Br
- N
- imagen1
- O
- O
- D73
- NN O O 3-(5-{5-[3-cloro-4-(2metilpropil)fenil]1,2,4-oxadiazol-3-il}1H-indazol-1-il)propanoato de etilo D52 y D18 [MH+] 453, 455
- Cl
- O N N
- D74
- NN O O 4-(5-{5-[4-[(1metiletil)oxi]-3(trifluorometil)fenil]1,2,4-oxadiazol-3-il} D53 y D36 [MH+] 503
- imagen1
- 1H-indazol-1-il)butanoato de etilo
- F3C
- O N N
- O
- D75
- NN O O 3-{5-[5-(2-ciano-4bifenilil)-1,2,4oxadiazol-3-il]-1Hindazol-1-il}propanoato de etilo D52 y D21 [MH+] 464
- N
- NC
- N
- imagen1
- O
- D76
- O 3-(5-{5-[3-cloro-4-(1 D52 y D40 [MH+]
- O
- pirrolidinil)fenil]-1,2,4oxadiazol-3-il}-1H 466
- NN
-
imagen1 indazol-1-il)
- imagen1
- propanoato de etilo
- N
- N
- imagen1
- O
- N
- Cl
- D77
-
imagen1 4-[5-(5-{5-cloro-6-[(1metiletil)oxi]-3 D31 y D53 470 (MH+)
- Cl
- N O piridinil}-1,2,4oxadiazol-3-il)-1Hindazol-1-il]butanoato para35Cl
- imagen1
- de etilo
- NO
- N
-
imagen1
- N
- N
- EtO2C
- D78
- Cl NO N N O N N CO2Et 4-[5-(5-{5-cloro-6-[(1metiletil)oxi]-3piridinil}-1,2,4oxadiazol-3-il)-2Hindazol-2-il]butanoato de etilo D54 y D31 470 (MH+) para35Cl
- D79
-
imagen1 4-(5-{5-[2-(trifluorometil)-4-bifenilil]1,2,4-oxadiazol-3-il} D53 y D23 [MH+] 521
- F3C
-
imagen1 1H-indazol-1il)butanoato de etilo
- NO
- N
-
imagen1
- N
- N
- EtO2C
- D80
-
imagen1 4-(5-{5-[2-(trifluo D54 y D23 [MH+]
- F3C
-
imagen1 rometil)-4-bifenilil]1,2,4-oxadiazol-3-il}2H-indazol-2-il)butanoato de etilo 521
- NO
- N
-
imagen1
- N
- N
- CO2Et
- D81
- O CN 3-[4-(5-{3-ciano-4-[(1metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol-3-il)1H-indazol-1-il]propanoato de etilo D55 [MH+] 446
- O
- NN
- N N
- CO2Et
- D82
- N O N ClO 3-[4-(5-{3-cloro-4-[(1metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol-3-il)2H-indazol-2-il]propanoato de etilo D55 y D3 [MH+]45 5, 457
- N N CO2Et
- D83
- O CN 3-[4-(5-{3-ciano-4-[(1metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol-3-il)2H-indazol-2-il]propanoato de etilo D55 [MH+] 446
- O
- NN
- N N CO2Et
- D84
- N O N O CN 4-[4-(5-{3-ciano-4-[(1metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol-3-il)1H-indazol-1-il]butanoato de etilo D56 [MH+] 460
- N N
- CO2Et
- D85
- N O N N 4-(4-{5-[3-etil-4-(1piperidinil)fenil]-1,2,4oxadiazol-3-il}-1Hindazol-1-il)butanoato de etilo D56 y D9 [MH+] 488
- N N
- CO2Et
- D86
- N O N CF3 4-(4-{5-[2-(trifluorometil)-4-bifenilil]1,2,4-oxadiazol-3-il}1H-indazol-1-il)butanoato de etilo D56 y D23 [MH+]52 1.
- N N
- EtO2C
- D87
- N O N Cl O CF3 4-[4-(5-{3-cloro-4[(trifluorometil)oxi]fenil}-1,2,4oxadiazol-3-il)-1Hindazol-1-il]butanoato de etilo D56 [MH+] 495
- N N
- EtO2C
- D88
- N O N O CF3 3-(4-{5-[4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)fenil]1,2,4-oxadiazol-3-il}1H-indazol-1-il)propanoato de etilo D97 y D36 [MH+] 489
- N N
- CO2Et
- D89
- O N O N CF3 4-(4-{5-[4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)fenil]1,2,4-oxadiazol-3-il}1H-indazol-1-il)butanoato de etilo D56 y D36 [MH+] 503
- N N
- EtO2C
- D90
- O N O N N Cl 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1metiletil)oxi]-3piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1Hindazol-1-il]butanoato de etilo D56 y D31 [MH+]47 0, 472
- N N
- EtO2C
- D91
-
imagen1 4-(4-{5-[4-fenil-5 D56 [MH+]
- (trifluorometil)-2
- 527
- imagen1
- tienil]-1,2,4-oxadiazol
- 3-il}-1H-indazol-1
- F3C
- S O il)butanoato de etilo
- NN
- N N
- EtO2C
- D92
- O Cl N N N O N O O 4-[4-(5-{3-cloro-4-[(1metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol-3-il)2H-indazol-2-il]butanoato de etilo D56 y D3 [MH+] 469
- D93
- O ONC 3-{5-[5-(3-ciano-4{[(1S)-1metilpropil]oxi}fenil)1,2,4-oxadiazol-3-il]1H-indazol-1-il}propanoato de etilo D52 y D27 [MH+] 460
- NN
- N N
- O
- O
- D94
- ONC 3-{5-[5-(3-ciano-4{[(1R)-1-metil D52 y D29 [MH+] 460
- imagen1
- propil]oxi}fenil)-1,2,4
- oxadiazol-3-il]-1H
- imagen1
- indazol-1
- O
- il}propanoato de etilo
- NN
- N N
- O
- O
- D95
- O ONC 3-(5-{5-[3-ciano-4(ciclopentiloxi)fenil]1,2,4-oxadiazol-3-il}1H-indazol-1-il)propanoato de etilo D52 y D42 [MH+] 472
- NN
- N N
- O
- O
Descripción de D96 3-(4-Ciano-1H-indazol-1-il)propanoato de etilo (D96)
CN
N
Se añadieron 1H-indazol-4-carbonitrilo (0,716 g, 5 mmol), 3-bromopropanoato de etilo (1,276 ml, 10,00 mmol) y car
5 bonato de cesio (4,90 g, 15,00 mmol) a N,N-dimetilformamida (DMF) (20 ml) y se calentó la mezcla a 90 ºC durante 80 minutos. Se enfrió la mezcla antes de ser extraída en una mezcla de acetato de etilo y agua. Se lavó la fracción orgánica con 3 porciones de 30 ml de agua, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó. Se añadió la mezcla del pro
ducto crudo a una columna Biotage y se eluyó con acetato de etilo/gasolina para uso técnico 1:3 para dar 0,95 g del compuesto del epígrafe. δH (CDCl3, 400MHz) 1,17 (3H, t), 3,01 (2H, t), 4,08 (2H, q), 4,71 (2H, t), 7,46 (1H, dd), 7,54
10 (1H, dd), 7,81 (1H, d), 8,21 (1H, d).
Descripción de D97
3-{4-[(Hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}propanoato de etilo (D97)
CO2Et
Se calentaron en etanol (20 ml) a 50 º C durante 3 horas, 3-(4-ciano-1H-indazol-1-il)propanoato de etilo (D96) (0,95
15 g, 3,91 mmol), hidrocloruro de hidroxilamina (1,086 g, 15,62 mmol), y bicarbonato de sodio (3,28 g, 39,1 mmol). Se filtró la mezcla y se evaporó para dar el compuesto del epígrafe (760 mg) como un polvo blanco. MS (ES): C13H16N4O3 requiere 276; encontrado (MH+) 277.
Descripción de D98
3-Bromo-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D98)
Br
20
Se disolvió ácido 3-bromo-2,2-dimetilpropanoico (comercialmente disponible de Fluka) (1 g, 5,52 mmol) en cloruro de tionilo (5 ml, 68,5 mmol) y la mezcla resultante se mantuvo a reflujo durante 2 h, después se enfrió a temperatura ambiente y se concentró en vacío. Se disolvió el residuo en etanol (10 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se separó la mayor parte del disolvente en vacío, se disolvió el residuo en EtOAc y se lavó dos veces con
25 una solución 1 M acuosa de NaOH, salmuera, se secó y se concentró para dar el compuesto del epígrafe (0,939 g, 81 %) como un aceite amarillo pálido que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Descripción de D99 4-Bromo-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D99)
Se hizo burbujear bromuro de hidrógeno a través de 3,3-dimetildihidro-2(3H)-furanona (1 g, 8,76 mmol) a temperatu
5 ra ambiente durante aproximadamente 5 h y la mezcla resultante se dejó a temperatura ambiente durante la noche. Después se hizo burbujear nitrógeno a través de la mezcla. Se disolvió el ácido crudo en DCM (10 ml) y se trató con cloruro de oxalilo (2,3 ml, 26,3 mmol) y DMF (1 gota) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante el fin de semana y después se concentró en vacío. Se trató el residuo con etanol (10 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y después se vertió sobre agua. Se extrajo la fase acuosa dos veces
10 con éter dietílico y se lavó la solución etérea con salmuera, se secó y se concentró en vacío para dar el compuesto del epígrafe (949 mg, 49 %) como un aceite de color amarillo muy pálido que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Descripción de D100 y D101
3-[5-(5-{3-Cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoato de etilo
H3C imagen1
O
Cl
H3C
H3C imagen1
O
N Cl
H3CO
N N
N CH3
CH3 N O
NO Nimagen1
OO
Se trató 5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol (D4) (122 mg, 0,344 mmol) en DMF (2 ml), con 3-bromo-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D98) (79 mg, 0,378 mmol) y Cs2CO3 (134 mg, 0,413 mmol) y la 20 mezcla resultante se agitó a 80 oC durante la noche. Se añadieron más 3-bromo-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D98) (29 mg, 0,4 mmol) y Cs2CO3 (56 mg, 0,5 mmol) y la mezcla resultante se agitó a 80 oC durante 6 h y después se enfrió a temperatura ambiente y se concentró en vacío. Se disolvió el residuo en EtOAc y se lavó la fase orgánica con agua y después con salmuera, se secó y se concentró en vacío. Por purificación del residuo por cromatografía rápida sobre gel de sílice [gradiente de acetato de etilo/ciclohexano] se obtuvo 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1
25 metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D100) (92 mg, 55 %) y 3-[5-(5{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D101) (49 mg, 30 %). MS (ES) C25H27ClN4O4 requiere 482; encontrado 483 [M+H]+
Descripción de D102 3-(4-Ciano-1H-indazol-1-il)-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D102)
Se calentaron a 80 oC durante la noche y después durante 7 horas más, 1H-indazol-4-carbonitrilo (comercialmente
5 disponible de Insight Chemical Solutions Ltd.) (500 mg, 3,49 mmol), 3-bromo-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D98) (803 mg, 3,84 mmol) y Cs2CO3 (1,36 g, 4,19 mmol), en DMF seca (3 ml). Después, la mezcla de reacción se sometió a reparto entre EtOAc y H2O. Se separaron las dos capas y la fase orgánica se lavó con más H2O y con salmuera, se secó y se concentró hasta un aceite amarillo. Por purificación del residuo por cromatografía rápida sobre gel de sílice [gradiente de acetato de etilo/ciclohexano] se obtuvo el compuesto del epígrafe (356 mg, 37 %) como un mate
10 rial cristalino. MS (ES) C15H17N3O2 requiere 271; encontrado 272 [M+H]+
Descripción de D102 (procedimiento alternativo)
3-(4-Ciano-1H-indazol-1-il)-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D102)
N
Se trató, bajo nitrógeno, con NaH (94 mg, 2,348 mmol), 1H-indazol-4-carbonitrilo (comercialmente disponible de In
15 sight Chemical Solutions Ltd., 298 mg, 1,957 mmol) en N,N-dimetilformamida seca (DMF) (1 ml),. Se añadió entonces a la mezcla de color marrón oscuro, una solución de 3-bromo-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D98) (450 mg, 2,153 mmol), en DMF (2 ml). Se calentó la mezcla de reacción a 80 ºC durante la noche y después se concentró en vacío. Se disolvió el residuo en EtOAc y la fase orgánica se lavó con agua, después con salmuera, se secó y se concentró para dar una goma de color marrón. Por purificación del residuo por cromatografía rápida sobre gel de
20 sílice [gradiente de acetato de etilo/ciclohexano] se obtuvo el compuesto del epígrafe (217 mg, 86 %) como un aceite amarillo. MS (ES) C15H15N3O2 requiere 271; encontrado 272 [M+H]+
Descripción de D103 3-{4-[(Hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D103)
OH
Se calentaron a 65 oC durante 24 h y después a temperatura ambiente durante el fin de semana, 3-(4-ciano-1H
5 indazol-1-il)-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D102) (348 mg, 1,28 mmol), hidrocloruro de hidroxilamina (1,087 g, 10,26 mmol), NaHCO3 (1,078 g, 12,83 mmol) en MeOH (20 ml). Se filtró la mezcla, se concentró, se trató con agua y se agitó vigorosamente durante 10 minutos, se filtró y se secó para dar un sólido incoloro, se secó durante la noche en vacío a 45 ºC para dar el compuesto del epígrafe (373 mg, 90 %). MS (ES) C15H20N4O3 requiere 304; encontrado 305 [M+H]+
10 Descripción de D104
3-[4-(5-{3-Cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoato de etilo
(D104)
H3C Cl
H3C
O
Una mezcla de ácido 3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]benzoico (D3) (245 mg, 1,143 mmol), 3-{4
15 [(hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D103) (348 mg, 1,143 mmol), en DMF (5 ml) a temperatura ambiente, se trató con N-etil-N-(1-metiletil)-2-propanamina (0,240 ml, 1,372 mmol) seguido por HATU (522 mg, 1,372 mmol). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 1 hora y a 80 oC durante la noche y después durante 4 horas más, después se enfrió a temperatura ambiente y se concentró en vacío. Se disolvió el residuo en EtOAc y la fase orgánica se lavó dos veces con H2O y después con salmuera, se secó y se
20 concentró en vacío. Por purificación del residuo por cromatografía rápida sobre gel de sílice [gradiente de acetato de etilo/ciclohexano] se obtuvo el compuesto del epígrafe (233 mg, 39 %) como un sólido cremoso. MS (ES) C25H27ClN4O4 requiere 482; encontrado 483 [M+H]+
Descripción de D105
3-[4-(5-{5-Cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D105)
5 Se disolvieron en N,N-dimetilformamida (DMF) (5 ml), ácido 5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridincarboxílico (D31) (70,9 mg, 0,329 mmol), trietilamina (0,092 ml, 0,657 mmol), HOBT (60,4 mg, 0,394 mmol) y después EDC (76 mg, 0,394 mmol) seguido por 3-{4-[(hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D103) (100 mg, 0,329 mmol). Se agitó la mezcla resultante a 50 ºC durante la noche, después se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó en EtOAc. Se lavó la fase orgánica con H2O, se secó y se concentró en vacío. Por purificación del residuo por
10 cromatografía rápida sobre gel de sílice [EtOAc al 15-40 % /ciclohexano] se obtuvo el compuesto del epígrafe (30 mg, 17 %) como un sólido amarillo claro. MS (ES) C24H26ClN5O4 requiere 483; encontrado 484 [M+H]+
Descripción de D106
Cloruro de 3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]benzoilo (D106)
15 Se añadió cloruro de oxalilo (0,224 ml, 2,56 mmol) a una solución en agitación de ácido 3-ciano-4-[(1metiletil)oxi]benzoico (que se puede preparar como se describe en el documento WO2005/58848, 500 mg, 2,437 mmol) en DCM (10 ml), seguido por DMF (20 μl) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se evaporó el disolvente para dar el compuesto del epígrafe (545 mg, 100 %) como un sólido de color verde oliva que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Descripción de D107
3-[5-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D107)
H3C CH3
N O
N O
N N N
H3C CH3
O
A una solución de 5-[3-(1H-indazol-5-il)-1,2,4-oxadiazol-5-il]-2-[(1-metiletil)oxi]benzonitrilo (D43) (85 mg, 0,246 mmol)
5 en N,N-dimetilformamida (DMF) (5 ml), se añadieron 3-bromo-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D98) (103 mg, 0,492 mmol) y Cs2CO3 (120 mg, 0,369 mmol). Se agitó la mezcla resultante a 80 ºC durante 48 h, después se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua, se secó sobre MgSO4 y se concentró en vacío. Por purificación del residuo por cromatografía rápida sobre gel de sílice [EtOAc al 30-50 % /ciclohexano] se obtuvo el compuesto del epígrafe (20 mg, 16 %) como un sólido amarillo. MS (ES) C26H27N5O4 re
10 quiere 473; encontrado 474 [M+H]+
Descripción de D108
4-[5-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D108)
H3C
CH3
N O
N
O N
N
H3C CH3
O
15 Se obtuvo el compuesto del epígrafe a partir de 5-[3-(1H-indazol-5-il)-1,2,4-oxadiazol-5-il]-2-[(1metiletil)oxi]benzonitrilo (D43) con un rendimiento del 31 % (50 mg) usando un procedimiento análogo a la síntesis de 3-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D107), usando 4-bromo-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D99) como reactivo alquilante en lugar de 3-bromo-2,2dimetilpropanoato de etilo (D98). MS (ES) C25H25N5O4 requiere 459; encontrado 460 [M+H]+
Descripción de D109
3-[4-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D109)
H3C
CH3
N O
N O N
N
H3C CH3
O
Se trató cloruro de 3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]benzoilo (D106) (0,398 mmol) en acetonitrilo (3,00 ml) a temperatura
5 ambiente, con 3-{4-[(hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D103) (101 mg, 0,332 mmol) seguido por trietilamina (0,069 ml, 0,498 mmol). La solución amarilla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se mantuvo a reflujo durante la noche, y durante 24 horas más y de nuevo durante la noche, después se enfrió a temperatura ambiente y se concentró en vacío. Por purificación del residuo por cromatografía rápida sobre gel de sílice [gradiente de acetato de etilo/ciclohexano] se obtuvo el compuesto del epígrafe (107 mg,
10 68 %) como un sólido incoloro. MS (ES) C26H27N5O4 requiere 473; encontrado 474 [M+H]+
Descripción de D110
5-(5-{5-Cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol (D110), N6043-42
Una mezcla de ácido 5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridincarboxílico (D31) (350 mg, 1,623 mmol), trietilamina (328 mg,
15 452 μl, 3,25 mmol), hidroxibenzotriazol hidratado (298 mg, 1,95 mmol), EDC (373 mg, 1,95 mmol) y N-hidroxi-1Hindazol-5-carboximidamida (D2) (430 mg, 2,43 mmol) en DMF (5 ml), se agitó a 50 ºC durante 4 días. Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc (25 ml). Se lavó la capa orgánica con una solución acuosa saturada de NaHCO3 , agua y después salmuera. Se secó la fase orgánica y se concentró en vacío para dar el compuesto del epígrafe (334 mg, 58 %) como un sólido de color rojo claro que se usó en la siguiente
20 etapa sin purificación adicional. MS (ES) C17H14ClN5O2 requiere 355; encontrado 356 [M+H]+
Descripción de D111
3-[5-(5-{5-Cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D111)
Una mezcla de 5-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol (D110) (335 mg, 0,94
5 mmol), 3-bromo-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D98) (197 mg, 0,94 mmol) y K2CO3 (130 mg, 0,94 mmol) en DMF (5 ml), se agitó a 80 ºC durante 48 horas. Se enfrió entonces la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se sometió a reparto entre EtOAc y agua (30 ml 1:1). Se separó la fase orgánica, se secó sobre MgSO4 y se concentró en vacío. Por purificación del residuo por cromatografía rápida sobre gel de sílice [acetato de etilo al 20 % /ciclohexano] se obtuvo el compuesto del epígrafe (100 mg, 22 %) como un sólido incoloro. MS (ES) C24H26ClN5O4 requiere 483;
10 encontrado 484 [M+H]+
Descripción de D112
4-(4-Bromo-1H-indazol-1-il)-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D112)
Br
O
15 A una solución de 4-bromo-1H-indazol (comercialmente disponible de Insight Chemical Solutions Ltd., 826 mg, 4,19 mmol) en DMF (10 ml) a temperatura ambiente, se añadieron Cs2CO3 (1,37 g, 4,19 mmol) y 4-bromo-2,2dimetilbutanoato de etilo (D99) (1,40 g, 6,29 mmol) y la mezcla resultante se agitó a 80 oC durante 24 h, después se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con AcOEt. Se lavó la fase orgánica con agua, se secó sobre MgSO4 y se concentró en vacío. Por purificación del residuo por cromatografía rápida sobre gel de sílice [EtOAc al 15-25 %
20 /ciclohexano] se obtuvo el compuesto del epígrafe (600 mg, 40 %) como un aceite naranja. MS (ES) C15H1981BrN2O2 requiere 340; encontrado 341 [M+H]+
Descripción de D113 4-(4-Ciano-1H-indazol-1-il)-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D113), N6375-40
O
A una solución de 4-(4-bromo-1H-indazol-1-il)-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D112) (600 mg, 1,77 mmol) y Zn(CN)2
5 (207 mg, 1,77 mmol) en DMF (5 ml) a temperatura ambiente, se añadió Pd(PPh3)4 (204 mg, 0,18 mmol) y la mezcla resultante se agitó a 100 oC durante el fin de semana, se calentó durante 5 horas más y después se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con AcOEt. Se filtró la fase orgánica a través de celita y se lavó con agua, después con salmuera, se secó y se concentró en vacío. Por purificación del residuo por cromatografía rápida sobre gel de sílice [EtOAc al 10-20 % /ciclohexano] se obtuvo el compuesto del epígrafe (200 mg, 36 %) como un aceite incoloro. MS
10 (ES) C16H19N3O2 requiere 285; encontrado 286 [M+H]+.
Descripción de D114
4-{4-[(Hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D114)
O
Se obtuvo 4-{4-[(hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D114) a partir de 4-(4
15 ciano-1H-indazol-1-il)-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D113) de una manera similar al procedimiento descrito para la síntesis de 3-{4-[(hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D103). Se obtuvieron 200 mg, 85 % de rendimiento. MS (ES) C16H22N4O3 requiere 318; encontrado 319 [M+H]+.
Descripción de D115
4-[4-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D115)
N
O
N O N
N
N
O
O
5 Se obtuvo 4-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D115) a partir de cloruro de 3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]benzoilo (D106) y 4-{4-[(hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol1-il}-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D114) de una manera similar al procedimiento descrito como un procedimiento alternativo para la síntesis de 5-[3-(1H-indazol-5-il)-1,2,4-oxadiazol-5-il]-2-[(1-metiletil)oxi]benzonitrilo (D43). 120 mg, 74 % de rendimiento. MS (ES) C27H29N5O4 requiere 487; encontrado 488 [M+H]+.
10 Descripción de D116
4-[4-(5-{5-Cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D116)
N
N
O
N
N
N
O
Cl
O
O
Se disolvieron en DMF (4 ml) a temperatura ambiente, ácido 5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridincarboxílico (D31)
15 (67,7 mg, 0,314 mmol), después trietilamina (88 μl, 0,628 mmol) seguido por HOBT (57,7 mg, 0,377 mmol), EDC (72,3 mg, 0,377) y 4-{4-[(hidroxiamino)(imino)metil]-1H-indazol-1-il}-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D114) (100 mg, 0,314 mmol), y después se agitaron a 50 oC durante 5 días. Se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con agua, se secó y se concentró en vacío. Por purificación del residuo por cromatografía rápida sobre gel de sílice [EtOAc al 15-40 % /ciclohexano] se obtuvo el compuesto del epígrafe (110
20 mg, 67 %) como un sólido amarillo claro. MS (ES) C25H28ClN5O4 requiere 497; encontrado 498 [M+H]+.
Ejemplo 1
Ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico (E1)
ON
Cl
O
Se disolvió 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoato de etilo (D5) (240
5 mg) en MeOH (5 ml), se trató con NaOH 2 M acuoso (5 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche y se aplicó vacío para separar el MeOH. Se diluyó entonces la mezcla de reacción con NaOH 1 M acuoso, se lavó con EtOAc (x 2) y se acidificó a pH = 3. Se extrajo esta solución con EtOAc (x 3) y los extractos reunidos se lavaron con salmuera y se evaporaron para dar el producto crudo. Se purificó éste usando el sistema MDAP para dar el compuesto del epígrafe (13 mg) como un sólido blanco. δH (CDCl3, 400MHz): 1,44 (6H, d), 3,03 (2H, t), 4,68-4,75 (3H,
10 m), 7,05 (1H, d), 7,60 (1H, d), 8,06 (1H, d), 8,11 (1H, s), 8,15 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,56 (1H, s). MS (ES): C21H1935ClN4O4 requiere 426; encontrado 427 (MH+).
Ejemplo 1 (procedimiento alternativo)
Ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico (E1)
ON
Cl
15 Se disolvió en etanol, 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoato de etilo (D5) (1,95 g, 4,29 mmol). Se añadió NaOH 2 M (2,143 ml, 4,29 mmol) y la solución se mantuvo a temperatura ambiente durante 3 horas. Se evaporó el etanol y se disolvió la mezcla en EtOAc y agua y se acidificó con ácido acético. Se secó la capa orgánica (MgSO4) y se evaporó para dar 1,34 g de sólido blanco. δH (d6-DMSO, 400 MHz): 1,37
(6H, d), 2,89 (2H, t), 4,65 (2H, t), 4,89 (1H, m), 7,45 (1H, d), 7,89 (1H, d), 8,06 (1H, d), 8,12 (1H, d), 8,20 (1H, s), 20 8,27 (1H, s), 8,55 (1H, s). MS (ES): C21H1935ClN4O4 requiere 426; encontrado 427 (MH+).
Ejemplo 2
3-(5-{5-[3-Cloro-4-(etiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoato de sodio (E2)
O
Se suspendió en NaOH 2 M acuoso (2 ml) y etanol (2 ml), 3-(5-{5-[3-cloro-4-(etiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H
25 indazol-1-il)propanoato de etilo (D57) (77 mg, 0,17 mmol). Se calentó la mezcla a 50 °C hasta que se disolvió y después se enfrió. Se separó el etanol en vacío y el sólido resultante se filtró, se lavó con etanol, agua y éter dietílico, después se secó con alto vacío para obtener el compuesto del epígrafe (63,6 mg) como un sólido rosa. δH (metanold4, 400MHz) 1,49 (3H, t), 2,77 (2H, t), 4,25 (2H, q), 4,71 (2H, t), 7,27 (1H, d), 7,82 (1H, d), 8,09-8,25 (4H, m), 8,55 (1H, s). MS (ES): C20H1735ClN4O4 requiere; 412 encontrado (MH+) 413.
Ejemplo 3
3-[5-(5-{3-Ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoato de sodio (E3)
Se disolvió en etanol (2 ml), 3-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoato de etilo (D58) (99 mg, 0,22 mmol) y se añadió NaOH 2 M acuoso (0,55 ml). Se calentó la reacción a 80 °C durante
5 30 minutos y se disolvieron los reactivos. Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y después se dejó estar durante la noche. El precipitado resultante se filtró, se lavó con agua y después con éter, se secó calentando en vacío para obtener el compuesto del epígrafe (29,1 mg). δH (metanol-d4, 400MHz) 1,46 (6H, d), 2,78, (2H, t), 4,71 (2H, t), 4,88-5,00 (estimado 1H [parcial solapamiento del pico del agua], m). 7,43 (1H, d), 7,83 (1H, d), 8,10-8,17 (2H, m), 8,37-8,49 (2H, m), 8,56 (1H, s), MS (ES): C22H19N5O4 requiere 417; encontrado (MH+) 418.
10 Ejemplo 4
Ácido 3-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico (E4)
CO2H
Se disolvió 3-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoato de etilo (D58) (523 mg, 1,17 mmol) en mezcla de etanol (20 ml) y THF (10 ml) calentando a 50 °C. Se enfrió a temperatura ambien15 te y se añadió NaOH 2 N (1 ml, 2 mmol) y se dejó estar a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se separó el disolvente por evaporación, se añadió agua (50 ml) y se lavó con EtOAc (50 ml). Se acidificó la capa acuosa y se extrajo el producto en EtOAc (50 ml). La capa de EtOAc se secó (MgSO4) y se evaporó el disolvente. Triturando con
éter dietílico se obtuvo el compuesto del epígrafe (139 mg) como un sólido beige. δH (d6-DMSO, 400 MHz): 1,39 (6H, d), 2,90 (2H, t), 4,66 (2H, t), 4,94-5,03 (1H, m), 7,57 (1H, d), 7,90 (1H, d), 8,07 (1H, dd), 8,28 (1H, d), 8,42 (1H, dd), 8,54 (2H, dd), 12,35 (1H, s ancho). MS (ES): C22H19N5O4 requiere 417; encontrado (MH+) 418.
Ejemplo 5
Ácido 4-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico (E5)
Se calentaron 4-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H- metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)2H-indazol-2-il]butanoato de etilo (D44) (73 mg, 0,16 mmol), dimetilamina al 33 % en etanol (4 ml) en el microondas a 160 °C durante 1 hora. Se añadieron 2 gotas de agua, y se calentó en el microondas a 160 °C durante 3 horas. Se
10 dejó que la reacción se enfriara durante la noche y después se evaporó a sequedad en vacío. La purificación ensayada por MDAP generó el material crudo .
A una solución de 4-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H- metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol3-il)-2H-indazol-2-il]butanoato de etilo (D44) (65 mg, 0,14 mmol) en etanol (10 ml), se añadió NaOH 2 M acuoso (1 ml). Se calentó durante 1 hora a 80 °C y después se dejó durante la noche a temperatura ambiente. Se evaporó el
15 disolvente y el material crudo se purificó por MDAP. Se trituró el material resultante con éter y agua para generar el material crudo .
Se reunieron los lotes crudos y se purificaron por MDAP, se secaron por congelación las fracciones que contienen el producto para generar el compuesto del epígrafe (11,1 mg). δH (d6-DMSO, 400MHz) 1,39 (6H, d), 2,01-2,11 (2H, m), 2,23 (2H, t), 4,50 (2H, t), 4,98 (1H, septete), 7,56 (1H, d), 7,86 (1H, d), 8,07 (1H, dd), 8,28 (1H, d), 8,42 (1H, dd),
20 8,52 (1H, d), 8,57 (1H, dd). MS (ES): C23H21N5O4 requiere 431; encontrado (MH+) 432.
Ejemplo 6
Ácido 3-(5-{5-[4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico (E6)
O
N N
N OH
Se disolvió 3-(5-{5-[4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoato de etilo
25 (D59) (82 mg, 0,17 mmol) en etanol (4 ml) y después se añadió NaOH 2 M acuoso (0,5 ml). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante la noche y después se evaporó el etanol en vacío. Se añadió acetato de etilo pero como el compuesto parecía estar en ambas capas acuosa y orgánica, se evaporó la mezcla. Por purificación por MDAP (en dos lotes) seguido por secado por congelación se obtuvo el compuesto del epígrafe (28,7 mg). δH (400MHz, d6-DMSO) 1,36 (6H, d), 2,88 (2H, t), 4,65 (2H, t), 4,98 (1H, sept.), 7,59 (1H, d), 7,89 (1H, d), 8,07 (1H, dd),
30 8,27 (1H, d), 8,32 (1H, d), 8,41 (1H, dd), 8,57 (1H, dd). MS (ES): C22H19F3N4O4 requiere 460; encontrado (MH+) 461.
Ejemplo 7
Ácido 4-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico (E7)
Se añadió hidróxido de sodio 2 M (1 ml, 2 mmol) a una solución de 4-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoato de etilo (D60) (N2666-13-A1) (0,062 g, 0,132 mmol) en etanol (5 ml) y se 5 calentó la reacción a 80 °C para efectuar la disolución y después se dejó que se enfriara durante 2 horas. Se evaporó, se disolvió en acetato de etilo/agua (25 ml de cada uno) y se acidificó con ácido acético. Se secó la capa orgánica (sulfato de magnesio), se evaporó, en mezcla azeotrópica con 15 ml de tolueno y se trituró con éter. Se filtró para dar el compuesto del epígrafe (42 mg) como un sólido blanco. δH (d6-DMSO, 400MHz): 1,37 (6H, d), 2,09 (2H, m), 2,24 (2H, t), 4,54 (2H, t), 4,90 (1H, m), 7,47 (1H, d), 7,62 (1H, dd), 7,97 (1H, d), 8,01 (1H, d), 8,17 (1H, dd), 8,26
10 (1H, d), 8,56 (1H, s). MS (ES): C22H2135ClN4O4 requiere 440; encontrado (MH+) 441.
Ejemplo 7 (procedimiento alternativo)
Ácido 4-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico (E7)
Una solución de 4-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoato de etilo (D60)
15 (1,5 g, 3,20 mmol) en etanol caliente (15 ml), se trató con hidróxido de sodio (7,5 ml, 15,00 mmol) y se dejó estar durante 1 hora. Se evaporaron los disolventes y se sometió el residuo a reparto entre acetato de etilo/agua. Se añadió ácido acético para ajustar el pH a 5 y se separaron las capas. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de magnesio y se evaporó. Se trituró el material crudo con éter para dar el compuesto del epígrafe (1,1 g) como un sólido blanco. δH (d6-DMSO, 400MHz): 1,37 (6H, d), 2,08 (2H, m), 2,23 (2H, t), 4,54 (2H, t), 4,90 (1H, m), 7,47 (1H,
20 d), 7,62 (1H, dd), 7,97 (1H, d), 8,01 (1H, d), 8,17 (1H, dd), 8,26 (1H, d), 8,56 (1H, s). MS (ES): C22H2135ClN4O4 requiere 440; encontrado (MH+) 441.
Ejemplo 8
Ácido 3-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico (E8)
CO2H
Se disolvió 3-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoato de etilo (D61)
5 (380 mg, 0,835 mmol) en etanol caliente (4 ml), se añadió hidróxido de sodio 2 M (2 ml, 4,00 mmol) y se agitó la solución durante 30 minutos. Se había formado un precipitado. Se evaporó el etanol y se sometió el residuo a reparto entre EtOAc/agua. Se neutralizó la capa acuosa con AcOH y se separaron las capas. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de magnesio y se evaporó. Se trituró el material crudo con éter para dar un sólido blanco (240 mg). δH (d6-DMSO) 1,36 (6H, d), 2,90 (2H, t), 4,68 (2H, t), 4,89 (1H, m), 7,46 (1H, d), 7,59 (1H, t), 7,99 (2H, d), 8,16 (1H, dd),
10 8,25 (1H, d), 8,55 (1H, s), 11,90 (1H, br. s). MS (ES): C21H1935ClN4O4 requiere 426; encontrado (MH+) 427.
Los siguientes ejemplos se prepararon por reacciones de hidrólisis similares. A menos que se indique otra cosa, la reacciones se llevaron a cabo entre temperatura ambiente y 80 °C. El disolvente de reacción fue una mezcla de etanol y NaOH 2 M (acuoso). En algunas ocasiones se añadió un disolvente adicional tal como DCM para ayudar en la disolución. En algunos casos se usaron disolventes alternativos tales como DCM en lugar de EtOAc en el procedi15 miento de preparación. En algunos casos se acidificó la mezcla de reacción (usando ácido acético o ácido clorhídrico) para generar el ácido carboxílico mientras que en otros casos se aisló el producto como la sal de sodio. En algunos casos la evaporación de parte del disolvente de la reacción hizo que precipitara el producto y que este material pudiera ser aislado por filtración. Alternativamente, el ácido carboxílico se aisló a veces y se convirtió después en la sal de sodio mediante tratamiento con hidróxido de sodio. En el caso de E23, E24, el uso de ácido clorhídrico para
20 acidificar la reacción en la preparación generó la sal hidrocloruro. Los compuestos se purificaron por MDAP o por trituración. Algunas veces se usó el secado por congelación para generar el material sólido.
- Ejemplo
- Estructura Nombre Precursor MS
- E9
- O Cl O N N NN OH O ácido 3-(5-{5-[3cloro-4(propiloxi)fenil]1,2,4-oxadiazol3-il}-1H-indazol1-il)propanoico D62 [MH+] 427
- E10
- O N N Cl O F F F N N O OH ácido 3-[5-(5-{3cloro-4[(trifluorometil)oxi]fenil}-1,2,4oxadiazol-3-il)1H-indazol-1il]propanoico D65 [MH+] 453
- E11
- O N N N N F F F O O Na+ 3-(5-{5-[4ciclohexil-3(trifluorometil)fenil]-1,2,4oxadiazol-3-il}1H-indazol-1il)propanoato de sodio D66 [MH+] 485
- E12
- NN O N O N F F F O OH ácido 3-(5-{5-[4(metiloxi)-3(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1Hindazol-1-il)propanoico D67 [MH+] 433
- E13
- N N N O N N O CH3 H3C O OH ácido [5-(5-{3ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol3-il)-1H-indazol1-il]acético D46 [MH+] 404
- E14
- OH O ácido 3-(5-{5-[3cloro-4-(metiloxi)fenil]-1,2,4 D68 [MH+] 399
- NN
- oxadiazol-3-il}1H-indazol-1il)propanoico
- N
- NCl
- O
- H3C
- O
- E15
- N N NO N N O O Na+ 3-(5-{5-[3-etil-4(1-piperidinil)fenil]-1,2,4oxadiazol-3-il}1H-indazol-1il)propanoato de sodio D69 [MH+] 446
- E16
-
imagen1 O N N NN O O Na+ 3-{5-[5-(4-ciclohexil-3-etilfenil)1,2,4-oxadiazol3-il]-1H-indazol1-il}propanoato de sodio D70 [MH+] 445
- E17
- NN O OH ácido 3-(5-{5-[3ciano-4-(2metilpropil)fenil]1,2,4-oxadiazol3-il}-1H-indazol1-il)propanoico D71 [MH+] 416
- imagen1
- O N N CN
- E18
- NN O OH ácido 3-[5-(5-{3bromo-4-[(1metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol3-il)-1H-indazol1-il]propanoico D72 [MH+] 471, 473
- O
- O N N Br
- E19
- O ácido 3-(5-{5-[3cloro-4-(2 D73 [MH+] 425, 427
- OH
- metilpropil)fenil]
- NN
- 1,2,4-oxadiazol3-il}-1H-indazol
- imagen1
- 1-il)propanoico
- N
- N
- imagen1
- O
- Cl
- E20
- O CF3 O N N NN O OH ácido 4-(5-{5-[4[(1-metiletil)oxi]3(trifluorometil)fenil]-1,2,4oxadiazol-3-il}1H-indazol-1il)butanoico D74 [MH+] 475
- E21
- NN O OH ácido 3-{5-[5-(2ciano-4-bifenilil)1,2,4-oxadiazol3-il]-1H-indazol1-il}propanoico D75 [M-H+] 434
- NC
- O N N
- E22
- O ácido 3-(5-{5-[3cloro-4-(1 D76 [M-H+] 436, 438
- OH
- pirrolidinil)fenil]
- NN
- 1,2,4-oxadiazol3-il}-1H-indazol
- imagen1
- 1-il)propanoico
- N
- Cl
- N
- imagen1
- O
- N
- E23
- O N N N O Cl H3C CH3 N N ClH hidrocloruro de ácido 4-[5-(5-{5cloro-6-[(1metiletil)oxi]-3piridinil}-1,2,4oxadiazol-3-il)1H-indazol-1il]butanoico D77 [MH+] para 35Cl 442
- HO O
- E24
- O H3C CH3 hidrocloruro de ácido 4-[5-(5-{5cloro-6-[(1 D78 [MH+] para 35Cl 442
- NCl ClH
- metiletil)oxi]-3piridinil}-1,2,4
- imagen1
- oxadiazol-3-il)
- O N
- 2H-indazol-2il]butanoico
- N
- N
- N
- O
- HO
- E25
- F F F ácido 4-(5-{5-[2(trifluorometil)-4bifenilil]-1,2,4oxadiazol-3-il}1H-indazol-1il)butanoico D79 [MH+] 493
- O N
- N N
- N
- HO O
- E26
- F F F ácido 4-(5-{5-[2(trifluorometil)-4bifenilil]-1,2,4oxadiazol-3-il}2H-indazol-2il)butanoico D80 [MH+] 493
- N
- O
- N
- N
- N
- O
- HO
- E27
- O CN ácido 3-[4-(5-{3ciano-4-[(1metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol3-il)-1H-indazol1-il]propanoico D81 [MH+] 418
- O
- NN
- N N
- CO2H
- E28
- ácido 3-[4-(5-{3 D82 [MH+]
- ClO
- cloro-4-[(1metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol 427
- 3-il)-2H-indazol
- imagen1
- 2-il]propanoico
- O
- NN
- N N CO2H
- E29
- N O N O CN ácido 3-[4-(5-{3ciano-4-[(1metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol3-il)-2H-indazol2-il]propanoico D83 [MH+] 418
- N N CO2H
- E30
- N O N O CN ácido 4-[4-(5-{3ciano-4-[(1metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol3-il)-1H-indazol1-il]butanoico D84 [MH+] 432
- N N
- CO2H
- E31
- ácido 4-(4-{5-[3 D85 [MH+]
- N
- etil-4-(1piperidinil)fenil] 460
- imagen1
- 1,2,4-oxadiazol
- 3-il}-1H-indazol
- imagen1
- 1-il)butanoico
- O
- NN
- N N
- CO2H
- E32
- CF3 ácido 4-(4-{5-[2(trifluorometil)-4bifenilil]-1,2,4 D86 [MH+] 493
- oxadiazol-3-il}
- O
- 1H-indazol-1il)butanoico
- NN
- N N
- HO2C
- E33
- ClCF3 ácido 4-[4-(5-{3 D87 [MH+]
- O
- cloro-4[(trifluorome 467
- imagen1
- til)oxi]fenil}-1,2,4
- N O N
- oxadiazol-3-il)1H-indazol-1il]butanoico
- N N
- HO2C
- E34
- N O N O CF3 ácido 3-(4-{5-[4[(1-metiletil)oxi]3(trifluorometil)fenil]-1,2,4oxadiazol-3-il}1H-indazol-1il)propanoico D88 [MH+] 461
- N N
- CO2H
- E35
- N O N O CF3 ácido 4-(4-{5-[4[(1-metiletil)oxi]3(trifluorometil)fenil]-1,2,4oxadiazol-3-il}1H-indazol-1il)butanoico D89 [MH+] 475
- N N
- HO2C
- E36
- N O N N N N O Cl HO2C ácido 4-[4-(5-{5cloro-6-[(1metiletil)oxi]-3piridinil}-1,2,4oxadiazol-3-il)1H-indazol-1-il]butanoico D90 [MH+] 442
- E37
-
imagen1 ácido 4-(4-{5-[4 D91 [MH+]
- imagen1
- fenil-5-(trifluorometil)-2 499
- tienil]-1,2,4
- imagen1
- oxadiazol-3-il}
- S N O N F3C
- 1H-indazol-1il)butanoico
- N N
- HO2C
- E38
- N N O OH O ácido 4-[4-(5-{3cloro-4-[(1metiletil)oxi]fenil}1,2,4-oxadiazol3-il)-2H-indazol2-il]butanoico D92 [MH+] 441
- N O N Cl
- E39
- N O N ONC sal de sodio del ácido 3-{5-[5-(3ciano-4-{[(1S)-1metilpropil]oxi}fenil)-1,2,4oxadiazol-3-il]1H-indazol-1il}propanoico D93 [MH+] 432
- N N O O Na+
- E40
-
imagen1 sal de sodio del D94 [MH+]
- ONC
- ácido 3-{5-[5-(3ciano-4-{[(1R)-1 432
- imagen1
- metilpropil]
- imagen1
- oxi}fenil)-1,2,4oxadiazol-3-il]
- O
- 1H-indazol-1-il}propanoico
- NN
- O O Na+
- N N
- E41
- N sal de sodio del D95 [MH+]
- O
- ácido 3-(5-{5-[3ciano-4 444
- imagen1
- (ciclopentil
- oxi)fenil]-1,2,4
- imagen1
- oxadiazol-3-il}
- N O N
- 1H-indazol-1il)propanoico
- O Na+
- N N
- O
Ejemplo 42 Ácido 4-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico (E42)
Se disolvió en etanol (5 ml), 4-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoato de etilo (D63) (127 mg, 0,27 mmol) y después se añadió hidróxido de sodio (11 mg). Se calentó la mezcla de reacción a 100 °C durante 1 hora en un reactor de microondas y después se dejó que se enfriara. El sólido resultante se separó por filtración y después se lavó con acetona. Por purificación por MDAP, seguida por secado por congelación del material resultante se obtuvo el compuesto del epígrafe (38,1 mg). MS (ES): C22H2135ClN4O4 requiere 440; encontrado (MH+) 441.
Los siguientes ejemplos se prepararon usando un método similar al descrito anteriormente.
- Ejemplo
- Estructura Nombre Precursor MS
- E43
- S F F F O N N N N OHO ácido 4-(5-{5[4-fenil-5(trifluorometil)2-tienil]-1,2,4oxadiazol-3-il}1H-indazol-1il)butanoico D64 [MH+] 499
5 Ejemplo 44
Ácido 4-[5-(5-{3-|ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]butanoico (E44)
O NN
N N
O
Se añadió 4-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]butanoato de etilo (D45) (60 mg, 0,13 mmol) a una solución de dimetilamina en etanol (4 ml) seguido por la adición de unas gotas de agua. Se
10 calentó la mezcla a 160 °C en un reactor de microondas durante cuatro horas y después se dejó que se enfriara. Se separó el disolvente en vacío y el material crudo se purificó por MDAP para obtener el compuesto del epígrafe (28,3 mg) como un sólido blanco. MS (ES): C23H21N5O4 requiere 431; encontrado (MH+) 432.
Ejemplo 45
Ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico (E45)
H3C
HO
A una solución de 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D100) (85 mg, 176 mmol) en THF (2 ml), se añadió a temperatura ambiente NaOH (2 N en H2O, 440 μl, 880 mmol) y la mezcla resultante se agitó a 50 oC durante la noche. Se añadieron NaOH (2 N en H2O, 440 μl, 880 mmol) y THF (2 ml) y la mezcla resultante se agitó a 80 oC durante dos noches y después se enfrió a temperatura ambien
5 te. Se separó la mayor parte de THF en vacío y la fase acuosa resultante se acidificó a pH 3. El precipitado formado se separó por filtración y se lavó con H2O, después se secó a 60 oC a vacío para dar el compuesto del epígrafe (73 mg, 91 %) como un sólido blanco. MS (ES): C23H23ClN4O4 requiere 454; encontrado (MH+) 455.
Los siguientes ejemplos se prepararon usando un método similar al descrito para el ejemplo 45 (E45), usando EtOH en lugar de THF como disolvente orgánico:
10
- Ejemplo
- Estructura Nombre Precursor MS
- E46
- N N N O N ClO H3C H3C H3C OH O CH3 ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1metiletil)oxi]fenil}-1,2,4oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]2,2-dimetilpropanoico D101 [MH+] 455
- E47
- N N O N ClO H3C H3C ácido 3-[4-(5-{3-cloro-4-[(1metiletil)oxi]fenil}-1,2,4oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]2,2-dimetilpropanoico D104 [MH+] 455
- N CH3 HO O CH3
Ejemplo 48
Ácido 3-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico (E48)
15 Se disolvió en etanol (10 ml), 3-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2dimetilpropanoato de etilo (D105) (50 mg, 0,103 mmol). Se añadió hidróxido de sodio (2 N en H2O, 0,258 ml, 0,517 mmol) y la mezcla resultante se agitó a 60 ºC durante la noche y después se enfrió a temperatura ambiente. Se evaporó el disolvente, y después se diluyó el residuo con agua. Se neutralizó la fase acuosa con una solución acuosa 2 N de HCl y después se extrajo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con H2O, se secó sobre MgSO4 y se concentró en vacío para dar el compuesto del epígrafe (22 mg, 42 %) como un sólido de color blanco sucio. MS (ES): C22H22ClN5O4 requiere 455; encontrado (MH+) 456.
Ejemplo 49
5 Ácido 3-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico (E49)
H3C
CH3
N O
N
O N N
N
H3C CH3
Se disolvió en etanol (10 ml), 3-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2dimetilpropanoato de etilo (D107) (50 mg, 0,106 mmol). Se añadió hidróxido de sodio (2 N en H2O, 0,264 ml, 0,528 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se separó la mayor parte del disolvente
10 en vacío, y el residuo se diluyó con agua. Se neutralizó la fase acuosa con una solución acuosa 2 N de HCl y después se extrajo con EtOAc. Se lavó la fase orgánica con H2O, se secó sobre MgSO4 y se concentró en vacío para dar el compuesto del epígrafe (15 mg, 30 %) como un sólido amarillo claro. MS (ES): C23H24N5O4 requiere 445; encontrado (MH+) 446.
Ejemplo 50
15 Ácido 4-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilbutanoico (E50)
N O
N
O
N
N
N
O CH3 OH
Se obtuvo el compuesto del epígrafe (E50) a partir de 4-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilbutanoato de etilo (D108) usando un procedimiento similar a la preparación del Ejemplo 49 (E49) (16 mg, 32 %). MS (ES): C25H25N5O4 requiere 459; encontrado (MH+) 460.
20 Ejemplo 51
Ácido 3-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico (E51)
N
O
Una solución de 3-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoato de etilo (D109) (100 mg, 0,21 mmol) en etanol (2 ml), se trató con solución acuosa 2 M de hidróxido de sodio (1 ml, gran exceso) y se calentó a 80 ºC durante 2 horas. Se enfrió la mezcla de reacción y se separó la mayor parte del etanol en vacío. Se diluyó el residuo con agua (3 ml) y se acidificó con una solución acuosa concentrada de HCl y se
5 extrajo con EtOAc (3 x 10 ml). Se secaron los extractos reunidos y se concentraron en vacío. Por purificación del residuo por MDAP se obtuvo el producto deseado (5 mg, 5 %) como un sólido incoloro. MS (ES) C24H23N5O4 requiere 445; encontrado (MH+) 446.
Ejemplo 52
Ácido 3-[5-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico 10 (E52)
H3C
H3C
Una solución de 3-[5-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2dimetilpropanoato de etilo (D111) (100 mg, 0,21 mmol) en etanol (2 ml), se trató con una solución acuosa 2 M de hidróxido de sodio (1 ml) y se calentó a 80 ºC con agitación durante 4 horas. Se enfrió la mezcla de reacción a tem
15 peratura ambiente y se diluyó con agua (5 ml). Se acidificó la solución acuosa con ácido acético glacial, y se extrajo con EtOAc (2 x 10 ml). Las fases orgánicas reunidas se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vacío. Por purificación del residuo por MDAP se obtuvo el producto deseado (3 mg, 3 %) como un sólido incoloro. MS (ES): C22H22ClN5O4 requiere 455; encontrado (MH+) 456.
Los siguientes ejemplos se prepararon usando un método similar al descrito para el Ejemplo 48 (E48)
20
- Ejemplo
- Estructura Nombre Precursor MS
- E53
- N O N O N O N N O ácido 4-[4-(5-{3-ciano-4-[(1metiletil)oxi]fenil}-1,2,4oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]2,2-dimetilbutanoico D115 [MH+] 460
- E54
- N O N N O Cl N N O O ácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]2,2-dimetilbutanoico D116 [MH+] 470
Ensayo de unión de S1P1 a GTPS Y
Se cultivaron células de leucemia basófila de rata (RBL) que expresan de forma estable el receptor S1P1 hasta el 80 % de confluencia antes de ser recolectadas en 10 ml de solución salina fosfo-tamponada (PBS) y centrifugadas a 1200 rpm durante 5 minutos. Después de la separación del sobrenadante, se re-suspendió el sedimento y se
5 homogenizó en 20 volúmenes de tampón de ensayo ( HEPES 20 mM pH 7,4, NaCl 100 mM, MgCl2.6H2O 10 mM, GDP 10 µM, saponina a 10 µg/ml). La suspensión de la membrana se centrifugó adicionalmente durante 20 minutos a 20.000 rpm se re-homogenizó y se centrifugó de nuevo. Después de la segunda centrifugación se re-suspendió el sedimento en un volumen apropiado (1 ml para cada frasco de células) y se valoró en cuanto a la concentración de proteínas.
10 Se sonicó el stock concentrado de S1P antes de que fueran preparadas diluciones seriadas a partir de una concentración de partida 10-5 M. Se incubaron las membranas diluidas (10 µg/pocillo) con diferentes concentraciones de S1P y 35S-GTPγS 0,3 nM (NEN; actividad específica 1250 Ci/mmol) en placas de 96 pocillos profundos. Se realizó la unión a 30 ºC durante 45 minutos y se terminó recogiendo las membranas sobre placas filtrantes GF/B usando un Packard Universal Harvester. Después de secar las placas durante 45 minutos, se añadieron a cada pocillo 50 µl de
15 Microscint 0 y se midió la unión sobre un Topcount NXT (Perkin Elmer). Se analizaron los datos usando Graphpad Prism 4 y se expresaron como porcentaje de estimulación por encima de la basal. Los valores EC50 se definieron como la concentración de agonista requerida para dar el 50 % de la estimulación máxima.
El Ejemplo 1 de la invención tuvo una pEC50 > 6 en este ensayo de unión de GTPS.
Ensayo de unión de S1P1 a GTPS (método alternativo)
20 Para las preparaciones de las membranas todas las etapas se realizaron a 4 ºC. Se cultivaron células de hepatoma de rata que expresan de manera estable el receptor humano S1P1 o células de leucemia basófila de rata (RBL) que expresan de manera estable el receptor humano S1P3 hasta el 80 % de confluencia antes de ser recolectadas en 10 ml de solución salina fosfo-tamponada (PBS) y centrifugadas a 1200 rpm durante 5 minutos. Después de la separación del sobrenadante, se re-suspendió el sedimento y se homogenizaron las células en un mezclador Waring de
25 vidrio durante 2 ráfagas de 15 segundos en 200 ml de tampón (HEPES 50 mM, leupeptina 1mM, bacitracina 25μg/ml, EDTA 1 mM, PMSF 1 mM, pepstatina A 2 μM). Se sumergió el mezclador en hielo durante 5 minutos después de la primera ráfaga y 10-40 minutos después de la ráfaga final para dejar que se disipara la espuma. Después se centrifugó el material a 500 g durante 20 minutos y se centrifugó el sobrenadante durante 36 minutos a
30 pepstatina A. Se hizo pasar entonces el material a través de una aguja de 0,6 mm, se llevó al volumen requerido (normalmente 4 veces el volumen del sedimento celular original), se prepararon alícuotas y se almacenaron congeladas a – 80 ºC.
Las membranas del hepatoma de rata con S1P1 humano (1,5 μg/pocillo) se adhirieron a perlas del ensayo de proximidad de centelleo (SPA) recubiertas con aglutinina de germen de trigo (WGA) (0,125 mg/pocillo) en tampón de
35 ensayo (HEPES 20 mM, MgCl2 10 mM, NaCl 100 mM y pH ajustado a 7,4 usando KOH 5 M, y también se añadieron GDP 10μM FAC (concentración final de ensayo) y saponina a 90μg/ml FAC).
Después de 30 minutos de pre-acoplamiento en hielo la suspensión de perlas y membranas se dispensó a una placa Greiner blanca de pocillos LV384 de polipropileno (5 μl/pocillo), que contiene 0,1 μl del compuesto. Se añadieron entonces a las placas del agonista 5 μl/pocillo de [35S]-GTP�S (concentración final del radioligando 0,5 nM) prepa
40 rado en tampón de ensayo. Se centrifugó entonces el cocktail del ensayo final (10,1 μl) a 1000 rpm durante 5 minutos y después se leyó inmediatamente en un lector Viewlux.
Todos los compuestos de ensayo se disolvieron en DMSO a una concentración 10 mM y se prepararon en DMSO al 100 % usando una etapa de dilución 1 en 4 para proporcionar curvas de dosis-respuesta de 11 puntos. Se transfirieron las diluciones a las placas de ensayo asegurando que la concentración de DMSO era constante en toda la placa para todos los ensayos.
Todos los datos se normalizaron a la media de 16 pocillos control altos y 16 pocillos control bajos en cada placa. Se aplicó después un ajuste de la curva de cuatro parámetros.
Los ejemplos 1 a 52 de la invención tuvieron una pEC50 > 5 en este ensayo.
Ensayo de unión de S1P3 a GTPS
Las membranas de S1P3 procedentes de células de leucemia basófila de rata (RBL-2H3) (1,5 μg/pocillo) se adhirieron a perlas SPA recubiertas con WGA (0,125 mg/pocillo) en tampón de ensayo (HEPES 20 mM, MgCl2 3 mM, NaCl 100 mM y pH ajustado a 7,4 usando KOH 5 M), y también se añadieron GDP 10 μM FAC y saponina a 90 μg/ml FAC).
Después de 30 minutos de pre-acoplamiento en hielo la suspensión de perlas y membranas se dispensó a una placa Greiner blanca de pocillos LV384 de polipropileno (5 μl/pocillo), que contiene 0,1 μl del compuesto. Se añadieron entonces a las placas del agonista 5 μl/pocillo de [35S]-GTPS (concentración final del radioligando 0,5 nM) preparado en tampón de ensayo. Se centrifugó entonces el cocktail del ensayo final (10,1 μl) a 1000 rpm durante 5 minutos y después se leyó inmediatamente en un lector Viewlux.
Todos los compuestos de ensayo se disolvieron en DMSO a una concentración 10 mM y se prepararon en DMSO al 100 % usando una etapa de dilución 1 en 4 para proporcionar curvas de dosis-respuesta de 11 puntos. Se transfirieron las diluciones a las placas de ensayo asegurando que la concentración de DMSO era constante en toda la placa para todos los ensayos.
Todos los datos se normalizaron a la media de 16 pocillos control altos y 16 pocillos control bajos en cada placa. Se aplicó después un ajuste de la curva de cuatro parámetros.
Los ejemplos 1 a 46 y 52 tuvieron una pEC50 < 6,5, muchos de los ejemplos ensayados tuvieron una pEC50 <5 en este ensayo.
Ensayo de unión a levaduras
Se generaron células de levadura (Saccharomyces cerevisiae) que expresan el receptor humano S1P1 mediante integración de una casete de expresión en el locus cromosómico ura3 de la cepa de levadura MMY23. Esta casete consistía en una secuencia de DNA que codifica el receptor S1P1 humano flanqueada por el promotor de levadura GPD hacia el extremo 5' de S1P1 y una secuencia terminadora de la transcripción de levadura hacia el extremo 3' de S1P1. La cepa MMY23 expresa una subunidad alfa de la proteína G quimérica de levaduras/mamíferos en la que los 5 aminoácidos C-terminales de Gpa1 están reemplazados por los 5 aminoácidos C-terminales de Gαi1/2 humana (como se describe en Brown et al. (2000), Yeast 16:11-22). Las células se cultivaron a 30 ºC en el medio de levaduras Synthetic Complete (SC) líquido (Guthrie and Fink (1991), Methods in Enzymology, Vol. 194) que carecía de uracilo, triptófano, adenina y leucina hasta una fase logarítmica tardía (aproximadamente 6 OD600/ml).
Los agonistas se prepararon como soluciones 10 mM en DMSO. Los valores de EC50 (la concentración requerida para producir 50 % de la respuesta máxima) se estimaron usando diluciones de 4 veces (BiomekFX, Beckman) en DMSO. Las soluciones de agonista en DMSO (1 % del volumen final de ensayo) se transfirieron a placas de microtitulación de fondo negro de Greiner (pocillos 384). Las células se suspendieron a una densidad de 0,2 OD600/ml en medio SC que carecía de histidina, uracilo, triptófano, adenina y leucina y se suplementaron con 3-aminotriazol 0.1 mM, fosfato de sodio 0,1 M, pH 7,0 y fluoresceína-di-β-D-glucopiranósido (FDGlu) 10μM. Esta mezcla (50 μl por pocillo) se añadió al agonista en las placas de ensayo (Multidrop 384, Labsystems). Después de la incubación a 30 ºC durante 24 horas, se determinó la fluorescencia resultante de la degradación de FDGlu a fluoresceína debida a la exoglucanasa, una enzima de levaduras endógena producida durante el crecimiento celular estimulado por agonistas, usando un lector de placas de microtitulación de fluorescencia (Tecan Spectrofluor o LJL Analyst, longitud de onda de excitación: 485 nm; longitud de onda de emisión: 535 nm). Se representó la fluorescencia frente a la concentración de compuesto y se ajustó la curva iterativamente usando un ajuste de cuatro parámetros para generar un valor de efecto frente a concentración. La eficacia (Emax) se calculó a partir de la ecuación
Emax = Max[compuesto X] - Min[compuesto X] / Max[S1P] - Min[S1P] x 100 %
donde Max[compuesto X] y Min[compuesto X] son los máximos y mínimos fijados respectivamente a partir de la curva efecto-concentración para el compuesto X, y Max[S1P] y Min[S1P] son los máximos y mínimos fijados respectivamente a partir de la curva efecto-concentración para la esfingosina-1-fosfato (disponible de Sigma). Los valores de la relación molar equiefectiva (EMR) se calcularon a partir de la ecuación
EMR = EC50 [compuesto X] / EC50 [S1P]
donde EC50 [compuesto X] es la EC50 del compuesto X y EC50 [S1P] es la EC50 de S1P.
Los compuestos de los ejemplos de la invención analizados en este ensayo tuvieron una pEC50 > 5.
Claims (10)
- REIVINDICACIONES1. Un compuesto de la fórmula (I) o sales del mismo:(I) en la que uno de R5 y R6 es hidrógeno o R2 y el otro es (a)ON N
imagen1 imagen2 R1(a)uno de R3 y R4 es hidrógeno y el otro es (b)imagen3 OH (b)A es un fenilo o un anillo heteroarilo de 5 o 6 miembros;10 R1 es hidrógeno o representa hasta tres sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, alquilo C(1-4), alcoxi C(1-4), cicloalquilo C(5-7), cicloalcoxi C(5-7), trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluorometilo, ciano, fenilo, anillos heteroarilo de 5 o 6 miembros, piperidinilo y pirrolidinilo;R2 es hidrógeno o representa hasta tres sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, alquilo C(1-4), alcoxi C(1-4), trifluorometoxi, difluorometoxi, trifluorometilo y ciano;15 R7 es hidrógeno o halógeno;Z es alquilo C(1-4) que puede estar opcionalmente interrumpido una vez por N o O y que puede estar opcionalmente sustituido sobre carbono con hasta cuatro sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, metilo e hidroxilo, con la condición de que ningún átomo de carbono esté sustituido con dos grupos hidroxilo. - 2. Un compuesto de la fórmula (IA) como se ha definido en la reivindicación 1 o sales del mismo:20 OH (IA) en la que R1, R2, R5, R6, R7 y Z se definen según la reivindicación 1.
- 3. Un compuesto de la fórmula (IB) como se ha definido en la reivindicación 1 o sales del mismo:
imagen4 imagen5 en la que R1, R2, R5, R6, R7 y Z se definen según la reivindicación 1. - 4. Un compuesto según las reivindicaciones 1 o 2, en el que, A es tiofeno opcionalmente sustituido, piridilo o fenilo; y 5 R1 representa dos sustituyentes seleccionados independientemente entre hidrógeno, cloro, bromo, isopropoxi, propoxi, metoxi, 1-metilpropoxi, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, ciclohexilo, piperidina, pirrolidinilo, etilo, 2metilpropilo, fenilo y ciclopentoxi; y R2 es hidrógeno; y R7 es hidrógeno; y10 Z es etileno o propileno opcionalmente sustituidos con gem-dimetilo.
- 5. Un compuesto como se ha definido en la reivindicación 1, seleccionado de: ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico ácido 3-(5-{5-[3-cloro-4-(etiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 3-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico15 ácido 4-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico ácido 3-(5-{5-[4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 4-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico ácido 3-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico ácido 3-(5-{5-[3-cloro-4-(propiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico20 ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(trifluorometil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico ácido 3-(5-{5-[4-ciclohexil-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 3-(5-{5-[4-(metiloxi)-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido [5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]acético ácido 3-(5-{5-[3-cloro-4-(metiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico25 ácido 3-(5-{5-[3-etil-4-(1-piperidinil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 3-{5-[5-(4-ciclohexil-3-etilfenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]-1H-indazol-1-il}propanoico ácido 3-(5-{5-[3-ciano-4-(2-metilpropil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico ácido 3-[5-(5-{3-bromo-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoico ácido 3-(5-{5-[3-cloro-4-(2-metilpropil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico30 ácido 4-(5-{5-[4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)butanoico ácido 3-{5-[5-(2-ciano-4-bifenilil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]-1H-indazol-1-il}propanoico ácido 3-(5-{5-[3-cloro-4-(1-pirrolidinil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoico hidrocloruro de ácido 4-[5-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoico hidrocloruro de ácido 4-[5-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]butanoico ácido 4-(5-{5-[2-(trifluorometil)-4-bifenilil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)butanoicoácido 4-(5-{5-[2-(trifluorometil)-4-bifenilil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-2H-indazol-2-il)butanoicoácido 3-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]propanoicoácido 3-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]propanoicoácido 3-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]propanoicoácido 4-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoicoácido 4-(4-{5-[3-etil-4-(1-piperidinil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)butanoicoácido 4-(4-{5-[2-(trifluorometil)-4-bifenilil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)butanoicoácido 4-[4-(5-{3-cloro-4-[(trifluorometil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoicoácido 3-(4-{5-[4-[(1-metiletil)oxi]-3-(trifluorometil)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoicoácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoicoácido 4-(4-{5-[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)butanoicoácido 4-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]butanoicosal de sodio del ácido 3-{5-[5-(3-ciano-4-{[(1S)-1-metilpropil]oxi}fenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]-1H-indazol-1-il}propanoicosal de sodio del ácido 3-{5-[5-(3-ciano-4-{[(1R)-1-metilpropil]oxi}fenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]-1H-indazol-1-il}propanoicoácido 3-(5-{5-[3-ciano-4-(ciclopentiloxi)fenil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)propanoicoácido 4-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]butanoicoácido 4-(5-{5-[4-fenil-5-(trifluorometil)-2-tienil]-1,2,4-oxadiazol-3-il}-1H-indazol-1-il)butanoicoácido 4-[5-(5-{3-|ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]butanoicoácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico:ácido 3-[5-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-2H-indazol-2-il]-2,2-dimetilpropanoicoácido 3-[4-(5-{3-cloro-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoicoácido 3-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoicoácido 3-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico ácido 4-[5-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilbutanoico ácido 3-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoicoácido 3-[5-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilpropanoico:ácido 4-[4-(5-{3-ciano-4-[(1-metiletil)oxi]fenil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilbutanoicoácido 4-[4-(5-{5-cloro-6-[(1-metiletil)oxi]-3-piridinil}-1,2,4-oxadiazol-3-il)-1H-indazol-1-il]-2,2-dimetilbutanoicoo las sales de los mismos.
-
- 6.
- Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para uso en el tratamiento de esclerosis múltiple, enfermedades autoinmunes, trastornos inflamatorios crónicos, asma, neuropatías inflamatorias, artritis, transplantes, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, lupus eritematoso, psoriasis, lesiones por isquemia-reperfusión, tumores sólidos, y metástasis tumoral, enfermedades asociadas con angiogénesis, enfermedades vasculares, condiciones dolorosas, enfermedades virales agudas, trastornos inflamatorios del intestino, diabetes dependiente de insulina y no dependiente de insulina.
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- 7.
- El uso según la reivindicación 6, en el que la enfermedad o trastorno es esclerosis múltiple.
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- 8.
- Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para fabricar un medicamento para uso en el tratamiento de esclerosis múltiple, enfermedades autoinmunes, trastornos inflamatorios crónicos, asma, neuropatías inflamatorias, artritis, transplantes, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, lupus eritematoso, psoriasis, lesiones por isquemia-reperfusión, tumores sólidos, y metástasis tumoral, enfermedades asociadas con an
giogénesis, enfermedades vasculares, condiciones dolorosas, enfermedades virales agudas, trastornos inflamatorios del intestino, diabetes dependiente de insulina y no dependiente de insulina. -
- 9.
- El uso según la reivindicación 8, en el que la enfermedad o trastorno es esclerosis múltiple.
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- 10.
- Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.
Applications Claiming Priority (3)
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Family Applications (1)
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2008
- 2008-04-02 GB GB0805993A patent/GB0805993D0/en not_active Ceased
- 2008-04-17 ES ES08736315T patent/ES2361962T3/es active Active
Also Published As
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