PT2055188E - Agente para aumentar o teor em polifenol para plantas - Google Patents

Description

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Descrição "Agente para aumentar o teor em polifenol para plantas"

Campo da Invenção A presente invenção diz respeito à utilização do ácido 5-aminolevulínico, de um seu derivado de fórmula (1) ou de um seu sal para aumentar o teor em polifenol contido numa planta e a um processo para aumentar o teor em polifenol numa planta.

Antecedentes da Invenção

Polifenol é um termo genérico para compostos que possuem dois ou mais grupos hidroxilicos fenólicos nas mesmas moléculas. 0 seu número representa 5000 ou mais e é classificado como sendo à base de ácido fenilcarboxilico, à base de lenhano, à base de curcumina, à base de cumarina, ou à base de flavonoides. O polifenol é um açúcar variado que é em parte modificado que se encontra nas folhas, flores, tronco e partes semelhantes de plantas é sintetizado por fotossintese, e que possui uma acção de desactivar o oxigénio activo gerado pelos raios ultra-violeta.

Doenças relacionadas com o estilo de vida como os cancros e doenças cardíacas são desenvolvidas através de danos de ADN, quebra de membranas celulares, desnaturação de proteínas, ferimento do receptor e danos semelhantes provocados pelo oxigénio activo gerado em componentes solúveis em gordura entre células e sobre membranas celulares. O polifenol pode induzir a apoptose de células 2 de cancro e também desactiva o oxigénio activo através da acção anti-oxidante, de modo que o polifenol é dito ser eficaz para a prevenção destas doenças (documentos que não são patentes de invenção 1 e 2).

Por isso, o polifenol chama a atenção como um principio activo de alimentos funcionais e têm sido realizados activamente estudos de pesquisa de plantas que contêm polifeno. Contudo, é dificilmente conhecida é dificilmente conhecida uma tentativa para aumentar o teor de polifenol numa planta e um processo de aumentar o teor em flavonoides, que são um tipo de polifenois, utilizando uma acilciclohexanodiona específica é apenas revelado no documento de patente de invenção 1 recentemente do domínio público.

Uma série de ácidos 5-aminolevulínicos tal como o ácido 5-aminolevulínico representado por derivados de NH2CH2CO (CH2) 2COOH dos seus ésteres alquílicos, etc., os seus cloridratos e semelhantes são conhecidos por serem úteis como um fotosensibilizador na terapia fotocinética (documento de patente de invenção 2), um regulador de crescimento de planta (documento de patente de invenção 3 e 8), um herbicida (documento de patente de invenção 4 e 11), uma terapia de infecção com microrganismos patogénicos e parasitas de peixes (documento de patente de invenção 5), e um acelerador de crescimento do porco (documento de patente de invenção 6), um agente para aumentar os oligossacarídeos de plantas (documento de patente de invenção 7), um agente para melhorar a tolerância ao sal pelas plantas (documento de patente de invenção 9), um regulador de pigmentação para maçãs (documento de patente de invenção 10) . Contudo, um seu efeito de aumento do polifenol não é inteiramente conhecido. 3

Documento de patente de invenção 1: JP-A-2006-52217 Documento de patente de invenção 2 : JP-T-2004-505105 Documento de patente de invenção 3: JP-A-07-53487 Documento de patente de invenção 4 : JP-A-05-117110 Documento de patente de invenção 5: JP-A-2001-316255 Documento de patente de invenção 6 : JP-A-2003-40770 Documento de patente de invenção 7: JP-A-09-87108 Documento de patente de invenção 8 : EP0514 7 76 A Documento de patente de invenção 9 : EP0714600A Documento de patente de invenção 10 : EP0598304A Documento de patente de invenção 11 : JP04009360A Documento que nao é patente de invenção 1: Br. Pharmacol 123:565-573, (1998) Documento que não é patente de invenção 2: Oncogene 7180-7189, 2005

Divulgação da Invenção

Problemas que a invenção vem resolver

Um objectivo da invenção é aumentar o teor de polifenol numa planta

Meios para resolver os problemas

Os presentes inventores verificaram que o teor de polifenol numa planta é aumentado através da utilização de 5-aminolevulina numa planta e assim realizaram a invenção.

Nomeadamente, a invenção disponibiliza a utilização de ácido 5-aminolevulínico ou um seu derivado representado pela fórmula seguinte (1), ou um seu sal para aumentar o teor de polifenol numa planta: 4 (Chem 1) R2R1NCH2COCH2CH2COR3 (1) em que R1 e R2 cada um independentemente representam um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo, um grupo acilo, um grupo alcóxicarbonilo, um grupo arilo, ou um grupo aralquilo; R3 representa um grupo hidróxilo, um grupo alcóxido que pode ter um substituinte, um grupo acilóxi, um grupo alcóxicarbonilóxi, um grupo arilóxi, um grupo aralquilóxi, ou um grupo amino, ou um seu sal.

Vantagem da Invenção A utilização de ácido 5-aminolevulínico ou um seu derivado de fórmula (1), ou um seu sal da invenção pode aumentar o teor do polifenol da planta convenientemente e eficazmente e assim conferir uma natureza de alimento funcional a uma planta.

Melhor Forma de Efectuar a Invenção

Na presente invenção o ácido 5-aminolevulínico ou um seu derivado representado pela fórmula acima (1), ou um seu sal é utilizado como principio activo de um agente que aumenta o teor em polifenol. 0 grupo alquilo representado por R1 e R2 na fórmula (1) é preferencialmente um grupo alquilo linear ou ramificado possuindo 1 a 24 átomos de carbono e mais preferencialmente um grupo alquilo possuindo 1 a 18 átomos de carbono, particularmente é preferido um grupo alquilo possuindo 1 a 6 átomos de carbono. Como grupo alquilo que possui 1 a 6 átomos de carbono pode ser mencionado um grupo metilo, um grupo etilo, um grupo n- 5 propilo, um grupo isopropilo, um grupo n-butilo, um grupo sec-butilo.

Como grupo acilo representado por R1 e R2, um grupo alcanoílo linear ou ramificado, é preferido um grupo alquenilcarbonilo, um grupo aroilo, um grupo arilóxicarbonilo possuindo 1 a 24 átomos de carbono, preferencialmente 1 a 12 átomos de carbono, e particularmente é preferido um grupo alcanoílo possuindo 1 a 6 átomos de carbono. Como grupo acilo pode ser mencionado um grupo formilo, um grupo acetilo, um grupo n-propanoílo, um grupo n-butanoílo, um grupo n-pentanoílo, um grupo n-hexanoílo, um grupo n-nonanoílo, um grupo benzilóxicarbonilo.

Como grupo alcóxicarbonilo representado por R1 e R2, um grupo alcóxicarbonilo possuindo 2 a 13 átomos de carbono no total é preferido, e particularmente é preferido um grupo alcóxicarbonilo possuindo 2 a 7 átomos de carbono. Como grupo alcóxicarbonilo pode ser mencionado um grupo metóxicarbonilo, um grupo etóxicarbonilo, um grupo n-propóxicarbonilo, um grupo isopropóxicarbonilo. É preferido como grupo arilo representado por R1 e R2, um grupo arilo que possui de 6 a 16 átomos de carbono e pode ser por exemplo mencionado um grupo fenilo, um grupo naftilo.

Como grupo aralquilo representado por R1 e R2 é preferido um grupo composto por um grupo arilo possuindo 6 a 16 átomos de carbono e o grupo alquilo acima possuindo 1 a 6 átomos de carbono e pode ser, por exemplo, mencionado um grupo benzilo.

Como grupo alquilo que pode ser substituído, o grupo representado por R3 pode ser por exemplo mencionado como sendo um grupo alquilo de estrutura linear ou ramificada ou cíclica possuindo um grupo alquilo com 1 a 24 átomos 6 de carbono que pode ter um substituinte. Como substituinte que o grupo alquilo pode ter pode ser por exemplo mencionado, um grupo hidróxilo, um grupo alcóxido, um grupo fenilo, e semelhante. Como exemplos preferidos do grupo alquilo que pode ter um substituinte, pode ser por exemplo mencionado, por exemplo, um grupo metilo, um grupo etilo, um grupo n-propilo, um grupo isopropilo, um grupo n-butilo, um grupo isobutilo, um grupo terc-butilo, um grupo n-pentilo, um grupo isopentilo, um grupo neopentilo, um grupo terc-pentilo, um grupo 2-metilbutilo, um grupo n-hexilo, um grupo ciclohexilo, um grupo isohexilo, um grupo 3-metilpentilo, um grupo etilbutilo, um grupo n-heptilo, um grupo 2-metilhexilo, um grupo n-octilo, um grupo isooctilo, um grupo terc-octilo, um grupo 2-etilhexilo, um grupo 3-metilpentilo, um grupo n-nonilo, um grupo isononilo, um grupo 1-metiloctilo, um grupo etilheptilo, um grupo n-dodecilo, um grupo 1-metilnonilo, um grupo n-undecilo, um grupo 1, 1-dimetilnonilo, um grupo n-tridecilo, um grupo n-tetradecilo, um grupo n-pentadecilo, um grupo n-hexadecilo, um grupo n-heptadecilo, um grupo n-octadecilo, um grupo benzilo, um grupo fenetilo, um grupo fenilpropilo, um grupo hidróxietilo, um grupo etóxietilo, e semelhantes. Destes um grupo alquilo possuindo 1 a 12 átomos de carbono é mais preferido.

Como grupo acilóxi representado por R3 é preferido um grupo alcanoilóxi linear ou ramificado possuindo 1 a 12 átomos de carbono, e particularmente, é preferido um grupo alcanoilóxi linear ou ramificado possuindo 1 a 6 átomos de carbono. Como grupo acilóxi pode ser mencionado um grupo acetóxi, um grupo propionilóxi, um grupo butirilóxi.

Como grupo alcóxicarboniloxi representado por R , e preferido um grupo alcóxicarboniloxi possuindo 2 a 13 7 átomos de carbono no total e em particular é preferido um grupo alcóxicarbonilóxi possuindo 2 a 7 átomos de carbono no total. Como grupo alcóxicarbonilóxi pode ser mencionado um grupo metóxicarboniloxi, um grupo etóxicarbonilóxi, um grupo n-propóxicarbonilóxi, um grupo isopropóxicarboniloxi.

Como grupo arilóxi representado por R3, é preferido um grupo ariloxi possuindo 6 a 16 átomos de carbono e pode por exemplo ser mencionado um grupo fenóxi, um grupo naftilóxi. Como grupo aralquilóxi, é preferido um que possui o grupo aralquil acima referido e pode ser por exemplo mencionado um grupo benzilóxi.

Como R1 e R2 na fórmula (1), é preferido um átomo de hidrogénio. Como R3 é preferido um grupo hidróxilo, um grupo alcóxi ou um grupo aralquilóxi, e mais preferencialmente, um grupo hidróxilo, ou um grupo alcóxido possuindo 1 a 12 átomos de carbono, particularmente 1 a 6 átomos de carbono, em particular é preferido um grupo metóxi, ou um grupo hexilóxi.

Como derivado do ácido 5-aminolevulínico pode ser mencionado o éter metílico do ácido 5-aminolevulínico, éster etílico do ácido 5-aminolevulínico, éster propílico do ácido 5-aminolevulínico, éster butílico do ácido 5- aminolevulínico, éster pentílico do ácido 5 aminolevulínico, éster hexílico do ácido 5 aminolevulínico, e semelhantes. Em particular, é preferido o éster metílico do ácido 5-aminolevulínico ou éster hexílico do ácido 5-aminolevulínico.

Como sal do ácido 5-aminolevulínico ou do seu derivado pode ser por exemplo mencionados sais de adição de ácidos, tais como cloridratos, bromidratos, iodidratos, fosfatos, metilfosfatos, etilfosfatos, fosfitos, hipofosfitos, nitratos, sulfatos, acetatos, propionatos, toluenosulfonatos, succinatos, oxalatos, 8 lactatos, tartaratos, glicolatos, metanossulfonatos, butiratos, valeratos, citratos, fumaratos, maleatos, e malatos; sais metálicos, tais como sais de sódio, sais de potássio, e sais de cálcio; sais de amónio, sais de alquilamónio, e semelhantes. Nas suas aplicações estes sais são utilizados como soluções aquosas ou pós. 0 ácido 5-aminolevulínico referido acima, um seu derivado de fórmula (1), e um seu sal (aqui referido como "ácido 5-aminolevulínico ou semelhante") pode formar hidratos ou solvatos. Além disso qualquer deles pode ser utilizado isoladamente ou dois ou mais podem ser utilizados em combinação. 0 ácido 5-aminolevulínico ou análogos a serem utilizados na invenção podem ser produzidos de acordo com qualquer processo de síntese química, produção por um microorganismo, e produção por uma enzima. Especificamente pode ser produzido de acordo com os processos descritos na JP-A-48-92328, JP-A-62-111954, JP-A-2-76841, JP-A-6172281, JP-A-7-188133, JP-A-11-42083. Pode ser utilizado o ácido 5-aminolevulínico ou compostos semelhantes e uma mistura reaccional ou um seu líquido de fermentação antes da purificação que são produzidos como referido acima de modo a que sejam utilizados como tal sem separação e purificação a não ser que contenham substância(s) nociva(s). Além disso, também pode ser utilizado um produto comercial.

Como indicado nos exemplos seguintes, tratando uma planta com ácido 5-aminolevulínico ou análogos, o teor total de ácido clorogénico, ácido cafeico, ácido ferrúlico, rutina, quercetina, luteolina, hesperetina, kaempferol, apigenina, e isorhamnetina, que são polifenois típicos contidos numa planta é aumentado. Por isso o ácido 5-aminolevulínico, ou análogos podem ser utilizados como um agente para aumentar o teor de 9 polifenol de uma planta. A acção de um tal ácido 5-aminolevulínico ou análogos é totalmente inesperada e a invenção é útil para aumentar o valor de uma planta como alimento funcional. 0 ácido 5-aminolevulínico ou análogo é utilizado convenientemente como um agente de reforço de polifenois à base de ácido fenilcarboxilico, à base de lenhano, à base de curcumina, à base de cumarina, ou à base de flavonoides, em particular como agente de reforço de polifenol à base de ácido f enilcarboxilico, à base de lenhano, à base de curcumina, à base de cumarina, ou à base de flavonoides, em particular como agente de reforço de polifenois à base de ácido fenilcarboxilico ou à base de flavonoides. Além disso, o ácido 5-aminolevulinico ou análogo é utilizado de forma conveniente como agente de reforço do ácido clorogénico, ácido cafeico, ou ácido ferrúlico entre os polifenois à base de ácidos fenilcarboxilicos e como agente de reforço da apigenina, rutina, ou luteolina, quercetina, kaempferol, isorhamnetina, ou hesperitina entre os polifenois à base de flavonoides. A planta para ser um alvo para o ácido 5-aminolevulínico, ou análogos não se encontra particularmente limitada, mas no caso em que uma planta que possui um teor em polifenol reforçado é utilizada como alimento funcional, é vantajoso utilizar uma planta que possui um elevado teor de polifenol. Como tal planta pode ser por exemplo mencionada plantas que pertencem às Camelliaceae, Solanaceae, Leguminosae, Umbelliferae, Liliacea, ou Rosaceae. Como alimentos podem ser mencionados cereais, feijões, batatas e amidos, nozes e sementes, vegetais, frutos e cogumelos. Destes especificamente são preferidos a maçã, pêra, soja, soja verde, salsa, morango, espargo, cebola, pimenta verde, 10 uvas e chá, em particular com o objectivo de aumentar os que são à base de flavonoides são preferidos a pêra, soja verde, pimenta verde e chá. 0 chá é utilizado como chá preto, chá oolong, ou chá verde. 0 ácido 5-aminolevulínico ou análogo é adequado como agente de reforço em particular para o ácido clorogénico, ácido ferrúlico, rutina, quercetina, ou hesperetina no caso em que a pimenta verde é um alvo, é adequado como agente de reforço em particular para o ácido cafeico, ácido ferrúlico, apigenina, ou isorhamnetin no caso em que a pêra é um alvo é adequado como agente de reforço para a hesperetina no caso em que a soja verde é um alvo é adequado como agente de reforço para a luteolina ou hesperitina no caso em que o chá é um alvo, é adequado como um agente de reforço para a luteolina ou hesperetina no caso em que o espargo é um alvo, e é adequado como agente de reforço para a quercetina ou hesperetina no caso em que a salsa é um alvo.

Como uma forma de agente para aumentar o teor em polifenol da invenção pode ser mencionado um pó, um comprimido, ou um grânulo.

Podem ser produzidos de forma conveniente utilizando um solvente, um meio de dispersão, um filtro, e/ou um excipiente de acordo com um processo habitual. 0 agente para aumentar o teor em polifenol da invenção pode também ser utilizado como um pó de ácido 5-aminolevulínico ou análogo, como uma solução aquosa contendo ácido 5-aminolevulínico ou semelhante aí dissolvido, ou como um líquido de fermentação contendo ácido 5-aminolevulínico ou análogo produzido pelo processo anteriormente mencionado ser adsorvido sobre um suporte, tal como um excipiente. 0 tipo de suporte pode ser um habitual e pode ser mencionada celulose cristalina, gelatina, amido, dextrina, um bolo de óleo, 11 levedura de padeiro, levedura de saké, levedura de vinho, leite desnatado em pó, lactose, óleo vegetal, ou animal e gordura e fosfato de cálcio anidro, carbonato de cálcio, estearato de magnésio, aluminossilicato de magnésio, e aluminosslicato de magnésio.

No caso da preparação de um agente que aumenta o teor em polifenol da invenção como uma solução aquosa, de modo a evitar a decomposição do ácido 5-aminolevulínico ou análogo como um princípio activo é necessário prestar atenção de modo a que a solução aquosa não se torne alcalina. No caso em que a solução aquosa se torna alcalina a decomposição do princípio activo pode ser evitada removendo o oxigénio dissolvido. 0 agente para aumentar o teor em polifenol da invenção não se encontra particularmente limitado na medida em que contém ácido 5-aminolevulínico ou análogo como principio activo. 0 ácido 5-aminolevulínico, ou análogo é utilizado como tal, ou pode ser misturado com um regulador do crescimento da planta, um açúcar, um aminoácido, um ácido orgânico, um álcool, uma vitamina, e/ou um mineral a não ser que a vantagem seja prejudicada.

Como regulador do crescimento da planta para ser aqui utilizado pode ser por exemplo mencionado brassinolidos tal como agente epibrassinolido colina tais como cloreto de colina e nitrato de colina, ácido indolebutírico, ácido indolacético, agente eticlozato, agente 1-naftilacetamida, agente isoprotiolano, agente amida do ácido nicotínico, agente hidróxiisoxazole, agente peróxido de cálcio, agente benzilaminopurina, agente metasulfocarb, agente oxietileno docosanol, agente ethphon, agente cloquinfonac, agente giberelina, daminozida, agente 4-CPA, agente ancymidol, agente inabenfid, agente uniconazole, agente clormequat, agente 12 dikeblack, agente mefluidide, agente carbonato de cálcio, e agente piperonil butóxido.

Como açúcar pode ser por exemplo mencionado glucose, sacarose, xilitol, sorbitol, galactose, xilose, manose, arabinose, madurose, ribose, ramnose, frutose, maltose, lactose, e maltotriose.

Como aminoácido pode ser por exemplo mencionado asparagina, glutamina, histidina, tirosina, glicina, arginina, alanina, triptofano, metionina, valina, prolina, leucina, lisina, e isoleucina.

Como ácido orgânico pode ser por exemplo mencionado, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido butirico, ácido valérico, ácido oxálico, ácido ftálico, ácido benzóico, ácido láctico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido malónico, ácido málico, ácido succínico, ácido glicólico, ácido glutâmico, ácido aspártico, ácido maleico, ácido caproico, ácido caprílico, ácido miristico, ácido esteárico, ácido palmítico, ácido pirúvico, e ácido α-cetoglutárico.

Como álcool pode ser por exemplo mencionado metanol, etanol, propanol, butanol, pentanol, hexanol, e glicerol.

Como vitamina pode ser por exemplo mencionada amida do ácido nicotinico, vitamina B6, vitamina B12, vitamina B5, vitamina C. vitamina B13, vitamina Bl, vitamina B3, vitamina B2, vitamina K3, vitamina A, vitamina D2, vitamina D3, vitamina Kl, a-tocoferol, β-tocoferol, γ-tocoferol, σ-tocoferol, ácido p-hidróxibenzoico, biotina, ácido fólico, ácido nicotinico, ácido pantoténico, e ácido a-lipoico.

Como mineral pode ser por exemplo mencionado azoto, fósforo, potássio, sódio, cálcio, boro, níquel, selénio, manganês, magnésio, zinco, cobre, ferro, e molibdénio. A aplicação do agente para aumentar o teor de polifenois numa planta da invenção não se encontra 13 particularmente limitada, mas o agente pode ser absorvido a partir de raizes, folhas ou caules. Por exemplo, o agente pode ser utilizado para o tratamento de folhagem (agente de tratamento da folhagem), ou pode ser utilizado para o tratamento do solo (agente de tratamento do solo). Além disso, o agente pode ser absorvido antes de uma planta ser plantada ou de uma estaca ser plantada. Além disso, o agente pode ser adicionado à água na hidroponia.

No caso em que o agente para aumentar o teor de polifenol da invenção é utilizado como agente para tratar a folhagem é preferido que o ácido 5-aminolevulínico ou análogo seja incorporado numa concentração de 0,1 a 1000 ppm, preferencialmente 0,5 a 500 ppm, particularmente preferido de 1 a 300 ppm e é utilizado numa proporção de 10 a 1000 1, particularmente de 50 a 300 1 por 10 are. No caso em que o agente é utilizado numa planta, tal como uma monocotiledónea, à qual o agente se liga dificilmente às suas folhas é desejável utilizar um agente de dispersão em combinação. 0 tipo e quantidade do agente de dispersão a ser utilizado não se encontra particularmente limitado.

No caso em que o agente para aumentar o teor em polifenol da invenção é utilizado como um agente para tratar o solo é preferida a utilização do ácido 5-aminolevulínico ou semelhante numa proporção de 10 a 1000 g, em particular de 10 a 500 g por 10 are. Neste contexto, na hidroponia é preferida a utilização aproximadamente na mesma quantidade.

No caso em que é adoptado um processo para absorver o ácido 5-aminolevulínico ou análogo por imersão antes de plantar utilizando o agente para aumentar o teor em polifenol da invenção, a concentração do ácido 5-aminolevulínico ou semelhante na solução de imersão é desejavelmente de 0,001 a 10 ppm, em particular 0,01 a 5 14 ppm e um tempo de imersão de 1 hora a uma semana é desejável, em particular de 3 horas a 1 dia. 0 método de tratamento com o agente para aumentar o teor em polifenol da invenção, em particular a altura para o tratamento, as condições de crescimento não se encontram particularmente limitadas, mas o tratamento é preferencialmente conduzido na altura, quando o teor de polifenol é elevado e uma estação de baixa temperatura, ou estação seca é preferida particularmente. Além disso, é obtido um efeito suficiente tratando a planta uma vez, mas o efeito pode ainda ser reforçado tratando a planta duas vezes ou mais vezes. Neste caso cada processo descrito acima pode ser combinado. 0 agente para aumentar o teor em polifenol da invenção pode aumentar o teor de polifenol numa planta. Como processo de ingerir a planta ao qual a invenção foi aplicada pode ser mencionado um processo de ingerir a planta como um método de a ingerir como alimento, como bebida processada, como bebida de luxo e semelhantes, mas o processo de ingestão não se encontra particularmente limitado a não ser que o processo diminua o polifenol em grande medida. Além disso, é também possível extrair o polifenol da planta, se necessário. 0 processo de extrair e isolar o polifenol da planta em que o teor do polifenol é aumentado pelo agente para aumentar o teor em polifenol da invenção não se encontra particularmente limitado e são utilizados processos conhecidos. Por exemplo, pode ser mencionado um processo em que as fracções solúveis em água são extraídas com água da planta como tal, ou após processamento para uma forma adequada à extracção por secagem, corte em pequenos pedaços, ou pulverizando a planta para remover deste modo os contaminantes de forma grosseira e depois a extracção é efectuada com um solvente orgânico tal como acetato de etilo; e um 15 processo de purificação por cromatografia em coluna utilizando sílica gel, ou ODS como suporte.

Exemplos

Seguidamente vai-se descrever especificamente a invenção fazendo referência a exemplos, mas são apenas citados como ilustração e não limitam a invenção.

Exemplo 1 10 minutos.

Foram disponibilizados dois contentores (comprimento:0, 75 m largura 0,5 m) e foi colocado solo em cada um. Um fertilizante químico (teor em azoto:teor em fósforo:teor em potássio=15:15:15 como proporção mássica) foi utilizado como um fertilizante de base e plantas jovens de pimenta verde (Solanaceae, género cayenne, raça Miogi) foram feitas crescer durante dois meses de acordo com um processo convencional. Regaram-se com água as plantas jovens uma vez por dia com um regador de repuxo. Um mês antes da colheita o tratamento foi conduzido uma vez por semana com 50 ml por contentor de cada solução aquosa contendo 0 ppm (controlo) ou 1 ppm de cloridrato de ácido 5-aminolevulínico ao qual tinha sido adicionado um agente dispersante, Approach BI (fabricado pela Empresa Kao) numa proporção 0,1% em peso. Após a colheita cortou-se finamente 3 g de pimenta verde com tesoura e uma faca de cozinha e depois homogeneizou-se após adição de água. O homogeneizado foi diluído com 6 ml de água destilada (solução mãe) e a solução mãe foi dividida em três porções iguais e utilizada nos seguintes processos de extracção (1) a (3) . (1) Adicionou-se três ml de acetato de etilo a 2 mL da solução mãe e a resultante foi centrifugada a 3000 rpm durante 10 minutos. O 16 sobrenadante foi transferido para um tubo e foi evaporado até à secura com azoto enquanto o tubo foi imerso num banho quente a cerca de 60°C. Adicionou-se 200 μΐ de metanol e 100 μΐ de água destilada perfazendo o volume para 300 μΐ (2) . Adicionou-se dois ml de metanol a 2 ml de solução mãe e a solução resultante foi centrifugada a 3000 rpm durante 10 minutos. O sobrenadante foi transferido para um tubo e foi evaporado até à secura com azoto, enquanto o tubo estava imerso num banho quente a cerca de 60°C. Adicionou-se 200 μΐ de metanol e 100 μΐ de água destilada, perfazendo o volume para 300 μΐ (3) . Adicionou-se 1 ml de ácido clorídrico 0,1 N a 2 ml de solução mãe e a solução resultante foi transferida para um tubo de plástico e mantida num banho de evaporação a 96,5°C durante 1 hora para efectuar a hidrólise. Adicionou-se cinco ml de acetato de etilo e a solução resultante foi centrifugada a 3000 rpm durante 10 minutos. O sobrenadante foi transferido para um tubo e foi evaporado até à secura com azoto enquanto o tubo foi imerso num banho quente a cerca de 60°C. Adicionou-se 200 μΐ de metanol e 100 μΐ de água destilada perfazendo o volume para 300 μΐ.

As amostras de (1) a (3) foram analisadas por cromatografia líquida de elevada eficiência (HPLC) (condiçoes analíticas: a medição foi efectuada a um caudal de 1,0 ml/min a uma temperatura da coluna de 40°C utilizando um comprimento de onda de 350 nm, utilizando o líquido A (80% em volume de metanol/5% em volume de ácido acético) ou líquido B (10% em volume de metanol/5% em volume de ácido acético) como um eluente, e utilizando uma coluna de Hichrom 5C18, T898, 4,6 mm x 150 mm (fabricado por LLOYD'S REGISTER QUALITY COMPANY) e cada concentração foi calculada baseada em soluções padrão. Na 17 tabela 1, o valor mais extraído foi citado entre os resultados medidos com cada um dos processos de extracção (1) a (3) . Além disso, a soma da concentração individual do polifenol utilizado nesta altura foi considerada como a quantidade total de polifenol.

Como indicado na tabela 1, a quantidade total de polifenol contida na pimenta verde tratada com o presente agente aumentou 9,4 vezes, quando comparada com o controlo.

Tabela 1

Quantidade de polifenol na pimenta verde Tratamento ALA Controlo Ácido clorogénico 4856 675 Ácido cafeico 276 113 Ácido ferrúlico 5680 417 Rutina 56 96 79 Quercetina 28919 2811 Luteolina 644 127 Hesperetina 236 0 Kaempferol 668 195 Apigenina 0 0 Isorhamnetina 1849 787 Quantidade total de polifenol 48824 5204 ALA/razão de controlo 9,4 — Unidade: ng/g

Exemplo 2 150 dias antes da colheita, foi realizado o tratamento a pêras (Camelliace, género pêra, raça Kosui) cultivadas num campo de uma quinta de produção em cada quinze dias com uma quantidade de pulverização de 300 1/tan de cada solução aquosa contendo 0 ppm (controlo), ou 3 ppm de 18 cloridrato de ácido 5-aminolevulínico à qual tinha sido adicionado agente dispersante, Approach BI (fabricado pela empresa Kao) numa proporção de 0,1% em massa. Após a colheita o teor de polifenol foi analisado por HPLC da mesma maneira que no Exemplo 1. Os resultados são indicados na Tabela 2. Como indicado na tabela 2, a quantidade total de polifenol contido na pêra tratada com o presente agente foi aumentada 2,3 vezes, quando comparada com o controlo.

Tabela 2

Quantidade de polifenol na pêra Tratamento ALA Controlo Ácido clorogénico 1819 6212 Ácido cafeico 8400 838 Ácido ferrúlico 12456 2337 Rutina 1595 1021 Quercetina 111 64 Luteolina 61 59 Hesperetina 81 160 Kaempferol 18 173 Apigenina 95 0 Isorhamnetina 567 0 Quantidade total de polifenol 25202 10863 ALA/razão de controlo 2,3 — Unidade: ng/g

Exemplo 3 210 dias antes da colheita, foi realizado o tratamento a soja verde (Leguminosae, género soja, raça Hakusan) cultivada num campo de uma quinta de produção em cada quinze dias após floração com uma quantidade de 19 pulverização de 100 1/tan de cada solução aquosa contendo 0 ppm (controlo) , ou 1 ppm de cloridrato de ácido 5-aminolevulínico. Após a colheita o teor de polifenol foi analisado por HPLC da mesma maneira que no Exemplo 1. Os resultados são indicados na Tabela 3. Como indicado na Tabela 3, a quantidade total de polifenol contido na soja verde tratada com o presente agente foi aumentada 1,4 vezes, quando comparada com o controlo.

Tabela 3

Quantidade de polifenol na soja verde Tratamento ALA Controlo Ácido clorogénico 17 45 Ácido cafeico 0 0 Ácido ferrúlico 3963 3133 Rutina 1032 1378 Quercetina 261 450 Luteolina 19 28 Hesperetina 1841 0 Kaempferol 0 10 Apigenina 11 8 Isorhamnetina 0 12 Quantidade total de polifenol 7143 5064 ALA/razão de controlo 1,4 — Unidade: ng/g

Exemplo 4 210 dias antes da colheita, foi realizado o tratamento a chá (Camelliace, género camellia, raça Yabukita) cultivado num campo de uma quinta de produção uma vez por mês com uma quantidade de pulverização de 100 1/tan de cada solução aquosa contendo 0 ppm (controlo), ou 3 ppm 20 de cloridrato de ácido 5-aminolevulínico. Após a colheita o teor em polifenol foi analisado por HPLC da mesma maneira que no Exemplo 1. Os resultados são indicados na Tabela 4. Como indicado na Tabela 4, a quantidade total de polifenol contido na folha de chá tratada com o presente agente foi aumentada 1,1 vezes, quando comparada com o controlo.

Tabela 4

Quantidade de polifenol na folha do chá Tratamento ALA Controlo Ácido clorogénico 3474 5245 Ácido cafeico 0 0 Ácido ferrúlico 17172 18976 Rutina 4519 30105 Quercetina 8249 1997 Luteolina 2181 29 Hesperetina 25887 0 Kaempferol 970 1553 Apigenina 915 974 Isorhamnetina 3881 1022 Quantidade total de polifenol 67248 59901 ALA/razão de controlo 1,1 — Unidade: ng/g

Exemplo 5 150 dias antes da colheita, foi realizado o tratamento ao espargo de raiz tetra-anual (Liliaceae, género espargo, raça Welcome) cultivado na forma de caule vertical numa estufa em cada quinze dias com uma quantidade de pulverização de 100 1/tan de cada solução aquosa contendo 0 ppm (controlo), ou 3 ppm de cloridrato de ácido 5- 21 aminolevulínico. Após a colheita o teor de polifenol foi analisado da mesma maneira que no Exemplo 1. Os resultados são indicados na Tabela 5. Como indicado na tabela 5, a quantidade total de polifenol contido no espargo tratado com o presente agente foi aumentado 2,3 vezes, quando comparado com o controlo.

Tabela 5

Quantidade de polifenol no espargo Tratamento ALA Controlo Ácido clorogénico 2983 2453 Ácido cafeico 0 0 Ácido ferrúlico 9899 7988 Rutina 40234 20315 Quercetina 5533 2083 Luteolina 1923 182 Hesperetina 20198 225 Kaempferol 723 887 Apigenina 456 598 Isorhamnetina 1022 998 Quantidade total de polifenol 82971 35729 ALA/razão de controlo 2,3 — Unidade: ng/g

Exemplo 6

Foram disponibilizados dois contentores (comprimento: 0,75 m largura 0,5 m) e foi colocado solo em cada um. Um fertilizante químico (teor em azoto:teor em fósfororteor em potássio=15:15:15 como proporção mássica) foi utilizado como um fertilizante de base e sementes de salsa (Umbelliferae, género salsa, raça Paramount) foram plantadas de acordo com um processo convencional e regou- 22 se uma vez por dia com um regador de repuxo. Um mês antes da colheita o tratamento foi conduzido uma vez por semana com 50 mL por contentor de cada solução aquosa contendo 0 ppm (controlo) ou 1 ppm de cloridrato de ácido 5-aminolevulínico. Após a colheita o teor de polifenol foi analisado da mesma maneira que no Exemplo 1. Os resultados são indicados na Tabela 6. Como indicado na tabela 6, a quantidade total de polifenol contido na salsa tratada com o presente agente foi aumentada 3,5 vezes, quando comparada com o controlo.

Tabela 6

Quantidade de polifenol na salsa Tratamento ALA Controlo Ácido clorogénico 20820 16255 Ácido cafeico 4240 3050 Ácido ferrúlico 0 0 Rutina 28977 29213 Quercetina 37699 0 Luteolina 2733 1172 Hesperetina 110685 225 Kaempferol 10321 9007 Apigenina 1099 760 Isorhamnetina 4388 2716 Quantidade total de polifenol 220962 62398 ALA/razão de controlo 3,5 — Unidade: ng/g

Exemplo 7

Foram disponibilizados dois contentores (comprimento: 0,75 m largura 0,5 m) e foi colocado solo em cada um. Um fertilizante químico (teor em azotorteor em fósforo:teor 23 em potássio=15:15:15 como proporção mássica) foi utilizado como um fertilizante de base e plantas jovens de pimenta (Solanaceae, género cayenne, raça Habanero) foram plantadas de acordo com um processo convencional e regou-se uma vez por dia com um regador de repuxo. Um mês antes da colheita o tratamento foi conduzido uma vez por semana com 50 mL por contentor de cada solução aquosa contendo 0 ppm (controlo) ou 1 ppm de cloridrato de ácido 5-aminolevulinico. Após a colheita, o teor de polifenol foi analisado da mesma maneira que no Exemplo 1. Os resultados são indicados na Tabela 7. Como indicado na tabela 7, a quantidade total de polifenol contido na pimenta tratada com o presente agente foi aumentada 1,4 vezes, quando comparada com o controlo.

Tabela 7

Quantidade de polifenol na pimenta Tratamento ALA Controlo Ácido clorogénico 18020 10829 Ácido cafeico 5520 5518 Ácido ferrúlico 9270 6731 Rutina 457080 332108 Quercetina 26700 21905 Luteolina 62060 45610 Hesperetina 0 12 Kaempferol 0 0 Apigenina 2570 1438 Isorhamnetina 270 166 Quantidade total de polifenol 581490 424317 ALA/razão de controlo 1,4 — Unidade: ng/g 24

Aplicabilidade Industrial

De acordo com a presente invenção pode ser disponibilizado ácido 5-aminolevulínico, um seu derivado de fórmula (1) , ou um seu sal para aumentar o teor de polifenol numa planta e um processo para aumentar o teor de polifenol numa planta.

Lisboa, 22 de Fevereiro de 2012.

Claims (12)

1 Reivindicações 1. Uso do ácido 5-aminolevulínico ou de um seu derivado de fórmula (1), ou um seu sal para aumentar o teor em polifenol numa planta: R’ 0 o cu em que R1, R2 cada um independentemente é hidrogénio, alquilo, acilo, alcóxicarbonilo, arilo ou aralquilo; e R3 é OH, alcóxi eventualmente substituídos, acilóxi, alcóxicarbonilóxi, arilóxi, aralquilóxi, ou amino.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, em que a planta pertence às Camelliaceae, Solanaceae, Leguminosae, Umbeliferae, Liliaceae, ou Rosaceae.

3. Uso de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o polifenol é um polifenol à base de ácido fenilcarboxilico, à base de lenhano, à base de curcumina, à base de cumarina, ou à base de flavonoide.

4. Uso de acordo com a reivindicação 3, em que o polifenol à base de ácido fenilcarboxilico é ácido clorogénico, ácido cafeico, ou ácido ferrúlico.

5. Uso de acordo com a reivindicação 3 em que o polifenol à base de flavonoide é apigenina, rutina, luteolina, quercetina, kaempferol, isorhamnetina, ou hesperetina.

6. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, em que o ácido 5-aminolevulínico ou seu derivado de 2 fórmula (1), ou um seu sal é para ser absorvido pelas folhas, pelos caules, ou pelas raízes.

7. Processo para aumentar o teor em polifenol numa planta que compreende tratar uma planta com um ácido 5-aminolevulínico ou um seu derivado de fórmula (1), ou um seu sal:

o w em que R1, R2 cada um independentemente é H, alquilo, acilo, alcóxicarbonilo, arilo, ou aralquilo; e R3 é OH, alcóxi eventualmente substituído, acilóxi, alcóxicarboniloxi, ariloxi, aralquiloxi ou amino.

8. Processo de acordo com a reivindicação 7, em que a planta pertence às Camelliaceae, Solanaceae, Leguminosae, Umbeliferae, Liliaceae, ou Rosaceae.

9. Processo de acordo com a reivindicação 7 ou 8, em que o polifenol é um polifenol à base de ácido fenilcarboxílico, à base de lenhano, à base de curcumina, à base de cumarina ou à base de flavonoide.

10. Processo de acordo com a reivindicação 9, em que o polifenol à base de ácido fenil carboxílico é ácido clorogénico, ácido cafeico, ou ácido ferrúlico.

11. Processo de acordo com a reivindicação 9, em que o polifenol à base de flavonoides é apigenina, rutina, luteolina, quercetina, kaempferol, isorhamnetina, ou hesperetina. 3

12. Processo de acordo reivindicações 7-11, em que o seu derivado de fórmula(1), absorvido pelas folhas caules, com qualquer uma das ácido 5-aminolevulínico ou ou um seu sal é para ser ou rai zes . Lisboa, 22 de Fevereiro de 2012.