PT2004670E - Processo para a preparação de derivados de lisobactina - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DE LISOBACTINA" A presente invenção refere-se a um processo para a preparação de depsipeptídeos cíclicos da seguinte fórmula (I)

NH2 em que R1 é = H ou CH3, 1 em que R2 é = hidrogénio, ciclo-alquilo-C3-C6, ciclo-alcenilo-C5-C6, ciclo-alquil-C3-C6-metilo, heterociclilmetilo de 5 até 7 membros, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, 1-metilprop-l-ilo, 2-metilprop-l-ilo, 2,2-dimetilprop-l-ilo, 1,1-dimetilprop- 1- ilo, 1-etil-prop-l-ilo, 1-etil-l-metilprop-l-ilo, n-butilo, 2- metilbut-l-ilo, 3-metilbut-l-ilo, 1-etilbut-l-ilo, terc-butilo, 4-metilpent-l-ilo, n-hexilo, alcenilo ou arilo, em que R2 pode estar substituído com 0, 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados, independentemente uns dos outros, do grupo constituído por halogéneo, hidroxilo, amino, ciano, trimetilsililo, alquilo, alcoxilo, benziloxilo, ciclo-alquilo-C3-C6, arilo, heteroarilo de 5 até 10 membros, alquilamino, arilamino, alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, arilcarbonilo e benziloxicarbonilamino, em que arilo e heteroarilo, por seu lado, podem estar substituídos com 0, 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados independentemente uns dos outros, do grupo constituído por halogéneo, hidroxilo, amino, ciano, nitro, alquilo, alcoxilo e fenilo, em que R3 é = hidrogénio ou alquilo-Ci-C4, ou em que R2 e R3 em conjunto com o átomo de carbono ao qual se encontram ligados, formam um anel de ciclo-alquilo-C3-C6 ou um anel de heterociclilo de 5 até 7 membros, em que o anel de ciclo-alquilo e o anel de heterociclilo podem estar substituídos com 0, 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados independentemente 2 uns dos outros, do grupo constituído por trifluorometilo, alquilo, alcoxilo e alquilcarbonilo, em que R4 é = alquilo, ciclo-alquilo-C3-C6, heterociclilo de 5 até 7 membros, arilo, heteroarilo de 5 ou 6 membros, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ciclo-alquilo-C3-C6-carbonilo, heterociclilcarbonilo de 5 até 7 membros, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo de 5 ou 6 membros ou alquilaminocarbonilo, em que alquilo, ciclo-alquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, alcoxicarbonilo, cicloalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo e alquilaminocarbonilo podem estar substituídos com 0, 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados independentemente uns dos outros, a partir do grupo constituído por halogéneo, hidroxilo, amino, alquilamino e fenilo, e em que alquilcarbonilo está substituído com um substituinte amino ou alquilamino, e em que alquilcarbonilo pode estar substituído com outros 0, 1 ou 2 substituintes, seleccionados independentemente uns dos outros, a partir do grupo constituído por halogéneo, hidroxilo, trimetilsililo, alcoxilo, alquiltio, benziloxilo, ciclo-alquilo-C3-C6, fenilo, naftilo, heteroarilo de 5 até 10 membros, alquilcarbonilamino, alcoxicarbonilamino, arilcarbonilamino, arilcarboniloxilo, benziloxicarbonilo e benziloxicarbonilamino, 3 em que fenilo e heteroarilo, por seu lado, podem estar substituídos com 0, 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados, independentemente uns dos outros, do grupo constituído por halogéneo, hidroxilo, nitro, alquilo, alcoxilo e fenilo, ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono no alquilcarbonilo, em conjunto com o átomo de carbono ao qual se encontram ligados, formam um anel de ciclo-alquilo-C3-C6 ou um anel de heterociclilo de 5 até 7 membros, em que o anel de ciclo-alquilo e o anel de heterociclilo podem estar substituídos com 0, 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados, independentemente uns dos outros, a partir do grupo constituído por trifluorometilo, alquilo e alcoxilo, ou em que o anel de ciclo-alquilo pode estar benzo-anelado, em que R5 é = hidrogénio, alquilo-Ci-C4, ciclopropilo ou ciclopropilmetilo, ou em que R4 e R5 em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontram ligados, formam um anel de heterociclilo de 5 até 7 membros, em que o anel de heterociclilo pode estar substituído com 0, 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados, independentemente uns dos outros, do grupo constituído por halogéneo, hidroxilo, amino, ciano, alquilo, alcoxilo e alquilamino, 4 bem como compostos que são úteis neste processo e que são descritos nas reivindicações.

Os depsipeptideos ciclicos acima apresentados compreendem, entre outros, ambos os materiais naturais apresentados de seguida, que são designados por lisobactina e catanosina A. Estas substâncias são inibidoras da biossintese da parede celular e assim activas de forma anti-bacteriana.

O

5 A parede celular bacteriana é sintetizada através de uma série de enzimas (biossintese da parede celular) e é essencial para a sobrevivência ou para a multiplicação dos microorganismos. A estrutura desta macromolécula, assim como as proteínas e intermediários biossintéticos ("precursores") que participam na sua síntese, estão fortemente conservados dentro das bactérias. Devido à sua natureza e uniformidade essenciais, a biossintese da parede celular é um ponto de ataque ideal para novos antibióticos.

Vancomicina e penicilina são inibidores da biossintese da parede celular bacteriana e representam exemplos, bem sucedidos, da potência antibiótica deste princípio activo. Elas são utilizadas clinicamente desde há várias décadas para o tratamento de infecções bacterianas, sobretudo com agentes patogénicos gram-positivos. Através da crescente ocorrência de micróbios resistentes, por exemplo, estafilococus resistentes a meticilina, pneumococus resistentes à penicilina e enterococus resistentes à vancomicina, bem como, recentemente, também pela primeira vez estafilococus resistentes à vancomicina, estas substâncias têm perdido crescentemente a sua eficácia terapêutica. A lisobactina foi até agora obtida através de fermentação utilizando, por exemplo, Lysobacter sp. SC 14067. Além disso, é conhecido do documento WO 2004/099239 Al, a eliminação de ambas as unidades de leucina que formam o segmento linear, e a substituição com outros grupos. Até agora não é conhecida uma via para a preparação completamente sintética de lisobactina, catanosina A ou derivados destas, que apresentem variações no segmento linear. 6

Egner e Bradley, Tetrahedron, 1997, 53 (41), 14021 apresentam uma síntese em fase sólida de análogos de lisobactina. É assim objectivo da invenção, descrever um processo para a preparação de depsipeptídeos cíclicos da fórmula (I) acima mencionada.

Este objectivo é resolvido através de um processo para a preparação de depsipeptídeos cíclicos da fórmula (I) através de ciclização intramolecular de um composto da seguinte fórmula (II)

7 (II) em que R1 até R5 são definidos como anteriormente, em que X é = OH, um éster activo, um pseudo-halogéneo (por exemplo, uma azida) ou um halogéneo, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado, e subsequente desprotecção do produto intermédio cíclico com a formação do depsipeptídeo cíclico da fórmula (I).

Este processo é caracterizado por o β-hidroxi-a-aminoácido esterificado em O3 (aqui β-fenilserina = β-hidroxi-fenilalanina) ser activado quimicamente no passo da ciclização ocorrendo depois como dador de acilo. A ciclização ocorre através de uma ligação amida (formação de lactama) e não através de uma reacção de esterificação (formação de lactona). 0 processo é caracterizado, além disso, por o segmento cíclico da estrutura de laço depsipeptídica ser preparado através de uma ciclização no aminoácido cabeça da ponte (aqui β-hidroxi-fenilalanina).

No âmbito da presente invenção, os substituintes, desde que nada se indique de contrário, possuem o seguinte significado:

Aquilo per se e "Alq" e "Alquilo" em alcoxilo, alquilamino, alquilcarbonilo,_alcoxicarbonilo,_alquilaminocarbonilo e alquilcarbonilamino significa um resíduo alquilo linear ou ramificado com, em geral, 1 até 6, de um modo preferido, 1 até 4, de um modo especialmente preferido 1 até 3 átomos de carbono, por exemplo e de um modo preferido, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, terc-butilo, n-pentilo e n-hexilo. 8

Alcoxilo significa, por exemplo e de um modo preferido, metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, isopropoxilo, terc-butoxilo, n-pentoxilo e n-hexoxilo.

Alcenilo significa um resíduo alcenilo linear ou ramificado com 2 até 6 átomos de carbono. De um modo preferido é um resíduo alcenilo linear ou ramificado com 2 até 4 de um modo especialmente preferido com 2 até 3 átomos de carbono. Mencionam-se por exemplo e de um modo preferido: vinilo, alilo, n-prop-l-en-l-ilo, n-but-2-en-l-ilo, 2-metil-prop-l-en-l-ilo e 2-metilprop-2-en-l-ilo.

Alquilamino significa um resíduo alquilamino com um ou dois (seleccionados independentemente um do outro) substituintes alquilo, por exemplo e de um modo preferido, metilamino, etilamino, n-propilamino, isopropilamino, terc-butilamino, n-pentilamino, n-hexilamino, N,N-dimetilamino, N, N-dietilamino, N-etil-N-metilamino, N-metil-N-n-propilamino, N-isopropil-N-n-propilamino, N-terc-butil-N-metilamino, N-etil-N-n-pentilamino e N-n-hexil-N-metilamino.

Arilamino significa um resíduo arilamino com um substituinte arilo e eventualmente um outro substituinte, como por exemplo, arilo ou alquilo, por exemplo e de um modo preferido, fenilamino, naftilamino, fenilmetilamino ou difenilamino.

Alquilcarbonilo significa um resíduo alquilcarbonilo com um substituinte alquilo, por exemplo e de um modo preferido, metilcarbonilo, etilcarbonilo, n-propilcarbonilo, isopropilcarbonilo, terc-butilcarbonilo, n-pentilcarbonilo e n-hexilcarbonilo. 9

Alcoxicarbonilo significa um resíduo alcoxicarbonilo com um substituinte alcoxilo, por exemplo e de um modo preferido, metoxicarbonilo, etoxicabonilo, n-propoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo, terc-butoxicarbonilo, n-pentoxicarbonilo e n-hexoxicarbonilo.

Ciclo-alquilcarbonilo significa um resíduo ciclo-alquilcarbonilo com um substituinte ciclo-alquilo, por exemplo e de um modo preferido, ciclopropilcarbonilo, ciclobutilcarbonilo, ciclopentilcarbonilo e ciclo-hexilcarbonilo.

Hetero-ciclilcarbonilo significa um resíduo heterociclilcarbonilo com um substituinte heterociclilo, por exemplo e de um modo preferido, tetra-hidrofuran-2-ilcarbonilo, pirrolidin-2-ilcarbonilo, pirrolidin-3-ilcarbonilo, pirrolinilcarbonilo, piperidinilcarbonilo, morfolinilcarbonilo e per-hidroazepinilcarbonilo.

Arilcarbonilo significa um resíduo arilcarbonilo com um substituinte arilo, por exemplo e de um modo preferido, fenilcarbonilo, naftilcarbonilo e fenantrenilcarbonilo.

Hetero-arilcarbonilo significa um resíduo hetero-arilcarbonilo com um substituinte hetero-arilo, por exemplo e de um modo preferido, tienilcarbonilo, furilcarbonilo, pirrolilcarbonilo, tiazolilcarbonilo, oxazolilcarbonilo, imidazolilcarbonilo, piridilcarbonilo, pirimidilcarbonilo, piridazinilcarbonilo, indolilcarbonilo, indazolilcarbonilo, benzofuranilcarbonilo, benzotiofenilcarbonilo, quinolinilcarbonilo e isoquinolinilcarbonilo. 10

Alquilcarbonilamino significa um resíduo alquilcarbonilamino com um substituinte alquilo, por exemplo e de um modo preferido, metilcarbonilamino, etilcarbonilamino, n-propilcarbonilamino, isopropilcarbonilamino, terc-butilcarbonilamino, n-pentilcarbonilamino e n-hexilcarbonilamino.

Arilcarbonilamino significa um resíduo arilcarbonilamino com um substituinte arilo, por exemplo e de um modo preferido, fenilcarbonilamino, naftilcarbonilamino e fenantrenilcarbonilamino.

Alquilaminocarbonilo significa um resíduo alquilaminocarbonilo com um ou dois (seleccionados independentemente um do outro) substituintes alquilo, por exemplo e de um modo preferido, metilaminocarbonilo, etilaminocarbonilo, n-propilaminocarbonilo, isopropilaminocarbonilo, terc-butilaminocarbonilo, n-pentilaminocarbonilo, n-hexilaminocarbonilo, N,N-dimetilaminocarbonilo, N,N-dietilaminocarbonilo, N-etll-N-metilaminocarbonilo, N-metil-W-n-propilaminocarbonilo, N-isopropil-N-n-propilaminocarbonilo, N-terc-butil-N-metilaminocarbonilo, N-etil-N-n-pentilaminocarbonilo e N-n-hexil-N-metilaminocarbonilo.

Ciclo-alquilo significa um grupo cicloalquilo com, em geral, 3 até 6 átomos de carbono, por exemplo e de um modo preferido, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclo-hexilo. 11 em

Ciclo-alcenilo significa um grupo cicloalcenilo com, geral, 5 até 6 átomos de carbono e uma ou duas ligações duplas, por exemplo e de um modo preferido, ciclopent-l-en-l-ilo, ciclopent-2-en-l-ilo, ciclopent-3-en-l-ilo, ciclo-hex-l-en-1-ilo, ciclo-hex-2-en-l-ilo e ciclo-hex-3-en-l-ilo.

Arilo significa um residuo carbociclico aromático mono até triciclico com, em geral, 6 até 14 átomos de carbono, por exemplo e de um modo preferido, fenilo, naftilo e fenantrenilo.

Heterociclilo significa um resíduo heterocíclico mono ou policíclico, de um modo preferido, mono ou bicíclico com, em geral, 5 até 7 átomos no anel e até 3, de um modo preferido, até 2 heteroátomos e/ou heterogrupos da série N, 0, S, SO, SO2. Os resíduos heterociclilo podem ser saturados ou parcialmente insaturados. São preferidos resíduos heterociclilo saturados monociclicos de 5 até 7 membros com até dois heteroátomos da série 0, N e S, como por exemplo e de um modo preferido, tetra-hidrofuran-2-ilo, pirrolidin-2-ilo, pirrolidin-3-ilo, pirrolinilo, piperidinilo, morfolinilo e per-hidroazepinilo.

Heteroarilo significa um resíduo mono ou bicíclico aromático com, em geral, 5 até 10, de um modo preferido, 5 até 6 átomos no anel e até 5, de um modo preferido, até 4 heteroátomos da série S, O, e N, por exemplo e de um modo preferido, tienilo, furilo, pirrolilo, tiazolilo, oxazolilo, imidazolilo, piridilo, pirimidilo, piridazinilo, indolilo, indazolilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, quinolinilo e isoquinolinilo.

Aminoácido ligado a carbonilo significa um aminoácido que se encontra ligado através do grupo carbonilo da função ácido do aminoácido. São preferidos, neste caso, α-aminoácidos na 12 configuração L ou D, em especial α-aminoácidos que ocorrem de forma natural, como por exemplo, glicina, L-alanina, L-valina, L-leucina, L-isoleucina, L-prolina, L-fenilalanina, L-triptofano ou α-aminoácidos que ocorrem de forma habitual na configuração não natural D, como por exemplo, D-alanina, D-valina, D-leucina, D-isoleucina, D-prolina, D-fenilalanina, D-triptofano ou aminoácidos não naturais, com um grupo lateral ligado ao átomo de carbono α do aminoácido, como por exemplo, ciclo-alquil-C3-C6-metilo, ciclo-alquilo-C3-C6, etilo, n-propilo, 2.2- dimetilpropilo, terc-butilo, 3-metilbutilo, n-hexilo ou alilo, ou a cadeia lateral forma um anel com o átomo de carbono α do aminoácido, como por exemplo, ciclopropilo (aminoácido: ácido 1-amino-l-ciclopropancarboxilico), ciclobutilo, ciclopentilo ou ciclo-hexilo, ou β-aminoácidos (para a nomenclatura ver: D. Seebach, M. Overhand, F. N. M. Kuhnle, B. Martinoni, L. Oberer, U. Hommel, H. Widmer, Helv. Chim. Acta 1996, 79, 913-941), como por exemplo, β-alanina, β-fenilalanina, β-Aib (α-metilalanina) ou derivados do ácido 2.3- diaminopropiónico (por exemplo, ácido 2,3-diamino-3-fenilpropiónico).

Halogéneo significa flúor, cloro, bromo e iodo, de um modo preferido, flúor e cloro. A designação éster activo compreende todos os ésteres activos conhecidos do especialista. Exemplos para os ésteres activos preferidos na invenção incluem os seguintes, nomeadamente, éster cianometilo, éster p-nitrofenilo, éster o-nitrofenilo, éster 2,4-dinitrofenilo, éster 2,4,5-triclorofenilo, éster pentaclorofenilo, éster pentaflurofenilo (Pfp), N-hidroxi-ftalimida, 13 N-hidroxisuccinimida, (O-Su), éster 1-hidroxipiperidinio, éster 5-cloro-8-hidroxiquinolina. A ciclização intramolecular é a formação de uma ligação amida, que é, em princípio, possível de ser conseguida através de qualquer processo conhecido do especialista. A ciclização ocorre aqui através do ataque nucleofílico representado de seguida.

Caso X signifique um éster activo, um pseudo-halogéneo ou um halogéneo, a conversão ocorre, em geral, em solventes inertes, eventualmente na presença de uma base, de um modo 14 preferido, numa gama de temperatura de -30 °C até 50 °C à pressão normal.

Solventes inertes são, por exemplo, tetra-hidrofurano, cloreto de metileno, piridina, dioxano, clorofórmio, éter dietilico, éter terc-butilmetílico, acetato de etilo ou dimetilformamida, em que cloreto de metileno ou dimetilformamida são preferidos.

Bases são, por exemplo, trietilamina, triisopropiletilamina ou N-metilmorfolina, sendo preferido, triisopropiletilamina.

Caso X signifique OH, a conversão ocorre, em geral, em solventes inertes na presença de um reagente de desidratação, eventualmente na presença de uma base, de um modo preferido, numa gama de temperatura de -30 °C até 50 °C à pressão normal.

Solventes inertes são, por exemplo, hidrocarbonetos halogenados, como diclorometano ou triclorometano, hidrocarbonetos como benzeno, nitrometano, dioxano, dimetilformamida ou acetonitrilo. É além disso possível, utilizar uma mistura de solventes. São especialmente preferidos como solventes diclorometano e dimetilformamida.

Como reagentes de desidratação adequam-se, por exemplo, carbodiimidas, como por exemplo, Ν,Ν'-áietil-, N, N-dipropil-, N,N-diisopropil-, N, i/-diciclo-hexilcarbodiimida, cloridrato de N-(3-dimetilaminoisopropil)-N'-etilcarbodiimida (EDC), N-ciclo-hexilcarbodiimida-W '-propiloximetil-polistireno (PS-carbodiimida) ou compostos carbonilo, como carbonildiimidazole ou compostos 1,2-oxazolio, como 2-etil-5-fenil-1,2-oxazolio-3-sulfato ou perclorato de 2-terc-butil-5- 15 metil-isooxazolio ou compostos de acilamino, como 2-etoxi-l-etoxicarbonil-1,2-di-hidroquinolina ou anidrido de ácido propanofosfórico ou cloroformato de isobutilo ou cloreto de bis-(2-oxo-3-oxazolidinil)-fosforilo ou hexafluorofosfato de de benzotriaziloxi-tri(dimetilamino)-fosfónio ou hexafluorofosfato de 0-(benzotriazol-l-il)-ν,ν,ν' ,Ν'-tetrametilurónio (hbtu), tetrafluoroborato de 2-(2-oxo-l-(2-H)-piridil)-1,1,3,3- tetrametilurónio (TPTU) ou hexafluorofosfato de 0- (7-azabenzotriazol-l-il)-N,N,N',N '-tetrametilurónio (HATU) ou 1- hidroxibenzotriazole (HOBt) ou hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxitris(dimetilamino)-fosfónio (BOP) ou hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxitris(pirrolidino)-fosfónio (PyBOP) ou N-hidroxissuccinimida ou misturas a partir destas com bases.

Bases são, por exemplo, carbonatos de metais alcalinos, como por exemplo, carbonato ou hidrogenocarbonato de sódio ou potássio, ou bases orgânicas, como trialquilaminas, por exemplo, trietilamina, N-metilmorfolina, 4-metilmorfolina, N-metilpiperidina, 4-dimetilaminopiridina ou diisopropiletilamina. A reacção é efectuada de um modo preferido com HATU na presença de 4-metilmorfolina.

Os compostos da fórmula (II) possuem, eventualmente, grupos de proteção, de maneira que nestes casos segue-se, à ciclização intramolecular do composto da fórmula (II), uma cisão dos grupos de protecção de acordo com métodos conhecidos do especialista. A designação "grupo de protecção adequado" tal como aqui se utiliza, compreende todos os grupos de protecção conhecidos do 16 especialista, que possam ser utilizados para mascarar uma função especifica e de seguida possam ser de novo removidos, sem provocar quaisquer outras alterações na molécula a desproter.

Podem ser protegidos, por exemplo, grupos hidroxilo primários ou secundários como éteres hidrolizáveis, em especial como éter metoximetilo, benziloximetilo, p-metoxibenziloximetilo, benzilico, terc-butilico, tetra-hidropiranilo, alilico, p-clorofenilico, p-nitrofenilico ou trifenilmetilico. Éteres silílicos representam uma outra possibilidade para a protecção de grupos hidroxilo, por exemplo, éter trimetilsililo (TMS), terc-butildimetilsililo (TBDMS), triisopropilsililo (TIPS), terc-butildifenilsililo (TBDPS) ou trifenilsililo. Além disso, os grupos hidroxilo podem também ser protegidos através de grupos éster, por exemplo, através de éster de acetilo, de benzoilo, de propionilo, de cloroacetilo, de tricloroacetilo, de trifluoroacetilo ou crotilico. A par disto, consideram-se também carbonatos, como por exemplo, metilcarbonato, alilcarbonato, benzilcarbonato, para a protecção de álcoois. Além disso, podem ser utilizados ésteres de ácido sulfúrico ou ácidos sulfónicos, como por exemplo, sulfato, alilsulfonato, p-toluenossulfonato (tosilato) ou metilsulfonato como grupos de protecção para álcoois.

Grupos de protecção preferidos para grupos hidroxilo são éter terc-butilico ou éteres silílicos, em especial, éter terc-butildimetilsililo.

Para o grupo guanidino adequam-se em princípio os mesmos grupos de protecção dos grupos hidroxilo, sendo preferido neste caso o grupo (2,2, 5, 7, 8-pentametil-3, 4-di-hidro-2fí-cromen-6-il)sulfonilo (grupo PMC). 17

Grupos carboxilo podem ser protegidos na forma dos seus ésteres alquílicos, silílicos arilalquílicos ou arílicos, por exemplo, como éster metílico, etílico, terc-butílico, trimetilsililico, terc-butildimetilsilílico, benzílico, picolílico, tricloroetílico ou trimetilsililico. Grupos carboxílicos podem também ser protegidos na forma de diferentes amidas, anilidas ou hidrazidas, por exemplo, como N,N- dimetilamida, pirrolidinilamida, piperidinilamida, 0- nitroanilida, Ν-7-nitroindolilamida ou N-fenil-hidrazida. A par disto, eles podem também ser protegidos como orto-ésteres, por exemplo como orto-éster trimetílico. Os ácidos carboxílicos são protegidos de um modo preferido na forma dos seus ésteres, em especial, como éster metílico ou trimetilsililico.

Para a protecção dos grupos amino adequam-se, em especial, os grupos que originem carbamatos que sejam hidrolizáveis, por exemplo, os grupos metoxicarbonilo, terc-butoxicarbonilo (Boc), benziloxicarbonilo (CBz ou Z), aliloxicarbonilo (alloc), 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc), 2-trimetilsililetilcarbonilo, 1- adamantilcarbonilo, m-nitrofenilo. Além disso, os grupos amino podem também ser protegidos na forma de amidas ou imidas facilmente hidrolizáveis, por exemplo, como formamida, cloroacetamida, tricloroacetamida, trifluroacetamida, benzoilamida, o-nitrofenilacetamida, ftalimida, tetracloroftalimida ou nitroftalimida. Uma outra possibilidade para a protecção dos grupos amino consiste, em formar aminas hidrolizáveis com determinados grupos alquilo, como por exemplo, o grupo terc-butilo, o grupo metilo, o grupo trifenilmetilo, o grupo ferrocenilmetilo ou o grupo alilo ou com grupos arilo, como por exemplo, o grupo 2,4-dinitrofenilo. 18

De um modo preferido são utilizados para a protecção do grupo amino, carbamatos, entre os quais são utilizados, sobretudo os grupos terc-butoxicarbonilo (Boc), benziloxicarbonilo (CBz ou Z) ou 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc).

Os grupos de protecção aqui indicados servem apenas como exemplo e não representam uma enumeração exaustiva de todas as possibilidades. Pode-se encontrar um tratamento adicional desta área em, entre outros, T. W. Greene, P. G. M. Wuts Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edição, John Wiley & Sons Inc. 1999.

Os grupos representados através de PG, tal como são aqui utilizados, podem ser numa molécula os mesmos grupos de protecção ou diferentes grupos de protecção adequados ou combinações de grupos de protecção iguais ou diferentes com H ou exclusivamente H.

De um modo preferido o composto da fórmula (II) é um composto da seguinte fórmula (lia) 19 PG Ο

(lia) em que X e R1 são como definido anteriormente, em que R6 é = isopropilmetilo, terc-butilmetilo, 2,2-dimetilbut-1-ilo, 2-etil-2-metilbut-l-ilo, 2,2-dietilbut-l-ilo, 2.2- dimetilpent-l-ilo, 3-piridilmetilo, 4-trifluorometil-3-piridilmetilo, benzilo ou trimetilsililmetilo, em que R7 é = isopropilmetilo, terc-butilmetilo, 2,2-dimetilbut-1-ilo, 2-etil-2-metilbut-l-ilo, 2,2-dietilbut-l-ilo, 2.2- dimetilpent-l-ilo, trimetilsililmetilo ou benzilo, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado. 20

De um modo preferido R6 é = isopropilmetilo, terc-butilmetilo ou 3-piridilmetilo, e em especial, R6 = isopropilmetilo. preferido R é trimetilsililmetilo isopropilmetilo, e em especial,

De um modo terc-butilmetilo ou R7 = isopropilmetilo.

De um modo preferido X é = OH.

De um modo preferido R1 é = CH3.

Numa outra forma de execução da invenção o composto (II) é preparado por acoplamento de um composto da seguinte fórmula (III) com um composto da seguinte fórmula (IV) IV)

O

21 (IV) CH, o h3C'

VyWy^Y-O mu S 0 H3CA0

H.C NH PG ΠΝ H PG

CH, PG em que R1 até R5 são como definidos anteriormente em que Y é = OH, um éster activo, um pseudo-halogéneo ou um halogéneo, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado, e eventualmente desprotecção parcial ou completa do produto intermédio bem como eventualmente transformação do grupo carboxilo da 3-hidroxi-fenilalanina num grupo da fórmula -C(=0)X, em que X é como definido anteriormente. 22

Em especial o composto da fórmula (III) é um composto da seguinte fórmula (Illa)

O

PG (Illa) em que R6 e R7 são como definido anteriormente, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado. 0 acoplamento pode decorrer sob as mesmas condições ou outras condições, como anteriormente descrito para a ciclização intramolecular. 0 acoplamento decorre aqui através do ataque nucleofilico representado de seguida. A conversão do grupo carboxilo da 3-hidroxi-fenilalanina num grupo da fórmula -C(=0)X pode decorrer através de processos conhecidos do especialista. 23

"Λ Vrsy0 «,γ'-ο OH.

PG

I PG

Os grupos de protecção existentes no produto intermédio podem corresponder completa ou parcialmente ou não corresponder de todo aos do produto desejado. Estes podem eventualmente, ser removidos, substituídos ou colocados através de processos conhecidos do especialista.

Numa outra forma de execução da invenção, um composto da fórmula (III) é preparado através de acoplamento de um composto da seguinte fórmula (V) com um composto da seguinte fórmula (VI)

24 em que R2 até R5 são como definido anteriormente, em que Z é = OH, um éster activo, um pseudo-haloqéneo ou um halogéneo, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado, e eventualmente desprotecção parcial ou completa do produto intermédio.

Em especial, o composto (V) é aqui um composto da seguinte fórmula (Va)

PG

(Va) em que R e R são como definido anteriormente, e PG é = H ou um grupo de protecção adequado. 0 acoplamento pode decorrer sob as mesmas condições ou sob outras condições, como anteriormente descrito para o acoplamento anteriormente mencionado ou para a ciclização intramolecular. 0 acoplamento decorre aqui por ataque nucleofilico representado de seguida. 25

Os grupos de protecção existentes no produto intermédio podem corresponder completa ou parcialmente ou não corresponder de todo aos do produto desejado. Estes podem eventualmente, ser colocados, removidos ou substituídos através de processos conhecidos do especialista. A invenção refere-se além disso a um composto da seguinte fórmula (III)

(III) 26 em que R2 até R5 são como definido anteriormente, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado, em especial um composto da seguinte fórmula (Illa)

í Xlla3 em que R6 e R7 são como definido anteriormente, e PG é = H ou um grupo de protecção adequado, 27 e em especial um composto da seguinte fórmula (Illb).

I ch3 (Illb) A invenção refere-se além disso a um processo para a preparação de um composto da fórmula (III) através de acoplamento de um composto da fórmula (V) com um composto da fórmula (VI) e eventualmente desprotecção parcial ou total do produto intermédio. 28 A invenção refere-se além disso a um composto da seguinte fórmula (VI)

em que Z é = OH, um éster activo, um pseudo-halogéneo ou um halogéneo, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado, em especial um composto da seguinte fórmula (Via).

(Via)

Bem como um processo para a preparação de um composto da fórmula (VI) por acoplamento de um composto da seguinte fórmula (Vil) com um composto da seguinte fórmula (VIII) 29 PG 1 P 0 0 ^O-PG > 1 o zx / o PG—Ο, X Y "nh2 Ό 0 (VII) (VIII) PG é = H ou um grupo de protecção adequado, ntualmente desprotecção completa ou parcial do intermédio .

Em especial, os compostos das fórmulas (VII) e (VIII) são aqui compostos das seguintes fórmulas (Vila) ou (Vllla).

0 processo de preparação da invenção e a preparação dos compostos de acordo com a invenção são explicados em mais detalhe através dos seguintes esquemas de sintese com base na sintese da lisobactina. 30 0 processo consiste numa construção do tipo modular de diferentes fragmentos, que depois são convertidos em conjunto a um composto da fórmula (II). 0 composto da fórmula (II) é depois submetido a uma ciclização intramolecular e eventualmente desprotegido, de maneira a originar o produto final desejado.

Demonstrou-se aqui de forma surpreendente que influenciada pela selecção da estrutura de base e pela sequência em que os blocos são acoplados podem ser preparadas as moléculas de cadeia aberta da fórmula (II), já apresentando uma ligação éster na sua cadeia. Foi além disso verificado, que estes compostos de cadeia aberta na presença da ligação éster podem ser ciclizados aos depsipeptideos ciclicos desejados.

De acordo com o esquema de síntese 1, sintetiza-se um fragmento 1 partindo de ácido (2S, 3S)-2-amino-3-hidroxi-4-metoxi-4-oxobutírico e éster de Boc-glicin-N-hidroxisucinimida. 31 ο

Fragmento 1

Esquema de síntese 1

Um fragmento 2 é preparado de acordo com o esquema de síntese 2 partindo de 3-hidroxifenilalanina. 32

Fragmento 2

Esquema de síntese 2

Um fragmento 3 é preparado de acordo com o esquema de síntese 3 partindo de N2-(benziloxicarbonil)-D-leucina e L-leucinato de metilo de acordo com o esquema de síntese 3.

Através da substituição de ambos os derivados de leucina neste passo, podem ser preparados compostos da fórmula (I) com quaisquer resíduos R2 até R5.

Os fragmentos 2 e 3 são depois acoplados de acordo com o esquema de síntese 4, parcialmente desprotegidos, e o produto intermédio obtido é convertido com N2-(terc-butoxicarbonil)-03-terc-butil-L-serina, de maneira que depois de uma outra desprotecção se obtém um fragmento 4 parcialmente desprotegido. 33

LiOH 'r

Fragmento 3

Esquema de síntese 3 34

Fragmento 3 Fragmento 2

Fragmento 4

Esquema de síntese 4 0 fragmento 4 assim obtido é acoplado de acordo com o esquema de síntese 5 com o fragmento 1, de maneira a obter-se, após desprotecção, parcial um fragmento 5. 35

I CHj

Fragmento 5

Esquema de síntese 5 36 0 fragmento 5 é depois acoplado de acordo com o esquema de síntese 6 com um fragmento 6. Este fragmento 6 é um pentapeptídeo, que pode ser preparado de acordo com métodos conhecidos. Através da substituição da leucina na posição 2 no fragmento 6 com uma valina, pode-se preparar, em lugar da lisobactina, catanosina A. Após desprotecção do produto intermédio obtido é obtido um fragmento 7, o qual representa um composto da fórmula (li) . Após uma ciclização intramolecular e subsequente desprotecção de acordo com o esquema de síntese 7, é obtido o depsipeptídeo cíclico desejado, neste caso, lisobactina. 37

H.C-Si-CH, 3 | 3 CH

hatu Fragmento 6 4-Metilmorfolina o

Fragmento 5

Esquema de síntese 6 38

2TFA CHs HN^NH NH,

Esquema de síntese 7 39

Exemplo Síntese de novo de lisobactina Abreviaturas abs . absoluto Eq. equivalentes Boc N-terc-butoxicarbonilo d.teo. da teoria DCC diciclo-hexilcarbodiimida DIEA N, N-diisopropiletilamina DMAP 4-dimetilaminopiridina DMF N, N-Dimetilformamida EDC cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida EDTA ácido etilenodiaminotetracético (Ethylene Diamine Tetraacetic Acid) Fa. firma fmoc 9-fluorenilmetoxicarbonilo sat. saturado(a) h hora(s) HATU hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-N, N, Ν' ,N'~ tetrametilurónio HOBT hidrato de l-hidroxi-líí-benzotriazole Cone. concentrado(a) LHMDS hexametildisilazida de lítio min minuto(s) MTBE éter terc-butilmetílico NMM N-metilmorfolina org. orgânica(s) 40 TA temperatura ambiente TBAF fluoreto de tetrabutilamónio TBTU tetrafluoroborato de N-[(1H-1,2, 3-benzotriazol-l- iloxi)(dimetilamino)metileno]-N-metilmetanamínio TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano TMG Ν,Ν,Ν,Ν- tetrametilguanidina aq. aquoso(a) XPHOS diciclo-hexil(2 ', 4 ', 6'-triisopropilbifenil-2- il)fosfina

Materiais e métodos

Métodos analíticos - HPLC/OV Método 1

Tipo de aparelho HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; coluna: Phenomenex Synergi 2 μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 min 90% A -> 2,5 min 30% A -> 3,0 min 5% A -> 4,5 min 5% A; fluxo: 0,0 min 1 mL/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min. 2 mL/min; forno: 50 °C; detecção por UV: 210 nm. Método 2

Instrumento: HP 1100 com detecção por DAD; coluna: Kromasil 100 RP-18, 60 mm χ 2,1 mm, 3,5 pm; eluente: A = 5 mL de HCIO4 (70%)/L H20, B = ACN; gradiente: 0 min 2% B, 0,5 min 2% B, 4,5 41 min 90% B, 9 min 90% B, 9,2 min. 2% B, 10 min 2% B; fluxo: 0,75 mL/min; temperatura da coluna: 30 °C; detecção: UV 210 nm Método 3

Aparelho: Agilent 1100 com DAD (G1315B), bomba binária (G1312A), amostrador automático (G1313a), desgaseificador de solventes (G1379A) e termostato de coluna (G1316A); coluna: Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 4,6 χ 150 χ 5 mm; temperatura da coluna: 30 °C; eluente A: 0,05% de ácido perclórico a 70% em água; eluente B: acetonitrilo; fluxo: 2,00 mL/min; gradiente: ΟΙ min 10% B, rampa, 4-5 min 90% B, rampa, 5,5 min 10% B. Método 4

Tipo de aparelho HPLC: HP 1050 Series; UV DAD; coluna: Zorbax 300 mSB-Cl8 3,5 μ, 4,6 mm χ 150 mm; eluente A: 1 L de água + 0,1% de TFA, eluente B: 60% de acetonitrilo em água com 0,1% de TFA; gradiente: 0,0 min 10% B, rampa, 18,0 min 80% B, 20.0 min 100% B, 25,0 min 100% B. Fluxo: 1 mL/min; forno: 40 °C; detecção por UV: 210 nm. Método 5

Tipo de aparelho HPLC: HP 1050 Series; UV DAD; coluna: Zorbax 300 mSB-C18 3,5 μ, 4,6 mm χ 150 mm; eluente A: 1 L de água + 0,1% de TFA, eluente B: 60% de acetonitrilo em água com 0,1% de TFA; gradiente: 0,0 min 10% B, 2,00 min 10% B, rampa, 50.0 min 80% B, 52,0 min 100% B, 55 min 100% B. Fluxo: 0,7 mL/min; forno: 40 °C; detecção por UV: 210 nm. 42 Método 6

Agilent 1100 com DAD (G1315B), bomba binária (G1312A), amostrador automático (G1313A), desgaseificador (G1379A) e termostato de coluna (G1316A); coluna: Phenomenex Gemini 5 μ, C-18, 50 x 2 mm; temperatura do forno: 40 °C; eluente A: água + 0,1% de ácido fórmico; eluente B: acetonitrilo; fluxo: 2,00 mL/min; gradiente: 0-1 min 0% B, rampa, 0-5 min 100% B, 5,50 min 100% B. Método 7

Daicel Chiralpak AD-H 5 pm, 250 mm x 2,0 mm, n-heptano/etanol 95 + 5, fluxo: 0,2 mL/min, detecção por UV a 220 nm.

Métodos analíticos - HPLC/MS, MALDI, HR-MS Método 8

Tipo de aparelho MS: Micromass ZQ; tipo de aparelho HPLC: Waters Alliance 2795/HP 1100; coluna: Phenomenex Synergi 2 μ Hydro-RP Mercury 20 mm χ 4 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de % de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 min 90% A -» 2,5 min 30% A -> 3,0 min 5% A -> 4,5 min 5% A; fluxo: 0,0 min 1 mL/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 mL/min; forno: 50 °C; detecção por UV: 210 nm. 43 Método 9

Tipo de aparelho MS: Micromass ZQ; tipo de aparelho HPLC: Waters Alliance 2795/HP 1100; coluna: Phenomenex Gemini 3 μ C-18 100 Â, 30 mm x 3 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 min 90% A -► 2,5 min 30% A 3,0 min 5% A -> 4,5 min 5% A; fluxo: 0,0 min 1 mL/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 mL/min; forno: 50 °C; detecção por UV: 210 nm. Método 10

Detecção por UV: 210 nm. Tipo de aparelho MS: Micromass ZQ; tipo de aparelho HPLC: Waters Alliance 2795; coluna: Phenomenex

Synergi 2 μ Hydro-RP Mercury 20 mm χ 4 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 min 90% A -> 2,5 min 30% A -> 3,0 min 5% A -> 4,5 min 5% A; fluxo: 0,0 min 1 mL/min, 2,5 min/3,0 min/4,5 min 2 mL/min; forno: 50 °C; detecção por UV: 210 nm. Método 11

Instrumento: Micromass Platform LCZ com HPLC Agilent Serie 1100; coluna: Thermo Hypersil GOLD 3 μ 20 mm χ 4 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L de acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 min 100% A -> 0,2 min 100% A ^ 2,9 min 30% A -> 3,1 min 10% A -> 5,5 min 10% A; forno: 50 °C; fluxo: 0,8 mL/min; detecção por UV: 210 nm. 44 Método 12

Instrumento: Micromass Platform LCZ com HPLC Agilent Serie 1100; coluna: Thermo HyPURITI Aquastar 3 μ 50 mm χ 2,1 mm; eluente A: 1 L de água + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%, eluente B: 1 L acetonitrilo + 0,5 mL de ácido fórmico a 50%; gradiente: 0,0 min 100% A -> 0,2 min 100% A -> 2,9 min 30% A -► 3,1 min 10% A -*5,5 min 10% A; forno: 50 °C; fluxo: 0,8 mL/min; detecção por UV: 210 nm. Método 13

Aparelho: Micromass LCT; Ionização: ESI positiva/negativa; HP1100 com DAD e amostrador automático; forno 40 °C; coluna:

Waters Symmetry C-18, 50 χ 2,1 mm, 3,5 μ; eluente A: 0,1% de ácido fórmico/acetonitrilo, eluente B: 0,1% de ácido fórmico /água; fluxo: 0,5 mL/min.; gradiente: 0-1 min 0% A, 1-6 min 90% A, 6-8 min 100 A, 8-10 min 100% A, 10-15 0% A. Método 14

Espectros de TOF-HR-MS-ESI+ são recolhidos com um aparelho Micromass LCT (voltagem do capilar: 3,2 KV, voltagem do cone: 42 V, temperatura da fonte: 120 °C, temperatura de dessolvatação: 280 °C) . Para este efeito é utilizada uma bomba de injecção (firma Harvard Apparatus) para a introdução da amostra. Como padrão serve leucina-encefalina (Tir-Gly-Gly-Phe-Leu). 45 Métodos de separação preparativos - HPLC, cromatoqrafia em gel Método 15

Aparelho: Gilson Abimed HPLC; sistema de bombas binário; coluna: Nucleodur Cis Gravity, firma Macherey-Nagel, 5 pm; 250 χ 21 mm; eluente A: água/0,05-0,1% de TFA, eluente B: acetonitrilo; gradiente: 0-8 min 5% B, 8-40 min 5-60% B, 40-60 min 60% B, 60-75 min 60-100% B, 75-80 min 100% B, de seguida, regeneração da coluna de cromatografia; fluxo: 7-15 mL/min; detector de UV a 210 nm. Método 16

Aparelho: Gilson Abimed HPLC; sistema de bombas binário; coluna: Kromasil-lOOA Ci8, 5 pm; 250 χ 30 mm; eluente A: água/0,05-0,5% de TFA, eluente B: acetonitrilo; gradiente: 0-5 min 5% B, 5,01-10 min 10% B, 10,01-20 min 40% B, 20, 01-27 min 50% B, 27, 01-40 min 60% B, 40, 01-45 min 90% B, 45,01-60 min 100% B; fluxo: 15-60 mL/min; detector de UV a 210 nm. Método 17

Gilson Abimed HPLC; detector de UV a 210 nm; coluna:

Kromasil RP-18 5 pm, 100 Â, 250 x 20 mm; eluente A: água + 0,05% de TFA, eluente B: acetonitrilo + 0,05 de TFA: fluxo: 10 mL/min; 0-3 min 5% B, rampa, 35 min 90% B. 46 Método 18

Gilson Abimed HPLC; detector de UV a 210 nm; coluna: Gromsil ODS-4HE 10 μιη, 250 χ 40 mm; eluente A: água + 0,05 de TFA, eluente B: acetonitrilo + 0,05 de TFA: fluxo: 20 mL/min; 0-3 min 10% B, rampa, 30-35 min 90% B, 35-40 min 90% B. Método 19

Gilson Abimed HPLC; detector de UV a 210 nm; coluna: Waters Symmetry-Prep™ C-18, 7 pm, 300 χ 19 mm; eluente A: água + 0,05 de TFA, eluente B: acetonitrilo + 0,05% de TFA: fluxo: 10 mL/min; 0-3 min 10% B, rampa, 30-38 min 90% B, 38-45 min 10% B. Método 20

Cromatografia em gel é efectuada sem pressão em Sephadex LH-20 (firma Pharmacia). Fracciona-se de acordo com a actividade em UV (detector de UV para 254 nm, firma Knauer) (módulo de recolha de fracções ISCO Foxy 200) . Dimensões da coluna: 32 χ 7 cm (escala de 1000-100 pmole); 30 χ 4 cm (escala de 100-10 pmole); 25 χ 2 cm (escala de 10-1 pmole). Utiliza-se metanol como eluente. Método 21

Gilson Abimed HPLC; detector de UV a 210 nm; coluna:

Biotage Flash40 rp-18 ou Modul Varian Metaflash C18 40 M compatível, 35 pm, 150 χ 40 mm; eluente A: água + 0,05% de TFA, eluente B: acetonitrilo + 0,05% de TFA: fluxo: 40 mL/min; 0-3 min 10% B, rampa, 30-38 min 90% B, 38-45 min 10% B. 47 Métodos de trabalho gerais

Procedimento de trabalho 1 0 material de partida é retomado em 30% de TFA (solução em diclorometano) e agita-se 30 minutos à temperatura ambiente. O solvente é depois destilado em vácuo, em que a temperatura do banho não deve ultrapassar 30 °C. O produto é subsequentemente seco até peso constante com uma bomba de vácuo a óleo. A. Preparação dos compostos

Composto exemplificativo IA: N2-(terc-Butoxicarbonil)-L- allotreonina

HO CH.

CH3 OH .0 L-allo-Treonina (3,15 g, 26,44 mmole) é dissolvida em água-dioxano (1 + 2, 75 mL), dicarbonato de di-terc-butilo (6,35 g, 29,09 mmole, 1,1 equivalentes) e trietilamina (4,79 mL, 34,38 mmole, 1,3 equivalentes) são adicionados e a mistura é agitada durante a noite à temperatura ambiente. O solvente é depois eliminado em vácuo. O resíduo é retomado em acetato de etilo e agita-se com 1 M de ácido cítrico. A fase aquosa é 48 extraída ainda várias vezes com acetato de etilo, até que já não seja possível detectar qualquer produto (HPLC, método 3) . Os extractos orgânicos reunidos são depois secos sobre sulfato de sódio, concentra-se e seca-se até peso constante com uma bomba de vácuo a óleo. 0 produto é utilizado posteriormente sem outra purificação. Rendimento: 6,5 g de produto bruto. HPLC (método 3): Rt = 3,23 min. LC-MS (método 11): Rt = 2,51 min, MS (ESIneg) : m/z (%) = 217,8 (100) [Μ - ΗΓ. RMN de 1H (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) = 1,08 (d, J = 5,4 Hz, 3H), 1,38 (s, 9H), 3, 72-3, 84 (m, 2H), 6,77 (d, J= 7,4 Hz, 1H) .

Composto exemplificativo 2A: N2-(terc-Butoxicarbonil)-L- allotreoninato de benzilo

O método foi efectuado de forma análoga à seguinte literatura: S. B. Cohen, R. Halcomb, J. Am. Chem. Soc 2004, 124, 2534-2543. W. Jiang, J. Wanner, R. J. Lee, P.-Y. Bounaud, D. L. Boger, J. Am. Chem. Soc 2003, 125, 1877-1887.

Composto exemplificativo IA (6,8 g de produto bruto, 26,44 mmole), é retomado em metanol (177 mL), introduz-se carbonato de 49 césio (5,56 g, 17,06 mmole, 0,63 equivalentes) e agita-se até completa dissolução. Subsequentemente remove-se o solvente de forma destilativa, adiciona-se DMF (42 mL) e depois brometo de benzilo (4,06 mL, 34,12 mmole, 1,26 equivalentes). Deixa-se agitar a mistura durante 16 horas, sendo depois eliminado exaustivamente o dmf em vácuo. O resíduo é retomado em água e extrai-se com 3 porções de diclorometano. As fases orgânicas reunidas são secas sobre sulfato de sódio, filtra-se e concentra-se em vácuo. O produto bruto é purificado sobre uma Biotage RPl8-Flash (gradiente água-acetonitrilo: 0-5 min. 10% ACN, 3-30 min. 10-90% ACN, 30-35 min. 90% ACN; fluxo: 20 mL/min.). As fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Rendimento 5,00 g (16,16 mmole, 52% da teoria) do composto em título. HPLC (método 3): Rt = 4,36 min. LC-MS (método 8): Rt = 2,39 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 332.6 (25) [M + H] + RMN de 1H (400 MHz, d( i-DMSO ) δ (ppm) = 1,09 (d, J = 6, 4, 3H), 1,37 (s, 9H), 3, ,82 (m, 1H), 3, 95 (dd, J = 6,4, J -- = 8, 1 Hz), 4,98 (d, J = 5,4 Hz, r 1H), 5, 09 (d , J = 12, 7 Hz, 1H), 5, ,16 (d, J = 12, 7 Hz, 1H), 7, 10 (d, J = 8 ,1 Hz, 1H), 7,31-7, 37 (m, 5H) 50

Composto exemplificativo 3A:

Trifluoroacetato de L-allotreoninato de benzilo NIHj

530 mg do composto exemplificativo 2A são convertidos de acordo com o procedimento de trabalho 1 com 8,0 mL da solução de TFA. O produto bruto (589 mg, quantitativo) é utilizado posteriormente sem mais outra purificação. HPLC (método 3): Rt = 3,18 min. LC-MS (método 11): Rt = 2,24 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 210,0 (100) [M + H]+. RMN de 1H (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) = 1,15 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 4,09-4,10 (m, 2H), 5,26 (s, 2H) , 7, 36-7, 44 (m, 5H), 8,34 (s largo, 2H).

Composto exemplificativo 4A: [N2-(terc-Butoxicarbonil)-L- isoleucil]-L-allotreoninato de benzilo

51

Composto exemplificativo 3A (2,30 g 7,12 mmole) e N-{terc-butoxicarbonil)-L-isoleucina (2,14 g, 9,25 mmole, 1,3 equivalentes) são dissolvidos em DMF (21,0 mL) . Adiciona-se 4-metilmorfolina (1,3 mL, 12,02 mmole, 1,7 equivalentes) e HATU (3,52 g, 9,25 mmole, 1,3 equivalente) e a mistura é agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. A mistura é depois purificada cromatograficamente, em primeiro lugar, de acordo com o método 20 e subsequentemente de acordo com o método 21. As fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 1,75 g (4,14 mmole, 58% da teoria) como substância sólida amorfa corada de beige claro. HPLC (método 3): Rt = 4,59 min. LC-MS (método 8): Rt = 2,56 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 423,8 (70) [M + H]+. RMN de 1H (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) = 0, 74-0, 78 (m, 6H), 1,01- 1.07 (m, 2H), 1,10 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 1,37 (s, 9H), 1,64-1,66 (m, 1H), 3,86-3, 94 (m, 1H), 4,28 (dd, J= 7,3, J= 7,3 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 5,6 Hz), 5,09 (d, J = 12,7 Hz, 1H) , 5,13 (d, J = 12.7 Hz 1H), 6,70 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 7,31-7,36 (m, 5H), 8,11 (d, J = 8,1 Hz) . HR-TOF-MS (método 14): C22H35N2O6 calculado 423,2490, observado 423,2489 [M + H]+. 52

Composto exemplificativo 5A: L-isoleucil-L-allotreoninato de benzilo

Trifluoroacetato de

*TFA

Composto exemplificativo 4A (224 mg, 0,53 mmole) é tratado de acordo com o procedimento de trabalho 1 com 8,0 mL da solução de TFA. Obtém-se 253 mg do produto bruto do exemplo 5A (aproximadamente 91% puro, 0,53 mmole, quantitativo), que é utilizado posteriormente sem mais outra purificação. HPLC (método 3): Rt = 3,51 min. LC-MS (método 8): Rt = 1,58 min, MS (ESIpos): m/z (%) = 323,6 (100) [Μ + H]+. (m, 6H), 1,02 1,77 (m, 1H), 1H), 5,16 (d, 8,07-8,08 (m, RMN de 1H (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) = 0,77-0,86 (m, 1H), 1,15 (d, J= 6,4 Hz, 3H) , 1,45 (m, 1H) , 3,97 (m, 1H), 4,34 (m, 1H), 5,11 (d, J= 12,5 Hz, J= 12,5 Hz, 1H), 7, 37-7, 39 (m, 5H) , 7,47 (m, 1H) , 3H), 8,69 (d, J = 7,3 Hz, 1H). 53

Composto exemplificativo 6A: [N2-{terc-Butoxicarbonil)-D- arginil]-L-isoleucil-L-allotreoninato de benzilo CH.

Composto exemplificativo 5A (253 mg 91% puro, 0,53 mmole) e N*-{terc-butoxicarbonil)-D-arginina (145 mg, 0,53 mmole, 1 equivalente) são dissolvidos em DMF (3,0 mL) . Adiciona-se 4-metilmorfolina (76 pL, 0,70 mmole, 1,3 equivalentes) e HATU (221 mg, 0,58 mmole, 1,1 equivalentes) e a mistura é agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. Depois coloca-se toda a mistura numa coluna de HPLC e purifica-se cromatograficamente (método 18) . As fracções contendo o porduto são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 364 mg (0,53 mmole, 99% da teoria) do composto em título. HPLC (método 3): Rt = 3,91 min. LC-MS (método 8): Rt = 2,04 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 579,9 (100) [M + H]+. RMN de XH (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) = 0,72-1,16 (m, 8H), 1,37 (s, 9H), 1,46 (m, 2H), 1,60 (m, 1H), 1,69 (m, 1H), 3,06 (m, 2H), 3,93-4,01 (m, 2H), 4,25 (m, 1H), 4,33 (m, 1H), 5,07-5,14 (m, 2H), 6,96 (d, J= 7,8, 1H), 7,35 (m, 5H), 7,45 (m, 1H) , 7,66 (d, J = 8,8), 8,33 (m, 1H). 54

Bis-trifluoroacetato de

Composto exemplificativo 7A: D-arginil-L-isoleucil-L-allotreoninato de benzilo

*2TFA

Composto exemplificativo 6A (237 mg, 0,34 mmole) é tratado de acordo com o procedimento de trabalho 1 com 2,0 mL da solução de TFA. Obtém-se 255 mg do produto bruto do composto exemplificativo 7A (94% puro, 0,34 mmole, quantitativo), que é convertido sem mais outra purificação. HPLC (método 3): Rt = 3,42 min. LC-MS (método 11): Rt = 2,42 min, MS (ESIpos): m/z (%) = 479,3 (50) [M + H]+. RMN de :Η (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) = o, . 73- -0,81 (m, 5H), 1,11 1, 19 (m, 5H) , 1, 33- 1, 49 (m, - 3H), 1, 74 ( ;m, 3H), 3,10 (m, 2H) 3, 88-3,95 (m, 2H) , 4 ,25 (dd, J = 6, 8, J = 7, 1 Hz, 1H) , 4,46 (dd J = 7,3, J = 8 ,8 Hz, 1H) , 5, 09 (d, J = 12 ,5 Hz, 1H), 5,15 (dd, = 12,5 Hz) , 7, 36 (m, 5H) , 7, 61 (m, 1H), 8 ,10 (m, 2H), 8,51 (d, = 7,6 Hz, 1H), 8, 57 (d, , J = 9, 0 Hz, 1H) . 55

Composto exemplificativo 8A: Trifluoroacetato de [«Mterc- butoxicarbonil)-L-leucil]-D-arginil-t-isoleucil-L-allotreoninato de benzilo

Composto exemplificativo 7A (240 mg, 0,34 mmole) e N-{terc-butoxicarbonil)-L-leucina (79 mg, 0,34 mmole, 1 equivalente) são dissolvidos em diclorometano-DMF (5 + 1, 6 mL) . São adicionados diisopropiletilamina (296 pL, 1,70 mmole, 5 equivalentes) e HATU (194 mg, 0,51 mmole, 1,5 equivalentes) e a mistura é agitada durante 24 horas à temperatura ambiente. Toda a mistura é depois colocada numa coluna de cromatografia em gel e purifica-se cromatograficamente (método 20, eluente é metanol). As fracções contendo o produto são reunidas e concentradas. Rendimento: 146 mg (0,18 mmole, 53% da teoria) do composto em titulo. HPLC (método 3): Rt = 4,15 min. LC-MS (método 8): Rt = 1,92 min, MS (ESIpos): m/z (%) = 692,8 (100), [M + H]+. RMN de XH (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) = 0, 72-1, 23 (m, 22H) , 1,37 (s, 9H), 1,38-1,71 (m, 3H), 3,08 (m, 2H), 3,91-4,00 (m, 2H), 4,26 (m, 1H), 4,33-4, 42 (m, 2H), 5,07-5,15 (m, 2H), 6,92 (d, J = 56 7,8 Hz, 1H), 7,35 (m, 5H) , 7,47 (m, 1H) , 7,88 (d, J = 8,1 Hz 1H), 7,93 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 8,35 (d, J= 7,3 Hz, 1H) .

Composto exemplificativo 9A: Bis-trifluoroacetato de L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-allotreoninato de benzilo

*2 TFA

Composto exemplificativo 8A (220 mg, 0,27 mmole) é tratado de acordo com o procedimento de trabalho 1 com 2,0 mL da solução de TFA. Obtém-se 223 mg do produto bruto do exemplo 9A (0,27 mmole, quantitativo), que é convertido sem mais outra purificação. HPLC (método 2): Rt = 3,80. LC-MS (método 11): Rt = 2,54 min, MS (ESIpos): m/z (%) = 592,4 (2) [M + H] + . RMN de :H (400 MHz, cfe-DMSO) δ (ppm) = 0,73-1,11 (m, 13H), 1,ΙΟΙ, 74 (m, 12H), 3,11 (m, 4H) , 3,60 (m, 2H) , 3,87 (m, 1H) , 3,95 (m, 1H), 4,25 (m, 1H) , 4,38 (dd, J= 7,8, J= 8,6 Hz, 1H) , 4,64 57 (dd, J -- - 7, 8, J = 13,7 Hz, 1H), 5, 09 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 12, 7 Hz, 1H), 7,35 (m, 5H) f 7,58 (m, 1H), 8,07 (m, 2H) , 8,25 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 8 ,39 (d, J = 7,i 6 Hz, 1H), , 8,77 (d, J = 8,3 Hz, 1H)

Composto exemplificativo 10A: Trifluoroacetato [(3R)-N2-(terc-butoxicarbonil)-3-hidroxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-allotreoninato de benzilo

CH, CH,

Composto exemplificativo 9A (223 mg, 0,27 mmole) e N-(terc-butoxicarbonil) - (3f?) -3-hidroxi-L-leucina (89 mg, 0,33 mmole, 1,22 equivalentes) são dissolvidos em dmf (6 mL) e a solução é arrefecida a -20 °C. São adicionados 4-metilmorfolina (150 pL, 1,36 mmole, 5 equivalentes) e HATU (165 mg, 0,44 mmole, 1,6 equivalentes) e a mistura é agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. Toda a mistura é depois colocada sobre uma coluna de cromatografia em gel e purifica-se cromatograficamente (método 20, eluente é metanol). As fracções contendo o produto são reunidas e concentradas. Rendimento: 188 mg (0,20 mmole, 74% da teoria) do composto em título. 58 HPLC (método 3): Rt = 4,24 min. LC-MS (método 9): Rt = 1,99 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 821,9 (100) [M + H]+. RMN de ( 400 MHz 1 r d; " -DMSO) δ (ppm) = = 0,71-0, 90 (m, 15H), 1,00 (m, 1H) , i, 10 (d, J = 6, 4 Hz, 3H), 1, 24-1,26 (m, 3H), 1,38 (s, 9H), 1, 42-1 ,71 (m, . 6H) 1 3,06-3 ,17 (m, 3H) , 3 ,45 (m, 1H), 3, 61 (m, 1H) , 3, 93 ( m, 1H), 4, 05 (m, 1H), 4 ,26 (m, 1H), 4,35 (m, 2H), 4,54 (d , J = 7 ',8 Hz, 1H) , 5,07 -5,15 (m, 2H), 5,45 (d, J = 9,0 Hz, 1H) , 7, 35 (m, 5H) , 7 ,46 (m, 1H), 7,85 (d, J ~- = 7,8 Hz, 1H), 7, 89 (d , J = 8, 8 Hz, 1H), 7, 97 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 8,35 (d, J = 7,6 Hz, 1H) .

Composto exemplificativo 11A: Trifluoroacetato de [(3R)-N2-(terc-butoxicarbonil)-3-hidroxi-L-leucil]-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-allotreonina

O

HO H3C CH,

oCH3 O OH NH CH,

UvJJ

O H,C' > O

O H,C^ O CH, OH CH,

*TFA

Composto exemplificativo 10A (100 mg, 0,11 mmole) é dissolvido em ácido acético glacial (4,3 mL), adiciona-se 10% de paládio sobre carvão activado (22 mg) e hidrogena-se a mistura 59 durante 2 horas à temperatura ambiente sob pressão normal. Filtra-se o catalisador e liofiliza-se o filtrado. 0 produto bruto é purificado cromatograficamente (método 17) . As fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Obtém-se 58 mg (60 pmole, 55% da teoria) do composto em titulo. HPLC (método 3): Rt = 3,75 min. LC-MS (método 9): Rt = 1,80 min, MS (ESIpos): m/z (%) = 731,8 (100) [M + H]+.

Composto exemplificativo 12A: Ácido [N2-{terc- butoxicarbonil)-glicil]-(3S)-3-hidroxi-04-metil-L-asparaginico

Ácido (3S)-3-hidroxiasparagínico é preparado de acordo com o procedimento de G. Cardillo, L. Gentilucci, A. Tolomelli, C. Tomasini, Synlett 1999, 1772-1730, e é convertido de forma análoga a P. G. Mattingly, M. J. Miller, j. Org. Chem. 1983, 48, 3556-3559, utilizando radiação de microondas num reactor fechado, originando cloridrato de ácido (2S,3S)-2-amino-3-hidroxi-4-metoxi-4-oxobutírico. 60

Cloridrato de ácido (2S, 3S)-2-amino-3-hidroxi-4-metoxi-4-oxobutírico (447 mg, 2,24 mmole) são dissolvidos em DMF (9 mL) . A solução é arrefecida a 0 °C, sendo adicionados éster de Boc-glicin-N-hidroxisuccinimida (763 mg, 2,91 mmole, 1,3 equivalentes), DMAP (14 mg, 0,11 mmole, 0,05 equivalentes) e finalmente DIEA (1170 pL, 6,72 mmole, 3 equivalentes). A mistura é deixada aquecer lentamente até à temperatura ambiente e depois agitada ainda 2 horas. A mistura é acidificada com ácido acético glacial, misturada com acetonitrinlo e é cromatografada em

Sephadex LH 20 (método 20) . As fracções contendo o produto são reunidas, concentra-se e cromatografa-se de novo (método 21) . As fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. O produto obtido (761 mg, quantitativo) é convertido posteriormente sem mais purificação. Para fins analíticos é obtida uma amostra pura através de HPLC (método 19). HPLC (método 3): Rt = 3,15 min LC-MS (método 8): Rt = 1,17 min, MS (ESIPOS) = 321,2 [M + H]+. [a]20Na = +39° (c = 0,55, MeOH) . RMN de XH (300 MHz, cfe-DMSO) δ (ppm) = 1,40 (s, 9H), 3,49-3,60 (m, 2H), 3,61 (s, 3H), 4,29 (m, 1H), 4,73 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,01 (m, 1H), 7,49 (d, J= 6,99 Hz, 1H). RMN de 13C (c/6-acetona, 126 MHz, DEPT) δ (ppm) = 28,5 (CH3), 42,2 (CH2), 51,8 (CH3), 53,7 (CH), 56,0 (CH), 79,2 (quat), 169,6 (quat), 169,7 (quat), 172,8 (quat), 173,8 (quat). HR-TOF-MS (método 14): Ci2H22N208 [M+H]+ calculado: 321, 1298, encontrado 321,1299. 61

Composto exenqplificativo 13A: [N2-(terc-Butoxicarbonil)- glicil]-(3S)-3-hidroxi-L-asparagina

Composto exemplificativo 12A (353 mg, 1,10 mmole) é dissolvido em 25% de amoníaco aquoso (1,70 mL) e a mistura é agitada aproximadamente 2 horas à temperatura ambiente. Logo que a conversão for completa (determinação com HPLC, método 3), concentra-se à secura com uma bomba de vácuo a óleo e o resíduo é purificado com HPLC (método 17). As fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 172 mg (51% da teoria) do composto em título como substância sólida incolor. HPLC (método 3): Rt = 2,70 min. LC-MS (método 11): Rt = 2,21 min, MS (ESIpos): m/z (%) = 306 (70) [M + H] + .

Composto exemplificativo 14A: {3R)-3-Hidroxi-fenilalanina

62

Este composto exemplificativo é sintetizado de acordo com o método de Belokon (Y. N. Belokon, K. A. Kochetkov, N. S. Ikonnikov, T. V. Strelkova, S. R. Harutyunyan, A. S. Saghiyan, Tetrahedron: Asymmetry 2001, 12, 481-485). LC-MS (método 12): Rt = 0,41 min, MS (ESIpos): m/z (%) = 182,1 (100) [M + H]+.

[oí] 20jsfa = -21° (c = 0,1, MeOH) . Literatura (D. Alker, G. Hamblett, L. M. Harwood, S. M. Robertson, D. J. Watkin, C. E. Williams, Tetrahedron 1998, 54, 6089-6098.): [a]22Na = -20° (c = 0,8, MeOH). RMN de ΧΗ (400 MHz, D20) δ (ppm) = 3,84 (d, J= 4,5 Hz, 1H), 4,64 (d, J= 4,5 Hz, 1H), 7,30-7,36 (m, 5H) .

Composto exemplificativo 15A: N-Butoxicarbonil-(3R)-3- hidroxifenilalanina

OH O

Composto exemplificativo 14A (0,5 g, 2,76 mmole) é retomado em 1,4-dioxano-água (2 + 1, 9 mL) e é misturado com trietilamina (500 pL, 3,59 mmole, 1,3 equivalentes) e dicarbonato de di-terc-butilo (660 mg, 3,04 mmole, 1,3 equivalentes). A mistura é 63 agitada durante 16 horas à temperatura ambiente e depois a reacção é terminada com 1 M de ácido cítrico. Extrai-se com várias porções de acetato de etilo, até que na fase aquosa não seja mais determinável qualquer produto por HPLC (método 3) . As fases orgânicas reunidas são secas sobre sulfato de sódio e concentra-se. No resíduo obtém-se 759 mg (2,70 mmole, 98% da teoria) do composto em título como óleo incolor. HPLC (método 3): Rt = 3,89 min. LC-MS (método 8): Rt = 1,87 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 282,3 (40) [M + H]+. RMN de XH (400 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) = 1,27 (s, 9H, COC(C H3)3), 4,21 (m, 1H), 5,09 (s, 1H), 6,30 (d, J = 9,8 Hz, 7,22-7,34 (m, 5H) . HPLC quiral (método 7): e.e. 94,1%.

Composto exemplificativo 16A: N-Butoxicarbonil-(3R)-3- hidroxifenilalaninato de metilo

OH O

'3 64

Composto exemplificativo 16A (331 mg, 1,11 mmole) é dissolvido em diclorometano-metanol (5 + 1, 12 mL), arrefece-se a 0 °C e adiciona-se gota a gota trimetilsilildiazometano (2 M em THF, 1,66 mL, 3,32 mmole, 3 equivalentes). A mistura é agitada a 0 °C ainda por 30 minutos e depois é misturada com algumas gotas de TFA até descoloração. O solvente é destilado, restando como resíduo o composto em título (345 mg, 95% puro através de HPLC) em rendimento quantitativo como óleo amarelado. HPLC (método 3): Rt = 4,26 min. LC-MS (método 8): Rt = 2,11 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 296,3 (50) [M + H]+. RMN de ΤΗ (300 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) = 1,27 (s, 9H, COC(CH3)3), 3,60 (s, 3H, OCH3), 4,31 (dd, J= 3,8, J= 9,3 Hz, 1H), 5,03 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 5,68 (s largo, 1H), 6,62 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,23-7,34 (m, 5H).

Composto exemplificativo 17A: Trifluoroacetato de (3R)-3- hidroxi-fenilalaninato de metilo

Composto exemplificativo 16A (345 mg, 1,17 mmole) é dissolvido em 30% de TFA em diclorometano (10 mL) e agita-se 15 minutos à temperatura ambiente. Depois, o solvente é 65 destilado. 0 resíduo é seco em vácuo com uma bomba de óleo até peso constante. Rendimento: 401 mg (quantitativo) como óleo amarelo, que é utilizado no passo seguinte sem mais purificação. HPLC (método 3): Rt = 2,51 min. LC-MS (método 8): Rt = 0,30 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 196,1 (20) [M + H]+.

Composto exemplificativo 18A: [N2-(Benziloxicarbonil)-D- leucil]-L-leucinato de metilo

N2-(Benziloxicarbonil)-D-leucina (BACHEM Cat N° zl3351.) (6,37 g, 24 mmole) ) e L-leucinato de metilo (3,49 g, 24 mmole, 1 equivalente) são dissolvidos a 0 °C em DMF (75 mL), sendo depois adicionados NMM (5,28 mL, 48 mmole, 2 equivalentes) e HATU (13,69 g, 36 mmole, 1,5 equivalentes). A mistura é agitada três horas à temperatura ambiente. Mistura-se com MTBE e solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio e extrai-se. A fase aquosa é posteriormente extraida com uma segunda porção de MTBE, sendo depois as fases orgânicas reunidas lavadas com 1 M de ácido cítrico bem como novamente com solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio, seca-se sobre sulfato de sódio, 66 filtra-se e concentra-se em vácuo. 0 resíduo é purificado cromatograficamente em duas porções (Biotage 40 M, ciclo-hexano/acetato de etilo 3 + 1). As fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 7,85 g (80% da teoria) do composto em título. HPLC (método 3): Rt = 4,82 min. LCMS (método 8): Rt = 2,65 min; MS (ESIpos.): m/z (%) = 393 (100) [M + H]+ .

[a]20Na = -5,2° (c = 0,52, MeOH) . RMN de 2H (400 MHz, cfe-DMSO) δ (ppm) = 0, 77-0, 92 (m, 12H), 1,31-1,66 (m, 6H), 3,60 (s, 3H), 4,10 (m, 1H), 4,28 (m, 1H) , 5,02 (s, 2H), 7,25-7,38 (m, 6H), 8,23 (d, 1H), RMN de 13C (126 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) = 21,1 (CH3), 21,5 (CH3), 22,8 (CH3), 22,9 (CH3), 24,2 (CH), 41,0 (CH2), 50,0 (CH) , 51,8 (CH3, OCH3), 52,9 (CH), 65,3 (CH2, OCH2Ph) , 127,6 (CH, ar-C), 127,7 (CH, ar-C), 128,3 (CH, ar-C), 137,1 ( (C quat, ar-C), 155,8 (C quat, NCOC(CH3) 3) , 172,4 (C quat, C=0) , 172,9 (C quat, C=0) . 67

Composto exemplificativo 19A: [N2-(Benziloxicarbonil)-D- leucil]-L-leucina

CH '3

Composto exemplificativo 18A (7,70 g, 19,62 mmole) é retomado em 200 mL de THF/água (3 + 1), arrefece-se a 0 °C e mistura-se com mono-hidrato de hidróxido de lítio (1,65 g, 39,24 mmole, 2 equivalentes). Deixa-se agitar a 0 °C, de maneira que após controlo de HPLC (método 3) a conversão tenha decorrido completamente (aproximadamente 45 minutos). Destila-se a maior parte do THF em vácuo, ajusta-se depois o pH a aproximadamente 4 através da adição de ácido citrico e extrai-se com 2 porções de acetato de etilo. As fases orgânicas reunidas são secas sobre sulfato de sódio, filtra-se e concentra-se. O produto é obtido como substância sólida amorfa num rendimento de 6,87 g (89% da teoria) do composto em titulo. HPLC (método 3): Rt = 4,45 min. LCMS (método 8): Rt = 2,39 min, MS (ESIpos.) m/z (%) = 379 (100) [M + H]+, 757 (40) [2M + H]+.

[a]2V = +4,7° (c = 0,50, MeOH) . 68 RMN de XH (300 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) = 0, 77-0, 92 (m, 12H), 1,34-1,68 (m, 6H), 4, 04-4,26 (m, 2H), 5,02 (Sf 2H), 7,25-7,38 (m, 6H), 8,12 (d, 1H), 12,50 (s largo, 1H). HR-TOF-MS (método 14): C20H31N2O5 [M + H]+ calculado 379,2228, encontrado 379,2216.

Composto exemplificativo 20A: [N2-(Benziloxicarbonil-D- leucil]-L-leucil-(3.R)-3-hidroxi-fenilalaninato de metilo

Composto exemplificativo 19A (550 mg, 1,45 mmole) e composto exemplificativo 17A (449 mg, 1,45 mmole, 1 equivalente) são dissolvidos em DMF(12 mL) a 0 °C. Depois adiciona-se a isto 4-metilmorfolina (320 pL, 2,9 mmole, 2 equivalentes) e HATU (663 mg, 1,74 mmole, 1,2 equivalentes) e agita-se 15 minutos a 0 °C. Subsequentemente adiciona-se mais 4-metilmorfolina (160 pL, 1,45 mmole, 1 equivalente) e agita-se durante 16 horas à temperatura ambiente. De seguida agita-se entre acetato de etilo e hidrogenocarbonato de sódio concentrado, a fase orgânica é lavada com 0,5 M de ácido cítrico e lava-se mais uma vez com hidrogenocarbonato de sódio concentrado, seca-se sobre sulfato de sódio e concentra-se. O resíduo é purificado cromatograficamente (método 17) . As fracções contendo o produto 69 são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 626 mg (1,13 mmole, 78% da teoria) do composto em titulo. HPLC (método 3): Rt = 4,69 min. LC-MS (método 8): Rt = 2,58 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 556,5 (100) [M + H]+. RMN de ΧΗ (300 MHz, d6-DMSO) δ (ppm) = 0,76-0,88 (m, 12H), 1,23-1,60 (m, 6H), 3,54 (s, 3H, OC tf3), 4,06-4,11 (m, 1H), 4,43 (dd, J = 8,3, J = 14,9 Hz, 1H), 4,52 (dd, J = 4,1, J = 7,7 Hz, 1H) , 5, 02-5, 06 (m, 3H), 5,87 (d, J= 4,5 Hz, 1H), 7, 20-7, 40 (m, 11H), 8,01 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 8,08 (d, J= 8,5 Hz, 1H).

Composto exemplificativo 21A: [N2-(Benziloxi)carbonil-D- leucil]-L-leucil-(3R)-3-hidroxi-fenilalanina

Composto exemplificativo 20A (650 mg, 1,17 mmole) é dissolvido sob árgon em THF-água (2 + 1, 30 mL) .A0 °C é adicionada gota a gota uma solução aquosa de hidróxido de litio (57 mg, 2,40 mmole, 4 equivalentes em 8,65 mL de água). Após 45 minutos a conversão decorreu completamente (HPLC, método 1) . 70

Mistura-se com ácido acético glacial e concentra-se. 0 produto bruto é purificado cromatograficamente (método 16). As fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 618 mg (98% da teoria) do composto em titulo. HPLC (método 1): Rt = 2,44 min. LC-MS (método 13) Rt = 6,04; MS (ESIpos) m/z (%) = 542,5 (100) [M + H]+, 183,8 (80) [2M + H]+; MS (ESIneg) m/z (%) = 540,4 (40) [M - H]“; 1081, 70 (100) [2M - ΗΓ.

Composto exemplificativo 22A: N2-[Benziloxicarbonil-D-leucil]-L-leucil-(3R)-3-hidroxi-L-fenilalaninato de 2-(trimetilsilil)etilo

Composto exemplificativo 21A (150 mg, 277 pmole) e 2-(trimetilsilil)etanol (790 pL, 5,54 mmole, 20 equivalentes) e alguns peneiros moleculares de 4 Á são dissolvidos em diclorometano seco (3,0 mL) e agita-se aproximadamente 1 hora a -30 °C. Depois adciona-se DCC (114 mg, 553 pmole, 2 equivalentes) e DMAP (34 mg, 277 pmole, 1 equivalente), sendo a mistura agitada durante a noite e aqui deixa-se atingir 71 lentamente a temperatura ambiente. Depois a mistura é concentrada em vácuo e é cromatografada (método 16). As fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 108 mg, 60% da teoria) do composto em título. HPLC (método 1): Rt = 3,14 min. LC-MS (método 10): Rt = 2,97 min, MS (ESIpos): m/z (%) = 642,3 (100) [M + H]+.

Composto exemplificativo 23A: N2-[(Benziloxi)carbonil]-D-leucil-L-leucil-(3R)-3-{ [N2-{terc-butoxicarbonil)-O3-(terc-butil)-L-seril]oxi}-L-fenilalaninato de 2-(trimetilsilil)etilo

Composto exemplificativo 22A (104 mg, 162 pmole) e N2-(terc- butoxicarbonil) -O3- terc-butil-L-serina (47 mg, 178 pmole, 1,1 equivalentes) são dissolvidos em diclorometano seco (2,0 mL) e adiciona—se alguns peneiros moleculares de 4 Â Depois 72 adiciona-se DCC (70 mg, 340 μιηοΐθ, 2,1 equivalentes) e DMAP (23 mg, 194 pmole, 1,2 equivalentes) e a mistura é agitada durante a noite e aqui é deixada atingir lentamente a temperatura ambiente. A mistura é depois concentrada em vácuo e é submetida a cromatografia (método 16). As fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 120 mg (84% da teoria) do composto em titulo. HPLC (método 1): Rt = 3,49 min. LC-MS (método 10): Rt = 3,38 min, MS (ESIpos): m/z (%) = 885,6 (100) [M + H]+. HR-TOF-MS (método 14): C46H73N4O11SÍ calculado 885,5040, encontrado 885,5031 [M + H]+. 73

Composto exemplificativo 24A: Trifluoroacetato de N2-[(benziloxi)carbonil]-D-leucil-L-leucil- (3R)-3-{ [03-(terc-butil)-L-seril]oxi}-L-fenilalaninato de 2-(trimetilsilil)etilo

Composto exemplificativo 23A (117 mg, 132 pmole) é dissolvido em diclorometano (3 mL) . Adiciona-se 15% de TFA em diclorometano (20 mL), concentrando-se à secura após 10 minutos. O residuo é purificado cromatograficamente (método 16). As fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 100 mg (83% da teoria). HPLC (método 1): Rt = 2,40 min. LC-MS (método 10): Rt = 2,28 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 785,4 (100) [M + H]+. 74

Composto exemplificativo 25A: Λ72-[ (Benziloxi) carbonil]-D- leucil-L-leucil-(3R)-3-{ [N2-(terc-butoxicarbonil)glicil-(3S)-3-hidroxi-L-asparaginil-O3-(terc-butil)seril]oxi}-L-fenilalaninato de 2-(trimetilsilil)etilo

O

Composto exemplificativo 24A (96 mg, 107 pmole) e composto exemplificativo 13A (33 mg, 107 pmole, 1 equivalente) são dissolvidos em DMF (2,0 mL) e arrefece-se a -30 °C. São adicionados HATU (122 mg, 320 pmole, 3 equivalentes) e 4-metilmorfolina (86 mg, 854 pmole, 8 equivalentes), depois a mistura é lentamente deixada aquecer a aproximadamente 4 °C e deixa-se em repouso 12 horas a essa temperatura. A solução reaccional bruta é cromatografada (método 15), sendo as fracções contendo o produto reunidas e liofilizadas. Rendimento: 92 mg, 89% da teoria) do composto em titulo. 75 HPLC (método 1): Rt = 3,22 min. LC-MS (método 9): Rt = 3,21 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 1072,6 (100) [M + H]+; MS (ESIneg) : m/z (%) = 1070, 5 (100) [Μ - ΗΓ. HR-TOF-MS (método 14): C52H82N7Oi5Si calculado 1072,5633, encontrado 1072,5667 [M + H]+.

Composto exemplificativo 26A: Trifluoroacetato de N2-[(benziloxi)carbonil]-D-leucil-L-leucil-(3R)-3-{[glicil-(3S)-3-hidroxi-L-asparaginil-O3-(terc-butil)seril]oxi}-L- fenilalaninato de 2-(trimetilsilil)etilo

Composto exemplificativo 25A (90 mg, 84 pmole) é dissolvido em diclorometano (3,0 mL) . Adiciona-se 15% de TFA em diclorometano (20 mL), sendo que após 10 minutos se concentra à 76 secura. 0 resíduo é purificado cromatograficamente (método 16). As fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 73 mg (80% da teoria) do composto em título. HPLC (método 1): Rt = 2,65 min. LC-MS (método 10): Rt = 2,13 min, MS (ESIpos): m/z (%) = 972,6 (100) [M + H]+; MS (ESIneg) : m/z (%) = 970, 7 (100) [Μ - ΗΓ HR-TOF-MS (método 14): C47H74N7O13SÍ calculado 972,5109, encontrado 972,5103 [M + H]+. 77

Composto exemplificativo 27A: Trifluoroacetato de 2 N2-[(benziloxi)carbonil]-D-leucil-L-leucil- (3R) -3- ( [N2-(terc-butoxicarbonil)-(3R)-3-hidroxi-L-leucil-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-allotreonil-glicil-(3S)-3-hidroxi-L-asparaginil-O3-(terc-butil)seril]oxi}-L-fenilalaninato de 2-(trimetilsilil)etilo

Composto exemplificativo 26A (10,0 mg, 9,2 pmole) e composto exemplificativo 11A (8,2 mg, 107 pmole, 1 equivalente) são dissolvidos em (0,5 mL) e arrefece-se a -30 °C. São adicionados HATU (10,5 mg, 27,6 pmole, 3 equivalentes) e 4-metilmorfolina (7,5 mg, 74 pmole, 8 equivalentes), deixando-se depois a mistura aquecer lentamente até aproximadamente 4 °C e deixa-se em repouso 12 horas a esta temperatura. A solução 78 reaccional bruta é cromatografada (método 15), as fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 10,7 mg, 65% da teoria) do composto em titulo. HPLC (método 1): Rt = 2,99 min. LC-MS (método 9): Rt = 2,40 min, MS (ESIpos): m/z (%) = 1685,8 (50) [M + H]+; MS (ESIneg) : m/z (%) = 1683, 8 (50) [Μ - ΗΓ 1728,8 (100) [M + HCOOH] . HR-TOF-MS (método 14) : C80H134N15O22S1 calculado 1684,9592 encontrado 1684,9573 [M + H] + . 79

Composto exemplificativo 28A: Trifluoroacetato de N2-[(benziloxi)carbonil]-D-leucil-L-leucil-(3R)-3-{[N2- (terc-butoxicarbonil)-(3R)-3-hidroxi-L-leucil-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-allotreonil-glicil-(3S)-3-hidroxi-L-asparaginil-O3- ( terc-butil)seril]oxi}-L-fenilalanina

Método A:

Composto exemplificativo 27A (10 mg, 5,6 pmole) é dissolvido em THF absoluto (0,5 mL) . Adiciona-se TBAF (17,4 mg, 67 pmole, 12 equivalentes) e a mistura é agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Após HPLC analítica (método 1) a conversão está completada, termina-se a reacção com ácido acético glacial (6 pL), concentra-se e cromatografa-se (método 80 15). As fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 2,5 mg (aproximadamente 69% puro, 18% da teoria) do composto em título. Método B:

Composto 27A (25 mg, 13,9 pmole) é dissolvido em THF absoluto (2,5 mL) . Adiciona-se sulfato de sódio (anidro, 200 mg, 1,4 mmole) e a suspensão é agitada 30 minutos. Adiciona-se solução de TBAF (1M anidra em THF, 84 pL, 6 equivalentes) e agita-se 45 minutos à temperatura ambiente. Após HPLC analítica (método 1) a conversão está completada. Termina-se a reacção com ácido acético glacial (16 pL), filtra-se, concentra-se e cromatografa-se (método 15). Rendimento: 21 mg (> 95% puro, 89% da teoria) do composto em titulo. HPLC (método 6): Rt = 2,99 min. LC-MS (método 9) : Rt = 2,34 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 1585,6 (20) [M + H]+; MS (ESIneg): m/z (%) = 1583,4 (100) [Μ - H]“. HR-TOF-MS (método 14): C75H121N15O23SÍ calculado 1584,8884, encontrado 1584,8843 [M + H] + . 81

Composto exenqplificativo 29A: Bis-trifluoroacetato de N2-[(benziloxi)carbonil]-D-leucil-L-leucil-(3R)-3-(3R)-3-hidroxi-L-leucil-L-leucil-D-arginil-L-isoleucil-L-allotreonil-glicil-(3S)-3-hidroxi-L-asparaginil-seril]oxi}-L-fenilalanina

Composto exemplificativo 28A (2,5 mg, 1,5 pmole) é convertido com triisopropilsilano ( 12,5 pL) e água (2,8 pL) e mistura-se com 0,5 mL de TFA. Depois agita-se 1 hora à temperatura ambiente e finalmente o solvente é eliminado a vácuo. 0 resíduo é cromatografado (método 15). As fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 2 mg (82% da teoria) do composto em título. 82 HPLC (método 6): Rt = 2,00 min. 714, 9 LC-MS (método 9): Rt = 1,60 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = (100) [M + 2H]2 +; MS (ESIneg) m/z (%) = 1427, 7 (100) [Μ - H]" 7734, HR-TOF-MS (método 14) : C66H106N15O20 calculado 1428, encontrado 1428,7700 [M + H]+. de

Composto exemplificativo 30A: Trifluoroacetato N-benziloxicarbonil-lisobactina

O

83

Composto exemplificativo 29A (1,0 mg, 1,1 pmole) é dissolvido em DMF (0,9 mL) e arrefece-se a -15 °C. São adicionados hatu (1,2 mg, 3,3 pmole, 3 equivalentes) e 4-metilmorfolina ( 11 pL de uma solução de 100 pL de 4-metilmorfolina em 0,9 mL de DMF, 8,7 pmole, 8 equivalentes), depois a mistura é lentamente deixada aquecer a aproximadamente 4 °C e agita-se 3 horas à temperatura ambiente. A solução reaccional bruta é cromatografada (método 15), as fracções contendo o produto são reunidas e liofilizadas. Rendimento: 1,2 mg, 73% da teoria) do composto em titulo. HPLC (método 1): Rt = 2,17 min. LC-MS (método 9): Rt = 2,00 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 1410,8 (100) [M + H]+; MS (ESIneg) m/z (%) = 1408,7 (100) [Μ - ΗΓ. HR-TOF-MS (método 14): C66H104N15O19 calculado 1410, 7628, encontrado 1410,7639 [M + H]+. 84

Composto exemplificativo 31A: Bis-trifluoroacetato de lisobactina

Composto exemplificativo 30A (1,0 mg, 0,66 pmole) é dissolvido em dioxano (0,5 mL), adiciona-se 0,75 mL de 0,1% de TFA aquoso e uma ponta de espátula de 10% Pd/C e a mistura é hidrogenada à pressão normal e à temperatura ambiente durante 15 minutos. O produto é filtrado do catalisador, concentra-se e purifica-se cromatograficamente (método 15). Rendimento: 0,6 mg (61% da teoria) do composto em título. HPLC (método 4): Rt = 16,31 min. A identidade do produto de síntese 31A foi confirmada através de co-injecção com 85 lisobactina autêntica (obtida de acordo com o método descrito no documento WO 2004-099239(Al)). HPLC (método 5) Rt = 38,10 min. A identidade do produto de síntese 31A foi confirmada através de co-injecção com lisobactina autêntica (obtida de acordo com o método descrito no documento WO 2004/099239(Al)). LC-MS (método 9): Rt = 1,40 min, MS (ESIpos) : m/z (%) = 638,9 (100) [Μ + 2H] 2+, 1276,8 (5) [M + H]+; MS (ESlneg) : m/z (%) = 637, 0 (100) [Μ - 2H] 2“, 1274,7 (40) [Μ - ΗΓ. HR-TOF-MS (método 14): C58H98N15O17 calculado 1276,7260, encontrado 1276,7264 [Μ + H]+. B. Avaliação da actividade fisiológica A actividade in vitro dos compostos de acordo com a invenção pode ser mostrada no seguinte ensaio:

Determinação da concentração mínima de inibição (CMI): A CMI é determinada no teste de diluição liquida de acordo com as directrizes NCCLS. As culturas obtidas durante a noite de Staphylococcus aureus 133, Enterococus faecalis ICB27159 e Streptococus pneumoniae G9a são incubados com as substâncias teste descritas numa série de diluição de 1:2. A determinação de CMI é efectuada com uma contagem celular de 105 micróbios germes por mL em meio Isosensit (firma Difco, Irvine/EUA), com a excepção de S. pneumoniae, que é testado em BHI-Bouillon (firma 86

Difco, Irvine/EUA) com 10% de soro de vitelo para um número de células de 106 micróbios por mL. As culturas são incubadas a 37 °C durante 18-24 horas, a S. pneumoniae na presença de 10% de C02.

Define-se como CMI a respectiva concentração mais baixa de substância para a qual já não ocorre qualquer crescimento bacteriano visível. Os valores de CMI são indicados em pg/mL. Não resultaram quaisquer diferenças significativas na actividade fisiológica entre a lisobactina preparada de forma completamenta sintética e a lisocabtina fermentada.

Lisboa, 2 de Fevereiro de 2010 87

Claims (19)

1. REIVINDICAÇÕES Processo para a preparação de depsipeptídeos cíclicos seguinte fórmula (I) da

rf NH, em que R1 é = H ou CH3, em que R2 é hidrogénio, ciclo-alquilo-C3-C6, ciclo-alcenilo-Cs-Ce, ciclo-alquil-C3-C6-metilo, heterociclilmetilo de 5 até 7 membros, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, 1-metilprop-l-ilo, 2-metilprop-l-ilo, 2,2-dimetilprop-l-ilo, 1,1-dimetilprop-l-ilo, 1-etil-prop-l-ilo, 1-etil-l-metilprop-l-ilo, n-butilo, 2-metilbut-l-ilo, 3-metilbut-l- 1 ilo, 1-etilbut-l-ilo, terc-butilo, 4-metilpent-l-ilo, n-hexilo, alcenilo ou arilo, em que R2 pode estar substituído com 0, 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados, independentemente uns dos outros, do grupo constituído por halogéneo, hidroxilo, amino, ciano, trimetilsililo, alquilo, alcoxilo, benziloxilo, ciclo-alquilo-C3-C6, arilo, heteroarilo de 5 até 10 membros, alquilamino, arilamino, alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, arilcarbonilo e benziloxicarbonilamino, em que arilo e heteroarilo, por seu lado, podem estar substituídos com 0, 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados, independentemente uns dos outros, do grupo constituído por halogéneo, hidroxilo, amino, ciano, nitro alquilo, alcoxilo e fenilo, em que R3 é = hidrogénio ou alquilo-Ci-C4, ou em que R2 e R3 em conjunto com o átomo de carbono ao qual se encontram ligados, formam um anel de ciclo-alquilo-C3-C6 ou um anel de heterociclilo de 5 até 7 membros, em que o anel de ciclo-alquilo e o anel de heterociclilo podem estar substituídos com 0, 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados, independentemente uns dos outros, do grupo constituído por trifluorometilo, alquilo, alcoxilo e alquilcarbonilo, em que R4 é = alquilo, ciclo-alquilo-C3-C6, heterociclilo de 5 até 7 membros, arilo, heteroarilo de 5 ou 6 membros, 2 alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ciclo-alquilo-C3-C6-carbonilo, heterociclilcarbonilo de 5 até 7 membros, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo de 5 ou 6 membros ou alquilaminocarbonilo, em que alquilo, ciclo-alquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, alcoxicarbonilo, cicloalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo e alquilaminocarbonilo podem estar substituídos com 0, 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados, independentemente uns dos outros, do grupo constituído por halogéneo, hidroxilo, amino, alquilamino e fenilo, e em que alquilcarbonilo está substituído com um substituinte amino ou alquilamino, e em que alquilcarbonilo pode estar substituído com outros 0, 1 ou 2 substituintes, seleccionados, independentemente uns dos outros, do grupo constituído por halogéneo, hidroxilo, trimetilsililo, alcoxilo, alquiltio, benziloxilo, ciclo-alquilo-C3-C6, fenilo, naftilo, heteroarilo de 5 até 10 membros, alquilcarbonilamino, alcoxicarbonilamino, arilcarbonilamino, arilcarboniloxilo, benziloxicarbonilo e benziloxicarbonilamino, em que fenilo e heteroarilo, por seu lado, podem estar substituídos com 0, 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados, 3 independentemente uns dos outros, do grupo constituído por halogéneo, hidroxilo, nitro, alquilo, alcoxilo e fenilo, ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono no alquilcarbonilo, em conjunto com o átomo de carbono ao qual se encontram ligados, formam um anel de ciclo-alquilo-C3-C6 ou um anel de heterociclilo de 5 até 7 membros, em que o anel de ciclo-alquilo e o anel de heterociclilo podem estar substituídos com 0, 1, 2 ou 3 substituintes seleccionados, independentemente uns dos outros, do grupo constituído por trifluorometilo, alquilo e alcoxilo, ou em que o anel de ciclo-alquilo pode estar benzo-anelado, em que R5 é = hidrogénio, alquilo-Ci-C4, ciclopropilo ou ciclopropilmetilo, ou em que R4 e R5 em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontram ligados, formam um anel de heterociclilo de 5 até 7 membros, em que o anel de heterociclilo pode estar substituído com 0, 1, 2 ou 3 substituintes, seleccionados, independentemente uns dos outros, do grupo constituído por halogéneo, hidroxilo, amino, ciano, alquilo, alcoxilo e alquilamino, através de ciclização intramolecular de um composto da seguinte fórmula (II) 4

(II) em que R1 até R5 são como definido anteriormente, em que X é = OH, um éster activo, um pseudo-halogéneo ou um halogéneo, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado, e subsequente desprotecção do produto intermédio cíclico com a formação do depsipeptídeo cíclico da fórmula (I). 5 2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o composto da fórmula (II) ser um composto da seguinte fórmula (lia)

2. PG

(Ila) em que X e R1 são como definido na reivindicação 1, em que R6 é isopropilmetilo, terc-butilmetilo, 2,2-dimetilbut-l-ilo, 2-etil-2-metilbut-l-ilo, 2,2-dietilbut-l-ilo, 2,2-dimetilpent-l-ilo, 3-piridilmetilo, 4- trifluorometil-3-piridilmetilo, benzilo ou trimetilsililmetilo, 6 em que R1 é = isopropilmetilo, terc-butilmetilo, 2,2-dimetilbut-l-ilo, 2-etil-2-metilbut-l-ilo, 2,2-dietilbut-l-ilo, 2,2-dimetilpent-l-ilo, trimetilsililmetilo ou benzilo, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado.

3. Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por R6 ser = isopropilmetilo, terc-butilmetilo ou 3- piridilmetilo, e R1 ser = isopropilmetilo, terc-butilmetilo ou trimetilsililmetilo.

4. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por R6 ser = R1 = isopropilmetilo.

5. Processo de acordo com uma das reivindicações 1 até 4, caracterizado por X ser = OH.

6. Processo de acordo com uma das reivindicações 1 até 5, caracterizado por R1 ser = CH3.

7 1 Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela preparação do composto da fórmula (II) por acoplamento de um composto da seguinte fórmula (III) com um composto da seguinte fórmula (IV)

em que R1 até R5 são como definido na reivindicação 1, em que Y é = OH, um éster activo, um pseudo-halogéneo ou um halogéneo, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado, e eventualmente desprotecção parcial ou completa do produto intermédio bem como eventualmente transformação do grupo carboxilo da 3-hidroxi-fenilalanina num grupo da fórmula -C(=0)X, em que X é como definido na reivindicação 1.

8 Processo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado por o composto da fórmula (III) ser um composto da seguinte fórmula (Illa)

(IIIa) em que R6 e R7 são como definido nas reivindicações 2 até 4, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado.

9. Processo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pela preparação do composto da fórmula (III) por acoplamento de um composto da seguinte fórmula (V) com um composto da seguinte fórmula (VI) 9 (VI) R

NH PG ,0 O

em que R2 até R5 são como definido na reivindicação 1, em que Z é = OH, um éster activo, um pseudo-halogéneo ou um halogéneo, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado, e eventualmente a desprotecção parcial ou completa do produto intermédio.

10. Processo de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por o composto da fórmula (V) ser um composto da seguinte fórmula (Va) PG

(Va) 10 em que R6 e R7 são como definido nas reivindicações 2 até 4, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado.

11. Composto da seguinte fórmula (III)

PG (III) 1, e seguinte em que R2 até R5 são como definido na reivindicação em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado.

12. Composto de acordo com a reivindicação 11, com a fórmula (Illa) 11 Q Ρ<3

ΝΗ ΜΗ, Ο

ίIlla) em que R6 e R7 são como definido nas reivindicações 2 até 4, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado.

13. Composto de acordo com a reivindicação 12, com a seguinte fórmula (Illb) 12 ο

(II Ib)

14. Processo para a preparação de um composto de acordo com a reivindicação 11, que apresenta o acoplamento de um composto da fórmula (V) com um composto da fórmula (VI)

em que R2 até R5 são como definido na reivindicação 1, em que Z é = OH, um éster activo, um pseudo-halogéneo ou um halogéneo, e 13 em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado, e eventualmente a desprotecção parcial ou completa do produto intermédio.

15. Composto da seguinte fórmula (VI) PG PG

(VI) em que Z é = OH, um éster activo, um pseudo-halogéneo ou um halogéneo, e em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado.

16. Composto de acordo com a reivindicação 15, com a seguinte fórmula (Via)

(Vlã)

17. Processo para a preparação de um composto de acordo com a reivindicação 15, que apresenta o acoplamento de um composto da seguinte fórmula (VII) com um composto da seguinte fórmula (VIII) 14

em que PG é = H ou um grupo de protecção adequado, e eventualmente a desprotecção completa ou parcial do produto intermédio.

18. Processo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado por o composto da fórmula (VII) ser um composto da seguinte fórmula (Vila).

(Vila)

19. Processo de acordo com a reivindicação 17 ou 18, caracterizado por o composto da fórmula (VIII) ser um composto da seguinte fórmula (Vllla). 15

{VIIla) Lisboa, 2 de Fevereiro de 2010 16