KR20080112374A

KR20080112374A - 리소박틴 유도체의 제조 방법

Info

Publication number: KR20080112374A
Application number: KR1020087027736A
Authority: KR
Inventors: 프란쯔 본 누스바움; 소냐 안라우프; 요한네스 쾨벌링; 호아킴 텔세르; 디터 해비히
Original assignee: 아이쿠리스 게엠베하 운트 코. 카게
Priority date: 2006-04-13
Filing date: 2007-04-13
Publication date: 2008-12-24
Also published as: RU2434878C2; EP2004670B1; PL2004670T3; RU2008144662A; CN101421291A; ATE456572T1; PT2004670E; UA94743C2; ES2337949T3; EP2004670A1; DE502007002745D1; DE102006018250A1; IL194337A0; DK2004670T3; US20090163696A1; HK1126791A1; MX2008013189A; CA2648136A1; WO2007118693A1; JP2009533372A

Abstract

본 발명은 분자내 고리화에 의한 하기 화학식 (I)을 가지는 시클릭 뎁시펩티드의 제조 방법에 관한 것이다.

[화학식 I]

시클릭 뎁시펩티드, 항생제, 합성 리소박틴, 분자내 고리화, 탈보호

Description

리소박틴 유도체의 제조 방법{PROCESS FOR THE MANUFACTURE OF LYSOBACTIN DERIVATIVES}

본 발명은 하기 화학식　(I)의 시클릭 뎁시펩티드(depsipeptide)의 제조 방법뿐만 아니라 본 방법에 유용한 화합물에 관한 것이다.

상기 식에서, R¹은 H 또는 CH₃이고,

R²는 수소, C₃-C₆-시클로알킬, C₅-C₆-시클로알케닐, C₃-C₆ 시클로알킬메틸, 5 내지 7원 헤테로시클릴메틸, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, 1-메틸프로프-1-일, 2-메틸프로프-1-일, 2,2-디메틸프로프-1-일, 1,1-디메틸프로프-1-일, 1-에틸프로프-1-일, 1-에틸-1-메틸프로프-1-일, n-부틸, 2-메틸부트-1-일, 3-메틸부트-1-일, 1-에틸부트-1-일, tert-부틸, 4-메틸-펜트-1-일, n-헥실, 알케닐 또는 아릴이고,

(여기서 R²는 할로겐, 히드록시, 아미노, 시아노, 트리메틸실릴, 알킬, 알콕시, 벤질옥시, C₃-C₆-시클로알킬, 아릴, 5 내지 10원 헤테로아릴, 알킬아미노, 아릴아미노, 알킬카르보닐아미노, 아릴카르보닐아미노, 알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, 아릴카르보닐 및 벤질옥시카르보닐아미노로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있으며,

여기의 아릴 및 헤테로아릴은 다시 할로겐, 히드록시, 아미노, 시아노, 니트로, 알킬, 알콕시 및 페닐로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있음),

R³은 수소 또는 C₁-C₄-알킬이거나, 또는

R² 및 R³은 이들이 결합한 탄소 원자와 함께 C₃-C₆-시클로알킬 고리 또는 5 내지 7원 헤테로시클릴 고리를 형성하고, 여기의 시클로알킬 고리 및 헤테로시클릴 고리는 트리플루오로메틸, 알킬, 알콕시 및 알킬카르보닐로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있고,

R⁴는 알킬, C₃-C₆-시클로알킬, 5 내지 7원 헤테로시클릴, 아릴, 5 또는 6원 헤테로아릴, 알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, C₃-C₆-시클로알킬카르보닐, 5 내지 7원 헤테로시클릴카르보닐, 아릴카르보닐, 5 또는 6원 헤테로아릴카르보닐 또는 알킬아미노카르보닐이고,

(여기서 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시카르보닐, 시클로알킬카르보닐, 헤테로시클릴카르보닐, 아릴카르보닐, 헤테로아릴카르보닐 및 알킬아미노카르보닐은 할로겐, 히드록시, 아미노, 알킬아미노 및 페닐로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있으며,

여기서 알킬카르보닐은 아미노 또는 알킬아미노 치환기로 치환되고,

여기의 알킬카르보닐은 할로겐, 히드록시, 트리메틸실릴, 알콕시, 알킬티오, 벤질옥시, C₃-C₆-시클로알킬, 페닐, 나프틸, 5 내지 10원 헤테로아릴, 알킬카르보닐아미노, 알콕시카르보닐아미노, 아릴카르보닐아미노, 아릴카르보닐옥시, 벤질옥시카르보닐 및 벤질옥시카르보닐아미노로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1 또는 2개의 추가의 치환기로 치환될 수 있으며,

여기의 페닐 및 헤테로아릴은 다시 할로겐, 히드록시, 니트로, 알킬, 알콕시 및 페닐로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있거나, 또는

알킬카르보닐 내 동일한 탄소 원자에 있는 2개의 치환기는 그들이 결합한 탄소 원자와 함께 C₃-C₆-시클로알킬 고리 또는 5 내지 7원 헤테로시클릴 고리를 형성하고,

여기의 상기 시클로알킬 고리 및 헤테로시클릴 고리는 트리플루오로메틸, 알킬 및 알콕시로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있거나, 또는

여기의 상기 시클로알킬 고리는 벤조 융합될 수 있음),

R⁵는 수소, C₁-C₄-알킬, 시클로프로필 또는 시클로프로필메틸이거나, 또는

R⁴및 R⁵는 이들이 결합한 질소 원자와 함께 5 내지 7원 헤테로시클릴 고리를 형성하고, 여기의 헤테로시클릴 고리는 할로겐, 히드록시, 아미노, 시아노, 알킬, 알콕시 및 알킬아미노로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2, 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있다.

상기 설명된 시클릭 뎁시펩티드는 그 중에서도 특히 리소박틴 및 카타노신 A으로 지칭되는 후술되는 2가지 천연물을 포함한다. 이 물질들은 세포벽 생합성 억제제이며, 따라서 항균 활성을 가진다.

리소박틴, R = CH₃

카타노신 A, R = H

박테리아의 세포벽은 다수의 효소에 의해 합성되고 (세포벽 생합성), 미생물의 생존 및 번식에 있어 필수적이다. 거대 분자의 구조 뿐만 아니라 그의 합성에 관련된 단백질 및 생합성 중간체 ("전구체")가 박테리아 내에 고도로 보존된다. 그의 본질적 특성 및 균일성으로 인해, 신규 항생제에 있어서 세포벽 생합성은 이상적인 공격 지점이 된다.

반코마이신 및 페니실린은 박테리아 세포벽 생합성의 억제제이고, 이 작용 원리의 항생제 효력의 성공적인 예를 나타낸다. 그들은 박테리아성 감염, 특히 그 램-양성 병원체의 치료에 수 십년간 임상적으로 사용되어 왔다. 내성 미생물, 예를 들면 메티실린-내성 포도상구균류(staphylococci), 페니실린-내성 폐렴구균(pneumococci) 및 반코마이신-내성 장구균(enterococci) 및 또한 최근 최초로 발생한 반코마이신-내성 포도상구균류의 발생 증가로 인해, 이들 물질들은 점점 그들의 치료 효과를 잃어 가고 있다.

현재까지 리소박틴은 예컨대 리소박터 종 (Lysobacter sp.) SC 14067을 이용한 발효에 의해 수득되어 왔다. 또한, WO 2004/099239 A1으로부터 선형 절편을 형성하는 2개의 루이신 유닛을 제거하고 그들을 다른 기로 치환하는 것이 공지되어 있다. 리소박틴, 카타노신 A 또는 선형 절편 중 변이를 가지는 그들의 유도체의 완전한 합성에 의한 제조 방법은 지금까지 알려진 바 없다.

따라서, 본 발명의 목적은 전술된 화학식 (I)의 시클릭 뎁시펩티드의 제조 방법을 기술하는 것이다.

상기 목적은 하기 화학식　(II)의 화합물의 분자내 고리화 후 시클릭 중간체의 탈보호로 화학식 (I)의 시클릭 뎁시펩티드를 형성하는, 화학식 (I)의 시클릭 뎁시펩티드 제조 방법에 의해 달성된다.

(식 중, R¹ 내지 R⁵는 전술된 바와 같고,

여기의 X는 OH, 활성 에스테르, 슈도할로겐 (예, 아지드) 또는 할로겐이고,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)

본 방법은 O ³ 에서 에스테르화된 β-히드록시 α-아미노산 (본원에서의 β-페닐세린 = β-히드록시페닐알라닌)이 고리화 단계에서 화학적으로 활성화된 후 아실 공여체로 거동하는 것을 특징으로 한다. 상기 고리화는 에스테르화 반응 (락톤 형성)에 의해서가 아니라 아미드 결합 (락탐 형성)에 의해 일어난다.

또한, 상기 방법은 뎁시펩티드 올가미(lasso) 구조의 시클릭 절편을 다리목 아미노산 (본원에서는 b-히드록시-페닐알라닌)에서의 고리화에 의해 제조하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 목적에 있어서, 치환기는 달리 특정되지 않는 한 다음과 같은 의미를 갖는다.

알킬 자체 및 알콕시, 알킬아미노, 알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, 알킬아미노카르보닐 및 알킬카르보닐아미노 중 "알크" 및 "알킬"은 일반적으로 탄소수 1 내지 6, 바람직하게는 1 내지 4, 특히 바람직하게는 1 내지 3의 직쇄 또는 분지쇄 알킬 라디칼, 예컨대 바람직하게는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, tert-부틸, n-펜틸 및 n-헥실을 나타낸다.

알콕시는 예컨대 바람직하게는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, tert-부톡시, n-펜톡시 및 n-헥속시를 나타낸다.

알케닐은 탄소수 2 내지 6의 직쇄 또는 분지쇄 알케닐 라디칼을 나타낸다. 탄소수 2 내지 4, 특히 바람직하게는 탄소수 2 내지 3의 직쇄 또는 분지쇄 알케닐 라디칼이 바람직하다. 바람직하게 예시될 수 있는 예로는 비닐, 알릴, n-프로프-1-엔-1-일, n-부트-2-엔-1-일, 2-메틸프로프-1-엔-1-일 및 2-메틸프로프-2-엔-1-일이 있다.

알킬아미노는 1 또는 2개의 알킬 치환기 (서로 독립적으로 선택됨)를 갖는 알킬아미노 라디칼, 예컨대 바람직하게는 메틸아미노, 에틸아미노, n-프로필아미노, 이소프로필아미노, tert-부틸아미노, n-펜틸아미노, n-헥실아미노, N,N-디메틸아미노, N,N-디에틸아미노, N-에틸-N-메틸아미노, N-메틸-N-n-프로필아미노, N-이소프로필-N-n-프로필아미노, N-tert-부틸-N-메틸-아미노, N-에틸-N-n-펜틸아미노 및 N-n-헥실-N-메틸아미노를 나타낸다.

아릴아미노는 하나의 아릴 치환기 및 임의로 추가의 치환기, 예컨대 아릴 또는 알킬 등을 가지는 아릴아미노 라디칼, 예컨대 바람직하게는 페닐아미노, 나프틸아미노, 페닐메틸아미노 또는 디페닐아미노를 나타낸다.

알킬카르보닐은 하나의 알킬 치환기를 가지는 알킬카르보닐 라디칼, 예컨대 바람직하게는 메틸카르보닐, 에틸카르보닐, n-프로필카르보닐, 이소프로필카르보닐, tert-부틸카르보닐, n-펜틸카르보닐 및 n-헥실카르보닐을 나타낸다.

알콕시카르보닐은 하나의 알콕시 치환기를 가지는 알콕시카르보닐 라디칼, 예컨대 바람직하게는 메톡시카르보닐, 에톡시카르보닐, n-프로폭시카르보닐, 이소프로폭시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, n-펜톡시카르보닐 및 n-헥속시카르보닐을 나타낸다.

시클로알킬카르보닐은 하나의 시클로알킬 치환기를 가지는 시클로알킬카르보닐 라디칼, 예컨대 바람직하게는 시클로프로필카르보닐, 시클로부틸카르보닐, 시클로펜틸카르보닐 및 시클로헥실카르보닐을 나타낸다.

헤테로시클릴카르보닐은 하나의 헤테로시클릴 치환기를 가지는 헤테로시클릴카르보닐 라디칼, 예컨대 바람직하게는 테트라히드로푸란-2-일카르보닐, 피롤리딘-2-일카르보닐, 피롤리딘-3-일카르보닐, 피롤리닐카르보닐, 피페리디닐카르보닐, 모르폴리닐카르보닐 및 퍼히드로아제피닐카르보닐을 나타낸다.

아릴카르보닐은 하나의 아릴 치환기를 가지는 아릴카르보닐 라디칼, 예컨대 바람직하게는 페닐카르보닐, 나프틸카르보닐 및 페난트레닐카르보닐을 나타낸다.

헤테로아릴카르보닐은 하나의 헤테로아릴 치환기를 가지는 헤테로아릴카르보닐 라디칼, 예컨대 바람직하게는 티에닐카르보닐, 푸릴카르보닐, 피롤릴카르보닐, 티아졸릴카르보닐, 옥사졸릴카르보닐, 이미다졸릴카르보닐, 피리딜카르보닐, 피리미딜카르보닐, 피리다지닐카르보닐, 인돌릴카르보닐, 인다졸릴카르보닐, 벤조푸라닐카르보닐, 벤조티오페닐카르보닐, 퀴놀리닐카르보닐 및 이소퀴놀리닐카르보닐을 나타낸다.

알킬카르보닐아미노는 하나의 알킬 치환기를 가지는 알킬카르보닐아미노 라디칼, 예컨대 바람직하게는 메틸카르보닐아미노, 에틸카르보닐아미노, n-프로필카르보닐아미노, 이소프로필카르보닐아미노, tert-부틸카르보닐아미노, n-펜틸카르보닐아미노 및 n-헥실카르보닐아미노를 나타낸다.

아릴카르보닐아미노는 하나의 아릴 치환기를 가지는 아릴카르보닐아미노 라디칼, 예컨대 바람직하게는 페닐카르보닐아미노, 나프틸카르보닐아미노 및 페난트레닐카르보닐아미노를 나타낸다.

알킬아미노카르보닐은 1 또는 2개의 알킬 치환기 (서로 독립적으로 선택됨)를 가지는 알킬아미노카르보닐 라디칼, 예컨대 바람직하게는 메틸아미노카르보닐, 에틸아미노카르보닐, n-프로필아미노카르보닐, 이소프로필아미노카르보닐, tert-부틸아미노카르보닐, n-펜틸아미노카르보닐, n-헥실아미노카르보닐, N,N-디메틸아미노카르보닐, N,N-디에틸아미노카르보닐, N-에틸-N-메틸아미노카르보닐, N-메틸-N-n-프로필아미노카르보닐, N-이소프로필-N-n-프로필아미노카르보닐, N-tert-부틸-N-메틸-아미노카르보닐, N-에틸-N-n-펜틸아미노카르보닐 및 N-n-헥실-N-메틸아미노카 르보닐을 나타낸다.

시클로알킬은 일반적으로 탄소수 3 내지 6의 시클로알킬기, 예컨대 바람직하게는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실을 나타낸다.

시클로알케닐은 일반적으로 탄소수 5 내지 6의, 1 또는 2개의 이중결합을 갖는 시클로알케닐기, 예컨대 바람직하게는 시클로펜트-1-엔-1-일, 시클로펜트-2-엔-1-일, 시클로펜트-3-엔-1-일, 시클로헥스-1-엔-1-일, 시클로헥스-2-엔-1-일 및 시클로헥스-3-엔-1-일을 나타낸다.

아릴은 일반적으로 탄소수 6 내지 14의 모노- 내지 트리시클릭 방향족, 카르보시클릭 라디칼; 예컨대 바람직하게는 페닐, 나프틸 및 페난트레닐을 나타낸다.

헤테로시클릴은 일반적으로 5 내지 7개의 고리 원자 및 N, O, S, SO, SO₂계열로부터의 3개 이하, 바람직하게는 2개 이하의 헤테로원자 및/또는 헤테로기를 가지는 모노- 또는 폴리시클릭, 바람직하게는 모노- 또는 비시클릭, 헤테로시클릭 라디칼을 나타낸다. 헤테로시클릴 라디칼은 포화되거나 부분적으로 불포화될 수 있다. O, N 및 S 계열로부터의 2개 이하의 헤테로원자를 가지는 5 내지 7원 모노시클릭 포화 헤테로시클릴 라디칼이 바람직하며, 예컨대 바람직하게는 테트라히드로푸란-2-일, 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 피롤리닐, 피페리디닐, 모르폴리닐 및 퍼히드로아제피닐이다.

헤테로아릴은 일반적으로 5 내지 10개, 바람직하게는 5 내지 6개의 고리 원자 및 S, O 및 N 계열로부터 5개 이하, 바람직하게는 4개 이하의 헤테로원자를 가 지는 방향족, 모노- 또는 비시클릭 라디칼, 예컨대 바람직하게는 티에닐, 푸릴, 피롤릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이미다졸릴, 피리딜, 피리미딜, 피리다지닐, 인돌릴, 인다졸릴, 벤조푸라닐, 벤조티오페닐, 퀴놀리닐 및 이소퀴놀리닐을 나타낸다 .

카르보닐결합 아미노산은 아미노산 산 작용기의 카르보닐기를 통해 결합된 아미노산을 나타낸다. 이와 관련하여, L- 또는 D-배위의 α-아미노산, 특히 천연 α-아미노산, 예컨대 글리신, L-알라닌, L-발린, L-루이신, L-이소루이신, L-프롤린, L-페닐알라닌, L-트립토판 등 또는 자연적이지 않은 D-배위의 천연 α-아미노산, 예컨대 D-알라닌, D-발린, D-루이신, D-이소루이신, D-프롤린, D-페닐알라닌, D-트립토판 등 또는 아미노산의 α-탄소 원자에 결합된 측기 (예컨대 C₃-C₆-시클로-알킬메틸, C₃-C₆-시클로알킬, 에틸, n-프로필, 2,2-디메틸프로필, tert-부틸, 3-메틸부틸, n-헥실 또는 알릴 등) 또는 아미노산의 α-탄소 원자와 고리를 형성하는 측쇄 (예컨대 시클로프로필 (아미노산: 1-아미노-1-시클로프로판-카르복실산), 시클로부틸, 시클로펜틸 또는 시클로헥실 등)를 가지는 비천연 아미노산 또는 β-아미노산 (명명법에 대해서는 문헌[D. Seebach, M. Overhand, F. N. M. Kuenle, B. Martinoni, L. Oberer, U. Hommel, H. Widmer, Helv. Chim. Acta 1996, 79, 913-941] 참조), 예컨대 β-알라닌, β-페닐알라닌, β-Aib (α-메틸알라닌) 등 또는 2,3-디아미노프로피온산의 유도체 (예, 2,3-디아미노-3-페닐프로피온산)이 바람직하다.

할로겐은 불소, 염소, 브롬 및 요오드, 바람직하게는 불소 및 염소를 나타낸 다.

활성 에스테르란 당업자에게 공지된 모든 활성 에스테르를 포함한다. 본 발명에서 바람직한 활성 에스테르의 예로는 시아노메틸 에스테르, p-니트로페닐 에스테르, o-니트로페닐 에스테르, 2,4-디니트로페닐 에스테르, 2,4,5-트리클로로페닐 에스테르, 펜타클로로페닐 에스테르, 펜타플루오로페닐 에스테르 (Pfp), N-히드록시프탈이미드 에스테르, N-히드록시숙신이미드 에스테르 (O-Su), 1-히드록시피페리딘 에스테르, 5-클로로-8-히드록시퀴놀린 에스테르를 들 수 있다.

분자내 고리화는 기본적으로 당업자에게 공지된 임의의 공정에 의해 수행될 수 있는 아미드 결합의 형성을 포함한다.

이에 의한 고리화는 하기 도시된 친핵성 공격에 의해 일어난다.

X가 활성 에스테르, 슈도할로겐 또는 할로겐을 나타내는 경우, 반응은 일반 적으로 비활성 용매 중, 경우에 따라 염기 존재 하에, 바람직하게는 대기압 하 -30℃ 내지 50℃의 온도 범위 내에서 일어난다.

비활성 용매의 예로는 테트라히드로푸란, 메틸렌 클로라이드, 피리딘, 디옥산, 클로로포름, 디에틸 에테르, tert-부틸 메틸 에테르, 에틸 아세테이트 또는 디메틸포름아미드가 있으며, 메틸렌 클로라이드 또는 디메틸 포름아미드가 바람직하다.

염기의 예로는 트리에틸아민, 트리이소프로필에틸아민 또는 N-메틸모르폴린이 있으며, 트리이소프로필에틸아민이 바람직하다.

X가 OH를 나타내는 경우, 반응은 일반적으로 비활성 용매 중 탈수제 존재 하에, 경우에 따라 염기 존재 하에, 바람직하게는 대기압 하 -30℃ 내지 50℃의 온도 범위 내에서 일어난다.

비활성 용매의 예로는 할로탄화수소, 예컨대 디클로로메탄 또는 트리클로로메탄, 탄화수소, 예컨대 벤젠, 니트로메탄, 디옥산, 디메틸포름아미드 또는 아세토니트릴이 있다. 용매의 혼합물을 사용하는 것도 또한 가능하다. 특히 바람직한 용매는 디클로로메탄 및 디메틸포름아미드이다.

적합한 탈수제의 예로는 카르보디이미드, 예컨대 N,N'-디에틸-, N,N-디프로필-, N,N-디이소프로필-, N,N-디시클로헥실카르보디이미드, N-(3-디메틸아미노이소프로필)-N'-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC), N-시클로헥실-카르보디이미드-N'-프로필옥시메틸-폴리스티렌 (PS-카르보디이미드) 또는 카르보닐 화합물, 예컨대 카르보닐디이미다졸 또는 1,2-옥사졸륨 화합물, 예컨대 2-에틸-5-페닐-1,2- 옥사졸륨 3-술페이트 또는 2-tert-부틸-5-메틸-이소옥사졸륨 퍼클로레이트 또는 아실아미노 화합물, 예컨대 2-에톡시-1-에톡시카르보닐-1,2-디히드로퀴놀린 또는 프로판포스폰산 무수물 또는 이소부틸 클로로포르메이트 또는 비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스포릴 클로라이드 또는 벤조트리아질옥시트리(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 또는 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU), 2-(2-옥소-1-(2-H)-피리딜)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TPTU) 또는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 또는 1-히드록시벤조트리아졸 (HOBt) 또는 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (BOP) 또는 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(피롤리디노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBOP) 또는 N-히드록시숙신이미드 또는 염기와 그들의 혼합물이 있다.

염기의 예로는 알칼리 금속 탄산염, 예컨대 탄산 또는 중탄산 나트륨, 또는 탄산 또는 중탄산 칼륨 또는 유기 염기, 예컨대 트리알킬아민 (예, 트리에틸아민), N-메틸모르폴린, 4-메틸모르폴린, N-메틸피페리딘, 4-디메틸아미노피리딘 또는 디이소프로필에틸아민이 있다.

상기 반응은 바람직하게는 4-메틸모르폴린의 존재 하에 HATU를 사용하여 수행된다.

화학식 (II)의 화합물은 경우에 따라 보호기를 보유하며, 이러한 경우 화학식 (II)의 화합물의 분자내 고리화 후에 당업자에게 공지된 방법에 의한 보호기의 제거가 수행된다.

본원에서 사용되는 "적합한 보호기"는 당업자에게 공지되어 있는 모든 보호기를 포함하며, 특정 관능기를 차폐하는데 사용할 수 있으며, 이후에 탈보호되어야 하는 분자 내 추가의 변경을 일으키지 않고 다시 제거될 수 있다.

예를 들어, 1급 또는 2급 히드록시 기는 절단가능한 에테르로서, 특히 메톡시메틸, 벤질옥시메틸, p-메톡시벤질옥시메틸, 벤질, tert-부틸, 테트라히드로피라닐, 알릴, p-클로로페닐, p-니트로페닐 또는 트리페닐메틸 에테르로서 보호될 수 있다. 실릴 에테르, 예를 들어 트리메틸실릴 (TMS), tert-부틸디메틸실릴 (TBDMS), 트리이소프로필실릴 (TIPS), tert-부틸디페닐실릴 (TBDPS) 또는 트리페닐실릴 에테르는 히드록시 기 보호를 위한 추가의 가능성을 나타낸다. 또한, 히드록시 기는 에스테르 기, 예를 들어 아세틸, 벤조일, 프로피오닐, 클로로아세틸, 트리클로로아세틸, 트리플루오로아세틸, 또는 크로틸 에스테르에 의해 보호될 수 있다. 이들 외에도, 카르보네이트, 예컨대 메틸 카르보네이트, 알릴 카르보네이트, 벤질 카르보네이트가 또한 알콜 보호에 적합하다. 또한, 알콜에 대한 보호기로서 황산 또는 술폰산의 에스테르, 예컨대 술페이트, 알릴술포네이트, p-톨루엔술포네이트 (토실레이트) 또는 메틸술포네이트를 이용하는 것이 가능하다.

히드록시 기를 위한 바람직한 보호기는 tert-부틸 에테르 또는 실릴 에테르, 특히 tert-부틸디메틸실릴 에테르이다.

구아니디노 기에 적합한 보호기는 원칙적으로는 히드록시 기에 대한 것과 동일하며, 이 경우 (2,2,5,7,8-펜타메틸-3,4-디히드로-2H-크로멘-6-일)술포닐 기 (PMC 기)가 바람직하다.

카르복시 기는 그들의 알킬, 실릴, 아릴알킬 또는 아릴에스테르 형태로, 예컨대 메틸, 에틸, tert-부틸, 트리메틸실릴, tert-부틸디메틸실릴, 벤질, 피콜릴, 트리클로로에틸 또는 트리메틸실릴 에스테르로서 보호될 수 있다. 카르복시 기는 또한 다양한 아미드, 아닐리드 또는 히드라지드 형태, 예를 들어 N,N-디메틸아미드, 피롤리디닐아미드, 피페리디닐아미드, o-니트로아닐리드, N-7-니트로인돌릴아미드 또는 N-페닐히드라지드로서 보호될 수 있다. 이들 외에도, 그들은 또한 오르토에스테르로서, 예컨대 트리메틸 오르토에스테르로서 보호될 수 있다. 카르복실산은 바람직하게는 그들의 에스테르 형태로, 특히 메틸 또는 트리메틸실릴에틸 에스테르로서 보호된다.

아미노 기 보호에 특히 적합한 기는 절단가능한 카르바메이트를 제공하는 기, 예를 들어 메톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐 (Boc), 벤질옥시카르보닐 (CBz 또는 Z), 알릴옥시카르보닐 (alloc), 9-플루오로에닐메톡시카르보닐 (Fmoc), 2-트리메틸실릴에틸카르보닐, 1-아다만틸카르보닐, m-니트로페닐 기이다. 또한, 아미노 기는 추가로 용이하게 절단가능한 아미드 또는 이미드의 형태, 예를 들어 포름아미드, 클로로아세트아미드, 트리클로로아세트아미드, 트리플루오로아세트아미드, 벤조일아미드, o-니트로페닐아세트아미드, 프탈이미드, 테트라클로로프탈이미드 또는 니트로프탈이미드로서 보호될 수 있다. 아미노 기 보호를 위한 추가의 가능성은 특정 알킬 기, 예컨대 상기 tert-부틸 기, 상기 메틸 기, 상기 트리페닐메틸 기, 상기 페로세닐메틸 기 또는 상기 알릴 기로 또는 아릴 기, 예컨대 상기 2,4-디니트로페닐 기로 절단가능한 아민을 형성하는 것이다.

카르바메이트, 그 중에서도 특히 tert-부톡시카르보닐 (Boc), 벤질옥시카르보닐 (CBz 또는 Z) 또는 9-플루오로에닐메톡시카르보닐 기 (Fmoc)가 아미노 기 보호를 위해 바람직하게 사용된다.

본원에 제시되는 보호기는 단지 예로서의 역할을 하며, 모든 가능성의 남김없는 기재를 나타내는 것은 아니다. 본 영역의 보다 광범위한 해설은 그 중에서도 문헌[T. W. Greene, P. G. M. Wuts Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd Edition, John Wiley & Sons Inc. 1999]에서 확인할 수 있다.

본원에서 사용되는 PG로 표시되는 기는 한 분자 내에서 동일하거나 상이한 적합한 보호기 또는 오직 H 또는 H와 동일하거나 상이한 보호기의 조합일 수 있다.

화학식 (II)의 화합물은 바람직하게는 하기 화학식 (IIa)의 화합물이다.

(식 중, X 및 R¹은 상기 정의된 바와 같으며,

R⁶은 이소프로필메틸, tert-부틸메틸, 2,2-디메틸부트-1-일, 2-에틸-2-메틸부트-1-일, 2,2-디에틸부트-1-일, 2,2-디메틸펜트-1-일, 3-피리딜메틸, 4-트리플루오로메틸-3-피리딜메틸, 벤질 또는 트리메틸실릴메틸이고,

R⁷은 이소프로필메틸, tert-부틸메틸, 2,2-디메틸부트-1-일, 2-에틸-2-메틸부트-1-일, 2,2-디에틸부트-1-일, 2,2-디메틸펜트-1-일, 트리메틸실릴메틸 또는 벤질이고,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)

R⁶은 바람직하게는 이소프로필메틸, tert-부틸메틸 또는 3-피리딜메틸이고, 특히 바람직하게는 R⁶은 이소프로필메틸이다.

R⁷은 바람직하게는 이소프로필메틸, tert-부틸메틸 또는 트리메틸실릴메틸이고, 특히 바람직하게는 R⁷은 이소프로필메틸이다.

X는 바람직하게는 OH이다.

R¹은 바람직하게는 CH₃이다.

본 발명의 추가의 실시태양에서, 화학식 (II)의 화합물은 하기 화학식 (III) 화합물과 하기 화학식 (IV)의 화합물의 커플링, 및 경우에 따라, 중간체의 부분적 또는 완전한 탈보호, 및 경우에 따라 3-히드록시페닐알라닌의 카르복시 기의 화학식 -C(=O)X (여기의 X는 상기 정의된 바와 같음)의 기로의 전환에 의해 제조한다.

(상기 식 (III), (IV)에서, R¹ 내지 R⁵는 상기 정의된 바와 같고,

Y는 OH, 활성 에스테르, 슈도할로겐 또는 할로겐이고,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)

화학식 (III)의 화합물은 특히 하기 화학식 (IIIa)의 화합물이다.

(식 중, R⁶ 및 R⁷은 상기 정의된 바와 같으며,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)

커플링은 분자내 고리화에서 전술된 조건과 동일하거나 상이한 조건 하에서 수행될 수 있다. 이에 의한 커플링은 하기 도시되는 친핵성 공격에 의해 일어난다.

3-히드록시-페닐알라닌의 카르복시 기의 화학식 -C(=O)X 기로의 전환은 당업자에게 공지된 방법에 의해 수행할 수 있다.

중간체 내 존재하는 보호기는 목적 생성물의 그것과 전적으로, 부분적으로 상응하거나 전혀 상응하지 않을 수 있다. 이들은 당업자에게 공지된 방법에 의해 제거, 치환되거나 경우에 따라 결합될 수 있다.

본 발명의 추가의 실시태양에서, 화학식 (III)의 화합물은 하기 화학식 (V)의 화합물의 하기 화학식 (VI)의 화합물과의 커플링, 및 경우에 따라, 중간체의 부분적 또는 완전한 탈보호에 의해 제조된다.

(상기 식 (V), (VI)에서, R² 내지 R⁵는 전술된 바와 같으며,

Z는 OH, 활성 에스테르, 슈도할로겐 또는 할로겐이고,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)

이에 의한 화합물 (V)는 특히 하기 화학식 (Va)의 화합물이다.

(식 중, R⁶ 및 R⁷은 상기 정의된 바와 같고,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)

커플링은 전술된 커플링 또는 분자내 고리화에서 기술된 조건과 동일하거나 상이한 조건 하에서 일어날 수 있다. 이에 의한 커플링은 하기 도시하는 친핵성 공격에 의해 일어난다.

중간체 내 존재하는 보호기는 목적 생성물의 그것과 부분적으로, 완전히 상응하거나 전혀 상응하지 않을 수 있다. 이들은 당업자에게 공지된 방법에 의해 결합, 제거되거나 경우에 따라 치환될 수 있다.

또한, 본 발명은 하기 화학식 (III)의 화합물, 특히 하기 화학식 (IIIa)의 화합물 및 특히 하기 화학식 (IIIb)의 화합물에 관한 것이다.

[화학식 III]

(식 중, R² 내지 R⁵는 상기 정의된 바와 같으며,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)

[화학식 IIIa]

(식 중, R⁶ 및 R⁷은 상기 정의된 바와 같으며,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)

또한, 본 발명은 화학식 (V)의 화합물의 화학식 (VI)의 화합물과의 커플링 및, 경우에 따라, 중간체의 부분적 또는 완전한 탈보호에 의한 화학식 (III)의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.

추가로, 본 발명은 하기 화학식 (VI)의 화합물, 특히 하기 화학식 (VIa)의 화합물에 관한 것이다.

[화학식 VI]

(식 중, Z는 OH, 활성 에스테르, 슈도할로겐 또는 할로겐이며,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)

또한, 하기 화학식 (VII)의 화합물의 하기 화학식 (VIII)의 화합물과의 커플링 및, 경우에 따라, 중간체의 완전한 또는 부분적인 탈보호에 의한 화학식 (VI)의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.

(상기 식 (VII) 및 (VIII)에서, PG는 H 또는 적합한 보호기임)

이에 의한 화학식 (VII) 및 (VIII) 화합물은 특히 각각 하기 화학식 (VIIa) 및 (VIIIa) 화합물이다.

본 발명의 제조 방법 및 본 발명 화합물의 제조예는 리소박틴의 합성법에 관한 하기 합성 반응식에 의해 보다 상세하게 설명된다.

본 방법은 조합되어 화학식 (II)의 화합물을 제공하는 다양한 단편들의 기본 단위 구성에 기초한다. 그 후, 화학식 (II)의 화합물은 분자내 고리화되고, 경우에 따라, 탈보호되어 목적 최종 생성물을 수득하게 된다.

이와 관련하여 놀랍게도 빌딩 블록 및 이들이 커플링되는 순서의 선택에 의해 영향받는, 이미 사슬 중 에스테르 결합을 가지는 화학식 (II)의 개환된 분자가 제조될 수 있다는 것이 확인되었다. 또한, 이러한 개환 화합물은 에스테르 결합의 존재 중 고리화되어 목적하는 시클릭 뎁시펩티드를 제공할 수 있다는 것이 확인되었다.

합성 반응식 1에 따라, 단편 1이 (2S,3S)-2-아미노-3-히드록시-4-메톡시-4- 옥소부티르산 및 Boc-글리신 N-히드록시숙신이미드 에스테르로부터 출발하여 합성되었다.

단편 2는 합성 반응식 2에 따라 3-히드록시페닐알라닌으로부터 출발하여 제조되었다.

단편 3은 합성 반응식 3에 따라 N ²-(벤질옥시카르보닐)-D-루이신 및 메틸 L- 루이시네이트로부터 출발하여 합성 반응식　3에 따라 제조되었다. 임의의 R² 내지 R⁵ 라디칼이 있는 화학식 (I)의 화합물은 본 단계에서 2개의 루이신 유도체를 치환함으로써 제조될 수 있다.

단편 2 및 3은 합성 반응식 4에 따라 커플링된 후, 부분적으로 탈보호되고, 얻어지는 중간체는 N ²-(tert-부톡시카르보닐)-O³-tert-부틸-L-세린과 반응하여 추가의 탈보호 이후 부분적으로 탈보호된 단편　4가 얻어진다.

상기 방식으로 수득된 단편 4는 합성 반응식 5에 따라 단편 1과 커플링되어 부분적인 탈보호 후 단편 5가 얻어진다.

단편 5는 그후 합성 반응식　6에 따라 단편 6과 커플링된다. 이러한 단편 6은 공지된 방법에 의해 제조될 수 있는 펜타펩티드이다. 리소박틴 대신에, 단편 6에서의 2 위치 루이신을 발린으로 치환함으로써 카타노신 A를 제조하는 것이 가능하다. 얻어지는 중간체의 탈보호는 화학식 (II)의 화합물로 표시되는 단편 7을 발 생시킨다. 합성 반응식 7에 따른 분자내 고리화 및 후속 탈보호는 목적하는 시클릭 뎁시펩티드, 이 경우에서는 리소박틴을 발생시킨다.

예

리소박틴의 신규 합성

약어

abs. 무수

aq. 수성

Boc N-tert-부톡시카르보닐

conc. 진한

DCC 디시클로헥실카르보디이미드

DIEA N,N-디이소프로필에틸아민

DMAP 4-디메틸아미노피리딘

DMF N,N-디메틸포름아미드

EDC 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드

EDTA 에틸렌디아민테트라아세트산

eq. 당량

fmoc 9-플루오레닐메톡시카르보닐

h 시간

HATU O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로-포스페이트

HOBT 1-히드록시-1H-벤조트리아졸 수화물

LHMDS 리튬 헥사메틸디실라지드

min 분

MTBE 메틸 tert-부틸 에테르

NMM N-메틸모르폴린

org. 유기

RT 실온

sat. 포화

TBAF 테트라부틸암모늄 플루오라이드

TBTU N-[(1H-1,2,3-벤조트리아졸-1-일옥시)-(디메틸아미노)메틸렌]-N-메틸메탄아미늄 테트라플루오로보레이트

TFA 트리플루오로아세트산

THF 테트라히드로푸란

TMG N,N,N,N-테트라메틸구아니딘

XPHOS 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필비페닐-2-일)포스핀

재료 및 방법

분석 방법 - HPLC/UV

방법　1

HPLC 기기 유형 : HP 1100 시리즈; UV DAD; 컬럼: 페노메넥스 시너지(Phemomenex Synergi) 2μ 히드로-RP 머큐리 20 mm x 4 mm; 용출액 A: 1 l의 물 + 0.5 ml의 50% 포름산, 용출액 B: 1 l의 아세토니트릴 + 0.5 ml의 50% 포름산; 구배: 0.0분 90%A → 2.5분 30%A → 3.0분 5%A → 4.5분 5%A; 유속: 0.0 분 1 ml/분, 2.5　분/3.0　분/4.5 분. 2　ml/분; 오븐: 50 ℃; UV 검출: 210 nm.

방법　2

기기: DAD 검출을 갖춘 HP 1100; 컬럼: 크로마실 100 RP-18, 60　mm x 2.1 mm, 3.5 ㎛; 용출액 A: 5 ml의 HClO₄(70%)/l의 H₂O, 용출액 B: ACN; 구배: 0분 2%B, 0.5분 2%B, 4.5분 90%B, 9분 90%B, 9.2분. 2%B, 10분 2%B; 유속: 0.75 ml/분; 컬럼 온도: 30 ℃; 검출: UV 210 nm.

방법　3

기기: DAD (G1315B)를 갖춘 애질런트(Agilent) 1100, 2원 펌프 (G1312A), 오토샘플러 (G1313A), 용매 탈기 장치 (G1379A) 및 컬럼 항온기 (G1316A); 컬럼: 애질런트 조르박스 이클립스 (Agilent Zorbax Eclipse) XDB-C8 4.6 x 150 x 5 mm; 컬럼 온도: 30 ℃; 용출액　A: 물 중 0.05% 70% 과염소산; 용출액　B: 아세토니트릴; 유속: 2.00　ml/분; 구배: 0-1분 10% B, 직선 구배(ramp), 4-5분 90% B, 직선 구배, 5.5분 10% B.

방법　4

HPLC 기기 유형: HP　1050 시리즈; UV DAD; 컬럼: 조르박스 300 mSB-C18 3.5μ, 4.6　mm x 150　mm; 용출액 A: 1 l의 물 + 0.1% TFA, 용출액 B: 물 중 60% 아세토니트릴과 0.1% TFA; 구배: 0.0 분 10%B, 직선 구배, 18.0　분 80%B, 20.0　분 100%B, 25.0　분 100%B. 유속: 1　ml/분; 오븐: 40 ℃; UV 검출: 210　nm.

방법　5

HPLC 기기 유형: HP　1050 시리즈; UV DAD; 컬럼: 조르박스 300 mSB-C18 3.5μ, 4.6　mm x 150　mm; 용출액 A: 1 l의 물 + 0.1% TFA, 용출액 B: 물 중 60% 아세토니트릴과 0.1% TFA; 구배: 0.0 분 10%B, 2.00 분 10% B, 직선 구배, 50.0　분 80%B, 52.0　분 100%B, 55 분 100% B. 유속: 0.7　ml/분; 오븐: 40 ℃; UV 검출: 210　nm.

방법　6

DAD (G1315B)를 갖춘 애질런트 1100, 2원 펌프 (G1312A), 오토샘플러 (G1313A), 용매 탈기 장치 (G1379A) 및 컬럼 항온기 (G1316A); 컬럼: 페노메넥스 게미니(Phenomenex Gemini) 5 m C-18, 50 x 2 mm; 오븐 온도: 40℃; 용출액　A: 물 + 0.1% 포름산; 용출액　B: 아세토니트릴; 유속: 2.00　ml/분; 구배: 0-1　분 0% B, 직선 구배, 0-5　분 100% B, 5.50 분 100% B.

방법 7

다이셀 키랄팩 AD-H 5 ㎛ 250 mm x 2.0 mm, n-헵탄/에탄올 95+5, 유속: 0.2 ml/분, 220 nm에서 UV 검출.

분석 방법 - HPLC/MS, MALDI, HR-MS

방법　8

MS 기기 유형: 마이크로매스(Micromass) ZQ; HPLC 기기 유형: 워터스 앨리언스(Waters Alliance) 2795/HP　1100; 컬럼: 페노메넥스 시너지 2μ 히드로-RP 머큐리 20　mm x 4　mm; 용출액 A: 1 l의 물 + 0.5 ml의 50% 포름산, 용출액 B: 1 l의 아세토니트릴 + 0.5 ml의 50% 포름산; 구배: 0.0분 90%A → 2.5분 30%A → 3.0분 5%A → 4.5분 5%A; 유속: 0.0분 1　ml/분, 2.5분/3.0분/4.5분 2　ml/분; 오븐: 50 ℃; UV 검출: 210 nm.

방법 9

MS 기기 유형: 마이크로매스 ZQ; HPLC 기기 유형: 워터스 앨리언스 2795/HP　1100; 컬럼: 페노메넥스 게미니 3μ C-18 100 Å, 30　mm x 3　mm; 용출액 A: 1 l의 물 + 0.5 ml의 50% 포름산, 용출액 B: 1 l의 아세토니트릴 + 0.5 ml의 50% 포름산; 구배: 0.0분 90%A → 2.5분 30%A → 3.0분 5%A → 4.5분 5%A; 유속: 0.0분 1　ml/분, 2.5분/3.0분/4.5분 2　ml/분; 오븐: 50 ℃; UV 검출: 210 nm.

방법　10

UV 검출: 210 nm. MS 기기 유형: 마이크로매스 ZQ; HPLC 기기 유형: 워터스 앨리언스 2795; 컬럼: 페노메넥스 시너지 2μ 히드로-RP 머큐리 20　mm x 4　mm; 용출액 A: 1 l의 물 + 0.5　ml의 50%의 포름산, 용출액 B: 1 l의 아세토니트릴 + 0.5　ml의 50% 포름산; 구배: 0.0분 90%A → 2.5분 30%A → 3.0분 5%A → 4.5분 5%A; 유속: 0.0분 1 ml/분, 2.5분/3.0분/4.5분 2 ml/분; 오븐: 50 ℃; UV 검출: 210 nm.

방법　11

HPLC 애질런트 시리즈 1100을 갖춘 마이크로매스 플랫폼(Platform) LCZ; 컬럼: 써모 하이퍼실 골드(Thermo Hypersil GOLD) 3μ 20　mm x 4　mm; 용출액 A: 1 l의 물　+　0.5 ml의 50% 포름산, 용출액 B: 1 l의 아세토니트릴　+　0.5 ml의 50% 포름산; 구배: 0.0분 100%A → 0.2분 100%A → 2.9분 30%A → 3.1분 10%A → 5.5분 10%A; 오븐: 50 ℃; 유속: 0.8　ml/분; UV 검출: 210 nm.

방법 12

기기: HPLC 애질런트 시리즈 1100을 갖춘 마이크로매스 플랫폼 LCZ; 컬럼: 써모 하이퓨리티 아쿠아스타(Thermo HyPURITY Aquastar) 3μ 50　mm x 2.1　mm; 용출액 A: 1 l의 물　+　0.5 ml의 50% 포름산, 용출액 B: 1 l의 아세토니트릴　+　0.5 ml의 50% 포름산; 구배: 0.0분 100%A → 0.2분 100%A → 2.9분 30%A → 3.1분 10%A → 5.5분 10%A; 오븐: 50 ℃; 유속: 0.8　ml/분; UV 검출: 210 nm.

방법 13

기기: 마이크로매스 LCT; ESI 양성/음성; DAD 및 오토샘플러를 갖춘 HP　1100; 오븐 40 ℃; 컬럼: 워터스 시메트리(Waters Symmetry) C-18, 50 x 2.1　mm, 3.5　㎛; 용출액 A: 0.1% 포름산/아세토니트릴, 용출액　B: 0.1% 포름산/물; 유속: 0.5　ml/분; 구배: 0-1 분 0% A, 1-6 분 90% A, 6-8 분 100% A, 8-10 분 100% A, 10-15 0% A.

방법 14

TOF-HR-MS-ESI+ 스펙트럼을 마이크로매스 LCT 기기 (모세관 전압: 3.2　KV, 콘 전압: 42　V, 공급원 온도: 120 ℃, 탈용매 온도: 280 ℃)로 기록하였다. 이 목적을 위해, 주사기 펌프 (하버드 어패러투스(Harvard Apparatus))를 샘플 운반을 위해 사용하였다. 루이신-엔세팔린 (Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu)을 기준으로 사용하였다.

정제용 분리 방법 - HPLC, 겔 크로마토그래피

방법 15

기기: 길슨 아비메드(Gilson Abimed) HPLC; 2원 펌프 시스템; 컬럼: 누클레오두르(Nucleodur)C₁₈그래비티(Gravity), 매커리-나겔(Macherey-Nagel), 5　㎛; 250 x 21 mm; 용출액 A: 물/0.05%-0.1% TFA, 용출액 B: 아세토니트릴; 구배: 0-8분 5%B, 8-40분 5-60%B, 40-60분 60%B, 60-75분 60-100%B, 75-80분 100%B, 그 후 크로마토그래피 컬럼을 재생; 유속: 7-15　ml/분; UV 검출기 210 nm.

방법 16

기기: 길슨 아비메드 HPLC; 2원 펌프 시스템; 컬럼: 크로마실-100A C₁₈, 5　㎛; 250 x 30　mm; 용출액 A: 물/0.05-0.5% TFA, 용출액 B: 아세토니트릴; 구배: 0-5　분 5%B, 5.01-10　분 10%B, 10.01-20　분 40%B, 20.01-27　분 50%B, 27.01-40　분 60%B, 40.01-45　분 90%B, 45.01-60　분 100%B; 유속: 15-60　ml/분; UV 검출기 210 nm.

방법 17

길슨 아비메드 HPLC; UV 검출기 210 nm; 컬럼: 크로마실 RP-185　㎛, 100 Å, 250 x 20　mm; 용출액　A: 물 + 0.05% TFA, 용출액　B: 아세토니트릴 + 0.05% TFA: 유속: 10　ml/분; 0-3분 5% B, 직선 구배, 35분 90% B.

방법 18

길슨 아비메드 HPLC; UV 검출기 210 nm; 컬럼: 그롬실(Gromsil) ODS-4HE 10　㎛, 250 x 40　mm; 용출액　A: 물 + 0.05% TFA, 용출액　B: 아세토니트릴 + 0.05% TFA: 유속: 20　ml/분; 0-3분 10% B, 직선 구배, 30-35분 90% B, 35-40분 90% B.

방법 19

길슨 아비메드 HPLC; UV 검출기 210 nm; 컬럼: 워터스 시메트리-프렙(Waters Symmetry-Prep)^TMC-18, 7 ㎛, 300 x 19　mm; 용출액　A: 물 + 0.05% TFA, 용출액　B: 아세토니트릴 + 0.05% TFA: 유속: 10　ml/분; 0-3　분 10% B, 직선 구배, 30-38　분 90% B, 38-45　분 10% B.

방법 20

겔 크로마토그래피를 세파덱스(Sephadex)　LH-20 상에서 압력 없이 수행하였다. 분획물을 UV 활성 (254　nm에 대한 UV 검출기, 크나우어(Knauer))에 따라 취하였다 (ISCO 폭시(Foxy)　200 분획물 수집기(Fraction Collector)). 컬럼 치수: 32　x　7　cm (1000-100　㎛ol 크기); 30　x　4　cm (100-10　㎛ol 크기); 25　x　2　cm (10-1　㎛ol 크기). 메탄올을 용출액으로 사용하였다.

방법 21

길슨 아비메드 HPLC; UV 검출기 210 nm; 컬럼: 바이오티지(Biotage) 플래쉬40 RP-18 또는 호환가능한 모듈의 배리안 메타플래쉬 C18 40M, 35　㎛, 150 x 40　mm; 용출액　A: 물 + 0.05% TFA, 용출액　B: 아세토니트릴 + 0.05% TFA; 유속: 40　ml/분; 0-3분 10% B, 직선 구배, 30-38분 90% B, 38-45분 10% B.

일반적인 실시 방법

공정 1

출발 물질을 30% TFA (디클로로메탄 중 용액)에 녹이고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 그 후, 용매를 진공 상태에서, 배쓰 온도가 30 ℃를 초과하지 않도록 하면서 증류시켰다. 그 후, 생성물을 오일 펌프 진공하에서 일정한 중량이 되도록 건조시켰다.

A. 화합물의 제조

예시적인 화합물 1A: N ² -(tert-부톡시카르보닐)-L-알로트레오닌

L-알로-트레오닌 (3.15 g, 26.44 mmol)을 물-디옥산 (1+2, 75　ml)에 용해시키고, 디-tert-부틸 디카르보네이트 (6.35 g, 29.09 mmol, 1.1 당량) 및 트리에틸아민 (4.79 ml, 34.38 mmol, 1.3 당량)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 용매를 진공 중 제거하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트에 녹이고 1　M 시트르산으로 추출하였다. 생성물이 더 이상 그 안에서 검출되지 않을 때까지, 수상을 에틸 아세테이트로 수회 추출하였다 (HPLC, 방법　3). 합쳐진 유기 추출물을 황산나트륨으로 건조시킨 후, 농축시키고, 오일 펌프 진공 하에서 일정 중량이 되도록 건조시켰다. 생성물을 추가의 정제 없이 추가로 반응시켰다. 수득 량: 6.5　g의 조 생성물.

예시적인 화합물 2A: 벤질 N ² -(tert-부톡시카르보닐)-L-알로트레오니네이트

본 방법을 다음의 문헌 [S. B. Cohen, R. Halcomb, J. Am. Chem. Soc 2004, 124, 2534-2543. W. Jiang, J. Wanner, R. J. Lee, P.-Y. Bounaud, D. L. Boger, J. Am. Chem. Soc 2003, 125, 1877-1887]과 유사하게 수행하였다.

예시적인 화합물 1A (6.8 g의 조 생성물, 26.44　mmol)을 메탄올 (177 ml) 중 녹이고, 탄산 세슘 (5.56 g, 17.06 mmol, 0.63 당량)를 첨가하고 용해가 완전히 될 때까지 혼합물을 교반하였다. 용매를 증류에 의해 제거한 후, DMF (42 ml) 및 다음으로 벤질 브로마이드 (4.06 ml, 34.12 mmol, 1.26 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 16시간 동안 교반하여 방치한 후, DMF의 대부분을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 물에 녹이고 디클로로메탄 3회분으로 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 진공 농축시켰다. 조 생성물을 바이오티지 RP18-플 래쉬 (물-아세토니트릴 구배: 0-5　분 10% ACN, 3-30 분 10-90% ACN, 30-35 분 90% ACN; 유속: 20　ml/분)에서 정제하였다. 생성물 함유 분획물을 취합하고 동결건조시켰다. 수득량: 5.00 g (16.16 mmol,이론치의 52%)의 표제 화합물.

예시적인 화합물 3A: 벤질 L-알로트레오니네이트 트리플루오로아세테이트

530 mg의 예시적인 화합물 2A를 공정 1에 따라 8.0 ml의 TFA 용액과 반응시켰다. 조 생성물 (589 mg, 정량)을 추가의 정제없이 추가로 반응시켰다.

예시적인 화합물 4A: 벤질 [N ² -(tert-부톡시카르보닐)-L-이소루이실]-L-알로트레오니네이트

예시적인 화합물 3A (2.30 g, 7.12 mmol) 및 N-(tert-부톡시카르보닐)-L-이소루이신 (2.14 g, 9.25 mmol, 1.3 당량)을 DMF (21.0 ml)에 용해시켰다. 4-메틸모르폴린 (1.3 ml, 12.02 mmol, 1.7 당량) 및 HATU (3.52 g, 9.25 mmol, 1.3 당량)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 완료된 혼합물을 먼저 방법 20 및 이어서 방법 21에 따라 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획물을 취합하고 동결건조시켰다. 엷은 베이지색 무정형 고체로서 수득량: 1.75 g (4.14 mmol, 이론치의 58%).

예시적인 화합물 5A: 벤질 L-이소루이실-L-알로트레오니네이트 트리플루오로아세테이트

예시적인 화합물 4A (224 mg, 0.53 mmol)를 공정 1에 따라 8.0 ml의 TFA 용액으로 처리하였다. 253　mg의 실시예 5A 조 생성물 (약 91% 순도, 0.53　mmol, 정량)를 수득하고 추가 정제없이 반응시켰다.

예시적인 화합물 6A: 벤질 [N ² -(tert-부톡시카르보닐)-D-아르기닐]-L-이소루이실-L-알로트레오니네이트

예시적인 화합물 5A (253 mg, 91% 순도, 0.53 mmol) 및 N ² -(tert-부톡시카르 보닐)-D-아르기닌 (145 mg, 0.53 mmol, 1 당량)을 DMF (3.0 ml)에 용해시켰다. 4-메틸모르폴린 (76 ㎕, 0.70 mmol, 1.3 당량) 및 HATU (221 mg, 0.58 mmol, 1.1 당량)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 완료된 혼합물 HPLC 컬럼 상에 넣고 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (방법 18). 생성물 함유 분획물을 취합하고 동결건조시켰다. 표제 화합물의 수득량: 364 mg (0.53 mmol, 이론치의 99%).

예시적인 화합물 7A: 벤질 D-아르기닐-L-이소루이실-L-알로트레오니네이트 비스트리플루오로아세테이트

예시적인 화합물 6A (237 mg, 0.34 mmol)를 공정 1에 따라 2.0 ml의 TFA 용액으로 처리하였다. 255　mg의 예시적인 화합물 7A의 조 생성물 (94% 순도, 0.34 　mmol, 정량)을 수득하고 추가 정제없이 반응시켰다.

예시적인 화합물 8A: 벤질 [N ² -(tert-부톡시카르보닐)-L-루이실]-D-아르기닐-L-이소루이실-L-알로트레오니네이트 트리플루오로아세테이트

예시적인 화합물 7A (240 mg, 0.34 mmol) 및 N-(tert-부톡시카르보닐)-L-루이신 (79　mg, 0.34　mmol, 1　당량)을 디클로로메탄-DMF (5+1, 6 ml)에 용해시켰다. 디이소프로필에틸아민 (296 ㎕, 1.70 mmol, 5 당량) 및 HATU (194 mg, 0.51 mmol, 1.5 당량)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 완료된 혼합물을 겔 크로마토그래피 컬럼 상에 주입한 후 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (방법　20, 용출액은 메탄올). 생성물 함유 분획물을 취합하고 농축하였다. 표제 화합물의 수득량: 146 mg (0.18 mmol, 이론치의 53%).

예시적인 화합물 9A: 벤질 L-루이실-D-아르기닐-L-이소루이실-L-알로트레오니네이트 비스트리플루오로아세테이트

예시적인 화합물 8A (220 mg, 0.27 mmol)를 공정 1에 따라 2.0　ml의 TFA 용액으로 처리하였다. 223　mg의 실시예 9A의 조 생성물 (0.27 mmol, 정량)을 수득하고 추가 정제없이 반응시켰다.

예시적인 화합물 10A: 벤질 [(3R)-N ² -(tert-부톡시카르보닐)-3-히드록시-L-루이실]-L-루이실-D-아르기닐-L-이소루이실-L-알로트레오니네이트 트리플루오로아세테이트

예시적인 화합물 9A (223 mg, 0.27 mmol) 및 N-(tert-부톡시카르보닐)-(3R)-3-히드록시-L-루이신 (89　mg, 0.33　mmol, 1.22 당량)을 DMF (6　ml)에 용해시키고, 용액을 -20℃로 냉각시켰다. 4-메틸모르폴린 (150 ㎕, 1.36 mmol, 5 당량) 및 HATU (165 mg, 0.44 mmol, 1.6 당량)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 완료된 혼합물을 겔 크로마토그래피 컬럼에 주입한 후, 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (방법　20, 용출액은 메탄올). 생성물 함유 분획물을 취합 하여 농축시켰다. 표제 화합물의 수득량: 188 mg (0.20 mmol, 이론치의 74%).

예시적인 화합물 11A: [(3R)-N ²-(tert-부톡시카르보닐)-3-히드록시-L-루이실]-L-루이실-D-아르기닐-L-이소루이실-L-알로트레오닌 트리플루오로아세테이트

예시적인 화합물 10A (100 mg, 0.11 mmol)를 빙초산 (4.3 ml)에 용해시키고, 10% 활성탄 상 팔라듐 (22 mg)을 첨가하고, 혼합물을 대기압 하 실온에서 2시간 동안 수소화하였다. 촉매를 여과 제거하고 여액을 동결건조시켰다. 조 생성물을 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (방법　17). 생성물 함유 분획물을 취합하고 동결건조시켰다. 58　mg (60 μmol, 이론치의 55%)의 표제 화합물을 수득하였다.

예시적인 화합물 12A: [N ² -(tert-부톡시카르보닐)-글리실]-(3S)-3-히드록시-O ⁴ -메틸-L-아스파르트산

(3S)-3-히드록시아스파르트산을 문헌[G. Cardillo, L. Gentilucci, A. Tolomelli, C. Tomasini, Synlett 1999, 1727-1730]의 방법에 따라 제조하고, 밀폐된 반응기 내에서 마이크로파 조사를 이용하여 문헌[P. G. Mattingly, M. J. Miller, J. Org. Chem. 1983, 48, 3556-3559]과 유사하게 (2S,3S)-2-아미노-3-히드록시-4-메톡시-4-옥소부티르산 히드로클로라이드로 전환하였다.

(2S,3S)-2-아미노-3-히드록시-4-메톡시-4-옥소부티르산 히드로클로라이드 (447 mg, 2.24 mmol)를 DMF (9 ml)에 용해시켰다. 용액을 0℃로 냉각시키고, Boc-글리신 N-히드록시숙신이미드 에스테르 (763 mg, 2.91 mmol, 1.3　당량), DMAP (14　mg, 0.11　mmol, 0.05 당량) 및 최종적으로 DIEA (1170 ㎕, 6.72 mmol, 3　당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 서서히 가온시킨 후, 추가로 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 빙초산으로 산성화시키고, 아세토니트릴과 혼합하고, 세파덱 스(Sephadex) LH 20 상에서 크로마토그래피 분석하였다 (방법　20). 생성물 함유 분획물을 취합하여, 농축시키고 다시 크로마토그래피 분석하였다 (방법 21). 생성물 함유 분획물을 취합하고 동결건조시켰다. 얻어진 생성물 (761 mg, 정량)을 추가 정제없이 추가로 반응시켰다. 분석 목적으로, 순수한 샘플을 HPLC에 의해 수득하였다 (방법 19).

예시적인 화합물 13A: [N ² -(tert-부톡시카르보닐)-글리실]-(3S)-3-히드록시-L-아스파라긴

예시적인 화합물 12A (353 mg, 1.10 mmol)을 25% 암모니아 수용액 (1.70 ml)에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 약 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료되자 마자 (HPLC에 의한 검출, 방법　3), 혼합물을 오일 펌프 진공 하에서 건조될 때까지 농축시키고, 잔류물을 HPLC에 의해 정제하였다 (방법　17). 생성물 함유 분획물을 취합하여 동결건조시켰다. 무색 고체로서 표제 화합물의 수득량: 172 mg (이론치의 51%).

예시적인 화합물 14A: (3R)-3-히드록시페닐알라닌

본 예시적인 화합물은 벨로콘 (Belokon)법에 따라 합성하였다 (문헌[Y. N. Belokon, K. A. Kochetkov, N. S. Ikonnikov, T. V. Strelkova, S. R. Harutyunyan, A. S. Saghiyan, Tetrahedron: Asymmetry 2001, 12, 481-485] 참조).

예시적인 화합물 15A: N-부톡시카르보닐-(3R)-3-히드록시페닐알라닌

예시적인 화합물 14A (0.5 g, 2.76 mmol)를 1,4-디옥산-물 (2+1, 9 ml)에 녹이고, 트리에틸아민 (500　㎕, 3.59 mmol, 1.3 당량) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (660 mg, 3.04 mmol, 1.3 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 후, 1M 시트르산을 사용하여 종결시켰다. HPLC (방법　3)에 의해 수상에서 더 이상 생성물이 검출되지 않을 때까지, 혼합물을 에틸 아세테이트 수회분으로 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨으로 건조시키고 농축시켰다. 759　mg (2.70　mmol, 이론치의 98%)의 표제 화합물을 잔류물 중 무색 오일로서 수득하였다.

예시적인 화합물 16A: 메틸 N-부톡시카르보닐-(3R)-3-히드록시페닐알라니네이트

예시적인 화합물 16A (331 mg, 1.11 mmol)를 디클로로메탄-메탄올 (5+1, 12 ml) 중 용해시키고, 0℃로 냉각시키고, 트리메틸실릴디아조메탄 (THF 중 2M, 1.66　ml, 3.32 mmol, 3 당량)을 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 추가로 30분간 교반한 후, 탈색이 일어날 때까지 소량의 TFA를 적가하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물로서 정량적인 수득량의 황색 오일로서 표제 화합물 (345 mg, HPLC에 의해 95% 순도)이 남았다.

예시적인 화합물 17A: 메틸 (3R)-3-히드록시-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트

예시적인 화합물 16A (345 mg, 1.17 mmol)를 디클로로메탄 (10 ml) 중 30% TFA에 용해시키고, RT에서 15분간 교반하였다. 그 후, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 오일 펌프 진공에서 일정한 중량이 될때까지 건조시켰다. 황색 오일로서 수득량: 401 mg (정량), 추가 정제없이 다음 단계에 사용됨.

예시적인 화합물　18A: 메틸　[N ² -(벤질옥시카르보닐)-D-루이실]-L-루이시네이트

N ² -(벤질옥시카르보닐)-D-루이신 (바켐(BACHEM) Cat No zl3351.) (6.37　g, 24　mmol) 및 메틸 L-루이시네이트 (3.49　g, 24　mmol, 1　eq.)를 0℃에서 DMF (75　ml)에 용해시킨 후, NMM (5.28　ml, 48　mmol, 2　eq.) 및 HATU (13.69　g, 36　mmol, 1.5　eq.)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. MTBE 및 중탄산나트륨 포화 용액을 첨가하고, 추출을 행하였다. 수상을 MTBE 2회분으로 다시 추출한 후, 합한 유기상을 1M 시트르산 및 다시 중탄산나트륨 포화 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 진공 농축시켰다. 잔류물을 2부분으로 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (바이오티지 40M, 시클로헥산/에틸 아세테이트 3+1). 생성물 함유 분획물을 취합하여 동결건조시켰다. 표제 화합물의 수득량: 7.85 g (이론치의 80%).

예시적인 화합물　19A: [N ² -(벤질옥시카르보닐)-D-루이실]-L-루이신

예시적인 화합물 18A (7.70　g, 19.62　mmol)를 200 ml의 THF/물 (3+1)에 녹이고, 0℃로 냉각시키고, 수산화리튬 일수화물 (1.65　g, 39.24　mmol, 2　eq.)을 첨가하였다. HPLC 모니터링에 의해 (방법　3) 반응이 완료될 때까지 (약 45　분) 반응물을 0℃에서 방치하여 두었다. 대부분의 THF를 진공에서 증발시키고, 혼합물에 시트르산을 첨가하여 약 pH　4로 조정하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 2회분으로 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 생성물을 무색 무정형 물질로서 6.87　g (이론치의 89%)의 표제 화합물의 수득량으 로 수득하였다.

예시적인 화합물 20A: 메틸 [N ² -(벤질옥시카르보닐)-D-루이실]-L-루이실-(3R)-3-히드록시페닐알라니네이트

예시적인 화합물 19A (550　mg, 1.45　mmol) 및 예시적인 화합물 17A (449　mg, 1.45　mmol, 1　당량)를 0℃에서 DMF (12 ml) 중 용해시켰다. 4-메틸모르폴린 (320 ㎕, 2.9 mmol, 2 당량) 및 HATU (663 mg, 1.74 mmol, 1.2 당량)을 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 15분간 교반하였다. 이어서 4-메틸모르폴린 (160 ㎕, 1.45 mmol, 1　당량)을 추가로 첨가하고, 혼합물을 RT에서 16시간 동안 교반하였다. 혼 합물을 에틸 아세테이트와 진한 중탄산나트륨 사이에서 추출한 후, 유기상을 0.5M 시트르산 및 다시 진한 중탄산나트륨으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (방법　17). 생성물 함유 분획물을 취합하여 동결건조시켰다. 표제 화합물의 수득량: 626 mg (1.13 mmol, 이론치의 78%).

예시적인 화합물 21A: [N ² -(벤질옥시)카르보닐-D-루이실]-L-루이실-(3R)-3-히드록시페닐알라닌

예시적인 화합물 20A (650 mg, 1.17 mmol)을 아르곤 하에서 THF-물 (2+1, 30 ml) 중 용해시켰다. 0℃에서, 수산화리튬 수용액 (8.65 ml의 물 중 57　mg, 2.40　mmol, 4 당량)을 적가하였다. 반응을 진행하여 45 분후 완료하였다 (HPLC, 방법 　1). 빙초산을 첨가하고, 혼합물을 농축하였다. 조 생성물을 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (방법　16). 생성물 함유 분획물을 취합하여 동결건조시켰다. 표제 화합물의 수득량: 618 mg (이론치의 98%).

예시적인 화합물 22A: 2-(트리메틸실릴)에틸-N ² -[벤질옥시카르보닐-D-루이실]-L-루이실-(3R)-3-히드록시-L-페닐알라니네이트

예시적인 화합물 21A (150 mg, 277 μmol) 및 2-(트리메틸실릴)에탄올 (790 ㎕, 5.54 mmol, 20　당량) 및 약간의 4 Å 분자체를 건조 디클로로메탄 (3.0 ml)에 용해시키고, -30℃에서 약 1시간 동안 교반하였다. DCC (114 mg, 553 mol, 2　당량) 및 DMAP (34 mg, 277 μmol, 1 당량)을 첨가한 후, 혼합물을 밤새 교반하면서 실온에 천천히 도달하도록 하였다. 혼합물을 진공에서 농축한 후, 크로마토그래피 분석하였다 (방법　16). 생성물 함유 분획물을 취합하여 동결건조시켰다. 표제 화합물의 수득량: 108 mg (이론치의 60%).

예시적인 화합물 23A: 2-(트리메틸실릴)에틸 N ² -[(벤질옥시)카르보닐]-D-루이실-L-루이실-(3R)-3-{[N ² -(tert-부톡시카르보닐)-O ³ -(tert-부틸)-L-세릴]옥시}-L-페닐알라니네이트

예시적인 화합물 22A (104 mg, 162 μmol) 및 N ² -(tert-부톡시카르보닐)-O ³ -tert-부틸-L-세린 (47　mg, 178　μmol, 1.1 당량)을 건조 디클로로메탄 (2.0 ml) 중 용해시키고, 약간의 4 Å 분자체를 첨가하였다. DCC (70 mg, 340 mol, 2.1 당량) 및 DMAP (23 mg, 194　μmol, 1.2 당량)를 첨가한 후, 혼합물을 밤새 교반하면서 실온에 천천히 도달하도록 하였다. 혼합물을 진공에서 농축한 후, 크로마토그래피 분석하였다 (방법　16). 생성물 함유 분획물을 취합하여 동결건조시켰다. 표제 화합물의 수득량: 120 mg (이론치의 84%).

예시적인 화합물 24A: 2-(트리메틸실릴)에틸 N ² -[(벤질옥시)카르보닐]-D-루이실-L-루이실-(3R)-3-{[O ³ -(tert-부틸)-L-세릴]옥시}-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트

예시적인 화합물 23A (117 mg, 132 μmol)을 디클로로메탄 (3　ml)에 용해시켰다. 15% 디클로로메탄 중 TFA (20 ml)를 첨가하고, 10분 후, 혼합물을 건조될 때까지 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (방법　16). 생성물 함유 분획물을 취합하여 동결건조시켰다. 수득량: 100 mg (이론치의 83%).

예시적인 화합물 25A: 2-(트리메틸실릴)에틸 N ² -[(벤질옥시)카르보닐]-D-루이실-L-루이실-(3R)-3-{[N ² -(tert-부톡시카르보닐)글리실-(3S)-3-히드록시-L-아스파라기닐-O ³ -(tert-부틸)세릴]옥시}-L-페닐알라니네이트

예시적인 화합물 24A (96 mg, 107 μmol) 및 예시적인 화합물 13A (33 mg, 107 μmol, 1 당량)를 DMF (2.0 ml)에 용해시키고, -30℃로 냉각시켰다. HATU (122 mg, 320 μmol, 3 당량) 및 4-메틸모르폴린 (86 mg, 854 μmol, 8 당량)을 첨가하고, 혼합물을 약 4℃까지 천천히 가온시킨 후, 이 온도에서 12시간 동안 방치하여 두었다. 조 반응 용액을 크로마토그래피 분석하고 (방법　15), 생성물 함유 분획물을 취합하여 동결건조시켰다. 표제 화합물의 수득량: 92　mg (이론치의 89%).

예시적인 화합물 26A: 2-(트리메틸실릴)에틸 N ² -[(벤질옥시)카르보닐]-D-루이실-L-루이실-(3R)-3-{[글리실-(3S)-3-히드록시-L-아스파라기닐-O ³ -(tert-부틸)세릴]옥시}-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트

예시적인 화합물 25A (90　mg, 84 μmol)을 디클로로메탄 (3.0 ml)에 용해시켰다. 15% 디클로로메탄 중 TFA (20　ml)를 첨가하고, 10분 후, 혼합물을 건조될 때까지 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (방법　16). 생성물 함유 분획을 취합하여 동결건조시켰다. 표제 화합물의 수득량: 73 mg (이론치의 80%).

예시적인 화합물 27A: 2-(트리메틸실릴)에틸 N ² -[(벤질옥시)카르보닐]-D-루이실-L-루이실-(3R)-3-{[N ² -(tert-부톡시카르보닐)-(3R)-3-히드록시-L-루이실-L-루이실-D-아르기닐-L-이소루이실-L-알로트레오닐-글리실-(3S)-3-히드록시-L-아스파라기닐-O ³ -(tert-부틸)세릴]옥시}-L-페닐알라니네이트 트리플루오로아세테이트

예시적인 화합물 26A (10.0　mg, 9.2　μmol) 및 예시적인 화합물 11A (8.2 mg, 107 μmol, 1 당량)을 DMF (0.5 ml) 중 용해시키고 -30℃로 냉각시켰다. HATU (10.5　mg, 27.6　μmol, 3 당량) 및 4-메틸모르폴린 (7.5 mg, 74　μmol, 8 당량)을 첨가하고, 혼합물을 약 4℃까지 천천히 가온한 후, 이 온도에서 12시간 동안 방치하여 두었다. 조 반응 용액을 크로마토그래피 분석하고 (방법　15), 생성물 함유 분획물을 취합하여 동결건조시켰다. 표제 화합물의 수득량: 10.7 mg (이론치의 65%).

예시적인 화합물 28A: N ² -[(벤질옥시)카르보닐]-D-루이실-L-루이실-(3R)-3-{[N ² -(tert-부톡시카르보닐)-(3R)-3-히드록시-L-루이실-L-루이실-D-아르기닐-L-이소루이실-L-알로트레오닐-글리실-(3S)-3-히드록시-L-아스파라기닐-O ³ -(tert-부틸)세릴]옥시}-L-페닐알라닌 트리플루오로아세테이트

방법 A:

예시적인 화합물 27A (10 mg, 5.6 μmol)을 무수 THF (0.5 ml)에 용해시켰다. TBAF (17.4 mg, 67 μmol, 12　당량)을 첨가하고, 혼합물을 RT에서 1시간 동안 교반하였다. HPLC 분석 (방법　1)에 따라, 반응을 완료시키고, 반응을 빙초산 (6 ㎕)으로 종결시키고, 혼합물을 농축시키고 크로마토그래피 분석하였다 (방법　15). 생성물 함유 분획물을 취합하고 동결건조시켰다. 표제 화합물의 수득량: 2.5 mg (약 69% 순도, 이론치의 18%).

방법 B:

화합물 27A (25 mg, 13.9 μmol)을 무수 THF (2.5 ml)에 용해시켰다. 황산나트륨 (무수, 200　mg, 1.4　mmol)을 첨가하고, 현탁액을 30분간 교반하였다. TBAF 용액 (THF 중 1M 무수, 84　㎕, 6　당량)을 첨가하고, 혼합물을 RT에서 45분 간 교반하였다. HPLC 분석 (방법　1)에 따라, 반응을 완료하였다. 반응을 빙초산 (16　㎕)으로 종결시키고, 혼합물을 여과하고, 농축시키고 크로마토그래피 분석하였다 (방법 15). 표제 화합물의 수득량: 21　mg (>95% 순도, 이론치의 89%).

예시적인 화합물 29A: N ² -[(벤질옥시)카르보닐]-D-루이실-L-루이실-(3R)-3-{[(3R)-3-히드록시-L-루이실-L-루이실-D-아르기닐-L-이소루이실-L-알로트레오닐-글리실-(3S)-3-히드록시-L-아스파라기닐-세릴]옥시}-L-페닐알라닌 비스트리플루오로아세테이트

예시적인 화합물 28A (2.5 mg, 1.5 μmol)을 트리이소프로필실란 (12.5 ㎕) 및 물 (2.8　㎕)과 반응시키고, 0.5 ml의 TFA를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 최종적으로 용매를 진공에서 제거하였다. 잔류물을 크로마토그래피 분석하였다 (방법　15). 생성물 함유 분획물을 취합하여 동결건조시켰다. 표제 화합물의 수득량: 2 mg (이론치의 82%).

예시적인 화합물 30A: N-벤질옥시카르보닐-리소박틴 트리플루오로아세테이트

예시적인 화합물 29A (1.0 mg, 1.1 μmol)를 DMF (0.9 ml)에 용해시키고 -15 ℃로 냉각시켰다. HATU (1.2 mg, 3.3　μmol, 3 당량) 및 4-메틸모르폴린 (0.9　ml의 DMF 중 100 ㎕의 4-메틸모르폴린의 용액 11　ml, 8.7 μmol, 8 당량)을 첨가하고, 혼합물을 약 4℃로 천천히 가온시키 후, 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 조 반응 용액을 크로마토그래피 분석하고 (방법　15), 생성물 함유 분획물을 취합하여 동결건조시켰다. 표제 화합물의 수득량: 1.2 mg (이론치의 73%).

예시적인 화합물 31A: 리소박틴 비스트리플루오로아세테이트

예시적인 화합물 30A (1.0 mg, 0.66 μmol)을 디옥산 (0.5 ml) 중 용해시키고, 0.75 ml의 0.1% TFA 수용액 및 10% Pd/C의 스페츌라 팁(spatula tip)을 첨가하고, 혼합물을 대기압 하 RT에서 15분간 수소화하였다. 생성물을 여과하여 촉매를 제거하고, 농축시키고 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (방법 15). 표제 화합물의 수득량: 0.6 mg (이론치의 61%).

HPLC (방법　4): R_t = 16.31 분. 합성된 생성물 31A의 동일성은 출처가 분명한(authentic) 리소박틴 (WO 2004/099239 (A1)에 기재되어 있는 방법에 의해 수득)과의 동시 주입(coinjection)에 의해 확인되었다.

HPLC (방법　5) R_t = 38.10 분. 합성된 생성물 31A의 동일성은 출처가 분명한 리소박틴 (WO 2004/099239 (A1)에 기재되어 있는 방법에 의해 수득)과의 동시 주입에 의해 확인되었다.

B. 생리학적 활성의 평가

본 발명 화합물의 시험관 내 효과를 하기 분석으로 설명할 수 있다.

최소 억제 농도 (MIC)의 결정:

MIC는 NCCLS 가이드라인에 따른 액체 희석 시험으로 결정된다. 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus) 133, 엔테로코커스 패칼리스 (Enterococcus faecalis) 27159 및 스트렙토코커스 뉴모니애 (Streptococcus pneumoniae) G9a의 철야 배양물을 1:2 연속 희석액 중 전술한 시험 물질과 함께 인큐베이션하였다. MIC 측정을 ml 당 10⁶ 미생물 세포 수로 10% 우혈청을 넣은 BHI 브로쓰 (디프코(Difco), 이르빈(Irvine)/미국) 중에서 실험하는 에스. 뉴모니애 (S. pneumoniae)를 제외하고는, 이소센시테스트(Isosensitest) 배지 (디프코, 이르빈/미국) 중 ml 당 10⁵ 미생물 세포 수로 수행하였다. 배양물을 37℃에서 18-24시간 동안, 에스. 뉴모니애는 10% CO₂존재 하에서 인큐베이션하였다.

MIC는 가시적인 박테리아 성장이 더 이상 관찰되지 않는 때의 각각의 물질의 최저 농도로 정의된다. MIC 수치는 ㎍/ml로 기록하였다.

완전한 합성에 의해 제조된 리소박틴과 발효된 리소박틴간에 생리학적 활성에 있어서 뚜렷한 차이는 관찰되지 않았다.

Claims

하기 화학식　(II)의 화합물의 분자내 고리화 후 시클릭 중간체의 탈보호로 화학식 (I)의 시클릭 뎁시펩티드를 형성하는, 하기 화학식 (I)의 시클릭 뎁시펩티드 제조 방법.

[화학식 I]

[상기 식에서, R¹은 H 또는 CH₃이고,

R²는 수소, C₃-C₆-시클로알킬, C₅-C₆-시클로알케닐, C₃-C₆ 시클로알킬메틸, 5 내지 7원 헤테로시클릴메틸, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, 1-메틸프로프-1- 일, 2-메틸프로프-1-일, 2,2-디메틸프로프-1-일, 1,1-디메틸프로프-1-일, 1-에틸프로프-1-일, 1-에틸-1-메틸프로프-1-일, n-부틸, 2-메틸부트-1-일, 3-메틸부트-1-일, 1-에틸부트-1-일, tert-부틸, 4-메틸-펜트-1-일, n-헥실, 알케닐 또는 아릴이고,

(여기서 R²는 할로겐, 히드록시, 아미노, 시아노, 트리메틸실릴, 알킬, 알콕시, 벤질옥시, C₃-C₆-시클로알킬, 아릴, 5 내지 10원 헤테로아릴, 알킬아미노, 아릴아미노, 알킬카르보닐아미노, 아릴카르보닐아미노, 알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, 아릴카르보닐 및 벤질옥시카르보닐아미노로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있으며,

여기의 아릴 및 헤테로아릴은 다시 할로겐, 히드록시, 아미노, 시아노, 니트로, 알킬, 알콕시 및 페닐로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있음),

R³은 수소 또는 C₁-C₄-알킬이거나, 또는

R² 및 R³은 이들이 결합한 탄소 원자와 함께 C₃-C₆-시클로알킬 고리 또는 5 내지 7원 헤테로시클릴 고리를 형성하고, 여기의 시클로알킬 고리 및 헤테로시클릴 고리는 트리플루오로메틸, 알킬, 알콕시 및 알킬카르보닐로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있고,

R⁴는 알킬, C₃-C₆-시클로알킬, 5 내지 7원 헤테로시클릴, 아릴, 5 또는 6원 헤테로아릴, 알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, C₃-C₆-시클로알킬카르보닐, 5 내지 7원 헤테로시클릴카르보닐, 아릴카르보닐, 5 또는 6원 헤테로아릴카르보닐 또는 알킬아미노카르보닐이고,

(여기서 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시카르보닐, 시클로알킬카르보닐, 헤테로시클릴카르보닐, 아릴카르보닐, 헤테로아릴카르보닐 및 알킬아미노카르보닐은 할로겐, 히드록시, 아미노, 알킬아미노 및 페닐로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있으며,

여기서 알킬카르보닐은 아미노 또는 알킬아미노 치환기로 치환되고,

여기의 알킬카르보닐은 할로겐, 히드록시, 트리메틸실릴, 알콕시, 알킬티오, 벤질옥시, C₃-C₆-시클로알킬, 페닐, 나프틸, 5 내지 10원 헤테로아릴, 알킬카르보닐아미노, 알콕시카르보닐아미노, 아릴카르보닐아미노, 아릴카르보닐옥시, 벤질옥시카르보닐 및 벤질옥시카르보닐아미노로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1 또는 2개의 추가의 치환기로 치환될 수 있으며,

여기의 페닐 및 헤테로아릴은 다시 할로겐, 히드록시, 니트로, 알킬, 알콕시 및 페닐로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있거나, 또는

알킬카르보닐 내 동일한 탄소 원자에 있는 2개의 치환기는 그들이 결합한 탄 소 원자와 함께 C₃-C₆-시클로알킬 고리 또는 5 내지 7원 헤테로시클릴 고리를 형성하고,

여기의 상기 시클로알킬 고리 및 헤테로시클릴 고리는 트리플루오로메틸, 알킬 및 알콕시로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있거나, 또는

여기의 상기 시클로알킬 고리는 벤조 융합될 수 있음),

R⁵는 수소, C₁-C₄-알킬, 시클로프로필 또는 시클로프로필메틸이거나, 또는

R⁴및 R⁵는 이들이 결합한 질소 원자와 함께 5 내지 7원 헤테로시클릴 고리를 형성하고, 여기의 헤테로시클릴 고리는 할로겐, 히드록시, 아미노, 시아노, 알킬, 알콕시 및 알킬아미노로 이루어지는 군으로부터 서로 독립적으로 선택되는 0, 1, 2, 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있음]

<화학식 II>

(식 중, R¹ 내지 R⁵는 전술된 바와 같고,

여기의 X는 OH, 활성 에스테르, 슈도할로겐 또는 할로겐이고,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)
제1항에 있어서, 상기 화학식 (II)의 화합물이 하기 화학식 (IIa)의 화합물인 것을 특징으로 하는 방법.

[화학식 IIa]

(식 중, X 및 R¹은 제1항에서 정의된 바와 같으며,

R⁶은 이소프로필메틸, tert-부틸메틸, 2,2-디메틸부트-1-일, 2-에틸-2-메틸부트-1-일, 2,2-디에틸부트-1-일, 2,2-디메틸펜트-1-일, 3-피리딜메틸, 4-트리플루오로메틸-3-피리딜메틸, 벤질 또는 트리메틸실릴메틸이고,

R⁷은 이소프로필메틸, tert-부틸메틸, 2,2-디메틸부트-1-일, 2-에틸-2-메틸부트-1-일, 2,2-디에틸부트-1-일, 2,2-디메틸펜트-1-일, 트리메틸실릴메틸 또는 벤질이고,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)
제2항에 있어서, R⁶이 이소프로필메틸, tert-부틸메틸 또는 3-피리딜메틸이고, R⁷이 이소프로필메틸, tert-부틸메틸 또는 트리메틸실릴메틸인 것을 특징으로 하는 방법.
제3항에 있어서, R⁶　=　R⁷이고 이소프로필메틸인 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, X가 OH인 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R¹이 CH₃인 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 하기 화학식 (III)의 화합물과 하기 화학식 (IV)의 화합물의 커플링 및 경우에 따라, 중간체의 부분적 또는 완전한 탈보호 뿐만 아니라 경우에 따라 3-히드록시페닐알라닌의 카르복시 기의 화학식 -C(=O)X (여기의 X는 제1항에 정의된 바와 같음)의 기로의 전환에 의한 화학식 (II)의 화합물의 제조를 특징으로 하는 방법.

[화학식 III]

[화학식 IV]

(상기 식 (III), (IV)에서, R¹ 내지 R⁵는 제1항에서 정의된 바와 같고,

Y는 OH, 활성 에스테르, 슈도할로겐 또는 할로겐이고,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)
제7항에 있어서, 상기 화학식 (III)의 화합물이 하기 화학식 (IIIa)의 화합물인 것을 특징으로 하는 방법.

[화학식 IIIa]

(식 중, R⁶ 및 R⁷은 제2항 내지 제4항에서 정의된 바와 같으며,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)
제7항에 있어서, 하기 화학식 (V)의 화합물과 하기 화학식 (VI) 화합물의 커플링 및 경우에 따라, 중간체의 부분적 또는 완전한 탈보호에 의한 화학식 (III)의 화합물의 제조를 특징으로 하는 방법.

[화학식 V]

[화학식 VI]

(상기 식 (V), (VI)에서, R² 내지 R⁵는 제1항에서 정의된 바와 같으며,

Z는 OH, 활성 에스테르, 슈도할로겐 또는 할로겐이고,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)
제9항에 있어서, 화학식 (V)의 화합물이 하기 화학식 (Va)의 화합물인 것을 특징으로 하는 방법.

[화학식 Va]

(식 중, R⁶ 및 R⁷은 제2항 내지 제4항에서 정의된 바와 같고,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)
하기 화학식 (III)의 화합물.

[화학식 III]

(식 중, R² 내지 R⁵는 제1항에서 정의된 바와 같으며,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)
제11항에 있어서, 하기 화학식 (IIIa)을 갖는 화합물.

[화학식 IIIa]

(식 중, R⁶ 및 R⁷은 제2항 내지 제4항에서 정의된 바와 같으며,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)
제12항에 있어서, 하기 화학식 (IIIb)를 갖는 화합물.

[화학식 IIIb]
하기 화학식 (V)의 화합물과 하기 화학식 (VI)의 화합물의 커플링 및 경우에 따라, 중간체의 부분적 또는 완전한 탈보호를 포함하는 제11항 화합물의 제조 방법.

[화학식 V]

[화학식 VI]

(상기 식 (V), (VI)에서, R² 내지 R⁵는 제1항에서 정의된 바와 같으며,

Z는 OH, 활성 에스테르, 슈도할로겐 또는 할로겐이고,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)
하기 화학식 (VI)의 화합물.

[화학식 VI]

(식 중, Z는 OH, 활성 에스테르, 슈도할로겐 또는 할로겐이고,

PG는 H 또는 적합한 보호기임)
제15항에 있어서, 하기 화학식 (VIa)를 갖는 화합물.

[화학식 VIa]
하기 화학식 (VII)의 화합물과 하기 화학식 (VIII)의 화합물의 커플링 및, 경우에 따라, 중간체의 완전한 또는 부분적인 탈보호를 포함하는 제15항 화합물의 제조 방법.

[화학식 VII]

[화학식 VIII]

(상기 식 (VII) 및 (VIII)에서, PG는 H 또는 적합한 보호기임)
제17항에 있어서, 상기 화학식 (VII)의 화합물이 하기 화학식 (VIIa)의 화합물인 것을 특징으로 하는 방법.

[화학식 VIIa]
제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 화학식 (VIII)의 화합물이 하기 화학식 (VIIIa)의 화합물인 것을 특징으로 하는 방법.

[화학식 VIIIa]