PT1869056E - Novos derivados de 7-amino-[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidina 5-substituídos - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "NOVOS DERIVADOS DE 7-AMINO-[1,3]TIAZOLO[4,5-D]PIRIMIDINA 5-SUBSTITUÍDOS"

Campo da Invenção A presente invenção divulga novos derivados de 7-amino-[1, 3]tiazolo[4,5—d]pirimidina 5-substituidos em conjunto com processos para a sua preparação, formulações farmacêuticas que os compreendem e a sua utilização em terapia.

Antecedentes da Invenção

As quimiocinas desempenham um papel importante nas respostas imunitárias e inflamatórias em várias doenças e distúrbios, incluindo asma, aterosclerose e doenças alérgicas, assim como em patologias autoimunes, tais como artrite reumatóide e esclerose múltipla. Estas moléculas pequenas segregadas são uma superfamilia em crescimento de proteínas com 8-14 kDa caracterizadas por um motivo de cisteina conservado. Presentemente, a superfamilia das quimiocinas compreende quatro grupos que apresentam motivos estruturais caracteristicos, as famílias C-X-C, C-C e C-X3-C e XC. As famílias C-X-C e C-C têm semelhança em termos de sequência e distinguem-se entre si com base numa inserção única de aminoácido entre o par de resíduos cisteina próximo de NH. A família C-X3-C distingue-se das outras duas famílias com base em ter uma inserção tripla de aminoácidos entre o par de resíduos cisteina próximos do NH. Pelo contrário, 1 os membros da família XC não apresentam um dos dois primeiros resíduos de cisteína.

As quimiocinas C-X-C incluem vários quimioatractores e activadores potentes de neutrófilos, tais como interleucina-8 (IL-8) e péptido 2 activador de neutrófilos (nap-2).

As quimiocinas C-C incluem quimioatractores potentes de monócitos, linfócitos e neutrófilos. Os exemplos incluem proteínas quimiotáticas de monócitos humanos 1-3 (MCP-1, MCP-2 e MCP-3), RANTES (Regulado na Activação, Expresso em células T Normais e Segregado), eotaxina e proteínas inflamatórias de macrófagos la e 1β (MIP-la e MIP-Ιβ). A quimiocina C-X3-C (também conhecida como fractalcina) é um quimioatractor potente e activador da microglia no sistema nervoso central (CNS), assim como de monócitos, células T, células NK e mastócitos.

Os estudos demonstraram que as acções das quimiocinas são mediadas por subfamílias de receptores ligados à proteína G, entre os quais se encontram os receptores designados CCRl, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10 e CCRll (para a família C-C); CXCRl, CXCR2, CXCR3, CXCR4 e CXCR5 (para a família C-X-C) e CX3CRl para a família C-X3-C. Estes receptores representam bons alvos para o desenvolvimento de fármacos dado que os agentes que modulam estes receptores irão ser úteis no tratamento de distúrbios e doenças, tais como os referidos acima. 0 documento WO 00/09511 divulga determinados derivados de 4-amino-tiazolopirimidina 2-substituídos que são úteis como 2 antagonistas dos receptores ligados às famílias de quimiocinas C-X-C e C-C, particularmente como antagonistas do receptor CXCR2. A presente invenção refere-se a um grupo de compostos que está parcialmente dentro do âmbito genérico do documento WO 00/09511 mas que é de um tipo estrutural não especificamente aí exemplificado. Quando comparados com os Exemplos divulqados no documento WO 00/09511, os compostos da presente invenção apresentam propriedades surpreendentemente úteis como antagonistas do receptor CX3CR1.

Divulgação da invenção A presente invenção proporciona compostos de fórmula (I)

N

(D em que: R representa CH3 ou CH3CH2; 3 R2 representa H, 2-F, 2-C1, 3-F, 3-OCH3, 3-CN, 3-CF3, 3-CONH2 ou 3-S02CH3; R3 representa H ou CH3; R4 representa H ou CH3; e R5 representa H; ou, quando R4 é CH3, R5 representa H ou F; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Os compostos de fórmula (I) podem existir em formas tautoméricas e/ou estereoisoméricas. Deve ser entendido que todos os enantiómeros, diastereómeros, racematos, tautómeros e suas misturas estão incluídos dentro do âmbito da invenção.

Numa forma de realização, R1 representa CH3. Noutra forma de realização, R1 representa CH3CH2.

Numa forma de realização, R2 representa H, 2-F, 3-F, 2-C1, 3-OCH3, 3-CN ou 3-CF3. Noutra forma de realização, R2 representa H, 2-F ou 3-CN. Noutra forma de realização, R2 representa H. Noutra forma de realização, R2 representa 2-F. Noutra forma de realização, R2 representa 3-CN.

Numa forma de realização, R3 representa H.

Numa forma de realização, R4 representa CH3. Noutra forma de realização, R4 representa H.

Numa forma de realização, R5 representa H. 4

Numa forma de realização, R4 representa CH3 e R5 representa F.

Numa forma de realização, R4 representa CH3 e R5 representa H.

Numa forma de realização, R1 representa CH3; R2 representa H, 2-F, 3-F, 2-C1, 3-OCH3, 3-CN ou 3-CF3; R3 representa H; R4 representa H ou CH3; e R5 representa H.

Noutra forma de realização, R1 representa CH3; R2 representa H, 2-F ou 3-CN; R3 representa H; R4 representa H ou CH3; e R5 representa H.

Noutra forma de realização, R1 representa CH3; R2 representa H, 2-F ou 3-CN; R3 representa H; R4 representa H; e R5 representa H.

Noutra forma de realização, R1 representa CH3; R2 representa H, 2-F ou 3-CN; R3 representa H; R4 representa CH3; e R5 representa H ou F.

Noutra forma de realização, R1 representa CH3; R2 representa H; R3 representa H; R4 representa CH3; e R5 representa H.

Os compostos particulares de fórmula (I) incluem: (2R)-2-[(2-amino-5-{[(IS)-1-(2—fluorofenil)etil]tio} [l,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]pentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[(IS)-1-(2—fluorofenil)etil]tio}[1,3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol; 5 (2R)-2-({2-amino-5-[(1-feniletil)tio] [1,3]tiazolo[4,5-d] pirimidin-7-il}amino)-4-metilpentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[(1R)-1-feniletil]tio}[1,3]tiazolo [4, 5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol; 3-{(IS) -1- [(2-amino-7-{[(1R)-1-(hidroximetil)butil]amino} [1.3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-5-il)tio]etil}benzonitrilo; (2R)-2-{[2-amino-5-({(IS)-1-[3-(metilsulfonil)fenil]etil} tio)[l,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il]amino}-4-metilpentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[ (IS)-1-feniletil]tio}[1,3]tiazolo [4, 5-d]pirimidin-7-il)amino]pentan-l-ol; 3-{(15)-1-[(2-amino-7-{[(1R)-1-(hidroximetil)-3-metilbutil] amino}[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-5-il)tio]etil} benzonitrilo; (2R)-2-({2-amino-5-[(1-fenilpropil)tio] [1,3]tiazolo[4, 5-d] pirimidin-7-il}amino)-4-metilpentan-l-ol; 3—{1—[(2-amino-7-{[(1R)-1-(hidroximetil)-3-metilbutil] amino}[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-5-il)tio]etil}benzamida; (2R)-2-{[2-amino-5-({1-[3-(trifluorometil)fenil]etil}tio) [1.3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il]amino}-4-metilpentan-l-ol; 6 (2R)-2-[{2-amino-5-[(1-feniletil)tio] [1,3]tiazolo[4,5-d] pirimidin-7-il}(metil)amino]-4-metilpentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[l-(2-clorofenil)etil]tio] [1,3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[1-(3-metoxifenil)etil]tio}[1,3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol; {2R)-2-[(2-amino-5-{[(15)-1-feniletil]tio}[1,3]tiazolo [4, 5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[(IS)-1-feniletil]tio}[1,3] tiazolo [4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-fluoro-4-metilpentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[(IS)-1-(2-fluorofenil)etil]tio}[1,3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-fluoro-4-metilpentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[(IS)-1-(3—fluorofenil)etil]tio}[1,3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Quando comparados com os compostos divulgados no documento WO 00/09511, os compostos da presente invenção são caracterizados pela presença do grupo tiobenzilo ramificado na posição 5 do sistema de anel tiazolopirimidina. Ou seja, os compostos da presente invenção incorporam um grupo R1 que não é hidrogénio. 7

De acordo com a invenção, a requerente proporciona, ainda, um processo de preparação de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável que compreende: a) fazer reagir um composto de fórmula (II):

(II) em que R3, R4 e R5 são como definidos na fórmula (I); com um composto de fórmula (III):

em que R1 e R2 são como definidos na fórmula (I) e L1 representa um grupo abandonante; ou b) fazer reagir um composto de fórmula (IV) 8

em que R1 e R2 são como definidos na fórmula (I) e L2 representa um grupo abandonante; com composto de fórmula (V)

em que R3, R4 e R5 são como definidos na fórmula (I); e, quando necessário, converter o composto resultante de fórmula (I) ou um outro seu sal, num seu sal farmaceuticamente aceitável; ou converter o composto resultante de fórmula (I) num composto adicional de fórmula (I); e, quando pretendido, converter o composto resultante de fórmula (I) num seu isómero óptico.

No processo (a), os reagentes (II) e (III) são ligados em conjunto num solvente orgânico adequado, tal como 9 dimetilsulfóxido (DMSO), acetonitrilo ou l-metil-2-pirrolidinona (NMP). A reacção é opcionalmente realizada na presença de uma base orgânica ou inorgânica adicionada, tal como trietilamina, N,N-di-isopropiletilamina (DIPEA) ou hidreto de sódio. A reacção é opcionalmente realizada na presença de um agente de redução suave, tal como boro-hidreto de sódio. A reacção é realizada a uma temperatura adequada, normalmente entre a temperatura ambiente e o ponto de ebulição do solvente. A reacção é geralmente continuada durante um período de cerca de uma hora a uma semana ou até que a análise indique que a formação do produto pretendido está completa.

No processo (b), os reagentes (IV) e (V) são ligados em conjunto num solvente orgânico adequado, tal como tetra-hidrofurano, acetonitrilo, dimetilsulfóxido ou l-metil-2-pirrolidinona. A reacção é opcionalmente realizada na presença de uma base adicionada. Esta base pode ser uma base orgânica, tal como trietilamina ou N,N-di-isopropiletilamina, ou uma base inorgânica tal como carbonato de potássio. A reacção é realizada a uma temperatura adequada, normalmente entre a temperatura ambiente e o ponto de ebulição do solvente mas, opcionalmente, a temperaturas mais elevadas se for utilizado um vaso de reacção selado. A reacção é geralmente continuada durante um período de cerca de uma hora a uma semana ou até que a análise indique que a formação do produto pretendido está completa.

Os grupos abandonantes adequados L1 e L2 são halogéneo, particularmente cloro ou bromo. Numa forma de realização, L1 e L2 representam cada cloro.

Ser irá evidente para um especialista na técnica que nos processos acima poderá ser desejável ou necessário proteger uma 10 amina, um hidroxilo ou outro grupo potencialmente reactivo. Os grupos de protecção adequados e os detalhes de processos de adição e remoção desses grupos são, em geral, bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, "Protective Groups in Organic

Synthesis", 3a Edição (1999) por Greene e Wuts. A presente invenção inclui compostos de fórmula (I) na forma de sais. Os sais adequados incluem os formados com ácidos orgânicos ou inorgânicos ou com bases orgânicas ou inorgânicas. Esses sais serão, normalmente, farmaceuticamente aceitáveis, embora os sais de ácidos ou de bases não farmaceuticamente aceitáveis possam ser úteis na preparação e na purificação do composto em questão.

Os sais de compostos de fórmula (I) podem ser formados fazendo reagir o composto livre ou um seu sal, enantiómero ou racemato, com um ou mais equivalentes do ácido ou da base adequados. A reacção pode ser realizada num solvente ou meio em que o sal seja insolúvel ou num solvente em que o sal seja solúvel, por exemplo, água, dioxano, etanol, tetra-hidrofurano ou o éter dietilico ou uma mistura de solventes, que possa ser removida in vácuo ou por liofilização. A reacção pode ser também um processo de metatético ou pode ser realizada uma resina de permuta iónica.

Os compostos de fórmula (II) são conhecidos do documento WO 00/09511 ou podem ser preparados utilizando métodos conhecidos que serão imediatamente evidentes para um especialista na técnica.

Os compostos de fórmula (IV) podem ser preparados utilizando métodos análogos aos divulgados no documento 11 WO 00/09511 ou utilizando outros métodos conhecidos que serão imediatamente evidentes para um especialista na técnica.

Os compostos de formulas (III) e (V) estão comercialmente disponíveis ou são conhecidos na literatura ou podem ser preparados utilizando métodos conhecidos que serão imediatamente evidentes para um especialista na técnica.

Na secção de Exemplos do presente pedido são detalhados métodos específicos adequados para a preparação dos compostos de formulas (II), (III), (IV) e (V) e esses métodos representam formas de realização específicas dos processos da invenção.

Por exemplo, os compostos de fórmula (II) e consequentemente os de fórmula (I), pode ser preparados como mostrado no Esquema 1: 12

Esquema 1

Os compostos intermediários podem ser utilizados como tal ou numa forma protegida. Os grupos de protecção adequados e os detalhes de processos de adição e remoção desses grupos são, em geral, bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, "Protective Groups in Organic Synthesis", 3a Edição (1999) por Greene e Wuts.

Os compostos da invenção e os seus intermediários podem ser isolados a partir das suas misturas de reacção e, se necessário, 13 ser purificados adicionalmente, utilizando técnicas convencionais.

Os compostos de fórmula (I) podem existir sob formas estereoisoméricas. Consequentemente, todos os enantiómeros, diastereómeros, racematos e suas misturas estão incluídos dentro do âmbito da invenção. Podem ser isolados vários isómeros ópticos por separação de uma mistura estereoisomérica dos compostos utilizando técnicas convencionais, por exemplo, cristalização fraccionada ou hplc. Alternativamente, podem ser preparados directamente vários isómeros ópticos utilizando materiais de partida opticamente activos.

Os compostos de fórmula (I) contêm dois centros estereogénicos e podem existir deste modo em quatro formas estereoisoméricas discretas como mostrado nas formulas (Ia) a (Id)

(la) (Ib) 14

Todos esses quatro estereoisómeros e qualquer sua mistura estão incluídos dentro do âmbito da invenção. Numa forma de realização, os compostos de fórmula (I) têm a estereoquímica apresentada na fórmula (Ia). Noutra forma de realização, os compostos de fórmula (I) têm a estereoquímica apresentada na fórmula (Ib).

Podem também existir compostos intermediários em formas estereoisoméricas e podem ser utilizados como enantiómeros, diastereómeros, racematos ou misturas purificados.

Os compostos de fórmula (I) e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis são úteis porque estes possuem actividade farmacológica como antagonistas do receptor CX3CRI. Em particular, quando comparados com os compostos especificamente exemplificados no documento WO 00/09511, os compostos de fórmula (I) da presente invenção possuem potências significativamente melhoradas para a inibição do receptor CX3CRI e/ou potências diminuídas de inibição do receptor CXCR2. Os compostos preferidos da presente invenção apresentam tanto potência intensificada para a inibição de CX3CRl como potência diminuída para a inibição de CXCR2. 15

Num aspecto, a presente invenção proporciona um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização como um medicamento.

Noutro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, na preparação de um medicamento, para o tratamento ou a profilaxia de doenças ou de patologias em que é benéfico o antagonismo do receptor cx3CRl.

Noutro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, na preparação de um medicamento, para o tratamento ou a profilaxia de distúrbios neurodegenerativos, doença desmielinizante, distúrbios ateroscleróticos cardio e cerebrovasculares, doença arterial periférica, artrite reumatóide, doenças pulmonares tais como COPD, asma ou dor.

Noutro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, na preparação de um medicamento, para o tratamento ou a profilaxia da esclerose múltipla (MS).

Noutro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, na preparação de um medicamento, para o tratamento ou a profilaxia da aterosclerose prevenindo e/ou reduzindo a formação de novas lesões ou placas ateroscleróticas e/ou prevenindo ou retardando a progressão das lesões e placas existentes. 16

Noutro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, na preparação de um medicamento, para o tratamento ou a profilaxia da aterosclerose pela modificação da composição das placas de forma a reduzir o risco de eventos de ruptura de placas e aterotrombóticos.

Noutro aspecto, a invenção proporciona uma formulação farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, em mistura com um adjuvante, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável, para utilização no tratamento ou na profilaxia de doenças ou patologias em que seja benéfico o antagonismo do receptor CX3CRI.

Noutro aspecto, a invenção proporciona uma formulação farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, em mistura com um adjuvante, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável, para utilização no tratamento ou na profilaxia de distúrbios neurodegenerativos, doença desmielinizante, distúrbios ateroscleróticos cardio e cerebrovasculares, doença arterial periférica, artrite reumatóide, COPD, asma ou dor.

Noutro aspecto, a invenção proporciona uma formulação farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, em mistura com um adjuvante, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável, para utilização no tratamento ou na profilaxia da esclerose múltipla. 17

Noutro aspecto, a presente invenção proporciona uma formulação farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, em mistura com um adjuvante, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável, para utilização no tratamento ou na profilaxia da aterosclerose prevenindo e/ou reduzindo a formação de novas lesões e placas ateroscleróticas e/ou prevenindo ou retardando a progressão das lesões e placas existentes.

Noutro aspecto, a presente invenção proporciona uma formulação farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I) ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, em mistura com um adjuvante, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável, para utilização no tratamento ou na profilaxia da aterosclerose modificando a composição das placas de forma a reduzir o risco de eventos de ruptura de placas e aterotrombóticos.

Os compostos de fórmula (I) e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis são indicados para utilização no tratamento ou na profilaxia de doenças ou de patologias em que seja desejável a modulação da actividade no receptor CX3CR1. Em particular, os compostos são indicados para utilização no tratamento de distúrbios neurodegenerativos ou da doença desmielinizante em mamíferos incluindo o homem. Mais particularmente, os compostos são indicados para utilização no tratamento da esclerose múltipla. Os compostos são também indicados como sendo úteis no tratamento de dor, artrite reumatóide, osteoartrite, distúrbios ateroscleróticos cardio e 18 cerebrovasculares, doença arterial periférica e hipertensão arterial pulmonar.

As patologias que podem ser especificamente referidas são: doenças neurodegenerativas e distúrbios da demência, por exemplo, doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica e outras doenças dos neurónios motores, doença de Creutzfeldt-Jacob e outras doenças dos priões, encefalopatia do HIV, doença de Huntington, demência frontotemporal, demência de corpo de Lewy e demência vascular; polineuropatias, por exemplo, sindrome de Guillain-Barre, polirradiculoneuropatia desmielinizante inflamatória crónica, neuropatia motora multifocal e plexopatias; desmielinização do CNS, por exemplo, disseminada/hemorrágica agudas encefalomielite e panencefalite esclerosante subaguda; distúrbios neuromusculares, por exemplo, miastenia grave e sindrome de Lambert-Eaton; distúrbios espinais, por exemplo, paraparesia espástica tropical e sindrome do homem rígido; síndromes de paraneoplásticas, por exemplo, degeneração cerebelar e encefalomielite; danos cerebrais traumáticos; enxaqueca; cancro; rejeição de aloenxertos; esclerose sistémica; infecções virais; doenças transmitidas por parasitas, por exemplo, malária; doença periodontal; enfarte de miocárdio; acidente vascular cerebral; doença coronária do coração; doença isquémica do coração; restenose; artrite reumatóide; doenças pulmonares, tais como COPD; asma ou dor.

Os compostos da invenção são também indicados para utilização no tratamento da aterosclerose prevenindo e/ou reduzindo a formação de novas lesões ou placas ateroscleróticas e/ou prevenindo ou retardando a velocidade da progressão das lesões e placas existentes. 19

Os compostos da invenção são também indicados para utilização no tratamento da aterosclerose modificando a composição das placas de forma a reduzir o risco de eventos de ruptura de placas e aterotrombóticos.

Os compostos da invenção são também indicados para utilização no tratamento da doença inflamatória do intestino (IBD), por exemplo, doença de Crohn e colite ulcerativa, induzindo a remissão e/ou mantendo a remissão da IBD. É esperado que a profilaxia seja particularmente relevante para o tratamento de pessoas que sofreram um episódio anterior da doença ou da patologia em questão ou que, de outra forma, sejam consideradas como estando em risco aumentado desta. As pessoas em perigo de desenvolver uma doença ou patologia particular incluem, geralmente, as que têm uma história familiar da doença ou da patologia ou as que foram identificadas em testes ou rastreios genéticos como sendo particularmente susceptiveis ao desenvolvimento da doença ou da patologia.

Para as indicações terapêuticas referidas acima, a dosagem administrada irá, naturalmente, variar com o composto utilizado, o modo de administração e o tratamento pretendido. No entanto, em geral, são obtidos resultados satisfatórios quando os compostos são administrados numa dosagem da forma sólida de entre 1 mg e 2000 mg por dia.

Os compostos de fórmula (I) e seus derivados farmaceuticamente aceitáveis podem ser utilizados isoladamente ou na forma de composições farmacêuticas adequadas em que o composto ou o derivado está em mistura com um adjuvante, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável. A administração 20 pode ser, mas não está limitada, pelas vias entérica (incluindo oral, sublingual ou rectal), intranasal, intravenosa, tópica ou outras parentéricas. Os processos convencionais de selecção e preparação de formulações farmacêuticas adequadas são descritos em, por exemplo, "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", Μ. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988. A composição farmacêutica compreende, de um modo preferido, menos de 80% e, de um modo mais preferido, a menos de 50% de um composto de fórmula (I) ou um seu sal f armaceuticamente aceitável. É também proporcionado um processo de preparação dessa composição farmacêutica que compreende a mistura dos ingredientes. A invenção refere-se, além disso, a terapias de combinação em que é administrado o composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou uma composição farmacêutica ou formulação compreendendo o composto de fórmula (I), simultânea ou sequencialmente com a terapia e/ou um agente para o tratamento de qualquer um de distúrbios ateroscleróticos cardio e cerebrovasculares e doença arterial periférica.

Em particular, um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável pode ser administrado em associação com compostos de um ou mais dos grupos seguintes: 1) agentes anti-inflamatórios, por exemplo, a) NSAID (e. g. ácido acetilsalicilico, ibuprofeno, naproxeno, flurbiprofeno, diclofenac, indometacina); 21

b) inibidores da síntese do leucotrieno (inibidores 5-LO e. g.r AZD4407, Zileuton, licofelona, CJ13610, CJ13454; inibidores de FLAP e. g. BAY-Y-1015, DG-031, MK591, MK886, A81834; inibidores da hidrolase LTM e. g. SC56938, SC57461A); c) antagonistas do receptor do leucotrieno; (e. g. CP195543, amelubante, LY293111, acolato, MK571); 2) agentes anti-hipertensão, por exemplo, a) beta-bloqueantes (e. g., metoprolol, atenolol, sotalol); b) inibidores da enzima conversora da angiotensina (e. g., captopril, ramipril, quinapril, enalapril); c) bloqueantes do canal do cálcio (e . g., verapamil, diltiazem, felodipina, amlodipina); d) antagonistas do receptor da angiotensina II (e. g., irbesartan, candesartan, telemisartan, losartan); 3) anti-coagulantes, por exemplo, a) inibidores da trombina (e. g. ximelagatrano), heparinas, inibidores do factor Xa; b) inibidores de agregação das plaquetas (e. g. clopidrogrel, ticlopidina, prasugel, AZ160); 4) moduladores de metabolismo dos lípidos, por exemplo, 22 a) sensibilizadores da insulina, tais como agonistas de PPAR (e. g., pioglitazona, rosiglitazona, Galida, muraglitazaar, gefemrozilo, fenofibrato); b) inibidores da redutase de HMG-CoA, estatinas (e. q., simvastatina, pravastatina, atorvastatina, rosuvastatina, fluvastatina, pitavastatina); c) inibidores da absorção do colesterol (e. g., ezetimibe); d) Inibidores de IBAT (e. g., AZD-7806); e) Agonistas de LXR (e. g., GW-683965A, T-0901317); f) Moduladores do receptor FXR; g) inibidores da fosfolipase; 5) agentes anti-anginais, por exemplo, nitratos e nitritos; 6) moduladores do stress de oxidativo, por exemplo, antioxidantes (probucol), inibidores da mieloperoxidase. A invenção é ilustrada, mas de modo algum limitada, pelos exemplos seguintes: 23 Métodos Gerais

Todos os solventes utilizados foram de grau analítico e foram normalmente utilizados nas reacções solventes anidros comercialmente disponíveis. As reacções foram tipicamente realizadas sob uma atmosfera inerte de azoto ou de árgon.

Os espectros de RMN de 1R e de 13C foram registados a 400 MHz para o protão e a 100 MHz para o carbono 13 num Espectrómetro de RMN Varian Unity+ 400 equipado com uma sonda BBO de 5 mm com gradientes Z ou um espectrómetro de RMN Bruker Avance 400 equipado com uma sonda dupla de fluxo inverso de 60 pL com gradientes Z, ou com um espectrómetro de RMN Bruker DPX400 equipado com uma sonda de 4 núcleos equipada com gradientes Z. Os espectros de RMN de 1R a 600 MHz foram registados num espectrómetro de RMN Bruker av600 equipado com uma sonda BBI de 5 mm com gradientes Z. Os espectros de RMN de ΧΗ a 300 MHz foram registados num RMN Varian Gemini 300 equipado com uma sonda BBI de 5 mm. A menos que especificamente referido nos exemplos, os espectros foram registados a 400 MHz para o protão e 100 MHz para o carbono-13. Foram utilizados os seguintes sinais de referência: a linha média de DMSO-dô δ 2,50 (3H), δ 39,51 (13C) ; a linha média de CD3OD δ 3,31 (XH) ou δ 49,15 (13C) ; acetona-d6, 2,04 (3H), 206,5 (13C) ; e CDC13 δ 7,26 (ΧΗ), a linha média de CDC13 δ 77,16 (13C) (a menos que indicado de outra forma). Foi determinado o excesso enantiomérico por GC numa coluna CyclodexB (eluição isotérmica 100 °C).

Os espectros de massa foram registados num LCMS Waters consistindo num Alliance 2795 (LC) e num espectrómetro de massa ZQ de quadrupólo único. O espectrómetro de massa foi equipado com uma fonte de iões de electrovaporização (ESI) operado num 24 modo de ião positivo ou negativo. A voltagem capilar foi de 3 kV e o espectrómetro de massa foi rastreado a partir de m/z 100-700 com um tempo de rastreio de 0,3 ou 0,8 s. As separações foram realizadas quer em colunas C8 Waters X-Terra MS, (3,5 pm, 50 ou em 100 mm x 2,1 mm i. d.) quer numa coluna ACE 3 AQ de ScantecLab (100 mm x 2,1 mm í. d.) . A temperatura da coluna foi estabelecida a 40 °C. Foi aplicado um gradiente linear utilizando um sistema de fase móvel neutro ou acídico, operando a 0% a 100% de fase orgânica em 4-5 minutos, velocidade de fluxo 0,3 mL/min. Sistema de fase móvel neutro: acetonitrilo/[NH4OAc 10 mM (aq.)/MeCN (95:5)] ou [NH4OAc 10 mM (aq.)/MeCN (1/9) ] / [NH4OAc 10 mM (aq.)/MeCN (9/1)]. Sistema de fase móvel acidico: [HCOOH 133 mM (aq.)/MeCN (5/95)]/[HCOOH 8 mM (aq.)/MeCN (98/2)] .

Alternativamente, os espectros de massa foram registados num GC-MS (GC 6890, 5973N MSD, Agilent Technologies) utilizando uma coluna VF-5 MS (Dl 0,25 mm x 30 m, 0,25 pm (Varian Inc.)). Foi aplicado um gradiente de temperatura linear (40 °C - 300 °C), 25 °C/min. O MS foi equipado com uma fonte de ião Cl e o gás reagente foi o metano. O MS foi rastreado entre m/z 50-500 e a velocidade de rastreio foi estabelecida em 3,25 rastreios/s. As análises de HPLC foram realizadas num sistema Agilent HP1000 consistindo num Desgaseificador de Vácuo Micro G1379A, Bomba Binária G1312A, colector de amostras automático G1367A Wellplate, G1316A Compartimento de Coluna Termostatizado e Detector de Matriz de Diodos G1315B. Coluna: X-Terra MS, Waters, 4, 6 50 mm x, 3,5 pm. A temperatura da coluna foi estabelecida a 40 °C e a velocidade de fluxo em 1,5 mL/min. O detector de Matriz de Diodos foi rastreado a 210-300 nm, o passo e largura do pico foram estabelecidos, respectivamente em 2 nm e 0,05 min. Foi aplicado um gradiente linear, operado de 0% a 100% 25 acetonitrilo, em 4 min. Fase móvel: acetonitrilo/acetato de amónio 10 mM em acetonitrilo a 5% em Água MilliQ.

Um processo de operação tipico após uma reacção consistiu na extracção do produto com um solvente, tal como acetato de etilo, lavagem com água seguida por secagem da fase orgânica sobre MgSCU ou Na2SC>4 e concentração da solução in vacuo.

Foi realizada cromatografia em camada fina (TLC) em placas TLC de Merck (silicagel 60 F254) e foi utilizada UV para visualizar as manchas. Foi realizada cromatografia "flash" em CombiFlash® Companion™ utilizando colunas flash RediSep™ de fase normal ou em silicagel Merck 60 (0,040-0,063 mm). Os solventes típicos utilizados na cromatografia flash foram misturas de clorofórmio/metanol, tolueno/acetato de etilo e acetato de etilo/hexanos. Foi realizada cromatografia preparativa num HPLC auto-preparativo Gilson com um detector de matriz de díodos. Coluna: XTerra MS C8, 19 x 300 mm, 7 pm. Gradiente com acetonitrilo/acetato de amónio 0,1 M em acetonitrilo a 5% em Água MilliQ, operada com acetonitrilo de 20% a 60%, durante 13 min. Velocidade de fluxo: 20 mL/min. Alternativamente, a purificação foi realizada num HPLC semi preparativo Shimadzu LC-8A com um detector Shimadzu SPD-10A UV-vis. equipado com uma coluna Waters Simmetry® (Cl8, 5 pm, 100 mm x 19 mm). Gradiente com acetonitrilo/ácido trifluoroacético 0,1% em Água MilliQ, operada com acetonitrilo de 35% a 60% durante 20 min. Velocidade de fluxo: 10 mL/min. A recristalização foi, tipicamente, realizada em solventes ou misturas de solventes, tais como éter, acetato de etilo/heptanos e metanol/água. 26

Foram utilizadas as seguintes abreviaturas: DCM = diclorometano; DIPC1 = β-clorodi-isopinocanfenilborano (DIP-cloreto™); DIPEA = N,N-di-isopropiletilamina; DMF = N, N-dimetilformamida; DMSO = dimetilsulfóxido; NCS = N-clorosuccinimida; NMP = l-metil-2-pirrolidinona; thf = tetra-hidrofurano;; aq = aquoso; conc = concentrado.

Os materiais de partida utilizados estavam disponíveis a partir de fontes comerciais ou foram preparados de acordo com os processos de literatura e originaram dados experimentais em concordância com os descritos. 0 seguinte são exemplos de material inicial que foram preparados: (IS)-1-(2—fluorofenil)etanol: Garrett, C. E. Tetrahedron:

Asymmetry 2002, 13, 1347-1349; Doucet, H. Chem. Eur. J. 1999, 5, 1320-1330; (R)-N-metil-leucinol: Aitali, M.; Allaoud, S.; Karim, A.;

Meliet, C.; Mortreux, A. Tetrahedron: Asymmetry 2000, 11, 1367-1374; (2R)-2-[(2-amino-5-mercapto[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7- il)amino]-4-metilpentan-l-ol: documento WO 02/076990; 5-(benziltio)-7-cloro[l,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-amina: documento WO 00/09511; 3-(1-hidroxietil)benzamida: Watson, C. Y; Whish, W. J. D;

Threadgill, M. D. Bioorg. Med. Chem. 1998 6(6) 721-34; 27 1-[3-(metilsulfonil)fenil]etanona: T. Fujita, J. Iwasa e C. Hansch, Journal of the American Chemical Society 1964, 86, 5175-5180; (1-Cloropropil)benzeno: Desai, V. R.; Nechvatal, A.; Tedder, J. M. J. Chem. Soc. (B) 1969, 30-32; 3-[(IS)-1-hidroxietil]benzonitrilo: Belley, M. Bioorg. Med. Chem., 1999, 7, 2697-2704; 1-(3-metoxifenil)etanol: Handa, S. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 1995, 1623-1633; (2R)-2-amino-4-fluoro-4-metilpentan-l-ol: Truong, V. L;

Gautier, J. Y; Boyd, M; Roy, B; Scheigetz, J. Synlett 2005, 8, 1279-1280; seguindo a via do enantiómero S: (IS)-1-(3- fluorofenil) etanol: Pastor, I. M. Chem. Eur. J. 2003, 9, 4031-4045. Método Geral Ά

Foram adicionados sódio boro-hidreto (0,1 equiv.), DIPEA (1,5 equiv.) e um composto de fórmula geral (III) (1,2 equiv.) a um composto de fórmula geral (II) (1,0 equiv.) em DMSO sob uma atmosfera de azoto. A mistura reaccional resultante foi agitada, a 40 °C, até à reacção estar completa (monitorizada por LC-MS, HPLC ou TLC) . A mistura foi vertida em água gelada e o produto foi extraido com DCM ou EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram secas e concentradas in vacuo. O produto bruto foi, se necessário, purificado utilizando HPLC preparativa ou por cromatografia em coluna flash. 28

Método Geral B

Foi adicionado Bl (1,0 equiv.) em THF (+)-DIPCl (para originar B2) ou (-)-DIPCl (para originar B3) (1,5 equiv.), a 0 °C, em THF sob uma atmosfera de árgon. Foi permitido à mistura reaccional atingir lentamente a temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi evaporado seguido pela adição de Et20 e dietanolamina (2,2 equiv.). A mistura foi agitada até à reacção estar completa (monitorizada por LC-MS, HPLC ou TLC). O precipitado que se formou foi filtrado, foi lavado com Et20 e o filtrado foi concentrado in vacuo. O produto bruto foi, se necessário, purificado utilizando HPLC preparativa ou cromatografia em coluna flash. 29

Método Geral C

OH

Cl

Ar

C1 C3

OH

Cl

Ar C4 C2

Foi adicionada trifenilfosfina (1,3 equiv.) em THF a NCS (1,3 equiv.) em THF a 0 °C sob uma atmosfera de árqon. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min.

Foi adicionado Cl ou C2 (1 equiv.), a 0 °C, e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente até à reacção estar completa (monitorizada por lc-ms, HPLC ou tlc). O solvente foi evaporado seguido por adição de hexano e remoção do precipitado por filtração. O filtrado foi concentrado in vacuo e o produto bruto foi, se necessário, purificado utilizando HPLC preparativa ou por cromatografia em coluna flash. 30

Exemplo 1 (2R)-2-[(2-Amino-5-{[(15)-1-(2-fluorofenil)etil]tio}[1,3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]pentan-l-ol a) l-{{IR)-1-Cloroetil]-2-fluorobenzeno 0 composto do título foi obtido com um rendimento de 65% com um excesso enantiomérico de 93%, utilizando o método geral C a partir de (IS)-1-(2-fluorofenil)etanol (3,56 g, 25 mmol). RMN de XH (CDC13) δ 7,53 (td, 1H), 7,28 (m, 1H) , 7,16 (m, 1H), 7,04 (m, 1H), 5,42 (q, 1H) , 1,84 (d, 3H); MS (ESI + ) m/z 158 [M+H]\ b) (2R) -2-{ [2-Amino-5- (benziltio) [1,3] tiazolo [4, 5-d] pirimidin-7-il]amino}pentan-l-ol

Foi dissolvida 5-(benziltio)-7-cloro[1, 3]tiazolo[4,5-d] pirimidin-2-amina (6,0 g, 19,4 mmol) em NMP (30 mL). Foi adicionado DIPEA (8,4 mL, 48,5 mmol) e 2-amino-(2R)-1-pentanol (3,5 g, 33,9 mmol) e a mistura foi aquecida a 110 °C, durante 4 dias. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura foi vertida em água (200 mL). O produto precipitado foi recolhido por filtração, foi lavado com água e foi utilizado no passo seguinte, sem purificação adicional (7,0 g, rendimento de 97%) . MS (ESI + ) m/z 376 [M+H]+. 31 c) (2R)-2-[2-Amino-5-mercapto[1,3]tiazolo[4, 5-d]pirimidin-7-il)amino]pentan-l-ol

Foi equipado um frasco de fundo redondo com um condensador de gelo seco-etanol e foi imerso num banho de arrefecimento de gelo seco-etanol. Foi condensada a amónia (250 mL) no frasco seguida pela adição de (2R)-2-{[2-amino-5-(benziltio) [1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il]amino}pentan-l-ol (6,8 g, 18,lmmol). Foi permitido à mistura resultante aquecer até -33 °C e foi adicionado sódio metálico em pequenas porções até que uma cor azul aparecesse e persistisse durante 30 segundos. A reacção foi, então, inactivada por adição de uma colher de cloreto de amónio sólido. A amónia foi evaporada e foi adicionada água (250 mL) ao resíduo. A mistura resultante foi neutralizada com HC1 1 M (aq.). O produto precipitado foi recolhido por filtração, foi lavado com água e foi seco in vacuo para produzir 4,15 g (rendimento de 80%) do composto do título. MS (ESI+) m/z 286 [M+H]+. d) (2R) -2-[ (2-Amino-5-{ [ (1S)-1- (2-fluorofenil) etil]tio} [1, 3]tiazolo[4, 5-d]pirimidin-7-il)amino]pentan-l-ol O composto do título foi obtido com um rendimento de 96% utilizando o método geral A a partir de (2R)-2-[(2-amino-5-mercapto[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]pentan-l-ol (703 mg, 2,46 mmol) e 1-[(IR)-1-cloroetil]-2-fluorobenzeno (469 mg, 2,96 mmol). RMN de XH (DMSO-d6) δ 8,38 (br s, 2H) , 7,55 (td, 1H) , 7,32 (m, 1H), 7,20 (m, 1H), 7,18 (d, 1H) , 5,26 (q, 1H), 4,19 (br s, 32 1Η), 3,43 (dd, 5,6 Hz, 1H), 3,35 (dd, 1H), 1,69 (d, 3H), 1,66-1,42 (m, 2H), 1,39-1,21 (m, 2H) , 0,86 (t, 3H) ; MS (ESI + ) m/z 408 [M+H]+.

Exemplo 2 (2R)-2-[(2-Amino-5-{[(IS)-1-(2-fluorofenil)etil]tio} [1,3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol O composto do título foi obtido com um rendimento de 41% utilizando o método geral A a partir de (2f?)-2-[ (2-amino-5-mercapto[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan- l-ol (800 mg, 2,67 mmol) e l-[ (1R)-1-cloroetil]-2-fluorobenzeno (509 mg, 3,21 mmol) . RMN de XH (DMSO-d6) δ 7,97 (s, 2H), 7,53 (td, 1H), 7,29 (m, 1H), 7,17 ( m, 1H), 7,15 (d, 1H), 6,89 (d, 1H) , 5,22 (q, 1H), 4 ,61 (t, 1H), 4,24 (br s, 1H), 3,38 (dt, 1H), 3,28 (m, 1H), 1, 65 (d, 3H), 1, 59 (m, 1H), 1,49-1,32 (m, 2H) , 0,87 (d, : 3H) , 0,84 (d, 3H); MS (ESI + ) m/z 422 [M+H]\

Exemplo 3 (2R)-2-({2-Amino-5-[(1-feniletil)tio] [1,3]tiazolo[4,5-d] pirimidin-7-il}amino)-4-metilpentan-l-ol O composto do título foi obtido como uma mistura de dois diastereómeros com um rendimento de 6 7% de acordo com o método geral A a partir de (2R)-2-[(2-amino-5-mercapto[1, 3] tiazolo 33 1, 01 [4, 5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol (320 mg mmol) e (1-bromoetil)-benzeno (245 mg, 1,21 mmol). RMN de (DMSO- -d6) δ 7 ,94 (s, 2H), 7,16 (m, 2H), 7,14 (m, 2H) , 6,97 (m, 1H), 6,77 (d, , 1H), 4,74 (m, 1H) , 4, 49 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 3, 87 (m, 2H), 3,22 (m, 2H) , 1,72 (dd, 1H), 1,61 (m, 1H), 1,42 (m, 2H) , o, 87 (d, 3H), 0,85 (m, 3H); MS (ESI+) m/z 405 [M+H]+.

Exemplo 4 (2R)-2-[ (2-Amino-5-{ [ (lf?)-l-feniletil]tio} [l,3]tiazolo [4, 5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol A purificação por HPLC de (2R)-2-({2-amino-5-[(1-feniletil) tio] [1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il}amino)-4-metilpentan-l-ol (Exemplo 3) (500 mg) proporcionou o diastereómero único do titulo (150 mg). RMN de : (DMSO-de) δ 7,98 (s, 2H), 7, 45 (m, 2H), 7,32 (m 2H) , 7, 24 (m, 1H), 6,87 (d, 1H), 4, 95 (q, 1H), 4, 24 (br s, 1H) 3, 45 (m, 1H), 3, 35 (m, 1H), 1,68 (d, - 3H), 1, 62 (m, 1H), 1,42 (m 2H) , 0, 88 (d, 3H) , 0,82 (d, 3H); MS ( ESI + ) m/z 405 [M+H]+. 34

Exemplo 5 3-{ (IS) -1- [ (2-Amino-7-{ [ (IR) -1- (hidroximetil)butil] amino} [1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-5-il)tio]etil}benzonitrilo a) 3-[ (IR)-1-CloroetilJbenzonitrilo 0 composto do título foi obtido com um rendimento de 79% de acordo com o método geral C a partir de 3-[(IS)-1-hidroxietil]benzonitrilo (3,35 g, 22,8 mmol). RMN de XH (DMSO-d6) : δ 7,97 (s, 1H) , 7,82 (m, 2H), 7,60 (t, 1H), 5,40 (q, 1H), 1,80 (d, 3H) ; RMN 13C (DMSO-d6) : δ 144,1, 131,2, 131,6, 130,3, 129,9, 118,4, 111,6, 57,41, 25,5; MS (ESI + ) m/z 166 [M+H]\ b) 3-{ (IS) -1-[ (2-Amino-7- { [ (IR) -1- (hidroximetil)butil] amino}[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-5-il)tiojetil}benzonitrilo O composto do título foi obtido com um rendimento de 75% de acordo com o método geral A a partir de 2-amino-7-{[(IR)-1-(hidroximetil)butil]amino][1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidina-5(6H) -tiona (2,87 g, 10,0 mmol) e 3-[(IR)-1-cloroetil]benzonitrilo (2,31 g, 13,9 mmol). RMN de ΧΗ (DMSO-d6) : δ 8,00 (s, 2H), 7,91 (s, 1H), 7, co ÍO 1H) , 7,69 (m, 1H), 7,52 (t, 1H), 6 ,90 (d, 1H), 5, 00 (q , 1H), 4,63 (t, 1H), 4,13 (br s, 1H), 3,41 (m, 1H), 3,30 (m, 1H) , 1,66 (d, 3H), 1,57 (m, 1H), 1, 43 (m, 1H), 1,29 (m, 2H), 0,86 (t , 3H) ; RMN 13C (DMSO- d6) : δ 170, 8, 168,7, 165, 1, 155, 7, 145, 9, 132,3, 35 130.8, 130,6, 129,5, 118,7, 111,2, 63,3, 59,7, 51,8, 42,3, 33,0, 21.8, 18,8, 14,0; MS (ESI+) m/z 415 [M+H]+.

Exemplo 6 (2R)-2-{[2-Amino-5-({(15)-1-[3-(metilsulfonil)fenil] etil} tio)[l,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il]amino}-4-metil-pentan-l-ol a) (IS) -1-[3-(Metilsulfonil)fenilJetanol O composto do título foi preparado com um rendimento de 58% a partir de 1-[3-(metilsulfonil)fenil]etanona (2,00 g, 10,1 mmol) de acordo com o método geral B. MS (ESI + ) m/z 201 [M+H] +. b) 1-[(IR)-1-Cloroetil]-3-(metilsulfonil)benzeno O composto do título foi preparado com um rendimento de 21% a partir de (IS)-1-[3-(metilsulfonil)fenil]etanol (100 mg, 0,50 mmol) de acordo com o método geral C. MS (ESI + ) m/z 219 [M+H]+. 36 c) (2R)-2-{[2-Amino-5- ({(IS)-1-[3-(metilsufonil)fenil]etil} tio)[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il]amino}-4-metil-pentan-l-ol 0 composto do título foi preparado a partir de (2R)-2-[(2-amino-5-mercapto[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il) amino]4-metilpentan-l-ol (16,5 g, 55,3 mmol) e 1-[(IR)-1-cloroetil]-3-(metilsulfonil)benzeno (12,1 g, 55,3 mmol) de acordo com o método geral A. RMN de 1R (600 MHz, DMSO-d6) : δ 8,00 (m, 3H) 7,81 (m, 2H) 7,60 (t, 1H) 6,91 (d, 1H) 5,06 (q, 1H) 4,66 (t, 1H) 4,24 (br s, 1H) 3,38 (m, 1H) 3,28 (m, 1H) 3,23 (s, 3H) 1,69 (d, 3H) 1,59 (m, 1H) 1,34 - 1,46 (m, 2H) 0,86 (m, 6H); MS (ESI + ) m/z 482 [M+H] \

Exemplo 7 (2R)-2-[ (2-Amino-5-{[(IS)-1-feniletil]tio}[1, 3]tiazolo [4, 5-d]pirimidin-7-il)amino]pentan-l-ol a) [(IR)-1-Cloroetil]benzeno O composto do título foi obtido com um rendimento de 67% utilizando o método geral C a partir de (IS)-1-feniletanol (25 g, 0,20 mol). RMN de ΧΗ (CDC13) δ 7,42 (m, 2H), 7,36 (m, 2H), 7,30 (m, 1H), 5,09 (q, 1H), 1,85 (d, 3H); MS (Cl) m/z 141 [M+l]\ 37 b) (2R)-2-[(2-Amino-5-{(IS)-1-feniletil]tio}[1, 3]tiazolo [4f 5-d]pÍrimidin-7-il)amino]pentan-l-ol 0 composto do título foi obtido com um rendimento de 23% utilizando o método geral A a partir de {2R)-2-[(2-amino-5-mercapto[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]pentan-l-ol (100 mg, 0,35 mmol) e [ (IR)-1-cloroetil] benzeno (54 mg, 0,38 mmol). RMN de 1R (DMSO-d6) δ ppm 7,96 (br s, 1H) , 7,43 (d, 1H) , 7,31 (m, 2H), 7,22 (m, 1H), 6,86 (d, 1H), 4,95 (m, 1H), 4,64 (t, 1H), 4,17 (br s, 1H), 3,44 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 1,66 (d, 3H), 1,58 (m, 1H), 1,44 (m, 1H), 1,36-1,21 (m, 2H), 0,85 (t, 3H) ; MS (ESI+) m/z 390 [M+H]+.

Exemplo 8 3-{(1S)-1-[(2-Amino-7-{[(1R)-1-(hidroximetil)-3-metilbutil] amino}[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-5-il)tio]etil}benzonitrilo O composto do título foi preparado com um rendimento de 31% a partir de (2R)-2-[(2-amino-5-mercapto[1,3]tiazolo[[4,5-d] pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol (200 mg, 0,67 mmol) e 3-[(IR)-1-cloroetil]benzonitrilo (166 mg, 1,0 mmol) de acordo com o método geral A. RMN de XH (CD3OD) δ 7, 89 - 7, 76 (m, 2H) 7,57 (d, 1H) 7,49 (m, 1H) 5,12 (q, 1H) 4,42 (br s, 1H) 3,53 (m, 1H) 3,44 (m, 1H) 1,63 - 1,76 (m, 4H) 1,41 - 1,60 (m, 2H) 0,96 (t, 6H); MS (ESI+) m/z 429 [M+H]+. 38

Exemplo 9 (2.R) -2- ({2-Amino-5- [ (1-fenilpropil) tio] [1,3] tiazolo [4, 5-d] pirimidin-7-il}amino)-4-metilpentan-l-ol 0 composto do título foi sintetizado como uma mistura de dois diastereómeros pelo método geral A a partir da reacção de (2R)-2-[(2-amino-5-mercapto[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il) amino]-4-metilpentan-l-ol (30 mg, 100 pmol) com (l-cloropropil)benzeno (15,5 pL, 100 pmol) para originar 13 mg (rendimento de 31%) como um óleo. RMN de XH (CD3OD) δ 7,39 (t, 2H) 7,28 (m, 2H) 7,20 (t, 1H) 4,85 (dd, 1H) 4,57 - 4, 40 (m, 1H) 3,62 (m, 1H) 3,59 - 3,48 (m, 15 1H) 2,25 - 2,11 (m, 1H) 2,01 (m, 1H) 1,79 - 1,65 (m, 1H) 1,63 - 1,53 (m, 1H) 1,53 - 1,42 (m, 1H) 1,01-0,87 (m, 9H); MS (ESI + ) m/z 418 [M+H]+.

Exemplo 10 3-{ (1-R) -1- [ (2-Amino-7-{ [ (1R) -1- (hidroximetil) -3-metilbutil] amino}[l,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-5-il)tio]etil}benzamida a) 3-(l-Cloroetil)benzamida

Foi adicionada dietilanilina (390 pL, 2,45 mmol) a 3-(1-hidroxietil)benzamida (400 mg, 2,45 mmol) empastada em DCM (20 mL) e a mistura reaccional foi arrefecida com um banho de 39 gelo. Foi adicionado cloreto de tionilo ((255 pL, 2,47 mmol), gota a gota, e a reacção foi colocada no refrigerador durante a noite. Foi adicionada água, a mistura reaccional foi extraída duas vezes com DCM, foi lavada com uma solução de HC1 a 10%, foi neutralizada com uma solução de bicarbonato saturada, foi tratada com solução salina, foi seca (MgS04), foi filtrada e foi evaporada até à secura. O produto bruto foi recristalizado a partir de éter dietílico/hexano para originar 335 mg (rendimento de 75%) do composto do título como um sólido branco. RMN de (Clorofórmio-d) δ 7,90 (s, 1H) 7,73 (d, 1H) 7,62 (d, 1H) 7,46 (t, 1H) 5,14 (q, 1H) 1,88 (d, 3H) 1,60 (s, 2H); MS (ESI+) m/z 183, 185 [M+H]+. b) 3-{ (lR)-l-[ (2-Amino-7- { [ (IR) -1-(hidroximetil) -3-metilbutil]amino}[1, 3]tiazolo[4, 5-d]pirimidin-5-il)tio] etiljbenzamida O composto do título foi sintetizado como uma mistura de dois diastereómeros pelo método geral A a partir da reacção de (2R)-2-[(2-amino-5-mercapto[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il) amino]-4-metilpentan-l-ol (30 mg, 100 pmol) com 3-(1-cloroetil)benzamida (20 mg, 100 pmol). A separação da mistura por HPLC preparativa originou um diastereómero único (6 mg, rendimento de 13%) como um óleo. RMN de :Η (CD3OD) δ 7,99 (s, 1H) 7,73 (d, 1H) 7,69 (d, 1H) 7,41 (t, 1H) 5,15 (q, 1H) 4,43 - 4,52 (m, 1H) 3,54 (m, 1H) 3,47 (m, 1H) 1,74 (d, 3H) 1,70 (m, 1H) 1, 59 - 1, 42 (m, 2H) 0,96 (t, 6H) ; 40 MS (ESI + ) m/z 447 [M+H]+.

Exemplo 11 (2R)-2-{[2-Amino-5-({1-[3-(trifluorometil)fenil]etil}tio [l,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il]amino}-4-metilpentan-l-ol 0 composto do título foi sintetizado como uma mistura de dois diastereómeros pelo método geral A, a partir da reacção de (2R)-2-[(2-amino-5-mercapto[l,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il) amino]-4-metilpentan-l-ol (30 mg, 0,1 mmol) com 3-(1-bromoetil)trifluorometilbenzeno (15,5 pL, 0,1 mmol), para originar 38 mg (rendimento de 81%) como um óleo. RMN de 1 H (600 MHz, CD3OD) δ 7,8 1 - 7, 71 (m, 2H) 7 ',57 - 7, 44 (rr L, 2H) 5, 16 (q, 1H) 4,43 (s, 0,5H) 4,31 (s, 0,5H) 3, 59 (m, 1H) 3, 55-3 ,40 (m, 1H) 1,74 (t, 3H) 1, 69 (m, 0, ,5H) 1,63 (m, 0 ,5H) 1, 54 (m, 1H) 1,49 - 1,37 (m, 1H) 0, 96 (dd, 3H) 55 0, 86 (dd, 1, 5H) ; MS (ESI + ) m/z 472 [M+H]+. 41

Exemplo 12 (2R)-2-[{2-Amino-5-[(1-feniletil)tio][1,3]tiazolo[4,5-d] pirimidin-7-il}(metil)amino]-4-metilpentan-l-ol a) (2R) -2-[ [2-Amino-5- (benziltio) [1,3] tiazolo [4, 5-d] pirimidin-7-il] (metil)amino]-4-metilpentan-l-ol

Foram misturados 5-(benziltio)-7-cloro[1, 3]tiazolo[4,5-d] pirimidin-2-amina (1,5 g, 4,86 mmol), DIPEA (691 mg, 5,35 mmol) e (R)-N-metil-leucinol (956 mg, 7,29 mmol) em NMP (7,5 mL) . A solução resultante foi agitada, a 110 °C, sob uma atmosfera de azoto, durante 2 dias. Após arrefecimento até à temperatura ambiente a mistura reaccional foi vertida em gelo. O precipitado amarelo resultante foi recolhido por filtração, foi lavado com água e foi seco in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash sobre silica (DCM: EtOAc 50 :50 a 0:100) para originar 1,42 g (rendimento de 72%) do composto do titulo como um sólido amarelo. RMN de 1R (DMSO-de) 7,97 (br s, 2H) , 7,40 (m, 2H) , 7,28 (m, 2H), 7,21 (m, 1H), 4,73 (dd, 1H), 4,64 (br s, 1H) , 4 ,32 (br s, 2H), 3,52-3,37 (m, 2H), 3,00 (s, 3H), 1,55-1, 35 (m, 2H), 1,27 (m, 1H), 0,88 (d, 3H), 0, 80 (d, 3H); MS (ESI + ) m/z 404 [M+H]+. 42 b) (2R)-2-{ (2-Amino-5-mercapto[1, 3]tiazolo{4,5-d]pirimidin-7-il) (metil)amino]-4-metilpentan-l-ol

Foi imerso um frasco de fundo redondo de três entradas num banho de arrefecimento de gelo seco/etanol e foi equipado com um condensador de gelo seco/etanol. 0 sistema foi lavado com azoto e a amónia (aproximadamente 50 mL) foi condensada no frasco. Foi adicionado (2R)-2-[[2-Amino-5-(benziltio) [1,3]tiazolo[4,5-d] pirimidin-7-il)(metil)amino]-4-metilpentan-l-ol (1 g, 2,5 mmol) ao frasco, resultando numa solução amarela clara. Foram adicionadas pequenas porções de sódio metálico (tamanho 2-3 mm) uma a uma à mistura reaccional. Quando apareceu uma cor azul persistente (> 20 seg.), foi adicionada uma colher de NH4C1 sólido para inactivar a reacção. A amónia foi evaporada. Foi adicionada água (50 mL) e a mistura foi neutralizada com HC1 1 M (aq.) a pH 7. O sólido amarelo precipitado foi recolhido por filtração, foi lavado com água e foi seco in vácuo para produzir 630 mg do composto do titulo (rendimento de 80%). RMN de XH (DMSO-d6) δ 12,78 (br s, 1H) , 8,43 (br s, 2H) , 4,84 (br, 2 H), 3,52-3,38 (m, 2H), 3,01 (s, 3H), 1,55-1, 33 (m, 2H), 1,32-1,20 (m, 1H), 0,87 (m, 6H) ; MS (ESI + ) m/z 314 [M+H]+. c) (2R)-2-{ (2-Amino-5-[(1-feniletil) tio][1, 3]tiazolo[4, 5-d] pirimÍdÍn-7-Íl}metil)amino]-4-metilpentan-l-ol O composto do titulo foi sintetizado como uma mistura de dois diastereómeros pelo método geral A a partir da reacção de (2R)-2-[(2-amino-5-mercapto[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il) 43 (metil)amino]-4-metilpentan-l-ol (31,4 mg, 0,1 35 mmol) com 1-bromoetilbenzeno (13,5 pL, 0,1 mmol) para originar 26 mg (rendimento de 62%). RMN de XH (DMSO-d6) δ 7,96 (s, 2H) 7,43 (t, 2H) 7,32 (m, 2H) 7,23 (t, 1H) 5,02-4,92 (m, 1H) 4,83 - 4,71 (m, 1H) 4,64 (s, 1H) 3,53 - 3,38 (m, 2H) 3,01 (d, 3H) 1,68 (dd, 3H) 1,52 (m, 1H) 1,43 (m, 1H) 1,35-1,24 (m, 1H) 0,88 (d, 3H) 0,83 (d, 3H) ; MS (ESI + ) m/z 418 [M+H] +.

Exemplo 13 (2R)-2-[ (2-Amino-5-{[1-(2-clorofenil)etil]tio}[1, 3]tiazolo [4, 5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol a) l-Cloro-2- (1-cloroetil)benzeno

Foi adicionado cloreto de tionilo (1,49 g, 12,6 mmol) a 1-(2-clorofenil)etanol (1,0 g, 6,3 mmol) em tolueno (50 mL) e foi permitida a agitação da mistura à temperatura ambiente durante 2 h. Foi adicionada solução aq. de HC1 a 10% (20 mL) à mistura reaccional. A fase orgânica foi separada e foi lavada com outra porção de solução aq. de HC1 a 10%, solução salina (20 mL) e depois foi separada, foi seca e foi evaporada para proporcionar l-cloro-2-(1-cloroetil)benzeno com um rendimento de 72%. RMN de (DMSO-cM δ 7,72 (1H, d), 7,48 (1H, m) , 7,39 (2H, m), 5,59 (1H, q), 1,84 (3H, d). 44 b) (2R)-2-{ (2-Amino-5-{{1-(2-clorofenil)etil]tio}[1, 3] tiazolo[4, 5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol 0 composto do título foi obtido como uma mistura de dois diastereómeros com um rendimento de 24% de acordo com o método geral A a partir de (2J?) -2-[ (2-amino-5-mercapto [1,3] tiazolo [4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol (20 mg, 0,047 mmol) e l-cloro-2-(l-cloroetil)benzeno (10 mg, 0,057 mmol). RMN de ΧΗ ( DMSO- -de) δ 7 ,83 (2 H, m), 7,48 ( 1H, d), 7,32 (1H, m), 7, 15 (1H, m) , 7,14 i (1H, m), 6,79 (1H, d), 5 ,22 (1H, m), 4,13 (1H , m), 3,29 -3, ,17 ( : 2h, m), ,52 (3H, dd), 1, 47 (1H, m), 1,31 (1H , m), 1,25 (1H, m) , 0 ,76 (3H , dd), o, 73 (3H, dd); RMN de 13C (DMSO- d6) δ 171,18 r 169,14, 165,75, 165 ,64, 155 ,97, 140,63, 132, 62, 129 ,91 , 129, 04, , 128,96 i, 127, 94, 64 ,08, 63, 88, 51 3,59, 24 ,70, 23, 67, 22, 33, 22 ,22 , 22,01; MS (ESI+) m/z 438, 440 [M+H]+.

Exemplo 14 (2-R) -2- [ (2-Amino-5 { [1- (3-metoxifenil) etil] tio} [1,3] tiazolo [4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol a) 1-(1-Cloroetil)-3-metoxibenzeno O composto do título foi obtido com um rendimento de 59% a partir de 1-(3-metoxifenil)etanol (0,5 g, 3 mmol) e utilizando o método do Exemplo 13 (a). 45 RMN de 1H (CDC13) δ 7,22 (lH, m), 6,76 (2H, m), 6,62 (1H, dd), 4,81 (1H, q), 3,57 (3H, s), 1,62 (3H, d). b) (2R)-2-[(2-Amino-5-{{1-(3-metoxifenil)etil]tio}[1, 3] tiazolo[4, 5-d]pÍrimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol 0 composto do título foi obtido como uma mistura de dois diastereómeros com um rendimento de 25% de acordo com o método geral A a partir de (2R)-2-[(2-amino-5-mercapto[1, 3] tiazolo [4, 5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol (20 mg, 0,07 mmol) e 1-(1-cloroetil)-3-metoxibenzeno (9,7 mg, 0,06 mmol). RMN de XH (DMSO-dí) δ 7,89 (2H, s), 7,13 (1H, m) , 6,87 (2H, m) , 6,80 (1H, m) , 6,71 (1H, m) , 4,86 (1H, m) , 4,55 (1H, br s), 4,17 (1H, m), 3,64 (3H, s), 1,51 (3H, d), 1,48 (lH, m) , 1,31 (2H, m), 0,76 (6H, m) ; MS (ESI+) m/z 434 [M+H]+.

Exemplo 15 (2-R) -2- [ (2-amino-5-{ [ (15) -1-feniletil] tio} [1,3] tiazolo [4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol i) Utilizando o Processo (a) (2R)-2-[(2-Amino-5-{[(IS)-1-feniletil]tio}[l,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol 0 composto do título foi obtido com um rendimento de 42% utilizando o método geral A a partir de (2R)-2-[(2-amino-5-mercapto[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol (27 g, 90 mmol) e [(lí?)-1-cloroetil] benzeno (19 g, 135 mmol). RMN de (DMSO-dí) δ 7,95 (br s, 2H) , 7,43 (m, 2H) , 7,31 (m, 2H), 7,22 (m, 1H), 6,85 (d, 1H), 4,96 (q, 1H), 4,64 (t, 1H), 4,27 (br s, 1H), 3,44 - 3,30 (m, 2H), 1,66 (d, 3H), 1,59 (m, 1H), 1,41 (m, 2H), 0,87 (d, 3H), 0,84 (d, 3H); MS (ESI + ) m/z 404 [M+H]+. ii) Utilizando o Processo (b) a) 6-Amino-2-{[(IS)-1-feniletil]tio]pirimidin-4-ol

Foi adicionado NaH (60% em óleo) (0,5 g, 12,5 mmol) seguido por NaBH4 (40 mg, 1 mmol) a mono-hidrato de 6-amino-2- mercaptopirimidin-4-ol (1,6 g, 10 mmol) em DMF (20 mL) . Após 30 min, foi adicionado [(IR)-1-cloroetil]benzeno (1,4 g, 10 mmol) e a mistura reaccional foi agitada durante 16 h. A reacção foi concentrada in vacuo até ca. de 10 mL volume e depois foi vertida em água (ca. 50 mL) . O material sólido precipitado foi filtrado e foi lavado com água e com éter para originar o composto do titulo (1,15 g, rendimento de 46%). RMN de XH (DMSO-de) δ 7, 46-7,22 (m, 5H) , 6,53 (br s, 2H) , 4,99 (q, 1H), 4,92 (s, 1H), 1,67 (d, 3H). 47 b) 2-Amino-5-{[(IS)-1-feniletil]tio}[1, 3]tiazolo[4, 5-d] pirimidin-7-ol

Foi adicionada piridina (0,6 g, 7,6 mmol) a 6-amino-2-{[(IS)-1-feniletil]tio}pirimidin-4-ol (1 g, 4 mmol) e KSCN (1,7 g, 16 mmol) em DMF (20 mL) . A mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e foi, então, adicionado bromo (0,65 g, 4,0 mmol) numa porção. Após 2 h a mistura reaccional foi vertida em água e o precipitada cor de laranja foi filtrado e foi lavado com água. O sólido foi suspenso numa mistura de dmf (6 mL) e água (2 mL) e foi aquecido a 110 °C. Após 30 h, a mistura reaccional foi vertida em água, o precipitado amarelado foi filtrado e foi lavado com água e éter. O sólido foi seco in vacuo a 40 °C para originar o composto do titulo (0,8 g, rendimento de 65%). RMN de XH (DMSO-d6) δ 8,16 (br s, 1H) , 7, 47-7,24 (m, 5H) , 5,05 (q, 1H) , 1,71 (d, 3H) . c) l-Cloro-5-{[(IS)-1-feniletil]tio}[1,3]tiazolo[4, 5-d] pirimidin-2-amina

Foi adicionado P0C13 (1 mL) a DMF (1 mL) em dioxano (6 mL) . Foi adicionado 2-amino-5-{[(IS)-1-feniletil]tio}[1,3] tiazolo [4,5-d]pirimidin-7-ol (1 g, 3,3 mmol) à reacção numa porção. Foi adicionado POCI3 (1 mL) e a mistura reaccional foi aquecida a 80 °C, durante cerca de 30 min. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e foi vertida sobre gelo. A mistura resultante foi aquecida em refluxo durante cerca de 5 h. Foi permitido à mistura atingir a temperatura ambiente e depois foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi passada através de uma 48 camada de sílica gel e foi concentrada até à secura para originar o composto do título (1 g, rendimento de 95%). RMN de XH (DMSO-d6) δ 8,91 (br s, 2H) , 7, 47-7,20 (m, 5H), 4,95 (q, 1H), 1,69 (d, 3H) . d) 2R)-2-{ (2~amino-5-{[(IS)-1-feniletil]tio}[1,3]tiazolo [4, 5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol

Foram adicionados DIPEA (400 mg, 3 mmol) e D-leucinol (400 mg, 3,4 mmol) a 7-cloro-5-{[(IS)-1-feniletil]tio][1,3] tiazolo [4,5-d]pirimidin-2-amina (300 mg, 0,9 mmol) em NMP (6 mL) e a mistura foi aquecida a 120 °C, durante 24 h. A mistura foi vertida em água e foi extraída com acetato de etilo. A fase orgânica foi seca (MgS04), foi evaporada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (EtOAc) para originar o composto do título (200 mg, rendimento de 54%). RMN de XH (DMSO-d6) δ 7, 95 (br s, 2H), 7,43 (m, 2H), 7,31 (m, 2H), 7,22 (m, 1H), 6, . 85 (d, 1H) , 4, 96 (q, 1H), 4,64 (t, 1H), 4,27 (br s, 1H), 3,44 - 3j ,30 (m, 2H)( , 1,66 (d, 3H), 1,59 (m, 1H), 1,41 (m, 2H), 0,87 (d, 3H) , 0,84 (d, 3H); MS (ESI + ) m/z 404 [M+H] +.

Exemplo 16 (2R)-2-[(2-amino-5-{[(15)-1-feniletil]tio}[1,3]tiazolol [4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-fluoro-4-metilpentan-l-ol 49

Foi adicionado DIPEA (0,83 mL, 4,75 mmol) a uma solução de 7-cloro-5-{[(IS)-1-feniletil]tio}[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-amina (0,49 g, 1,52 mmol) e {2R)-2-amino-4-fluoro-4-metilpentan-l-ol (2 mmol) em NMP (2 mL) e a mistura reaccional foi agitada a 120 °C, durante 22 h. A purificação por HPLC proporcionou o composto do título ( 0,22 g, rendimento de 17%) • RMN de (400 MHz , CD3OD) : δ 7, 48 (m, 2H), 7,32 (m, 2H), 7, 23 (m, 1H) , 5,09 (q/ 1H), 4,66 (br s, 1H), 3,61-3,47 (m, 2H), 2, 12- -1,89 (m ., 2H), 1 ,75 (d, 3H), 1, 40 (m, 6H); MS (ESI + ) m/z 422 [M+H]\

Exemplo 17 (2.R) -2- [ (2-amino-5-{ [ (15)-1- (2-f luorofenil) etil] tio} [1,3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-fluoro-4-metilpentan-l-ol a) 6-Amino-2-{[ (IS)-1-(2-fluorofenil)etil]tio]pirimidin-4-ol

Foi adicionado NaH (60% em óleo, 1,05 g, 26,3 mmol), em porções, seguido por NaBH4 (0,099 g, 2,7 mmol) a mono-hidrato de 6-amino-2-mercaptopirimidin-4-ol (4,23 g, 26,3 mmol) em DMF (40 mL) . Após 30 minutos, foi adicionado 1-[(IR)-1-cloroetil]-2-fluorobenzeno (5,0 g, 31,5 mmol) em DMF (10 mL) e a mistura reaccional foi agitada durante 24 h. A mistura reaccional foi concentrada e repartida entre água e DCM, a fase orgânica foi seca (MgS04) e foi evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (um gradiente progressivo de MeOH 5-10% em CHC13) para originar o composto do título (5,20 g, rendimento de 75%) . 50 RMN de XH (400 MHz, DMSO-d&) : δ 7,35 (m, 1H), 7,13 (m, 1H), 6,99 (m, 2H), 6,29 (s, 2H), 5,00 (q, 1H), 4,76 (br s, 1H), 1,49 (d, 3H); MS (ESI + ) m/z 266 [M+H]+. b) 2-Amino-5-{[(IS)-1-(2-fluorofenil)etil]tio}[1;3] tiazolo[4, 5-d]pirimidin-7-ol

Foi adicionado KSCN (10,76 g, 110,7 mmol) e piridina (3,9 mL, 49,2 mmol) a 6-amino-2-{[(IS)-1-(2-fluorofenil) etil] tio}pirimidin-4-ol (6,53 g, 24,6 mmol) em DMF (70 mL) . A mistura foi arrefecida a 0 °C, e foi adicionado Br2 gota a gota. Após 3,5 h a mistura reaccional foi vertida em água e o precipitado formado foi recolhido por filtração. O sólido foi suspenso numa mistura de DMF (75 mL) e água (15 mL) e foi aquecido a 120 °C durante 8 h. A mistura reaccional foi vertida em água e o sólido foi recolhido por filtração e foi seco, in vacuo, a 40 °C, para originar o composto do titulo (6,42 g, rendimento de 81%) . MS (ESI + ) m/z 323 [M+H]+. c) 7-Cloro-5-{[({15)-1-(2-fluorofenil)etil]tio} [1,3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-amina

Foi adicionado P0C13 (2,77 mL, 29,7 mmol) a DMF (3,07 mL, 39,6 mmol) em dioxano (30 mL) . Após 30 minutos esta mistura foi adicionada a uma solução de 2-amino-5-{[(IS)-1-(2-fluorofenil) 51 etil]tio}[1, 3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-ol (6,38 g, 19,8 mmol) em dioxano (100 mL) . Após 30 minutos foi adicionado P0C13 (2,77mL, 29,7 mmol), a mistura reaccional foi aquecida a 80 °C, durante 2 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, foi cuidadosamente adicionada água (20 mL) e a mistura resultante foi agitada a 80 °C durante 30 minutos e à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reaccional foi vertida em água e o precipitado formado foi recolhido. O sólido foi purificado por cromatografia em coluna flash (MeOH a 5% em CHC13) para originar o composto do titulo (5,91 g, rendimento de 88%). RMN de (400 MHz, DMSO-df) : δ 8,94 (s, 2H) , 7,58 (m, 1H) , 7,32 (m, 1H), 7,20 (m, 2H), 5,22 (q, 1H), 1,71 (d, 3H); MS (ESI + ) m/z 341 [M+H]+. d) (2R)-2-[ (2-Amino-5-{ [ (IS) -1-(2-fluorofenil) etil] tio} [1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il) amino]-4-fluoro-4-metilpentan-l-ol

Foi adicionado DlPEA (2,09 mL, 12,0 mmol) a 7-cloro-5-{[(IS)-1-(2-fluorofenil)etil]tio}[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimiditn-2-amina (1,36 g, 4,0 mmol) e (2R)-2-amino-4-fluoro-4-metilpentan-l-ol (4 mmol) em NMP (3 mL). Após agitação da mistura reaccional, a 120 °C, durante 22 h esta foi vertida em água e o precipitado foi recolhido por filtração. O sólido foi purificado por cromatografia em coluna flash (um gradiente progressivo de MeOH a 5%-10% em CHC13) e HPLC preparativa para originar o composto do titulo (0,22 g, rendimento de 13%). 52 RMN de XH (400 MHz, CD3OD) δ 7,35 (m, 1H), 7,03 (m, 1H) 6,91 (m, 2H), 5,15 (q, 1H), 4,40 (m, 1H), 3,35-3-21 (m, 2H) 1,82-1,72 (m, 2H), 1,50 (d, 3H), 1,17 (m, 6H); MS (ESI + ) m/z 440 [M+H]+.

Exemplo 18 (2R)-2-[(2-Amlno-5-{[(15)-1-(3—fluorofenil)etil]tio}[1,3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol a) 1-[(IR)-1-Cloroetil]-3-fluorobenzeno O composto do título foi obtido com um rendimento de 49% com excesso enantiomérico de 94,5% utilizando o método geral C a partir de (IS)-1-(3-fluorofenil)etanol (4,20 g, 30 mmol). RMN de XH (300 MHz, DMSO-d6) δ 7, 47-7, 30 (m, 3H) ; 7,16 (t, 1H); 5,36 (q, 1H); 1,78 (d, 3H). b (2R)-2-[(2-Amino-5-{[(IS)-1-(3-fluorofenil)etil]tio}[1, 3] tiazolo[4, 5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol O composto do titulo foi obtido com um rendimento de 61% utilizando o método geral A a partir de (2í?)-2-[ (2-amino-5-mercapto[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol (0,30 g, 1,0 mmol), 1-[(IR)-1-cloroetil]-3fluorobenzeno (0,17 g, 1,1 mmol) e NaBH4 (0,019 g, 0,5 mmol). 53 RMN de XH (400 MHz, CD3OD) : δ 7,23 (m, 2H), 7,13 (m, 1H), 6,86 (m, 1H), 5,01 (q, 1H), 4,38 (m, 1H), 3,43 (m, 2H), 1,63 (d, 3H), 1,44 (m, 2H), 0,88 (m, 6H); MS (ESI+) m/z 422 [M+H]+.

Rastreios Farmacológicos

Materiais A fractalcina humana recombinante (hCX3CLl) e a interleucina humana recombinante 8 (IL-8 ou hCXCL8) foram adquiridas de

PeproTech Inc., RU. A [125i] -fractalcina (humana) recombinante e hIL-8 com a actividade especifica de 2200 Ci/mmol, foram adquiridas de NEN® Life Science Products, Inc., RU. FLU04-AM foi adquirido de Molecular Probes, US. Todos os outros compostos químicos foram de grau analítico. Células O ADNc completo do CX3CR1 humano (número de acesso GenBank U20350) foi extraído a partir de ARNm de cérebro humano (Superscript, Life Technologies) e foi ligado no vector pCR-Blunt II TOPO (InVitrogen). Foi isolada a inserção correspondente a hCX3CRl e foi adicionalmente subclonada em pcDNA3.1zeo. O ADN plasmídico foi preparado utilizando Plasmid Midi Kit (Qiagen). Foi, então, introduzido o plasmídeo de expressão para hCX3CRl na linha celular 293 de suspensão de rim embrionário humano (HEKS) contendo um vector para a expressão estável de uma proteína G quimérica Gaqi5, utilizando o Superfect 54

Transfection Reagent (Qiagen) de acordo com o protocolo do fabricante. Foi produzido um clone estável utilizando selecção com zeocina (500 pg/mL) e higromicina (100 pg/mL). Para aplicações adicionais as células foram mantidas em meio de Dulbecco com modificação de Eagle/mistura de nutrientes F12 (DMEM/F12) contendo piridoxina e suplementado com soro bovino fetal a 10% (v/v), L-glutamina 2 mM, penicilina 100 U/mL e estreptomicina 100 mg/mL, zeocina 250 pg/mL e higromicina 100 pg/mL.

As células expressando CXCR2 humano obtidas de AstraZeneca Charnwood são cultivadas em EMEM contendo Glutamax e suplementado com FBS a 10% (de PAA, Áustria), aminoácidos não essenciais a 1% (neaa), penicilina 100 U/mL e estreptomicina 100 pg/mL (PEST) e geneticina/G418 500 pg/mL.

Preparação das membranas

As células são cultivadas a 37 °C e C02 a 5% e são recolhidas numa confluência de 60-80% em tampão contendo Tris-HCl 10 mM pH 7,4, EDTA 5 mM, bacitracina 0,1 mg/mL. As células são centrifugadas a 300 x g durante 10 min e o sedimento é ressuspenso em tampão de recolha (Tris-HCl 10 mM, pH 7,4, ácido etilenodiaminatetra-acético (EDTA) 5 mM e bacitracina 0,1 mg/mL), são reunidas e são homogeneizadas utilizando um homogeneizador Dounce. O homogeneizado é centrifugado a 48000 xg durante 10 min e é ressuspenso em tampão de recolha utilizando Ultra-Turrax T8. As aliquotas de membrana são armazenadas a -80 °C. A concentração de proteína foi determinada em placas de microtitulação como descrito por Harrington (1990, Anal.

Biochem. 186, 285 - 287) . 55

Ensaio de Ligação ao receptor in vitro

Foram realizados estudos de competição de ligação de 1 oc [ I] fractalcma em placas de 96 poços profundos de 2 mL (Beckman, Alemanha) num volume total de 1000 pL/poço. Cada poço continha [ I]-fractalcina 10 pM e membrana equivalente a concentração de receptor de 1 pM em tampão de ensaio (Hepes-KOH 50 mM, pH 7,4, MgCl2 10 mM, EDTA 1 mM, gelatina a 0,1% (p/v) ) . Foram pré-dissolvidas dez concentrações (2 pontos/unidade log) dos compostos de teste em DMSO e foram adicionadas para atingir uma concentração final de DMSO a 1% (v/v). O ensaio foi iniciado com a adição de membranas e foi incubado a 25°C, durante 24 h. As reacções foram inactivadas por filtração rápida através de filtros de fibra de vidro Whatman GF/B pré-tratados com polietilimina 0,3% e lavagem subsequente com tampão gelado (Hepes-KOH 10 mM pH 7,4, NaCl 500 mM) utilizando um colector de ligação de receptor Brandel. Foi adicionada mistura de cintilação e a radioactividade foi determinada num contador de cintilação líquida Packard 2500TR. (Perkin Elmer, EUA)

Os estudos de competição de ligação [125I]-hIL-8 são realizados em singlicatos em isoplacas de 96 poços de fundo branco transparente com um volume final de 200 pL e cada poço contém [125l]-hiL-8 150 pM (actividade específica de 2200 Ci/mmol), preparação de membrana-SPA equivalente a receptores 20 pM e 1,5 mg de SPA-esferas em tampão de ensaio [HEPES-KOH 50 mM, pH 7,4, MgCl2 10 mM, EDTA 1 mM, gelatina 0,5% 56 (p/v)]. Os compostos de teste foram tratados como acima. A ligação não-especifica é determinada na presença de hlL-8 não-marcado 500 nM. É utilizado o agonista hIL-8 (uma curva de resposta à concentração de 3 nM a 30 nM) , como composto de referência em cada momento de teste. A curva de péptido não contém DMSO. A reacção de ligação é iniciada por adição de 140 pL de preparação de membrana-SPA e as amostras são incubadas no escuro à TA durante 4 h. As placas de ensaio são contadas num contador de cintilação liquida (Wallac MicroBeta® TriLux 1450 de Perkin Elmer, EUA).

Ligação de [35S] GTPyS

Os estudos ligação GTPyS foram realizados em duplicado em placas de microtitulação de fundo transparente com 10 concentrações do inibidor (2 conc./unidades log) diluídas em DMSO (conc. final 1%) e à temperatura ambiente. Foram adicionadas membranas expressando o receptor hCX3CRl (concentração final de 20 pg proteína/poço) em conjunto com esferas SPA (concentração final de 1 mg/poço) todas suspensas em tampão de ligação GTPyS (Tris-HCl 50 mM, NaCl 100 mM, gelatina a 0,1%, 15 pg de saponina/mL e GDP 3 pM, pH 7,4 à TA) . As membranas, as esferas SPA e os fármacos foram pré-incubados durante 30 min, antes da adição de fractalcina 310 pM para estímulo máximo. A actividade basal foi definida como a actividade verificada sem estímulo com fractalcina (tampão de ligação GTPyS) . Após mais 30 min a reacção foi iniciada com a adição de [35S]GTPyS a uma concentração final de 0,1 nM e com um volume de ensaio final de 0,2 mL. A experiência foi terminada após 30 minutos por centrifugação a 2000 rpm durante 2x5 minutos 57 (direcções diferentes) e a radioactividade foi determinada num contador de cintilação líquida (Wallac MicroBeta® TriLux 1450) .

Resultados

Os dados de ligação ao receptor dos compostos seleccionados da presente invenção são apresentados na Tabela 1. Os dados correspondentes para compostos de referência são mostrados na Tabela 2. A comparação entre os dados nas Tabelas 1 e 2 mostram, de um modo evidente, que os compostos da presente invenção em que R1 representa Me ou Et são tanto antagonistas mais potentes para o receptor CX3CRl como são antagonistas menos potentes para o receptor CXCR2 do que os compostos de referência correspondentes em que R1 representa H. É esperado que essa selectividade intensificada no que respeita ao antagonismo do receptor CX3CR1 resulte num benefício terapêutico significativo.

Tabela 1

58 (continuação)

Composto Ki nM CX3CR1 CXCR2 "Yfcn ch3 nh Exemplo 3 OO 00 3428 Π^γΎ^ΟΗ CHj NH f· Exemplo 13 5,9 5655 ^γγ-0Η ch3 nh hMJ Ϊ Γ3 N-^N^S^YyCN Exemplo 8 14 4210 NH x* Exemplo 7 52 1143 59

Tabela 2

Composto Ki nM CX3CR1 CXCR2 ch3 nh "*-CXX ^ WO 00/09511 Exemplo 70 48 531 h3 CyV^on ch3 nh η,νΗΤΧ ci/Así^ WO 02/076990, Exemplo 6 51 1809 Η3°γ^γ^0Η CH, NH /•γ^Ν Η!ΝΛΙα-0-“ WO 02/076990, Exemplo 37 156 1978 H3CS/\^oh NH h^YS ΝΛΝΛ5'^0 Este pedido, Exemplo 1 (b) 592 540

Lisboa, 6 de Janeiro de 2011 60

Claims (18)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula (I)

   (D R1 representa CH3 ou CH3CH2; R2 representa H, 2-F, 2-C1, 3-F, 2 3-OCH3, 3-CN, 3-CF3,
2. 2. Composto de acordo com a Reivindicação 1, em que R3 representa H. 1 3. Composto de acordo com a Reivindicação 1 ou a Reivindicação 2, em que R1 representa CH3.
3. 3-CONH ou 3-S02CH3; R3 representa H ou CH3; R4 representa H ou CH3; e R5 representa H; ou, quando R4 é CH3, R5 representa H ou F; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
4. 4. Composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 3, em que R2 representa H, 2-F ou 3-CN.
5. 5. Composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 4, em que R4 representa H.
6. 6. Composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 4, em que R4 representa CH3.
7. 7. Composto de acordo com a Reivindicação 6, em que R5 representa F.
8. 8. Composto de acordo com a Reivindicação 6, em que R5 representa H.
9. 9. Composto de acordo com a Reivindicação 1, em que R1 representa CH3; R2 representa H, 2-F ou 3-CN; R3 representa H; R4 representa H ou CH3; e R5 representa H.
10. 10. Composto de fórmula (I) de acordo com a Reivindicação 1, que é: (2R)-2-[(2-amino-5-{[(IS) -1-(2—fluorofenil)etil]tio} [1.3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]pentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[(IS)-1-(2-fluorofenil)etil]tio} [1.3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol; 2 (2R)-2-({2-amino-5-[(1-feniletil)tio] [1,3]tiazolo[4,5-d] pirimidin-7-il}amino)-4-metilpentan-l-ol; (2í?) -2- [ (2-amino-5-{ [ (1R) -1-feniletil] tio [1,3] tiazolo [4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol; 3-{ (IS)-1-[ (2-amino-7-{ [ (li?) —1 — (hidroximetil) butil] amino}[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-5-il)tio]etil} benzonitrilo; (2i?) —2 — { [2-amino-5-({ (15)-1-[3-(metilsulf onil) fenil] etil}tio) [1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il]amino}-4-metilpentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[ (15)-1-feniletil]tio}[1,3]tiazolo [4,5-d]pirimidin-7-il]amino]pentan-l-ol; 3-{ (15) -1- [ (2-amino-7-{ [ (li?) -1- (hidroximetil) -3-metilbutil]amino[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-5-il)tio] etil}benzonitrilo; (2i?) —2— ({2-amino-5- [ (1-fenilpropil) tio] [1,3] tiazolo [4,5-d]pirimidin-7-il}amino)-4-metilpentan-l-ol; 3 —{1—[(2-amino-7-{[(1R)-1-(hidroximetil)-3-metilbutil] amino}[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-5-il)tio] etil} benzamida; (2i?) -2-{ [2-amino-5- ({1- [3- (trif luorometil) fenil] etil} tio)[1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il]amino}-4-metilpentan-l-ol; 3 (2R)-2-[{2-amino-5-[(1-feniletil)tio] [1,3]tiazolo[4,5-d] pirimidin-7-il}(metil)amino]-4-metilpentan-l-ol; (2í?)-2-[ (2-amino-5-{ [1-(2-clorofenil) etil] tio} [1,3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[1-(3-metoxifenil)etil]tio}[1,3] tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol; {2R)-2-[(2-amino-5-{[(IS)-1-feniletil]tio}[1,3]tiazolo [4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[(IS)-1-feniletil]tio}[1,3]tiazolo [4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-f luoro^-metilpentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[(IS)-1-(2-fluorofenil)etil]tio} [1, 3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-fluoro-4-metilpentan-l-ol; (2R)-2-[(2-amino-5-{[(IS)-1-(3-fluorofenil)etil]tio} [1,3]tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il)amino]-4-metilpentan-l-ol; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
11. 11. Composto de fórmula (I), de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização como um medicamento.
12. 12. Formulação farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I), como definido em qualquer uma das 4 Reivindicações 1 a 10 ou um seu sal f armaceuticamente aceitável, em mistura com um diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.
13. 13. Utilização de um composto de fórmula (I) como definido em qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, na preparação de um medicamento para o tratamento ou a profilaxia de doenças ou patoloqias humanas em que é benéfico o antaqonismo do receptor CX3CR1.
14. 14. Utilização de um composto de fórmula (I) como definido em qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, na preparação de um medicamento para o tratamento ou a profilaxia de distúrbios neurodegenerativos, doença desmielinizante, distúrbios ateroscleróticos cardio e cerebrovasculares, doença arterial periférica, artrite reumatóide, doenças pulmonares tais como COPD, asma ou dor.
15. 15. Utilização de um composto de fórmula (I) como definido em qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, na preparação de um medicamento para o tratamento ou a profilaxia da esclerose múltipla.
16. 16. Utilização de um composto de fórmula (I) como definido em qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, na preparação de um medicamento para o tratamento ou a profilaxia da aterosclerose por modificação da composição das placas de 5 forma a reduzir o risco de de ruptura de placas e de eventos aterotrombóticos.
17. 17. Utilização de um composto de fórmula (I) como definido em qualquer uma das Reivindicações 1 a 10 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, na preparação de um medicamento para o tratamento ou a profilaxia da aterosclerose prevenindo e/ou reduzindo a formação de novas lesões ou placas ateroscleróticas e/ou prevenindo ou retardando a progressão das lesões e placas existentes.
18. 18. Processo de preparação de um composto de fórmula (I), como definido em qualquer das Reivindicações 1 a 10 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que o processo compreende: a) fazer reagir um composto de fórmula (II):

    em que R3, R4 e R5 são como definidos na fórmula (I); com um composto de fórmula (III): 6

    em que R1 e R2 são como definidos na fórmula (I) e L1 representa um grupo abandonante; ou b) faz reagir um composto de fórmula (IV)

    em que R1 e R2 são como definidos na fórmula (I) e L2 representa um grupo abandonante; com um composto de fórmula (V)

    R R4 R3- em que R3, R4 e R5 são como definidos na fórmula (I); 7 e quando necessário converter o composto resultante de fórmula (I) ou um outro seu sal, num seu sal farmaceuticamente aceitável; ou converter o composto resultante de fórmula (I) num composto adicional de fórmula (I); e, quando pretendido, converter o composto resultante de fórmula (I) num seu isómero óptico. Lisboa, 6 de Janeiro de 2011 8