PT1809238E

PT1809238E - Emulsões oftálmicas contendo um agente imunossupressor

Info

Publication number: PT1809238E
Application number: PT05802097T
Authority: PT
Inventors: Betty Philips; Severine Bague; Laura Rabinovich-Guilatt; Gregory Lambert
Original assignee: Novagali Pharma Sa
Priority date: 2004-11-09
Filing date: 2005-10-10
Publication date: 2009-02-09
Also published as: US20070248645A1; CN101056615A; ATE412400T1; IL182897A; EP1655021A1; NZ554929A; IL181446A0; US8298568B2; DE602005012136D1; IL190497A0; JP5894202B2; DK1809237T3; US8298569B2; IL190497A; JP2012162549A; ES2314354T3; ATE412401T1; JP2012149102A; ZA200703751B; ATE498392T1

Description

ΡΕ1809238 1

DESCRIÇÃO "EMULSÕES OFTÁLMICAS CONTENDO UM AGENTE IMUNOSSUPRESSOR"

Esta invenção refere-se a emulsões oftálmicas óleo em água, incluindo um agente imunossupressor como um agente activo, num veiculo especifico contendo um óleo e tiloxapol e sendo a dita emulsão livre de óleo de rícino e sendo adequada para o tratamento de condições oftalmológicas, particularmente de doenças do olho seco. A doença do olho seco, no significado desta invenção, refere-se a qualquer condição relacionada com a secura ocular e/ou deficiência lacrimal, incluindo, mas não limitado a condições relacionadas com uma evaporação patológica de fluido da superfície da córnea, ou condições relacionadas com o filme lacrimal deficiente, ou mais na generalidade qualquer secura córnea ou conjuntiva, a qual pode ser devida a produção insuficiente de lágrimas e a condições que lhe resultam, como seja queratite da córnea ou erosão do epitélio da córnea. Por exemplo, cerato-conjuntivite seca (KCS), cerato-conjuntivite seca atópica (AKS) e cerato-conjuntivite sezonal (VKC) são doenças do olho seco.

As ciclosporinas são uma grande classe de compostos peptídicos tendo variadas aplicações farmacológicas, 2 ΡΕ1809238 como sejam aplicações imunossupressoras e anti inflamatórias. As ciclosporinas incluem ciclosporina A, B, C e D. A ciclosporina mais vastamente investigada é a ciclosporina A e derivados da ciclosporina A. Outros agentes imunos-supressores comuns são sirolimus ou tacrolimus e seus derivados .

As emulsões oftálmicas óleo em água têm sido descritas e entre elas as emulsões comercializadas pela Allergan sob o nome comercial Restasis® (emulsão oftálmica de ciclosporina 0,05%). A US 4.839.342 descreve a utilização de ciclosporina para o tratamento de cerato-conjuntivite seca (KCS) imune e um método de aumentar a produção de lágrimas para um olho deficiente em lágrimas, em particular dirigido a um doente sofrendo de uma disfunção das glândulas lacrimais mediada imunologicamente. 0 método descrito neste doente inclui a administração de ciclosporina, preferivelmente ciclosporina A, com um excipiente farmacológico sendo azeite, óleo de jinguba, óleo de ricino ou óleo mineral.

Shulin Ding e Orest Olejnik têm um póster publicado no encontro anual AAPS em 3 de Novembro de 1997; este documento refere-se a emulsões óleo em água baseadas em óleo de ricino utilizando 0,1 até 0,4% de ciclosporina e tendo uma razão em peso ciclosporina/óleo de 0,08. Este póster publica que a concentração em ciclosporina A no óleo é optimizada no nivel de 7,4% p/p o qual está abaixo da 3 ΡΕ1809238 solubilidade da ciclosporina no específico veículo oleoso óleo de rícino (10% p/p). W02003/053405 publica uma emulsão a ser aplicada de forma tópica a um olho incluindo ciclosporina A, óleo de rícino e Pluronic F-68. WO2005/032577 descreve um método para tratamento de um olho de um humano incluindo a administração de uma emulsão incluindo menos do que 0,1% de ciclosporina e tendo uma razão em peso ciclosporina/óleo de rícino menor do que 0,8.

Apesar desta aplicação de patente anteriormente citada descrever outros óleos, não é tão óbvio para um especialista na técnica que a ciclosporina tenha o mesmo comportamento em qualquer veiculo oleoso, porque não tem a mesma solubilidade em todos os óleos e a biodisponibilidade da ciclosporina num veiculo oleoso não dá informação da sua biodisponibilidade noutro veiculo oleoso.

Uma emulsão é um sistema consistindo em duas fases líquidas imisciveis, uma das quais, em pequenas goticulas, é dispersa em toda a outra, sendo o sistema estabilizado por um terceiro componente, o agente emulsionante. As emulsões são inerentemente instáveis e os emulsionantes são essenciais tanto para a sua formação inicial como estabilidade a longo termo. 4 ΡΕ1809238

Devido ao seu pequeno tamanho de gotícula, as submicro ou nano-emulsões podem parecer transparentes e o movimento Browniano evita a sedimentação ou formação de creme, oferecendo assim estabilidade aumentada. A instabilidade de uma emulsão irá aparecer como uma separação de fases devido a formação de creme (diferenças de densidade), maturação de Ostwald (desproporcionação) floculação (agregação através de colisão interpartícuias) e coalescência (fusão de goticulas separadas). Uma distinção importante é que a floculação é muitas vezes reversível enquanto que a coalescência não é. O processo de coalescência de goticulas é a via normal na qual uma emulsão engrossa com o tempo, i.e., o tamanho de partícula média da gotícula aumenta aquando do armazenamento. A presença de agregados maiores promove a crema-gem mais rapidamente e facilita assim a coalescência. Isto é especialmente verdade para os sistemas polidispersos em que diferentes velocidades de cremagem produzem velocidades de encontro de goticulas melhoradas. Como consequência, a distribuição de tamanho de gotícula de uma emulsão governa as propriedades da emulsão como seja a estabilidade a longo prazo.

Portanto, uma população monomodal de goticulas tem o benefício da estabilidade aumentada além da uniformidade do conteúdo do fármaco a qual é essencial nas 5 ΡΕ1809238 aplicações farmacológicas para a administração de uma dose de fármaco correcta.

Apesar das formulações anteriores da técnica, como seja a Restasis®, serem correntemente úteis no tratamento de condições para as quais estão disponíveis poucos tratamentos, é conhecido que a biodisponibilidade das formulações anteriores da técnica não é óptima e uma das inconveniências conhecidas da Restasis®, por exemplo, é que pode levar várias semanas a fazer efeito totalmente. Adicionalmente, as emulsões de ciclosporina baseadas em óleo de rícino como seja a Restasis® apresentam uma população de gotículas bimodal (Ding, abstract AAPS 1997). Espe-ra-se que tal formulação tenha vida de prateleira diminuída como um resultado da coalescência das gotículas de óleo.

Existe por isso ainda necessidade de soluções alternativas para tratamento de condições de olho seco, com emulsões tendo pelo menos propriedades de estabilidade físico-químicas semelhantes e biodisponibilidade melhorada relativamente ao fármaco. No sentido desta invenção, a biodisponibilidade significa a percentagem do fármaco que pode ser detectado no tecido ocular alvo depois da sua administração. A detecção do fármaco pode ser conseguida de forma farmacológica (quantificação de uma resposta biológica à ciclosporina) de forma fármaco cinética (quantificação da concentração actual de fármaco). 6 ΡΕ1809238

Além disso, doentes que sofrem de doenças de olho seco têm olhos muito sensíveis e é um objectivo desta invenção providenciar uma composição providenciando conforto bem como terapia. É um objectivo desta invenção providenciar emulsões oftálmicas que incluam partículas coloidais. De acordo, as emulsões desta invenção incluem uma combinação de substâncias, que lhe permitem responder a ambos os requisitos de estabilidade e biodisponibilidade.

Assim, esta invenção refere-se a emulsões oftálmicas as quais incluem partículas coloidais tendo um núcleo oleoso rodeado por um filme interfacial, incluindo a dita emulsão pelo menos um agente imunossupressor, seleccionado preferivelmente a partir do grupo consistindo em ciclos-porina, sirolimus, tacrolimus, num veículo incluindo um óleo e tiloxapol e estando a dita emulsão livre de óleo de rícino.

Os inventores verificaram surpreendentemente que a utilização de MCT, um óleo vegetal seleccionado entre todos, providencia estabilidade inesperada e biodisponibilidade a emulsões oftálmicas contendo ciclosporina. Os inventores verificaram também que a utilização de MCT melhora a solubilização da ciclosporina, que pode ter um papel no melhoramento observado da biodisponibilidade da ciclosporina nas emulsões da invenção (Exemplos 1-6) . De 7 ΡΕ1809238 acordo com uma forma de realização da invenção, a quantidade de MCT é pelo menos 50% em peso de MCT por peso do conteúdo total de óleo da emulsão. De acordo com uma forma de realização da invenção preferida, o conteúdo de óleo da emulsão é 100% MCT. De forma vantajosa, a quantidade de MCT é desde 0,5 até 4%, preferivelmente 0,9 até 3%, mais preferivelmente até 2% p/p da emulsão.

De acordo com uma forma de realização da invenção preferida, a quantidade de tiloxapol é menos do que 1%, preferivelmente incluído entre 0,01 até 0,6% por peso do peso total da emulsão.

Ainda mais surpreendente, os inventores verificaram que MCT quando combinado com tiloxapol providencia ainda melhores resultados em termos de biodisponibilidade de um agente imunossupressor (Exemplo 7) . Os inventores demonstraram um efeito sinergético de tiloxapol e MCT numa emulsão oftalmológica da invenção contendo um agente imunossupressor, especialmente ciclosporina, sirolimus ou tacrolimus.

Finalmente, WO2005/032577 descreve emulsões baseadas em 1,25% de óleo de rícino para as quais aumentando a quantidade de ciclosporina de 0,05% para 0,1% (e portanto a razão CsA/óleo desde 0,04 para 0,08) não aumenta a eficácia global no tratamento da doença do olho seco. Contrariamente a este ensinamento, os inventores verifi- ΡΕ1809238 caram inesperadamente que, quando aumentavam a quantidade de agente imunossupressor nas emulsões da invenção, uma quantidade de fármaco cada vez maior é transferida para o alvo ocular (ver exemplo 8); isto significa que as emulsões da invenção não estão limitadas a uma razão especifica do agente imunossupressor/óleo. Assim, as emulsões da invenção tornam possível aumentar as quantidades terapêuticas de fármacos a serem administrados ao local alvo, aumentando assim os valores terapêuticos do agente imunossupressor utilizado.

De acordo com uma forma de realização da invenção, a emulsão pode ainda incluir quaisquer outros componentes oleosos, especialmente um ou mais óleos seleccio-nados a partir do grupo consistindo em azeite, óleo de soja, milho, mineral, de algodão, de cártamo, sésamo. As emulsões estão livres de óleo de rícino.

Numa forma preferida de realização da invenção, a emulsão é aniónica. De acordo com uma forma preferida de realização, a emulsão da invenção inclui um ou mais componentes seleccionados entre um grupo consistindo em fosfolípidos, ácido eólico e seus derivados, carboximetil-celuloses de metal, carboximetil-hidroxiceluloses de metal, carboximetilamidos de metal, carboximetil-hidroxietilamidos de metal, poliacrilamidas hidrolisadas e poliacrilonitrilos heparina gucoaminoglicanos ácido hialurónico sulfato de condroitina, sulfato de dermatano, péptidos e polipéptidos ácido algínico, homopolímeros e co-polímeros de alginatos 9 ΡΕ1809238 de metal de um ou mais de: acrilatos e metacrilatos metálicos dos ácidos acrílicos e metacrílicos ácido vinil-sulfónico, vinilsulfonatos de metal, amino ácidos, como sejam ácido aspártico, ácido glutâmico e semelhantes sais metálicos de amino ácidos p-estirenossulfonato metálico do ácido p-estirenossulfónico, ácidos 2-metacriloiloxietil-sulfónico, 2-metacriloiloxi-etilsulfonatos metálicos, 3-metacriloiloxi-2-hidroxi-propilsulfonatos metálicos dos ácidos 3-metacriloiloxi-2-hidroxipropilsulfónicos, 2-acril-amido-2-metil-propano-sulfonatos metálicos dos ácidos 2-acrilamido-2-metil-propanossulfónicos alilsulfonatos metálicos do ácido alilsulfónico e semelhantes.

Numa forma preferida de realização da invenção, a emulsão é catiónica. Nesta forma de realização, é preferido que a concentração do agente catiónico esteja compreendida entre 0,001 e 0,1% p/p, preferivelmente entre 0,002 e 0,05% p/p e ainda mais preferido entre 0,003 e 0,03% p/p. Esta segunda forma de realização é particularmente preferida porque verificou-se que a carga catiónica da emulsão melhora a biodisponibilidade da ciclosporina contida na emulsão. De forma vantajosa, a emulsão oftálmica catiónica contendo ciclosporina da invenção é uma emulsão do tipo óleo em água, a qual inclui partículas coloidais tendo um núcleo oleoso rodeado por um filme interfacial, incluindo a dita emulsão pelo menos um agente catiónico, pelo menos um tensioactivo não iónico, tendo a dita emulsão um potencial zeta positivo. De acordo com uma forma preferida de realização, a emulsão oftálmica catiónica da invenção 10 ΡΕ1809238 apresenta os requisitos do Teste A da estabilidade do potencial zeta como se descreve em seguida: O Teste A consiste na medição da estabilidade do potencial zeta da emulsão sob condições de stress térmico. O potencial zeta da emulsão é medido a T=0, i.e., logo a seguir à preparação da emulsão, sendo o valor obtido chamado Z0. Armazenaram-se à temperatura de 80 °C os frasquinhos de vidro (Tipo 1) com 10 mL de capacidade efectiva contendo entre 5-10 mL de emulsão e selados sob atmosfera de azoto (sem borbulhar).

Em seguida ao T=7 dias mediu-se o potencial zeta Z7 dias ·

Em seguida ao T=15 dias mediu-se o potencial zeta Z15 dias- Calculou-se em seguida o valor ôA=Z7h-Z0 ou Zi5h-Z0.

Para cada medição do potencial zeta, operou-se como se segue:

Determinou-se o potencial zeta da superfície das gotículas da emulsão por mobilidade electroforética numa montagem tal como um Malvern Zetasizer 200 (Malvern Instruments, UK) equipado com programa adequado e calibrado com o padrão fornecido.

Diluiu-se a emulsão em água duplamente destilada, 11 ΡΕ1809238 se necessário, para se obter a intensidade de dispersão permitindo a detecção óptima das partículas. A velocidade de contagem da amostra deve estar entre 100 até 1000 KCps, em detecção homódina (se se utilizar detecção heteródina, deve ser deduzida a contribuição do feixe de referência). São realizados à temperatura de 25°C três medições consecutivas utilizando uma unidade de células constante de 150mV. A mobilidade electroforética é convertida em valores de potencial zeta através da equação de Smoluchowsky, utilizando as constantes dieléctricas e viscosidade da água. 0 valor medido corresponde à média dos 3 valores obtidos.

Considerou-se que a emulsão apresenta os requisitos da estabilidade do potencial zeta do Teste A se §A é inferior ao desvio padrão das medições, preferivelmente inferior a 10 mV e ainda mais preferivelmente inferior a 5 mV.

Numa forma preferida de realização da invenção, a emulsão da invenção contém ciclosporina A. De forma vantajosa, a emulsão da invenção contém desde 0,01 até 0,4% p/p, preferivelmente 0,05 até 0,3% de agente imunos-supressor, preferivelmente ciclosporina, mais preferivelmente ciclosporina A. De acordo com outra forma de realização da invenção, a emulsão inclui uma quantidade de tacrolimus de 0,01 até 0,3% p/p, preferivelmente 0,05 até 0,2% p/p da emulsão. De acordo com ainda outra forma de realização da invenção, a emulsão inclui uma quantidade de 12 ΡΕ1809238 sirolimus de 0,01 até 0,3% p/p, preferivelmente 0,05 até 0,2% p/p da emulsão.

Noutra forma preferida de realização da invenção, a razão em peso do agente imunossupressor para o óleo é desde 0,0125 até 0,1. Noutra forma particular de realização da invenção, a emulsão de razão em peso do agente imunossupressor para o óleo é desde 0, 083 até 0,1. Noutra forma particular de realização da invenção, a emulsão de razão em peso do agente imunossupressor para o óleo é desde 0,0125 até 0,05. De forma vantajosa, a emulsão da invenção é submicrónica e numa forma muito preferida de realização da invenção, submicrónica monomodal, que significa que as partículas colóidais da invenção são muito homogéneas no seu tamanho igual ou inferior a 1 μιη, no facto de terem um índice de polidispersão do tamanho de gotícula perto de 0,2, geralmente entre 0,1 e 0,15. O cálculo do índice de polidispersão é definido no documento padrão ISO 13321:1996E.

Preferivelmente, partículas colóidais da invenção têm um tamanho médio de partícula de igual ou inferior a 1 μιη, de forma vantajosa igual ou inferior a 300 nm, de forma mais vantajosa no intervalo entre 100 e 250 nm.

De acordo com uma forma preferida de realização da invenção, as emulsões da invenção são emulsões catió-nicas submicrónicas e não contêm quaisquer substâncias capazes de geral uma quantidade suficiente de carga nega- 13 ΡΕ1809238 tiva para afectar o potencial zeta positivo da emulsão. Nesta forma de realização, de forma vantajosa, a emulsão não contém fosfolipidos. A invenção também se refere a um processo de preparação das emulsões contendo pelo menos um agente imunossupressor, escolhido preferivelmente no grupo consistindo em ciclosporina, preferivelmente ciclosporina A, sirolimus ou tacrolimus e MCT e tiloxapol de acordo com a invenção, incluindo um passo de mistura com cisalhamento, seguido por uma homogeneização a alta pressão. 0 melhor modo de preparação e utilização da presente invenção é descrito nos seguintes exemplos.

Exemplos

Nos seguintes exemplos, são utilizadas as seguintes abreviaturas: MCT: triglicéridos de cadeia média (Société des

Oléagineux, France)

BAK: cloreto de benzalcónio CsA: ciclosporina A

Cremophor: Cremofor EL (BASF, Germany)

Lipóide E80 (Lipóide GMBH, Alemanha)

Lutrol: Lutrol F68 (BASF, Germany)

Pemulen TR-2 (Noveon, US)

Fosfolipon 90G (Natterman, Alemanha) 14 ΡΕ1809238

Exemplo 1: Preparação de emulsões desta invenção

Os componentes da fase oleosa são pesados sucessivamente e em seguida agitados sob um aquecimento ligeiro até se obter uma fase límpida e ligeiramente viscosa. Os componentes da fase aquosa são pesados sucessivamente e em seguida agitados com agitação magnética sob um aquecimento ligeiro até se obter uma fase transparente, límpida e fluida. As duas fases são aquecidas e a emulsão grosseira é formada por adição rápida da fase aquosa na fase oleosa e em seguida rapidamente aquecida para a temperatura de 75°C. A emulsão é branca e ligeiramente transparente. O tamanho das gotículas da emulsão é em seguida diminuído por mistura com elevado cisalhamento utilizando, por exemplo um POLYTRON PT 6100, seguido pelo seu arrefecimento.

Obteve-se a emulsão final por homogeneização a alta pressão num equipamento adequado como seja um micro-fuidificador (C5, Avestin) utilizando vários ciclos contínuos. A emulsão final é leitosa e muito fluida. Em seguida diminuiu-se a temperatura da emulsão para 25°C, mediu-se o seu pH e em seguida ajustou-se para 6,0, 7,0, 8,0 utilizando-se uma solução HC1 0,1 M ou NaOH 0,1 Μ. A esterilização pode ser conseguida por autoclave durante 20 minutos à temperatura de 121°C ou por filtração através de um filtro de 0,22 um. 15 ΡΕ1809238

Exemplo 2: Caracterização das emulsões desta invenção 0 tamanho médio de partícula das gotículas da emulsão é determinado por dispersão de luz quase estática depois de diluição em água utilizando por exemplo um High Performance Particle Sizer (Malvern Instruments, UK). Esta instrumentação é também utilizada para determinar o índice de poli dispersão. A mobilidade electroforética é medida à temperatura de 25°C numa montagem apropriada como seja a Malvern Zetasizer 2000 (Malvern Instruments, UK) seguido por uma diluição de 1:200 em água duplamente destilada e convertida em potencial zeta através da equação de Smoluchowski. A CsA na emulsão é determinada por um método validado de HPLC-UV.

Exemplo 3: Composições desta invenção contendo CsA/óleo/Ti-loxapol

Substância EM047 EM048 EM04 9 EM050 EM051 EM052 EM053 CsA 0,025 0,025 0,05 0,05 0,2 0,2 0,1 MCT 0,75 2 1 2 2 4 2 BAK 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 Tiloxapol 0,12 0,3 0,16 0,3 0,3 0,3 0,3 Poloxamer 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 Vitamina E 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 Glicerina 2,25 2,25 2,25 2,25 2,25 2,25 2,25 Água purificada qb qb qb qb qb qb qb 16 ΡΕ1809238

Exemplo 4: Estabilidade das composições desta invenção A estabilidade das emulsões é avaliada pela medida de parâmetros fisico-quimicos tais como, tamanho da gotícula, potencial zeta e conteúdo CsA depois de esterilização por autoclave ou filtração e durante um teste de estabilidade acelerada à temperatura de 80°C.

Resultados:

Emulsão EM047 EM048 EM049 EM050 EM051 EM052 EM053 Tamanho glo-bular da emulsão (nm) TO 172 182 151 211 188 170 204 T7 188 193 173 212 195 201 211 T14 194 200 177 221 206 195 226 índice de po-lidispersão TO 0,155 0,144 0,148 0,116 0,078 0,138 0,108 Potencial Zeta (mV) TO 20,9 19,6 25,0 17,9 20,1 28,4 23,5 T7 18,9 19,6 24,7 20,3 21,9 24,5 23,2 T14 16,9 19,4 19,2 18,5 19,0 23,0 ND CsA (% de con-teúdo inicial) TO 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0 T7 96,4% 97,5% 97,8% 95,8% 92,8% 96,0% 97,4% T14 94,6% 96,4% 96,0% 94,2% 88,2% 96,6% 94,8% ND: não determinado 17 ΡΕ1809238

Conclusões

Emulsões de CsA baseadas em MCT/Tiloxapol produzidos por um processo da invenção incluindo um passo de mistura com cisalhamento seguido por um passo de homogeneização a elevada pressão são estáveis a seguir à preparação e durante pelo menos duas semanas à temperatura de 80°C.

Exemplo 5: Exemplo comparativo - Composições contendo CsA/óleo de rícino EMCIC007 EMCIC003 Restasis® Substância % p/p Substância % p/p Substância % p/p CsA 0,2 CsA 0,2 CsA 0,05 Óleo de ricino 2,5 Óleo de ricino 2,5 Óleo de ricino 1,25 Oleilamina 0,12 estearilamina 0,12 _ _ Fosfolipon 90G 0,5 Lipoid E80 0,5 Polisorbato 80 1 Lutrol F68 0,42 Lutrol F68 0,42 Pemulen TR-2 0,05 Glicerina 2,25 Glicerina 2,25 Glicerina 2,2 Água purificada qb Água purificada qb Água purificada qb

Exemplo 6: Exemplo comparativo - Composições contendo CsA/óleo de rícino Métodos

Semelhante ao Exemplo 1-4 18 ΡΕ1809238

Resultados

Emulsão EMCIC003 Restasis® EMCIC007 Tamanho globular da emulsão (nm) TO Emulsão quebrada 279 Emulsão quebrada T7 ND 514(56%) e 2467 (43%) ND T14 ND Emulsão quebrada ND Potencial Zeta (mV) TO ND -43,7 ND T7 ND -41,6 ND T14 ND ND ND CsA (% de con-teúdo inicial) TO ND 100,0% ND T7 ND 55,3% ND T14 ND ND ND ND: não determinado Percentagens indicam as populações relativas como medidas por luz difusa

Conclusões

Emulsões de CsA com óleo de rícino produzidas por técnicas de homogeneização como descrito anteriormente não são estáveis a seguir à preparação ou depois de uma semana à temperatura de 80°C.

Exemplo 7: Eficácia das emulsões desta invenção como avaliadas pelos seus parâmetros fármaco-cinéticos 19 ΡΕ1809238 Métodos :

Dividiram-se de forma aleatória noventa e seis (96) coelhos pigmentados da estirpe HYRNZ104 em dois (2) grupos de tratamento de quarenta e oito (48) animais, sendo cada grupo subdividido em oito (8) subgrupos de seis (6) animais correspondendo a oito (8) pontos de tempo (0,33; 0,66; 1; 2; 4; 8; 12 e 24 hrs). Os animais receberam uma instilação única nos olhos direitos dos anteriormente descritos EM050 ou Restasis® (Allergan, US) . Nos correspondentes pontos de tempo, fez-se a eutanásia dos animais e recolheu-se a conjuntiva. Determinou-se o conteúdo de CsA por HPLC-MS.

Resultados:

Apresentam-se os resultados na Figura 1 Conclusões:

As emulsões descritas nesta invenção mostram concentrações de tecido pelo menos tão boas como a emulsão baseada em óleo de ricino comercializada como Restasis®.

Exemplo 8: Impacto da razão CsA/óleo nas emulsões desta invenção na sua eficácia como avaliado pelos seus parâmetros fármaco-cinéticos 20 ΡΕ1809238 Métodos :

Dividiram-se de forma aleatória cento e quarenta e quatro (144) coelhos pigmentados da estirpe HYRNZ104 em três (3) grupos de tratamento de quarenta e oito (48) animais, sendo cada grupo subdividido em oito (8) subgrupos de seis (6) animais correspondendo a oito (8) pontos de tempo (0,33; 0,66; 1; 2; 4; 8; 12 e 24 hrs) . Os animais receberam uma instilação única nos olhos direitos dos anteriormente descritos EM048, EM050 ou EM053 (emulsões 0,025, 0,05 e 0,1% p/p CsA em 2% MCT). Nos correspondentes pontos de tempo, fez-se a eutanásia dos animais e recolheu-se a conjuntiva. Determinou-se o conteúdo de CsA por HPLC-MS. Calculou-se a área sob a curva (AUC) indicando a exposição do animal ao composto utilizando a regra trapezoidal.

Resultados:

Apresentam-se os resultados na Figura 2

Conclusões:

As emulsões descritas nesta invenção mostram uma correlação linear entre a razão CsA/óleo e a concentração conjunctival. Como a eficácia clinica está correlacionada com a concentração de CsA, pode ser assumido que este veiculo particular irá providenciar um aumento do valor terapêutico para quantidades cada vez maiores de CsA. 21 ΡΕ1809238

Exemplo 9: Tolerância ocular das emulsões desta in venção 0 objectivo deste estudo foi determinar a tolerância ocular das emulsões desta invenção (EM048, EM050 e EM053; ver composição nos exemplos anteriores) depois de múltiplas administrações tópicas oculares diárias durante 28 dias consecutivos no olho direito de coelhos albinos. Métodos:

Envolveram-se neste estudo dez (10) coelhos albinos New Zeland White por grupo (5 machos e 5 fêmeas) . Deram-se tratamentos (50D1 administrações oculares tópicas) quatro vezes ao dia durante 28 dias consecutivos. Investigou-se a tolerância geral (peso corporal, consumos de comida e água, aspecto geral, sinais clínicos, hematologia e bioquímica do sangue), tolerância ocular (observações com um oftalmoscópio, examinações com lâmpada corneana e histologia ocular) e necropsia (examinação macroscópica grosseira, peso dos órgãos principais). Também se realizou uma análise estatística (teste MANOVA LSD) nos pesos do corpo e órgão, nos dados de consumo de comida e água e nos parâmetros hematológicos e bioquímicos.

Resultados: O aspecto geral, consumo de comida e água, peso 22 ΡΕ1809238 do corpo, pesos dos órgãos não foram afectados pelos tratamentos. Não existiram observações relevantes na necropsia devido ao tratamento. As observações oftalmológicas e examinações microscópicas dos olhos e anexos não revelaram efeitos adversos. As reacções oculares confinaram-se a ligeiro vermelhado conjuntival que se observou em todos os animais do estudo e são vulgarmente observadas em coelhos depois de múltiplas instilações de produtos oftálmicos.

Conclusões:

As emulsões descritas nesta invenção são bem toleradas a seguir a administração tópica crónica.

Lisboa, 28 de Janeiro de 2009

Claims

ΡΕ1809238 1 REIVINDICAÇÕES 1. Uma emulsão oftálmica óleo em água, a qual inclui partículas coloidais tendo um núcleo oleoso envolvido por um filme interfacial, incluindo a dita emulsão um agente imunossupressor, óleo e tiloxapol e sendo a dita emulsão livre de óleo de rícino.
2. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com a reivindicação 1, a qual pode ser administrada de forma tópica.
3. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, em que pelo menos 50% do conteúdo em óleo é triglicéridos de cadeia média (MCT).
4. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com a reivindicação 1, em que a dita emulsão inclui 0,5 até 4% de MCT comparado com o peso total da emulsão.
5. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4, em que o agente imunossupressor é seleccionado entre um grupo consistindo em ciclosporina, sirolimus, tacrolimus,
6. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, em que a ciclosporina é ou inclui ciclosporina A. 2 ΡΕ1809238
7. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-6, em que a quantidade do agente imunossupressor é desde 0,01 até 4% p/p, preferivelmente 0,05 até 0,3% da emulsão.
8. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7, em que a quantidade de tiloxapol é menos do que 1%, preferivelmente incluído entre 0,01 até 0,6% por peso do peso total da emulsão.
9. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-8, incluindo ainda um ou mais óleos seleccionados entre o grupo consistindo em azeite, soja, milho, mineral, algodão, cártamo, sésamo.
10 . A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-9, em que a emulsão é aniónica.
11 . A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-9, em que a emulsão é catiónica.
12 . A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com a reivindicação 11, em que o agente catiónico está compreendida entre 0,001 e 0,1% p/p, preferivelmente entre 0,002 e 0,05% p/p e ainda mais preferido entre 0,003 e 0,03% p/p. 3 ΡΕ1809238
13. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo X com qualquer uma das reivindicações 11 ou 12 em que o agente catiónico é cloreto de benzalcónio
14. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo X com qualquer uma das reivindicações 11-13, caracterizada pelo facto de que a mesma apresenta os requisitos do Teste A da estabilidade do potencial zeta
15. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14 em que as ditas partículas colóidais da emulsão têm um tamanho médio de partícula de igual ou inferior a 1 μττι e a distribuição de tamanho da população é monomodal.
16. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-15 em que as ditas partículas colóidais da emulsão têm um tamanho médio de partícula de igual ou inferior a 1 μιη, de forma vantajosa igual ou inferior a 300 nm, de forma mais vantajosa no intervalo entre 100 e 250 nm.
17. Processo de preparação de uma emulsão oftálmica óleo em água contendo um agente imunossupressor e óleo e tiloxapol, incluindo os passos de adição da fase aquosa à fase oleosa seguido por mistura com cisalhamento e em seguida homogeneização a elevada pressão, sendo a dita emulsão livre de óleo de rícino. 4 ΡΕ1809238
18. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-16 para a preparação de um medicamento para o tratamento de condições oftálmicas, particularmente de doenças do olho seco.
19. A emulsão oftálmica óleo em água de acordo com a reivindicação 18 para a preparação de um medicamento para o tratamento de cerato-conjuntivite seca (KCS), cera-to-conjuntivite seca atópica (AKS) ou cerato-conjuntivite sezonal (VKC) Lisboa, 28 de Janeiro de 2009