PT1561460E

PT1561460E - Nanopartículas para administração de substâncias activas, processo para a produção das referidas partículas e composição que as contém

Info

Publication number: PT1561460E
Application number: PT03765124T
Authority: PT
Inventors: Maria Jose Alonso Fernandez; Carmen Remunan Lopez; Margarita Maria Cuna Vilan; Maria Alonso Sande; Jose Luis Vila Jato
Original assignee: Advancell Advanced In Vitro Ce
Priority date: 2002-07-19
Filing date: 2003-07-16
Publication date: 2007-03-30
Also published as: EP1561460A1; DE60310605T2; CY1106361T1; ES2221530A1; ES2279172T3; CA2492995A1; US20060134785A1; EP1561460B1; WO2004009060A1; DK1561460T3; DE60310605D1; ES2221530B1; ATE348602T1; SI1561460T1

Description

DESCRIÇÃO "NANOPARTÍCULAS PARA ADMINISTRAÇÃO DE SUBSTÂNCIAS ACTIVAS, PROCESSO PARA A PRODUÇÃO DAS REFERIDAS PARTÍCULAS E COMPOSIÇÃO QUE AS CONTÉM"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a nanopartículas compreendendo quitosana, glucomanana, pelo menos uma substância activa e, se necessário, um sal aniónico, de um modo preferido em forma de tripolifosfato de sódio, que podem ser utilizadas para administrar substâncias activas ao corpo humano ou animal. Refere-se ainda a um método para obtenção das referidas nanopartículas e a uma composição compreendendo as referidas nanopartículas.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO É conhecido que a administração de diversas substâncias activas por diferentes vias de administração ao corpo humano ou animal apresenta várias dificuldades. Vale a pena indicar, especialmente, as dificuldades de administração por vias mucosas, especialmente de péptidos e proteínas, dado que a referida administração é fortemente afectada pela permeabilidade limitada das barreiras epiteliais do corpo humano ou animal. Também é conhecido que é possível ultrapassar parte destas dificuldades por incorporação das substâncias activas a ser administradas em partículas pequenas. 0 transporte das referidas partículas através das mucosas é afectado, sobretudo, pelo tamanho destas partículas, aumentado o transporte com o decréscimo do tamanho 1 das partículas. Portanto, o transporte de, por exemplo, nanopartículas (genericamente, com um diâmetro médio inferior a 1 ym) através das mucosas é melhor do que o de micropartículas (genericamente com um diâmetro médio de 1 ym até várias centenas de ym). De facto, o transporte de nanopartículas através das mucosas do corpo humano ou animal ocorre naturalmente. É também conhecido que a eficácia da interacção das nanopartículas com as células epiteliais pode ser melhorada por meio da incorporação das nanopartículas de materiais contendo ligandos específicos. Por exemplo, a absorção de lipossomas por células M pode ser melhorada por revestimento dos referidos lipossomas com resíduos de manana, como descrito nos documentos Takada et al., Biochim. Biophys. Acta 802, 1984, 237-243 e Tornizawa et al., Pharm. Res. 10, 1993, 549-552. É ainda conhecido que as nanopartículas constituídas por quitosana fomentam o transporte de macromoléculas nelas incorporadas através do epitélio nasal e intestinal.

No estado da técnica são conhecidas uma série de publicações que se referem a nanopartículas de quitosana para a administração de substâncias activas e a métodos para obtenção das referidas nanopartículas. Entre as referidas publicações, vale a pena assinalar Calvo et al., J. Appl. Polym. Sei., 1997, 63, 125- 132 ; Calvo et al., 14, 1997b, 1431-1436; Fernández- Urrusuno et al., Phar. Res. 16, 1991a, 1576-1581; Fernández- Urrusuno et al., S.T.P. Pharm. Sei. 9, 1999b, 429-436; Tokumitsu et al., Pharm. Res. 16, 1999, 1830-1835; Mitra et al., J. Control. Release 74, 2001, 317-323; US-A-2001051189 e US-A-5 843 509. Todas estas nanopartículas, cujo principal componente é quitosana, têm a desvantagem de não ser estáveis a dados valores de pH, especificamente, dissolvem-se em meio ácido e precipitam em meio básico. O documento da patente WO-A-01/01964 refere-se, por seu 2 lado, a composições para a libertação controlada de biomoléculas, em forma de partículas, compreendendo um polímero aniónico e outro polímero catiónico, que interactuam um com o outro, e biomoléculas. 0 polímero catiónico pode ser um polímero carregado positivamente, solúvel em água, tal como quitosana, por exemplo. Sulfato de dextrano, heparina, ácido algínico, alginato, carragenina, um polimetacrilato aniónico e um poliaminoácido carregado positivamente são referidos como polímeros aniónicos. 0 documento da patente WO-A-96/20698 refere-se a nanopartículas para a libertação controlada de agentes bioactivos, compreendendo um núcleo baseado num polímero biocompatível e biodegradável, que pode ser quitosana, tendo as referidas nanopartículas pelo menos, um agente bioactivo associado ou incorporado e, pelo menos, um agente de modificação de superfície. Também se refere a um método para obtenção das nanopartículas, baseado na mistura de soluções orgânicas dos componentes, e sua adição subsequente a uma fase aquosa, com evaporação subsequente do solvente orgânico e separação das nanopartículas da fase aquosa resultante. 0 documento da patente WO-A-Ol/32751 refere-se a um método para produção de quitosanas ou derivados de quitosanas em forma de nanopartículas, com um diâmetro médio das partículas na gama de 10 a 1000 nm, consistindo na dissolução da quitosana ou derivado de quitosana num meio aquoso ácido e aumentando o pH da solução na presença de um agente de modificação da superfície, até ser obtida a precipitação da quitosana. O documento da patente WO-A-99/47130 refere-se a nanopartículas tendo um complexo de polielectrólito biocompatível e biodegradável, a partir de, pelo menos, um policatião (que pode ser quitosana) e, pelo menos, um polianião, bem como, pelo menos, uma substância bioactiva, sendo as nanopartículas obtidas por 3 tratamento adicional do complexo de polielectrólito durante ou depois da sua formação com, pelo menos, um agente reticulante (glioxal, TSTU ou EDAP). 0 documento EP-A-0860166 descreve nanoparticulas compreendendo quitosana e poli(óxido de etileno). A maioria dos sistemas conhecidos de nanoparticulas e microparticulas produzidos à base de quitosana têm a importante desvantagem de serem instáveis após a sua administração in vivo, bem como durante a sua armazenagem. Normalmente há dificuldades com o processo de liofilização, especificamente dificuldades na reconstituição dos sistemas liofilizados, o que representa uma limitação adicional importante para a exploração adequada deste tipo de sistemas. Além disso, para a liofilização destes sistemas, descritos no estado da técnica, é necessário adicionar grandes quantidades de açúcares. Em consequência do que foi referido atrás, as nanoparticulas e microparticulas conhecidas geralmente têm de ser armazenadas em forma de suspensão líquida; isto normalmente resulta na destruição destes sistemas em poucos meses.

Pela sua parte, a glucomanana tem sido tradicionalmente utilizada como suplemento dietético, para fins de redução do nível de colesterol, para além do facto de ter sido utilizada em aplicações cosméticas. A utilização de glucomanana na preparação de composições farmacêuticas está descrita numa série de documentos. Por exemplo, a sua utilização na preparação de composições farmacêuticas em forma de gel está mencionada nos documentos WO-A-99/01166 e US-A-5662840; Xiao et al., J. Appl. Polym. Sei. 76, 2000, 509-515 e o documento US-A-6 159 504 referem a sua utilização em composições farmacêuticas em forma de película; o documento US-A-2002019447 e o US-A-2002018812 4 mencionam composições farmacêuticas em forma de espuma, cápsula e esponja; e o documento US-A-6221393 em composições em forma de comprimido. Alguns destes documentos mencionam a eventual incorporação de quitosana nas composições farmacêuticas.

Foi mencionado em alguns documentos a possivel existência de uma interacção entre quitosana e glucomanana, por exemplo, em forma de película, em Xiao et al., J. Appl. Polym. Sei. 76, 2000, 509-515, bem como em forma de grânulos com um diâmetro superior a 1 mm, para administração de fármacos analgésicos, em Xie et al., J. Macromol. Sei., Pure Appl. Chem. A29, 1992, 931-8 e Xie et al., J. Clin. Pharm. Sei. 1, 1992, 42-8. A publicação Alemã DE19839515 refere-se a uma preparação farmacêutica contendo pelo menos um produto de associação de polímero-substância activa coloidal (tamanho das partículas < 1 ym), em que pelo menos um componente é um polímero biocompatível e biodegradável, que pode ser quitosana.

De acordo com tudo o que foi referido anteriormente, há necessidade de proporcionar um tipo de nanopartículas com propriedades melhoradas de absorção pelo corpo humano ou animal, especialmente através do tecido das mucosas, e que possam ser armazenadas durante um período de tempo mais longo sem sofrer alterações importantes. Além disso, os métodos para a preparação de nanopartículas, quer sejam à base de quitosana ou não, normalmente requerem a utilização de solventes orgânicos, que têm as desvantagens conhecidas por qualquer especialista na matéria, tais como a sua toxicidade e a dificuldade da sua eliminação das nanopartículas, pelo que é apropriado procurar um método para produção das nanopartículas que cumpram as propriedades acima referidas, que seja simples e não requeira a utilização de solventes orgânicos. 5

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

Verificou-se agora que nanoparticulas compreendendo quitosana, glucomanana, a substância activa a ser administrada e, opcionalmente, um sal aniónico, de um modo preferido tripolifosfato de sódio, resolve as desvantagens do estado da técnica mencionadas. Foi ainda desenvolvido um método simples de preparação das nanoparticulas anteriormente referidas sem a necessidade de utilização de solventes orgânicos.

De acordo com um primeiro aspecto, a presente invenção refere-se a um método para a produção de nanoparticulas com um diâmetro médio inferior ou igual a 1 ym, incorporando, pelo menos, uma substância activa, compreendendo os passos seguintes: a) preparação de uma solução aquosa de quitosana, b) preparação de uma solução aquosa de glucomanana, e c) mistura, com agitação, das soluções dos passos a) e b), de tal modo que se obtém nanoparticulas de quitosana e glucomanana, em que, pelo menos, uma das soluções dos passos a) e b) contém, pelo menos, uma substância activa.

De acordo com um segundo aspecto, a presente invenção refere-se a nanoparticulas obtidas de acordo com o método anteriormente referido, compreendendo quitosana, glucomanana e, pelo menos, uma substância activa.

De acordo com um aspecto adicional, a invenção refere-se a uma composição farmacêutica ou cosmética compreendendo as nanoparticulas anteriormente referidas, conjuntamente com, pelo 6 menos, um excipiente farmaceuticamente ou cosmeticamente aceitável, respectivamente.

De acordo com uma forma de realização preferida do método, a solução de glucomanana contém ainda um sal aniónico, de um modo preferido em forma de tripolifosfato de sódio, para fins de favorecimento da formação espontânea das nanoparticulas.

De um modo preferido, a concentração da solução de quitosana utilizada no método está na gama entre 0,5 e 5 mg/mL.

Também de um modo preferido, a concentração da solução de glucomanana do método está na gama entre 0,1 e 50 mg/mL. A proporção de quitosana em relação a glucomanana (em peso) pode variar, de um modo preferido entre 1:0,02 a 1:100, de um modo particularmente preferido entre 1:0,5 e 1:50.

Durante o método de produção das nanoparticulas, o valor do pH da solução de quitosana é, de um modo preferido, mantido a um pH entre 2 e 6. O método de produção das nanoparticulas de quitosana e glucomanana pode ainda compreender um passo adicional, em que as referidas nanoparticulas são liofilizadas. Ao contrário das nanoparticulas conhecidas no estado da técnica, para a liofilização das nanoparticulas de acordo com a presente invenção, só é necessária a adição de pequenas quantidades de açúcares, embora também seja possivel efectuar a liofilização sem adição de açúcares. Na sua forma liofilizada, as nanoparticulas podem ser armazenadas durante períodos de tempo mais longos e podem ser facilmente regeneradas, quando necessário, por meio da adição da necessária quantidade de água. 7

De acordo com esta forma de realização adicional em que as nanopartículas obtidas são liofilizadas, a presente invenção refere-se ainda a nanopartículas de quitosana e glucomanana, de acordo com a invenção, liofilizadas, e a uma composição farmacêutica ou cosmética compreendendo as referidas nanopartículas liofilizadas e, pelo menos, um excipiente farmaceuticamente ou cosmeticamente aceitável.

As nanopartículas de quitosana e glucomanana que podem ser obtidas por meio do método descrito acima têm melhor estabilidade em contacto com fluidos biológicos e, também, durante a armazenagem, do que as nanopartículas conhecidas no estado da técnica. De facto, as nanopartículas de quitosana e glucomanana são estáveis, tanto em meio aquoso ácido como básico, pelo que podem ser armazenadas em forma de suspensão líquida durante períodos de tempo longos. Também têm uma capacidade melhorada de absorção pelo corpo humano ou animal.

Adicionalmente, as nanopartículas de quitosana e glucomanana são sistemas com utilidade farmacêutica e cosmética. Podem além disso ser administradas por várias vias, tais como, por exemplo, as vias tópica, oral, nasal, pulmonar, vaginal e subcutânea. A substância activa a ser incorporada nas nanopartículas de quitosana e glucomanana é o componente para o qual se destina a formulação. Este componente terá um efeito sobre o organismo humano ou animal após a sua administração; o referido efeito pode curar, minimizar ou impedir uma doença. A substância activa pode ser um fármaco, uma vitamina, uma vacina, etc., ou um agente cosmético, destinado ao melhoramento do aspecto físico ou estético, por exemplo hidratação da pele).

As nanopartículas de quitosana e glucomanana de acordo com a presente invenção têm uma elevada capacidade de associação a macromoléculas bioactivas, por exemplo insulina, albumina de soro de bovino ou proteínas imunogénicas. A capacidade de associação depende do tipo de macromolécula incorporada. Analogamente, para certas macromoléculas, o grau de associação pode depender do grau de desacetilação da quitosana: quanto maior o grau de desacetilação, maior a eficácia de associação.

Contudo, também é possível incorporar outras substâncias activas nas nanopartículas, tanto de natureza lipófila como hidrófila. Pode indicar-se por exemplo a incorporação efectiva de indometacina (moderadamente lipófila) e aciclovir (hidrófilo). A substância activa a ser incorporada nas nanopartículas é dissolvida numa das duas soluções aquosas utilizadas na formação das nanopartículas. No caso de substâncias activas lipófilas, estas têm de ser previamente dissolvidas num solvente orgânico polar, miscível com meios aquosos, e será depois adicionada à solução de quitosana, ou à solução de glucomanana. No caso da incorporação de mais do que uma substância activa nas nanopartículas, estas podem ser dissolvidas na mesma solução ou em soluções diferentes.

No caso da incorporação de macromoléculas bioactivas, estas podem ser, de um modo preferido, incorporadas de acordo com os seguintes métodos: i) a macromolécula é dissolvida em tripolifosfato de sódio, e a mistura resultante é incorporada na solução de glucomanana utilizada para a produção das nanopartículas; ii) a macromolécula é dissolvida numa solução de NaOH; a solução obtida é adicionada a tripolifosfato de sódio; a mistura resultante é incorporada na solução de glucomanana utilizada para a produção das nanopartículas; 9 iii) a macromolécula é dissolvida em fosfato de sódio a pH 6,6; a solução obtida é adicionada a tripolifosfato de sódio; a mistura resultante é incorporada na solução de glucomanana utilizada para a produção das nanopartículas; iv) a macromolécula é adicionada à solução de quitosana utilizada para a produção das nanopartículas; iv) a macromolécula é adicionada a uma solução de NaOH; a mistura obtida é adicionada à solução de quitosana utilizada para a produção das nanopartículas; vi) a macromolécula é adicionada a uma solução de fosfato de sódio a pH 6,6; a mistura obtida é adicionada à solução de quitosana utilizada para a produção das nanopartículas.

As nanopartículas de quitosana e glucomanana são coloidais, i. e. o seu diâmetro médio é igual ou menor que 1 pm. 0 tamanho médio das partículas é, sobretudo, afectado pela proporção de quitosana em relação a glucomanana, pelo grau de desacetilação da quitosana, pela incorporação de um sal aniónico, por exemplo tripolifosfato de sódio, e pela natureza da substância activa. Por outro lado, as nanopartículas podem ter uma carga superficial positiva ou negativa (determinada por meio do potencial zeta), cuja magnitude depende da composição das nanopartículas e do grau de desacetilação da quitosana.

As nanopartículas têm ainda a capacidade de libertar a substância activa nelas incorporada de modo controlado. A libertação da substância activa pode ser controlada por associação de factores, tais como a proporção de quitosana em relação a glucomanana, o grau de desacetilação da quitosana e o método de produção das nanopartículas. 10

Outros fins, características e vantagens da invenção tornar-se-ão mais claros à luz da descrição explicativa que se segue, feita com referência a vários exemplos ilustrativos.

EXEMPLOS

Ao longo dos exemplos, serão utilizadas as seguintes abreviaturas: CS = Quitosana GM = Glucomanana fosforilada TPP = Tripolifosfato de sódio

Pl: Proteína originária de uma planta (Ricinus communis) constituída por dois polipéptidos.

Exemplo 1

Preparou-se nanopartículas de quitosana (com um grau de desacetilação de 88%), glucomanana e tripolifosfato de sódio de acordo com o método da invenção, com diferentes proporções de glucomanana. Uma vez preparadas, determinou-se o seu diâmetro médio e potencial zeta.

Tabela 1 CS/TPP/GM (p/p) Diâmetro médio (mm) Potencial zeta (mV) 6/1/2,3 250 ± 24 +32,2 + 2,0 6/1/4,6 302 ± 26 +15,2 ± 1,7 11

Exemplo 2

Preparou-se nanopartículas de quitosana (com um grau de desacetilação de 88%) e glucomanana de acordo com o método da invenção, com diferentes proporções de glucomanana e sem adição de qualquer sal aniónico. Uma vez preparadas, determinou-se o seu diâmetro médio e potencial zeta.

Tabela 2 CS/GM (p/p) Diâmetro médio (mm) Potencial zeta (mV) 6/4,6 252,1 ± 15 +31,25 + 1,06 6/13,8 185,5 ± 3 +33,2 1+ O co

Exemplo 3

Preparou-se nanopartículas de quitosana (com um grau de desacetilação de 88%) e glucomanana, incorporando tripolifosfato de sódio, de acordo com o método da invenção, com diferentes proporções de quitosana e glucomanana, incorporando a proteína Pl ou insulina. Uma vez preparadas, determinou-se o seu diâmetro médio e potencial zeta.

Tabela 3 CS/TPP/GM (p/p) Proteína associada CS/proteína (p/p) Diâmetro médio (mm) Potencial zeta (mV) 4/1/1,5 Pl 1,6/1 552 + 4 +32,1 ± 1 6/1/4,6 Pl 1,3/1 296 ± 6 +15,9 ± 0,2 6/1/4,6 Pl 2,2/1 263 + 6 +30,3 + 0,6 6/0,7/4,6 Insulina 2/1 265,8 + 6 +32,2 + 0,4 12

Exemplo 4

Preparou-se nanopartículas de quitosana (com um grau de desacetilação de 88%) e glucomanana, sem incorporação de qualquer sal aniónico, de acordo com o método da invenção, com diferentes proporções de quitosana e glucomanana, incorporando a proteína PI ou insulina. Uma vez preparadas, determinou-se o seu diâmetro médio e potencial zeta.

Tabela 4 CS/GM (p/p) Proteína associada Diâmetro médio (mm) Potencial zeta (mV) 6/4,6 Insulina 252,3 ± 4 +15,5 ± 0,06 6/4,6 Pl 205 ± 11 +8,5 + 2,7 6/13,8 Pl 293,2 ± 5 +11,9 + 3,2

Exemplo 5

Preparou-se nanopartículas de quitosana (com um grau de desacetilação de 88%) e glucomanana, incorporando tripolifosfato de sódio, de acordo com o método da invenção, com uma proporção de CS/TTP de 3:1, nelas incorporando a proteína PI (25% de carga teórica), de acordo com diferentes métodos. Determinou-se a eficácia de associação da proteína Pl às nanopartículas, bem como a sua capacidade de carga. 13

Tabela 5 Método Eficácia de associação (%) Capacidade de carga (%) Tppi 15,4 ± 2,7 'ET T-1 +1 T-1 co NaOH-TPPi:Í 5,6 ± 0,3 3,2 ± 0,2 Fosfato-TPpi-ii 22,6 ± 0,2 í—1 0 +1 1—1 1 1 1-1 CSiv 15,5 ± 2,7 7,1 ± 1,2 NaOH-CSv 8,7 ± 3,2 CO 1—1 +1 I-1 lO Fosfato-CSvi 26,0 ± 0,1 11,9 ± 0,5 PI foi dissolvida em iTpp; i:LNaOH, e adicionada li:Lfosfato de sódio a a TPP pH 6,6, e adicionada a TPP ivCS; vNaOH, e adicionada a CS; e

vlfosfato de sódio a pH 6,6, e adicionada a CS

Exemplo 6

Preparou-se nanopartículas de quitosana (com um grau de desacetilação de 88%) e glucomanana, incorporando tripolifosfato de sódio, de acordo com o método da invenção, com uma proporção de CS/TTP de 6:1, nelas incorporando a proteína PI (25% de carga teórica), de acordo com diferentes métodos. Determinou-se a eficácia de associação da proteína PI às nanopartículas, bem como a sua capacidade de carga. 14

Tabela 6

Método Eficácia de associação Capacidade de carga (%) (%) Tppí 15,4 ± 4,0 16,8 ± 4,9 NaOH-TPPi:Í 8,7 ± 1,6 10,5 ± 1,9 Fosfato-TPpUi 26,3 ± 1,2 27,6+1,3 CSiv 6,5 ± 1,7 9,8 ± 2,6 NaOH-CSiv 18,2 ± 1,9 21,4 ± 2,4 Fosfato-CSv+ 24,5 ± 1,6 25,4 ± 1,7 Ρ1 foi dissolvida em i T PP; i:LNaOH, e adicionada li:Lfosfato de sódio a a TPP pH 6,6, e adicionada a TPP ivCS; vNaOH, e adicionada a vlfosfato de sódio a CS; e pH 6,6, e adicionada a CS

Exemplo 7

Preparou-se nanopartículas de quitosana (grau de desacetilação de 88%) e glucomanana, sem incorporação de qualquer sal aniónico, de acordo com o método da invenção, com diferentes proporções CS/GM, nelas incorporando proteína PI. Determinou-se a eficácia de associação da proteína PI às nanopartículas, bem como a sua capacidade de carga. 15

Tabela 7

CS/GM Proteína Eficácia de Capacidade de (p/p) associada associação (%) carga (%) 6/4,6 PI 37,3 ± 3,8 19,16 ± 1,95 6/13,8 PI 22,4 + 7,1 τ—1 'ET T-1 +1 'ET 'ET

Exemplo 8

Preparou-se nanopartículas de quitosana (grau de desacetilação de 88%) e glucomanana, sem incorporação de qualquer sal aniónico, de acordo com o método da invenção, nelas incorporando proteina PI ou insulina. Determinou-se a eficácia de associação da proteina PI às nanopartículas, bem como a sua capacidade de carga.

Tabela 8 CS/GM Proteína Eficácia de Capacidade de (p/p) associada associação (%) carga (%) 6/4,6 PI 37,3 ± 3,8 19,16 ± 1,95 6/4,6 Insulina 37,5 ± 3,1 23,77 ± 1,78

Exemplo 9

Preparou-se nanopartículas de quitosana (grau de desacetilação de 88%) e glucomanana, de acordo com o método da invenção, nelas incorporando indometacina ou aciclovir. Determinou-se a eficácia de associação da indometacina e do aciclovir às nanopartículas, bem como o seu diâmetro. 16

Tabela 9 Fármaco associado Eficácia de Diâmetro médio (mm) associação (%) Indometacina 81,81 ± 3,89 619 ± 15 Aciclovir 27,36 ± 7,90 304 ± 8

Exemplo 10

Preparou-se nanopartículas de quitosana (grau de desacetilação de 88%), glucomanana e tripolifosfato de sódio, de acordo com o método da invenção, com diferentes proporções CS/TPP/GM. Verificou-se o efeito do tipo e da concentração do agente crioprotector utilizado na liofilização das nanopartículas sobre o tamanho das partículas e o potencial zeta (Df: diâmetro final, Di: diâmetro inicial). (Ver Figura 1).

Exemplo 11

Preparou-se nanopartículas de quitosana (grau de desacetilação de 88%), glucomanana e tripolifosfato de sódio, de acordo com o método da invenção, com diferentes proporções CS/TPP/GM. Durante a sua incubação numa solução tampão de fosfato a pH 7,4 durante 2 horas, determinou-se o diâmetro médio das partículas. Proporções teóricas de CS/TPP/GM: (*) 3/1/13,5 () 3/1/6,7 e (-) 6/1/23: (Ver Figura 2)

Exemplo 12

Preparou-se nanopartículas de quitosana (grau de desacetilação de 88%) e glucomanana, de acordo com o método da 17 invenção, com diferentes proporções CS/GM. Durante a sua incubação em solução tampão de fosfato a pH 7,4, determinou-se o diâmetro médio das partículas. (~) CS/GM = 6/4,6; () CS/GM = 6/13,8; () CS/TPP/GM = 6/1/4,6. (Ver Figura 3)

Exemplo 13

Preparou-se nanoparticulas de quitosana (grau de desacetilação de 88%) e glucomanana, de acordo com o método da invenção, com diferentes proporções CS/GM, incorporando insulina. Determinou-se a libertação da insulina em tampão fosfato a pH 7,4 e 37° C. (*) CS/TPP/GM = 6/1/4,6 e () CS/GM = 6/4,6. (Ver Figura 4)

Exemplo 14

Preparou-se nanoparticulas de quitosana (grau de desacetilação de 88%) e glucomanana, de acordo com o método da invenção, com diferentes proporções CS/GM, incorporando proteína Pl. Determinou-se a libertação da insulina em tampão fosfato a pH 7,4 e 37°C. (*) CS/TPP/GM = 6/1/4,6 e () CS/GM = 6/4,6. (Ver Figura 5)

Exemplo 15

Preparou-se nanoparticulas de quitosana (grau de desacetilação de 42% e 88%) e glucomanana, de acordo com o método da invenção, incorporando As nanoparticulas foram administradas por via oral a murganhos, e mediu-se os níveis de radioactividade no sangue após 2, 4, 6 e 24 horas. (Ver Figura 6) 18

Exemplo 16

Preparou-se nanopartículas de quitosana e glucomanana, de acordo com o método da invenção, incorporando As nanopartículas foram administradas intraduodenalmente a murganhos, e mediu-se os níveis de radioactividade no sangue após 0,5, 2 e 24 horas. Utilizou-se nanopartículas de quitosana como controlo. (Ver Figura 7)

Exemplo 17

Preparou-se nanopartículas de quitosana (grau de desacetilação de 42% e 88%) e glucomanana, de acordo com o método da invenção, incorporando 125j_bs^_ As nanopartículas foram administradas por via oral a murganhos, e mediu-se os níveis de radioactividade em diferentes tecidos após 24 horas. (Ver Figura 8)

Exemplo 18

Preparou-se nanopartículas de quitosana e glucomanana, de acordo com o método da invenção, incorporando 125i_BgA. As nanopartículas foram administradas intraduodenalmente a murganhos, e mediu-se os níveis de radioactividade em diferentes tecidos após 24 horas. (Ver Figura 9)

Lisboa, 01 de Março de 2007 19

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Método de produção de nanopartículas, com um diâmetro médio igual ou menor que 1 ym, e incorporando, pelo menos, uma substância activa, caracterizado por compreender os passos seguintes: a) preparação de uma solução aquosa de quitosana, b) preparação de uma solução aquosa de glucomanana, e c) mistura, com agitação, das soluções dos passos a) e b), de tal modo que se obtém nanopartículas de quitosana e glucomanana, em que pelo menos uma das soluções dos passos a) e b) contém, pelo menos, uma substância activa.
2. Método de produção de nanopartículas de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a solução de glucomanana conter um sal aniónico.
3. Método de produção de nanopartículas de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por o sal aniónico ser tripolifosfato de sódio.
4. Método de produção de nanopartículas de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por o tripolifosfato de sódio estar numa concentração entre 0,1 e 5 mg/mL.
5. Método de produção de nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4, caracterizado por a concentração da solução de quitosana estar na gama entre 0,5 e 5 mg/mL. 1
6. Método de produção de nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 5, caracterizado por a concentração da solução de glucomanana estar na gama entre 0,5 e 50 mg/mL.
7. Método de produção de nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4, caracterizado por a proporção entre quitosana e glucomanana estar entre 1:0,1 e 1:100.
8. Método de produção de nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4 e 7, caracterizado por a proporção entre quitosana e glucomanana estar entre 1:0,5 e 1:50.
9. Método de produção de nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 8, caracterizado por a solução de quitosana ter um pH entre 2 e 6.
10. Método de produção de nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 9, caracterizado por a substância activa ser uma macromolécula bioactiva.
11. Método de produção de nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 10, caracterizado por a substância activa ser seleccionada do grupo compreendendo insulina, albumina de soro de bovino e proteínas imunogénicas.
12. Método de produção de nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 9, caracterizado por a substância activa ser um fármaco de baixo peso molecular.
13. Método de produção de nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 9 e 12, caracterizado por a substância activa ser seleccionado do grupo compreendendo aciclovir e indometacina. 2
14 . Método de produção de nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 13, caracterizado por compreender um passo adicional após o passo c), em que as nanopartículas são liofilizadas.
15. Nanopartículas com um diâmetro igual ou inferior a 1 ym, para a administração de, pelo menos, uma substância activa, caracterizadas por compreenderem quitosana, glucomanana e pelo menos, uma substância activa.
16. Nanopartículas de acordo com a reivindicação 15, caracterizadas por serem obtidas pelo método de acordo com as reivindicações 1 a 11.
17. Nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 15 e 16, caracterizadas por compreenderem ainda um sal aniónico.
18. Nanopartículas de acordo com a reivindicação 17, caracterizadas por o sal aniónico ser tripolifosfato de sódio.
19. Nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 15 a 18, caracterizadas por a substância activa ser uma macromolécula bioactiva.
20. Nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 15 a 19, caracterizadas por a substância activa ser seleccionada do grupo compreendendo insulina, albumina de soro de bovino e proteínas imunogénicas.
21. Nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 15 a 18, caracterizadas por a substância activa ser um fármaco de baixo peso molecular. 3
22. Nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 15 a 18 e 21, caracterizadas por a substância activa ser seleccionada do grupo que compreende aciclovir e indometacina.
23. Nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 15 a 22 caracterizadas por a proporção de quitosana:glucomanana estar entre 1:0,02 e 1:100.
24. Nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 15 a 23, caracterizadas por a proporção de quitosana:glucomanana estar entre 1:0,5 e 1:50.
25. Nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 15 a 22, caracterizadas por serem liofilizadas depois de serem obtidas.
26. Composição farmacêutica, caracterizada por compreender as nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 15 a 24 e, pelo menos, um excipiente farmaceuticamente aceitável.
27. Composição cosmética, caracterizada por compreender as nanopartículas de acordo com qualquer das reivindicações 15 a 24 e, pelo menos, um excipiente cosmeticamente aceitável.
28. Composição farmacêutica, caracterizada por compreender as nanopartículas de acordo com a reivindicação 25, depois de serem regeneradas por adição de água, e pelo menos, um excipiente farmaceuticamente aceitável.
29. Composição cosmética, caracterizada por compreender as nanopartículas de acordo com a reivindicação 25, depois de serem regeneradas por adição de água, e pelo menos, um 4 excipiente cosmeticamente aceitável. Lisboa, 01 de Março de 2007 5