CN103040745B - 一种环磷腺苷葡胺脂质体注射剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种环磷腺苷葡胺脂质体注射剂，主要由环磷腺苷葡胺、牛胆酸钠、胆固醇、十二烷基磺酸钠、焦亚硫酸钠、甘露醇制成。与现有制剂相比，本发明的制剂大大提高了制剂的稳定性和生物利用度，释药平稳，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，疗效更显著。

Description

一种环磷腺苷葡胺脂质体注射剂

技术领域

本发明涉及一种环磷腺苷葡胺的新制剂，具体涉及一种环磷腺苷葡胺脂质体注射剂及其制法，属于医药技术领域。

背景技术

环磷腺苷葡胺是环磷腺苷与葡甲胺摩尔比1:1的盐，为一种新型的能量合剂、细胞激活剂，易透过细胞膜，使细胞内cAMP浓度增加，具有正性肌力及扩张心脑血管作用，并对磷酸二脂酶有一定的抑制作用，更利于cAMP发挥作用。一方面使心肌细胞正性肌力增强，改善心肌泵血功能，具有温和的强心作用；另一方面可减轻动脉及周围血管阻力，增加冠状动脉血流，改善心肌缺血；减轻心脏前后负荷；保护和改善心肌缺血和缺氧时心肌细胞的形态和功能，显著增加心肌细胞的搏动强度和频率；具有第二信使作用，能直接进入细胞内，降低心肌氧耗量，改善心肌细胞代谢，保护缺氧的心肌细胞，提高心肌的应激能力；介入机体的许多重要代谢调控，对心律有双向调节作用，并具有药理作用强，毒性低，作用迅速，稳定性高接近于生理性，应用范围广等独特的优点，是目前唯一应用于临床的第二信使类药物。

临床上环磷腺苷葡胺主要用于治疗心力衰竭、心肌炎、病窦综合征、冠心病、心肌病，以及心律失常的辅助治疗。几年来，由于其疗效确切，作用独到，安全性能好，在临床上被广泛应用。

专利文献CN102283804A和CN101455631A公开了环磷腺苷葡胺注射液及其制备方法，选择合适的溶媒和附加剂制成环磷腺苷葡胺注射液。由于环磷腺苷微溶于水，在环磷腺苷中加入葡甲胺可增强其溶解性，然而，在环磷腺苷葡胺溶液中，随着保存时间的延长，环磷腺苷会逐渐析出，使药液发生变质、浑浊；环磷腺苷葡胺注射液在保存过程中，易遇光发生变化，使药物降解，并且易受环境因素的影响发生氧化、聚合使药品的结构发生变化。环磷腺苷葡胺注射液的各种不稳定性使药物的疗效下降，给临床用药带来了极大的安全隐患。

专利文献CN1579413A公开了一种注射用环磷腺苷葡胺及其制备工艺，所述的环磷腺苷、葡甲胺和赋形剂制成冻干粉针剂；专利文献CN1923180A公开了一种注射用环磷腺苷葡胺的制备工艺，采用现代制剂技术制成无菌冻干粉针剂。然而环磷腺苷葡胺冻干粉针剂存在制备工艺复杂，成本高，产品复溶性差等问题。

专利文献CN101491500A公开了一种环磷腺苷葡胺微球及其制法，主要由环磷腺苷、葡甲胺、聚己内酯、聚乙烯醇、表面活性剂、渗透压调节剂、冻干支持剂制成。但是药物在长期放置过程中会产生结块现象，不易重分散。

脂质体(liposomes)最初是由英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。脂质体是指将药物包封于类脂质双分子形成的薄膜中间所制成的超微型球状定向药物载体制剂，属于靶向给药系统的一种新剂型。20世纪60年代末Rahman等人首先将脂质体作为药物载体应用，近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，脂质体作为药物载体，具有诸多优点：如脂质体既能包封脂溶性药物，又能包封水溶性药物；减轻变态反应和免疫反应；延缓释放，降低体内消除速度；能有效地保护被包裹药物，提高生物利用度；改变药物在体内的分布，并能靶向性释药，能降低药物的毒副作用；适合多途径给药等。

本发明人经过长期认真的研究，出乎意料的发现，将环磷腺苷葡胺制成脂质体注射剂，能解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定的环磷腺苷葡胺脂质体注射剂，主要由环磷腺苷葡胺、牛胆酸钠、胆固醇、十二烷基磺酸钠、焦亚硫酸钠、甘露醇制成。本发明的脂质体注射剂具有良好的制剂稳定性，冻干过程中脂质体不会因脱水、融合、冰晶等发生破裂，水合复溶后，脂质体同样保持良好的包封率，减少了毒副作用，提高了制剂产品质量，而且较现有产品具有更好的生物利用度。

本发明解决的技术方案如下：

本发明提供一种环磷腺苷葡胺脂质体注射剂，主要由环磷腺苷葡胺、牛胆酸钠、胆固醇、十二烷基磺酸钠、焦亚硫酸钠、甘露醇制成。

本发明提供一种环磷腺苷葡胺脂质体注射剂，其中环磷腺苷葡胺的规格为：30mg、60mg、90mg和2ml:30mg、2ml:60mg、5ml:60mg、5ml:90mg、10ml:150mg（注射液体积：环磷腺苷葡胺重量）。

本发明提供一种环磷腺苷葡胺脂质体注射剂，主要由以下重量份数比的成分制成：

本发明提供一种环磷腺苷葡胺脂质体注射剂，其中优选的重量份数比的成分组成如下：

本发明还提供一种环磷腺苷葡胺脂质体注射剂的制备方法，包括如下步骤：

（1）称取环磷腺苷葡胺、牛胆酸钠、胆固醇和十二烷基磺酸钠溶于适量有机溶剂中，搅拌溶解；

（2）将焦亚硫酸钠和甘露醇溶于缓冲盐溶液中，然后将缓冲盐溶液加入到上述溶液中，进行短时超声，直到形成稳定的W/O型乳化剂；

（3）将上述乳化剂进行减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后，然后加入适量的缓冲盐溶液，旋转震荡直至使器壁上的凝胶脱落，加压条件下继续蒸发，制得水性混悬液，然后短时超声；

（4）将超声后的脂质体混悬液离心分离，经超滤膜除去细菌及热源，然后流通蒸汽消毒，无菌条件下冷冻干燥，分装；或者将超声后的脂质体混悬液经超滤膜除去细菌及热源，然后流通蒸汽消毒，定容，无菌条件下灌装，灭菌，制得环磷腺苷葡胺脂质体注射剂。

上所述的制备方法，其中所述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、氯仿、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙腈中的一种或几种，优选体积比为4：1的乙醇和氯仿的混合溶剂。

上所述的制备方法，其中所述的缓冲溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液中的一种，优选为pH为6.2的磷酸盐缓冲溶液。

上所述的制备方法，其中将超声后的脂质体混悬液4500rpm，离心10min，经超滤膜除去细菌及热源。

本发明制得的环磷腺苷葡胺脂质体注射剂，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；

并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

具体实施方式

以下通过具体优选的实施例对本发明进行进一步说明。这些实施例仅是说明性的，并不应理解为对本发明的限制。

实施例1环磷腺苷葡胺脂质体冻干粉针剂

处方（1000瓶）：

制备工艺：

（1）精密称取30g环磷腺苷葡胺、150g牛胆酸钠、60g胆固醇和30g十二烷基磺酸钠溶于800ml体积比为4：1的甲醇和氯仿的混合溶剂中，搅拌溶解；

（2）将溶有3g焦亚硫酸钠和90g甘露醇的pH为6.2的磷酸盐缓冲溶液800ml，溶入到上述溶液中，进行短时超声，直到形成稳定的W/O型乳化剂；

（3）将上述乳化剂进行减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后，加入800ml pH为6.0的磷酸盐缓冲溶液，旋转震荡直至使器壁上的凝胶脱落，加压条件下继续蒸发，制得水性混悬液，然后短时超声；

（4）将超声后的脂质体混悬液4500rpm，离心10min，经超滤膜除去细菌及热源，然后流通蒸汽消毒30分钟，无菌条件下冷冻干燥，分装，制得环磷腺苷葡胺脂质体冻干粉针剂。

实施例2环磷腺苷葡胺脂质体冻干粉针剂

处方（1000瓶）：

制备工艺：

（1）精密称取90g环磷腺苷葡胺、150g牛胆酸钠、90g胆固醇和45g十二烷基磺酸钠溶于1000ml体积比为4：1的甲醇和氯仿的混合溶剂中，搅拌溶解；

（2）将溶有4.5g焦亚硫酸钠和90g甘露醇的pH为6.2的磷酸盐缓冲溶液1000ml，溶入到上述溶液中，进行短时超声，直到形成稳定的W/O型乳化剂；

（3）将上述乳化剂进行减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后，加入1000ml pH为6.0的磷酸盐缓冲溶液，旋转震荡直至使器壁上的凝胶脱落，加压条件下继续蒸发，制得水性混悬液，然后短时超声；

（4）将超声后的脂质体混悬液4500rpm，离心10min，经超滤膜除去细菌及热源，然后流通蒸汽消毒30分钟，无菌条件下冷冻干燥，分装，制得环磷腺苷葡胺脂质体冻干粉针剂。

实施例3环磷腺苷葡胺脂质体注射液

处方（1000瓶）：

制备工艺：

（1）精密称取60g环磷腺苷葡胺、60g牛胆酸钠、300g胆固醇和120g十二烷基磺酸钠溶于1500ml体积比为4：1的甲醇和氯仿的混合溶剂中，搅拌溶解；

（2）将溶有12g焦亚硫酸钠和240g甘露醇的pH为6.2的磷酸盐缓冲溶液1500ml，溶入到上述溶液中，进行短时超声，直到形成稳定的W/O型乳化剂；

（3）将上述乳化剂进行减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后，加入1500ml pH为6.0的磷酸盐缓冲溶液，旋转震荡直至使器壁上的凝胶脱落，加压条件下继续蒸发，制得水性混悬液，然后短时超声；

（4）将超声后的脂质体混悬液经超滤膜除去细菌及热源，然后流通蒸汽消毒30分钟，用pH为6.2的磷酸盐缓冲溶液定容至2000ml，无菌条件下灌装，灭菌，制得环磷腺苷葡胺脂质体注射液。

对比例1-3

分别选用本发明优选组分之外的成分以及本发明组分优选含量配比之外的组合进行对比例试验，制备工艺同实施例1-3，从而制得对比例1-3，各对比例组分如下表所示：

注：＊CN101804051B

试验例1粒径的测定

室温条件下，取实施例和对比例的环磷腺苷葡胺脂质体注射剂，以生理盐水配成0.1%的溶液，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果如表1：

表1粒径检测结果

实施例	平均粒径	外观
			实施例1	201.1±13.4nm	球状，均匀
实施例2	223.2±16.7nm	球状，均匀
			实施例3	208.2±18.3nm	球状，均匀
对比例1	935.7±27.5nm	不均匀，杂乱
			对比例2	843.6±31.5nm	不均匀，杂乱
对比例3	717.5±37.6nm	不均匀，杂乱

由以上结果可知，实施例1-3制得的脂质体粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的脂质体粒径不均匀，形状不定，大小不一。

试验例2包封率的测定

将实施例和对比例制备的环磷腺苷葡胺脂质体注射剂加水溶解稀释成0.1%的溶液，高速离心，5000r/min，离心20分钟，取上清液，用甲醇溶解，HPLC法测环磷腺苷葡胺含量，计算包封率，结果如表2：

表2包封率测定结果

由以上结果可知，实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率，说明本发明的产品具有预料不到的效果。

试验例3稳定性考察

将本发明实施例1-3和对比例1-3制备的样品和上市环磷腺苷葡胺注射液（批号：110801，吉林海外制药有限公司）分别置于高温40℃、相对湿度75%的条件下6个月，进行加速试验考察，实验结果如表3：

表3加速试验结果

由以上结果可知，加速6月时，上市制剂和对比例样品含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。

试验例4渗漏率试验

取试验例1-3，对比例1-3制备的样品，分别室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果见表4。

表4渗漏率试验结果

由以上试验结果可知，本发明实施例制备的样品在长期储存过长中渗漏率变化不大，而对比例的样品渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说明本发明制备的环磷腺苷葡胺脂质体注射剂具有较高的稳定性。

试验例5生物利用度的测定

取24只SD大鼠，体重（200±10）g，随机分成4组，每组分别注射给药3mg/kg的环磷腺苷葡胺脂质体注射剂，给药后2h采血到168小时，以5000rpm离心3min，分离血浆，精密量取血浆50ul，加入含2.25ug／ml的乙腈溶液50ul，涡旋振荡10s，离心(18000rpm)2min，取上清液50ul与0.04%的三氟乙酸水溶液50ul混匀，取20ul进样分析。使用软件3p87和WT1.4进行数据分析。试验结果如下表。

表5有关药动学参数

由以上实验数据可以看出，本发明实施例制备的环磷腺苷葡胺脂质体注射剂和对比例相比，生物利用度大大提高，充分说明了本发明由于赋形剂和活性成分的制成的环磷腺苷葡胺脂质体，具有协同作用，制备的注射剂大大地提高生物利用度，获得了预料不到技术效果。

Claims (3)

1.一种环磷腺苷葡胺脂质体注射剂，其特征在于主要由下列重量份的成分制成：

该脂质体注射剂的制备方法包括如下步骤：

（1）称取环磷腺苷葡胺、牛胆酸钠、胆固醇和十二烷基磺酸钠溶于适量有机溶剂中，搅拌溶解；

（2）将焦亚硫酸钠和甘露醇溶于缓冲盐溶液中，然后将缓冲盐溶液加入到上述溶液中，进行短时超声，直到形成稳定的W/O型乳化剂；

（3）将上述乳化剂进行减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后，然后加入适量的缓冲盐溶液，旋转震荡直至使器壁上的凝胶脱落，加压条件下继续蒸发，制得水性混悬液，然后短时超声；

（4）将超声后的脂质体混悬液离心分离，经超滤膜除去细菌及热源，然后流通蒸汽消毒，无菌条件下冷冻干燥，分装；或者将超声后的脂质体混悬液经超滤膜除去细菌及热源，然后流通蒸汽消毒，定容，无菌条件下灌装，灭菌，制得环磷腺苷葡胺脂质体注射剂；

所述有机溶剂为4：1的乙醇和氯仿的混合溶剂；

所述的缓冲溶液为pH为6.2的磷酸盐缓冲溶液。

2.根据权利要求1所述的环磷腺苷葡胺脂质体注射剂，其中各重量份的成分为：

3.权利要求1或2所述的环磷腺苷葡胺脂质体注射剂的在制备治疗心力衰竭、心肌炎、病窦综合征、冠心病、心肌病及心律失常的药物中的应用。