CN102366410B - 一种阿加曲班脂质体注射剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种阿加曲班脂质体注射剂及其制法。通过选用特定重量配比的阿加曲班、鞘髓磷脂、十八胺、和吐温80，制成品质优异的阿加曲班脂质体注射剂。与现有制剂相比，本发明的制剂大大提高了制剂的稳定性和生物利用度，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，释药平稳，疗效更显著。

Description

一种阿加曲班脂质体注射剂

技术领域

本发明涉及一种阿加曲班的新剂型，具体涉及一种阿加曲班的脂质体注射剂及其制法，属于医药技术领域。

背景技术

阿加曲班(Argatroban)是由日本三菱化学研究所研制合成的抗血栓药，其化学名称为(2R，4R)-4-甲基1-[N-((R，S)-3-甲基1，2，3，4-四氢-8-喹啉磺酰基)-L-精氨酰基]-2-哌啶羧酸，分子式C₂₃H₃₆N₆O₅S，分子量508.63，结构式为：

阿加曲班是一种凝血酶抑制剂，可逆地与凝血酶活性位点结合，阿加曲班的抗血栓作用不需要辅助因子抗凝血酶III。阿加曲班通过抑制凝血酶催化或诱导的反应，包括血纤维蛋白的形成，凝血因子V、VII和XIII的活化，蛋白酶C的活化，及血小板聚集发挥其抗凝血作用。临床上用于周围动脉闭塞性疾病，急性脑血栓形成，以及心肌梗死溶栓的辅助治疗，并用于在抗凝血酶(AT)缺乏患者进行血透时的抗凝处理。

阿加曲班在水中具有较差的溶解性，因此不适合制成包含高浓度阿加班曲的注射剂。美国专利US5214052通过将阿加曲班溶解在包含水、乙醇和糖类的溶出介质中来解决这一问题。中国专利CN101516370A提供了一种阿加曲班的水性制剂，采用乳糖酸和蛋氨酸作为增溶剂制成即可给药型可注射剂型。然而上述方法制备的阿加班曲注射剂，在长期放置过程中不稳定，影响了药物的临床应用。

目前国内已有阿加曲班注射液的销售，但是注射液长期放置澄明度不合格，pH值降低，稳定性较差，阿加曲班含量下降。

脂质体(liposomes)最初是由英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。脂质体是指将药物包封于类脂质双分子形成的薄膜中间所制成的超微型球状定向药物载体制剂，属于靶向给药系统的一种新剂型。20世纪60年代末Rahman等人首先将脂质体作为药物载体应用，近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，脂质体作为药物载体，具有诸多优点：如脂质体既能包封脂溶性药物，又能包封水溶性药物；减轻变态反应和免疫反应；延缓释放，降低体内消除速度；能有效地保护被包裹药物，提高生物利用度；改变药物在体内的分布，并能靶向性释药，能降低药物的毒副作用；适合多途径给药等。

本发明人经过长期认真的研究，出乎意料的发现，将阿加曲班制成脂质体注射剂，能够提高药物的稳定性，提高生物利用度。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定的阿加曲班脂质体注射剂，主要由阿加曲班、鞘髓磷脂、十八胺、吐温80制成，优选加入抗氧剂和赋形剂提高其稳定性。

为了形成品质优良的阿加曲班脂质体注射剂，重要的是寻找能与阿加曲班良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料。

为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和实现，发现特定重量配比的阿加曲班、鞘髓磷脂、十八胺、和吐温80能制成阿加曲班脂质体注射剂，其中，作为药物活性成分的阿加曲班的包封率高，脂质体粒径小且分布均匀，与现有技术中的阿加曲班注射液相比，本发明制剂的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长，药物的生物相容性高，生物利用度明显提高，疗效明显提高。

一方面，本发明提供一种阿加曲班脂质体注射液，其主要由以下重量配比的成分制成：

优选地，本发明的阿加曲班脂质体注射液，主要由以下重量配比的成分制成：

进一步优选地，十八胺和吐温80的重量比为2∶1。

作为用于形成脂质体的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。本发明人通过大量研究发现鞘髓磷脂特别适用于作为阿加曲班的基础磷脂成膜材料。

鞘髓磷脂作为一种天然磷脂，其含量非常高，容易获得，价格低廉。鞘髓磷脂的相变温度较高，易于形成稳定的脂质体膜。较其他磷脂更易形成品质优良的脂质体，进一步提高脂质体的包封率、稳定性和降低渗漏率等。

在本发明的阿加曲班脂质体注射液中，相对于10重量份的阿加曲班而言，鞘髓磷脂的用量为10-20重量份。如果鞘髓磷脂的用量低于10重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果鞘髓磷脂的用量的用量高于20重量份，则作为药物活性成分的阿加曲班的包封率下降，注射液的品质以及疗效降低。

本发明的阿加曲班脂质体注射液，特别之处在于采用十八胺和吐温80协同调节脂质体的膜稳定性。

研究表明，脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。因此，本发明的阿加曲班脂质体注射剂的稳定性高，是导致药物生物利用度高的因素之一。

在本发明的阿加曲班脂质体注射剂中，相对于10重量份的阿加曲班而言，吐温-80的用量为2.5-7.5重量份。如果吐温-80的用量低于2.5重量份，则由于其用量过低导致对阿加曲班脂质体注射液的稳定性改进不够，反之，如果吐温-80的用量高于7.5重量份，则用于其用量过高而导致脂质体膜易于泄露。

最终研究发现，当使用上述特定量的阿加曲班、鞘髓磷脂、十八胺和吐温-80时，可以得到品质优良的阿加曲班脂质体，其包封率、稳定性以及生物利用度均得到预料不到的提高。

本发明的阿加曲班脂质体注射剂，其阿加曲班的规格可以为20ml：10mg(注射液体积：阿加曲班重量)。

本发明还提供了一种阿加曲班脂质体注射剂的制备方法，具体包括如下制备步骤：

(1)按重量组分称取阿加曲班、鞘髓磷脂、十八胺、吐温80和置于梨形瓶中，加入有机溶剂中，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上40-50℃减压除去有机溶液，制得磷脂膜；

(2)用缓冲盐溶液水化上述含药磷脂薄膜，并置于组织捣碎机中捣碎，加缓冲盐溶液至全量，混匀；

(3)将上述脂质体溶液0.45μm微孔滤膜过滤，分装于安瓿，每支20ml，流通蒸汽灭菌30分钟，既得阿加曲班脂质体注射剂。

上述所述的制备方法，其中所述的有机溶剂选自氯仿、乙醇、苯甲醇、甲醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙腈、正己烷和二氯甲烷中的一种或几种，优选为正丁醇。

上述所述的制备方法，其中所述的缓冲溶液选自磷酸盐缓中溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种，优选为pH为5.6的磷酸盐缓冲溶液。

有益效果

本发明人通过选择适当的材料成分、采用合适的制备工艺，获得了品质优良的阿加曲班脂质体注射液，脂质体粒径分布均匀，包封率高，稳定性高。

本发明的脂质体注射剂具有良好的制剂稳定性，脂质体具有良好的包封率，较现有产品具有更好的生物利用度，本发明制得的脂质体注射剂减少了毒副作用，提高了制剂产品质量，适合于工业化大生产。

附图说明

图1是阿加曲班脂质体注射剂的血药浓度-时间曲线。

具体实施方式

以下通过具体实施方式本发明进行进一步说明，本发明的特点和优点将随着这些说明而变得更为清楚。

实施例

下面参照实施例进一步详细阐述本发明，但是领域的技术人员应当理解，本发明并不限于这些实施例以及是用的制备方法。并且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行等同替换、组合、改良和修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。

实施例1阿加曲班脂质体注射液

处方(1000支)

制备工艺：

(1)分别称取10g阿加曲班、150g鞘髓磷脂、150g十八胺、75g吐温80置于梨形瓶中，加入1000ml正丁醇，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上50℃减压除去正丁醇，制得磷脂膜；

(2)用1000mlpH为5.6的磷酸盐缓冲溶液水化上述含药磷脂薄膜，并置于组织捣碎机中10000rpm捣碎，然后加入pH为5.6的磷酸盐缓冲溶液定容至20L，混匀；

(3)将上述脂质体溶液，过0.45μm微孔滤膜过滤，分装于安瓿，每支20ml，流通蒸汽灭菌30分钟，即得阿加曲班脂质体注射液。

实施例2阿加曲班脂质体注射液

处方(1000支)

制备工艺：

(1)分别称取10g阿加曲班、200g鞘髓磷脂、50g十八胺、25g吐温80置于梨形瓶中，加入1000ml正丁醇，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上50℃减压除去正丁醇，制得磷脂膜；

(2)用1000mlpH为5.6的磷酸盐缓中溶液水化上述含药磷脂薄膜，并置于组织捣碎机中10000rpm捣碎，然后加入pH为5.6的磷酸盐缓冲溶液定容至20L，混匀；

(3)将上述脂质体溶液，0.45μm微孔滤膜过滤，分装于安瓿，每支20ml，流通蒸汽灭菌30分钟，即得阿加曲班脂质体注射液。

实施例3阿加曲班脂质体注射液

处方(1000支)

制备工艺：

(1)分别称取10g阿加曲班、200g鞘髓磷脂、80g十八胺、30g吐温80置于梨形瓶中，加入1000ml正丁醇，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上50℃减压除去正丁醇，制得磷脂膜；

(2)用1000mlpH为5.6的磷酸盐缓冲溶液水化上述含药磷脂薄膜，并置于组织捣碎机中10000rpm捣碎，然后加入pH为5.6的磷酸盐缓冲溶液定容至20L，混匀；

(3)将上述脂质体溶液，0.45μm微孔滤膜过滤，分装于安瓿，每支20ml，流通蒸汽灭菌30分钟，即得阿加曲班脂质体注射液。

对比例1-4阿加曲班脂质体注射液的制备

采用分别与实施例1-4中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-4中的原料成分分别制成阿加曲班肢质体注射液；

表1对比例1-4中所用原料成分

试验例1脂质体粒径的测定

室温条件下，取实施例1-3和对比例1-4中的阿加曲班脂质体注射剂，置于SubmicronParticle Sizer Model370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。

表2脂质体粒径检测结果

从表2可知，实施例1-3制得的固体脂质纳米粒粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-4制得的固体脂质纳米粒粒径不均匀，形状不定，大小不一。

具体而言，即使采用相同的生产工艺时，与对比例1相比，实施例1，4中所得脂质体外观规则，平均粒径小，粒径均匀。这表明，当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得阿加曲班脂质体的品质明显劣于本发明。

具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，与对比例2，3相比，实施例2，，3中所得脂质体外观规则，平均粒径小，粒径均匀。这表明当使用本发明所用成分以外的成分时，所得阿加曲班脂质体的品质明显劣于本发明。

试验例2包封率的测定

将实施例1-3和对比例1-4中制备的阿加曲班脂质体注射剂以5000r/min的转速高速离心，离心20分钟，取上清液，用甲醇溶解，HPLC法测阿加曲班含量，计算包封率，结果示于下表3中。

表3包封率测定结果

由表3可知，实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-4的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分对，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。

试验例3稳定性考察

将本发明实施例1-3制备的样品和上市阿加曲班注射液(批号：20100912，天津药物研究院药业有限责任公司)分别置于高温40℃、相对湿度75％的条件下6个月，进行加速试验考察，实验结果示于下表4中。

表4加速试验结果

由表4可知，加速6月时，上市制剂和对比例1-4的含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。

试验例4渗漏率试验

取实验例1-3和对比例1-4制备的样品，在室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果示于下表5中。

表5渗漏率试验结果

由表5可知，长期储存时，本发明实施例1-3中制备的阿加曲班脂质体注射液渗漏率变化不大，而对比例1-4中制备的注射液渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说明本发明制备的阿加曲班脂质体注射液具有更高的稳定性。

试验例5血药浓度的测定

将40只大鼠随机分成8组，每组分别皮下注射给药实施例1-3及对比例1-4中制备的注射液，以及市售阿加曲班注射液(批号：20100912，天津药物研究院药业有限责任公司)，注射量为2ml阿加曲班注射液。给药后分别于0.5h、1h、1.5h、2h、3h、6h、8h、12h和24h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1-3中制备的阿加曲班脂质体注射液、对比例1-4中制备的阿加曲班脂质体注射液和市售阿加曲班注射液的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中。

由图1可知，与对比例1-4中制备的阿加曲班脂质体注射液和市售阿加曲班脂质体注射液相比，本发明实施例1-3中制备的阿加曲班脂质体注射液具有以下优点：在体内的消除速度减缓，在体循环中分布时间延长，达到了改进的缓释效果，生物利用度增加。

工业实用性

由上述实施例以及实验例的结果可知，本发明的阿加曲班脂质体具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，这些均因落入本发明的保护范围内。

本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。

Claims (2)

1.一种阿加曲班脂质体注射液，其特征在于由下列成分制成：

处方，1000支

制备工艺：

（1）分别称取10g阿加曲班、150g鞘髓磷脂、150g十八胺、75g吐温80置于梨形瓶中，加入1000ml正丁醇，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上50℃减压除去正丁醇，制得磷脂膜；

（2）用1000mlpH为5.6的磷酸盐缓冲溶液水化上述含药磷脂薄膜，并置于组织捣碎机中10000rpm捣碎，然后加入pH为5.6的磷酸盐缓冲溶液定容至20L，混匀；

（3）将上述脂质体溶液，过0.45μm微孔滤膜过滤，分装于安瓿，每支20ml，流通蒸汽灭菌30分钟，即得阿加曲班脂质体注射液。

2.一种阿加曲班脂质体注射液，其特征在于由下列成分制成：

处方，1000支

制备工艺：

（1）分别称取10g阿加曲班、200g鞘髓磷脂、50g十八胺、25g吐温80置于梨形瓶中，加入1000ml正丁醇，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上50℃减压除去正丁醇，制得磷脂膜；

（2）用1000mlpH为5.6的磷酸盐缓冲溶液水化上述含药磷脂薄膜，并置于组织捣碎机中10000rpm捣碎，然后加入pH为5.6的磷酸盐缓冲溶液定容至20L，混匀；

（3）将上述脂质体溶液，0.45μm微孔滤膜过滤，分装于安瓿，每支20ml，流通蒸汽灭菌30分钟，即得阿加曲班脂质体注射液。