PT1339685E - Bifenilcarboxamidas uteis como agentes de dimunuição do teor de lipidos - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO

"BIFENILCARBOXAMIDAS ÚTEIS COMO AGENTES DE DIMINUIÇÃO DO TEOR DE LÍPIDOS" A presente invenção diz respeito a novos compostos bifenilcarboxamida com actividade inibidora da apolipoproteina B e actividade concomitante de diminuição do teor de lípidos. A invenção refere-se suplementarmente a métodos para preparar esses compostos e a composições farmacêuticas compreendendo esses compostos, bem como à utilização desses compostos como medicamento para o tratamento de hiperlipidemia, obesidade e diabetes de tipo II . A obesidade é a causa de uma miríade de problemas de saúde graves, como o aparecimento adulto de diabetes e doença cardíaca. Adicionalmente, a perda de peso está a tornar-se numa obsessão numa proporção crescente da população humana. É agora amplamente reconhecida a relação causal entre hipercolesterolemia, particularmente a associada a concentrações crescentes no plasma de lipoproteínas de baixa densidade (daqui em diante referidas como LDL) e lipoproteínas de muito baixa densidade (daqui em diante referidas como VLDL), e aterosclerose e/ou doença cardiovascular prematuras. No entanto, está presentemente disponível um número limitado de fármacos para o tratamento de hiperlipidemia. Os fármacos maioritariamente utilizados na gestão de hiperlipidemia incluem resinas sequestrantes de ácidos biliares, como colestiramina e colestipol, derivados do ácido fíbrico, como bezafibrato, clofibrato, fenofibrato, ciprofibrato e gemfibrozil, inibidores da síntese do ácido nicotínico e colesterol, como inibidores 2 da HMG Co-enzima-A redutase. A inconveniência da administração (uma forma granular a ser dispersa em água ou sumo de laranja) e os efeitos secundários consideráveis (desconforto gastrointestinal e obstipação) de resinas sequestrantes de ácidos biliares são grandes desvantagens. Os derivados do ácido fíbrico induzem um decréscimo moderado (em 5 até 25%) do colesterol de LDL (excepto em pacientes hipertrigliceridémicos, nos quais os níveis inicialmente baixos tendem a aumentar) e, apesar de serem habitualmente bem tolerados, sofrem efeitos secundários incluindo potenciação da varfarina, prurido, fadiga, dor de cabeça, insónias, miopatia reversível dolorosa e ancilose em grupos de músculos grandes, impotência e função renal enfraquecida. 0 ácido nicotínico é um agente potente de diminuição do teor de lípidos, resultando num decréscimo de 15 até 40% do colesterol de LDL (e mesmo de 45 até 60% quando combinado com uma resina sequestrante de ácidos biliares), mas tem uma incidência elevada de efeitos secundários problemáticos relacionados com a acção vasodilatadora associada ao fármaco, como dores de cabeça, afrontamentos, palpitações, taquicardia e síncopes ocasionais, bem como outros efeitos secundários, como desconforto gastrointestinal, hiperucemia e enfraquecimento da tolerância à glucose. Na família dos inibidores da HMG Co-enzima-A redutase, a lovastatina e a simvastatina são pró-fármacos inactivos contendo um anel lactona que é hidrolisado no fígado, formando o derivado hidroxiácido activo correspondente. Induzem uma redução do colesterol de LDL em 35 até 45% e são geralmente bem tolerados, com baixa incidência de efeitos secundários desprezáveis. No entanto, ainda são necessários novos agentes de diminuição do teor de lípidos com eficiência melhorada e/ou actuando via 3 outros mecanismos diferentes dos fármacos mencionados acima.

As lipoproteínas do plasma são complexos solúveis em água, de elevado peso molecular, formados a partir de lípidos (colesterol, triglicéridos, fosfolipidos) e apolipoproteinas. Foram definidas cinco grandes classes de lipoproteínas, que diferem na proporção de lípidos e no tipo de apolipoproteína, todas originárias no fígado e/ou no intestino, de acordo com a sua densidade (medida por ultracentrifugação). Incluem LDL, VLDL, lipoproteínas de densidade intermédia (daqui em diante referidas como IDL) , lipoproteínas de alta densidade (daqui em diante referidas como HDL) e quilomícrons. Foram identificadas dez principais apolipoproteinas do plasma humano. A VLDL, que é segregada pelo fígado e contém apolipoproteína B (daqui em diante referida como Apo-B), sofre degradação para LDL, que transporta 60 até 70% do colesterol total presente no soro. A Apo-B também é o principal componente proteico da LDL. O colesterol de LDL acrescido no soro, devido a super-síntese ou metabolismo decrescido, está relacionado de forma causal com aterosclerose. Em contraste, as lipoproteínas de alta densidade (daqui em diante referidas como HDL), que contêm apolipoproteína Al, exercem um efeito protector e estão inversamente correlacionadas com o risco de doença cardíaca coronária. Assim, a razão HDL/LDL é um método conveniente para avaliar o potencial aterogénico do perfil de lípidos no plasma de um indivíduo.

As duas isoformas da apolipoproteína (apo) B, apo B-48 e apo B-100, são proteínas importantes no metabolismo de lipoproteínas humanas. A apo B-48, denominada desta forma porque aparenta ter cerca de 48% do tamanho da apo B-100 em géis de dodecilsulfato de sódio-poliacrilamida, é 4 sintetizada pelo intestino em humanos. A apo B-48 é necessária para a reunião de quilomicrons; em consequência, tem um papel obrigatório na absorção intestinal de gorduras dietéticas. A apo B-100, que é produzida no fígado em humanos, é necessária para a síntese e secreção de VLDL. As LDL, que contêm cerca de 2/3 do colesterol presente no plasma humano, são produtos metabólicos das VLDL. A apo B-100 é, virtualmente, o único componente proteico da LDL. Concentrações elevadas de apo B-100 e colesterol de LDL no plasma são factores de risco reconhecidos para o desenvolvimento de doença aterosclerótica das artérias coronárias.

Um grande número de doenças genéticas e adquiridas pode resultar em hiperlipidemia. Podem ser classificadas em estados hiperlipidémicos primários e secundários. As causas mais comuns de hiperlipidemias secundárias são diabetes mellitus, ingestão abusiva de álcool, drogas, hipotiroidismo, falha renal crónica, síndroma nefrótica, colestase e bulimia.

As hiperlipidemias primárias também foram classificadas em hipercolesterolemia comum, hiperlipidemia combinada familiar, hipercolesterolemia familiar, hiperlipidemia remanescente, síndroma de quilomicronemia e hipertrigliceridemia familiar.

Sabe-se que a proteína de transferência de triglicéridos microssómicos (daqui em diante referida como MTP) catalisa o transporte de triglicéridos e ésteres de colesterilo por preferência para fosfolípidos, como fosfatidilcolina. Foi demonstrado, por D. Sharp et al., Nature (1993) 365: 65, que a deficiência causadora de abetalipoproteinemia se 5 situa no gene MTP. Isto indica que a MTP é necessária para a síntese de lipoproteínas contendo Apo B, como VLDL, o precursor da LDL. Em consequência, um inibidor da MTP irá inibir a síntese de VLDL e LDL, desse modo diminuindo os níveis de VLDL, LDL, colesterol e triglicéridos em humanos. Foram relatados inibidores da MTP na candidatura de patente canadiana N° 2 091 102 e em WO 96/26205. Também foram relatados inibidores da MTP pertencentes à classe das poliarilcarboxamidas na Patente U.S. N° 5 760 246, bem como em WO-96/40640 e WO-98/27979. A patente US-5 968 950 revela cloridrato de ácido 4'-trifluorometilbifenil-2-carboxílico-[2-(2-acetilaminoetil)-1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolino-6-il]-amida como inibidor de MTP/secreção de Apo B. A patente US-5 827 875 revela fluorenos substituídos com pirrolidinilo como inibidores da proteína de transferência de triglicéridos microssómicos. A patente US-5 965 577 revela inibidores heterocíclicos da proteína de transferência de triglicéridos microssómicos. A patente WO-00/32582 revela derivados benzamida e a sua utilização como inibidores da secreção de apoB-100, e a patente WO-98/23593 revela ácido 4'-(trifluorometil) bifenil-2-carboxílico (1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolino-6-il)amidas inibidoras de MTP/secreção de apoB que são úteis no tratamento de estados tais como aterosclerose, pancreatite, obesidade, hipercolesterolemia e afins.

Um dos objectivos da presente invenção consiste em proporcionar um tratamento aperfeiçoado para pacientes que sofrem de obesidade ou aterosclerose, especialmente aterosclerose coronária, e mais geralmente de perturbações que estão relacionadas com aterosclerose, como doença cardíaca isquémica, doença vascular periférica e doença vascular cerebral. Outro objectivo da presente invenção 6 consiste em causar regressão da aterosclerose e inibir as suas consequências clinicas, particularmente morbidez e mortalidade. A presente invenção baseia-se na descoberta inesperada de que uma classe de novos compostos bifenilcarboxamida actua como inibidores selectivos da MTP, isto é, consegue bloquear selectivamente a MTP ao nivel da parede intestinal em mamíferos, e, consequentemente, é um candidato promissor a medicamento, nomeadamente para o tratamento de hiperlipidemia. Adicionalmente, a presente invenção proporciona vários métodos para preparar esses compostos bifenilcarboxamida, bem como composições farmacêuticas incluindo esses compostos. Suplementarmente, a invenção fornece alguns compostos novos que são intermediários úteis na preparação dos compostos bifenilcarboxamida terapeuticamente activos, bem como métodos para preparar esses intermediários. Por fim, a invenção proporciona um método de tratamento de um estado seleccionado entre aterosclerose, pancreatite, obesidade, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, diabetes e diabetes de tipo II, compreendendo administrar a um mamífero um composto bifenilcarboxamida terapeuticamente activo. A presente invenção refere-se a uma família de novos compostos bifenilcarboxamida de fórmula (I):

0), 7 aos respectivos N-óxidos, sais de adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis e formas estereoquimicamente isoméricas, em que: p1, p2 e p3 são inteiros, cada um seleccionado independentemente entre 1 até 3; cada R1 é seleccionado independentemente entre hidrogénio, Ci_4alquilo, Ci_4alquiloxi, halo, hidroxi, mercapto, ciano, nitro, Ci_4alquiltio ou poli-haloCi_6alquilo, amino, Ci_ 4alquilamino e di (Ci_4alquil) amino; cada R2 é seleccionado independentemente entre hidrogénio, Ci_4alquilo, Ci_4alquiloxi, halo ou trifluorometilo; R3 é hidrogénio ou Ci_4alquilo; cada R4 é seleccionado independentemente entre hidrogénio, Ci_4alquilo, Ci-4alquiloxi, halo ou trif luorometilo; Z é um radical bivalente de fórmula:

em que n é um inteiro desde 2 até 4, e a fracção -(CH2)n_ presente no radical (a-1) pode estar opcionalmente substituída com um ou dois grupos Ci-4alquilo; m e m' são inteiros desde 1 até 3; cada um dos R5 e R6 é seleccionado independentemente entre hidrogénio, Ci_6alquilo ou arilo; cada um dos X1 e X2 é seleccionado independentemente entre CH, N ou um átomo de carbono com hibridação sp2 e, no radical (a-1), pelo menos um dos X1 ou X2 é N; 8 A é Ci-6alcanodiilo substituído com um grupo arilo; B representa hidrogénio; Ci-i0alquilo; arilo ou heteroarilo, cada um opcionalmente substituído com um grupo seleccionado entre halo, ciano, nitro, Ci-4alquiloxi, amino, Ci-ioalquilamino, di (Ci-ioalquil) amino, Ci-ioacilo, Ci-ioalquiltio, Ci-ioalcoxicarbonilo, Ci-ioalquilaminocarbonilo e di (Ci-ioalquil) amino-carbonilo; arilCi-ioalquilo; heteroarilCi-ioalquilo; c3-iocicloalquilo; poli-haloCi-6alquilo; C3-6alcenilo; C3-6alcinilo; NR7R8, ou OR9; em que cada um dos R7 e R8 representa independentemente hidrogénio, Ci_4oalquilo, arilo ou heteroarilo cada um opcionalmente substituído com um grupo seleccionado entre halo, ciano, Ci_4alquiloxi, amino, C4-i0alquilamino, di (Ci_ioalquil) amino, Ci_i0acilo, Ci_ loalquiltio, Ci_ioalquilaminocarbonilo e di(C4_ ioalquil) aminocarbonilo; arilCi_i0alquilo, heteroarilCi-i0alquilo, C3_10cicloalquilo, C7_i0policicloalquilo, poli-haloCi_6alquilo, C3-3alcenilo, C3_8alcinilo, benzo-C5-8CÍcloalquilo fundido, e em que R7 e R8, tomados em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, podem formar um radical heterocíclico saturado possuindo desde 4 até 8 átomos de carbono, e em que R9 representa Ci-ioalquilo, arilo ou heteroarilo cada um opcionalmente substituído com um grupo seleccionado entre halo, ciano, nitro, Ci-4alquiloxi, amino, Ci-ioalquilamino, di (Ci-ioalquil) amino, Ci-ioacilo, Ci-ioalquiltio, Ci-ioalquilaminocarbonilo e di(C4-loalquil) aminocarbonilo; arilC4-ioalquilo; heteroarilCi-10alquilo; C3_iocicloalquilo; C7-iopolicicloalquilo; poli-haloC4-6alquilo; C3_8alcenilo; C3-8alcinilo, ou benzoC5-scicloalquilo fundido. 9 A menos que afirmado em contrário, tal como são utilizados nas definições anteriores e daqui em diante: halo é uma designação genérica de fluoro, cloro, bromo e iodo;

Ci-4alquilo define radicais de hidrocarbonetos saturados de cadeia linear e ramificada possuindo desde 1 até 4 átomos de carbono, tais como, por exemplo, metilo, etilo, propilo, n-butilo, 1-metiletilo, 2-metilpropilo, 1, 1-dimetiletilo e afins; pretende-se que Ci-6alquilo inclua Ci_4alquilo (como aqui definido acima) e os respectivos homólogos de cadeia longa possuindo 5 ou 6 átomos de carbono, tais como, por exemplo, 2-metilbutilo, n-pentilo, dimetilpropilo, n-hexilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo e afins; pretende-se que Ci-ioalquilo inclua Ci_6alquilo (como aqui definido acima) e os respectivos homólogos de cadeia longa possuindo 7 até 10 átomos de carbono, tais como, por exemplo, heptilo, etil-hexilo, octilo, nonilo, decilo e afins; poli-haloCi_6alquilo é definido como Ci-ealquilo substituído com poli-halo, em particular Ci_6alquilo (como aqui definido acima) substituído com 2 até 13 átomos de halogéneo, como difluorometilo, trifluoro-metilo, trifluoroetilo, octafluoropentilo e afins; arilo é definido como grupos mono e poliaromáticos, como fenilo opcionalmente substituído com um grupo seleccionado entre halo, ciano, nitro, Ci-4alquiloxi, amino, Ci-ioalquilamino, di (Ci-ioalquil) amino, Ci-ioacilo,

Ci-ioalquiltio, Ci-ioalcoxicarbonilo, Ci-ioalquilamino- carbonilo e di (Ci-ioalquil) aminocarbonilo; heteroarilo é definido como grupos mono e poli-heteroaromáticos, como os que incluem um ou mais 10 heteroátomos seleccionados entre azoto, oxigénio, enxofre e fósforo, em particular piridinilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, triazinilo, triazolilo, imidazolilo, pirazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, pirrolilo, furanilo, tienilo e afins, incluindo todas as respectivas formas isoméricas possíveis, e opcionalmente substituídos com um grupo seleccionado entre halo, ciano, nitro, Ci_4alquiloxi, amino, Ci-ioalquilamino, di (Ci-ioalquil)-amino, Ci-ioacilo, Ci-ioalquiltio, Ci_ loalcoxicarbonilo, Ci-ioalquilaminocarbonilo e di(Ci_ ioalquil)amino-carbonilo; C3^6alcenilo define radicais de hidrocarbonetos de cadeia linear e ramificada contendo uma ligação dupla e possuindo desde 3 até 6 átomos de carbono, tais como, por exemplo, 2-propenilo, 3-butenilo, 2-butenilo, 2-pentenilo, 3-pentenilo, 3-metil-2-butenilo, 3-hexenilo, 2-hexenilo e afins; C3^6alcinilo define radicais de hidrocarbonetos de cadeia linear e ramificada contendo uma ligação tripla e possuindo desde 3 até 6 átomos de carbono, tais como, por exemplo, 2-propinilo, 3-butinilo, 2-butinilo, 2-pentinilo, 3-pentinilo, 3-metil-2-butinilo, 3-hexinilo, 2-hexinilo e afins; C4_8CÍcloalcenilo define radicais de hidrocarbonetos cíclicos contendo uma ligação dupla e possuindo desde 4 até 8 átomos de carbono, tais como, por exemplo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclo-hexenilo, ciclo-heptenilo, ciclo-octenilo e afins; benzoC5_8CÍcloalquilo fundido define radicais tais como, por exemplo, indanilo, 1,2,3,4-tetra-hidro-naftalenilo, fluorenilo e afins; 11 C7-ioPolicicloalquilo define radicais possuindo desde 7 até 10 átomos de carbono, tais como, por exemplo, norbornilo; - Ci-6alquilamino define radicais de amino primário possuindo desde 1 até 6 átomos de carbono, tais como, por exemplo, metilamino, etilamino, propilamino, isopropilamino, butilamino, isobutilamino e afins; di(Ci_6alquil)amino define radicais de amino secundário possuindo desde 1 até 6 átomos de carbono, tais como, por exemplo, dimetilamino, dietilamino, dipropilamino, diisopropilamino, N-metil-N'-etilamino, N-etil-N'-propilamino e afins;

Ci_6alquiltio define um grupo Ci_6alquilo ligado a um átomo de enxofre, como metiltio, etiltio, propiltio, isopropiltio, butiltio e afins;

Ci_6acilo define um grupo Ci_6alquilo ligado a um grupo carbonilo, tal como, por exemplo, acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo e afins. 1 2

Exemplos do radical bivalente Z em que um dos X ou X representa um átomo de carbono com hibridação sp2 são:

Pretende-se que os sais de adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis, como aqui mencionado acima, compreendam as formas de sal de adição ácido não tóxico terapeuticamente activo que os compostos de fórmula (I) conseguem formar. Os sais de adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis podem ser convenientemente obtidos tratando a forma de base com um ácido apropriado. Ácidos apropriados compreendem, por 12 exemplo, ácidos inorgânicos, tais como ácidos halogenidricos, por exemplo, ácido clorídrico ou bromídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico e ácidos afins; ou ácidos orgânicos, tais como, por exemplo, acético, propanóico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, oxálico (isto é, etanodióico), malónico, succínico (isto é, ácido butanodióico), maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, metanossulfónico, etanossulfónico, benzenossulfónico, p-toluenossulfónico, ciclâmico, salicílico, p-aminossalicílico, pamóico e ácidos afins.

Inversamente, essas formas de sal podem ser convertidas na forma da base livre por tratamento com uma base apropriada. 0 termo sal de adição, tal como foi aqui utilizado acima, também compreende os solvatos que os compostos de fórmula (I), bem como os seus sais, conseguem formar. Esses solvatos são, por exemplo, hidratos, alcoolatos e afins.

Pretende-se que as formas de iV-óxido dos compostos de fórmula (I), que podem ser preparadas de modos conhecidos na área, compreendam os compostos de fórmula (I) nos quais um átomo de azoto está oxidado no IV-óxido. 0 termo "formas estereoquimicamente isoméricas", tal como foi aqui utilizado antes, define todas as formas isoméricas possíveis que os compostos de fórmula (I) possam possuir. A menos que mencionado ou indicado em contrário, a designação química dos compostos designa a mistura de todas as formas estereoquimicamente isoméricas possíveis, em que essas misturas contêm todos os diastereómeros e enantiómeros da estrutura molecular básica. Mais em particular, centros estereogénicos podem ter a configuração R ou S; 13 substituintes de radicais (parcialmente) saturados ciclicos e bivalentes podem ter a configuração cis ou trans. A menos que mencionado ou indicado em contrário, a designação quimica dos compostos designa a mistura de todas as formas estereoquimicamente isoméricas possíveis, em que essas misturas contêm todos os diastereómeros e enantiómeros da estrutura molecular básica. Aplica-se o mesmo aos intermediários descritos aqui utilizados para preparar os produtos finais de fórmula (I).

Os termos cis e trans são aqui utilizados de acordo com a nomenclatura do Chemical Abstracts e referem-se à posição dos substituintes numa fracção em anel. A configuração estereoquímica absoluta dos compostos bifenilcarboxamida de fórmula (I) e dos intermediários utilizados na sua preparação pode ser facilmente determinada pelos experimentados na área utilizando métodos bem conhecidos, tais como, por exemplo, difracção de raios X.

Suplementarmente, alguns compostos bifenilcarboxamida de fórmula (I) e alguns dos intermediários utilizados na sua preparação podem exibir polimorfismos. Deve entender-se que a presente invenção abrange quaisquer formas polimórficas possuindo propriedades úteis no tratamento dos estados aqui notados acima.

Um grupo de compostos interessantes consiste naqueles compostos de fórmula (I) aos quais se aplica uma ou mais das seguintes restrições: a) R1 é hidrogénio ou trifluorometilo; b) R2 é hidrogénio; 14 c) R3 é hidrogénio; d) R4 é hidrogénio; e) p1 é 1; f) p2 é 1; g) P3 é 1; h) Z é um radical bivalente de fórmula (a-1) em que cada um dos X1 e X2 é azoto; i) Zé um radical bivalente de fórmula (a-2) em que X1 é azoto e m e m' são o inteiro 1; j) Z é um radical bivalente de fórmula (a-2) em que X1 é azoto, m é o inteiro 2 e m' é o inteiro 1; k) Zé um radical bivalente de fórmula (a-3) em que X1 é azoto e m e m' são o inteiro 1; 1) Z é um radical bivalente de fórmula (a-3) em que X1 é azoto, m é o inteiro 2 e m' é o inteiro 1; m) Z é o radical bivalente de : fórmula (a-4) em que m é o inteiro 2 e m' é o inteiro 1; n) cada um dos R5 e R6 é, independentemente, hidrogénio ou metilo; o) o radical bivalente A é Ci_6alcanodiilo substituído com um grupo arilo; em particular, A é um grupo metileno substituído com fenilo; p) B é Ci-4alquiloxi ou Ci-ioalquilamino.

Compostos mais interessantes são aqueles compostos de fórmula (I) em que R1 é hidrogénio ou trifluorometilo; R2, R3 e R4 são hidrogénio; Z é um radical bivalente de fórmula (a-1) em que cada um dos X1 e X2 é azoto, n é o inteiro 2, e cada um dos R5 e R6 é, independentemente, hidrogénio ou metilo.

Outros compostos mais interessantes são aqueles compostos de fórmula (I) em que R1 é hidrogénio ou trif luorometilo; 15 R2, R3 e R4 são hidrogénio; Z é um radical bivalente de fórmula (a—2) ou (a-3) em que X1 é azoto, m e m' são o inteiro 1, e cada um dos R5 e R6 é, independentemente, hidrogénio ou metilo.

Ainda outros compostos mais interessantes são aqueles compostos de fórmula (I) em que R1 é hidrogénio ou trifluorometilo; R2, R3 e R4 são hidrogénio; Z é um radical bivalente de fórmula (a—2) ou (a-3) em que X1 é azoto, m é o inteiro 2, m' é o inteiro 1, e cada um dos R5 e R6 é, independentemente, hidrogénio ou metilo.

Ainda outros compostos mais interessantes são aqueles compostos de fórmula (I) em que R1 é hidrogénio ou trifluorometilo; R2, R3 e R4 são hidrogénio; Z é um radical bivalente de fórmula (a-4) em que m é o inteiro 2 e m' é o inteiro 1, e cada um dos R5 e R6 é, independentemente, hidrogénio ou metilo.

Uma vantagem da presente invenção é a facilidade de preparação dos compostos de fórmula (I) por um número elevado de processos diferentes. Alguns destes processos serão agora descritos em pormenor, sem pretender fornecer uma lista exaustiva dos métodos de preparação desses compostos.

Um primeiro processo de preparação de um composto bifenilcarboxamida de acordo com esta invenção é um processo em que um intermediário fenilenamina de fórmula: 16

em que B, A, Z e R4 são como definidos na fórmula (I), reage com um ácido ou haleto bifenilcarboxílico de fórmula (III) :

em que R1 e R2 são como definidos na fórmula (I) e Y1 é seleccionado entre hidroxi e halo, em pelo menos um solvente inerte para a reacção e, opcionalmente, na presença de uma base adequada, cujo processo também compreende, opcionalmente, converter um composto de fórmula (I) num respectivo sal de adição e/ou preparar respectivas formas estereoquimicamente isoméricas. No caso de Y1 ser hidroxi, pode ser conveniente activar o ácido bifenilcarboxilico de fórmula (III) adicionando uma quantidade eficaz de um promotor da reacção. Exemplos não limitativos desses promotores da reacção incluem carbonildiimidazolo, diimidas, como N,N'~diciclo-hexil-carbodiimida ou 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbo-diimida, e respectivos derivados funcionais. Para este tipo de procedimento de acilação é preferido utilizar um 17 solvente aprótico polar, tal como, por exemplo, cloreto de metileno. Bases adequadas para implementar este primeiro processo incluem aminas terciárias, como trietilamina, triisopropilamina e afins. Temperaturas adequadas para conduzir o primeiro processo da invenção variam, tipicamente, desde cerca de 20°C até cerca de 140°C, dependendo do solvente particular utilizado, e muito frequentemente consistirão na temperatura de ebulição desse solvente.

Um segundo processo para preparar um composto bifenilcarboxamida da invenção é um processo em que um intermediário de fórmula (IV):

em que R1, R2, R3, R4, A e Z são como definidos na fórmula (I) e Y2 é seleccionado entre halo e hidroxi, reage com um intermediário (V) de fórmula B-H, em que B é NR7R8 ou OR9, e R7, R8 e R9 sao como definidos na fórmula (I), em pelo menos um solvente inerte para a reacção e, opcionalmente, na presença de pelo menos um reagente de acoplamento adequado e/ou uma base adequada, cujo processo também compreende, opcionalmente, converter um composto de fórmula (I) num respectivo sal de adição e/ou preparar respectivas formas estereoquimicamente isoméricas. No caso de Y2 ser hidroxi, pode ser conveniente activar o ácido carboxilico de fórmula (IV) adicionando uma quantidade eficaz de um promotor da reacção. Exemplos não limitativos desses promotores da 18 reacção incluem carbonildiimidazolo, diimidas, como N,N'~ diciclo-hexilcarbodiimida ou 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, e respectivos derivados funcionais. No caso de se utilizar um reagente quiralmente puro de fórmula (V) , pode efectuar-se uma reacção rápida e sem formação de enantiómeros do intermediário de fórmula (IV) com esse intermediário (V) na presença suplementar de uma quantidade eficaz de um composto como hidroxibenzotriazolo, hexafluorofosfato de benzotriazoliloxitris(dimetilamino) fosfónio, hexafluorofosfato de tetrapirrolidinofosfónio, hexafluorofosfato de bromotripirrolidinofosfónio, ou respectivo derivado funcional, como revelado por D. Hudson, J. Org. Chem. (1988), _53_: 617. No caso de Y2 ser hidroxi e B ser OR9, então a reacção de esterif icação pode ser convenientemente realizada na presença de uma quantidade eficaz de um ácido, como ácido sulfúrico e afins.

Um terceiro processo para preparar um composto bifenilcarboxamida de acordo com esta invenção é um processo em que um intermediário de fórmula (VI):

(rV

em que R1, R2, R3 e R4 são como definidos na fórmula (I) e Y3 é seleccionado entre halo, B(0H>2/ alquilboronatos e respectivos análogos cíclicos, reage com um reagente de fórmula (VII): 19 ι/νζ-Η (νπ), em que Β, A e Ζ são como definidos na fórmula (I), em pelo menos um solvente inerte para a reacção e, opcionalmente, na presença de pelo menos um reagente de acoplamento de metais de transição e/ou pelo menos um ligando adequado, cujo processo também compreende, opcionalmente, converter um composto de fórmula (I) num respectivo sal de adição e/ou preparar respectivas formas estereoquimicamente isoméricas. Este tipo de reacção, conhecida na área como reacção de Buchwaldt, e referência aos reagentes de acoplamento de metais aplicáveis e/ou ligandos adequados, por exemplo, compostos de paládio, como tetra(trifenil-fosfina)paládio, tris(dibenzilideno-acetona-dipaládio, 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo e afins, podem encontrar-se, por exemplo, em Tetrahedron Letters (1996) 3/7 (40): 7181-7184, e J. Am. Chem. Soc. (1996) 118: 7216 . Se Y3 for B(0H)2, um alquilboronato ou respectivo análogo ciclico, então deve utilizar-se acetato cúprico como reagente de acoplamento, de acordo com Tetrahedron Letters (1998) 3_9 : 2933-6.

Os compostos de fórmula (I) podem ser convenientemente preparados utilizando técnicas de síntese em fase sólida, como representado no Esquema 1 abaixo. Em geral, a síntese em fase sólida envolve fazer reagir um intermediário, numa síntese, com um suporte polimérico. Em seguida, este intermediário suportado num polímero pode ser submetido a alguns passos de síntese. Depois de cada passo, as impurezas são removidas filtrando a resina e lavando-a 20 numerosas vezes com vários solventes. Em cada passo, a resina pode ser separada para reagir com vários intermediários no passo seguinte, desse modo permitindo a síntese de um grande número de compostos. Após o último passo do procedimento, a resina é tratada com um reagente ou processo para clivar a resina da amostra. Explicações mais pormenorizadas das técnicas utilizadas em química de fase sólida são descritas, por exemplo, em "The Combinatorial índex" (B. Bunin, Academic Press) e no manual da Novabiochem de 1999 "Catalogue & Peptide Synthesis Handbook" (Novabiochem AG, Suiça).

Esquema 1: 21(RVv Ο'

Η,Ν

Br , Ti(OiPr)4

NaB(OCOCH3)3H, CHaCla temperatura ambiente NOVABIOCHEM 01-64-0261

DIPEA, DM AP, CH2C12 temperatura ambiente

Pdadbag, BINAP NaOEt, NMP At

resina (II) PG-Z-H (TO)

resina (V) 22

As abreviaturas utilizadas no Esquema 1 são explicadas na Parte Experimental. Os substituintes R1, R2, R3, R4, A, B e Z são como definidos para os compostos de fórmula (I) . PG representa um grupo protector, tal como, por exemplo, t-butoxicarbonilo, Ci_6alquiloxicarbonilo, fenilmetiloxi-carbonilo e afins.

Os compostos de fórmula (I), tal como preparados nos processos aqui descritos acima, podem ser sintetizados na forma de misturas racémicas de enantiómeros, que podem ser separados uns dos outros seguindo procedimentos de resolução conhecidos na área. Os compostos racémicos de fórmula (I) podem ser convertidos nas correspondentes formas de sais diastereoméricos por reacção com um ácido quiral adequado. Essas formas de sais diastereoméricos são subsequentemente separadas, por exemplo, por cristalização selectiva ou fraccionada, e os enantiómeros são libertados por alcali. Um modo alternativo para separar as formas enantioméricas dos compostos de fórmula (I) envolve cromatografia liquida utilizando uma fase estacionária quiral. Essas formas estereoquimicamente isoméricas puras também podem ser derivadas das correspondentes formas estereoquimicamente isoméricas puras dos materiais de partida apropriados, desde que a reacção ocorra de forma estereoespecifica. Preferivelmente, se for desejado um estereoisómero especifico, esse composto será sintetizado por métodos de preparação estereoespecificos. 23

Vantajosamente, estes métodos empregarão materiais de partida enantiomericamente puros.

Os compostos bifenilcarboxamida de fórmula (I), as respectivas formas de N-óxidos, sais farmaceuticamente aceitáveis e formas estereoisoméricas possuem actividade favorável inibidora da apolipoproteína B e actividade concomitante de diminuição do teor de lípidos. Em consequência, os presentes compostos são úteis como medicamento, especialmente num método de tratamento de pacientes que sofrem de hiperlipidemia, obesidade, aterosclerose ou diabetes de tipo II. Em particular, os presentes compostos podem ser utilizados no fabrico de um medicamento destinado a tratar perturbações causadas por um excesso de lipoproteínas de muito baixa densidade (VLDL) ou lipoproteinas de baixa densidade (LDL) e, especialmente, perturbações causadas pelo colesterol associado a essas VLDL e LDL. A relação causal entre hipercolesterolemia -particularmente a associada a concentrações acrescidas no plasma de lipoproteinas de baixa densidade (LDL) e lipoproteinas de muito baixa densidade (VLDL) - e aterosclerose e doença cardiovascular prematuras está bem determinada. A VLDL é segregada pelo fígado e contém apolipoproteína B (apo-B); estas partículas sofrem degradação na circulação para LDL, que transporta cerca de 60 até 70% do colesterol total presente no soro. A apo-B também é o principal componente proteico da LDL. O colesterol de LDL aumentado no soro, devido a super-síntese ou metabolismo decrescido, está relacionado de forma causal com aterosclerose. Em contraste, as lipoproteínas de alta densidade (HDL) que contêm apolipoproteína AI exercem um 24 efeito protector e estão inversamente correlacionadas com o risco de doença cardíaca coronária. Assim, a razão HDL/LDL é um método conveniente para avaliar o potencial aterogénico do perfil de lípidos no plasma de um indivíduo. 0 principal mecanismo de acção dos compostos de fórmula (I) aparenta envolver inibição da actividade da MTP (proteína de transferência de triglicéridos microssómicos) em hepatócitos e células epiteliais intestinais, resultando em produção decrescida de VLDL e quilomícrons, respectivamente. Esta abordagem à hiperlipidemia é nova e inovadora, esperando-se que diminua o colesterol de LDL e triglicéridos através de produção hepática de VLDL e produção intestinal de quilomícrons decrescidas.

Um grande número de doenças genéticas e adquiridas pode resultar em hiperlipidemia. Podem ser classificadas em estados hiperlipidémicos primários e secundários. As causas mais comuns de hiperlipidemias secundárias são diabetes mellitus, ingestão abusiva de álcool, drogas, hipotiroidismo, falha renal crónica, síndroma nefrótica, colestase e bulimia. Hiperlipidemias primárias são hipercolesterolemia comum, hiperlipidemia combinada familiar, hipercolesterolemia familiar, hiperlipidemia remanescente, síndroma de quilomicronemia, hipertri-gliceridemia familiar. Os presentes compostos também podem ser utilizados para prevenir ou tratar pacientes que sofrem de obesidade ou de aterosclerose, especialmente aterosclerose coronária e, mais em geral, perturbações que estão relacionadas com aterosclerose, como doença cardíaca isquémica, doença vascular periférica, doença vascular cerebral. Os presentes compostos podem causar regressão de 25 aterosclerose e inibir as consequências clinicas de aterosclerose, particularmente morbidez e mortalidade.

Tendo em vista a utilidade dos compostos de fórmula (I), a presente invenção também proporciona um método de tratamento de animais de sangue quente, incluindo humanos (aqui genericamente denominados pacientes), que sofrem de perturbações causadas por um excesso de lipoproteinas de muito baixa densidade (VLDL) ou lipoproteinas de baixa densidade (LDL) e, especialmente, perturbações causadas pelo colesterol associado a essas VLDL e LDL. Consequentemente, é proporcionado um método de tratamento para atenuar o sofrimento de pacientes com estados tais como, por exemplo, hiperlipidemia, obesidade, aterosclerose ou diabetes de tipo II. A apo B-48, sintetizada pelo intestino, é necessária para a reunião de quilomícrons e, assim, exerce um papel obrigatório na absorção intestinal de gorduras dietéticas. A presente invenção fornece compostos bifenilcarboxamida que actuam como inibidores selectivos da MTP ao nível da parede intestinal.

Adicionalmente, a presente invenção fornece composições farmacêuticas compreendendo pelo menos um transportador farmaceuticamente aceitável e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto bifenilcarboxamida de fórmula (I).

Para preparar as composições farmacêuticas desta invenção, uma quantidade eficaz do composto particular, na forma de base ou de sal de adição, como ingrediente activo, é combinada em mistura íntima com pelo menos um transportador 26 farmaceuticamente aceitável, cujo transportador pode tomar uma grande variedade de formas dependendo da forma da preparação desejada para administração. Desejavelmente, estas composições farmacêuticas estão em forma galénica unitária adequada, preferivelmente, para administração oral, administração rectal, administração percutânea ou injecção parentérica.

Por exemplo, na preparação das composições em forma galénica oral pode empregar-se qualquer um dos transportadores líquidos farmacêuticos habituais, tais como, por exemplo, água, glicóis, óleos, álcoois e afins no caso de preparações orais líquidas, como suspensões, xaropes, elixires e soluções; ou transportadores farmacêuticos sólidos, como amidos, açúcares, caulino, lubrificantes, aglutinantes, agentes de desintegração e afins no caso de pós, comprimidos, cápsulas e pastilhas. Devido à sua administração fácil, as pastilhas e cápsulas representam a forma galénica unitária oral mais vantajosa, em cujo caso se empregam, obviamente, transportadores farmacêuticos sólidos. Para composições de injecção parentérica, o transportador farmacêutico compreenderá maioritariamente água esterilizada, apesar de se poderem incluir outros ingredientes para melhorar a solubilidade do ingrediente activo. Por exemplo, podem preparar-se soluções injectáveis utilizando um transportador farmacêutico compreendendo uma solução salina, uma solução de glucose ou uma mistura de ambas. Também podem preparar-se suspensões injectáveis utilizando transportadores líquidos e agentes de suspensão apropriados e afins. Em composições adequadas para administração percutânea, o transportador farmacêutico pode compreender, opcionalmente, um agente intensificador da penetração e/ou um agente humedecedor adequado, 27 opcionalmente combinado com proporções muito pequenas de aditivos adequados que não provocam um efeito prejudicial significativo na pele. Esses aditivos podem ser seleccionados para facilitar a administração do ingrediente activo na pele e/ou podem ser úteis para preparar as composições desejadas. Estas composições tópicas podem ser administradas de vários modos, por exemplo, como um emplastro transdérmico, uma aplicação local ("spot-on") ou um unguento. Os sais de adição dos compostos de fórmula (I), devido à sua solubilidade acrescida em água relativamente à forma de base correspondente, são obviamente mais adequados na preparação de composições aquosas. É especialmente vantajoso formular as composições farmacêuticas da invenção em forma galénica unitária, por facilidade de administração e uniformidade de dosagem. "Forma galénica unitária", tal como é aqui utilizado, refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias, em que cada unidade contém uma quantidade predeterminada de ingrediente activo, calculada para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com o necessário transportador farmacêutico. Exemplos dessas formas galénicas unitárias são pastilhas (incluindo pastilhas com incisão ou revestidas), cápsulas, comprimidos, pacotes de pó, hóstias, soluçoes ou suspensões injectáveis, medidas de colheres de chá, medidas de colheres de sopa e afins, e respectivos múltiplos segregados.

Para administração oral, as composições farmacêuticas da presente invenção podem tomar a forma de formas galénicas sólidas, por exemplo, pastilhas (nas formas para engolir e 28 para mastigar), cápsulas ou cápsulas de gelatina mole hermeticamente seladas ("gelcaps"), preparadas por meios convencionais com excipientes e transportadores farmaceuticamente aceitáveis, como agentes de ligação (por exemplo, amido de milho pré-gelatinizado, polivinil-pirrolidona, hidroxipropilmetilcelulose e afins), agentes de enchimento (por exemplo, lactose, celulose micro-cristalina, fosfato de cálcio e afins), lubrificantes (por exemplo, estearato de magnésio, talco, sílica e afins) , agentes de desintegração (por exemplo, amido de batata, glicolato de amido sódico e afins), agentes humedecedores (por exemplo, laurilsulfato de sódio) e afins. Essas pastilhas também podem ser revestidas por métodos bem conhecidos na área.

Preparações líquidas para administração oral podem tomar a forma, por exemplo, de soluções, xaropes ou suspensões, ou podem ser formuladas como um produto seco para mistura com água e/ou outro transportador líquido adequado antes da utilização. Essas preparações líquidas podem ser produzidas por meios convencionais, opcionalmente com outros aditivos farmaceuticamente aceitáveis, como agentes de suspensão (por exemplo, xarope de sorbitol, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose ou gorduras comestíveis hidrogenadas), agentes emulsionantes (por exemplo, lecitina ou acácia), transportadores não aquosos (por exemplo, óleo de amêndoas, ésteres oleosos ou álcool etílico), adoçantes, aromatizantes, agentes de mascaramento e conservantes (por exemplo, p-hidroxibenzoatos de metilo ou propilo ou ácido sórbico).

Adoçantes farmaceuticamente aceitáveis úteis nas composições farmacêuticas da invenção compreendem 29 preferivelmente pelo menos um adoçante intenso, como aspartame, acessulfame-potássio, ciclamato de sódio, alitame, um adoçante di-hidrochalcona, monelina, esteviósido, sucralose (4,1',6'-tricloro-4,1',6'-tridesoxi-galactossucrose) ou, preferivelmente, sacarina, sacarina de sódio ou cálcio, e, opcionalmente, pelo menos um adoçante em volume, como sorbitol, manitol, frutose, sucrose, maltose, isomalte, glucose, xarope de glucose hidrogenada, xilitol, caramelo ou mel. Os adoçantes intensos são convenientemente utilizados em concentrações baixas. Por exemplo, no caso de sacarina de sódio, essa concentração pode variar desde cerca de 0,04% até 0,1% (peso/volume) da formulação final. O adoçante em volume pode ser eficazmente utilizado em concentrações maiores, que variam desde cerca de 10% até cerca de 35%, preferivelmente desde cerca de 10% até 15% (peso/volume).

Os aromatizantes farmaceuticamente aceitáveis que podem mascarar os ingredientes de sabor amargo nas formulações de baixa dosagem são, preferivelmente, aromas de frutos, como cereja, framboesa, groselha ou morango. Uma combinação de dois aromas pode dar resultados muito bons. Nas formulações de dosagem elevada podem ser necessários aromas farmaceuticamente aceitáveis mais fortes, como Caramel Chocolate, Mint Cool, Fantasy e afins. Cada aroma pode estar presente na composição final numa concentração que varia desde cerca de 0,05% até 1% (peso/volume) . São vantajosamente utilizadas combinações desses aromas fortes. Preferivelmente, utiliza-se um aroma que não sofra qualquer alteração ou perda de sabor e/ou cor nas circunstâncias da formulação. 30

Os compostos bifenilcarboxamida desta invenção podem ser formulados para administração parentérica por injecção, convenientemente injecção intravenosa, intramuscular ou subcutânea, por exemplo, por injecção de bolus ou infusão intravenosa continua. Formulações para injecção podem ser apresentadas em forma galénica unitária, por exemplo, em ampolas ou recipientes de múltiplas doses, incluindo um conservante adicionado. Podem tomar formas tais como suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos, e podem conter agentes de formulação tais como agentes de isotonicidade, suspensão, estabilização e/ou dispersão. Alternativamente, o ingrediente activo pode estar presente na forma de pó para mistura com um veículo adequado, por exemplo, água esterilizada sem pirogénios, antes da utilização. Os compostos bifenilcarboxamida desta invenção também podem ser formulados em composições rectais, como supositórios ou clisteres de retenção, por exemplo, contendo bases convencionais para supositórios, como manteiga de cacau e/ou outros glicéridos.

Os compostos bifenilcarboxamida desta invenção podem ser utilizados em conjunção com outros agentes farmacêuticos; em particular, as composições farmacêuticas da presente invenção podem compreender suplementarmente pelo menos um agente adicional de diminuição do teor de lípidos, conduzindo assim a uma terapia de diminuição do teor de lípidos de combinação. Esse agente adicional de diminuição do teor de lípidos pode ser, por exemplo, um fármaco conhecido convencionalmente utilizado para a gestão de hiperlipidemia, tal como, por exemplo, uma resina sequestrante de ácidos biliares, um derivado do ácido fíbrico ou ácido nicotínico, como previamente mencionado no contexto da invenção. Agentes adicionais adequados de 31 diminuição do teor de lípidos também incluem outros inibidores da biossintese do colesterol e inibidores da absorção do colesterol, especialmente inibidores da HMG-CoA redutase e inibidores da HMG-CoA sintase, inibidores da expressão genética da HMG-CoA redutase, inibidores da CETP, inibidores da ACAT, inibidores da esqualeno sintetase e afins.

Qualquer inibidor da HMG-CoA redutase pode ser utilizado como segundo composto no aspecto de terapia de combinação desta invenção. 0 termo "inibidor da HMG-CoA redutase", tal como é aqui utilizado e a menos que afirmado em contrário, refere-se a um composto que inibe a biotransformação de hidroximetilglutaril-coenzima A em ácido mevalónico catalisada pela enzima HMG-CoA redutase. Essa inibição pode ser facilmente determinada pelo experimentado na área de acordo com ensaios comuns, isto é, Methods of Enzymology (1981) 71: 455-509. Compostos exemplificativos são descritos, por exemplo, na Patente U.S. N° 4 231 938 (incluindo lovastatina), Patente U.S. N° 4 444 784 (incluindo simvastatina), Patente U.S. N° 4 739 073 (incluindo fluvastatina), Patente U.S. N° 4 346 227 (incluindo pravastatina), EP-A- -491 226 (incluindo rivastatina) e Patente U . S . N° 4 647 576 (incluindo atorvastatina).

Qualquer inibidor da HMG-CoA sintase pode ser utilizado como segundo composto no aspecto de terapia de combinação desta invenção. O termo "inibidor da HMG-CoA sintase", tal como é aqui utilizado e a menos que afirmado em contrário, refere-se a um composto que inibe a biossintese de hidroximetilglutaril-coenzima A a partir de acetil-coenzima A e acetoacetil-coenzima A catalisada pela enzima HMG-CoA 32 sintase. Essa inibição pode ser facilmente determinada pelo experimentado na área de acordo com ensaios comuns, isto é, Methods of Enzymology (1985) 110: 19-26. Compostos exemplificativos são descritos, por exemplo, na Patente U.S. N° 5 120 729, relativamente a derivados beta-lactama, Patente U.S. N° 5 064 856, relativamente a derivados espiro-lactona, e Patente U.S. N° 4 847 271, relativamente a compostos oxetano.

Qualquer inibidor da expressão genética da HMG-CoA redutase pode ser utilizado como segundo composto no aspecto de terapia de combinação desta invenção. Estes agentes podem ser inibidores da transcrição da HMG-CoA redutase, que bloqueiam a transcrição de DNA, ou inibidores da tradução, que previnem a tradução de mRNA que codifica para a HMG-CoA redutase em proteína. Esses inibidores podem afectar a transcrição ou tradução directamente ou podem sofrer biotransformação em compostos com os atributos acima mencionados por uma ou mais enzimas da cascata da biossíntese do colesterol, ou podem conduzir à acumulação de um metabolito com as actividades acima mencionadas. Essa regulação pode ser facilmente determinada pelo experimentado na área de acordo com ensaios comuns, isto é, Methods of Enzymology (1985) 110: 9-19. Compostos exemplificativos são descritos, por exemplo, na Patente U.S. N° 5 041 432 e em E.I. Mercer, Prog. Lip. Res. (1993) 32: 357-416.

Qualquer inibidor da CETP pode ser utilizado como segundo composto no aspecto de terapia de combinação desta invenção. O termo "inibidor da CETP", tal como é aqui utilizado e a menos que afirmado em contrário, refere-se a um composto que inibe o transporte mediado pela proteína de 33 transferência de ésteres de colesterilo (CETP) de vários ésteres de colesterilo e triglicéridos de HDL para LDL e VLDL. Compostos exemplificativos são descritos, por exemplo, na Patente U.S. N° 5 512 548, em J. Antibiot. (1996) _49(8): 815-816 e em Bioorg. Med. Chem. Lett. (1996) 6: 1951-1954.

Qualquer inibidor da ACAT pode ser utilizado como segundo composto no aspecto de terapia de combinação desta invenção. 0 termo "inibidor da ACAT", tal como é aqui utilizado e a menos que afirmado em contrário, refere-se a um composto que inibe a esterificação intracelular de colesterol dietético pela enzima acil CoA:colesterol-acil-transferase. Essa inibição pode ser facilmente determinada pelo experimentado na área de acordo com ensaios comuns, isto é, o método de Heider et al.r Journal of Llpld Research (1983) 2_4: 1127. Compostos exemplif icativos são descritos, por exemplo, na Patente U.S. N° 5 510 379, em WO 96/26948 e WO 96/10559.

Pode utilizar-se qualquer inibidor da esqualeno-sintetase como segundo composto no aspecto de terapia de combinação desta invenção. O termo "inibidor da esqualeno-sintetase", tal como é aqui utilizado e a menos que afirmado em contrário, refere-se a um composto que inibe a condensação de duas moléculas de farnesilpirofosfato para formar esqualeno, catalisada pela enzima esqualeno sintetase. Essa inibição pode ser facilmente determinada pelo experimentado na área de acordo com métodos comuns, isto é, Methods of Enzymology (1985) 110: 359-373. Compostos exemplificativos sao descritos, por exemplo, em EP-A-567 026, em EP-A-645 378 e em EP-A-645 377. 34

Os experimentados no tratamento de hiperlipidemia determinarão facilmente a quantidade terapeuticamente eficaz de um composto bifenilcarboxamida desta invenção a partir dos resultados de testes aqui apresentados a seguir. Em geral, é contemplado que uma dose terapeuticamente eficaz varia desde cerca de 0,001 mg/kg até cerca de 5 mg/kg de peso do corpo, mais preferivelmente desde cerca de 0,01 mg/kg até cerca de 0,5 mg/kg de peso do corpo do paciente a ser tratado. Pode ser apropriado administrar a dose terapeuticamente eficaz na forma de duas ou mais sub-doses em intervalos apropriados ao longo do dia. Essas sub-doses podem ser formuladas como formas galénicas unitárias, por exemplo, cada uma contendo desde cerca de 0,1 mg até cerca de 350 mg, mais particularmente desde cerca de 1 até cerca de 200 mg do ingrediente activo por forma galénica unitária. A dosagem exacta e a frequência da administração dependem do composto bifenilcarboxamida particular de fórmula (I) utilizado, do estado particular a ser tratado, da gravidade do estado a ser tratado, da idade, peso e estado físico geral do paciente particular, bem como de outra medicação que o paciente possa estar a tomar (incluindo os agentes adicionais de diminuição do teor de lípidos acima mencionados), como é bem conhecido dos experimentados na área. Suplementarmente, essa quantidade diária eficaz pode ser diminuída ou aumentada, dependendo da resposta do paciente tratado e/ou dependendo da avaliação do médico que prescreve os compostos bifenilcarboxamida da presente invenção. Assim, as gamas de quantidades diárias eficazes aqui mencionadas acima são apenas linhas orientadoras. 35

Parte experimental

Nos procedimentos aqui descritos a seguir utilizaram-se as seguintes abreviaturas: "ACN" significa acetonitrilo; "THF" significa tetra-hidrofurano; "DCM" significa diclorometano; "DIPE" significa éter diisopropílico; "DMF" significa N,N-dimetilformamida; "NMP" significa IV-metil-2-pirrolidona; "TFA" significa ácido trifluoroacético; "TIS" significa triisopropilsilano; "DIPEA" significa diisopropiletilamina; "MIK" significa metilisobutilcetona; "BINAP" significa 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo, e "TMSOTf" significa triflato de trimetilsililo. A. Síntese dos intermediários

Para a abordagem combinatorial prepararam-se algumas resinas intermediárias partindo de uma resina comercialmente disponível:

Esquema 2: 36 Br

Η

Ti(OiPr)4

NaB(OCOCH3)3H,CH2CI2 temperatura ambiente

Br

NOVABIOCHEM 01-64-0261

Rb

DIPEA, DMAP, CH2CI2 temperatura ambiente resina (1)

Rb

Rb = hidrogénio ouCF3 resina (2-a): Rb = H resina (2-b): Rb = CF3

Exemplo A.l

Uma mistura de resina comercial Novabiochem 01-64-0261 (25,1 g) , 4-bromoanilina (24 g) e isopropóxido de titânio (IV) (41 ml) em DCM (400 ml) foi suavemente agitada durante uma hora à temperatura ambiente. Adicionou-se triacetoxi-boro-hidreto de sódio (30 g) e agitou-se a mistura reaccional durante a noite à temperatura ambiente. Adicionou-se metanol (50 ml) e a mistura foi agitada durante uma hora, depois foi filtrada, lavada uma vez com DCM, uma vez com metanol, depois uma vez com DCM (200 ml) + DIPEA (20 ml), foi lavada três vezes primeiramente com DCM, depois seguido por metanol, e seguidamente foi seca, dando 37 origem a 29,28 g de uma resina identificada como resina (1) no esquema 2, que é utilizada no passo reaccional seguinte sem purificação suplementar.

Exemplo A.2

Dissolveu-se ácido 2-fenilbenzóico (8,3 g) em DCM (100 ml). Adicionou-se cloreto de tionilo (10 g) . Adicionou-se DMF (10 gotas) e agitou-se a mistura, tendo refluído durante uma hora. Evaporou-se o solvente. Adicionou-se DCM (três vezes 50 ml) ao resíduo e evaporou-se o solvente. Dissolveu-se o resíduo em DCM (50 ml). Adicionou-se esta solução a uma mistura de resina (1) do exemplo A.l (14,64 g) , DIPEA (24 ml) e 4-dimetilaminopiridina (daqui em diante referida como DMAP) (0,5 g) em DCM (150 ml). Agitou-se a mistura reaccional durante a noite à temperatura ambiente, depois foi filtrada e o resíduo da filtração foi lavado com 100 ml de DMF + 20 ml de DIPEA, depois com metanol, água, DCM, metanol, DCM e metanol, e foi seca, dando origem a 15,73 g de uma resina identificada como resina (2-a) no esquema 2. EXEMPLO A.3

Dissolveu-se ácido 4'-(trifluorometil)-2-bifenil- carboxílico (14,64 g) em DCM (100 ml). Adicionou-se DMF (1 ml). Adicionou-se cloreto de tionilo (10 g) e agitou-se a mistura, tendo refluído durante uma hora. Evaporou-se o solvente. Adicionou-se DCM (duas vezes 50 ml) e depois evaporou-se o solvente. Dissolveu-se o resíduo em DCM (50 ml). Adicionou-se esta solução a uma mistura de resina (1) do exemplo A.l (14,64 g), DIPEA (24 ml) e DMAP (0,5 g) em DCM (150 ml). Agitou-se a mistura reaccional durante quatro horas à temperatura ambiente, depois foi filtrada e o resíduo da filtração foi lavado com 100 ml de DMF + 20 ml 38 de DIPEA, depois foi lavado três vezes primeiramente com DCM e depois com metanol e, por fim, foi seco. Este produto reaccional reagiu mais uma vez com metade das quantidades iniciais de ácido 4'-(trifluorometil)-2-bifenilcarboxílico, cloreto de tionilo, DIPEA e DMAP. A mistura reaccional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, depois foi filtrada e o resíduo da filtração foi agitado com DMF + 20 ml de DIPEA, depois metanol, água, metanol, DCM, metanol, DCM + metanol, depois foi seco, dando origem a 17,48 g de uma resina identificada como resina (2-b) no esquema 2.

Exemplo A.4 a) Adicionou-se lentamente, a 5°C, uma solução de cloreto de 4(trifluorometil)-[1,1'-bifenil]-2-carbonilo (0,019 mol) em DCM (50 ml) a uma mistura de l-amino-4-iodobenzeno (0,017 mol) e trietilamina (0, 026 mol) em DCM (40 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, depois foi lavada com HC1 1 N, depois com K2C03 10%. A camada orgânica foi separada, seca e filtrada e o solvente foi evaporado. O resíduo foi cristalizado a partir de DIPE. O precipitado foi removido por filtração e foi seco, dando origem a 6,1 g de IV-(4-iodofenil)-4(trif luorometil) -[1,1'-bifenil]-2-carboxamida (intermediário 1; p.f. 147°C). b) Uma mistura de intermediário (1) (0,012 mol), N-alilftalimida (0,012 mol), acetato de paládio (II) (0,001 mol) e trietilamina (0,024 mol) foi agitada a 100°C durante 12 horas num aparato de bombardeamento, depois foi dissolvida em DCM e lavada com K2C03 10%. A camada orgânica foi separada, seca e filtrada e o solvente foi evaporado. O resíduo foi cristalizado a partir de ACN. O precipitado foi removido por filtração e foi seco, dando origem a 3,2 g de IV- [ 4 - [ (l.E)-3-(l,3-di-hidro-l, 3-dioxo-2i7-isoindolo-2-il) -1- 39 propenil]fenil]-4'-(trifluorometil)-[1,1'-bifenil]-2-carboxamida (intermediário 2; p.f. 190°C). c) Uma mistura de intermediário (2) (0, 005 mol) e uma solução aquosa de hidrazina (0,005 mol) em etanol (30 ml) foi agitada e refluiu durante 2 horas. O precipitado foi filtrado e lavado com etanol. Adicionou-se água. A suspensão foi basifiçada com NaOH e foi filtrada em celite. A celite foi lavada com acetato de etilo. O filtrado foi extraído com acetato de etilo e foi lavado com K2CO3, depois com NaCl. A camada orgânica foi separada, seca e filtrada e o solvente foi evaporado. O resíduo foi cristalizado a partir de ACN. O precipitado foi removido por filtração e foi seco, dando origem a 2,5 g de IV-[4- [(1E)-3-amino-1-propenil]fenil]-4'-(trifluorometil)—[1,1'— bifenil]-2-carboxamida (intermediário 3; p.f. 190°C). B. Síntese dos compostos finais

Exemplo B.1

Uma suspensão de BINAP (0,00014 mol) em NMP (1 ml) foi adicionada à resina (2-b) (0,00014 mol) e tert-butóxido de sódio (0,00252 mol). Adicionou-se 1,2-diaminoetano (0, 0021 mol) em NMP (2 ml) e agitou-se a mistura sob árgon.

Adicionou-se Pd2(dba)3 (0,000028 mol) em NMP (1 ml) e agitou-se a mistura reaccional durante 19 horas a 105°C. A mistura foi arrefecida e filtrada e o resíduo da filtração foi lavado com DMF, água, DMF (3 x), água (3 x), DMF (3 x), CH3OH (3 x), DCM (3 x), CH3OH (3 x) e NMP (2 x). Adicionou-se NMP (3 ml). Adicionou-se 2-bromo-2-fenilacetato de metilo (0, 0007 mol) em NMP (1 ml) . Adicionou-se DIPEA (0,3 ml) e agitou-se a mistura reaccional durante 18 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi filtrada, lavada com DMF e água, depois com DMF (3 x) , água (3 x) , DMF (3 x), CH3OH (3 x), DCM (3 x) , CH3OH (3 x) e DCM (3 x) . 40

Adicionou-se uma solução de TFA/TIS/DCM (49:2:49) (4 ml) e agitou-se a mistura durante uma hora à temperatura ambiente. Filtrou-se a mistura e adicionou-se mais TFA/TIS/DCM (49:2:49) (1,5 ml). A mistura foi agitada durante 15 minutos, foi filtrada e lavada com DCM (2 ml), depois os filtrados foram secos sob corrente de azoto. Purificou-se o residuo por HPLC em Purospher Star RP-18 (20 g, 5 μιη; eluente: ( (NH40Ac 0,5% em H20)/CH3CN 90/10) /CH3OH/ CH3CN (0 minutos) 75/25/0, (10,00 minutos) 0/50/50, (16,00 minutos) 0/0/100, (18,10-20 minutos) 75/25/0). Recolheram-se as fracções desejadas e evaporou-se o solvente orgânico. O concentrado aquoso foi tratado com uma solução aquosa de Na2C03, depois foi extraído com DCM. O extracto foi separado por intermédio de Extrelut e os filtrados foram secos sob corrente de azoto a 50°C. O resíduo foi suplementarmente seco (vácuo, 50°C), dando origem a 0,006 g de composto 1.

Os compostos identificados como N° 2 até N° 29 na tabela F-l seguinte foram preparados de modo semelhante, utilizando o mesmo procedimento experimental e substituindo 1,2-diaminoetano pela diamina reactiva apropriada.

Exemplo B.2

Adicionou-se NMP (2 ml) à resina (2-a) (0,00014 mol). Adicionaram-se BINAP (0,00014 mol) e tert-butóxido de sódio (0,00252 mol). Adicionou-se 1,2-diaminoetano (0,0021 mol) em NMP (1 ml) e agitou-se a mistura durante 1 hora sob árgon. Adicionou-se Pd2(dba)3 (0,000028 mol) em NMP (1 ml) e agitou-se a mistura reaccional durante 18 horas a 105°C. A mistura foi arrefecida e filtrada e o resíduo da filtração foi lavado com DMF-água 50-50, DMF (3 x) , água (3 x) , DMF (3 x), CH30H (3 x), DCM (3 x) , CH30H (3 x) e NMP (2 x) . Adicionou-se NMP (3 ml) . Adicionou-se 2-bromo-2- 41 fenilacetato de metilo (0,0007 mol) em NMP (1 ml). Adicionou-se DIPEA (0,300 ml) e agitou-se a mistura durante 18 horas à temperatura ambiente. A mistura foi filtrada, foi lavada com DMF e água, lavada com DMF (3 x) , água (3 x) , DMF (3 x), CH30H (3 x), DCM (3 x) , CH30H (3 x) , DCM (3 x). Adicionou-se TFA/TIS/DCM (49:2:49) (4 ml) e agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura ambiente, depois foi filtrada. Adicionou-se mais TFA/TIS/DCM (49:2:49) (2 ml) e a mistura reaccional foi agitada durante 15 minutos, depois foi filtrada. O residuo da filtração foi lavado com DCM (2 ml), depois os filtrados foram secos sob corrente de azoto. Purificou-se o residuo por HPLC em Purospher Star RP-18 (20 g, 5 μιη; eluente: ( (NH4OAc 0,5% em H20)/CH3CN 9 0 /10 )/CH3OH/ CH3CN (0 minutos) 75/25/0, (10,00 minutos) 0/50/50, (16,00 minutos) 0/0/100, (18,10-20 minutos) 75/25/0). Recolheram-se as fracções desejadas e evaporou-se o solvente orgânico. O concentrado aquoso foi tratado com uma solução aquosa de Na2C03, depois foi extraído com DCM. O extracto foi separado e os filtrados foram secos sob corrente de azoto a 50°C. O residuo foi suplementarmente seco (vácuo, 50°C), dando origem a 0,007 g de composto 30. Os compostos identificados como N° 31 até N° 58 na tabela F-l seguinte foram preparados de modo semelhante, utilizando o mesmo procedimento experimental e substituindo 1,2-diaminoetano pela diamina reactiva apropriada.

Exemplo B.3

Adicionou-se NMP (2 ml) à resina (2-a) (0,00014 mol). Adicionaram-se, em porções, BINAP (0,00014 mol) e tert-butóxido de sódio (0,00252 mol). Adicionou-se 4-amino-l-tert-butoxicarbonilpiperidina (0,0021 mol) em NMP (1 ml) e agitou-se a mistura durante 1 hora sob azoto. Adicionou-se Pd2(dba)3 (0,000028 mol) em NMP (1 ml) e agitou-se a 42 mistura reaccional durante 18 horas a 105°C. A mistura foi arrefecida e filtrada e o resíduo da filtração foi lavado com DMF-água 50-50, DMF (3 x), água (3 x), DMF (3 x), CH3OH (3 x) , DCM (3 x) , CH3OH (3 x) e DCM (3 x) . Adicionaram-se TMSOTf (1 M) e 2,6-lutidina (1,5 M) em DCM (3 ml) e agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura ambiente. A mistura foi filtrada, lavada com DCM (3 x) e adicionou-se metanol (4 ml). A mistura foi agitada durante uma hora à temperatura ambiente e foi filtrada e o resíduo da filtração foi lavado com DCM (3 x), CH30H (3 x) , DCM (3 x), CH3OH (3 x), DCM (3 x), CH3OH (3 x) e uma vez com NMP. Adicionou-se NMP (3 ml) . Adicionou-se 2-bromo-2-fenilacetato de etilo (0, 0007 mol) em NMP (1 ml). Adicionou-se DIPEA (0,3 ml) e agitou-se a mistura reaccional durante 20 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi filtrada, lavada três vezes com DMF, 3 x com água, 3 x DMF, 3 x CH3OH, 3 x DCM, 3 x CH3OH e 3 x DCM. Adicionou-se TFA/TIS/DCM (49:2:49) (4 ml) e agitou-se a mistura durante uma hora à temperatura ambiente, depois foi filtrada. Adicionou-se mais TFA/TIS/DCM (49:2:49) (2 ml) e a mistura foi agitada durante 30 minutos, depois foi filtrada e lavada com DCM (2 ml). Os filtrados foram secos sob corrente de azoto a 50°C. Purificou-se o resíduo por HPLC em Purospher Star RP-18 (20 g, 5 μιη; eluente: ( (NH4OAc 0,5% em H20)/CH3CN 90/10)/CH3OH/CH3CN (0 minutos) 75/25/0, (10,00 minutos) 0/50/50, (16,00 minutos) 0/0/100, (18,10-20 minutos) 75/25/0). Recolheram-se as fracções desejadas e evaporou-se o solvente orgânico. O concentrado aquoso foi tratado com uma solução aquosa de Na2C03, depois foi extraído com DCM. O extracto foi separado e os filtrados foram secos sob corrente de azoto a 50°C. O resíduo foi suplementarmente seco (vácuo, 55°C), dando origem a 0,007 g de composto 59. Os compostos identificados como N° 60 até 43 Ν° 96 na tabela F-l seguinte foram preparados de modo semelhante, utilizando o mesmo procedimento experimental e substituindo 4-amino-l-tert-butoxicarbonilpiperidina pela amina reactiva apropriada.

Exemplo B.4

Lavou-se resina (2-b) (0,00014 mol) com NMP (2 ml). Adicionaram-se BINAP (0,00014 mol) e tert-butóxido de sódio (0,00252 mol). Adicionou-se 4-amino-l-tert-butoxicarbonil-piperidina (0, 0021 mol) em NMP (1 ml). Adicionou-se NMP (3 ml) e agitou-se a mistura durante 1 hora sob árgon. Adicionou-se Pd2(dba)3 (0,000028 mol) em NMP (1 ml) e agitou-se a mistura reaccional durante 18 horas a 105°C. A mistura foi arrefecida e filtrada e o resíduo da filtração foi lavado com DMF, DMF-água 50-50, DMF (3 x) , água (3 x) , DMF (3 x), CH3OH (3 x), DCM (3 x) , CH3OH (3 x) e DCM (3 x) . Adicionaram-se TMSOTf (1 M) e 2,6-lutidina (1,5 M) em DCM (3 ml) e agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura ambiente. A mistura foi filtrada, lavada com DCM (3 x), CH3OH (3 x), DCM (3 x), CH3OH (3 x), DCM (3 x), CH3OH (3 x), depois com NMP (2 x). Adicionou-se NMP (3 ml). Adicionou-se 2-bromo-2-fenilacetato de metilo (0,160 g) em NMP (1 ml). Adicionou-se DIPEA (0,3 ml). A mistura reaccional foi agitada durante 20 horas à temperatura ambiente, foi filtrada, lavada com DMF, depois com DMF-água 50-50, depois com DMF (3 x) , água (3 x) , DMF (3 x) , CH3OH (3 x) , DCM (3 x) , CH3OH (3 x) e DCM (3 x) . Adicionou-se TFA/TIS/DCM (49:2:49) (4 ml) e agitou-se a mistura durante uma hora, depois foi filtrada. Adicionou-se mais TFA/TIS/DCM (49:2:49) (2 ml) e a mistura reaccional foi agitada durante 30 minutos, depois foi filtrada. Os filtrados foram secos sob corrente de azoto a 50°C. Purificou-se o resíduo por HPLC em Purospher Star RP-18 (20 g, 5 μιη; eluente: ( (NH4OAc 44 0,5% em água) /CH3CN 90/10)/CH3OH/CH3CN (0 minutos) 75/25/0, (10,00 minutos) 0/50/50, (16,00 minutos) 0/0/100, (18,10-20 minutos) 75/25/0). Recolheram-se as fracções desejadas e evaporou-se o solvente orgânico. O concentrado aguoso foi tratado com uma solução aquosa de Na2CC>3, depois foi extraído com DCM. O extracto foi separado e os filtrados foram secos sob corrente de azoto a 50°C. O resíduo foi suplementarmente seco (vácuo, 50°C), dando origem a 0,031 g de composto 97. Os compostos identificados como N° 98 até N° 136 na tabela F-l seguinte foram preparados de modo semelhante, utilizando o mesmo procedimento experimental e substituindo 4-amino-l-tert-butoxicarbonilpiperidina pela amina reactiva apropriada.

Exemplo B.5

Uma mistura de intermediário (3) (0,006 mol), 2-bromo-2-fenilacetato de metilo (0,011 mol), trietilamina (1,6 ml) e iodeto de tetrabutilamónio (0,001 mol) em THF (20 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 8 horas. Adicionou-se água. Extraiu-se a mistura com acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca e filtrada e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (eluente: CH2CI2/CH3OH 98,5/1,5) e foi cristalizado a partir de éter dietílico, dando origem ao composto (137), p.f. 142°C. A Tabela F-l lista os compostos que foram preparados de acordo com um dos Exemplos acima. Utilizaram-se nas tabelas as abreviaturas seguintes: .C2HF3O2 significa o sal trifluoroacetato. 45

Tabela F-l V' -yP 0 NH 0 U H v Λό Λ /_^—NH //nV U H Co. N° 1· Ex. B.l Co. N° 2· Ex. B.l fn<.f u'8^ 9x χτΝ v N—( o Co. N° 3· Ex. B.l Co. N° 4· Ex. B.l °^O rS >P 5 0 KJ U H Co. N° 5· Ex. B.l (TRANS)· Co. N° 6· Ex. B.l 46

VvP 0 ΝΉ o U H ^ °\o 0F ^^—NH Xi£T U - Co.N°7 Ex. B.l Co.N°8 Ex. B.l F\^F Xl XXX Xr íi W O <0 S4 XO ò x” ύ\ xy™ Co. N° 9· Ex. B.l Co. N° 10· Ex. B.l vvP 0 NH X’ 0 CJf ” VF l^-F ff\ 0 ΝΉ |Χγ^Ν/Υ^ U H (TRANS)· Co. N° 11· Ex. B.l Co. N° 12· Ex. B.l l v °XO Γ"Γ —NH Ι^Γ ,^γ-ΝΗ xAf γΥ""^ LJ H F^.F \ $ ' ° Cj B ^ "" Co. N° 13· Ex. B.l Co. N° 14· Ex. B.l 47 F F X i ΓίΥ Vr7 V-T" O ! γ Λ XC” Χλ χχ™ Co.N°15 Ex. B.l Co. N° 16· Ex. B.l -A 0 NH F\/F _/ δ δ V^H O F-^-F \_/ Xf~-F </ \ 1 O^^NH I 0 ΓΥ™ U H (TRANS)· Co. N° 17· Ex. B.l Co. N° 18· Ex. B.l ( NH v' °*VO T~~F ^__^—NH U H F^^F C-Χ”^ H x Co. N° 19· Ex. B.l Co. N° 20· Ex. B.l F F ^ '0 ( NH γ ΛΌ Λ χτ" xx** Co. N° 21· Ex. B.l Co. N° 22· Ex. B.l 48 ο ΙΑ 0 ΝΗ χ· 0 U H “A_NH O F\^F \_/ 0 NH Χλ ΑΊΓ™ QPb ^ (TRANS)· Co. N° 23· Ex. B.l Co. N° 24· Ex. B.l NH vf °"VO —NH o U H XF < (jl Τχ”7 °~0-(X Qr sx Νχ Co. N° 25· Ex. B.l Co. N° 26· Ex. B.l F^^F ) NH γ, ΛΌ ό AC” Xjl £T CJ s v Co. N° 27· Ex. B.l Co. N° 28· Ex. B.l ~^jP 0 NH g 0 “Vp 0 NH O ^ L!l H (TRANS)· Co. N° 29· Ex. B.l Co. N° 30· Ex. B.2 49 g, jQrN^f^3 Co. Ν° 31· Εχ. Β.2 Co. Ν° 32· Εχ. Β.2 xjuCt^V Ν ( Ο νΡ 0 ΝΗ ο ^ Co. Ν° 33· Εχ. Β.2 Co. Ν° 34· Εχ. Β.2 { ΛΌ _^—ΝΗ KJ 0 ^γΝΗ U> Η Co. Ν° 35· Εχ. Β.2 Co. Ν° 36· Εχ. Β.2 IXΓΤν^λ yr ο 0 ΝΗ Ο ^ u »χ Co. Ν° 37· Εχ. Β.2 Co. Ν° 38· Εχ. Β.2 \ °>Χ3 _^—ΝΗ xji χτ^ Οι Η ^ 'ΧΧΝ^~νΓ^—X) Co. Ν° 39· Εχ. Β.2 Co. Ν° 40· Εχ. Β.2 50

SwXX Ο v-p 0^ ^NH (j Co. N° 41· Ex. B.2 Co. N° 42· Ex. B.2 °^Η '5 Co. N° 43 Ex. B.2 Co. N° 44· Ex. B.2 O K 0 NH n Vi xr” u - NH ΛΌ _^—NH o ^v^nh U H Co. N° 45· Ex. B.2 Co. N° 46· Ex. B.2 Cr^ (/_^ Xi XTX X[XJ X Co. N° 47· Ex. B.2 Co. N° 48· Ex. B.2 °^rO n ^ x-P 0 NH 0 2 xx rr” Cj B ^ Co. N° 49· Ex. B.2 (TRANS)· Co. N° 50· Ex. B.2 51

Co. N° 51· Ex. B.2

Co. N° 52· Ex. B.2

Co. N° 53· Ex. B.2 (TRANS)· Co. N° 54· Ex. B.2 (

NH

Co. N° 55· Ex. B.2 (TRANS)· Co. N° 56· Ex. B.2

NH

•NH

Co. N° 57· Ex. B.2 (TRANS)· Co. N° 58· Ex. B.2 52 6 cw° 0 Xx xy™ (j s ^ Co. N° 59· Ex. B.3 Co. N° 60· Ex. B.3 \ ,0 Q ^ U ” Co. N° 61· Ex. B.3 Co. N° 62· Ex. B.3 6 oy0 Q ^ ΑΛ JCX^ Qis Co. N° 63· Ex. B.3 Co. N° 64· Ex. B.3 o 5° KJ o N*S5s/J U ” ° / Co. N° 65· Ex. B.3 Co. N° 66· Ex. B.3 53 ο 0=-/ /Ο 0 7 /UL £Γ 0 /r^y $ι.ΧτσΟ U ” Co. Ν° 67· Εχ. Β.3 Co. Ν° 68· Εχ. Β.3 cw™ ρ ^ U » ^ υ!^ Co. Ν° 69· Εχ. Β.3 Co. Ν° 70· Εχ. Β.3 cw™ ρ 7° αλ χχΝ^ 0 Co. Ν° 71· Εχ. Β.3 Co. Ν° 72· Εχ. Β.3 ? ΝΉ 0=5-/ η 7^ Vier U ” 0 Co. Ν° 73·Εχ. Β.3 Co. Ν° 74· Εχ. Β.3 54 ,ΝΉ ο Cj 8 ^ 0 Co. N° 75· Ex. B.3 Co. N° 76· Ex. B.3 ~ξο o 7 Co. N° 77· Ex. B.3 Co. N° 78· Ex. B.3 HN—\ Π X (> ^UL XT^ ^ \ o ov ío Co. N° 79· Ex. B.3 Co. N° 80· Ex. B.3 6 Os*/0 ío o V> Jo j^jf^ ^ ^AgXJN Co. N° 81· Ex. B.3 Co. N° 82· Ex. B.3 55 0 /— JCL ίΊ X Ο ΥιΧΤ U Η XX Ο \ Co. Ν° 83· Εχ. Β.3 Co. Ν° 84· Εχ. Β.3 ο \_ ^ ^ =^5Μ y Co. Ν° 85· Εχ. Β.3 Co. Ν° 86· Εχ. Β.3 Π X () XJL XX ^ ζΐ Β ^ (J cw° 7ο 0 9 Co. Ν° 87· Εχ. Β.3 Co. Ν° 88· Εχ. Β.3 7 CW™ Ο 7° ΧΧΧΧ" U ” ο /— y y—ΝΗ ^AgXX” Co. Ν° 89· Εχ. Β.3 Co. Ν° 90· Εχ. Β.3 56 0 /— V-NH HN—\ ^ T 0 Πι ^ U ” 6 ΝΉ O „ ^γ” U H Co. N° 91· Ex. B.3 Co. N° 92· Ex. B.3 O \_ 0 ^ ^ ==^5M y 0 /-^ ^ J—NH U H Co. N° 93· Ex. B.3 Co. N° 94· Ex. B.3 \rJ J—ΝΉ HN—\__ Π r5 Q jxXr <> CW™ ío 0. ,2 Cj s x Co. N° 95· Ex. B.3 Co. N° 96· Ex. B.3 Vp ÍO δ.Ν U H Co. N° 97· Ex. B.4 Co. N° 98· Ex. B.4 57 \ δ 7 χλ xy'K Cr» ^ F ρ Co. Ν° 99· Εχ. Β.4 Co. Ν° 100· Εχ. Β.4 ο, / F F \—0 F ΗΝ—\ ÍJ (Λ ν' Co. Ν° 101· Εχ. Β.4 Co. Ν° 102· Εχ. Β.4 cj Co. Ν° 103· Εχ. Β.4 Co. Ν° 104· Εχ. Β.4 0 /— Fv^/F W F ΗΝ—\ CX^íC Ο ι vf £ ^ JXCT U Η Co. Ν° 105· Εχ. Β.4 Co. Ν° 106· Εχ. Β.4 58 |χ|α Η_δ^/ \_Γ^ Fv^/F \ 0 9χ £ϊ ^ U " Co. Ν° 107· Εχ. Β.4 Co.N0 108· Εχ. Β.4 V/-7 F^^F /—0 r~F ΗΝ—Ν. _ ίι Ο χλ /ji ^ U* s ^ 6 ΝΉ .. ίο δ 7 cr Co. Ν° 109· Εχ. Β.4 Co.N0 110· Εχ. Β.4 Ο /— \ Co.N0 111· Εχ. Β.4 Co.N0 112· Εχ. Β.4 us^N” ” <> ν' NQ Fv^F Ν \—Ρ δ 7 (j s ^ Co.N0113· Εχ. Β.4 Co.N0114· Εχ. Β.4 /'~·^ Χ^-Χ^ U Η Fv^f \ 'τ—:ΝΉ Υι £Τ^ ^ U " Co.N0 115· Εχ. Β.4 Co.N0 116· Εχ. Β.4 59 0 J-f F\<^F V-NH I HN—\ Cj]1 ^ Co. N° 117· Ex. B.4 Co. N° 118· Ex. B.4 \ Oss^0 ^ ío ô ^ Χλ jCT Cj]s ^ \ 0*0 F.-----^F / \ / 5 ^ Co. N° 119· Ex. B.4 Co. N° 120· Ex. B.4 >o F^,F .N (5 7 Co. N° 121· Ex. B.4 Co. N° 122· Ex. B.4 (W° v xo δ ^ Χλ £T δ v jxcr U H Co. N° 123· Ex. B.4 Co. N° 124· Ex. B.4 60

OaO* Το δ 9 U ” Χλλ^” U H Co. N° 125· Ex. B.4 Co. N° 126· Ex. B.4 cw° F\/F / \ / $ ? Χλ χχΝ^ (j]“ ^ oo O \_ 6 ^ ^ =^5K y Co. N° 127· Ex. B.4 Co. N° 128· Ex. B.4 6 VF cX δ. T ι/γ U H Fv^f 9 ^__ Co. N° 129· Ex. B.4 Co. N° 130· Ex. B.4 cw™_ Vf XO (5 9 Χλ XX" 6 w™ ^ >0 ó 1 XOCT U H Co. N° 131· Ex. B.4 Co. N° 132· Ex. B.4 61

C. Exemplos farmacológicos. C.l. Quantificação da secreção de ApoB.

Cultivaram-se células HepG2, em placas de 24 cavidades, em MEM Rega 3 contendo soro fetal de vitelo 10%. Aos 70% de confluência, o meio foi mudado e adicionou-se o composto de teste ou transportador (DMSO, concentração final de 0,4%). Após 24 horas de incubação, o meio foi transferido para tubos Eppendorf e foi clarificado por centrifugação. Adicionou-se ao sobrenadante um anticorpo de ovelha dirigido contra a apoB e manteve-se a mistura a 8°C durante 62 24 horas. Em seguida, adicionou-se anticorpo de coelho anti-ovelha e deixou-se o complexo imunológico precipitar durante 24 horas a 8°C. 0 imunoprecipitado foi transformado em grânulos por centrifugação durante 25 minutos a 1320 g e foi lavado duas vezes com um tampão contendo Mops 40 mM, NaH2P04 40 mM, NaF 100 mM, DTT 0,2 mM, EDTA 5 mM, EGTA 5 mM, Triton-X-100 1%, desoxicolato (DOC) de sódio 0,5%, SDS 0,1%, leupeptina 0,2 μΜ e PMSF 0,2 μΜ. Quantificou-se a radioactividade presente no grânulo por contagem de cintilações liquidas.

Os valores IC50 resultantes estão enumerados na Tabela C.l.

Tabela C.l: Valores pIC50 (= -log valor IC50) Número do pIC50 composto 1 7,149 2 6,499 3 6,116 4 7,007 5 5,992 6 5,683 7 6,482 8 6,888 9 6,247 10 6,023 11 5,862 12 6,162 13 6,312 14 6,028 15 6,121 16 5,899 17 6,092 18 >7,523 19 6,641 20 5,715 21 6,296 22 5,987 23 5,805 24 6,766 25 6,023 26 5,706 27 6,204 28 5,826 29 6,123 98 5,801 100 7,38 101 7,388 102 <5,523 103 5,796 63 104 >7,523 105 6,737 106 5,523 107 5,805 108 7,161 109 6,823 110 5,93 111 6,458 112 7,404 113 7,97 114 5,583 115 6,023 116 7,023 117 >7,523

C.2. Ensaio de MTP

Mediu-se a actividade da MTP utilizando um ensaio semelhante ao descrito por J.R. Wetterau e D.B. Zilversmit em Chemistry and Physics of Lipids, 3_8, 205-222 (1985) .

Para preparar as vesículas dadoras e aceitadoras, os lípidos apropriados, em clorofórmio, foram colocados num tubo de teste de vidro e foram secos sob uma corrente de N2. Adicionou-se ao lípido seco um tampão contendo Tris-HCl 15 mM pH 7,5, EDTA 1 mM, NaCl 40 mM, NaN3 0, 02% (tampão de ensaio). A mistura foi brevemente submetida a vórtice e deixaram-se hidratar os lípidos durante 20 minutos em gelo. Em seguida, prepararam-se as vesículas por sonicação em banho (Branson 2200) à temperatura ambiente durante um período máximo de 15 minutos. Em todas as preparações de vesículas incluiu-se hidroxitolueno butilado numa concentração de 0,1%. A mistura do ensaio de transferência de lípidos continha vesículas dadoras (40 nmol de fosfatidilcolina, 7,5% molar de cardiolipina e 0,25% molar de tri[1 — 14C]-oleato de glicerol), vesículas aceitadoras (240 nmol de fosfatidilcolina) e 5 mg de BSA, num volume total de 675 μΐ, num tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. Adicionaram-se os compostos de teste dissolvidos em DMSO (concentração final de 0,13%). Após 5 minutos de pré-incubação a 37°C, a reacção foi iniciada pela adição de MTP 64 em 100 μΐ de tampao de diálise. A reacção foi terminada pela adição de 400 μΐ de DEAE-52 celulose pré-equilibrada em Tris-HCl 15 mM pH 7,5, EDTA 1 mM, NaN3 0,02% (1:1, volume/volume). A mistura foi agitada durante 4 minutos e foi centrifugada durante 2 minutos à velocidade máxima numa centrifugadora Eppendorf (4°C), para transformar em grânulos as vesículas dadoras ligadas a DEAE-52. Submeteu-se a contagem uma alíquota do sobrenadante contendo os lipossomas aceitadores e utilizaram-se as contagens de [14C] para calcular a transferência percentual de triglicéridos das vesículas dadoras para as aceitadoras.

Lisboa, 29 de Janeiro de 2007

Claims (9)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula (I) : 0 Λ íl *TVq ^ -cr‘V l Ί d). 1 3 R3 ^ -<r2V respectivos N-óxidos , sais de adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis e formas estereoquimicamente isoméricas, em que: p1, p2 e p3 são inteiros, cada um seleccionado independentemente entre 1 até 3; cada R1 é seleccionado independentemente entre hidrogénio, Ci_4alquilo, Ci_4alquiloxi, halo, hidroxi, mercapto, ciano, nitro, Ci_4alquiltio ou poli-haloCi_6alquilo, amino, Ci-4alquilamino e di (Ci_4alquil) amino; cada R2 é seleccionado independentemente entre hidrogénio, Ci_4alquilo, Ci_4alquiloxi, halo ou trifluorometilo; R3 é hidrogénio ou Ci-4alquilo; cada R4 é seleccionado independentemente entre hidrogénio, Ci_4alquilo, Ci_4alquiloxi, halo ou trif luorometilo; Z é um radical bivalente de fórmula:

2 em que n é um inteiro desde 2 até 4, e a fracção -(CH2)n_ presente no radical (a-1) pode estar opcionalmente substituída com um ou dois grupos Ci-4alquilo; m e m' são inteiros desde 1 até 3; cada um dos R5 e R6 é seleccionado independentemente entre hidrogénio, Ci-6alquilo ou arilo; cada um dos X1 e X2 é seleccionado independentemente entre CH, N ou um átomo de carbono com hibridação sp2 e, no radical (a-1), pelo menos um dos X1 ou X2 é N; A é Ci-6alcanodiilo substituído com um grupo arilo; B representa hidrogénio; Ci-ioalquilo; arilo ou heteroarilo, cada um opcionalmente substituído com um grupo seleccionado entre halo, ciano, nitro, Ci_4alquiloxi, amino, Ci-ioalquilamino, di (Ci_ioalquil)-amino, Ci_ioacilo, Ci-ioalquiltio, Ci_ioalcoxicarbonilo, Ci_i0alquilaminocarbonilo e di (Ci-ioalquil) amino-carbonilo; arilCi_i0alquilo; heteroarilCi-ioalquilo; C3_iocicloalquilo; poli-haloCi_ 6alquilo; C3_6alcenilo; C3-6alcinilo; NR7R8, ou OR9; em que cada um dos R7 e R8 representa independentemente hidrogénio, Ci-ioalquilo, arilo ou heteroarilo cada um opcionalmente substituído com um grupo seleccionado entre halo, ciano, C4-4alquiloxi, amino, Ci-ioalquil-amino, di(Ci_ loalquil) amino, Ci-ioacilo, Ci-ioalquiltio, halo crano, amino, Ci-ioalquilaminocarbonilo e di (Ci-ioalquil) amino-carbonilo; arilCi-ioalquilo, heteroarilCi-ioalquilo, c3-iocicloalquilo, C7-iopolicicloalquilo, poli-haloCi-6alquilo, C3_8alcenilo, C3-8alcinilo, benzo-Cs-scicloalquilo fundido, e em que R7 e R8, tomados em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, podem formar um radical heterocíclico saturado possuindo desde 4 até 8 átomos de carbono, e em que R9 representa Ci-ioalquilo, arilo ou heteroarilo cada um opcionalmente substituído com um grupo seleccionado entre halo, ciano, nitro, Ci-4alquiloxi, 3 Ci-ioalquilamino, di (Ci-ioalquil) amino, Ci-ioacilo, Ci-ioalquiltio, Ci-ioalquilaminocarbonilo e di(Ci_ loalquil) aminocarbonilo; arilCi-i0alquilo; heteroarilCi-loalquilo; C3-ioCÍcloalquilo; C7-iopolicicloalquilo; poli-haloCi_6alquilo; C3-8alcenilo; C3-8alcinilo, ou benzo-C5- scicloalq fundido; em que, nas definições anteriores, arilo e heteroarilo estão opcionalmente substituídos com um grupo seleccionado entre halo, ciano, nitro, Ci-4alquiloxi, amino, Ci-ioalquilamino, di (Ci-ioalquil) amino, Ci-ioacilo, Ci-ioalquiltio, Ci-ioalcoxicarbonilo, Ci-ioalquilamino- carbonilo e di (Ci_i0alquil) aminocarbonilo .

2. Composto como reivindicado na Reivindicação 1, em que R1 é hidrogénio ou trifluorometilo; R2, R3 e R1 são hidrogénio; Z é um radical bivalente de fórmula (a-1) em que cada um dos X1 e X2 é azoto, n é o inteiro 2, e cada um dos R2 e R3 é, independentemente, hidrogénio ou metilo.

3. Composto como reivindicado na Reivindicação 1, em que R1 é hidrogénio ou trifluorometilo; R2, R3 e R1 são hidrogénio; Z é um radical bivalente de fórmula (a-2) ou (a-3) em que X1 é azoto, m e m' são o inteiro 1, e cada um dos R2 e R3 é, independentemente, hidrogénio ou metilo. 1 Composto como reivindicado na Reivindicação 1, em que 2 R1 é hidrogénio ou trifluorometilo; R2, R3 e R1 são 3 hidrogénio; Z é um radical bivalente de fórmula (a-2) ou (a-3) em que X1 é azoto, m é o inteiro 2, m' é o inteiro 1, e cada um dos R2 e R3 é, independentemente, hidrogénio ou metilo. 4

5. Composto como reivindicado na Reivindicação 1, em que R1 é hidrogénio ou trifluorometilo; R2, R3 e R4 são hidrogénio; Z é um radical bivalente de fórmula (a—4) em que m é o inteiro 2 e m' é o inteiro 1, e cada um dos R5 e R6 é, independentemente, hidrogénio ou metilo.

6. Composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 até 5, em que A é Ci-6alcanodiilo substituído com fenilo e B é Ci-4alquiloxi ou Ci-ioalquilamino.

7. Composição farmacêutica compreendendo um transportador farmaceuticamente aceitável e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 até 6.

8. Processo de preparação de uma composição farmacêutica como reivindicada na Reivindicação 7, em que uma quantidade terapeuticamente activa de um composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 até 6 é intimamente misturada com um transportador farmaceuticamente aceitável.

9. Composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 até 6 para utilização como medicamento.

10. Processo de preparação de um composto de fórmula (I), em que: a) um intermediário de fórmula (II), em que B, A, Z, R4 e p3 são como definidos na Reivindicação 1: 5

reage com um ácido ou haleto bifenilcarboxílico de fórmula (III), em que R1, R2, p1 e p2 são como definidos na fórmula (I) e Y1 é seleccionado entre hidroxi e halo, em pelo menos um solvente inerte para a reacção e, opcionalmente, na presença de uma base adequada:

(ID) b) um intermediário de fórmula (IV):

em que R1, R2, R3, R4, A, Z, p1, p2 e p3 são como definidos na Reivindicação 1 e Y2 é seleccionado entre halo e hidroxi, reage com um intermediário (V) de fórmula B-H, em que B é NR7R8 ou OR9, e R7, R8 e R9 são como definidos na Reivindicação 1, em pelo menos um solvente inerte para a reacção e, opcionalmente, na presença de pelo menos um reagente de acoplamento adequado e/ou uma base adequada; 6 c) um intermediário de fórmula (VI), em que R1, R2, R3, R4, p1, p2 e p3 são como definidos na Reivindicação 1 e Y3 é seleccionado entre halo, B(OH)2, alquilboronatos e respectivos análogos cíclicos: 6

reage com um reagente de fórmula (VII), em que B, A e Z são como definidos na Reivindicação 1, em pelo menos um solvente inerte para a reacção e, opcionalmente, na presença de pelo menos um reagente de acoplamento de metais de transição e/ou pelo menos um ligando adequado:

(VII), d) ou compostos de fórmula (I) sao convertidos uns nos outros seguindo reacções de transformaçao conhecidas na área; ou, se desejado, um composto de fórmula (I) é convertido num sal de adição ácido, ou, inversamente, um sal de adição ácido de um composto de fórmula (I) é convertido numa forma de base livre com alcali, e, se desejado, preparando respectivas formas estereoquimicamente isoméricas. Lisboa, 29 de Janeiro de 2007